全 文 ：植物保护学报 Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｐｌａｎｔ Ｐｒｏｔｅｃｔｉｏｎꎬ ２０１５ꎬ ４２(５): ７７７ － ７８６ ＤＯＩ: １０􀆰 １３８０２ / ｊ. ｃｎｋｉ. ｚｗｂｈｘｂ. ２０１５􀆰 ０５􀆰 ０１２
基金项目:山西省科技攻关项目 (２０１２０３１１０１９￣３)ꎬ山西农业大学引进人才博士科研启动基金 (２０１３ＹＪ０９)ꎬ国家自然科学基金
(３１０００８７３)
∗通讯作者(Ａｕｔｈｏｒ ｆｏｒ ｃｏｒｒｅｓｐｏｎｄｅｎｃｅ)ꎬ Ｅ￣ｍａｉｌ: ｊｍ. ｗ＠ ｓｏｈｕ. ｃｏｍ
收稿日期: ２０１５ － ０５ － ０５
尖镰孢菌 ＥＳＴ￣ＳＳＲ遗传多样性分析及通用性评价
李新凤１ 　 王建明１∗　 张作刚１ 　 郝晓娟１ 　 张祖维２ 　 田宏先３
(１.山西农业大学农学院ꎬ 太谷 ０３０８０１ꎻ ２.山西农业大学动物科技学院ꎬ 太谷 ０３０８０１ꎻ
３.山西省农业科学院高寒区作物研究所ꎬ 大同 ０３７０００)
摘要: 为了解 ３８ 株尖镰孢菌的遗传多样性并开发可在近缘镰孢菌种中通用的尖镰孢菌 ＥＳＴ￣ＳＳＲ
标记ꎬ利用设计和筛选的 １８ 对多态性 ＥＳＴ￣ＳＳＲ引物对 ３８ 株尖镰孢菌和 ５ 种近缘镰孢菌进行 ＳＳＲ￣
ＰＣＲ扩增ꎬ经 ６％非变性聚丙烯酰胺凝胶分离扩增产物ꎬ并用 ＮＴＳＹＳ 软件分析供试尖镰孢菌的
ＰＣＲ扩增结果ꎮ 结果表明ꎬ１８ 对 ＥＳＴ￣ＳＳＲ标记引物在 ３８ 株尖镰孢菌中检测到 ７５ 条多态性条带ꎬ
多态性比率达 ９２􀆰 ６％ ꎬ平均每对引物可扩增 ４􀆰 ２ 条ꎻ各菌株间的遗传相似系数介于 ０􀆰 ５６５ ~ ０􀆰 ９４６
之间ꎬ平均为 ０􀆰 ７２１ꎻ来源于同科寄主植物群体的菌株间的平均遗传相似系数以葫芦科最大ꎬ锦葵
科最小ꎬ依次为葫芦科 >兰科 >豆科 >亚麻科 >茄科 >锦葵科ꎮ 在相似系数为 ０􀆰 ７５６ 时ꎬ供试 ３８
株菌有 ３５ 株按照不同科寄主植物聚为不同的类群ꎬ说明尖镰孢菌 ＳＳＲ 类群的划分与其寄主来源
具有一定的相关性ꎮ １８ 对 ＥＳＴ￣ＳＳＲ引物在近缘镰孢菌种中均能有效扩增的引物数及通用性比率
为 １０ 对和 ５５􀆰 ６％ ꎬ均显示多态性的引物有 ２ 对ꎬ占供试引物总数的 １１􀆰 １％ ꎮ 表明尖镰孢菌 ＥＳＴ￣
ＳＳＲ区域遗传多样性丰富ꎬ基于尖镰孢菌 ＥＳＴ序列开发镰孢菌通用 ＳＳＲ标记是可行的ꎮ
关键词: 尖镰孢菌ꎻ ＥＳＴ￣ＳＳＲꎻ 遗传多样性ꎻ 通用性
Ａｎａｌｙｓｉｓ ｏｆ ｇｅｎｅｔｉｃ ｄｉｖｅｒｓｉｔｙ ａｎｄ ｃｒｏｓｓ￣ｓｐｅｃｉｅｓ ｔｒａｎｓｆｅｒａｂｉｌｉｔｙ ｂａｓｅｄ ｏｎ
Ｆｕｓａｒｉｕｍ ｏｘｙｓｐｏｒｕｍ ＥＳＴ￣ＳＳＲ ｍａｒｋｅｒｓ
Ｌｉ Ｘｉｎｆｅｎｇ１ 　 Ｗａｎｇ Ｊｉａｎｍｉｎｇ１∗ 　 Ｚｈａｎｇ Ｚｕｏｇａｎｇ１ 　 Ｈａｏ Ｘｉａｏｊｕａｎ１ 　 Ｚｈａｎｇ Ｚｕｗｅｉ２ 　 Ｔｉａｎ Ｈｏｎｇｘｉａｎ３
(１. Ｃｏｌｌｅｇｅ ｏｆ Ａｇｒｉｃｕｌｔｕｒｅꎬ Ｓｈａｎｘｉ Ａｇｒｉｃｕｌｔｕｒａｌ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙꎬ Ｔａｉｇｕ ０３０８０１ꎬ Ｓｈａｎｘｉ Ｐｒｏｖｉｎｃｅꎬ Ｃｈｉｎａꎻ ２. Ｃｏｌｌｅｇｅ ｏｆ Ａｎｉｍａｌ
Ｓｃｉｅｎｃｅ ａｎｄ Ｖｅｔｅｒｉｎａｒｙ Ｍｅｄｉｃｉｎｅꎬ Ｓｈａｎｘｉ Ａｇｒｉｃｕｌｔｕｒａｌ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙꎬ Ｔａｉｇｕ ０３０８０１ꎬ Ｓｈａｎｘｉ Ｐｒｏｖｉｎｃｅꎬ Ｃｈｉｎａꎻ
３. Ｃｒｏｐｓ Ｒｅｓｅａｒｃｈ Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ ｆｏｒ Ａｌｐｉｎｅꎬ Ｓｈａｎｘｉ Ａｃａｄｅｍｙ ｏｆ Ａｇｒｉｃｕｌｔｕｒａｌ Ｓｃｉｅｎｃｅｓꎬ Ｄａｔｏｎｇ ０３７０００ꎬ Ｓｈａｎｘｉ Ｐｒｏｖｉｎｃｅꎬ Ｃｈｉｎａ)
Ａｂｓｔｒａｃｔ: Ｔｈｅ ｏｂｊｅｃｔｉｖｅ ｏｆ ｔｈｉｓ ｓｔｕｄｙ ｉｓ ｔｏ ａｎａｌｙｚｅ ｇｅｎｅｔｉｃ ｄｉｖｅｒｓｉｔｙ ｏｆ ３８ Ｆｕｓａｒｉｕｍ ｏｘｙｓｐｏｒｕｍ ｓｔｒａｉｎｓ ａｎｄ
ｔｏ ｄｅｖｅｌｏｐ Ｆ. ｏｘｙｓｐｏｒｕｍ ＥＳＴ￣ＳＳＲ ｍａｒｋｅｒｓ ｗｈｉｃｈ ｃａｎ ｂｅ ａｌｓｏ ｕｓｅｄ ｉｎ ｏｔｈｅｒ Ｆｕｓａｒｉｕｍ ｓｐｐ. ｓｔｒａｉｎｓ.
Ｅｉｇｈｔｅｅｎ ＥＳＴ￣ＳＳＲ ｍａｒｋｅｒｓ ｗｅｒｅ ｕｓｅｄ ｔｏ ａｓｓｅｓｓ Ｆｕｓａｒｉｕｍ ｓｐｐ. ｓｔｒａｉｎｓ ａｎｄ ｔｈｅ ａｍｐｌｉｆｉｃａｔｉｏｎ ｐｒｏｄｕｃｔｓ ｗｅｒｅ
ｓｅｐａｒａｔｅｄ ｏｎ ６％ ｄｅｎａｔｕｒｅｄ ｐｏｌｙａｃｒｙｌａｍｉｄｅ ｇｅｌｓ. Ｔｈｅｎ ｔｈｅ ｒｅｓｕｌｔｉｎｇ ｄａｔａ ｗａｓ ａｎａｌｙｚｅｄ ｕｓｉｎｇ ＮＴＳＹＳ
ｐｒｏｇｒａｍ. Ｔｈｅ ｒｅｓｕｌｔｓ ｓｈｏｗｅｄ ｔｈａｔ ａ ｔｏｔａｌ ｏｆ ７５ (９２􀆰 ６％ ) ｂａｎｄｓ ｗｅｒｅ ａｍｐｌｉｆｉｅｄ ｂｙ １８ ｐｒｉｍｅｒｓ ｗｉｔｈ ａｎ
ａｖｅｒａｇｅ ｏｆ ４􀆰 ２ ｂａｎｄｓ ｐｅｒ ｍａｒｋｅｒ. Ｔｈｅ ｇｅｎｅｔｉｃ ｓｉｍｉｌａｒｉｔｙ ａｍｏｎｇ ａｌｌ ｔｈｅ ｓｔｒａｉｎｓ ｒａｎｇｅｄ ｆｒｏｍ ０􀆰 ５６５ ｔｏ ０􀆰 ９４６
ｗｉｔｈ ａｎ ａｖｅｒａｇｅ ｏｆ ０􀆰 ７２１. Ｔｈｅ ａｖｅｒａｇｅ ｇｅｎｅｔｉｃ ｓｉｍｉｌａｒｉｔｙ ａｍｏｎｇ ｔｈｅ ｓｔｒａｉｎｓ ｏｆ ｄｉｆｆｅｒｅｎｔ ｆａｍｉｌｉｅｓ ｗａｓ
ｄｉｆｆｅｒｅｎｔꎻ ｔｈｏｓｅ ｏｆ ｔｈｅ ｓｔｒａｉｎｓ ｆｒｏｍ Ｃｕｃｕｒｂｉｔａｃｅａｅ ｆａｍｉｌｙ ｓｈｏｗｅｄ ｔｈｅ ｈｉｇｈｅｓｔ ｓｉｍｉｌａｒｉｔｙꎬ ｔｈｏｓｅ ｆｒｏｍ
Ｍａｌｖａｃｅａｅ ｔｈｅ ｌｏｗｅｓｔꎬ ａｎｄ ｔｈｅ ｏｒｄｅｒ ｗａｓ Ｃｕｃｕｒｂｉｔａｃｅａｅ > Ｏｒｃｈｉｄａｃｅａｅ > Ｌｅｇｕｍｉｎｏｓａｅ > Ｌｉｎａｃｅａｅ >
Ｓｏｌａｎａｃｅａｅ > Ｍａｌｖａｃｅａｅ. Ｐｈｙｌｏｇｅｎｅｔｉｃ ｃｌｕｓｔｅｒｉｎｇ ｂａｓｅｄ ｏｎ ｔｈｅｓｅ １８ ＥＳＴ￣ＳＳＲ ｍａｒｋｅｒｓ ｓｈｏｗｅｄ ｔｈａｔ ３５ Ｆ.
