全 文 ：植物保护学报 !"#$%&"()&%*)$"*+,*-"%! ./01! 2."2#$10/ 410E 678$ 0/90:3/.;<=,%>-=?@ABCA=./019/29//1
基金项目$国家公益性行业"农业#科研专项"./0//:/.D#!中央高校基本业务费专项基金"Q6!f./02F/01#!西南大学团队学科建设项 目".:E./01Qf/2# !通讯作者"F#*B"$("$,"$+GH"%I+%,+#! JKL&-$,B+%M#">&%MNG@#=+I#=,% 收稿日期$ ./01 4/0 40D
基于根肿菌早期侵染量的白菜抗性分析
朱红丽O肖崇刚O陈国康!O马冠华O青O玲
"西南大学植物保护学院! 重庆 2//50E#
摘要! 为探究不同抗性白菜品种对根肿菌侵染量的影响!通过水培法观测 2 个白菜品种接种根肿
菌后其在寄主根内的发展动态!实时荧光定量 )TZ检测技术对同期根内含菌量进行分析!并结合
温室盆栽试验获得的各品种发病数据进行相关性分析" 结果表明!早熟长江 1 号根肿病的发病率
和病情指数分别为 3.91e和 :E9.!华良早五号为 EE95e和 :591!TZK春美为 E39De和 :E9/!可归
为感病品种!而 TZK英雄为 1.91e和 0E91!可归为抗病品种#水培法接种观测和 )TZ定量结果显
示!根毛侵染率皮层侵染数以及根内含菌量均表现为 TZK英雄最低!显著低于其它 : 个品种" 根
毛侵染率皮层侵染数根内含菌量发病率四者间呈显著相关!其 G. 最大值变幅为 /932 /^9D3!
且根毛侵染率与根内含菌量发病率与根内含菌量的最大相关系数均出现在第 E 天!说明根肿菌早
期侵染量直接影响白菜根肿病的发生程度" 表明根内早期侵染是根肿菌致病的关键环节!通过水
培法观测并结合实时荧光定量 )TZ检测可以评价品种的抗性!可作为根肿病抗性评价的一种
方法"
关键词! 根肿菌# 白菜品种# 抗病性# 根内侵染# 实时荧光定量)TZ
!"#+#,$*&"$*$B4#+#./@+*"#"&$22$A"#,. !"#$%&(&)*&+# ,+# $$(-#. 2$#"(.*"$%B4 +*/"&,+.*+*%..,# _B# X"%M-OQ-&"TB"%MM&%MOTB+% R#">&%M!Oa&R#&%B#&Od-%MP-%M "T"+M+"()&%*)$"*+,*-"%! ["#*B@+G*U%-V+$G-*S! TB"%Mh-%M2//50E! TB-%&# 12#,%$&,$ Y"&%&S?+*B++(+,*G"(I-(+$+%*$+G-G*&%*V&$-+*-+G"(TB-%+G+,&AA&M+G"% *B+-%(+,*-"% -% $""*GAS!"&*9)-/),2).& A.&*/4&%! *B+I+V+"HL+%*IS%&L-,G-% ("#$V&$-+*-+G- $""*G@+$+L+&G#$+I &(*+$ -%",#&*-"% #%I+$G"#*-"% ,#*#$+,"%I-*-"%G=\#$*B+$L"$+! h#&%*-*&*-V+$+&K*-L+)TZ " h)TZ# *+,B%""MS@&G&I"H*+I *"I+*+,*!=A.&*/4&%6bF,"%*+%*-% $""*GI#$-%M*B+G&L+H+$-"I=T"$+&*-"% &%&SG-G@&G(-%&S,"%I#,*+I &L"%M*B++&$S-%(+,*-"% -%I-,&*"$G-% $""*G=YB+$+G#*GGB"@+I *B&**B+ -%,-I+%,+G;I-G+&G+-%I+C+G"(_&"GB#,B&%M<-&%M1! X#&-&%M?&"1! TZKTB#%L+-&%I TZKc-%MC-"%M@+$+ 3.91e;:E9.! EE95e;:591! E39De;:E9/ &%I 1.91e;0E91! $+GH+,*-V+S=YB+("$L+$*B$++V&$-+*-+G *+G*+I -% *B+G*#IS@+$+G#G,+H*-A+! @B-+TZKc-%MC-"%M@&G$+G-G*&%*=YB+$""*KB&-$-%(+,*-"% $&*+! &L"#%*G"(,"$*+C-%(+,*-"%! &%I !=A.&*/4&%6bF,"%*+%*-% TZKc-%MC-"%M@+$+G-M%-(-,&%*S"@+$*B&% *B"G+"("*B+$*B$++V&$-+*-+G=YB+,"$+&*-"% @&G&G"G-M%-(-,&%*&L"%M$""*KB&-$-%(+,*-"% $&*+! &L"#%*G "(,"$*+C-%(+,*-"%! !