全 文 ：第 源员 卷摇 第 源 期
圆园员源 年 愿 月
植摇 物摇 保摇 护摇 学摇 报
粤悦栽粤 孕匀再栽韵孕匀再蕴粤悦陨悦粤 杂陨晕陨悦粤
灾燥造援 源员摇 晕燥援 源
粤怎早援 摇 圆园员源
摇
基金项目院 国家自然科学基金渊猿员猿园员远猿缘冤袁广西省自然科学基金渊圆园员猿郧载晕杂云月粤园员怨员员园冤袁广西科学研究与技术开发计划渊桂科合
员源员圆猿园园员鄄员缘冤
作者简介院 娄兵海袁男袁员怨愿猿年生袁副研究员袁研究方向为柑橘黄龙病分子生物学及其综合防控技术袁 耘鄄皂葬蚤造院 月蚤灶早澡葬蚤援 蕴燥怎岳 澡燥贼皂葬蚤造援 糟燥皂
鄢通讯作者渊粤怎贼澡燥则 枣燥则 糟燥则则藻泽责燥灶凿藻灶糟藻冤袁 耘鄄皂葬蚤造院 扎曾造园园愿园员岳 员远猿援 糟燥皂
收稿日期院 圆园员猿 原 员圆 原 圆圆
柑橘花器和种子中黄龙病菌的定量分布及应用
娄兵海员 摇 宋雅琴员 摇 赵小龙圆鄢摇 白先进猿 摇 邓崇岭员
渊员援广西壮族自治区柑桔研究所袁 广西柑橘生物学重点实验室袁 桂林 缘源员园园源曰
圆援广西农业职业技术学院袁 南宁 缘猿园园园苑曰 猿援广西农业科学院袁 南宁 缘猿园园园苑冤
摘要院 为准确尧快速测定感病柑橘花器和种子中黄龙病菌渊悦葬灶凿蚤凿葬贼怎泽 蕴蚤遭藻则蚤遭葬糟贼藻则 葬泽蚤葬贼蚤糟怎泽袁 蕴葬泽冤的
含量袁比较了 杂再月砸 郧则藻藻灶 玉实时荧光定量 孕悦砸渊杂郧陨鄄择孕悦砸冤和单管双引物对 栽葬择酝葬灶 探针 择孕悦砸
渊杂栽阅孕鄄择孕悦砸冤的检测灵敏度袁并用 杂栽阅孕鄄择孕悦砸法定量检测了感病沙田柚花器和种子中的 蕴葬泽遥 结
果显示袁杂栽阅孕鄄择孕悦砸检测灵敏度为 员 伊 员园园 拷贝 辕 滋蕴袁比 杂郧陨鄄择孕悦砸 高 员园园 倍曰花器中的雄蕊尧花瓣尧
雌蕊和花粉等组织袁以及种子的种皮和胚乳组织中均可检测到 蕴葬泽袁但含量差异较大袁其中种皮组
织中 蕴葬泽含量最高袁达到 员园怨愿源圆 个细胞 辕 滋早 阅晕粤袁花粉中的 蕴葬泽含量最低袁为 猿园愿 个细胞 辕 滋早 阅晕粤袁
所有种壳中均未检测到 蕴葬泽曰基于雄蕊组织的黄龙病分子诊断准确率达 怨猿援 愿豫 遥 表明 蕴葬泽在感病柑
橘花器和种子中呈不均匀分布袁基于雄蕊组织的黄龙病诊断方法可辅助用于该病害的高通量检测遥
关键词院 黄龙病曰 花器曰 种子曰 实时荧光定量 孕悦砸曰 雄蕊
匝怎葬灶贼蚤贼葬贼蚤增藻 凿蚤泽贼则蚤遭怎贼蚤燥灶 燥枣 悦葬灶凿蚤凿葬贼怎泽 蕴蚤遭藻则蚤遭葬糟贼藻则 葬泽蚤葬贼蚤糟怎泽 蚤灶 枣造燥憎藻则泽
葬灶凿 泽藻藻凿泽 燥枣 杂澡葬贼蚤葬灶 责怎皂皂藻造燥 葬灶凿 蚤贼泽 葬责责造蚤糟葬贼蚤燥灶泽
蕴燥怎 月蚤灶早澡葬蚤员 摇 杂燥灶早 再葬择蚤灶员 摇 在澡葬燥 载蚤葬燥造燥灶早圆鄢摇 月葬蚤 载蚤葬灶躁蚤灶猿 摇 阅藻灶早 悦澡燥灶早造蚤灶早员
渊员援 郧怎葬灶早曾蚤 运藻赠 蕴葬遭燥则葬贼燥则赠 燥枣 悦蚤贼则怎泽 月蚤燥造燥早赠袁 郧怎葬灶早曾蚤 悦蚤贼则怎泽 砸藻泽藻葬则糟澡 陨灶泽贼蚤贼怎贼藻袁 郧怎蚤造蚤灶 缘源员园园源袁 郧怎葬灶早曾蚤 在澡怎葬灶早
粤怎贼燥灶燥皂燥怎泽 砸藻早蚤燥灶袁 悦澡蚤灶葬曰 圆援 郧怎葬灶早曾蚤 粤早则蚤糟怎造贼怎则葬造 灾燥糟葬贼蚤燥灶葬造鄄栽藻糟澡灶蚤糟葬造 悦燥造造藻早藻袁 晕葬灶灶蚤灶早 缘猿园园园苑袁 郧怎葬灶早曾蚤
在澡怎葬灶早 粤怎贼燥灶燥皂燥怎泽 砸藻早蚤燥灶袁 悦澡蚤灶葬曰 猿援 郧怎葬灶早曾蚤 粤糟葬凿藻皂赠 燥枣 粤早则蚤糟怎造贼怎则葬造 杂糟蚤藻灶糟藻泽袁 晕葬灶灶蚤灶早 缘猿园园园苑袁
郧怎葬灶早曾蚤 在澡怎葬灶早 粤怎贼燥灶燥皂燥怎泽 砸藻早蚤燥灶袁 悦澡蚤灶葬冤
粤遭泽贼则葬糟贼院 陨灶 燥则凿藻则 贼燥 择怎葬灶贼蚤枣赠 贼澡藻 糟燥灶糟藻灶贼则葬贼蚤燥灶 燥枣 悦葬灶凿蚤凿葬贼怎泽 蕴蚤遭藻则蚤遭葬糟贼藻则 葬泽蚤葬贼蚤糟怎泽 渊蕴葬泽冤 蚤灶 枣造燥憎藻则泽
葬灶凿 泽藻藻凿泽 燥枣 澡怎葬灶早造燥灶早遭蚤灶早 渊匀蕴月冤鄄蚤灶枣藻糟贼藻凿 糟蚤贼则怎泽袁 贼憎燥 则藻葬造鄄贼蚤皂藻 枣造怎燥则藻泽糟藻灶糟藻 择怎葬灶贼蚤贼葬贼蚤增藻 孕悦砸 渊择孕悦砸冤
皂藻贼澡燥凿泽袁 杂再月砸 郧则藻藻灶 陨 择孕悦砸 渊 杂郧陨鄄择孕悦砸冤 葬灶凿 野 泽蚤灶早造藻 糟造燥泽藻凿 贼怎遭藻 凿怎葬造 责则蚤皂藻则冶 栽葬择酝葬灶 择孕悦砸
渊杂栽阅孕鄄择孕悦砸冤袁 憎藻则藻 糟燥皂责葬则藻凿 枣燥则 贼澡藻蚤则 凿藻贼藻糟贼蚤燥灶 泽藻灶泽蚤贼蚤增蚤贼赠袁 葬灶凿 杂栽阅孕鄄孕悦砸 憎葬泽 怎泽藻凿 贼燥 择怎葬灶贼蚤枣赠 贼澡藻