ｏｘｙｓｐｏｒｕｍ ｓｔｒａｉｎｓ ｗｅｒｅ ｄｉｓｔｉｎｃｔｌｙ ｃｌｕｓｔｅｒｅｄ ｉｎｔｏ ｄｉｆｆｅｒｅｎｔ ｇｒｏｕｐｓ ａｃｃｏｒｄｉｎｇ ｔｏ ｔｈｅｉｒ ｈｏｓｔ ｆａｍｉｌｙ ａｔ ０􀆰 ７５６ꎬ
ｗｈｉｃｈ ｉｎｄｉｃａｔｅｄ ｓｏｍｅ ｃｏｒｒｅｌａｔｉｏｎ ｂｅｔｗｅｅｎ ｃｌｕｓｔｅｒｉｎｇ ａｎｄ ｈｏｓｔ ｏｒｉｇｉｎｓ ｏｆ ｓｔｒａｉｎｓ. Ｔｈｅ ｐａｉｒｓ ｏｆ ｐｒｉｍｅｒｓ ｔｈａｔ
ｃｏｕｌｄ ｅｆｆｅｃｔｉｖｅｌｙ ａｍｐｌｉｆｉｅｄ ｂａｎｄｓ ｉｎ ｆｉｖｅ Ｆｕｓａｒｉｕｍ ｓｐｐ. ｓｔｒａｉｎｓ ｗｅｒｅ ｔｅｎꎬ ａｎｄ ｔｈｅ ｔｒａｎｓｆｅｒａｂｉｌｉｔｙ ｒａｔｅ ｗａｓ
５５􀆰 ６％ . Ａ ｔｏｔａｌ ｏｆ ｔｗｏ ｐａｉｒｓ (１１􀆰 １％ ) ｏｆ Ｆ. ｏｘｙｓｐｏｒｕｍ ＥＳＴ￣ＳＳＲ ｐｒｉｍｅｒｓ ｗｅｒｅ ｄｅｔｅｃｔｅｄ ｔｏ ｂｅ ｈｉｇｈｌｙ
ｐｏｌｙｍｏｒｐｈｉｃ ａｍｏｎｇ Ｆｕｓａｒｉｕｍ ｓｐｐ. Ｔｈｅｓｅ ｒｅｓｕｌｔｓ ｉｎｄｉｃａｔｅｄ ｔｈａｔ Ｆ. ｏｘｙｓｐｏｒｕｍ ｈａｄ ａ ｒｉｃｈ ｇｅｎｅｔｉｃ ｂａｓｉｓ ａｎｄ
ｅｘｐｌｏｉｔａｔｉｏｎ ｏｆ ＥＳＴ￣ＳＳＲ ｍａｒｋｅｒｓ ｆｒｏｍ Ｆ. ｏｘｙｓｐｏｒｕｍ ｆｏｒ ｏｔｈｅｒ Ｆｕｓａｒｉｕｍ ｓｐｐ. ｗａｓ ｅｆｆｉｃｉｅｎｔ.
Ｋｅｙ ｗｏｒｄｓ: Ｆｕｓａｒｉｕｍ ｏｘｙｓｐｏｒｕｍꎻ ＥＳＴ￣ＳＳＲꎻ ｇｅｎｅｔｉｃ ｄｉｖｅｒｓｉｔｙꎻ ｔｒａｎｓｆｅｒａｂｉｌｉｔｙ
　 　 尖镰孢菌 Ｆｕｓａｒｉｕｍ ｏｘｙｓｐｏｒｕｍ 是镰孢菌属真菌
中可侵染多种植物引起枯萎病的重要植物病原菌ꎮ
该菌具有种内遗传分化水平高和菌株间生理分化显
著的特点ꎬ因此在其种下通常又分为多个专化型和
生理小种ꎬ而专化型和生理小种的传统鉴定方法主
要是通过测定菌株对不同寄主种或品种的致病性来
确定(Ｂｏｏｔｈꎬ１９９８)ꎮ 这种传统生物学方法不仅耗时
耗力、植株需求量大ꎬ且要求鉴定人员具有较高的技
术水平ꎮ 随着分子生物学技术的迅猛发展和广泛应
用ꎬ以病原菌 ＤＮＡ 或 ＲＮＡ 检测为基础的现代分子
检测技术ꎬ为从分子水平鉴定病原菌种内不同的致
病类型提供了可能ꎬ并已在一些病原菌专化型及生
理小种的鉴定上得到了应用(张吉祥等ꎬ２０１３)ꎮ 通
常认为病原菌的分子鉴定应该建立在致病性相关的
遗传学基础上(Ｌｉｅｖｅｎｓ ＆ Ｔｈｏｍｍａꎬ２００５)ꎬ然而迄今
为止关于尖镰孢菌与寄主特异性关系的遗传基础研
究还很少ꎬ因此运用分子标记的方法研究尖镰孢菌
种内各菌株间的遗传多样性与群体遗传结构ꎬ对从
分子水平了解该菌种的生理分化机理、分析分子标
记位点与菌种类群、致病性及抗病性等方面的关联
性具有重要的理论意义和实践价值ꎮ
近年来ꎬ已有多种分子标记技术应用于尖镰孢
菌的遗传多样性研究(Ｍｉｓｈｒａ ｅｔ ａｌ. ꎬ２０１３ꎻ张述义
等ꎬ２０１３ꎻ高慧等ꎬ２０１４)ꎮ 简单重复序列扩增多态
性(ｓｉｍｐｌｅ ｓｅｑｕｅｎｃｅ ｒｅｐｅａｔꎬＳＳＲ)标记作为一种基于
ＰＣＲ扩增物种基因组中多态性微卫星而建立的分
子标记技术ꎬ与其它分子标记技术相比ꎬ具有多态性
高、共显性遗传、重复性好等优点ꎬ已成为物种遗传
多样性、亲缘关系等研究的最主要分子标记之一ꎬ并
逐渐应用于病原真菌的遗传多样性分析、种群变异
和菌种鉴定等方面的研究(Ｌｅｅｓ ｅｔ ａｌ. ꎬ２００６ꎻＩｖｏｒｓ ｅｔ
ａｌ. ꎬ２００６ꎻ胡小平等ꎬ２００８)ꎮ
ＳＳＲ标记技术包括基因组 ＳＳＲ(Ｇｅｎｏｍｉｃ￣ＳＳＲ)
标记和表达序列标签 ＳＳＲ(ＥＳＴ￣ＳＳＲ)标记ꎮ 目前有
关镰孢菌 ＳＳＲ 标记的研究主要是 Ｇｅｎｏｍｉｃ￣ＳＳＲꎬ且
大多局限于标记引物的开发ꎬ针对黄色镰孢菌 Ｆ.
ｃｕｌｍｏｒｍ、禾谷镰孢菌 Ｆ. ｇｒａｍｉｎｅａｒｕｍ与梨孢镰孢菌
Ｆ. ｐｏａｅ 等开发了多对可用于镰孢菌遗传分化研究
的 ＳＳＲ引物(Ｇｉｒａｕｄ ｅｔ ａｌ. ꎬ２００２ꎻＶｏｇｅｌｇｓａｎｇ ｅｔ ａｌ. ꎬ
２００９ꎻ２０１１)ꎬ还开发了用于转 Ｂｔ基因与非转基因玉
米越冬秸秆残留物中镰孢菌群体遗传结构分析的
ＳＳＲ引物(Ｎａｅｆ ＆ Ｄéｆａｇｏꎬ２００６)ꎮ 此外ꎬ除已经公布
基因组序列的少数镰孢菌种外ꎬ基于镰孢菌基因组
序列开发 ＳＳＲ 标记均需要通过富集文库、ＳＳＲ 克
隆、测序等步骤ꎬ不仅耗时耗力ꎬ而且成本高ꎮ ＥＳＴ￣
ＳＳＲ标记是基于物种已知 ＥＳＴ 序列开发的 ＳＳＲ 标
记ꎬ与 Ｇｅｎｏｍｉｃ￣ＳＳＲ标记相比ꎬ除具有 ＳＳＲ标记的优
点外ꎬ还有经济、通用性高、可提高生物数据库中
ＥＳＴ资源的利用效率等特点ꎮ 目前有关镰孢菌
ＥＳＴ￣ＳＳＲ 标记的研究报道较少ꎬ Ｍａｈｆｏｏｚ ｅｔ ａｌ.