=A.&*/4&%6bF,"%*+%*&%I I-G+&G+-%,-I+%,+! &%I *B+L&C-L#LV&#+"(G. $&%M+I ($"L/932 *"/9D3=FII-*-"%&S! *B+V&#+"(G. $+&,B+I *B+L&C-L#L&**B+E*B I&S&(*+$ -%",#&*-"% A+*@++% !=A.&*/4&%6bF,"%*+%*&%I $""*KB&-$-%(+,*-"% $&*+"$I-G+&G+-%,-I+%,+=8* -%I-,&*+I *B&*+&$S-%(+,*-"% +V+-% $""*GI-$+,*S&(+,*+I *B+,#A$""*",,#$+%,+I+M$++"(TB-%+G+ ,&AA&M+GV&$-+*-+G! G#MM+G*-%M*B&**B++&$S-%(+,*-"% @&G&>+SH$",+GG("$!=A.&*/4&%H&*B"M+%-,-*S= YB+G*#ISGB"@+I *B&**B+V&$-+*-+G- $+G-G*&%,+,&% A++V&#&*+I ASL+&G#$+L+%*"(*B++&$S-%(+,*-"% -% $""*G! &%I I+*+,*-"% "(!=A.&*/4&%6bF,"%*+%*#G-%Mh)TZL+*B"I= 3"4 5.%(#$ !"&*9)-/),2).& A.&*/4&% TB-%+G+,&AA&M+V&$-+*S $+G-G*&%,+ $""*G-%(+,*-"% h)TZ OO根肿病是由芸薹根肿菌 !"&*9)-/),2).& A.&*/7 4&%]"$"%=引起的一种世界性土传病害!国内每年 有近 :9. 2^9/ BL. 的十字花科作物受根肿菌侵染! 造成 ./e :^/e的损失"TB&-+*&=!./02#) 根肿 病作为一种土传病害!其休眠孢子可在土壤中存活 ./ 年以上"]&+%B&LL&$!0DDE#!给该病害的防治 带来了极大困难!而选用抗病品种是目前较为有效 的途径之一) 有关十字花科作物对根肿病的抗性研究多以传 统的室内人工接种或田间鉴定为主要手段"a&%?&K %&$+GK6&#+#C+*&=!.///#!而6+"$&+*&="./0.#结 合病理学指标!即不同品种的根毛侵染时间和皮层 侵染面积!提出了更为直接可信的评价依据) 品种 抗性在生理生化水平的表现!主要考虑参与其代谢 活动的多种防御酶活性的变化"况宁宁等!./0.# 或者从根内激素水平揭示品种抗性差异的可能性 "黄芸等!./02#) 随着分子生物学技术在各学科领 域的应用!实时荧光定量)TZ技术在根肿菌特异性 检测方面也得以应用"[#%I+-% +*&=!./0/]&+%K B&LL&$+*&=!./0.#!为检测根肿菌在十字花科作 物根内的侵染进程!提供了更能精确判定根内侵染 量的方法) 如 X@&%M+*&="./00./0.#通过实时 荧光定量 )TZ证实温室条件下!感病品种接种后 E 0^/ I根内含菌量比抗性品种更高!一个种植周期 内即可在土壤中累积更多的休眠孢子) 在目前的定量分析模式中!大多实时荧光定量 )TZ均依据样品特异的看家基因作为参比"6-%M+* &=!.//2_B&%M+*&=!./01#!或者依据标准曲线对 样品6bF进行定量"]&+%B&LL&$+*&=!./0.T&" +*&=!./02#) 鉴于传统的根肿病抗性评价方法单 一又费工费时!且具有明显的局限性!因此本试验在 室内建立根肿菌水培接种体系"P#"+*&=!./02#! 观测白菜 2 个不同抗性品种接种根肿菌后在根内的 侵染发展动态!以实时荧光定量)TZ法检测根内含 菌量!比较不同抗性品种受侵染后的表型差异!并结 合盆栽试验获得的发病数据进行相关性分析!以期 进一步揭示早期根内侵染在根肿菌致病过程中的作 用!探索可能的根肿病抗性评价机制!为十字花科作 物根肿病抗性品种选育提供新的方法和途径) 6 材料与方法 686 材料 供试品种及病菌来源$2 个白菜品种分别为早 熟长江 1 号(华良早五号(TZK春美和TZK英雄!购自 德高蔬菜种苗研究所) 供试根肿菌株采集自重庆市 涪陵区榨菜生产基地!经 ]--&LG鉴定系统鉴定为 根肿菌 2 号生理小种!于4./p冰箱保存备用) 试剂$植物基因组 6bF提取试剂盒(\&G*\-$+ h)TZ)$+a-C")$"A+#购自天根生化科技"北京#有限 公司其余试剂均为国产分析纯试验所用引物均由 生工生物工程"上海#股份有限公司合成) 仪器$b+#A&#+$血球计数板!上海光学仪器厂 精密 HX仪!成都世纪方舟科技有限公司T""[Fb) T""$:9:a显微摄像系统!