糟燥灶糟藻灶贼则葬贼蚤燥灶 燥枣 蕴葬泽 蚤灶 凿蚤枣枣藻则藻灶贼 枣造燥则葬造 葬灶凿 泽藻藻凿 责葬则贼泽 糟燥造造藻糟贼藻凿 枣则燥皂 匀蕴月鄄蚤灶枣藻糟贼藻凿 悦蚤贼则怎泽 皂葬曾蚤皂葬
渊月怎则皂援 冤 酝藻则则援 糟增援 杂澡葬贼蚤葬灶 栽援 栽援 再怎 贼则藻藻泽援 栽澡藻 则藻泽怎造贼泽 泽澡燥憎藻凿 贼澡葬贼 贼澡藻 凿藻贼藻糟贼蚤燥灶 泽藻灶泽蚤贼蚤增蚤贼赠 燥枣 杂栽阅孕鄄择孕悦砸
憎葬泽 员 伊员园园糟燥责蚤藻泽 辕 滋蕴 阅晕粤袁 员园园 贼蚤皂藻泽 澡蚤早澡藻则 贼澡葬灶 贼澡葬贼 燥枣 杂郧陨鄄择孕悦砸援 匝怎葬灶贼蚤贼葬贼蚤增藻 葬灶葬造赠泽蚤泽 蚤灶凿蚤糟葬贼藻凿 贼澡葬贼
蕴葬泽 憎葬泽 凿蚤泽贼则蚤遭怎贼藻凿 蚤灶 泽贼葬皂藻灶泽袁 责藻贼葬造泽袁 责蚤泽贼蚤造泽袁 责燥造造藻灶袁 泽藻藻凿 糟燥葬贼泽 葬灶凿 藻灶凿燥泽责藻则皂泽援 匀燥憎藻增藻则袁 贼澡藻 皂藻葬灶
糟燥灶糟藻灶贼则葬贼蚤燥灶 燥枣 蕴葬泽 蚤灶 凿蚤枣枣藻则藻灶贼 贼蚤泽泽怎藻泽 憎葬泽 凿蚤枣枣藻则藻灶贼援 栽澡藻 澡蚤早澡藻泽贼 糟燥灶糟藻灶贼则葬贼蚤燥灶 燥枣 蕴葬泽 憎葬泽 燥遭泽藻则增藻凿 蚤灶
泽藻藻凿 糟燥葬贼泽袁 怎责 贼燥 员园怨 愿源圆 糟藻造造泽 辕 滋早 阅晕粤袁 葬灶凿 贼澡藻 造燥憎藻泽贼 憎葬泽 燥遭泽藻则增藻凿 蚤灶 责燥造造藻灶袁 燥灶造赠 猿园愿 糟藻造造泽 辕 滋早
阅晕粤援 晕燥 葬皂责造蚤糟燥灶 憎葬泽 燥遭贼葬蚤灶藻凿 枣则燥皂 泽藻藻凿 澡怎造造 泽葬皂责造藻泽援 栽澡藻 蚤灶糟蚤凿藻灶糟藻 燥枣 糟燥灶增藻灶贼蚤燥灶葬造 孕悦砸 凿藻贼藻糟贼蚤燥灶 燥枣
蕴葬泽 遭葬泽藻凿 燥灶 泽贼葬皂藻灶 贼蚤泽泽怎藻泽 憎葬泽 怨猿援 愿豫 援 栽澡藻泽藻 则藻泽怎造贼泽 蚤灶凿蚤糟葬贼藻凿 贼澡葬贼 蕴葬泽 憎葬泽 怎灶藻增藻灶造赠 凿蚤泽贼则蚤遭怎贼藻凿 蚤灶
枣造燥憎藻则泽 葬灶凿 泽藻藻凿泽 糟燥造造藻糟贼藻凿 枣则燥皂 匀蕴月鄄蚤灶枣藻糟贼藻凿 糟蚤贼则怎泽 贼则藻藻泽袁 葬灶凿 贼澡藻 灶藻憎 凿蚤葬早灶燥泽蚤泽 泽赠泽贼藻皂 燥枣 匀蕴月 遭葬泽藻凿
燥灶 泽贼葬皂藻灶 贼蚤泽泽怎藻泽 糟燥怎造凿 遭藻 怎泽藻凿 枣燥则 造葬则早藻鄄泽糟葬造藻 凿藻贼藻糟贼蚤燥灶 燥枣 蕴葬泽 葬泽 葬灶 葬凿躁藻糟贼蚤增藻 皂藻贼澡燥凿援
运藻赠 憎燥则凿泽院 澡怎葬灶早造燥灶早遭蚤灶早曰 枣造燥憎藻则曰 泽藻藻凿曰 则藻葬造鄄贼蚤皂藻 枣造怎燥则藻泽糟藻灶糟藻 择怎葬灶贼蚤贼葬贼蚤增藻 孕悦砸曰 泽贼葬皂藻灶
摇 摇 黄龙病渊澡怎葬灶早造燥灶早遭蚤灶早袁 匀蕴月冤是柑橘生产中的
一种毁灭性病害袁在田间主要通过亚洲柑橘木虱
阅蚤葬责澡燥则蚤灶葬 糟蚤贼则蚤和非洲柑橘木虱 栽则蚤燥扎葬 藻则赠贼则藻葬藻 进行
传播袁人为条件下可通过嫁接进行传播袁目前已在全
球 源园 多个国家和地区发生流行咱员暂 遥 黄龙病的病原
物为革兰氏阴性尧韧皮部限制性难培养细菌袁目前已
知 猿 个种院亚洲种渊悦葬灶凿蚤凿葬贼怎泽 蕴蚤遭藻则蚤遭葬糟贼藻则 葬泽蚤贼蚤糟怎泽袁
蕴葬泽冤尧非洲种渊悦葬援 蕴援 葬枣则蚤糟葬灶怎泽袁 蕴葬枣冤咱圆暂和美洲种渊悦葬援
蕴援 葬皂藻则蚤糟葬灶怎泽袁 蕴葬皂冤咱猿暂 袁其中 蕴葬泽 分布最为广泛袁也
是在我国发生流行的类型咱源暂 遥 由于黄龙病菌尚未
实现体外重复培养袁很多生物学试验无法开展袁目前
对其生物学特性知之甚少遥 因此袁对黄龙病菌在寄
主植物体内的分布和含量水平进行研究袁有助于加
深对黄龙病菌生物学特性及其在寄主植物体内扩散
定殖特性和致病机理的了解袁还可为黄龙病高准确
性分子诊断方法的建立提供依据遥
实时荧光定量 孕悦砸渊则藻葬造鄄贼蚤皂藻 枣造怎燥则藻泽糟藻灶糟藻 择怎葬灶鄄
贼蚤贼葬贼蚤增藻 孕悦砸袁 择孕悦砸冤技术由于不仅可对 阅晕粤进行定
性检测袁还可对其进行定量分析袁因此是研究黄龙病
菌在寄主植物体内分布和含量的有效手段遥 栽藻蚤曾藻蚤则葬
等咱缘暂应用 择孕悦砸检测来自同一株黄龙病树的 愿圆圆 份
叶片样品袁发现黄龙病菌在叶片中分布不均匀袁斑驳
型黄化症状的叶片中往往含有较高浓度的黄龙病
菌袁平均含量达到每克中脉组织 圆援 苑 伊 员园苑 个细菌袁
而无症状的叶片中却往往检测不到黄龙病菌遥
栽葬贼蚤灶藻灶蚤等咱远暂和 蕴蚤 等咱苑暂相继应用 择孕悦砸 检测了黄龙
病树的不同组织样品袁发现黄龙病菌可以感染柑橘
植株的叶尧皮尧根尧果皮和果肉等组织袁并且在不同组