(２０１２)开发了 ４ 对尖镰孢菌 ＥＳＴ￣ＳＳＲ 多态性引物ꎻ
李新凤等(２０１４)在分析尖镰孢菌 ＥＳＴ￣ＳＳＲ 分布组
成特点的基础上ꎬ开发了 １４ 对 ＳＳＲ 引物ꎻ本研究在
进一步发掘尖镰孢菌 ＥＳＴ￣ＳＳＲ 的基础上ꎬ对 ３８ 株
寄主和地理来源不同的尖镰孢菌进行了 ＥＳＴ￣ＳＳＲ
遗传多样性分析ꎬ并探讨多态性 ＥＳＴ￣ＳＳＲ 标记在近
缘镰孢菌中的通用性ꎬ旨在为镰孢菌属真菌分类鉴
定、系统发育、镰孢菌病害分子诊断及抗病育种等方
面的研究提供丰富而有效的 ＳＳＲ标记ꎮ
１ 材料与方法
１􀆰 １ 材料
供试菌株:供试 ３８ 株尖镰孢菌中ꎬ３６ 株为分离
自山西省不同地区的不同专化型单孢菌株ꎬ２ 株为
分离自河北保定兰花的单孢菌株(表 １)ꎻ供试 ２５ 株
近缘镰孢菌分别为轮枝镰孢菌、腐皮镰孢菌、半裸镰
孢菌、木贼镰孢菌、禾谷镰孢菌的单孢菌株各 ５ 株ꎮ
所有供试菌株均采用 Ｂｏｏｔｈ 分类系统与 Ｌｅｓｌｉｅ 分类
方法进行形态学鉴定 ( Ｂｏｏｔｈꎬ１９８８ꎻＬｅｓｌｉｅ ＆ Ｓｕｍ￣
ｍｅｒｅｌｌꎬ２００６)ꎮ
８７７ 植　 物　 保　 护　 学　 报 ４２ 卷
表 １ 供试菌株的寄主及来源
Ｔａｂｌｅ １ Ｔｅｓｔｅｄ ｓｔｒａｉｎｓ ａｎｄ ｔｈｅｉｒ ｈｏｓｔｓꎬ ｃｏｌｌｅｃｔｉｎｇ ａｎｄ ｉｓｏｌａｔｅ ｓｉｔｅｓ ｉｎ ｔｈｅ ｓｔｕｄｙ
编号 Ｎｏ. 菌株 Ｓｔｒａｉｎ 寄主 Ｈｏｓｔ 采集地 Ｃｏｌｌｅｃｔｉｎｇ ｓｉｔｅ
１ 尖镰孢菌大豆专化型 Ｆ. ｏｘｙｓｐｏｒｕｍ ｆ. ｓｐ. ｔｒａｃｈｅｉｐｈｉｌｕｍ 绿豆 Ｖｉｇｎａ ｒａｄｉａｔａ 山西祁县 Ｑｉｘｉａｎꎬ Ｓｈａｎｘｉ
２ 尖镰孢菌大豆专化型 Ｆ. ｏｘｙｓｐｏｒｕｍ ｆ. ｓｐ. ｔｒａｃｈｅｉｐｈｉｌｕｍ 绿豆 Ｖ. ｒａｄｉａｔｅ 山西阳城 Ｙａｎｇｃｈｅｎｇꎬ Ｓｈａｎｘｉ
３ 尖镰孢菌蚕豆专化型 Ｆ. ｏｘｙｓｐｏｒｕｍ ｆ. ｓｐ. ｔｒａｃｈｅｉｐｈｉｌｕｍ 大豆 Ｇｌｙｃｉｎｅ ｍａｘ 山西太谷 Ｔａｉｇｕꎬ Ｓｈａｎｘｉ
４ 尖镰孢菌大豆专化型 Ｆ. ｏｘｙｓｐｏｒｕｍ ｆ. ｓｐ. ｔｒａｃｈｅｉｐｈｉｌｕｍ 绿豆 Ｖ. ｒａｄｉａｔｅ 山西太谷 Ｔａｉｇｕꎬ Ｓｈａｎｘｉ
５ 尖镰孢菌蚕豆专化型 Ｆ. ｏｘｙｓｐｏｒｕｍ ｆ. ｓｐ. ｆａｂａｅ 菜豆 Ｐｈａｓｅｏｌｕｓ ｖｕｌｇａｒｉｓ 山西太谷 Ｔａｉｇｕꎬ Ｓｈａｎｘｉ
６ 尖镰孢菌蚕豆专化型 Ｆ. ｏｘｙｓｐｏｒｕｍ ｆ. ｓｐ. ｆａｂａｅ 菜豆 Ｐ. ｖｕｌｇａｒｉｓ 山西太谷 Ｔａｉｇｕꎬ Ｓｈａｎｘｉ
７ 尖镰孢菌大豆专化型 Ｆ. ｏｘｙｓｐｏｒｕｍ ｆ. ｓｐ. ｆａｂａｅ 蚕豆 Ｖｉｃｉａｅ ｆａｂａ 山西太谷 Ｔａｉｇｕꎬ Ｓｈａｎｘｉ
８ 尖镰孢菌黄瓜专化型 Ｆ. ｏｘｙｓｐｏｒｕｍ ｆ. ｓｐ. ｃｕｃｕｍｅｒｉｎｕｍ 黄瓜 Ｃｕｃｕｍｉｓ ｓａｔｉｖｕｓ 山西夏县 Ｘｉａｘｉａｎꎬ Ｓｈａｎｘｉ
９ 尖镰孢菌黄瓜专化型 Ｆ. ｏｘｙｓｐｏｒｕｍ ｆ. ｓｐ. ｃｕｃｕｍｅｒｉｎｕｍ 黄瓜 Ｃ. ｓａｔｉｖｕｓ 山西夏县 Ｘｉａｘｉａｎꎬ Ｓｈａｎｘｉ
１０ 尖镰孢菌黄瓜专化型 Ｆ. ｏｘｙｓｐｏｒｕｍ ｆ. ｓｐ. ｃｕｃｕｍｅｒｉｎｕｍ 黄瓜 Ｃ. ｓａｔｉｖｕｓ 山西太谷 Ｔａｉｇｕꎬ Ｓｈａｎｘｉ
１１ 尖镰孢菌黄瓜专化型 Ｆ. ｏｘｙｓｐｏｒｕｍ ｆ. ｓｐ. ｃｕｃｕｍｅｒｉｎｕｍ 黄瓜 Ｃ. ｓａｔｉｖｕｓ 山西太原 Ｔａｉｙｕａｎꎬ Ｓｈａｎｘｉ
１２ 尖镰孢菌黄瓜专化型 Ｆ. ｏｘｙｓｐｏｒｕｍ ｆ. ｓｐ. ｃｕｃｕｍｅｒｉｎｕｍ 黄瓜 Ｃ. ｓａｔｉｖｕｓ 山西太谷 Ｔａｉｇｕꎬ Ｓｈａｎｘｉ
１３ 尖镰孢菌黄瓜专化型 Ｆ. ｏｘｙｓｐｏｒｕｍ ｆ. ｓｐ. ｃｕｃｕｍｅｒｉｎｕｍ 西葫芦 Ｃｕｃｕｒｂｉｔａ ｐｅｐｏ 山西太谷 Ｔａｉｇｕꎬ Ｓｈａｎｘｉ
１４ 尖镰孢菌黄瓜专化型 Ｆ. ｏｘｙｓｐｏｒｕｍ ｆ. ｓｐ. ｃｕｃｕｍｅｒｉｎｕｍ 黄瓜 Ｃ. ｓａｔｉｖｕｓ 山西临汾 Ｌｉｎｆｅｎꎬ Ｓｈａｎｘｉ
１５ 尖镰孢菌黄瓜专化型 Ｆ. ｏｘｙｓｐｏｒｕｍ ｆ. ｓｐ. ｃｕｃｕｍｅｒｉｎｕｍ 黄瓜 Ｃ. ｓａｔｉｖｕｓ 山西太原 Ｔａｉｙｕａｎꎬ Ｓｈａｎｘｉ
１６ 尖镰孢菌黄瓜专化型 Ｆ. ｏｘｙｓｐｏｒｕｍ ｆ. ｓｐ. ｃｕｃｕｍｅｒｉｎｕｍ 黄瓜 Ｃ. ｓａｔｉｖｕｓ 山西临汾 Ｌｉｎｆｅｎꎬ Ｓｈａｎｘｉ
１７ 尖镰孢菌黄瓜专化型 Ｆ. ｏｘｙｓｐｏｒｕｍ ｆ. ｓｐ. ｃｕｃｕｍｅｒｉｎｕｍ 黄瓜 Ｃ. ｓａｔｉｖｕｓ 山西太原 Ｔａｉｙｕａｎꎬ Ｓｈａｎｘｉ
１８ 尖镰孢菌番茄专化型 Ｆ. ｏｘｙｓｐｏｒｕｍ ｆ. ｓｐ. ｌｙｃｏｐｅｒｓｉｃｉ 番茄 Ｌｙｃｏｐｅｒｓｉｃｏｎ ｅｓｃｕｌｅｎｔｕｍ 山西太原 Ｔａｉｙｕａｎꎬ Ｓｈａｎｘｉ
１９ 尖镰孢菌番茄专化型 Ｆ. ｏｘｙｓｐｏｒｕｍ ｆ. ｓｐ. ｌｙｃｏｐｅｒｓｉｃｉ 番茄 Ｌ. ｅｓｃｕｌｅｎｔｕｍ 山西太谷 Ｔａｉｇｕꎬ Ｓｈａｎｘｉ
２０ 尖镰孢菌番茄专化型 Ｆ. ｏｘｙｓｐｏｒｕｍ ｆ. ｓｐ. ｌｙｃｏｐｅｒｓｉｃｉ 番茄 Ｌ. ｅｓｃｕｌｅｎｔｕｍ 山西大同 Ｄａｔｏｎｇꎬ Ｓｈａｎｘｉ
２１ 尖镰孢菌辣椒专化型 Ｆ. ｏｘｙｓｐｏｒｕｍ ｆ. ｓｐ. ｃａｐｓｉｃｕｍ 辣椒 Ｃａｐｓｉｃｕｍ ａｎｎｕｕｍ 山西太谷 Ｔａｉｇｕꎬ Ｓｈａｎｘｉ
２２ 尖镰孢菌茄子专化型 Ｆ. ｏｘｙｓｐｏｒｕｍ ｆ. ｓｐ. ｍｅｌｏｎｇｅｎａｅ 茄子 Ｓｏｌａｎｕｍ ｍｅｌｏｎｇｅｎａ 山西祁县 Ｑｉｘｉａｎꎬ Ｓｈａｎｘｉ