重庆奥特光学仪器有限 公司百乐荧光定量 )TZ八连管(T\QT"%%+,*Ya Z+&KY-L+[SG*+L!美国W87KZF6公司) 687 方法 68786 孢子悬浮液的制备及供试植株的处理 将储存于4./p冰箱内的榨菜根肿病根取出并 用搅拌机打碎!纱布过滤1// $;L-%过滤 01 L-%!取 滤液!. 1// $;L-% 过滤 1 L-% 取沉淀!依次洗 : 次 用 .e氯胺Y消毒 ./ L-% 后再离心收集沉淀!用无 菌水悬浮离心清洗 : 次!沉淀用无菌水悬浮!加入硫 酸粘杆菌素(盐酸万古霉素和头孢塞肟钠!使其浓度 分别为 0(0 和 E "M;LP!室温黑暗放置 .2 B后离心 收集沉淀!用无菌水悬浮离心清洗 : 次". 1// $; L-%!1 L-%#!加入 :/ LP无菌水悬浮!血球计数板统 计休眠孢子浓度!最后用无菌水调至 0 u0/5 个;LP "FG&%"+*&=!0DDD肖崇刚和郭向华!.//.#) 利用 水培接种法对催芽 2 I 的植株进行接种!将幼苗夹 在剪有小口的直径 01 LL小圆泡沫片上!塞于黑色 胶布包裹的 0/ LP离心管口内!每管加 0/ LP0 u 0/5 个;LP孢子悬浮液!对照加 0/ LP无菌水"P#" +*&=!./02#) 分别于接种 2(E(3(0/(0.(02 和 0E I 后采集白菜根!一部分储存于甲醛储备液中以备显 微观察一部分存于43/p冰箱!用于定量分析) 0012 期 朱红丽等$ 基于根肿菌早期侵染量的白菜抗性分析 68787 发病样品的采集及调查 白菜苗水培 ./ I 后!移栽入 D ,LuD ,L装有 珍珠岩的培养钵中!生长 .. I 后拔出幼苗进行根肿 病发病统计) 每次取样 :/ 株!重复处理 : 次!记录 发病株数和发病等级!计算发病率和病情指数) 发 病率v"病株数;调查株数# u0//e病情指数 v" "各级发病株数 u级数#;"调查总株数 u最高病情 级数# u0//) 病害分级依据 / D^ 级标准"吴道军 等!./0:#$/ 级$无肿瘤0 级$仅侧根肿大: 级$主 根肿大!直径小于茎基部的 . 倍(侧根肿大数量小于 1/e的根系1 级$主根肿大!直径小于茎基部的 : 倍(侧根肿大数量占 1/e 5^/e的根系5 级$主根 肿大!直径是茎基部的 : 2^ 倍或侧根肿大数量大于 5/e的根系D 级$主根肿大!直径大于茎基部的 2 倍) 白菜根肿病群体抗性分级标准依据病情指数 "I-G+&G+-%I+C!68#划分$免疫$/高抗$/ y68y0/ 抗病$0/ y68y./耐病$./ y68y:/感病$68}:/) 68789 发病样品根毛和皮层侵染动态观察 于接种 2(E(3(0/(0.(02(0E I 后采集各白菜品 种的根!自来水冲洗干净根部!\FF固定后!再用自 来水冲洗!然后荧光桃红染色!最后在光学显微镜下 观察并记录根毛及皮层的侵染情况!每株观察 0// 根根毛!重复 : 次!并计算根毛侵染率) 根毛侵染 率v"侵染根毛数;0// 根根毛# u0//e) 于接种后 第 E(02 和 0E 天观察皮层侵染!每株观察 : 个视野! 重复 : 次!并记录皮层侵染数) 6878; 样品根内根肿菌的定量分析 于接种 2(E(3(0/(0.(02(0E I 后采集 01 株白 菜根!无菌水冲洗去除根表面杂质和附着的根肿菌 孢子!灭菌纸吸取根表面水分!将所有根剪碎!称取 0// LM用植物基因组 6bF提取试剂盒提取的总 6bF!利用实时荧光定量)TZ对根内菌量进行定量 "X@&%M+*&=!./0.#!根据根肿菌 03[ $ZbF设计引 物和探针"X@&%M+*&=!./00#) 上游引物$1mKYFK FYTRTTTYRRRYFYRRYFK:m!下游引物$1mKTRTRFK YYTRFTRYFRRF TYK:m! aRW 探 针$ 1mKE\FaK FTFFTRRFTFFRRFYRYYKaRWb\dK:m) ./ "P)TZ 扩增体系$. u\&G*\-$+h)TZ)$+a-C0/ "P(上下游引 物各 /9E "P(荧光探针 /92 "P(6bF模板 0 "P和 Zb&G+K\$++IIX.7592 "P) 反应时间$D1p预变性./ G!循环 0次D1p变性 0 G和退火;延伸 01 G!循环 2/ 次) 对照组为未接种的白菜和清水对照!: 次生物 学重复!: 次技术重复) 提取纯化过的根肿菌休眠 孢子 6bF!测量其总浓度!逐步稀释得到 0 u0/5 ^ 0 u0/. (M;"P的 6bF!按照以上程序制备标准曲 线) 标准曲线表明了根肿菌 6bF量与 1M值的关 系!