织中含量差异巨大袁一般在斑驳型黄化叶的叶脉和
果实的果柄组织中含量较高遥 但是对黄龙病菌在柑
橘花器和种子等重要繁殖器官中的含量水平缺乏系
统研究遥 为此袁本研究比较了 圆 种 择孕悦砸 的检测灵
敏度袁并应用灵敏度较高的 员 种 择孕悦砸 方法对感病
橘树花器和种子中的 蕴葬泽 进行定量检测袁以期建立
一种适合高通量检测并且不依赖于症状的高准确性
匀蕴月分子诊断方法遥
员 材料与方法
员援 员 材料
供试植物院从 缘 株感染黄龙病的沙田柚 悦蚤贼则怎泽
皂葬曾蚤皂葬渊月怎则皂援 冤 酝藻则则援 糟增援 杂澡葬贼蚤葬灶 栽援 栽援 再怎 树上随机
采集 员圆园 朵花和 圆园园 颗种子遥 其中袁花朵分成 员园 个
花瓣混样尧员圆 个雄蕊混样尧员圆 个雌蕊混样以及 猿 个
花粉混样曰种子分成 圆园 个种壳混样尧圆园 个种皮混样
以及 圆园 个胚乳混样遥 另外从 猿 株感染黄龙病的夏
橙 悦蚤贼则怎泽 葬怎则葬灶贼蚤怎皂 蕴援 糟增援 晕葬贼泽怎凿葬蚤凿葬蚤 树上整树随机
采集 圆源园 朵花袁猿 朵花为一组袁每朵花取 源 个雄蕊袁
共收集 愿园 个雄蕊混样遥 收集保存于网室中的健康
沙田柚树上的花和种子样品为阴性对照袁感染黄龙
病的沙田柚树上的斑驳型黄化叶作为阳性对照遥
引物和探针院巢式外侧引物 蕴葬泽鄄韵鄄云 渊缘忆鄄悦郧鄄
郧栽郧粤粤栽郧栽粤栽栽粤粤郧悦栽郧粤郧郧悦郧栽栽悦悦鄄猿忆冤和 蕴葬泽鄄韵鄄砸
渊 缘忆鄄栽粤悦悦悦粤悦粤粤悦粤粤粤粤栽郧粤郧粤栽粤悦粤悦悦粤粤悦粤粤悦栽栽悦鄄
猿忆冤咱愿暂尧巢式内侧引物 蕴葬泽鄄陨鄄云渊缘忆鄄悦郧粤栽栽郧郧栽郧栽栽悦栽鄄
栽郧栽粤郧 悦郧鄄猿忆冤和 蕴葬泽鄄陨鄄砸渊缘忆鄄粤粤悦粤粤栽粤郧粤粤郧郧粤栽鄄
悦粤粤郧悦粤栽悦栽鄄猿忆冤 咱愿暂 尧常规 孕悦砸 引物 韵陨员渊缘忆鄄郧悦郧悦鄄
郧栽粤栽郧悦粤粤栽粤悦郧粤郧悦郧郧悦粤鄄猿忆冤和 韵陨圆糟渊缘忆鄄郧悦悦栽悦鄄
郧悦郧粤悦栽栽悦郧悦粤粤悦悦悦粤栽鄄猿忆冤 咱怨暂 袁均由上海生物工程
技术服务有限公司合成遥 栽葬择酝葬灶 探针 渊缘忆鄄云粤酝鄄
粤粤栽悦粤悦悦郧粤粤郧郧粤郧粤粤郧悦悦粤郧悦粤栽栽粤悦粤鄄酝郧月鄄猿忆冤
由美国农业部农业研究服务署渊哉灶蚤贼藻凿 杂贼葬贼藻泽 阅藻鄄
责葬则贼皂藻灶贼 燥枣 粤早则蚤糟怎造贼怎则藻袁 粤早则蚤糟怎造贼怎则葬造 砸藻泽藻葬则糟澡 杂藻则增蚤糟藻袁
哉杂阅粤鄄粤砸杂冤蕴蚤灶 匀燥灶早博士提供遥
试剂院凝胶回收试剂盒尧质粒快速提取试剂盒袁
德国 匝陨粤郧耘晕 公司曰克隆载体 责郧耘酝鄄栽 灾藻糟贼燥则袁美国
孕则燥皂藻早葬公司曰实时荧光定量 孕悦砸 试剂袁美国 粤责鄄
责造蚤藻凿 月蚤燥泽赠泽贼藻皂泽 公司曰常规 孕悦砸 试剂袁日本 栽葬运葬砸葬
公司遥
仪器院粤月陨 苑缘园园 云葬泽贼 实时荧光定量 孕悦砸 仪袁美
国 粤责责造蚤藻凿 月蚤燥泽赠泽贼藻皂泽 公司曰 杂员园园园 常规 孕悦砸 仪及
郧耘蕴 阅韵悦 载砸 凝胶成像系统袁美国 月蚤燥鄄砸葬凿 公司曰
蕴葬皂遭凿葬 猿缘 紫外可见分光光度计袁美国 孕耘公司遥
员援 圆 方法
员援 圆援 员 核酸提取
参照 蕴蚤灶 驭 宰葬造噪藻则咱员园暂建立的改良 悦栽粤月法提取
沙田柚叶片尧花器及种子不同组织样品的 阅晕粤遥 参
照周常勇等咱员员暂建立的微量植物组织总核酸快速提
取法提取夏橙雄蕊样品的总核酸遥 用紫外可见分光
光度计对提取的 阅晕粤进行浓度测定袁并将浓度调节
到 缘园园 灶早 辕 滋蕴遥
愿源源 植摇 物摇 保摇 护摇 学摇 报 源员 卷
员援 圆援 圆 质粒标准品模板制备
采用引物 蕴葬泽鄄韵鄄云 辕 蕴葬泽鄄韵鄄砸袁运用常规 孕悦砸 对
蕴葬泽 核酸相应区域进行扩增遥 反应体系为 圆园 滋蕴院
员园 伊 孕悦砸 月怎枣枣藻则 员 滋蕴尧 圆援 缘 皂皂燥造 辕 蕴 凿晕栽孕 皂蚤曾贼怎则藻
员援 远 滋蕴尧缘 滋皂燥造 辕 蕴 上下游引物各 员 滋蕴尧缘 哉 辕 滋蕴 热启
动 栽葬择 阅晕粤聚合酶 员 滋蕴尧阳性 阅晕粤模板 员 滋蕴袁补足
凿凿匀圆韵 至 圆园 滋蕴遥 扩增程序为院怨源 益 缘 皂蚤灶曰怨源 益猿园 泽袁远苑 益 源缘 泽袁苑圆 益 员 皂蚤灶袁猿缘 个循环曰苑圆 益 员园 皂蚤灶遥
扩增产物经 阅晕粤凝胶回收试剂盒回收尧纯化后分别
与 责郧耘酝鄄栽 灾藻糟贼燥则进行连接袁并转化入感受态的大
肠杆菌 阅匀缘琢遥 通过蓝白斑筛选袁挑选阳性重组质
粒进行测序验证后袁用紫外可见分光光度计测定其
质量浓度袁并计算分子拷贝数院分子拷贝数 越 咱阅晕粤
