全 文 ：植物保护学报 Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｐｌａｎｔ Ｐｒｏｔｅｃｔｉｏｎ， ２０１６， ４３（４）： ６３４ － ６４０ ＤＯＩ： １０􀆰 １３８０２ ／ ｊ． ｃｎｋｉ． ｚｗｂｈｘｂ． ２０１６􀆰 ０４􀆰 ０１６
基金项目：北京市优秀人才培养资助项目（２０１３Ｄ００２００６０００００１）
∗通讯作者（Ａｕｔｈｏｒ ｆｏｒ ｃｏｒｒｅｓｐｏｎｄｅｎｃｅ）， Ｅ⁃ｍａｉｌ： ｌｙｌｏｎｇ７７＠ １６３． ｃｏｍ
收稿日期： ２０１５ － ０３ － ３０
北京及周边地区九个地理种群的亚洲小车蝗
ｍｔＤＮＡ ＮＤ６ 基因及其部分侧翼序列分析
李云龙１∗　 谢爱婷１ 　 秦　 萌２ 　 张群峰１ 　 孙　 勇３ 　 杨建国１
（１．北京市植物保护站， 北京 １０００２９； ２．全国农业技术推广服务中心， 北京 １００１２５；
３．道真仡佬族苗族自治县农牧局农安股， 贵州 ５６３５００）
摘要： 为明确北京地区亚洲小车蝗 Ｏｅｄａｌｅｕｓ ａｓｉａｔｉｃｕｓ Ｂｅｙ⁃Ｂｉｅｎｋｏ的迁飞来源，选取包含完整线粒体
ＤＮＡ的 ＮＤ６、ｔＲＮＡ⁃Ｔｈｒ 基因及侧翼 ＮＤ４Ｌ、ＣＹＴＢ 基因部分序列作为目的片段，采用 ＤＮＡ 序列法分
析来自北京及周边省市 ９ 个地理种群 １５５ 个亚洲小车蝗样本的序列碱基组成、种群遗传多样性、种
群结构及单倍型网络进化等。 结果表明：在目的序列中共检测到多态性位点 １６ 个，鉴定出单倍型
２０ 种，分别占碱基总数和总样品量的 １􀆰 ８８％和 １２􀆰 ９０％ ；核苷酸多样性为 ０􀆰 ００１２，单倍型多样性为
０􀆰 ６６，种群间遗传分化系数绝对值≤０􀆰 ５１，种群内个体间遗传变异占总变异的 ８６􀆰 ８８％ ，各种群遗
传变异与空间距离间无显著相关性，供试样本总体上遗传变异程度相对较低。 北京密云种群鉴定
出的独享单倍型 Ｈ１４ 由单倍型 Ｈ１０ 经 ２ 次突变获得，Ｈ１０ 被锡林郭勒和乌兰察布种群共享；北京
密云与河北滦平、围场及内蒙古乌兰察布种群间基因流 Ｎｍ 绝对值分别为 ３􀆰 ７４９、１􀆰 ３８７ 和 ０􀆰 ９１２，
均高于密云种群与其它种群间的 Ｎｍ绝对值；结合亚洲小车蝗在北京及周边地区出现的先后时序
可知，内蒙古锡林郭勒、乌兰察布及河北滦平、围场是北京地区亚洲小车蝗的最主要迁飞来源。
关键词： 亚洲小车蝗； ｍｔＤＮＡ ＮＤ６ 基因； 序列分析； 遗传关系
Ｓｅｑｕｅｎｃｅ ａｎａｌｙｓｉｓ ｏｆ ｍｔＤＮＡ ＮＤ６ ａｎｄ ｆｒａｇｍｅｎｔｓ ｏｆ ｆｌａｎｋｉｎｇ ｇｅｎｅｓ ｆｒｏｍ ｎｉｎｅ
ｇｅｏｇｒａｐｈｉｃａｌ ｐｏｐｕｌａｔｉｏｎｓ ｏｆ Ｏｅｄａｌｅｕｓ ａｓｉａｔｉｃｕｓ ｉｎ Ｂｅｉｊｉｎｇ ａｎｄ ｓｕｒｒｏｕｎｄｉｎｇ ｒｅｇｉｏｎｓ
Ｌｉ Ｙｕｎｌｏｎｇ１∗ 　 Ｘｉｅ Ａｉｔｉｎｇ１ 　 Ｑｉｎ Ｍｅｎｇ２ 　 Ｚｈａｎｇ Ｑｕｎｆｅｎｇ１ 　 Ｓｕｎ Ｙｏｎｇ３ 　 Ｙａｎｇ Ｊｉａｎｇｕｏ１
（１． Ｂｅｉｊｉｎｇ Ｐｌａｎｔ Ｐｒｏｔｅｃｔｉｏｎ Ｓｔａｔｉｏｎ， Ｂｅｉｊｉｎｇ １０００２９， Ｃｈｉｎａ； ２． Ｎａｔｉｏｎａｌ Ａｇｒｏ⁃Ｔｅｃｈｎｉｃａｌ Ｅｘｔｅｎｓｉｏｎ ａｎｄ Ｓｅｒｖｉｃｅ Ｃｅｎｔｒｅ，
Ｂｅｉｊｉｎｇ １００１２５， Ｃｈｉｎａ； ３． Ｄｅｐａｒｔｍｅｎｔ ｏｆ Ａｇｒｉｃｕｌｔｕｒｅ ａｎｄ Ｌｉｖｅｓｔｏｃｋ Ｐｒｏｄｕｃｔｉｏｎ ｏｆ Ｄａｏｚｈｅｎ Ｃｏｕｎｔｙ，
Ｇｕｉｚｈｏｕ ５６３５００， Ｇｕｉｙａｎｇ Ｐｒｏｖｉｎｃｅ， Ｃｈｉｎａ）
Ａｂｓｔｒａｃｔ： Ｔｏ ｄｅｔｅｒｍｉｎｅ ｔｈｅ ｍｉｇｒａｔｉｏｎ ｓｏｕｒｃｅ ｏｆ Ｏｅｄａｌｅｕｓ ａｓｉａｔｉｃｕｓ Ｂｅｙ⁃Ｂｉｅｎｋｏ ｉｎ Ｂｅｉｊｉｎｇ ａｎｄ ｓｕｒｒｏｕｎｄｉｎｇ
ｒｅｇｉｏｎｓ， ａｎ ８５１⁃ｂｐ ｓｅｑｕｅｎｃｅ ｃｏｎｔａｉｎｉｎｇ ｔｈｅ ｃｏｍｐｌｅｔｅ ｍｉｔｏｃｈｏｎｄｒｉａｌ ＤＮＡ ＮＤ６ ｇｅｎｅ， ｔＲＮＡ⁃Ｔｈｒ ｇｅｎｅ ａｎｄ
ｆｒａｇｍｅｎｔｓ ｏｆ ＮＤ４Ｌ ｇｅｎｅ ａｎｄ ＣＹＴＢ ｇｅｎｅ ｗａｓ ａｍｐｌｉｆｉｅｄ ｆｒｏｍ １５５ ｉｎｄｉｖｉｄｕａｌｓ ｏｆ ｎｉｎｅ ｇｅｏｇｒａｐｈｉｃａｌ
ｐｏｐｕｌａｔｉｏｎｓ ｆｒｏｍ Ｂｅｉｊｉｎｇ ａｎｄ ｓｕｒｒｏｕｎｄｉｎｇ ｒｅｇｉｏｎｓ． Ｔｈｅ ｂａｓｅ ｃｏｍｐｏｓｉｔｉｏｎ， ｇｅｎｅｔｉｃ ｄｉｖｅｒｓｉｔｙ， ｐｏｐｕｌａｔｉｏｎ
ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ ａｎｄ ｈａｐｌｏｔｙｐｅ ｎｅｔｗｏｒｋ ｗｅｒｅ ａｎａｌｙｚｅｄ ａｎｄ ｃｏｍｐａｒｅｄ ｂｙ ｕｓｉｎｇ ＤＮＡ ｓｅｑｕｅｎｃｅ ａｎａｌｙｓｉｓ
ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ． Ｔｈｅ ｒｅｓｕｌｔｓ ｓｈｏｗｅｄ ｔｈａｔ １６ ｇｅｎｅｔｉｃ ｐｏｌｙｍｏｒｐｈｉｓｍｓ ａｎｄ ２０ ｈａｐｌｏｔｙｐｅｓ ｗｅｒｅ ｉｄｅｎｔｉｆｉｅｄ ｉｎ ｔｈｅ
ｔａｒｇｅｔ ｆｒａｇｍｅｎｔｓ， ａｃｃｏｕｎｔｉｎｇ ｆｏｒ ａｂｏｕｔ １􀆰 ８８％ ｏｆ ｔｈｅ ｓｅｑｕｅｎｃｅｄ ｎｕｃｌｅｏｔｉｄｅｓ ａｎｄ １２􀆰 ９０％ ｏｆ ｔｏｔａｌ
ｓａｍｐｌｅｓ， ｒｅｓｐｅｃｔｉｖｅｌｙ． Ｔｈｅ ｎｕｃｌｅｏｔｉｄｅ ｄｉｖｅｒｓｉｔｙ ａｎｄ ｈａｐｌｏｔｙｐｅ ｄｉｖｅｒｓｉｔｙ ｗｅｒｅ ０􀆰 ００１２ ａｎｄ ０􀆰 ６６，
ｒｅｓｐｅｃｔｉｖｅｌｙ． Ｐａｉｒｗｉｓｅ ＦＳＴ ａｂｓｏｌｕｔｅ ｖａｌｕｅｓ ｏｆ ｐｏｐｕｌａｔｉｏｎｓ ｗｅｒｅ ｌｅｓｓ ｔｈａｎ ｏｒ ｅｑｕａｌ ｔｏ ０􀆰 ５１， ａｎｄ ｔｈｅ ｇｅｎｅｔｉｃ