其中 1M值表示扩增产物"荧光信号#到达阈值 时"进入指数增长期#所经过的扩增循环指数 "T&"+*&=!./02#) 689 数据分析 采用JC,+.//5 和 [)[[ 0D9/ 统计分析软件进 行数据分析!应用最小显著差数法"P[6#进行差异 显著性检验) 7 结果与分析 786 接种肿根菌后 ; 个品种的发病情况 早熟长江 1 号(华良早五号(TZK春美和 TZK英 雄发病率分别为 3.91e(EE95e(E39De和 1.91e! 早熟长江 1 号发病率显著高于其余品种!TZK英雄 发病率最低!华良早五号和 TZK春美发病率差异不 显著"表 0#) 对于病情指数!品种早熟长江 1 号(华 良早五号和 TZK春美差异不显著!TZK英雄最低为 0E91!显著低于前三者) 早熟长江 1 号(华良早五号 和TZK春美表现为感病!而TZK英雄表现为抗病) 表 6 四个白菜品种接种肿根菌后的发病率和病情指数 Y&A+0 YB+-%,-I+%,+&%I -%I+C"(I-G+&G+"(("#$TB-%+G+,&AA&M+V&$-+*-+G-% M$++%B"#G+*$-&G 供试品种 g&$-+*S 发病率 "e# 6-G+&G+-%,-I+%,+ 病情指数 6-G+&G+-%I+C 抗性分级 Z+G-G*&%,+M$&I+ 早熟长江 1 号 _&"GB#,B&%M<-&%M1 3.91 x/9/: & :E9. x09.0 & [ 华良早五号 X#&-&%M?&"1 EE95 x/9/: A :591 x:90. & [ TZK春美 TZKTB#%L+- E39D x/9/. A :E9/ x093/ & [ TZK英雄 TZKc-%MC-"%M 1.91 x/9/. , 0E91 x09// A Z OO[$ 感病 Z$ 抗病) 表中数据为平均数x标准误) 同列数据后不同字母表示经P[6法检验在!y/9/1 水平差异显著) [$ [#G,+HK *-A+ Z$ $+G-G*&%*=6&*&&$+L+&% x[J=6-(+$+%*+*+$G-% *B+G&L+,"#L% -%I-,&*+G-M%-(-,&%*I-(+$+%,+&*!y/9/1 +V+ASP[6*+G*= .01 植O物O保O护O学O报 2. 卷 787 显微观察根毛和皮层的侵染情况 2 个白菜品种根毛侵染率随着侵染时间的变化 规律较一致!均呈先增加后降低的趋势"图 0#) 接 种后第 2 天!2 个品种均有根毛被侵染!侵染率高低 排序为华良早五号"/9De# }TZK春美"/95e# }早 熟长江 1 号"/92e# }TZK英雄"/90e#) 早熟长 江 1 号在侵染后第 0/ 天出现侵染高峰!侵染率为 .190e华良早五号在第 0. 天出现侵染高峰!侵染 率为 .19De而TZK春美和TZK英雄均在第 02 天出 现侵染高峰!侵染率分别为 .29/e和 0:9/e) 侵染 后 02 0^E I时!早熟长江 1 号(华良早五号(TZK春 美和TZK英雄的侵染率均有所下降!下降比率分别 为 2.9/e(0392e(2D91e和 519.e) 皮层侵染最先出现在早熟长江 1 号"1 个#和华 良早五号"1 个#!在第 02 0^E 天皮层侵染数均有所 增加!第 0E 天皮层侵染数依次为早熟长江 1 号"25 个# }华良早五号".D 个# }TZK春美".5 个# }TZK 英雄"00 个#"表 .#) 图 6 四个白菜品种接种根肿菌后不同时间点的根毛侵染率 \-M=0 YB+$""*KB&-$-%(+,*-"% $&*+AS!"&*9)-/),2).& A.&*/4&%-% ("#$TB-%+G+,&AA&M+V&$-+*-+G&*I-(+$+%**-L+H"-%*G 图中数据为平均数x标准误) 同色柱上不同字母表示经 P[6法检验在 !y/9/1 水平差异显著) 6&*&&$+L+&% x[J= 6-(+$+%*+*+$G"% *B+G&L+,""$A&$G-%I-,&*+G-M%-(-,&%*I-(+$+%,+&*!y/9/1 +V+ASP[6*+G*= O 表 7 四个白菜品种接种根肿菌后 =#6; 和 6= (的皮层侵染数 Y&A+. YB+&L"#%*G"(,"$*+C-%(+,*-"% -% ("#$TB-%+G+,&AA&M+V&$-+*-+G&**B+E*B! 02*B &%I 0E*B I&S&(*+$-%",#&*-"% 供试品种 g&$-+*S E I 02 I 0E I 早熟长江 1 号 _&"GB#,B&%M<-&%M1 1 x09// & :1 x095: & 25 x09// & 华良早五号 X#&-&%M?