质量浓度 辕 渊阅晕粤 碱基对数 伊 远源怨冤暂 伊 远援 园圆 伊 员园圆猿遥
将制备的重组质粒标准品命名为 耘栽云圆袁并按 员园 倍
梯度分别稀释为 员园苑尧员园远尧员园缘尧员园源尧员园猿尧员园圆尧员园员 和
员园园 拷贝 辕 滋蕴遥
员援 圆援 猿 蕴葬泽不同 择孕悦砸方法的比较
杂再月砸 郧则藻藻灶 陨 择孕悦砸渊杂郧陨鄄择孕悦砸冤院反应体系为
圆园 滋蕴院 圆 伊 杂再月砸 郧则藻藻灶 孕悦砸 酝葬泽贼藻则 酝蚤曾 员园 滋蕴尧
缘 滋皂燥造 辕 蕴引物 蕴葬泽鄄陨鄄云 辕 蕴葬泽鄄陨鄄砸 各 员 滋蕴尧梯度稀释的
耘栽云圆 质粒标准品 员 滋蕴袁补足 凿凿匀圆韵至 圆园 滋蕴遥 扩增
程序为院怨缘 益 员园 皂蚤灶曰怨缘 益 猿园 泽袁缘苑 益 源缘 泽袁苑圆 益
源缘 泽袁在 苑圆 益 采集荧光信号袁 源园 个循环曰 苑圆 益
员园 皂蚤灶遥 孕悦砸扩增结束后袁远园 耀 怨缘益每 员豫温度间隔
时采集荧光信号袁生成熔解曲线遥
单管双引物对 栽葬择酝葬灶 探针 择孕悦砸 渊 杂栽阅孕鄄
择孕悦砸冤院参照 蕴蚤灶 等咱愿暂方法并稍作修改遥 反应体系
为 圆园 滋蕴院 圆 伊 栽葬择酝葬灶 哉灶蚤增藻则泽葬造 孕悦砸 酝葬泽贼藻则 酝蚤曾
员园 滋蕴尧园援 缘 滋皂燥造 辕 蕴 引物 蕴葬泽鄄韵鄄云 辕 蕴葬泽鄄韵鄄砸 各 员 滋蕴尧
圆园 滋皂燥造 辕 蕴 引物 蕴葬泽鄄陨鄄云 辕 蕴葬泽鄄陨鄄砸 各 员 滋蕴尧缘 滋皂燥造 辕 蕴
栽葬择酝葬灶探针 员 滋蕴尧梯度稀释的 耘栽云圆 质粒标准品
员 滋蕴袁补足 凿凿匀圆韵至圆园滋蕴遥 扩增程序为院缘园益 圆皂蚤灶曰怨缘益 员园皂蚤灶曰怨缘益 猿园 泽袁远苑益 源缘 泽袁苑圆益 源缘 泽袁圆园 个循
环曰怨缘益 猿园 泽袁缘苑益 源缘 泽袁苑圆益 源缘 泽袁在苑圆 益采集荧光
信号袁猿缘 个循环遥
员援 圆援 源 杂栽阅孕鄄择孕悦砸标准曲线的建立及检测
以梯度稀释的 员园苑尧员园远尧员园缘尧员园源尧员园猿尧员园圆 和 员园员
拷贝 辕 滋蕴的 耘栽云圆 质粒标准品为模板袁进行 杂栽阅孕鄄
择孕悦砸检测袁以得到的 悦贼绘制标准曲线袁每梯度 猿 次
重复遥 采用 杂栽阅孕鄄择孕悦砸 方法对花器和种子不同组
织样品基因组 阅晕粤提取物进行 蕴葬泽 定量检测袁每处
理同时设清水尧阴性和阳性对照袁猿 次重复遥 将计算
所得浓度换算成野个细胞 辕 滋早 阅晕粤冶遥
员援 圆援 缘 雄蕊组织 蕴葬泽常规 孕悦砸检测
采用引物 韵陨员 辕 韵陨圆糟 对提取的夏橙雄蕊样品总
核酸进行 蕴葬泽 常规 孕悦砸 检测遥 反应体系及反应条
件同 员援 圆援 圆 中所述方法遥 反应结束后取 缘 滋蕴 进行
员援 圆豫琼脂糖凝胶电泳袁溴化乙锭染色后用凝胶成像
仪对电泳结果进行成像保存遥
员援 猿 数据分析
采用 耘曾糟藻造 圆园员园 和 杂孕杂杂 圆员援 园 软件进行统计分
析袁应用 杂糟澡藻枣枣藻法进行差异显著性检验遥
圆 结果与分析
圆援 员 重组质粒 耘栽云圆 的鉴定
通过对阳性重组质粒 耘栽云圆 进行测序袁获得
源苑园 遭责的核酸序列遥 将该序列与 蕴葬泽 佛罗里达黄龙
病菌基因组咱员圆暂 渊郧藻灶月葬灶噪 登录号 悦孕园园员远苑苑冤中靶标
位点序列进行比对袁序列相似性为 员园园豫 袁表明重组
质粒 耘栽云圆中插入的 阅晕粤片段为目的靶标核酸片段遥
圆援 圆 择孕悦砸检测灵敏度的比较
采用 杂郧陨鄄择孕悦砸 方法经过 源园 个循环后袁浓度为
员 伊 员园苑 耀 员 伊 员园圆 拷贝 辕 滋蕴 的 远 个 耘栽云圆 重组质粒
阅晕粤样品均出现了明显的荧光积累袁而稀释至 员 伊
员园员 拷贝 辕 滋蕴 和 员 伊 员园园 拷贝 辕 滋蕴 浓度的 圆 个 耘栽云圆
重组质粒 阅晕粤样品均未出现荧光信号增强袁表明使
用引物 蕴葬泽鄄陨鄄云 辕 蕴葬泽鄄陨鄄砸 的 杂郧陨鄄择孕悦砸 方法检测灵敏
度下限为 员 伊 员园圆 拷贝 辕 滋蕴渊图 员鄄葬冤遥 通过对熔解曲
线的分析袁产物熔解温度均一袁为 苑怨援 源圆益渊图 员鄄遭冤遥
而采用 杂栽阅孕鄄择孕悦砸方法经过第 员 轮的 圆园 个循环和
随后巢式的 猿缘 个循环后袁浓度为 员 伊 员园苑 耀 员 伊 员园园
拷贝 辕 滋蕴的 愿 个 耘栽云圆 重组质粒 阅晕粤样品均出现了
明显的荧光积累袁表明采用巢式引物 蕴葬泽鄄韵鄄云 辕 蕴葬泽鄄
韵鄄砸 和 蕴葬泽鄄陨鄄云 辕 蕴葬泽鄄陨鄄砸 的 杂栽阅孕鄄择孕悦砸 方法检测灵
敏度下限为 员 伊 员园园 拷贝 辕 滋蕴渊图 员鄄糟冤遥 圆 种 择孕悦砸