ｖａｒｉａｔｉｏｎ ｗｉｔｈｉｎ ｐｏｐｕｌａｔｉｏｎｓ ａｃｃｏｕｎｔｅｄ ｆｏｒ ８６􀆰 ８８％ ｏｆ ｔｈｅ ｔｏｔａｌ ｖａｒｉａｔｉｏｎ ｏｆ ｐｏｐｕｌａｔｉｏｎｓ． Ｔｈｅｒｅ ｗａｓ ｎｏ
ｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔ ｃｏｒｒｅｌａｔｉｏｎ ｂｅｔｗｅｅｎ ｇｅｎｅｔｉｃ ｖａｒｉａｔｉｏｎ ａｎｄ ｓｐａｔｉａｌ ｄｉｓｔａｎｃｅ ａｍｏｎｇ ｐｏｐｕｌａｔｉｏｎｓ ａｎｄ ｔｈｅ ｇｅｎｅｔｉｃ
ｖａｒｉａｔｉｏｎ ｏｆ ｔｈｅ ｔｅｓｔｅｄ ｓａｍｐｌｅｓ． Ｔｈｅ ｅｘｃｌｕｓｉｖｅ ｈａｐｌｏｔｙｐｅ Ｈ１４ ｉｄｅｎｔｉｆｉｅｄ ｆｒｏｍ Ｍｉｙｕｎ ｐｏｐｕｌａｔｉｏｎ ｗａｓ ｏｂｔａｉｎｅｄ
ｆｒｏｍ ｈａｐｌｏｔｙｐｅ Ｈ１０ ｆｏｒ ｔｗｏ ｍｕｔａｔｉｏｎｓ， ｗｈｉｃｈ ｗａｓ ｓｈａｒｅｄ ｂｙ Ｘｉｌｉｎｇｕｏｌｅ ａｎｄ Ｗｕｌａｎｃｈａｂｕ ｐｏｐｕｌａｔｉｏｎｓ； ｔｈｅ
ａｂｓｏｌｕｔｅ ｖａｌｕｅｓ ｏｆ ｇｅｎｅ ｆｌｏｗ ｂｅｔｗｅｅｎ Ｍｉｙｕｎ ａｎｄ Ｌｕａｎｐｉｎｇ， Ｗｅｉｃｈａｎｇ， Ｗｕｌａｎｃｈａｂｕ ｐｏｐｕｌａｔｉｏｎｓ （３􀆰 ７４９，
１􀆰 ３８７ ａｎｄ ０􀆰 ９１２， ｒｅｓｐｅｃｔｉｖｅｌｙ） ｗｅｒｅ ｈｉｇｈｅｒ ｔｈａｎ ｔｈａｔ ｂｅｔｗｅｅｎ Ｍｉｙｕｎ ａｎｄ ｏｔｈｅｒ ｐｏｐｕｌａｔｉｏｎｓ． Ｃｏｎｓｉｄｅｒｉｎｇ
ｔｈｅ ｏｃｃｕｒｒｅｎｃｅ ｏｒｄｅｒ ｏｆ Ｏ． ａｓｉａｔｉｃｕｓ ｉｎ Ｂｅｉｊｉｎｇ ａｎｄ ｓｕｒｒｏｕｎｄｉｎｇ ａｒｅａｓ ｄｕｒｉｎｇ ｓｕｍｍｅｒ ａｎｄ ａｕｔｕｍｎ， ａ
ｃｏｎｃｌｕｓｉｏｎ ｃａｎ ｂｅ ｄｒａｗｎ ｔｈａｔ ｓｏｍｅ ｐｏｐｕｌａｔｉｏｎｓ ｏｆ Ｏ． ａｓｉａｔｉｃｕｓ ｉｎ Ｂｅｉｊｉｎｇ ｒｅｇｉｏｎ ｏｒｉｇｉｎａｔｅｄ ｍａｉｎｌｙ ｆｒｏｍ
Ｘｉｌｉｎｇｕｏｌｅ ａｎｄ Ｗｕｌａｎｃｈａｂｕ ｏｆ Ｉｎｎｅｒ Ｍｏｎｇｏｌｉａ， ａｎｄ Ｌｕａｎｐｉｎｇ ａｎｄ Ｗｅｉｃｈａｎｇ ｏｆ Ｈｅｂｅｉ．
Ｋｅｙ ｗｏｒｄｓ： Ｏｅｄａｌｅｕｓ ａｓｉａｔｉｃｕｓ； ｍｔＤＮＡ ＮＤ６； ｓｅｑｕｅｎｃｅ ａｎａｌｙｓｉｓ； ｇｅｎｅｔｉｃ ｒｅｌａｔｉｏｎｓｈｉｐ
　 　 亚洲小车蝗 Ｏｅｄａｌｅｕｓ ａｓｉａｔｉｃｕｓ （Ｂｅｙ⁃Ｂｉｅｎｋｏ）属
直翅目蝗总科丝角蝗科小车蝗属，是我国农牧交错
带的重要经济害虫，也是我国北方草原的主要优势
种害虫（蒋湘等，２００３），可为害禾本科、莎草科和鸢
尾科等植物，喜食羊草、隐子草、针茅、冰草、苔草等
牧草及玉米、莜麦、小麦等农作物（吴虎山和能乃扎
布，２００９）。 亚洲小车蝗的远距离迁飞能力以及趋
光性均较强，在城市中灯光强烈的地方易吸引大量
成虫。 如在 ２０００ 和 ２００２ 年，大量亚洲小车蝗成虫
出现在北京市区及区县城区夜间灯下，给市民正常
生活带来极大不便，同时也给农业生产造成严重损
失（蒋湘等，２００３）。 利用现代分子技术手段开展亚
洲小车蝗等迁飞性害虫种群遗传关系及迁飞来源研
究，对于虫情的提早预警、虫源地害虫基数的降低、
虫害防控效率的提高都具有重要意义。
目前，在昆虫种群遗传研究中，线粒体 ＤＮＡ 序
列分析技术是最常用的分子生物学分析技术之一。
任竹梅等（２００３）研究了不同地理区域小稻蝗 Ｏｘｙａ
ｉｎｔｒｉｃａｔａ （Ｓｔåｌ）的 ｍｔＤＮＡ 部分序列，在一定程度上
为其系统演化提供了分子生物学方面的证据；吴广
超等（２００９）利用线粒体 ＣＯＩ 基因对 １０ 个不同地理
种群的橘小实蝇 Ｂａｃｔｒｏｃｅｒａ ｄｏｒｓａｌｉｓ （Ｈｅｎｄｅｌ）样本进
行了遗传关系分析，很好地揭示了上海地区橘小实
蝇的具体来源。 在亚洲小车蝗遗传多样性研究中，
郑先云（２００６）利用 ＳＳＲＰ⁃ＰＣＲ技术初步明确了山西
太原的亚洲小车蝗种群很可能来自于甘肃酒泉种
群；李东伟（２０１０）利用 ＲＡＰＤ 分析技术对内蒙古 ９
个不同地理种群亚洲小车蝗进行了遗传分化研究；
高书晶等（２０１１）分别利用 ｍｔＤＮＡ ＮＤ１ 和 ＣＯＩ 基因
对内蒙古 ７ 个不同地理种群亚洲小车蝗样本进行了
遗传多样性和种群关系分析，发现不同个体之间存
在一定的分歧，但与地理分布没有直接的对应关系；
李云龙等（２０１３）利用 ＣＯＩ基因对来自内蒙古、河北
和北京的 ７ 个地理种群亚洲小车蝗样本进行了
ＤＮＡ序列分析，发现各单倍型之间未形成与其地理
种群空间位置相对应的聚类单元，且在单倍型网络
进化图中也未发现各单倍型之间存在明显的进化关
系；韩海斌（２０１４）对内蒙古 １５ 个亚洲小车蝗地理
种群进行了遗传多样性分析，发现种群之间遗传距
离与地理距离呈极显著相关关系。
在进行 ＤＮＡ序列分析研究中，进化速率越快的
基因或基因片段，在相同序列长度下所能提供的变
异信息就越多，越适用于开展近缘物种或是种内不
同种群间的遗传进化关系研究。 线粒体 ＤＮＡ 的
ＮＤ６ 基因在氨基酸水平上进化速率相对快于 ＣＯＩ
基因（Ｗａｄａ ＆ Ｙｏｋｏｈａｍａ，２００４）。 因此，本研究选择
ＮＤ６ 基因作为供试目的基因，在设计特异性引物
时，还包含了完整的 ｔＲＮＡ⁃Ｔｈｒ 基因以及侧翼的
ＮＤ４Ｌ、ＣＹＴＢ基因的部分序列，以期在增加目的片段
有效变异信息位点数量的基础上，更好地揭示北京
及周边地区亚洲小车蝗的种群遗传关系，明确北京
地区亚洲小车蝗的迁飞来源，为其及时预警和有效
防治提供科学依据。
１ 材料与方法
１􀆰 １ 材料
供试亚洲小车蝗：包括来自内蒙古的赤峰市广
兴源（２５ 个样本）、锡林郭勒盟（３３ 个）、乌兰察布市
（２７ 个）、达莱诺日（２７ 个），河北省的张家口市（１９
个）、滦平县（５ 个）、隆化县（５ 个）、围场（５ 个）和北