&"1 1 x09// & 0D x095: A .D x095: A TZK春美 TZKTB#%L+- / x/9// A 0/ x.9// , .5 x.9E2 A TZK英雄 TZKc-%MC-"%M / x/9// A 0 x09// I 00 x09// , OO表中数据为平均数x标准误) 同列数据后不同字母表示经 P[6法检验在 !y/9/1 水平差异显著) 6&*&&$+L+&% x[J=6-(+$+%* +*+$G-% *B+G&L+,"#L% -%I-,&*+G-M%-(-,&%*I-(+$+%,+&*!y/9/1 +V+ASP[6*+G*= 789 样品根内根肿菌含量的变化 依据已知的不同量根肿菌6bF制作标准曲线! 结果表示 1Mv2/93D 4:9./DM6bF!G. }/9DD "!y/9///0#!可用于计算样品根内根肿菌6bF含 量) 受根肿菌侵染后早熟长江 1 号品种根内含菌量 变化不稳定!以第 0/ 天最多"M6bFvE9.3 (M#华 良早五号(TZK春美和TZK英雄总体趋势是先增加后 降低!高峰分别出现在第 0."M6bFvE90: (M#(02 "M6bFvE92 (M#和 02"M6bFv19E5(M#天"图 .#) 78; 接种根肿菌后各品种侵染指标的相关性分析 对接种根肿菌后第 2(E(3(0/(0.(02 和 0E 天各 品种的侵染指标两两进行相关性分析!结果表明接 种第 3 天根毛侵染率与发病率"图 :K&#(接种第 E 天根毛侵染率与根内含菌量"图 :KA#(接种第 E 天 :012 期 朱红丽等$ 基于根肿菌早期侵染量的白菜抗性分析 图 7 四个白菜品种接种根肿菌后根内根肿菌的含量 \-M=. YB+,"%*+%*"(!"&*9)-/),2).& A.&*/4&%6bF-% $""**-GG#+G"(("#$TB-%+G+,&AA&M+V&$-+*-+G&(*+$-%",#&*-"% 图中数据为平均数x标准误) 同色柱上不同字母表示经 P[6法检验在 !y/9/1 水平差异显著) 6&*&&$+L+&% x[J= 6-(+$+%*+*+$G"% *B+G&L+,""$A&$G-%I-,&*+G-M%-(-,&%*I-(+$+%,+&*!y/9/1 +V+ASP[6*+G*= O 图 9 白菜接种根肿菌后各侵染指标的相关性分析 \-M=: T"$+&*-"% &%&SG-G&L"%MI-(+$+%*-%(+,*-"% -%I-,+G&(*+$-%",#&*-"% AS!"&*9)-/),2).& A.&*/4&% T!$ 早熟长江 1 号 XP$ 华良早五号 Ta$ TZK春美 cQ$ TZK英雄) T!$ _&"GB#,B&%M<-&%M1 XP$ X#&-&%M?&"1 Ta$ TZKTB#%L+- cQ$ TZKc-%MC-"%M= O 根内含菌量与发病率"图 :K,#(接种第 0E 天皮层侵 染数与发病率"图 :KI#的最大相关系数 G. 值分别 为 /9D0(/932(/933 和 /9D3!均表现出显著相关关 系!表明白菜根肿病的发病程度取决于根肿菌在寄 201 植O物O保O护O学O报 2. 卷 主根毛和皮层的早期侵染水平) 9 讨论 本研究盆栽试验结果显示早熟长江 1 号发病率 最高"3.91e#!TZK英雄最低"1.91e#!华良早五号 和TZK春美居中"EE95e和 E39De#按照白菜根肿 病群体抗性分级标准!依据病情指数可将华良早五 号":591#(早熟长江 1 号":E9.#和TZK春美":E9/# 划归为感病品种!TZK英雄则归为抗病品种"0E91#) 这为后续分析根肿菌早期侵染与品种抗性的关系创 造了条件) 根肿菌生活史可分为土壤中存活(根毛"初级# 侵染和皮层"次级#侵染 : 个阶段"f&M+S&L&` FG&K %"!.//D#) 根肿病发生始于土壤中休眠孢子萌发形 成的初生游动孢子侵染寄主根毛"FS+$G!0D22#) 供 试白菜在接种根肿菌后第 2 天即可观察到根毛侵 染!并在寄主根毛内发展成原质团!这与 a&,(&$&%+ "0D1.#和X@&%M+*&="./00#的研究结果一致) 但 此时TZK英雄的根毛侵染率近乎为 /!接种后第 3 天 也仅为 29Ee!相反!感病品种早熟长江 1 号的根毛 侵染率达到 ./95e!约为抗病品种TZK英雄的 1 倍! 说明根肿菌根毛侵染在感病品种中发展更快!而这 一阶段在抗性品种TZK英雄中被极大地延缓) 本试验镜检结果显示!根毛侵染在 2 个品种中 均呈现为先增后降的动态趋势!但侵染高峰依然在 TZK英雄品种中出现最晚"第 02 天#!