方法扩增中袁清水对照和健康沙田柚植株 阅晕粤样品
对照均未出现荧光信号积累遥 表明 杂栽阅孕鄄择孕悦砸 方
法比 杂郧陨鄄择孕悦砸方法检测灵敏度高 员园园 倍遥
圆援 猿 标准曲线的构建
采用巢式引物 蕴葬泽鄄韵鄄云 辕 蕴葬泽鄄韵鄄砸和 蕴葬泽鄄陨鄄云 辕 蕴葬泽鄄
陨鄄砸进行的 蕴葬泽 杂栽阅孕鄄择孕悦砸 检测中袁标准品重组质
粒模板浓度与循环阈值渊贼澡则藻泽澡燥造凿 糟赠糟造藻袁 悦贼冤之间呈
现良好的线性关系袁扩增相关系数为 园援 怨怨愿袁扩增效
率为 员园源援 员圆源豫 袁模板初始浓度对数值与 悦贼 值的线
性方程为院赠 越 原猿援 圆圆苑曾 垣 圆怨援 苑园怨遥 重组质粒标准品
不同重复间 悦贼 值最大标准差为 园援 员远袁最大变异系
数为 园援 远园豫 遥
怨源源源 期 娄兵海等院 柑橘花器和种子中黄龙病菌的定量分布及应用
图 员 圆 种 择孕悦砸方法检测柑橘黄龙病菌灵敏度的对比
云蚤早援 员 悦燥皂责葬则蚤泽燥灶 燥枣 泽藻灶泽蚤贼蚤增蚤贼赠 遭藻贼憎藻藻灶 贼憎燥 择孕悦砸 皂藻贼澡燥凿泽 枣燥则 凿藻贼藻糟贼蚤灶早 悦葬灶凿蚤凿葬贼怎泽 蕴蚤遭藻则蚤遭葬糟贼藻则 葬泽蚤葬贼蚤糟怎泽
摇 摇 葬院 杂郧陨鄄择孕悦砸灵敏度测试曰 遭院 杂郧陨鄄择孕悦砸熔解曲线曰 糟院 杂栽阅孕鄄择孕悦砸灵敏度测试曰 员 耀 愿院 耘栽云圆重组质粒标准品浓度分别为 员园苑尧员园远尧
员园缘尧员园源尧员园猿尧员园圆尧员园员 和 员园园 拷贝 辕 滋蕴曰 怨院 阴性对照曰 员园院 清水对照遥 葬院 杂藻灶泽蚤贼蚤增蚤贼赠 贼藻泽贼 燥枣 杂郧陨鄄择孕悦砸 皂藻贼澡燥凿曰 遭院 皂藻造贼蚤灶早 糟怎则增藻 燥枣 杂郧陨鄄
择孕悦砸曰 糟院 泽藻灶泽蚤贼蚤增蚤贼赠 贼藻泽贼 燥枣 杂栽阅孕鄄择孕悦砸曰 员 原 愿院 贼澡藻 糟燥灶糟藻灶贼则葬贼蚤燥灶 燥枣 则藻糟燥皂遭蚤灶葬灶贼 责造葬泽皂蚤凿 泽贼葬灶凿葬则凿 渊员园苑袁 员园远袁 员园缘袁 员园源袁 员园猿袁 员园圆袁 员园员 葬灶凿
员园园 糟燥责蚤藻泽 辕 滋蕴袁 则藻泽责藻糟贼蚤增藻造赠冤曰 怨院 灶藻早葬贼蚤增藻 糟燥灶贼则燥造曰 员园院 憎葬贼藻则 糟燥灶贼则燥造援
圆援 源 花器和种子中 蕴葬泽的定量检测
定量检测表明袁沙田柚花器的雄蕊尧花瓣尧雌蕊
和花粉等组织袁以及种子的种皮和胚乳组织中均可
以检测到 蕴葬泽袁并且含量差异较大袁最高可达 猿缘苑 倍袁
其中种皮组织中 蕴葬泽 含量最高袁平均浓度达到
员园怨 愿源圆 个细胞 辕 滋早 阅晕粤袁而花粉组织中 蕴葬泽 含量最
低袁平均浓度仅为 猿园愿 个细胞 辕 滋早 阅晕粤遥 种皮组织
中 蕴葬泽含量显著大于花瓣尧雄蕊尧胚乳及花粉等组
织袁而种皮和雌蕊组织之间袁以及花瓣尧雄蕊尧胚乳和
花粉之间均无显著差异遥 在同一组织不同样品间袁
蕴葬泽含量差异也极大袁最高差异可达 员源 怨缘园 倍
渊表 员冤遥 所有样品种壳中均未检测到 蕴葬泽遥
表 员 杂栽阅孕鄄择孕悦砸定量检测感染黄龙病的沙田柚花器和种子不同组织中黄龙病菌的含量
栽葬遭造藻 员 匝怎葬灶贼蚤枣蚤糟葬贼蚤燥灶 燥枣 悦葬灶凿蚤凿葬贼怎泽 蕴蚤遭藻则蚤遭葬糟贼藻则 葬泽蚤葬贼蚤糟怎泽 蚤灶 凿蚤枣枣藻则藻灶贼 贼蚤泽泽怎藻泽 燥枣 枣造燥憎藻则泽 葬灶凿 泽藻藻凿泽 糟燥造造藻糟贼藻凿 枣则燥皂
澡怎葬灶早造燥灶早遭蚤灶早鄄蚤灶枣藻糟贼藻凿 杂澡葬贼蚤葬灶 再怎 贼则藻藻泽 遭赠 杂栽阅孕鄄择孕悦砸
组织
栽蚤泽泽怎藻
阳性样品数 辕测试样品数
孕燥泽蚤贼蚤增藻 泽葬皂责造藻 灶燥援 辕 贼藻泽贼藻凿 泽葬皂责造藻 灶燥援
蕴葬泽浓度 悦燥灶糟藻灶贼则葬贼蚤燥灶 燥枣 蕴葬泽 渊个细胞 辕 滋早 阅晕粤冤
浓度范围
悦燥灶糟藻灶贼则葬贼蚤燥灶 则葬灶早藻
平均浓度
粤增藻则葬早藻 糟燥灶糟藻灶贼则葬贼蚤燥灶
种皮 杂藻藻凿 糟燥葬贼 员愿 辕 圆园 圆园 耀 圆怨愿 怨远远 员园怨 愿源圆 依 圆员 苑苑圆 葬
雌蕊 孕蚤泽贼蚤造 员圆 辕 员圆 缘 圆源怨 耀 远猿源苑员摇 摇 摇 猿园 愿猿苑 依 远 园怨猿 葬遭
花瓣 孕藻贼葬造 怨 辕 员园 愿怨怨 耀 源源园圆圆摇 摇 员圆 圆缘园 依 源 怨缘园 遭
雄蕊 杂贼葬皂藻灶 员圆 辕 员圆 员圆 耀 圆缘 员猿苑 摇 愿 源愿远 依 圆 猿苑缘 遭
胚乳 耘灶凿燥泽责藻则皂 员愿 辕 圆园 猿怨 耀 员园 员苑源 摇 员 怨园怨 依 远园猿 遭
花粉 孕燥造造藻灶 圆 辕 猿摇 怨愿 耀 愿圆缘摇 摇 摇 猿园愿 依 圆远园 遭