京密云县石城镇（５ 个）共 ９ 个地理种群的 １５５ 个样
本。 采集时间为 ２０１１ 年 ８ 月—２０１２ 年 ８ 月，采集后
的新鲜样品置于无水乙醇中， － ２０℃保存备用。
试剂与仪器：血液 ／细胞 ／组织基因组 ＤＮＡ提取
试剂盒、Ｔａｑ Ｐｌｕｓ ＤＮＡ Ｐｏｌｙｍｅｒａｓｅ、１００ ｂｐ ＤＮＡ Ｌａｄ⁃
ｄｅｒ，天根生化科技 （北京）有限公司；蛋白酶 Ｋ、
ｄＮＴＰｓ，日本 ＴａＫａＲａ 公司；溴化乙锭、琼脂糖，生工
生物工程上海（股份）有限公司；其余试剂均为国产
５３６４ 期 李云龙等： 北京及周边地区九个地理种群的亚洲小车蝗 ｍｔＤＮＡ ＮＤ６ 基因及其部分侧翼序列分析
分析纯。 特异引物由北京奥科生物技术公司合成。
ＧｅｎｅＡｍｐ ＰＣＲ Ｓｙｓｔｅｍ ９７００ 型 ＰＣＲ 仪，北京北方华
粤易有限责任公司；Ｅａｇｌｅ Ｅｙｅ⁃ｎ 凝胶成像系统，美
国 Ｓｔｒａｔａｇｅｎｅ公司；ＤＹＹ⁃８Ｃ型稳压稳流电泳仪、ＤＹ⁃
ＣＰ⁃３１Ｄ型水平电泳槽，北京六一仪器厂。
１􀆰 ２ 方法
１􀆰 ２􀆰 １ 亚洲小车蝗基因组 ＤＮＡ提取与目的基因克隆
采用血液 ／细胞 ／组织基因组 ＤＮＡ 提取试剂盒
进行亚洲小车蝗腿部肌肉组织总 ＤＮＡ的提取，ＤＮＡ
质量和片段大小采用水平琼脂糖凝胶电泳方法检
测。 根据亚洲小车蝗线粒体 ＤＮＡ 全序列（序列号
ＮＣ＿０１１１１５􀆰 １），利用 Ｐｒｉｍｅｒ Ｐｒｅｍｉｅｒ ５􀆰 ０ 软件和 Ｏｌｉ⁃
ｇｏ ６􀆰 ０ 软件设计扩增目的片段特异性引物 ＮＤ６ ＋５Ｆ
（５′⁃ＡＴＡＧＡＡＡＧＧＣＣＴＡＡＡＧＣＡＣＣ⁃３′）和 ＮＤ６ ＋ ５Ｒ
（５′⁃ＣＡＡＣＣＧＣＡＡＡＴＣＣＴＣＣＴＣＡＴ⁃３′），引物分别位
于亚洲小车蝗 ｍｔＤＮＡ 全序列第９ ５０５ ～ ９ ５２４和第
１０ ８８７ ～ １０ ９０６ 碱基处。 目的片段总长１ ３６３ ｂｐ，包
括完整线粒体 ＤＮＡ 的 ＮＤ６ 和 ｔＲＮＡ⁃Ｔｈｒ 基因，以及
ＮＤ４Ｌ、ＣＹＴＢ基因的部分序列片段。
７０ μＬ ＰＣＲ扩增反应体系为：模板 ＤＮＡ（２０ ～
３０ ｎｇ）３ μＬ、２０ μｍｏｌ ／ Ｌ引物各 ２ μＬ、２ × Ｍｉｘ ２５ μＬ、
２５ ｍｍｏｌ ／ Ｌ ＭｇＣｌ２ １ μＬ、ｄｄＨ２Ｏ ３７ μＬ。 反应条件为：
９４℃预变性 ３ ｍｉｎ；９４℃变性 １ ｍｉｎ，５７℃退火 １ ｍｉｎ，
７２℃延伸 １ ｍｉｎ，３５ 次循环；最后 ７２℃延伸 ３０ ｍｉｎ，
４℃保存备用。 ＰＣＲ产物测序采用双向测序方法以
保证序列的准确性，由北京奥科生物技术公司完成。
１􀆰 ２􀆰 ２ 目的序列的碱基组成分析
利用 Ｃｌｕｓｔａｌ Ｘ １􀆰 ８３ 软件对测序后的拼接序列
进行序列比对和剪切，以确保获得准确且长度一致
的供分析用目的序列；利用 Ｍｅｇａ ３􀆰 １ 软件进行序列
碱基含量特征、多态性位点特征、碱基的替换和转换
以及插入和缺失等信息分析（Ｋｕｍａｒ ｅｔ ａｌ． ，２００４）。
１􀆰 ２􀆰 ３ 亚洲小车蝗地理种群遗传多样性分析
核苷酸多样性（ｎｕｃｌｅｏｔｉｄｅ ｄｉｖｅｒｓｉｔｙ，Π）、平均成
对核苷酸差异（ｋ）和单倍型多样度（ｈａｐｌｏｔｙｐｅ ｄｉｖｅｒ⁃
ｓｉｔｙ，Ｈｄ）是进行遗传座位或群体间遗传变异程度比
较的理想指标（陈善元和张亚平，２００６）。 供试样本
的总体核苷酸多样性、平均成对核苷酸差异和单倍
型多样度参数使用 ＤＮＡＳＰ ４􀆰 １０􀆰 １ 软件进行分析
（Ｒｏｚａｓ ｅｔ ａｌ． ，２００３）。
１􀆰 ２􀆰 ４ 亚洲小车蝗地理种群遗传结构分析
种群遗传分化系数 ＦＳＴ （Ｆ⁃ｓｔａｔｉｓｔｉｃ）和基因流
（Ｎｍ）是反映种群间的遗传分化程度和各种群间基
因交流情况的重要指标（李明等，２００２）；分子方差
分析（ａｎａｌｙｓｉｓ ｏｆ ｍｏｌｅｃｕｌａｒ ｖａｒｉａｎｃｅ，ＡＭＯＶＡ）能够将
整个种群的总变异分割到个体内差异、个体间差异
和种群间差异的协方差组成中，用于考察种群分化
的主要变异来源，本研究中依据各种群的地理空间
特征，将供试种群划分为 ３ 个群组，即内蒙古种群、
河北种群和北京种群进行 ＡＭＯＶＡ；Ｍａｎｔｅｌ ｔｅｓｔ 分析
能够明确地理种群的遗传分化与种群空间距离之间
的相关性。 使用 Ａｒｌｅｑｕｉｎ ３􀆰 ０ 软件对上述参数进行
分析（Ｅｘｃｏｆｆｉｅｒ ｅｔ ａｌ． ，２００５），并采用成对测试法进
行 ＦＳＴ间的显著性检验。
１􀆰 ２􀆰 ５ 供试样本单倍型网络进化分析
使用 ＴＣＳ １􀆰 ２１ 软件进行供试样本的单倍型网
络进化分析（Ｃｌｅｍｅｎｔ ｅｔ ａｌ． ，２０００）。 在分析过程中，
根据 Ｐｆｅｎｎｉｎｇｅｒ ＆ Ｐｏｓａｄａ （２００２）提出的频率判据
（ｆｒｅｑｕｅｎｃｙ ｃｒｉｔｅｒｉｏｎ）、拓扑判据 （ ｔｏｐｏｌｏｇｉｃａｌ ｃｒｉｔｅｒｉ⁃
ｏｎ）、地理判据（ ｇｅｏｇｒａｐｈｉｃ ｃｒｉｔｅｒｉｏｎ）原则进行断环
（ｂｒｅａｋ ｔｈｅ ｌｏｏｐｓ）处理，以解决在进行进化网络构建
过程中出现的分支、关联等问题。
２ 结果与分析
２􀆰 １ 亚洲小车蝗目的序列的碱基组成
供试样品扩增序列经比对剪切后，最终获得
１５５ 条准确一致的线粒体 ＤＮＡ 序列，序列长 ８５１
ｂｐ，除包含 ＮＤ６ 和 ｔＲＮＡ⁃Ｔｈｒ 基因的完整序列外，还
包括 ＮＤ４Ｌ 基因 １３２ ｂｐ 的片段以及 ＣＹＴＢ 基因的
１３３ ｂｐ片段。 全部样本序列中 Ａ、Ｔ、Ｇ 和 Ｃ 碱基平
均含 量 分 别 为 ４６􀆰 ５０％ 、 ３２􀆰 ５０％ 、 １４􀆰 ００％ 和
７􀆰 ００％ ，Ａ ＋ Ｔ的平均含量明显高于 Ｇ ＋ Ｃ。 在供试
样本中共检测到 １６ 个多态性位点，占碱基总数的
１􀆰 ８８％ ，发生在密码子第 １ 位点上的变异占总变异
位点的 ４３􀆰 ７５％ ，第 ２ 位点的变异占 ３１􀆰 ２５％ ，第 ３
位点的变异占 ２５􀆰 ００％ 。 １６ 个多态性位点中包括 ７