２３ 尖镰孢菌茄子专化型 Ｆ. ｏｘｙｓｐｏｒｕｍ ｆ. ｓｐ. ｍｅｌｏｎｇｅｎａｅ 茄子 Ｓ. ｍｅｌｏｎｇｅｎａ 山西五寨 Ｗｕｚｈａｉꎬ Ｓｈａｎｘｉ
２４ 尖镰孢菌茄子专化型 Ｆ. ｏｘｙｓｐｏｒｕｍ ｆ. ｓｐ. ｍｅｌｏｎｇｅｎａｅ 茄子 Ｓ. ｍｅｌｏｎｇｅｎａ 山西阳城 Ｙａｎｇｃｈｅｎｇꎬ Ｓｈａｎｘｉ
２５ 尖镰孢菌茄子专化型 Ｆ. ｏｘｙｓｐｏｒｕｍ ｆ. ｓｐ. ｍｅｌｏｎｇｅｎａｅ 茄子 Ｓ. ｍｅｌｏｎｇｅｎａ 山西祁县 Ｑｉｘｉａｎꎬ Ｓｈａｎｘｉ
２６ 尖镰孢菌萎蔫专化型 Ｆ. ｏｘｙｓｐｏｒｕｍ ｆ. ｓｐ. ｖａｓｉｎｆｅｃｔｕｍ 棉花 Ｇｏｓｓｙｐｉｕｍ ｈｉｒｓｕｔｕｍ 山西太谷 Ｔａｉｇｕꎬ Ｓｈａｎｘｉ
２７ 尖镰孢菌萎蔫专化型 Ｆ. ｏｘｙｓｐｏｒｕｍ ｆ. ｓｐ. ｖａｓｉｎｆｅｃｔｕｍ 棉花 Ｇ. ｈｉｒｓｕｔｕｍ 山西襄汾 Ｘｉａｎｇｆｅｎꎬ Ｓｈａｎｘｉ
２８ 尖镰孢菌萎蔫专化型 Ｆ. ｏｘｙｓｐｏｒｕｍ ｆ. ｓｐ. ｖａｓｉｎｆｅｃｔｕｍ 棉花 Ｇ. ｈｉｒｓｕｔｕｍ 山西运城 Ｙｕｎｃｈｅｎｇꎬ Ｓｈａｎｘｉ
２９ 尖镰孢菌胡麻专化型 Ｆ. ｏｘｙｓｐｏｒｕｍ ｆ. ｓｐ. ｌｉｎｉ 胡麻 Ｌｉｎｕｍ ｕｓｉｔａｔｉｓｓｉｍｕｍ 山西大同 Ｄａｔｏｎｇꎬ Ｓｈａｎｘｉ
３０ 尖镰孢菌芝麻专化型 Ｆ. ｏｘｙｓｐｏｒｕｍ ｆ. ｓｐ. ｓｅｓａｍｉ 芝麻 Ｓｅｓａｍｕｍ ｉｎｄｉｃｕｍ 山西襄汾 Ｘｉａｎｇｆｅｎꎬ Ｓｈａｎｘｉ
３１ 尖镰孢菌芝麻专化型 Ｆ. ｏｘｙｓｐｏｒｕｍ ｆ. ｓｐ. ｓｅｓａｍｉ 芝麻 Ｓ. ｉｎｄｉｃｕｍ 山西祁县 Ｑｉｘｉａｎꎬ Ｓｈａｎｘｉ
３２ 尖镰孢菌 Ｆ. ｏｘｙｓｐｏｒｕｍ 兰花 Ｍｉｃｈｅｌｉａ ｃｈａｐｅｎｓｉｓ 河北保定 Ｂａｏｄｉｎｇꎬ Ｈｅｂｅｉ
３３ 尖镰孢菌 Ｆ. ｏｘｙｓｐｏｒｕｍ 兰花 Ｍ. ｃｈａｐｅｎｓｉｓ 河北保定 Ｂａｏｄｉｎｇꎬ Ｈｅｂｅｉ
３４ 尖镰孢菌茄子专化型 Ｆ. ｏｘｙｓｐｏｒｕｍ ｆ. ｓｐ. ｍｅｌｏｎｇｅｎａｅ 茄子 Ｓ. ｍｅｌｏｎｇｅｎａ 山西神池 Ｓｈｅｎｃｈｉꎬ Ｓｈａｎｘｉ
３５ 尖镰孢菌茄子专化型 Ｆ. ｏｘｙｓｐｏｒｕｍ ｆ. ｓｐ. ｍｅｌｏｎｇｅｎａｅ 茄子 Ｓ. ｍｅｌｏｎｇｅｎａ 山西神池 Ｓｈｅｎｃｈｉꎬ Ｓｈａｎｘｉ
３６ 尖镰孢菌茄子专化型 Ｆ. ｏｘｙｓｐｏｒｕｍ ｆ. ｓｐ. ｍｅｌｏｎｇｅｎａｅ 茄子 Ｓ. ｍｅｌｏｎｇｅｎａ 山西太原 Ｔａｉｙｕａｎꎬ Ｓｈａｎｘｉ
３７ 尖镰孢菌 Ｆ. ｏｘｙｓｐｏｒｕｍ 兰花 Ｍ. ｃｈａｐｅｎｓｉｓ 山西长治 Ｃｈａｎｇｚｈｉꎬ Ｓｈａｎｘｉ
３８ 尖镰孢菌 Ｆ. ｏｘｙｓｐｏｒｕｍ 兰花 Ｍ. ｃｈａｐｅｎｓｉｓ 山西长治 Ｃｈａｎｇｚｈｉꎬ Ｓｈａｎｘｉ
３９ 轮枝镰孢菌 Ｆ. ｖｅｒｔｉｃｉｌｌｉｏｉｄｅｓ 蚕豆 Ｖ. ｆａｂａ 山西太谷 Ｔａｉｇｕꎬ Ｓｈａｎｘｉ
４０ 轮枝镰孢菌 Ｆ. ｖｅｒｔｉｃｉｌｌｉｏｉｄｅｓ 茄子 Ｓ. ｍｅｌｏｎｇｅｎａ 山西阳城 Ｙａｎｇｃｈｅｎｇꎬ Ｓｈａｎｘｉ
４１ 轮枝镰孢菌 Ｆ. ｖｅｒｔｉｃｉｌｌｉｏｉｄｅｓ 菜豆 Ｐ. ｖｕｌｇａｒｉｓ 山西阳城 Ｙａｎｇｃｈｅｎｇꎬ Ｓｈａｎｘｉ
４２ 轮枝镰孢菌 Ｆ. ｖｅｒｔｉｃｉｌｌｉｏｉｄｅｓ 番茄 Ｌ. ｅｓｃｕｌｅｎｔｕｍ 山西太谷 Ｔａｉｇｕꎬ Ｓｈａｎｘｉ
４３ 轮枝镰孢菌 Ｆ. ｖｅｒｔｉｃｉｌｌｉｏｉｄｅｓ 胡麻 Ｌ. ｕｓｉｔａｔｉｓｓｉｍｕｍ 山西大同 Ｄａｔｏｎｇꎬ Ｓｈａｎｘｉ
４４ 腐皮镰孢菌 Ｆ. ｓｏｌａｎｉ 甜瓜 Ｃｕｃｕｍｉｓ ｍｅｌｏ 山西太谷 Ｔａｉｇｕꎬ Ｓｈａｎｘｉ
４５ 腐皮镰孢菌 Ｆ. ｓｏｌａｎｉ 菜豆 Ｐ. ｖｕｌｇａｒｉｓ 山西太谷 Ｔａｉｇｕꎬ Ｓｈａｎｘｉ
４６ 腐皮镰孢菌 Ｆ. ｓｏｌａｎｉ 棉花 Ｇ. ｈｉｒｓｕｔｕｍ 山西运城 Ｙｕｎｃｈｅｎｇꎬ Ｓｈａｎｘｉ
４７ 腐皮镰孢菌 Ｆ. ｓｏｌａｎｉ 樱花 Ｐｒｕｎｕｓ ｓｅｒｒｕｌａｔａ 山西长治 Ｃｈａｎｇｚｈｉꎬ Ｓｈａｎｘｉ
４８ 腐皮镰孢菌 Ｆ. ｓｏｌａｎｉ 菜豆 Ｐ. ｖｕｌｇａｒｉｓ 山西太谷 Ｔａｉｇｕꎬ Ｓｈａｎｘｉ
４９ 半裸镰孢菌 Ｆ. ｓｅｍｉｔｅｃｔｕｍ 菜豆 Ｐ. ｖｕｌｇａｒｉｓ 山西太谷 Ｔａｉｇｕꎬ Ｓｈａｎｘｉ
５０ 半裸镰孢菌 Ｆ. ｓｅｍｉｔｅｃｔｕｍ 蚕豆 Ｖ. ｆａｂａ 山西太谷 Ｔａｉｇｕꎬ Ｓｈａｎｘｉ
９７７５ 期 李新凤等: 尖镰孢菌 ＥＳＴ￣ＳＳＲ遗传多样性分析及通用性评价
续表 １
编号 Ｎｏ. 菌株 Ｓｔｒａｉｎ 寄主 Ｈｏｓｔ 采集地 Ｃｏｌｌｅｃｔｉｎｇ ｓｉｔｅ
５１ 半裸镰孢菌 Ｆ. ｓｅｍｉｔｅｃｔｕｍ 茄子 Ｓ. ｍｅｌｏｎｇｅｎａ 山西运城 Ｙｕｎｃｈｅｎｇꎬ Ｓｈａｎｘｉ
５２ 半裸镰孢菌 Ｆ. ｓｅｍｉｔｅｃｔｕｍ 番茄 Ｌ. ｅｓｃｕｌｅｎｔｕｍ 山西太谷 Ｔａｉｇｕꎬ Ｓｈａｎｘｉ
５３ 半裸镰孢菌 Ｆ. ｓｅｍｉｔｅｃｔｕｍ 黄瓜 Ｃ. ｓａｔｉｖｕｓ 山西夏县 Ｘｉａｘｉａｎꎬ Ｓｈａｎｘｉ
５４ 木贼镰孢菌 Ｆ. ｅｑｕｉｓｅｔｉ 大豆 Ｇ. ｍａｘ 辽宁沈阳 Ｓｈｅｎｙａｎｇꎬ Ｌｉａｏｎｉｎｇ
５５ 木贼镰孢菌 Ｆ. ｅｑｕｉｓｅｔｉ 茄子 Ｓ. ｍｅｌｏｎｇｅｎａ 山西太谷 Ｔａｉｇｕꎬ Ｓｈａｎｘｉ
５６ 木贼镰孢菌 Ｆ. ｅｑｕｉｓｅｔｉ 番茄 Ｌ. ｅｓｃｕｌｅｎｔｕｍ 山西太谷 Ｔａｉｇｕꎬ Ｓｈａｎｘｉ
５７ 木贼镰孢菌 Ｆ. ｅｑｕｉｓｅｔｉ 番茄 Ｌ. ｅｓｃｕｌｅｎｔｕｍ 山西太谷 Ｔａｉｇｕꎬ Ｓｈａｎｘｉ
５８ 木贼镰孢菌 Ｆ. ｅｑｕｉｓｅｔｉ 棉花 Ｇ. ｈｉｒｓｕｔｕｍ 山西运城 Ｙｕｎｃｈｅｎｇꎬ Ｓｈａｎｘｉ