种壳 杂藻藻凿 澡怎造造 园 辕 圆园 要 摇 摇 摇 要
摇 摇 表中数据为平均数 依标准误遥 数据后不同字母表示经 杂糟澡藻枣枣藻法检验差异显著渊孕 约 园援 园缘冤遥 阅葬贼葬 蚤灶 贼澡藻 贼葬遭造藻 葬则藻 皂藻葬灶 依 杂耘援 阅葬贼葬
枣燥造造燥憎藻凿 遭赠 凿蚤枣枣藻则藻灶贼 造燥憎藻则糟葬泽藻 造藻贼贼藻则泽 蚤灶凿蚤糟葬贼藻 泽蚤早灶蚤枣蚤糟葬灶贼 凿蚤枣枣藻则藻灶糟藻 葬贼 孕 约 园援 园缘 造藻增藻造 遭赠 杂糟澡藻枣枣藻 贼藻泽贼援
圆援 缘 雄蕊组织常规 孕悦砸检测
在常规 孕悦砸方法下袁苑缘 个夏橙雄蕊总核酸样品
产生了与阳性对照大小一致的 员 员远园 遭责 目的 阅晕粤
片段袁蕴葬泽检出率达到 怨猿援 愿豫 渊苑缘 辕 愿园冤袁部分检测结
果如图 圆 所示袁清水对照和阴性对照样品均未产生
特异性目的条带遥
园缘源 植摇 物摇 保摇 护摇 学摇 报 源员 卷
图 圆 感染黄龙病的夏橙雄蕊组织中黄龙病菌的常规 孕悦砸检测
云蚤早援 圆 阅藻贼藻糟贼蚤燥灶 燥枣 悦葬灶凿蚤凿葬贼怎泽 蕴蚤遭藻则蚤遭葬糟贼藻则 葬泽蚤葬贼蚤糟怎泽 蚤灶 泽贼葬皂藻灶 贼蚤泽泽怎藻泽 糟燥造造藻糟贼藻凿 枣则燥皂 澡怎葬灶早造燥灶早遭蚤灶早鄄蚤灶枣藻糟贼藻凿
悦蚤贼则怎泽 葬怎则葬灶贼蚤怎皂 蕴援 糟增援 晕葬贼泽怎凿葬蚤凿葬蚤 贼则藻藻泽 遭赠 糟燥灶增藻灶贼蚤燥灶葬造 孕悦砸
摇 摇 酝院 圆缘园 遭责梯度的 阅晕粤分子量标准曰 员 耀 源园院 雄蕊组织样品曰 源员院 清水对照曰 源圆院 阳性对照曰 源猿 耀 源源院 阴性对照遥 酝院 圆缘园 遭责 阅晕粤
造葬凿凿藻则曰 员 原 源园院 泽贼葬皂藻灶 贼蚤泽泽怎藻 泽葬皂责造藻泽曰 源员院 憎葬贼藻则 糟燥灶贼则燥造曰 源圆院 责燥泽蚤贼蚤增藻 糟燥灶贼则燥造曰 源猿 原 源源院 灶藻早葬贼蚤增藻 糟燥灶贼则燥造援
猿 讨论
由于 蕴葬泽 在柑橘的叶尧皮尧根尧果皮和果肉等组
织中分布不均匀咱远 原 苑暂 袁因此建立或筛选一种高灵敏
度的 择孕悦砸方法对于 蕴葬泽 的检测和定量分析极其重
要遥 目前基于 栽葬择酝葬灶 水解探针的 择孕悦砸 由于特异
性好而被广泛用于植物病原微生物的定量检测咱员猿 原员源暂 袁
但其检测灵敏度却往往较 杂郧陨鄄择孕悦砸低咱员缘暂 遥 本研究
通过比较筛选获得了比 杂郧陨鄄择孕悦砸 检测灵敏度更高
的 杂栽阅孕鄄择孕悦砸方法袁其检测灵敏度达到 员 伊 员园园 拷
贝 辕 滋蕴袁为 杂郧陨鄄择孕悦砸 的 员园园 倍袁而 杂栽阅孕鄄择孕悦砸 由于
同样基于 栽葬择酝葬灶 水解探针袁因此具备极好的检测
特异性袁适用于柑橘树内含量较低的 蕴葬泽 检测和定
量分析遥
本研究应用 杂栽阅孕鄄择孕悦砸方法袁在沙田柚花器的
花瓣尧雄蕊尧花粉和雌蕊等组织及种子的种皮和胚乳
等组织中均检测到了 蕴葬泽袁但分布不均匀袁在不同组
织间及同一组织不同样品间袁含量差异往往较大袁这
与 栽葬贼蚤灶藻灶蚤等咱远暂和 蕴蚤等咱苑暂在柑橘的叶尧皮尧根尧果皮
和果肉等组织中发现的 蕴葬泽分布定殖特性一致遥 本
研究中胚乳混样 蕴葬泽 检出率达到 怨园豫 袁蕴葬泽 平均含
量为 员 怨园怨 个细胞 辕 滋早 阅晕粤袁而 栽葬贼蚤灶藻灶蚤 等咱远暂的研究
却表明袁柑橘种子的胚乳组织中检测不出 蕴葬泽袁分析
其原因可能是由于试验柑橘品种以及所处发病时期
不同引起的差异遥 尽管 杂栽阅孕鄄择孕悦砸 检测灵敏度高
达 员 伊 员园园 拷贝 辕 滋蕴袁但 圆园 个种壳组织均未检测到
蕴葬泽袁表明种壳组织或许可以有效阻止 蕴葬泽 在其中定
殖遥 本研究 杂栽阅孕鄄择孕悦砸 定性检测结果与常规 孕悦砸
一致咱员远暂 袁但由于其灵敏度更高袁 蕴葬泽 总检出率为
苑猿郾 圆园豫 袁比常规 孕悦砸的总检出率 远怨援 园苑豫高遥
虽然通过叶片斑驳型黄化和红鼻果症状识别黄
龙病病树的方法快速可靠袁但是田间病树复杂的综
合症状以及其它病害的干扰袁使得只有经过培训并
且经验丰富的相关人员才能准确识别遥 基于 孕悦砸
和 择孕悦砸 的黄龙病诊断方法虽然应用广泛袁但是诊
断准确性取决于取样部位袁目前普遍采用斑驳型黄
化叶叶脉组织作为检测部位咱员苑暂 袁而黄龙病病树叶片
斑驳型黄化症状往往在环境温度较高时消退咱员愿暂 袁因
此基于斑驳型黄化叶片的 匀蕴月 分子诊断方法具有
较大应用局限性遥 建立一种不依懒于症状的高准确
性 匀蕴月分子诊断方法对于黄龙病综合防控意义重
大遥 本研究 杂栽阅孕鄄择孕悦砸定量检测结果表明袁尽管雌
蕊和雄蕊组织中 蕴葬泽 含量低于种皮组织袁但其检出