个单变异多态性位点和 ９ 个简约信息位点；在碱基
的替换中，１５ 个位点发生了颠换，１ 个位点发生了转
换；所有多态性位点未发现碱基的插入和缺失，全部
由碱基的替换产生。
２􀆰 ２ 亚洲小车蝗地理种群的遗传多样性
供试亚洲小车蝗样本的整体核苷酸多样性为
０􀆰 ００１２，单倍型多样性为 ０􀆰 ６６，总体上遗传多样性
水平较低。 核苷酸多样性最高的为河北滦平种群
和北京密云种群，均为 ０􀆰 ００１４；其次是内蒙古达莱
诺日种群、乌兰察布种群和锡林郭勒种群，分别为
０􀆰 ００１２、０􀆰 ００１２ 和 ０􀆰 ００１０；内蒙古广兴源种群核
苷酸多样性值最低，为 ０􀆰 ０００２。 内蒙古锡林郭勒
６３６ 植　 物　 保　 护　 学　 报 ４３ 卷
和达莱诺日种群单倍型多样性在 ９ 个种群中最
高，均为 ０􀆰 ６８，内蒙古乌兰察布、河北滦平、隆化和
北京密云种群均为 ０􀆰 ６０，河北围场种群最低为
０􀆰 ４０（表 １）。
表 １ 亚洲小车蝗 ９ 个地理种群样本的遗传多样性参数
Ｔａｂｌｅ １ Ｔｈｅ ｒｅｌａｔｉｖｅ ｉｎｄｅｘ ｏｆ ｇｅｎｅｔｉｃ ｄｉｖｅｒｓｉｔｙ ｉｎ ｎｉｎｅ ｐｏｐｕｌａｔｉｏｎｓ ｏｆ Ｏｅｄａｌｅｕｓ ａｓｉａｔｉｃｕｓ
　 参数 Ｐａｒａｍｅｔｅｒ Π Ｈｄ ｋ Ｈｐ 参数 Ｐａｒａｍｅｔｅｒ Π Ｈｄ ｋ Ｈｐ
锡林郭勒 Ｘｉｌｉｎｇｕｏｌｅ ０􀆰 ００１０ ０􀆰 ６８ ０􀆰 ８７ ７ 滦平 Ｌｕａｎｐｉｎｇ ０􀆰 ００１４ ０􀆰 ６０ １􀆰 ２０ ２
广兴源 Ｇｕａｎｇｘｉｎｇｙｕａｎ ０􀆰 ０００２ ０􀆰 ５９ ０􀆰 ７６ ４ 隆化 Ｌｏｎｇｈｕａ ０􀆰 ０００７ ０􀆰 ６０ ０􀆰 ６０ ２
达莱诺日 Ｄａｌａｉｎｕｏｒｉ ０􀆰 ００１２ ０􀆰 ６８ １􀆰 ０１ ７ 围场 Ｗｅｉｃｈａｎｇ ０􀆰 ０００９ ０􀆰 ４０ ０􀆰 ８０ ２
乌兰察布 Ｗｕｌａｎｃｈａｂｕ ０􀆰 ００１２ ０􀆰 ６０ ０􀆰 ９９ ８ 密云 Ｍｉｙｕｎ ０􀆰 ００１４ ０􀆰 ６０ １􀆰 ２０ ２
张家口 Ｚｈａｎｇｊｉａｋｏｕ ０􀆰 ０００７ ０􀆰 ５１ ０􀆰 ６２ ４ 平均 Ａｖｅｒａｇｅ ０􀆰 ００１２ ０􀆰 ６６
　 　 Π：核苷酸多样性； Ｈｄ：单倍型多样性； ｋ：所有序列对间的平均核苷酸差异数； Ｈｐ：单倍型数量。 Π： Ｔｈｅ ａｖｅｒａｇｅ ｎｕｍｂｅｒ
ｏｆ ｎｕｃｌｅｏｔｉｄｅ ｄｉｆｆｅｒｅｎｃｅｓ ｐｅｒ ｓｉｔｅ ｂｅｔｗｅｅｎ ｔｗｏ ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ； Ｈｄ： ｔｈｅ ｐｒｏｂａｂｉｌｉｔｙ ｔｈａｔ ｔｗｏ ｒａｎｄｏｍｌｙ ｃｈｏｓｅｎ ｈａｐｌｏｔｙｐｅｓ ａｒｅ ｄｉｆｆｅｒｅｎｔ ｉｎ ｔｈｅ
ｓａｍｐｌｅｓ； ｋ： ｔｈｅ ａｖｅｒａｇｅ ｎｕｍｂｅｒ ｏｆ ｎｕｃｌｅｏｔｉｄｅ ｄｉｆｆｅｒｅｎｃｅｓ ｂｅｔｗｅｅｎ ａｌｌ ｐａｉｒｓ ｏｆ ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ； Ｈｐ： ｔｈｅ ｎｕｍｂｅｒ ｏｆ ｈａｐｌｏｔｙｐｅｓ．
２􀆰 ３ 亚洲小车蝗地理种群的遗传结构
各亚洲小车蝗地理种群间遗传分化系数（ＦＳＴ）
在 － ０􀆰 １５４ ～ ０􀆰 ５１３ 之间。 北京密云种群与河北滦
平、围场种群间的 ＦＳＴ分别为 － ０􀆰 １５４ 和 ０􀆰 ２６５，而与
其余种群间的 ＦＳＴ均在 ０􀆰 ３５４ 以上。 河北滦平种群
与围场种群间 ＦＳＴ为 ０􀆰 ０３９，与其余种群间的 ＦＳＴ均
在 ０􀆰 １６１ 以上或为负值（表 ２）。 各种群间基因流
　 　 　
（Ｎｍ）绝对值整体上表现出与种群遗传分化系数相
似的趋势，Ｎｍ 最大值出现在河北围场种群和内蒙
古锡林郭勒种群间，为 ３ ５７１􀆰 ９３０；最小值出现在北
京密云种群和内蒙古广兴源种群之间，为 ０􀆰 ４７５。
北京密云种群与河北滦平、围场、内蒙古乌兰察布种
群间 Ｎｍ 绝对值分别为 ３􀆰 ７４９、１􀆰 ３８７ 和 ０􀆰 ９１２（表
２）。 通过 ＡＭＯＶＡ 可知，种群间变异占 １１􀆰 ２５％ ，
　 　 　表 ２ 亚洲小车蝗 ９ 个地理种群样本的遗传分化系数 ＦＳＴ和基因流 Ｎｍ
Ｔａｂｌｅ ２ Ｐａｉｒｗｉｓｅ ＦＳＴ ｖａｌｕｅｓ ａｎｄ ｇｅｎｅ ｆｌｏｗ （Ｎｍ） ｉｎ ｎｉｎｅ ｐｏｐｕｌａｔｉｏｎｓ ｏｆ Ｏｅｄａｌｅｕｓ ａｓｉａｔｉｃｕｓ
种群
Ｐｏｐｕｌａｔｉｏｎ
锡林郭勒
Ｘｉｌｉｎｇｕｏｌｅ
广兴源
Ｇｕａｎｇｘｉｎｇ⁃
ｙｕａｎ
达莱诺日
Ｄａｌａｉｎｕｏｒｉ
乌兰察布
Ｗｕｌａｎ⁃
ｃｈａｂｕ
张家口
Ｚｈａｎｇ⁃
ｊｉａｋｏｕ
滦平
Ｌｕａｎｐｉｎｇ
隆化
Ｌｏｎｇｈｕａ
围场
Ｗｅｉｃｈａｎｇ
密云
Ｍｉｙｕｎ
锡林郭勒
Ｘｉｌｉｎｇｕｏｌｅ
－ ２５􀆰 ５６３ － ２８􀆰 ４９６ １１􀆰 ８１２ ２２􀆰 ９５２ １􀆰 １０６ － ４􀆰 ８５６ － ３ ５７１􀆰 ９３０ 　 ０􀆰 ５６６
广兴源
Ｇｕａｎｇｘｉｎｇｙｕａｎ
－ ０􀆰 ０１９ － ２４􀆰 ９４９ ８􀆰 ６２６ １６􀆰 ８０７ ０􀆰 ８９１ － ４􀆰 ７７３ １２􀆰 ４２９ ０􀆰 ４７５
达莱诺日
Ｄａｌａｉｎｕｏｒｉ
－ ０􀆰 ０１８ － ０􀆰 ０２１ ８６􀆰 １５５ － １２３􀆰 ９５７ １􀆰 ６２５ － ４􀆰 ７３３ － ９􀆰 ５５９ ０􀆰 ７４９
乌兰察布
Ｗｕｌａｎｃｈａｂｕ
０􀆰 ０４１∗ ０􀆰 ０５５∗ ０􀆰 ００６ － ２６􀆰 ５６９ ２􀆰 ６１３ － ７􀆰 ５１３ － ５􀆰 １３８ ０􀆰 ９１２
张家口
Ｚｈａｎｇｊｉａｋｏｕ
０􀆰 ０２１ ０􀆰 ０２９ － ０􀆰 ００４ － ０􀆰 ０１９ １􀆰 １８２ － ５􀆰 ７４９ － ９􀆰 ８６２ ０􀆰 ５１１
滦平 Ｌｕａｎｐｉｎｇ ０􀆰 ３１１∗ ０􀆰 ３５９∗ ０􀆰 ２３５∗ ０􀆰 １６１ ０􀆰 ２９８ １􀆰 ４８３ １２􀆰 ４３６ － ３􀆰 ７４９