５９ 禾谷镰孢菌 Ｆ. ｇｒａｍｉｎｅａｒｕｍ 棉花 Ｇ. ｈｉｒｓｕｔｕｍ 山西太谷 Ｔａｉｇｕꎬ Ｓｈａｎｘｉ
６０ 禾谷镰孢菌 Ｆ. ｇｒａｍｉｎｅａｒｕｍ 西瓜 Ｃｉｔｒｕｌｌｕｓ ｌａｎａｔｕｓ 山西太谷 Ｔａｉｇｕꎬ Ｓｈａｎｘｉ
６１ 禾谷镰孢菌 Ｆ. ｇｒａｍｉｎｅａｒｕｍ 黄瓜 Ｃ. ｓａｔｉｖｕｓ 山西临汾 Ｌｉｎｆｅｎꎬ Ｓｈａｎｘｉ
６２ 禾谷镰孢菌 Ｆ. ｇｒａｍｉｎｅａｒｕｍ 黄瓜 Ｃ. ｓａｔｉｖｕｓ 山西太原 Ｔａｉｙｕａｎꎬ Ｓｈａｎｘｉ
６３ 禾谷镰孢菌 Ｆ. ｇｒａｍｉｎｅａｒｕｍ 番茄 Ｌ. ｅｓｃｕｌｅｎｔｕｍ 山西临汾 Ｌｉｎｆｅｎꎬ Ｓｈａｎｘｉ
　 　 试剂及仪器:ＲＮａｓｅＡ、ＤＮＡ ｍａｒｋｅｒ、 Ｔａｑ ＤＮＡ
Ｐｏｌｙｍｅｒａｓｅ、ｄＮＴＰ购于生工生物工程(上海)股份有
限公司ꎻ其余试剂均为国产分析纯ꎮ 供试引物由北
京赛百盛基因技术有限公司合成ꎮ Ｔ￣１ＰＣＲ 基因扩
增仪ꎬ德国 Ｂｉｏｍｅｔｒａ 公司ꎻＧｅｌ ＤｏｃＴＭ ＸＲ ＋凝胶成像
分析系统ꎬ美国 ＢＩＯＲＡＤ 公司ꎻ３￣１８ｋ 高速冷冻离心
机ꎬ德国 Ｓｉｇｍａ 公司ꎻＤＹＹ￣１１ 型电脑三恒多用电泳
仪ꎬ北京市六一仪器厂ꎮ
１􀆰 ２ 方法
１􀆰 ２􀆰 １ 镰孢菌的菌丝培养与 ＤＮＡ提取
将活化后的菌株接种到含有 ＮａＮＯ３、Ｋ２ＨＰＯ４、
ＫＣｌ、ＭｇＳＯ４、ＦｅＳＯ４ 与蔗糖的查彼培养液中ꎬ２５℃恒
温振荡培养 ５ ｄ后ꎬ抽滤菌丝ꎬ再用无菌去离子水冲
洗 ３ 次ꎬ烘干ꎬ置于 － ７０℃冰箱中保存备用ꎮ 参考
Ｌｏｄｈｉ ｅｔ ａｌ. (１９９４)的方法ꎬ采用 ＳＤＳ￣ＣＴＡＢ 法抽提
供试菌株基因组 ＤＮＡꎮ 先用 ２％ ＳＤＳ(ｗ / ｖ)缓冲液
将液氮处理后的菌株粉末于 ６０℃水浴 １ ｈꎬ然后加
入 １０％ (ｗ / ｖ)的 ＣＴＡＢ裂解液ꎬ６５℃水浴 １０ ｍｉｎꎬ用
等体积的氯仿异戊醇(２４ ∶ １)重复 ２ 次抽提基因组
ＤＮＡꎮ 以标准 ＤＮＡ分子量作对照ꎬ用 ０􀆰 ８％的琼脂
糖凝胶电泳检测镰孢菌基因组 ＤＮＡꎬ并用紫外吸收
法检测 ＤＮＡ浓度ꎬ然后将镰孢菌 ＤＮＡ 浓度稀释成
２０ ｎｇ / μＬꎬ存于 － ２０℃冰箱中备用ꎮ
１􀆰 ２􀆰 ２ 镰孢菌 ＳＳＲ￣ＰＣＲ扩增与产物检测
参考李新凤等(２０１４)方法ꎬ基于尖镰孢菌的
ＥＳＴ序列进行引物的设计、合成与筛选ꎬ利用筛选出
的、在尖镰孢菌种内具有多态性的 １８ 对 ＳＳＲ 引物ꎬ
对供试 ３８ 株尖镰孢菌和 ５ 种 ２５ 株近缘镰孢菌进行
ＳＳＲ￣ＰＣＲ扩增ꎮ 然后用 ６％ 非变性聚丙烯酰胺凝
胶ꎬ在 １８０ Ｖ电压下电泳 ９０ ｍｉｎꎬ分离扩增产物ꎬ以
　 　 　
检测引物的扩增结果ꎮ 电泳结束后ꎬ参考 Ｂａｓｓａｍ ＆
Ｃａｅｔａｎｏ￣Ａｎｏｌｌéｓ(１９９３)方法进行银染显色ꎬ并记录
所有引物对供试镰孢菌的扩增结果ꎮ ２０ μＬ ＳＳＲ￣
ＰＣＲ反应体系:１􀆰 ０ Ｕ Ｔａｑ ＤＮＡ聚合酶、２􀆰 ０ ｍｍｏｌ / Ｌ
ＭｇＣｌ２、０􀆰 ２ ｍｍｏｌ / Ｌ ４ × ｄＮＴＰ、上下游引物各 ０􀆰 ２５
μｍｏｌ / Ｌ、２０ ｎｇ模板 ＤＮＡꎮ ＰＣＲ反应程序:９４℃预变
性 ４ ｍｉｎꎬ９４℃变性 ４０ ｓꎬ５５ ~ ６２℃ (随引物不同而
异)退火 ４０ ｓꎬ７２℃延伸 ４０ ｓꎬ共 ３５ 个循环ꎬ最后
７２℃延伸 ７ ｍｉｎꎬ扩增 ＰＣＲ产物保存在 ４℃冰箱内ꎮ
１􀆰 ２􀆰 ３ 尖镰孢菌 ＥＳＴ￣ＳＳＲ遗传多样性分析
对供试 ３８ 株尖镰孢菌的电泳图谱进行分析ꎬ每
条谱带代表引物在某样品 ＤＮＡ中的扩增片段ꎬ记为
１ 个分子标记ꎮ 将 ＰＣＲ 扩增的 ＤＮＡ 条带转换成二
进制数据ꎬ有带的记为“１”ꎬ无带的记为“０”ꎮ 利用
ＮＴＳＹＳｐｃ ２􀆰 １０ｅ软件的 Ｑｕａｌｉｔａｔｉｖｅ ｄａｔｅ 程序计算各
菌株间的遗传相似系数ꎬ并按寄主来源将尖镰孢菌
分为 ６ 个群体ꎬ即豆科作物群体、葫芦科作物群体、
茄科作物群体、锦葵科作物群体、亚麻科作物群体和
兰科植物群体ꎬ分析不同寄主群体内及群体间的遗
传相似性ꎮ 同时基于各菌株间的遗传相似系数ꎬ通
过 ＳＨＡＮ程序和 ＵＰＧＭＡ 方法对 ３８ 份材料进行聚
类分析ꎬ利用 Ｔｒｅｅ ｐｌｏｔ模块生成聚类图ꎮ
１􀆰 ２􀆰 ４ 尖镰孢菌 ＥＳＴ￣ＳＳＲ引物对近缘镰孢菌的通用性
分析 １８ 对尖镰孢菌 ＥＳＴ￣ＳＳＲ 引物分别在轮
枝镰孢菌、腐皮镰孢菌、半裸镰孢菌、木贼镰孢菌
与禾谷镰孢菌中的扩增情况ꎬ并统计通用率与多
态率ꎮ ＥＳＴ￣ＳＳＲ引物通用率 Ｇ ｅ ＝ ｅ / ｎ × １００％ ꎬｅ 表
示有效扩增引物对数ꎬｎ 表示供试引物对数ꎻＥＳＴ￣
ＳＳＲ引物多态率 Ｐｐ ＝ ｐ / ｎ × １００％ ꎬｐ 表示多态性引
物对数ꎮ
０８７ 植　 物　 保　 护　 学　 报 ４２ 卷
２ 结果与分析
２􀆰 １ 供试 ３８ 株尖镰孢菌 ＳＳＲ￣ＰＣＲ扩增结果
经电泳检测ꎬ供试 ６０ 株镰孢菌均可在 ２０ ｋｂ 左
右出现一条清晰且无明显拖尾的条带ꎬ说明 ＳＤＳ￣
ＣＴＡＢ法适合于镰孢菌基因组 ＤＮＡ的提取纯化ꎮ
利用 １８ 对 ＥＳＴ￣ＳＳＲ引物对寄主和地理来源不
同的 ３８ 株尖镰孢菌菌株进行 ＳＳＲ￣ＰＣＲ 扩增ꎬ发现
当退火温度为 ５４ ~ ６０℃时ꎬ引物均具有丰富的扩增
多态性ꎬ共扩增出 ８１ 个大小不同的产物片段ꎬ其中
多态性条带为 ７５ 条ꎬ占总扩增条带数的 ９２􀆰 ６％ ꎬ平
均每对引物可扩增 ４􀆰 ２ 条ꎬ且有 １２ 对引物的扩增多
态性比率达到了 １００％ (表 ２)ꎮ 不同引物扩增条带
数不同ꎬ为 ２ ~ ７ 条ꎬ其中引物 ＪＢ２５ 扩增出的条带数
最多ꎬ为 ７ 条ꎻ引物 ＪＢ２８ 与 ＪＢ４６ 扩增出的条带数最