且根毛侵染率 最低"0:9/e#!早熟长江 1 号在第 0/ 天".190e#( 华良早五号在第 0. 天".19De#(TZK春美在第 02 天".29/e#达到侵染高峰) 出现这种状况的主要 原因是根肿菌侵入根毛后!由原质团割裂形成次生 游动孢子!并排出根毛进入环境土壤所致) 且观测 发现感病品种出现下降的时间早于抗病品种!因此 感病品种可能更早进入次级皮层侵染阶段!即与抗 病品种相比!感病品种的侵染周期可能更短) 尽管 次生游动孢子可再次侵染根毛"b&->-+*&=!0D32 a,6"%&I +*&=!./02#!而本试验未能观察到根毛 侵染率再次上升!可能是由于次生游动孢子排出根 毛的速度快于初生和次生游动孢子的侵入速度!或 者是由于根内侵染动态已逐步由根毛侵染阶段转为 皮层侵染阶段) 本研究在整个观测期间感病品种的根毛侵染率 均高于抗病品种!相关性分析也显示在第 3 天根毛 侵染率与发病率的相关性最大"G. v/9D0#!说明根 肿病最终发病率取决于第 3 天根毛侵染率高低!这 为根肿病重点在苗期开展早期预防提供了佐证) 且 根毛侵染率与根内含菌量(根内含菌量与发病率的 最大相关值均出现在接种后第 E 天!表明白菜根肿 病的发病程度取决于根肿菌在寄主根毛和皮层的早 期侵染水平!同时也暗示了根肿病的早期预防不应 晚于直接播种或无菌移栽后第 E 天) 本试验结果显 示!白菜的皮层侵染最早在感病品种中被观测到!第 0E 天的皮层侵染数为早熟长江 1 号"25 个# }华良 早五号".D 个# }TZK春美".5 个# }TZK英雄"00 个#!且皮层侵染数与发病率的相关系数极高"G. v /9D3#!表明皮层侵染也直接影响着根肿病的发病 率) 感病品种早熟长江 1 号和华良早五号在接种后 第 E 天即观测到了皮层侵染!而此时根肿菌尚处在 根毛初级侵染阶段!可能原因是初级游动孢子绕开 根毛直接侵染了寄主皮层"\+%M+*&=!./0:#) 综合现有的)TZ定量分析模式及 )TZ绝对和 相对定量分析方法"克丙申等!.//.TB&% +*&=! .//1)&$> +*&=!.//5#!利用标准曲线对根内根肿 菌目标基因进行定量!可快速鉴定十字花科作物的 抗病性"T&"+*&=!./02#!使基于根内侵染的品种 抗根肿病分析从形态学观测上升到分子水平检测) 参 考 文 献 "Z+(+$+%,+G# FG&%"Y! f&M+S&L&f! XS&>#L&,B-a=0DDD=[#$(&,+I-G-%(+G*&K *-"% "($+G*-%MGH"$+G"(!"&*9)-/),2).& A.&*/4&%#G+I *"-%(+,* B&-$S$""*G"(5.&*/4& GHH=)BS*"H&*B""MS! 3D"2#$ :02 4:0D FS+$GR]=0D22=[*#I-+G"% *B+-(+B-G*"$S"(*B+,#A $""*"$M&%K -GL! !"&*9)-/),2).& A.&*/4&%=T&%&I-&% !"#$%&"(Z+G+&$,B! .."2#$ 02: 402D T&"Y! Z+%%-+6T! a&%"-g)! X@&%M[\! \&&> 8! [*$+>"V[J= ./02=d#&%*-(S-%M$+G-G*&%,+*"!"&*9)-/),2).& A.&*/4&%-% 5.&*/4& B"G*G=)&%*)&*B""MS! E:":#$ 501 45.E TB&-FP!Q-+Q]! [B-cQ!P-W!=./02=Z+G+&$,B G*&*#G"(,#A$"K "*"!"&*9)-/),2).& A.&*/4&%# "% ,$#,-(+$"#G,$"HG-% TB-%&= T&%&I-&% !"#$%&"()&%*)&*B""MS! :E"[0#$ 02. 401: TB&% TT! TB+@Jc! [B+% 6! X&,>+*!! _B#&%M_=.//1=JCH$+GK G-"% "(G*+L,+GL&$>+$G-% ",#&$B+L&%M-"A&G*"L&&GG",-&*K +I @-*B V"% X-HH+KP-%I&# "gXP# I-G+&G+=a"+,#&$g-G-"%! 00$ ED5 45/2 6+"$&F! R"GG+% W6! a,6"%&I aZ=./0.=8%(+,*-"% &%I I+V+"HK L+%*"(!"&*9)-/),2).& A.&*/4&%-% $+G-G*&%*&%I G#G,+H*-A+ ,&%"&,#*-V&$G=T&%&I-&% !"#$%&"()&%*)&*B""MS! :2".#$ .:D 4.25 6-%M!! !