隆化 Ｌｏｎｇｈｕａ － ０􀆰 １１５ － ０􀆰 １１７ － ０􀆰 １１８ － ０􀆰 ０７１ － ０􀆰 ０９５ ０􀆰 ２５２ － ５􀆰 ７７４ ０􀆰 ６３８
围场 Ｗｅｉｃｈａｎｇ － ０􀆰 ００１ ０􀆰 ０３９ － ０􀆰 ０５５ － ０􀆰 １０８ － ０􀆰 ０５３ ０􀆰 ０３９ － ０􀆰 ０９５ １􀆰 ３８７
密云 Ｍｉｙｕｎ ０􀆰 ４６９∗ ０􀆰 ５１３∗ ０􀆰 ４０１∗ ０􀆰 ３５４∗ ０􀆰 ４９５∗ － ０􀆰 １５４ ０􀆰 ４３９ ０􀆰 ２６５
　 　 对角线以上为基因流 Ｎｍ； 对角线以下为遗传分化系数 ＦＳＴ； ∗： 表明经成对法测试法检验该 ＦＳＴ值与其它 ＦＳＴ值之间差
异显著（Ｐ ＜ ０􀆰 ０５）。 Ｄａｔａ ａｂｏｖｅ ｄｉａｇｏｎａｌ ｒｅｐｒｅｓｅｎｔ ｇｅｎｅ ｆｌｏｗ （Ｎｍ） ｂｅｔｗｅｅｎ ｐｏｐｕｌａｔｉｏｎｓ； ｄａｔａ ｂｅｌｏｗ ｄｉａｇｏｎａｌ ｒｅｐｒｅｓｅｎｔ ｇｅｎｅｔｉｃ ｄｉｖｅｒ⁃
ｇｅｎｃｅ （ＦＳＴ）； ∗： ｔｈｅｒｅ ｉｓ ｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔ ｄｉｆｆｅｒｅｎｃｅ ｂｅｔｗｅｅｎ ｔｈｉｓ ＦＳＴ ａｎｄ ｏｔｈｅｒ ＦＳＴ ｖａｌｕｅｓ ｂｙ ｐａｉｒｗｉｓｅ ｔｅｓｔ （Ｐ ＜ ０􀆰 ０５）．
组内种群间变异占 １􀆰 ８８％ ，种群个体间变异占
８６􀆰 ８８％ ，表明引起种群总体变异的主要因素还是种
群内的个体间变异。 各种群间空间距离间与地理种
群 ＦＳＴ、Ｎｅｉ氏遗传距离（Ｎｅｉ 氏平均核苷酸差异数）
间的 Ｍａｎｔｅｌ ｔｅｓｔ 结果表明，２ 对矩阵之间不存在显
著相关性（Ｒ１ ＝ － ０􀆰 ２４４，Ｐ１ ＝ ０􀆰 ７５７；Ｒ２ ＝ － ０􀆰 ０１５，
７３６４ 期 李云龙等： 北京及周边地区九个地理种群的亚洲小车蝗 ｍｔＤＮＡ ＮＤ６ 基因及其部分侧翼序列分析
Ｐ２ ＝ ０􀆰 ４３３），即亚洲小车蝗种群间的地理距离与遗
传分化程度不存在显著相关性（表 ３）。
２􀆰 ４ 亚洲小车蝗单倍型网络进化
在 １５５ 条序列中共鉴定出 ２０ 种单倍型，占总样
品量的 １２􀆰 ９０％ ，其中共享单倍型 ７ 种，其余 １３ 种
均为独享单倍型。 在 ７ 种共享单倍型中，单倍型 Ｈ２
为所有 ９ 个种群的 ８４ 个个体所共享，占样本总量的
５４􀆰 ２０％ ；单倍型 Ｈ１ 为锡林郭勒、广兴源、达莱诺
日、乌兰察布、张家口、隆化 ７ 个种群的 ４４ 个个体所
共享，占样本总量的 ２８􀆰 ４０％ ；其余 ５ 种单倍型在至
少 ２ 个种群间共享，分别是 Ｈ４ 在达莱诺日种群和
滦平种群间共享；Ｈ１０ 在锡林郭勒种群和乌兰察布
种群间共享；Ｈ１１ 在达莱诺日种群和乌兰察布种群
间共享；Ｈ１５ 在达莱诺日种群和围场种群间共享；
Ｈ１７ 在张家口种群和乌兰察布种群间共享（表 ４）。
北京密云种群共鉴定出 Ｈ２、Ｈ１４ 两种单倍型，
Ｈ２ 为所有 ９ 个种群共享，Ｈ１４ 被北京密云种群独
享，由 Ｈ１０ 经 ２ 次突变而来，Ｈ１０ 被锡林郭勒种群
和乌兰察布种群共享。 Ｈ４ 由 Ｈ３ 经过 １ 次突变形
成，Ｈ３ 被广兴源种群独享，Ｈ４ 被达莱诺日种群和滦
平种群共享；Ｈ１５ 由 Ｈ１ 经过 １ 次突变形成，Ｈ１５ 被
达莱诺日种群和围场种群共享（图 １）。
表 ３ 亚洲小车蝗不同地理种群间的 Ｎｅｉ氏遗传距离和地理距离
Ｔａｂｌｅ ３ Ｎｅｉ’ｓ ｇｅｎｅｔｉｃ ｄｉｓｔａｎｃｅｓ ａｎｄ ｇｅｏｇｒａｐｈｉｃ ｄｉｓｔａｎｃｅｓ ｂｅｔｗｅｅｎ ｎｉｎｅ ｐｏｐｕｌａｔｉｏｎｓ ｏｆ Ｏｅｄａｌｅｕｓ ａｓｉａｔｉｃｕｓ
种群
Ｐｏｐｕｌａｔｉｏｎ
锡林郭勒
Ｘｉｌｉｎｇｕｏｌｅ
广兴源
Ｇｕａｎｇｘｉｎｇ⁃
ｙｕａｎ
达莱诺日
Ｄａｌａｉｎｕｏｒｉ
乌兰察布
Ｗｕｌａｎ⁃
ｃｈａｂｕ
张家口
Ｚｈａｎｇ⁃
ｊｉａｋｏｕ
滦平
Ｌｕａｎｐｉｎｇ
隆化
Ｌｏｎｇｈｕａ
围场
Ｗｅｉｃｈａｎｇ
密云
Ｍｉｙｕｎ
锡林郭勒
Ｘｉｌｉｎｇｕｏｌｅ １８２􀆰 ４７０ ２０７􀆰 ３５０ ２２５􀆰 ６６４ １００􀆰 ３３６ １９４􀆰 ７６６ １４２􀆰 ９４３ １３３􀆰 ４３６ ２０６􀆰 ９１５
广兴源
Ｇｕａｎｇｘｉｎｇｙｕａｎ － ０􀆰 ０１６ ７２􀆰 ５７８ ４０６􀆰 ７０９ ２７３􀆰 ２６０ ２０２􀆰 ３４５ １６１􀆰 ２８５ ８８􀆰 ７５９ ２７５􀆰 ０７１
达莱诺日
Ｄａｌａｉｎｕｏｒｉ － ０􀆰 ０１７ － ０􀆰 ０１８ ４１８􀆰 ５５３ ３０６􀆰 ４５１ ２７１􀆰 ７５０ １９５􀆰 ９３２ １２２􀆰 ７６２ ３３９􀆰 ０５３
乌兰察布
Ｗｕｌａｎｃｈａｂｕ ０􀆰 ０４０ ０􀆰 ０５３ ０􀆰 ００６ １６３􀆰 ２９６ ３７２􀆰 ７６６ ３３５􀆰 ８８７ ３５２􀆰 ６７５ ３３１􀆰 ２２９
张家口
Ｚｈａｎｇｊｉａｋｏｕ ０􀆰 ０２０ ０􀆰 ０２２ － ０􀆰 ００１ － ０􀆰 ０１２ ２０９􀆰 ５８９ １８１􀆰 ９８５ ２１０􀆰 １８０ １７７􀆰 ７２５
滦平 Ｌｕａｎｐｉｎｇ ０􀆰 ３８４ ０􀆰 ４２９ ０􀆰 ３０６ ０􀆰 １７８ ０􀆰 ２６３ ７３􀆰 ８１０ １４７􀆰 ２５９ ８７􀆰 ３４４
隆化 Ｌｏｎｇｈｕａ － ０􀆰 ０６３ － ０􀆰 ０６４ － ０􀆰 ０６７ － ０􀆰 ０３０ － ０􀆰 ０５２ ０􀆰 ３０６ ７８􀆰 ０２８ １３３􀆰 ７１１
围场Ｗｅｉｃｈａｎｇ ０􀆰 ００６ ０􀆰 ０２７ － ０􀆰 ０３４ － ０􀆰 ０７９ － ０􀆰 ０４８ ０􀆰 ０４１ － ０􀆰 ０６１ ２１１􀆰 ７１１
密云 Ｍｉｙｕｎ ０􀆰 ７７９ ０􀆰 ８３５ ０􀆰 ６８２ ０􀆰 ５４４ ０􀆰 ６６９ － ０􀆰 １６２ ０􀆰 ７１２ ０􀆰 ３６４
　 　 对角线以下为遗传距离； 对角线以上为地理距离（ｋｍ）。 Ｄａｔａ ｂｅｌｏｗ ｄｉａｇｏｎａｌ ｒｅｐｒｅｓｅｎｔ Ｎｅｉ’ ｓ ｇｅｎｅｔｉｃ ｄｉｓｔａｎｃｅｓ； ｄａｔａ ａｂｏｖｅ