少ꎬ为 ２ 条ꎮ
表 ２ １８ 对 ＥＳＴ￣ＳＳＲ引物对 ３８ 株尖镰孢菌的扩增结果
Ｔａｂｌｅ ２ Ａｍｐｌｉｆｉｃａｔｉｏｎ ｒｅｓｕｌｔｓ ｏｆ ３８ Ｆｕｓａｒｉｕｍ ｏｘｙｓｐｏｒｕｍ ｓｔｒａｉｎｓ ｗｉｔｈ １８ ｗｏｒｋｉｎｇ ＥＳＴ￣ＳＳＲ ｐｒｉｍｅｒｓ
引物
Ｐｒｉｍｅｒ
引物序列(５′￣３′)
Ｐｒｉｍｅｒ ｓｅｑｕｅｎｃｅ
(５′￣３′)
重复基元
Ｒｅｐｅａｔ
ｍｏｔｉｆ
退火温度
Ａｎｎｅａｌｉｎｇ
ｔｅｍｐｅｒａｔｕｒｅ
(℃)
预扩增产物
Ｅｘｐｅｃｔｅｄ
ｐｒｏｄｕｃｔ
(ｂｐ)
扩增条带
Ｎｏ. ｏｆ
ｂａｎｄｓ
多态性条带
Ｎｏ. ｏｆ
ｐｏｌｙｍｏｒｐｈｉｃ
ｂａｎｄｓ
多态率
Ｐｅｒｃｅｎｔａｇｅ ｏｆ
ｐｏｌｙｍｏｒｐｈｉｓｍ
(％ )
ＪＢ１２ Ｆ: ＣＧＧＡＴＧＧＴＧＴＴＴＣＴＧＴＧＣ
Ｒ: ＣＣＡＡＣＣＣＧＡＡＣＣＣＴＡＣＴＴ
(ＡＴ)９ ５７ ３２８ ５ ５ １００􀆰 ０
ＪＢ１４ Ｆ: ＴＴＣＣＴＴＴＣＣＣＴＣＣＴＧＴＴＴ
Ｒ: ＴＣＣＴＴＣＣＴＧＧＣＴＣＡＡＴＣＴ
(ＡＴＡＣ)５ ５６ ３９１ ３ ２ ６６􀆰 ７
ＪＢ１６ Ｆ: ＣＧＣＡＣＣＴＣＣＡＣＣＡＣＣＡＡＴ
Ｒ: ＴＴＣＣＧＡＧＣＡＡＡＣＧＣＣＡＡＴ
(ＡＣ)１５ ６０ ３２９ ５ ５ １００􀆰 ０
ＪＢ１７ Ｆ: ＧＡＧＧＧＡＣＡＡＧＴＣＴＴＡＣＡＴＴＣ
Ｒ: ＧＡＣＡＡＡＡＣＴＣＧＣＴＡＴＴＣＧ
(ＡＣ)１５ ５４ ３９７ ５ ４ ８０􀆰 ０
ＪＢ１８ Ｆ: ＴＴＣＣＴＴＴＣＣＣＴＣＣＴＧＴＴＴ
Ｒ: ＡＣＴＣＣＴＴＣＣＴＧＧＣＴＣＡＡＴ
(ＡＴＡＣ)５ ５４ ３９１ ４ ４ １００􀆰 ０
ＪＢ２０ Ｆ: ＣＧＴＡＴＴＧＣＣＡＧＧＴＡＧＧＴＴ
Ｒ: ＧＧＴＣＴＴＡＧＧＡＧＣＡＴＴＧＴＴＴ
(ＴＴＣ)９ ５５ ２５２ ４ ４ １００􀆰 ０
ＪＢ２４ Ｆ: ＣＣＴＧＴＣＧＣＡＡＴＧＧＧＴＡＴＣ
Ｒ: ＡＧＴＧＴＣＴＣＣＴＴＧＧＧＧＴＣＧ
(ＧＡＧ)６ ５９ ２１８ ５ ５ １００􀆰 ０
ＪＢ２５ Ｆ: ＧＣＡＣＣＴＣＣＡＣＣＡＣＣＡＡＴＧ
Ｒ: ＡＡＡＣＴＣＧＣＴＣＴＴＣＧＣＴＣＣ
(ＡＣ)１５ ５９ ２７４ ７ ７ １００􀆰 ０
ＪＢ２７ Ｆ: ＣＧＣＡＣＣＴＣＣＡＣＣＡＣＣＡＡＴ
Ｒ: ＴＴＣＣＧＡＧＣＡＧＡＣＧＣＣＡＡＴ
(ＡＣ)１５ ６０ ３２９ ６ ６ １００􀆰 ０
ＪＢ２８ Ｆ: ＣＧＧＧＧＴＣＡＡＣＴＣＣＡＡＡＡＴ
Ｒ: ＣＧＣＣＡＡＴＣＧＣＡＡＧＴＡＡＴＧ
(ＡＣ)１５ ５５ ２５２ ２ １ ５０􀆰 ０
ＪＢ３１ Ｆ: ＣＧＧＡＴＧＧＴＧＴＴＴＣＴＧＴＧＣ
Ｒ: ＣＣＡＡＣＣＣＧＡＡＣＣＣＴＡＣＴＴ
(ＡＴ)９ ５８ ３２６ ３ ２ ６６􀆰 ６
ＪＢ３５ Ｆ: ＴＡＴＧＣＴＧＧＡＴＧＧＴＧＡＡＧＧ
Ｒ:ＧＣＴＡＴＧＣＧＡＧＧＡＴＴＴＴＧＴ
(ＡＣＡＡ)５ ５５ １０５ ５ ４ ８０􀆰 ０
ＪＢ００７ Ｆ: ＣＧＧＡＴＧＧＴＧＴＴＴＣＴＧＴＧＣ
Ｒ: ＣＣＡＡＣＣＣＧＡＡＣＣＣＴＡＣＴＴ
(ＡＴ)９ ６０ ２７４ ７ ７ １００􀆰 ０
ＪＢ０１６ Ｆ: ＴＣＣＡＣＣＡＣＣＡＡＴＧＡＣＡＡＡＣ
Ｒ: ＡＡＣＴＣＣＧＴＧＡＧＡＣＧＡＡＡＣＴ
(ＡＣ)１５ ５６ ２８３ ６ ６ １００􀆰 ０
ＪＢ３９ Ｆ: ＴＴＣＣＴＴＴＣＣＣＴＣＣＴＧＴＴＴ
Ｒ: ＡＣＴＣＣＴＴＣＣＴＧＧＣＴＣＡＡＴ
(ＡＴＡＣ) ５ ５７ ３２９ ４ ４ １００􀆰 ０
ＪＢ４１ Ｆ: ＴＡＴＧＣＴＧＧＡＴＧＧＴＧＡＡＧＧ
Ｒ: ＧＣＴＡＴＧＣＧＡＧＧＡＴＴＴＴＧＴ
(ＡＣＡＡ)５ ５８ ２７８ ４ ４ １００􀆰 ０
ＪＢ４６ Ｆ: ＣＡＡＡＣＡＡＣＣＣＴＣＴＡＴＧＣＣ
Ｒ: ＡＣＴＣＣＧＴＧＡＧＡＣＧＡＡＡＣＴ
(ＡＣ)１５ ５７ ２１８ ２ ２ １００􀆰 ０
ＪＢ４９ Ｆ: ＣＣＡＧＣＡＡＡＣＡＡＴＡＡＧＡＣＣ
Ｒ: ＡＣＴＣＣＣＧＴＧＡＧＡＣＡＡＴＡＣ
(ＡＣ)１５ ５４ ３２９ ４ ３ ７５􀆰 ０
合计 Ｔｏｔａｌ ８１ ７５ ９２􀆰 ６
２􀆰 ２ 供试 ３８ 株尖镰孢菌的遗传相似性分析
３８ 株尖镰孢菌菌株间的遗传相似系数介于
０􀆰 ５６５ ~ ０􀆰 ９４６ 之间ꎬ平均为 ０􀆰 ７２１ꎮ 分离自山西太
谷黄瓜上的 １０ 号与 １２ 号菌株间的相似系数最大ꎬ
其次是太谷菜豆上的 ５ 号与 ６ 号菌株及河北兰花上
的 ３２ 号和 ３３ 号菌株ꎬ遗传相似系数均为 ０􀆰 ９２５ꎮ 而
１８７５ 期 李新凤等: 尖镰孢菌 ＥＳＴ￣ＳＳＲ遗传多样性分析及通用性评价
分离自襄汾棉花上的 ２７ 号与大同胡麻上的 ２９ 号菌
株ꎬ及太原黄瓜上的 １１ 号菌株间的相似系数最小ꎮ
分离自不同科寄主植物的菌株群体间及群体内
遗传相似性分析结果表明ꎬ同科寄主的菌株群体内
平均遗传相似系数以葫芦科最大ꎬ锦葵科最小ꎬ依次
为葫芦科 >兰科 >豆科 >亚麻科 >茄科 >锦葵科
(表 ３)ꎮ 不同科寄主的菌株类群间平均遗传相似系
数在 ０􀆰 ６２０ ~ ０􀆰 ７４７ 之间ꎬ葫芦科与茄科类群间的最
大ꎬ同源性最高ꎻ而葫芦科与锦葵科类群间的平均遗
传相似系数最小ꎬ亲缘关系最远ꎮ 与不同科寄主来
源的菌株相比ꎬ来源于同科寄主植物的菌株具有更
高的遗传同源性ꎬ亲缘关系更近ꎮ
表 ３ 不同科寄主来源尖镰孢菌的平均遗传相似系数
Ｔａｂｌｅ ３ Ａｖｅｒａｇｅ ｇｅｎｅｔｉｃ ｓｉｍｉｌａｒｉｔｙ ｃｏｅｆｆｉｃｉｅｎｔｓ ａｍｏｎｇ ｔｈｅ Ｆｕｓａｒｉｕｍ ｏｘｙｓｐｏｒｕｍ ｐｏｐｕｌａｔｉｏｎｓ ｆｒｏｍ ｄｉｆｆｅｒｅｎｔ ｈｏｓｔｓ
寄主
Ｈｏｓｔ ｐｌａｎｔ
豆科
Ｌｅｇｕｍｉｎｏｓａｅ
锦葵科
Ｍａｌｖａｃｅａｅ
葫芦科
Ｃｕｃｕｒｂｉｔａｃｅａｅ
茄科
Ｓｏｌａｎａｃｅａｅ
亚麻科
Ｌｉｎａｃｅａｅ