率均达 员园园豫 袁且由于雄蕊组织比雌蕊组织更易于
破碎袁便于基因组 阅晕粤 的提取袁因此雄蕊组织可能
是不依懒于症状的 匀蕴月 分子诊断方法的最佳取样
组织之一遥 通过应用基于国内外 蕴葬泽检测惯用引物
韵陨员 辕 韵陨圆糟的常规 孕悦砸 方法袁愿园 个整树随机采集的
雄蕊混样中有 苑缘 个检测到 蕴葬泽袁检出率达 怨猿援 愿豫 袁
比张培等咱员怨暂报道基于斑驳型黄化叶叶脉组织的
匀蕴月分子诊断方法的准确率 怨员援 愿豫稍高袁这表明该
方法可作为当斑驳型黄化叶症状缺失时的一种
匀蕴月分子诊断方法遥 此外本方法由于采用微量植
物组织总核酸快速提取法提取样品 阅晕粤袁样品制备
时间仅需 园援 缘 澡袁相比传统 悦栽粤月 法咱圆园暂省时省力袁因
此适合用于高通量黄龙病检测并易于推广应用遥 尽
管本研究表明袁种皮组织中 蕴葬泽 含量在所有试验组
织中最高袁但由于种皮组织 蕴葬泽检出率低于 员园园豫且
员缘源源 期 娄兵海等院 柑橘花器和种子中黄龙病菌的定量分布及应用
不易剥取袁需要耗费大量时间和人力袁因此不适合用
于大规模样品的检测遥
参 考 文 献 渊砸藻枣藻则藻灶糟藻泽冤
咱员暂 月燥增佴 允 酝援 匀怎葬灶早造燥灶早遭蚤灶早院 葬 凿藻泽贼则怎糟贼蚤增藻袁 灶藻憎造赠鄄藻皂藻则早蚤灶早袁 糟藻灶鄄
贼怎则赠鄄燥造凿 凿蚤泽藻葬泽藻 燥枣 糟蚤贼则怎泽援 允燥怎则灶葬造 燥枣 孕造葬灶贼 孕葬贼澡燥造燥早赠袁 圆园园远袁 愿愿
渊员冤院 苑 原 猿苑
咱圆暂 酝怎则则葬赠 砸 郧 耘袁 杂糟澡造藻蚤枣藻则 运 匀援 栽葬曾燥灶燥皂蚤糟 灶燥贼藻泽院 葬 责则燥责燥泽葬造 枣燥则
则藻糟燥则凿蚤灶早 贼澡藻 责则燥责藻则贼蚤藻泽 燥枣 责怎贼葬贼蚤增藻 贼葬曾葬 燥枣 责则燥糟葬则赠燥贼藻泽援 陨灶贼藻则灶葬鄄
贼蚤燥灶葬造 允燥怎则灶葬造 燥枣 杂赠泽贼藻皂葬贼蚤糟 月葬糟贼藻则蚤燥造燥早赠袁 员怨怨源袁 源源 渊 员 冤院
员苑源 原 员苑远
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澡怎葬灶早造燥灶早遭蚤灶早鄄造蚤噪藻 凿蚤泽藻葬泽藻 燥枣 糟蚤贼则怎泽 蚤灶 杂觔燥 孕葬怎造燥 杂贼葬贼藻袁 月则葬扎蚤造
葬灶凿 葬泽泽燥糟蚤葬贼蚤燥灶 燥枣 葬 灶藻憎 造蚤遭藻则蚤遭葬糟贼藻则 泽责藻糟蚤藻泽袁 野 悦葬灶凿蚤凿葬贼怎泽
蕴蚤遭藻则蚤遭葬糟贼藻则 葬皂藻则蚤糟葬灶怎泽冶袁 憎蚤贼澡 贼澡藻 凿蚤泽藻葬泽藻援 孕造葬灶贼 阅蚤泽藻葬泽藻袁
圆园园缘袁 愿怨渊员冤院 员园苑
咱源暂 阅藻灶早 载袁 悦澡藻灶 允袁 云藻灶早 在袁 藻贼 葬造援 陨凿藻灶贼蚤枣蚤糟葬贼蚤燥灶 葬灶凿 糟澡葬则葬糟贼藻则蚤扎葬鄄
贼蚤燥灶 燥枣 贼澡藻 澡怎葬灶早造燥灶早遭蚤灶早 遭葬糟贼藻则蚤怎皂 蚤灶 责怎皂皂藻造燥 枣则燥皂 皂怎造贼蚤责造藻
造燥糟葬贼蚤燥灶泽 蚤灶 郧怎葬灶早凿燥灶早袁 孕援 砸援 悦澡蚤灶葬援 孕造葬灶贼 阅蚤泽藻葬泽藻袁 圆园园愿袁
怨圆渊源冤院 缘员猿 原 缘员愿
咱缘暂 栽藻蚤曾藻蚤则葬 阅 悦袁 杂葬蚤造造葬则凿 悦袁 悦燥怎贼怎则藻 悦袁 藻贼 葬造援 阅蚤泽贼则蚤遭怎贼蚤燥灶 葬灶凿
择怎葬灶贼蚤枣蚤糟葬贼蚤燥灶 燥枣 悦葬灶凿蚤凿葬贼怎泽 蕴蚤遭藻则蚤遭葬糟贼藻则 葬皂藻则蚤糟葬灶怎泽袁 葬早藻灶贼 燥枣
澡怎葬灶早造燥灶早遭蚤灶早 凿蚤泽藻葬泽藻 燥枣 糟蚤贼则怎泽 蚤灶 杂觔燥 孕葬怎造燥 杂贼葬贼藻袁 月则葬泽蚤造袁 蚤灶
造藻葬增藻泽 燥枣 葬灶 葬枣枣藻糟贼藻凿 泽憎藻藻贼 燥则葬灶早藻 贼则藻藻 葬泽 凿藻贼藻则皂蚤灶藻凿 遭赠 孕悦砸援
酝燥造藻糟怎造葬则 葬灶凿 悦藻造造怎造葬则 孕则燥遭藻泽袁 圆园园愿袁 圆圆渊猿冤院 员猿怨 原 员缘园
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贼蚤燥灶 燥枣 耶悦葬灶凿蚤凿葬贼怎泽 蕴蚤遭藻则蚤遭葬糟贼藻则 葬泽蚤葬贼蚤糟怎泽爷 葬泽 则藻增藻葬造藻凿 遭赠 责燥造赠鄄
皂藻则葬泽藻 糟澡葬蚤灶 则藻葬糟贼蚤燥灶 渊孕悦砸冤 葬灶凿 则藻葬造鄄贼蚤皂藻 孕悦砸援 孕澡赠贼燥责葬贼澡燥造鄄
燥早赠袁 圆园园愿袁 怨愿渊缘冤院 缘怨圆 原 缘怨怨
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早造燥灶早遭蚤灶早援 孕澡赠贼燥责葬贼澡燥造燥早赠袁 圆园园怨袁 怨怨渊圆冤院 员猿怨 原 员源源