-&!! c&%MP! ]+% X! _B&%MT! P-# ]! _B&%M6=.//2= g&-I&*-"% "(&$-,+GH+,-(-,M+%+! G#,$"G+HB"GHB&*+GS%*B&G+! #G+I &G*B++%I"M+%"#G$+(+$+%,+M+%+("$h#&-*&*-V+&%I$+&K *-L+h#&%*-*&*-V+)TZI+*+,*-"% "(*$&%GM+%+G=!"#$%&"(FM$-K 1012 期 朱红丽等$ 基于根肿菌早期侵染量的白菜抗性分析 ,#*#$&&%I \""I TB+L-G*$S! 1."00#$ ::5. 4::55 \+%M!! X@&%M[\! [*$+>"V[J=./0:=[*#I-+G-%*"H$-L&$S&%I G+,"%I&$S-%(+,*-"% H$",+GG+GAS!"&*9)-/),2).& A.&*/4&%"% ,&%"&=)&%*)&*B""MS! E."0#$ 055 403: X#&%Mc! Q# P! Q-&"TR! P-# T)! TB+% Rf=./02=J(+,*"( !"&*9)-/),2).& A.&*/4&%-%(+,*-"% "% 8FF&%I _Y,"%*+%*G-% L#G*&$I $""*=TB-%&g+M+*&A+G! ".#$ 20 422 "-% TB-%+G+# +黄芸! 徐莉! 肖崇刚! 刘翠平! 陈国康=./02=根肿菌侵染 对茎瘤芥"榨菜#根系玉米素和吲哚乙酸含量的影响=中国 蔬菜! ".#$ 20 422, X@&%M[\! FBL+I XU! _B"# d! [*$+>"V[J! R"GG+% W6! )+%MR! Y#$%A#R6=./00=8%(#+%,+"(,#*-V&$$ +G-G*&%,+&%I -%",#K
#LI+%G-*S"% $""*B&-$-%(+,*-"% "(,&%"&"5.&*/4& 3&,#*# AS
!"&*9)-/),2).& A.&*/4&%=)&%*)&*B""MS! E/"1#$3./ 43.D X@&%M[\! FBL+I XU! _B"# d! [*$+>"V[J! R"GG+% W6! )+%M
R! Y#$%A#R6=./0.=FGG+GGL+%*"(*B+-LH&,*"($+G-G*&%*
&%I G#G,+H*-A+,&%"&"% !"&*9)-/),2).& A.&*/4&%-%",##L
H"*+%*-&=)&%*)&*B""MS! E0"1#$D21 4D1. f&M+S&L&f! FG&%"Y=.//D=P-(+,S,+"(!"&*9)-/),2).& A.&*/7 4&%=!"#$%&"()&%*R$"@*B Z+M#&*-"%! .3":#$ ./: 4.00
f+W[! X#&%MQc! TB+% [a! TB+% c!! d-\P=.//.=YB+f-%+*-,
&%I L&*B+L&*-,&L"I+"()TZ&LH-(-,&*-"% +CH+$-L+%*=X+K$+I-*&G! .2"0#$11 41D "-% TB-%+G+# +克丙申! 黄象艳! 陈 世敏! 陈英剑! 齐法莲=.//.=)TZ扩增试验的动力学数学 模型=遗传! .2"0#$ 11 41D,
f#&%Mbb!_B&%MZd!c&% XX=./0.=JV&#&*-"% "($+G-G*&%,+&%I &%&SG-G"($+G-G*&%,+HBSG-""MS-% V&$-+*-+G"(TB-%+G+,&AA&M+ -%(+,*+I AS!"&*9)-/),2).& A.&*/4&%=b"$*B+$% X"$*-,#*#$+! "00#$ 02/ 402: "-% TB-%+G+# +况宁宁! 张茹琴! 鄢洪海=
./0.=大白菜品种间根肿病抗性鉴定及抗性生理分析=北
方园艺! "00#$02/ 402:, P#"XT! TB+% Rf! P-# T)! X#&%Mc! Q-&"TR=./02=F% -LK H$"V+I ,#*#$+G"#*-"% *+,B%-h#+("$!"&*9)-/),2).& A.&*/4&%
-%(+,*-"% &%I *B+IS%&L-,-%(+,*-"% -% *B+$""*B&-$=F#G*$&&K G-&% )&%*)&*B""MS! 2:"0#$ 1: 4E/
a&,(&$&%+8=0D1.=\&,*"$G&(+,*-%M*B+G#$V-V&"(!"&*9)-/),2).& A.&*/4&%]"$=-% *B+G"-&%I 8Y[ &GG+GGL+%*AS&B"G**+G*=