兰科
Ｏｒｃｈｉｄａｃｅａｅ
豆科 Ｌｅｇｕｍｉｎｏｓａｅ ０􀆰 ８２３
锦葵科 Ｍａｌｖａｃｅａｅ ０􀆰 ７１９ ０􀆰 ６７８
葫芦科 Ｃｕｃｕｒｂｉｔａｃｅａｅ ０􀆰 ６５８ ０􀆰 ６２０ ０􀆰 ８４２
茄科 Ｓｏｌａｎａｃｅａｅ ０􀆰 ６９６ ０􀆰 ６４５ ０􀆰 ７４７ ０􀆰 ７７７
亚麻科 Ｌｉｎａｃｅａｅ ０􀆰 ６７１ ０􀆰 ６５５ ０􀆰 ６９７ ０􀆰 ７４２ ０􀆰 ７９１
兰科 Ｏｒｃｈｉｄａｃｅａｅ ０􀆰 ７０５ ０􀆰 ６９９ ０􀆰 ７２１ ０􀆰 ７４６ ０􀆰 ６５８ ０􀆰 ８２５
图 １ 供试 ３８ 株尖镰孢菌的 ＳＳＲ聚类分析图
Ｆｉｇ. １ Ｄｅｎｄｒｏｇｒａｍ ｏｆ ３８ Ｆｕｓａｒｉｕｍ ｏｘｙｓｐｏｒｕｍ ｓｔｒａｉｎｓ ｂａｓｅｄ ｏｎ ＳＳＲ￣ＰＣＲ　
２􀆰 ３ 供试 ３８ 株尖镰孢菌的聚类分析
当遗传相似系数为 ０􀆰 ７５６ 时ꎬ３８ 株供试尖镰
孢菌可分成 ７ 个 ＳＳＲ类群(图 １)ꎮ 第Ⅰ类包括所
有分离自豆科作物的菌株及分离自番茄和棉花的
１８ 号与 ２８ 号菌株ꎻ第Ⅱ类为分离自锦葵科棉花的
菌株ꎻ第Ⅲ类包括所有分离自葫芦科作物的菌株ꎻ
第Ⅳ类均分离自茄科作物ꎻ第Ⅴ类包括所有分离
自兰科植物的菌株ꎻ分离自亚麻科作物胡麻(２９
号)和芝麻(３０ 与 ３１ 号)的菌株分别聚在第Ⅵ和
第Ⅶ类群ꎮ 可见ꎬ除 １８、２８ 和 ２９ 号菌株外ꎬ其余
２８７ 植　 物　 保　 护　 学　 报 ４２ 卷
３５ 株菌均按照不同科寄主作物聚为不同的类群ꎮ
第Ⅱ、Ⅲ、Ⅵ和Ⅶ类群分别为尖镰孢萎蔫专化型、
尖镰孢黄瓜专化型、尖镰孢亚麻专化型和尖镰孢
芝麻专化型菌株ꎮ
　 　 当遗传相似系数为 ０􀆰 ８９７ 时ꎬ第Ⅰ类群中分离
自豆科作物的菌株又分为 ２ 个亚类ꎬ１ 个包括 ３ 株
大豆专化型菌株(１、２ 和 ４ 号)和 １ 株蚕豆专化型菌
株(７ 号)ꎬ另 １ 个包括 ２ 株蚕豆专化型菌株(５ 号和
６ 号)与 １ 株大豆专化型菌株(３ 号)ꎮ １８ 号和 ２８ 号
菌株各自为一类ꎮ 当遗传相似系数为 ０􀆰 ７８２ 时ꎬ第
Ⅳ类群又可以分为 ４ 个亚类ꎬ番茄和辣椒专化型菌
株各自聚为 １ 亚类ꎬ茄子专化型菌株聚为 ２ 个亚类ꎮ
当遗传相似系数为 ０􀆰 ９４６ 时ꎬ供试的 ３８ 个菌株可被
全部区分开ꎮ 可见ꎬ多数寄主专化型相同的菌株聚
在同一 ＳＳＲ类群或亚类群ꎮ
此外ꎬ同一 ＳＳＲ 类群或亚类群中包含不同地
理来源的菌株ꎬ同一地理来源的菌株又分布在不
同的 ＳＳＲ类群和亚类群中ꎬ且同一寄主专化型类
群或亚类群中ꎬ也并非地理来源相同的菌株先聚
在一起ꎮ 如在第Ⅲ类 ＳＳＲ类群(黄瓜专化型类群)
中ꎬ分离自山西中部地区的 １０ 号和 １２ 号菌株先与
分离自山西南部地区的 ８、９ 及 １４ 号菌株聚在一起
后ꎬ再与同是中部地区的 １１ 号菌株聚在一起ꎮ 说
明 ＳＳＲ 类群的划分与菌株的地理来源没有相
关性ꎮ
２􀆰 ４ 尖镰孢菌 ＥＳＴ￣ＳＳＲ引物对近缘镰孢菌的通用性
供试 １８ 对引物在 ５ 种近缘镰孢菌中均具有较
高的通用率ꎬ能够在轮枝镰孢菌、腐皮镰孢菌、半裸
镰孢菌、木贼镰孢菌和禾谷镰孢菌中有效扩增的引
物对数分别为 １４、１３、１２、１１ 和 １１ 对ꎬ通用性比率依
次为 ７７􀆰 ８％ 、７２􀆰 ２％ 、６６􀆰 ７％ 、６１􀆰 １％和 ６１􀆰 １％ ꎬ均
大于 ６０％ ꎬ其中具有多态性的引物对数分别为 ９、９、
８、４ 和 ７ 对ꎬ多态率分别为 ５０􀆰 ０％ 、５０􀆰 ０％ 、４４􀆰 ４％ 、
２２􀆰 ２％和 ３８􀆰 ９％ ꎮ 供试 １８ 对引物在 ５ 种近缘镰孢
菌种中的平均通用率与平均多态率分别为 ６３􀆰 ３％
和 ４１􀆰 １％ (表 ４)ꎮ 在轮枝镰孢菌与腐皮镰孢菌中
通用的引物数及比率均高于另外 ３ 种镰孢菌ꎮ 可
见ꎬ用于设计镰孢菌 ＳＳＲ引物的尖镰孢菌 ＥＳＴ 序列
在轮枝镰孢菌和腐皮镰孢菌中的保守性高于另外 ３
种镰孢菌ꎮ
表 ４ 尖镰孢菌 ＥＳＴ￣ＳＳＲ引物在 ５ 种近缘镰孢菌中的通用性
Ｔａｂｌｅ ４ Ｔｒａｎｓｆｅｒａｂｉｌｉｔｙ ａｎｄ ｐｏｌｙｍｏｒｐｈｉｓｍ ａｎａｌｙｓｉｓ ｏｆ Ｆｕｓａｒｉｕｍ ｏｘｙｓｐｏｒｕｍ ＥＳＴ￣ＳＳＲ ｉｎ ｆｉｖｅ Ｆｕｓａｒｉｕｍ ｓｐｅｃｉｅｓ
镰孢菌种
Ｓｐｅｃｉｅｓ
引物总数
Ｎｕｍｂｅｒ ｏｆ
ｐｒｉｍｅｒｓ
通用引物 Ｔｒａｎｓｆｅｒａｂｌｅ ｐｒｉｍｅｒ 多态性引物 Ｐｏｌｙｍｏｒｐｈｉｃ ｐｒｉｍｅｒ
对数 (对)
Ｎｕｍｂｅｒ
比率 (％ )
Ｒａｔｉｏ
对数 (对)
Ｎｕｍｂｅｒ
比率 (％ )
Ｒａｔｉｏ
轮枝镰孢菌 Ｆ. ｖｅｒｔｉｃｉｌｌｉｏｄｉｅｓ １８ １４ ７７􀆰 ８ ９ ５０􀆰 ０
腐皮镰孢菌 Ｆ. ｓｏｌａｎｉ １８ １３ ７２􀆰 ２ ９ ５０􀆰 ０
半裸镰孢菌 Ｆ. ｓｅｍｉｔｅｃｔｕｍ １８ １２ ６６􀆰 ７ ８ ４４􀆰 ４
木贼镰孢菌 Ｆ. ｅｑｕｉｓｅｔｉ １８ １１ ６１􀆰 １ ４ ２２􀆰 ２
禾谷镰孢菌 Ｆ. ｇｒａｍｉｎｅａｒｕｍ １８ １１ ６１􀆰 １ ７ ３８􀆰 ９
平均数 Ａｖｅｒａｇｅ １８ １２ ６３􀆰 ３ ７ ４１􀆰 １
　 　 引物 ＪＢ２０ 在腐皮镰孢菌、木贼镰孢菌和禾谷镰
孢菌中无扩增产物ꎻ引物 ＪＢ２８ 虽能有效扩增ꎬ但无
多态性ꎻ引物 ＪＢ２５ 除在腐皮镰孢菌中表现为多态性
外ꎬ在其余 ４ 种近缘镰孢菌中均无多态性ꎻ引物
ＪＢ３９ 在 ５ 种近缘镰孢菌中都有多态性扩增产物(图
２)ꎮ 在 ５ 种近缘镰孢菌中均能有效扩增的引物有
１０ 对ꎬ至少在 １ 种中能有扩增产物的引物有 １５ 对ꎬ
分别占供试引物的 ５５􀆰 ６％和 ８３􀆰 ３％ꎮ 在 ５ 种近缘镰
孢菌中均显示多态性的引物仅有 ２ 对ꎬ多态率为