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燥枣 悦葬灶凿蚤凿葬贼怎泽 蕴蚤遭藻则蚤遭葬糟贼藻则 葬泽蚤葬贼蚤糟怎泽袁 贼澡藻 遭葬糟贼藻则蚤怎皂 葬泽泽燥糟蚤葬贼藻凿
憎蚤贼澡 糟蚤贼则怎泽 澡怎葬灶早造燥灶早遭蚤灶早援 允燥怎则灶葬造 燥枣 酝蚤糟则燥遭蚤燥造燥早蚤糟葬造 酝藻贼澡燥凿泽袁
圆园员园袁 愿员渊员冤院 员苑 原 圆缘
咱怨暂 允葬早燥怎藻蚤曾 杂袁 月燥增佴 允 酝袁 郧葬则灶蚤藻则 酝援 栽澡藻 责澡造燥藻皂鄄造蚤皂蚤贼藻凿 遭葬糟贼藻则蚤鄄
怎皂 燥枣 早则藻藻灶蚤灶早 凿蚤泽藻葬泽藻 燥枣 糟蚤贼则怎泽 蚤泽 葬 皂藻皂遭藻则 燥枣 贼澡藻 琢 泽怎遭凿蚤增蚤鄄
泽蚤燥灶 燥枣 贼澡藻 孕则燥贼藻燥遭葬糟贼藻则蚤葬援 陨灶贼藻则灶葬贼蚤燥灶葬造 允燥怎则灶葬造 燥枣 杂赠泽贼藻皂葬贼蚤糟
月葬糟贼藻则蚤燥造燥早赠袁 员怨怨源袁 源源渊猿冤院 猿苑怨 原 猿愿远
咱员园暂 蕴蚤灶 匀袁 宰葬造噪藻则 酝 粤援 耘曾贼则葬糟贼蚤灶早 阅晕粤 枣则燥皂 糟葬皂遭蚤怎皂 贼蚤泽泽怎藻 枣燥则
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员圆远源 原 员圆远远
咱员员暂 周常勇袁 阅藻遭燥则葬澡 匀袁 砸葬糟澡葬藻造 悦袁 等援 一种微量尧快速抽提
柑桔衰退病毒渊悦栽灾冤核酸应用于 砸栽鄄孕悦砸 扩增的方法援 福
建农业大学学报袁 圆园园员袁 猿园渊杂冤院 圆园园
咱员圆暂 阅怎葬灶 再袁 在澡燥怎 蕴袁 匀葬造造 阅 郧袁 藻贼 葬造援 悦燥皂责造藻贼藻 早藻灶燥皂藻 泽藻择怎鄄
藻灶糟藻 燥枣 糟蚤贼则怎泽 澡怎葬灶早造燥灶早遭蚤灶早 遭葬糟贼藻则蚤怎皂袁 耶悦葬灶凿蚤凿葬贼怎泽 蕴蚤遭藻则蚤鄄
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孕造葬灶贼鄄酝蚤糟则燥遭藻 陨灶贼藻则葬糟贼蚤燥灶泽袁 圆园园怨袁 圆圆渊愿冤院 员园员员 原 员园圆园
咱员猿暂 邓丛良袁 赵晓丽袁 双龙海袁 等援 细菌磁颗粒实时荧光 砸栽鄄
孕悦砸检测菜豆荚斑驳病毒援 植物保护学报袁 圆园员猿袁 源园渊员冤院
怨员 原 怨圆
咱员源暂 赵晓丽袁 周琦袁 孙宁袁 等援 啤酒花矮化类病毒实时荧光定
量 砸栽鄄孕悦砸检测方法的建立与应用援 植物保护学报袁 圆园员猿袁
源园渊源冤院 猿园怨 原 猿员源
咱员缘暂 胡浩袁 殷幼平袁 张利平袁 等援 柑桔黄龙病的常规 孕悦砸 及
荧光定量 孕悦砸 检测援 中国农业科学袁 圆园园远袁 猿怨 渊员圆冤院
圆源怨员 原 圆源怨苑
咱员远暂 蕴燥怎 月袁 在澡葬燥 载袁 杂燥灶早 再袁 藻贼 葬造援 野悦葬灶凿蚤凿葬贼怎泽 蕴蚤遭藻则蚤遭葬糟贼藻则 葬泽蚤鄄
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泽藻藻凿 糟燥葬贼 葬灶凿 藻灶凿燥泽责藻则皂 燥枣 责怎皂皂藻造燥 蚤灶 悦澡蚤灶葬援 允燥怎则灶葬造 燥枣
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咱员苑暂 林亚玉袁 殷幼平袁 陈世钦袁 等援 三种分子检测体系的比较
及柑橘果园黄龙病监测援 植物保护学报袁 圆园员圆袁 猿怨渊远冤院
缘园猿 原 缘园苑
咱员愿暂 蕴燥责藻泽 杂 粤袁 云则葬则藻 郧 云袁 月藻则贼燥造蚤灶蚤 耘袁 藻贼 葬造援 蕴蚤遭藻则蚤遭葬糟贼藻则泽 葬泽泽燥鄄
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蕴蚤遭藻则蚤遭葬糟贼藻则 葬泽蚤葬贼蚤糟怎泽爷 蚤泽 澡藻葬贼 贼燥造藻则葬灶贼袁 耶悦葬援 蕴援 葬皂藻则蚤糟葬灶怎泽爷
蚤泽 澡藻葬贼 泽藻灶泽蚤贼蚤增藻援 孕造葬灶贼 阅蚤泽藻葬泽藻袁 圆园园怨袁 怨猿渊猿冤院 圆缘苑 原 圆远圆
咱员怨暂 张培袁 关磊袁 刘蕤袁 等援 砂糖橘红鼻子果与韧皮部杆菌侵
染相关性研究援 热带作物学报袁 圆园员员袁 猿圆渊源冤院 苑猿愿 原 苑源圆
咱圆园暂 酝怎则则葬赠 酝 郧袁 栽澡燥皂责泽燥灶 宰 云援 砸葬责蚤凿 蚤泽燥造葬贼蚤燥灶 燥枣 澡蚤早澡 皂燥造藻糟怎鄄
造葬则 憎藻蚤早澡贼 责造葬灶贼 阅晕粤援 晕怎糟造藻蚤糟 粤糟蚤凿泽 砸藻泽藻葬则糟澡袁 员怨愿园袁 愿
渊员怨冤院 源猿圆员 原 源猿圆缘
渊责任编辑院李美娟冤
圆缘源 植摇 物摇 保摇 护摇 学摇 报 源员 卷