F%%&G"(FHH-+I W-""MS! :D".#$.:D 4.1E a&%?&%&$+GK6&#+#Ca!! 6-V&$+*8! W&$"% \! YB"L&GR=.///=JK
V&#&*-"% "($+%,B 5.&*/4& )"%.&4%& &%I$&,+G("$$+G-G*&%,+*" !"&*9)-/),2).& A.&*/4&%=J#HBS*-,&! 00:":#$ .00 4.03
a,6"%&I aZ! [B&$L&f! R"GG+% W6! 6+"$&F! \+%M!! X@&%M
[\=./02=YB+$"+"(H$-L&$S&%I G+,"%I&$S-%(+,*-"% -% B"G*
$+GH"%G+*"!"&*9)-/),2).& A.&*/4&%=)BS*"H&*B""MS! 0/2 "0/#$ 0/53 40/35
b&->-Y! f&@&M#,B-T! 8>+M&L-X=0D32=Z""*B&-$$+-%(+,*-"% -%
TB-%+G+,&AA&M+G++I-%MGAS*B+G+,"%I&$S?""GH"$+G"(!"&*7
9)-/),2).& A.&*/4&%]"$"%-%=!&H&%+G+!"#$%&"()BS*"H&*B"K
"MS! 1/".#$ .0E 4../
)&$> 6a! _B#&%M_! TB+% P! b-,B"&G[! a&$-,8! P-!! ["B% Y!
f-L[X!P#A+%G>S8F!g"$*L+S+$F7!+*&=.//5=V"% X-HHK
+P-%I&# I-G+&G+K&GG",-&*+I B+L&%M-"A&G*"L&G&$+I+$-V+I
($"L+LA$S""M-,L#*-H"*+%*,+G=)P"[ a+I-,-%+! 2".#$ +E/
[#%I+-% Y! TB$-G*+%G+% TW! P&$G+% !! a~+$f=./0/=8%H&%*&
h#&%*-(-,&*-"% "(!"&*9)-/),2).& A.&*/4&%#G-%MG-M%&*#$+(&*S
&,-IG&%I $+&K*-L+)TZ=)&%*6-G+&G+! D2"2#$ 2:. 42:3
]&+%B&LL&$FT=0DDE=)$+V&+%,+"(!"&*9)-/),2).& A.&*/4&%-%
&GH$-%M"-G++I $&H+M$"@-%M&$+&-% ,+%*$&[@+I+% &%I (&,*"$G
-%(#+%,-%M G"--%(+G*&*-"% +V+G= )&%* )&*B""MS! 21
"2#$ 50/ 450D
]&+%B&LL&$FT! FLh#-G*T! [{I+$G*${La! !"%GG"% F=./0.=
8%K(-+I I-G*$-A#*-"% "(!"&*9)-/),2).& A.&*/4&%L+&G#$+I #G-%M
h#&%*-*&*-V+$+&K*-L+)TZ=)&%*)&*B""MS! E0"0#$ 0E 4.3
]# 6!! TB+% Rf! c&%MQd! c&"cX! a&d! Q-&"TR=./0:=
FHH-,&*-"% "(("#$>-%IG"(,&AA&M+,#A$""*I-G+&G+,&GG-(-,&K
*-"% G*&%I&$IG+V&#&*-"%=["#*B@+G*TB-%&!"#$%&"(FM$-,#K
*#$&[,-+%,+G! .E".#$ 1D0 41D2 "-% TB-%+G+# +吴道军! 陈
国康!杨晓琴!姚永红!马强!肖崇刚=./0:92种甘蓝根肿
病分级标准的应用评价=西南农业学报! .E ".#$ 1D0 4
1D2,
Q-&"TR!R#"QX=.//.=W-""M-,&,B&$&,*+$-G*-,"(!"&*9)-/),2)7
.& A.&*/4&%=aS,"GSG*+L&! .0"2#$ 1D5 4E/: "-% TB-%+G+#
+肖崇刚! 郭向华=.//.=甘蓝根肿病菌的生物学特性研
究=菌物系统! .0"2#$ 1D5 4E/:,
_B&%Mc! _+%MT!! X+P! 6-%MP! Y&%Mfc! )+%M])=./01=[+K
+,*-"% "(+%I"M+%"#G$+(+$+%,+L-ZbFM+%+G("$h#&%*-*&*-V+
$+V+$G+*$&%G,$-H*-"% H"SL+$&G+,B&-% $+&,*-"% G*#I-+G"(A"&$
GH+$L&*"?"& ,$S"H$+G+$V&*-"%= YB+$-"M+%""MS! 3: " 2 #$
E:2 4E20
$责任编辑%李美娟&
E01 植O物O保O护O学O报 2. 卷