ｄｉａｇｏｎａｌ ｒｅｐｒｅｓｅｎｔ ｇｅｏｇｒａｐｈｉｃ ｄｉｓｔａｎｃｅｓ （ｋｍ）．
表 ４ 各亚洲小车蝗地理种群的单倍型数量及单倍型频率
Ｔａｂｌｅ ４ Ｔｈｅ ｎｕｍｂｅｒ ａｎｄ ｆｒｅｑｕｅｎｃｙ ｏｆ ｈａｐｌｏｔｙｐｅｓ ｉｎ ｎｉｎｅ ｐｏｐｕｌａｔｉｏｎｓ
种群
Ｐｏｐｕｌａｔｉｏｎ
单倍型数量
Ｈａｐｌｏｔｙｐｅ ｎｕｍｂｅｒ
单倍型编码（频率）
Ｈａｐｌｏｔｙｐｅ ｃｏｄｅ （ｆｒｅｑｕｅｎｃｙ）
锡林郭勒 Ｘｉｌｉｎｇｕｏｌｅ ７ Ｈ１（１３）、Ｈ２（１４）、Ｈ５（２）、Ｈ７（１）、Ｈ８（１）、Ｈ１０（１）、Ｈ１３（１）
广兴源 Ｇｕａｎｇｘｉｎｇｙｕａｎ ４ Ｈ１（１０）、Ｈ２（１３）、Ｈ３（１）、Ｈ２０（１）
达莱诺日 Ｄａｌａｉｎｕｏｒｉ ７ Ｈ１（９）、Ｈ２（１３）、Ｈ４（１）、Ｈ１１（１）、Ｈ１５（１）、Ｈ１８（１）、Ｈ１９（１）
乌兰察布 Ｗｕｌａｎｃｈａｂｕ ８ Ｈ１（６）、Ｈ２（１９）、Ｈ９（１）、Ｈ１０（１）、Ｈ１１（１）、Ｈ１２（１）、Ｈ１６（１）、Ｈ１７（１）
张家口 Ｚｈａｎｇｊｉａｋｏｕ ４ Ｈ１（４）、Ｈ２（１３）、Ｈ６（１）、Ｈ１７（１）
滦平 Ｌｕａｎｐｉｎｇ ２ Ｈ２（３）、Ｈ４（２）
隆化 Ｌｏｎｇｈｕａ ２ Ｈ１（２）、Ｈ２（３）
围场 Ｗｅｉｃｈａｎｇ ２ Ｈ２（４）、Ｈ１５（１）
密云 Ｍｉｙｕｎ ２ Ｈ２（２）、Ｈ１４（３）
８３６ 植　 物　 保　 护　 学　 报 ４３ 卷
图 １ 亚洲小车蝗供试样本单倍型最大简约网络进化图
Ｆｉｇ． １ Ｎｅｔｗｏｒｋ ｏｆ ｔｈｅ ｍｏｓｔ ｐａｒｓｉｍｏｎｉｏｕｓ ｅｖｏｌｕｔｉｏｎａｒｙ ｒｅｌａｔｉｏｎｓｈｉｐｓ ａｍｏｎｇ ｈａｐｌｏｔｙｐｅｓ ｏｆ Ｏｅｄａｌｅｕｓ ａｓｉａｔｉｃｕｓ
○： 缺失的中间单倍型； Ａ： 锡林郭勒种群； Ｂ： 广兴源种群； Ｃ： 达莱诺日种群； Ｄ： 乌兰察布种群； Ｅ： 张家口种群；
Ｆ： 滦平种群； Ｇ： 隆化种群； Ｈ： 围场种群； Ｉ： 密云种群。 ○： Ｍｉｓｓｉｎｇ ｉｎｔｅｒｍｅｄｉａｔｅ ｈａｐｌｏｔｙｐｅ； Ａ： Ｘｉｌｉｎｇｕｏｌｅ ｐｏｐｕｌａｔｉｏｎ； Ｂ：
Ｇｕａｎｇｘｉｎｇｙｕａｎ ｐｏｐｕｌａｔｉｏｎ； Ｃ： Ｄａｌａｉｎｕｏｒｉ ｐｏｐｕｌａｔｉｏｎ； Ｄ： Ｗｕｌａｎｃｈａｂｕ ｐｏｐｕｌａｔｉｏｎ； Ｅ： Ｚｈａｎｇｊｉａｋｏｕ ｐｏｐｕｌａｔｉｏｎ； Ｆ： Ｌｕａｎｐｉｎｇ ｐｏｐｕ⁃
ｌａｔｉｏｎ； Ｇ： Ｌｏｎｇｈｕａ ｐｏｐｕｌａｔｉｏｎ； Ｈ： Ｗｅｉｃｈａｎｇ ｐｏｐｕｌａｔｉｏｎ； Ｉ： Ｍｉｙｕｎ ｐｏｐｕｌａｔｉｏｎ．
　
３ 讨论
本研究用于序列分析的基因片段长度为 ８５１
ｂｐ，除包括完整的 ＮＤ６、ｔＲＮＡ⁃Ｔｈｒ 基因外，还包括侧
翼部分 ＮＤ４Ｌ、ＣＹＴＢ基因序列。 在 １５５ 个样本中共
鉴定出 ２０ 种单倍型，占所有样品量的 １２􀆰 ９％ ；在
８５１ 个碱基中共检测到 １６ 个多态性位点，占碱基总
数的 １􀆰 ８８％ ，样本总体核苷酸多样性为 ０􀆰 ００１２，单
倍型多样性为 ０􀆰 ６６。 李云龙等（２０１３）选用 ｍｔＤＮＡ
ＣＯＩ部分基因作为目的序列，通过对 ７ 个地理种群
的 １３９ 个亚洲小车蝗样品分析，共检测到 １３ 种单倍
型，占所有样品量的 ９􀆰 ４％ ；在 ６４５ ｂｐ序列中检测到
１２ 个多态性位点，占所测核苷酸的 １􀆰 ８６％ ，样本总
体核苷酸多样性为 ０􀆰 ０００４２，单倍型多样性为
０􀆰 ２０５。 用于本研究的线粒体 ＤＮＡ ＮＤ６、 ｔＲＮＡ⁃Ｔｈｒ
基因以及侧翼部分 ＮＤ４Ｌ、ＣＹＴＢ 基因序列，其单倍
型检出率、多态性位点比例、核苷酸多样性、单倍型
多样性等遗传多样性参数值均高于 ｍｔＤＮＡ ＣＯＩ 基
因供试区段的相应数值。 因此，ＮＤ６ 基因及其侧翼
部分序列与 ｍｔＤＮＡ ＣＯＩ基因相比，能提供更多的遗
传信息，并且扩增测序结果稳定，更适用于开展近缘
物种或是种内不同种群间的遗传进化关系研究。
单倍型网络进化分析方法，不仅能解决多系和
网状结构的问题，还能充分利用单倍型的频率及地
理来源等信息，提供种群间详细的基因流动方向以
及具体的衍生突变过程（Ｅｘｃｏｆｆｉｅｒ ｅｔ ａｌ． ，１９９２），有
效弥补常规通过构建系统进化树进行地理种群间遗
传关系分析方法的缺陷。 本研究与李云龙等
（２０１３）选用 ＣＯＩ 部分基因进行亚洲小车蝗种群遗
传关系分析相比，在选用了变异速率更快的 ＮＤ６ 基
因及其侧翼部分序列作为目的基因情况下，１５５ 个
供试亚洲小车蝗样本总体上仍表现出较低水平的遗
传多样性；９ 个地理种群 ＦＳＴ、Ｎｅｉ氏遗传距离与各种
群空间距离间的 Ｍａｎｔｅｌ ｔｅｓｔ 结果也表明，各种群间
的遗传分化程度与地理距离不存在显著相关性，常
规遗传多样性与遗传结构分析方法无法提供直接的
种群迁飞路径信息。 本研究在进行单倍型网络进化
分析时，从单倍型网络进化图中可判断出北京密云
种群 Ｈ２、Ｈ１４ 两种单倍型的具体进化途径，从而直
接判断出部分北京密云亚洲小车蝗种群的具体迁飞
来源。 因此，单倍型网络进化分析方法更适用于亚
洲小车蝗等迁飞性害虫种内不同地理种群之间的遗
传关系研究。
本研究中，北京密云种群鉴定出的单倍型 Ｈ２
为所有 ９ 个种群共享，Ｈ１４ 被北京密云种群独享，由
Ｈ１０ 经 ２ 次突变而来，Ｈ１０ 被锡林郭勒和乌兰察布
２ 个种群共享，因此，北京地区的部分亚洲小车蝗种
群是从内蒙古锡林郭勒、乌兰察布地区迁飞而来。
同时，北京密云种群与河北滦平、围场种群、内蒙古
乌兰察布种群间 Ｎｍ分别为 ３􀆰 ７４９、１􀆰 ３８７ 和 ０􀆰 ９１２，
均高于密云种群与其它种群间的基因流绝对值，表
明北京密云种群与上述 ３ 个种群间存在着较频繁的
基因交流。 夏秋季节，亚洲小车蝗在内蒙古、河北以
及北京地区存在着整体由北向南先后出现的时序规
９３６４ 期 李云龙等： 北京及周边地区九个地理种群的亚洲小车蝗 ｍｔＤＮＡ ＮＤ６ 基因及其部分侧翼序列分析
律，因此，北京地区的亚洲小车蝗种群还有一部分是
从河北滦平以及围场 ２ 地迁飞而来。
韩海斌（２０１４）采用 ８ 对 ＳＳＲ 引物和 ７ 条 ＩＳＳＲ
引物对内蒙古 １５ 个地区的亚洲小车蝗种群进行遗
传多样性分析时发现，种群之间遗传距离与地理距
离呈极显著相关关系。 在本研究中，９ 个地理种群
的遗传距离与空间距离间 Ｍａｎｔｅｌ ｔｅｓｔ 结果显示，各
种群间的遗传分化程度与地理距离无显著相关性。
这一方面可能与本研究只选用了 ９ 个亚洲小车蝗种
群，并且研究个体数相对较少有关，另一方面可能与
该研究中选用的 ＳＳＲ 标记分析法和本研究中 ＤＮＡ
序列分析方法间的差异有关。 在今后研究中，还需
进一步增加国内其它地区的种群数量和样本数，并
将 ＤＮＡ序列分析方法与 ＳＳＲ、ＩＳＳＲ标记分析法相结
合进行更深入的探讨。
参 考 文 献 （Ｒｅｆｅｒｅｎｃｅｓ）
Ｃｈｅｎ ＳＹ， Ｚｈａｎｇ ＹＰ． ２００６． Ｇｅｎｅｔｉｃ ｍｅｔｈｏｄ ａｎｄ ｉｔｓ ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎ ｏｆ
ｔｈｅ ｓｔｕｄｉｅｓ ｏｎ ｔｈｅ ｏｒｉｇｉｎ ｏｆ ｄｏｍｅｓｔｉｃ ａｎｉｍａｌ． Ｃｈｉｎｅｓｅ Ｓｃｉｅｎｃｅ
Ｂｕｌｌｅｔｉｎ， ５１（２１）： ２４６９ － ２４７５ （ｉｎ Ｃｈｉｎｅｓｅ） ［陈善元， 张亚
平． ２００６． 家养动物起源研究的遗传学方法及其应用． 科学
通报， ５１（２１）： ２４６９ － ２４７５］
Ｃｌｅｍｅｎｔ Ｍ， Ｐｏｓａｄａ Ｄ， Ｃｒａｎｄａｌｌ ＫＡ． ２０００． ＴＣＳ： ａ ｃｏｍｐｕｔｅｒ ｐｒｏ⁃
ｇｒａｍ ｔｏ ｅｓｔｉｍａｔｅ ｇｅｎｅ ｇｅｎｅａｌｏｇｉｅｓ． Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｅｃｏｌｏｇｙ， ９（１０）：
１６５７ － １６５９
Ｅｘｃｏｆｆｉｅｒ Ｌ， Ｌａｖａｌ Ｇ， Ｓｃｈｎｅｉｄｅｒ Ｓ． ２００５． Ａｒｌｅｑｕｉｎ （ ｖｅｒｓｉｏｎ．
３􀆰 ０）： ａｎ ｉｎｔｅｇｒａｔｅｄ ｓｏｆｔｗａｒｅ ｐａｃｋａｇｅ ｆｏｒ ｐｏｐｕｌａｔｉｏｎ ｇｅｎｅｔｉｃｓ
ｄａｔａ ａｎａｌｙｓｉｓ． Ｅｖｏｌｕｔｉｏｎａｒｙ Ｂｉｏｉｎｆｏｒｍａｔｉｃｓ Ｏｎｌｉｎｅ， １： ４７ － ５０
Ｅｘｃｏｆｆｉｅｒ Ｌ， Ｓｍｏｕｓｅ ＰＥ， Ｑｕａｔｔｒｏ ＪＭ． １９９２． Ａｎａｌｙｓｉｓ ｏｆ ｍｏｌｅｃｕｌａｒ
ｖａｒｉａｎｃｅ ｉｎｆｅｒｒｅｄ ｆｒｏｍ ｍｅｔｒｉｃ ｄｉｓｔａｎｃｅｓ ａｍｏｎｇ ＤＮＡ ｈａｐｌｏｔｙｐｅｓ：
ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎ ｔｏ ｈｕｍａｎ ｍｉｔｏｃｈｏｎｄｒｉａｌ ＤＮＡ ｒｅｓｔｒｉｃｔｉｏｎ ｄａｔａ． Ｇｅ⁃
ｎｅｔｉｃｓ， １３１（２）： ４７９ － ４９１
Ｇａｏ ＳＪ， Ｌｉ ＤＷ， Ｌｉｕ ＡＰ， Ｙａｎ ＺＪ， Ｘｕ ＬＢ． ２０１１． Ｓｅｑｕｅｎｃｅ ａｎａｌｙｓｉｓ
ｏｆ ｍｔＤＮＡ ＣＯＩ ｇｅｎｅ ａｎｄ ｒｅｌａｔｉｏｎｓｈｉｐｓ ｏｆ ｇｅｏｇｒａｐｈｉｃａｌ ｐｏｐｕｌａ⁃
ｔｉｏｎｓ ｏｆ Ｏｅｄａｌｅｕｓ ａｓｉａｔｉｃｕｓ ｉｎ Ｉｎｎｅｒ Ｍｏｎｇｏｌｉａ． Ａｃｔａ Ａｇｒｅｓｔｉａ Ｓｉｎ⁃
ｉｃａ， １９（５）： ８４６ － ８５１ （ｉｎ Ｃｈｉｎｅｓｅ） ［高书晶， 李东伟，刘爱
萍， 闫志坚， 徐林波． ２０１１． 不同地理种群的亚洲小车蝗
ｍｔＤＮＡ ＣＯＩ基因序列及其相互关系． 草地学报， １９ （５）：
８４６ － ８５１］
Ｈａｎ ＨＢ． ２０１４． Ａｎａｌｙｓｉｓ ｏｆ ｔｈｅ ｇｅｎｅｔｉｃ ｄｉｖｅｒｓｉｔｙ ｏｆ Ｏｅｄａｌｅｕｓ ａｓｉａｔｉｃ⁃
ｕｓ （ Ｏｒｔｈｏｐｔｅｒａｎ： Ａｃｒｉｄｉｄａｅ） ｐｏｐｕｌａｔｉｏｎｓ ｉｎ Ｉｎｎｅｒ Ｍｏｎｇｏｌｉａ，
ｎｏｒｔｈｅｒｎ Ｃｈｉｎａ． Ｐｈ． Ｄ Ｔｈｅｓｉｓ． Ｈｏｈｈｏｔ： Ｉｎｎｅｒ Ｍｏｎｇｏｌｉａ Ａｇｒｉｃｕｌ⁃
ｔｕｒａｌ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ （ｉｎ Ｃｈｉｎｅｓｅ） ［韩海斌． ２０１４． 内蒙古亚洲小
车蝗种群遗传多样性的研究． 博士学位论文． 呼和浩特：内
蒙古农业大学］
Ｊｉａｎｇ Ｘ， Ｍａｉｍａｉｔｉｍｉｎｇ， Ｚｈａｎｇ Ｌ． ２００３． Ｎｏｃｔｕｒｎａｌ ｍｉｇｒａｔｉｏｎ ｏｆ ｇｒａｓｓ⁃
ｈｏｐｐｅｒ （Ａｃｒｉｄｉｄａｅ： Ｏｅｄａｌｅｕｓ ａｓｉａｔｉｃｕｓ）． Ａｃｔａ Ａｇｒｅｓｔｉａ Ｓｉｎｉｃａ，
１１（１）： ７５ －７７ （ｉｎ Ｃｈｉｎｅｓｅ） ［蒋湘， 买买提明， 张龙． ２００３．
夜间迁飞的亚洲小车蝗． 草地学报， １１（１）： ７５ －７７］
Ｋｕｍａｒ Ｓ， Ｔａｍｕｒａ Ｋ， Ｎｅｉ Ｍ． ２００４． ＭＥＧＡ３： ｉｎｔｅｇｒａｔｅｄ ｓｏｆｔｗａｒｅ ｆｏｒ
ｍｏｌｅｃｕｌａｒ ｅｖｏｌｕｔｉｏｎａｒｙ ｇｅｎｅｔｉｃｓ ａｎａｌｙｓｉｓ ａｎｄ ｓｅｑｕｅｎｃｅ ａｌｉｇｎ⁃
ｍｅｎｔ． Ｂｒｉｅｆｉｎｇｓ ｉｎ Ｂｉｏｉｎｆｏｒｍａｔｉｃｓ， ５（２）： １５０ － １６３
Ｌｉ ＤＷ． ２０１０． Ｇｅｎｅｔｉｃ ｄｉｖｅｒｓｉｔｙ ｏｆ ｄｉｆｆｅｒｅｎｔ ｇｅｏｇｒａｐｈｉｃａｌ ｐｏｐｕｌａｔｉｏｎｓ
ｏｆ Ｏｅｄａｌｅｕｓ ａｓｉａｔｉｃｕｓ ｉｎ Ｉｎｎｅｒ Ｍｏｎｇｏｌｉａ． Ｍａｓｔｅｒ Ｔｈｅｓｉｓ． Ｈｏ⁃
ｈｈｏｔ： Ｉｎｎｅｒ Ｍｏｎｇｏｌｉａ Ａｇｒｉｃｕｌｔｕｒａｌ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ （ｉｎ Ｃｈｉｎｅｓｅ） ［李
东伟． ２０１０． 内蒙古地区亚洲小车蝗不同地理种群遗传多
样性研究． 硕士学位论文． 呼和浩特： 内蒙古农业大学］
Ｌｉ Ｍ， Ｒａｏ Ｇ， Ｗｅｉ ＦＷ， Ｆａｎｇ ＳＧ， Ｔａｎｇ ＣＸ， Ｔａｍａｔｅ ＨＢ． ２００２．
Ｐｏｐｕｌａｔｉｏｎ ｇｅｎｅｔｉｃ ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ ａｎｄ ｇｅｏｇｒａｐｈｉｃ ｓｕｂｄｉｖｉｓｉｏｎ ｏｆ ｔｈｅ
ｒｅｄ ｐａｎｄａ （Ａｉｌｕｒｕｓ ｆｕｌｇｅｎｓ）． Ａｃｔａ Ｚｏｏｌｏｇｉｃａ Ｓｉｎｉｃａ， ４８ （４）：
４８０ － ４８６ （ｉｎ Ｃｈｉｎｅｓｅ） ［李明， 饶刚， 魏辅文， 方盛国， 汤
纯香， 玉手英利． ２００２． 小熊猫种群遗传结构和地理分化．
动物学报， ４８（４）： ４８０ － ４８６］
Ｌｉ ＹＬ， Ｌｉ Ｘ， Ｌｉａｎｇ ＴＳ， Ｚｈａｎｇ ＬＧ， Ｌｉ ＤＤ． ２０１３． Ｓｅｑｕｅｎｃｅ ａｎａｌｙ⁃
ｓｉｓ ｏｆ ｍｔＤＮＡ ＣＯＩ ｇｅｎｅ ｏｆ ７ ｇｅｏｇｒａｐｈｉｃａｌ ｐｏｐｕｌａｔｉｏｎｓ ｏｆ Ｏｅｄａｌｅ⁃
ｕｓ ａｓｉａｔｉｃｕｓ ｉｎ Ｂｅｉｊｉｎｇ ａｎｄ ｓｕｒｒｏｕｎｄｉｎｇ ｒｅｇｉｏｎｓ． Ｐｌａｎｔ Ｐｒｏｔｅｃ⁃
ｔｉｏｎ， ３９（５）： １１７ － １２２ （ｉｎ Ｃｈｉｎｅｓｅ） ［李云龙， 李霞， 梁铁
双， 张立国， 李冬冬． ２０１３． 北京及周边地区 ７ 个地理种群
的亚洲小车蝗 ｍｔＤＮＡ ＣＯＩ 基因序列分析． 植物保护， ３９
（５）： １１７ － １２２］
Ｐｆｅｎｎｉｎｇｅｒ Ｍ， Ｐｏｓａｄａ Ｄ． ２００２． Ｐｈｙｌｏｇｅｏｇｒａｐｈｉｃ ｈｉｓｔｏｒｙ ｏｆ ｔｈｅ ｌａｎｄ
ｓｎａｉｌ Ｃａｎｄｉｄｕｌａ ｕｎｉｆａｓｃｉａｔａ （Ｈｅｌｉｃｅｌｌｉｎａｅ， Ｓｔｙｌｏｍｍａｔｏｐｈｏｒａ）：
ｆｒａｇｍｅｎｔａｔｉｏｎ， ｃｏｒｒｉｄｏｒ ｍｉｇｒａｔｉｏｎ， ａｎｄ ｓｅｃｏｎｄａｒｙ ｃｏｎｔａｃｔ． Ｅｖｏ⁃
ｌｕｔｉｏｎ， ５６（９）： １７７６ － １７８８
Ｒｅｎ ＺＭ， Ｍａ ＥＢ， Ｇｕｏ ＹＰ． ２００３． Ｍｉｔｏｃｈｏｎｄｒｉａｌ ＤＮＡ ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ
ａｎｄ ｒｅｌａｔｉｏｎｓｈｉｐｓ ｏｆ Ｏｘｙａ ｉｎｔｒｉｃａｔａ ｉｎｄｉｖｉｄｕａｌｓ ｆｒｏｍ ｄｉｆｆｅｒｅｎｔ
ｐａｒｔｓ ｏｆ Ｃｈｉｎａ． Ａｃｔａ Ｅｎｔｏｍｏｌｏｇｉｃａ Ｓｉｎｉｃａ， ４６（１）： ５１ － ５７ （ｉｎ
Ｃｈｉｎｅｓｅ） ［任竹梅， 马恩波， 郭亚平． ２００３． 不同地域小稻
蝗 ｍｔＤＮＡ部分序列及其相互关系． 昆虫学报， ４６（１）： ５１ －
５７］
Ｒｏｚａｓ Ｊ， Ｓáｎｃｈｅｚ⁃ＤｅｌＢａｒｒｉｏ ＪＣ， Ｍｅｓｓｅｇｕｅｒ Ｘ， Ｒｏｚａｓ Ｒ． ２００３．
ＤｎａＳＰ， ＤＮＡ ｐｏｌｙｍｏｒｐｈｉｓｍ ａｎａｌｙｓｅｓ ｂｙ ｔｈｅ ｃｏａｌｅｓｃｅｎｔ ａｎｄ ｏｔｈ⁃
ｅｒ ｍｅｔｈｏｄｓ． Ｂｉｏｉｎｆｏｒｍａｔｉｃｓ， １９（１８）： ２４９６ － ２４９７
Ｗａｄａ Ｋ， Ｙｏｋｏｈａｍａ Ｍ． ２００４． Ａｎａｌｙｓｉｓ ｏｆ ｍｉｔｏｃｈｏｎｄｒｉａｌ ＤＮＡ ｐｒｏ⁃
ｔｅｉｎ⁃ｃｏｄｉｎｇ ｒｅｇｉｏｎ ｉｎ ｔｈｅ Ｙｅｓｏ Ｓｉｋａ ｄｅｅｒ （Ｃｅｒｖｕｓ ｎｉｐｐｏｎ ｙｅｓｏｅｎ⁃
ｓｉｓ）． Ａｎｉｍａｌ Ｓｃｉｅｎｃｅ Ｊｏｕｒｎａｌ， ７５（４）： ２９５ － ３０２
Ｗｕ ＧＣ， Ｌｉ ＹＬ， Ｌｉ ＺＨ， Ｌｉｕ ＬＪ． ２０１２． Ｔｈｅ ｇｅｎｅｔｉｃｓ ｒｅｌａｔｉｏｎ ｏｆ ｔｈｅ
ｐｏｐｕｌａｔｉｏｎ ｏｆ Ｂａｃｔｒｏｃｅｒａ ｄｏｒｓａｌｉｓ （ Ｄｉｐｔｅｒａ： Ｔｅｐｈｒｉｔｉｄａｅ ） ｉｎ
Ｓｈａｎｇｈａｉ ｄｉｓｔｒｉｃｔ ｂａｓｅｄ ｏｎ ｍｔＤＮＡ ＣＯＩ ｇｅｎｅ． Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｃｈｉｎａ
Ａｇｒｉｃｕｌｔｕｒａｌ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ， １７（２）： ９４ － １０１ （ｉｎ Ｃｈｉｎｅｓｅ） ［吴广
超， 李云龙， 李志红， 柳丽君． ２０１２． 基于线粒体 ＣＯＩ基因
的上海地区橘小实蝇种群遗传关系研究． 中国农业大学学
报， １７（２）： ９４ － １０１］
Ｗｕ ＨＳ， Ｎｏｎｎａｉｚａｂ． ２００９． Ｇｒａｓｓｌａｎｄ ｌｏｃｕｓｔ ｉｎ Ｈｕｌｕｎｂｅｉｅｒ Ｃｉｔｙ．
Ｂｅｉｊｉｎｇ： Ｃｈｉｎａ Ａｇｒｉｃｕｌｔｕｒａｌ Ｐｒｅｓｓ， ｐｐ． ６４ － ６６ （ ｉｎ Ｃｈｉｎｅｓｅ）
［吴虎山， 能乃扎布． ２００９． 呼伦贝尔市草地蝗虫． 北京：
中国农业出版社， ｐｐ． ６４ － ６６］
Ｚｈｅｎｇ ＸＹ． ２００６． Ａ ｓｔｕｄｙ ｏｎ ｔｈｅ ｐｏｐｕｌａｔｉｏｎ ｇｅｎｅｔｉｃｓ ｏｆ ｐａｒｔｉａｌ Ｏｅｄｉ⁃
ｐｏｄｉｄａｅ ｐｏｐｕｌａｔｉｏｎｓ ｉｎ Ｃｈｉｎａ． Ｐｈ． Ｄ Ｔｈｅｓｉｓ． Ｔａｉｙｕａｎ： Ｓｈａｎｘｉ
Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ （ｉｎ Ｃｈｉｎｅｓｅ） ［郑先云． ２００６． 斑翅蝗科部分种群
遗传结构研究． 博士学位论文． 太原： 山西大学］
（责任编辑：李美娟）
０４６ 植　 物　 保　 护　 学　 报 ４３ 卷