１１􀆰 １％ꎬ占在 ５种近缘镰孢菌中可通用引物的 ２０％ꎮ
３ 讨论
ＡＦＬＰ、ＲＦＬＰ、ＲＡＰＤ与 ＩＳＳＲ等分子标记技术均
可用于检测尖镰孢菌的遗传多态性ꎬ但都存在一定
的缺陷ꎮ ＡＦＬＰ 技术不仅步骤复杂且费用高(Ｇｒｏｅ￣
ｎｅｗａｌｄ ｅｔ ａｌ. ꎬ２００６ꎻ张艳菊等ꎬ２０１１)ꎻＲＦＬＰ 技术需
要大量的 ＤＮＡ 且工作量大 (张宝俊等ꎬ ２００７ )ꎻ
ＲＡＰＤ技术具有可重复性低的缺点(Ｒｏｄｒíｇｕｅｚ￣Ｍｏｌｉ￣
ｎａ ｅｔ ａｌ. ꎬ２０１３)ꎮ 此外ꎬ这几种标记方法均有在基
因组上不能定位ꎬ以及数据少不能在公共数据库中
用来和其它序列比较的缺点ꎮ 而 ＥＳＴ￣ＳＳＲ 来源于
转录组序列ꎬ代表一个完整基因的一部分ꎬ可以直接
获得基因表达信息ꎬ为功能基因提供“绝对”标记ꎮ
因此ꎬ该标记技术不仅用于物种遗传多样性分析
(蔺宇等ꎬ２００８ꎻ丁俊杰等ꎬ２０１２ꎻ梁照文等ꎬ２０１５)ꎬ
还可用于整合遗传图谱、定位候选基因及比较基因
３８７５ 期 李新凤等: 尖镰孢菌 ＥＳＴ￣ＳＳＲ遗传多样性分析及通用性评价
图 ２ 部分尖镰孢菌 ＥＳＴ￣ＳＳＲ引物在 ５ 种近缘镰孢菌中的扩增结果
Ｆｉｇ. ２ Ａｍｐｌｉｆｉｃａｔｉｏｎ ｏｆ ｓｏｍｅ Ｆｕｓａｒｉｕｍ ｏｘｙｓｐｏｒｕｍ ＥＳＴ￣ＳＳＲ ｍａｒｋｅｒｓ ｉｎ ｆｉｖｅ Ｆｕｓａｒｉｕｍ ｓｐｅｃｉｅｓ
Ｍ: Ｍａｒｋｅｒꎻ ３９ ~ ４３: 轮枝镰孢菌ꎻ ４４ ~ ４８: 腐皮镰孢菌ꎻ ４９ ~ ５３: 半裸镰孢菌ꎻ ５４ ~
５８: 木贼镰孢菌: ５９ ~ ６３: 禾谷镰孢菌ꎮ Ｍ: Ｍａｒｋｅｒꎻ ３９ － ４３: Ｆ. ｖｅｒｔｉｃｉｌｌｉｏｄｉｅｓꎻ ４４ － ４８: Ｆ.
ｓｏｌａｎｉꎻ ４９ － ５３: Ｆ. ｓｅｍｉｔｅｃｔｕｍꎻ ５４ － ５８: Ｆ. ｅｑｕｉｓｅｔｉꎻ ５９ － ６３: Ｆ. ｇｒａｍｉｎｅａｒｕｍ.
　
组学等研究(Ｋａｙｅ ｅｔ ａｌ. ꎬ２００３ꎻ潘海涛等ꎬ２０１０)ꎮ
但有报道显示该标记技术检测到的多态性低于基因
组 ＳＳＲ 标记 ( Ｅｕｊａｙｌ ｅｔ ａｌ. ꎬ ２００１ )ꎮ Ｓｃｏｔｔ ｅｔ ａｌ.
(２０００)研究表明ꎬ多态性的高低取决于筛选引物的
材料ꎬ且 ＥＳＴ￣ＳＳＲ 中存在少量多态性较高的引物ꎮ
本研究利用 １８ 对 ＥＳＴ￣ＳＳＲ引物在 ３８ 株尖镰孢菌中
共检测到 ７５ 条差异条带ꎬ多态性比例为 ９２􀆰 ６％ ꎬ种
内各菌株两两之间的遗传相似系数介于 ０􀆰 ５６５ ~
０􀆰 ９４６ 之间ꎬ平均为 ０􀆰 ７２１ꎬ显示了较高的遗传多样
性ꎮ Ｍａｈｆｏｏｚ ｅｔ ａｌ. (２０１２)基于尖镰孢菌黄瓜专化型
与西瓜专化型 ＥＳＴ序列开发了 ４ 对多态率为 １００％
的 ＳＳＲ引物ꎬ也表明尖镰孢菌 ＥＳＴ￣ＳＳＲ 标记具有丰
富的多态性ꎬ可用于检测尖镰孢菌种内各菌株间的
遗传多样性ꎻ这与李新凤等(２０１４)进行尖镰孢菌
ＥＳＴ￣ＳＳＲ遗传多样性分析所得结果一致ꎮ 可见ꎬ基
于尖镰孢菌 ＥＳＴ序列开发 ＥＳＴ￣ＳＳＲ标记是可行的ꎬ
本研究开发的尖镰孢菌 ＥＳＴ￣ＳＳＲ 标记可用于尖镰
孢菌种内遗传多样性分析ꎮ 同时也说明尖镰孢菌基
因组 ＥＳＴ￣ＳＳＲ 位点变异频率较高ꎬ遗传多样性
丰富ꎮ
４８７ 植　 物　 保　 护　 学　 报 ４２ 卷
目前有关尖镰孢菌遗传多样性分析的报道很
多ꎬ但多数都集中于同一专化型内菌株的研究ꎬ尚未
见来源于不同科寄主植物的同种菌株的遗传多样性
研究ꎮ 本研究结果表明ꎬ来源于同科寄主植物的菌
株间比来源于不同科寄主植物的菌株间的遗传相似
性高ꎬ亲缘关系更近ꎬ说明分离自各科寄主植物类群
间的菌株具有较明显的遗传分化ꎮ 关于寄主来源不
同的菌株类群间的遗传分化水平和遗传相似系数之
间的对应关系还有待进一步深入研究ꎮ 此外ꎬ本研
究中 ６ 个寄主群体中各供试菌株群体内的遗传分化
程度明显不同ꎬ其中锦葵科遗传分化最大ꎬ葫芦科分
化最小ꎬ这可能是不同类群菌株 ＤＮＡ￣ＳＳＲ的真实反
映ꎬ也可能与不同科寄主植物群体内供试菌株数量
差异有关ꎮ
本研究供试的 ３８ 个菌株中ꎬ有 ３５ 株根据不同
科寄主植物来源分别聚为 ６ 个 ＳＳＲ 类群ꎬ且大多数
寄主专化型相同的菌株聚在同一 ＳＳＲ 类群或亚类
群ꎮ 表明供试尖镰孢菌 ＳＳＲ 类群的划分与供试菌
株的寄主来源及寄主专化型具有一定的相关性ꎮ 不
同专化型尖镰孢菌的 ＥＳＴ￣ＳＳＲ 区域存在较为明显
的遗传分化ꎮ 李新凤等(２０１４)利用自行开发的 １４
对尖镰孢菌 ＥＳＴ￣ＳＳＲ引物对 ２３ 株尖镰孢菌进行遗
传多样性分析ꎬ也得出了同样的结果ꎻＭａｈｆｏｏｚ ｅｔ ａｌ.
(２０１２)利用 ９ 对基于尖镰孢菌 ＤＮＡ 编码区域设计
的 ＳＳＲ引物ꎬ对分属于 ５ 个尖镰孢菌专化型的 ２４ 株
菌株进行聚类分析ꎬ结果只有西瓜专化型(Ｆｏｍ)菌
株单独聚为了 １ 个亚类群ꎮ 这可能与试验所用引物
来源及数量多少有关ꎬ理论上讲ꎬ多态性引物及供试
菌株数量越多ꎬ试验结果越能反映不同菌株基因组
ＤＮＡ的序列差异ꎮ
１８ 对多态性 ＥＳＴ￣ＳＳＲ 引物在 ５ 种近缘镰孢菌
种中的通用率均大于 ６０％ ꎬ能够在 ５ 种近缘镰孢菌
中均通用的引物有 １０ 对ꎬ通用率为 ５５􀆰 ６％ ꎬ其中表
现多态性的有 ２ 对ꎬ多态率为 １１􀆰 １％ ꎮ 说明基于尖
镰孢菌 ＥＳＴ 序列建立的 ＳＳＲ 标记对尖镰孢菌近缘
种具有较高的通用性ꎬ基于尖镰孢菌 ＥＳＴ 序列开发
镰孢菌的通用 ＥＳＴ￣ＳＳＲ 标记是可行的ꎬ但多态率比
较低ꎮ Ｋｕｍａｒ ｅｔ ａｌ. (２０１３)在检测尖镰孢菌 ＳＳＲ 标
记在潮湿镰孢菌 Ｆ. ｕｄｕｍ中的通用性时发现ꎬ３０ 对
尖镰孢菌 ＥＳＴ￣ＳＳＲ引物中ꎬ７０％能够在潮湿镰孢菌
中进行有效扩增ꎬ其中 ３ 对为多态性引物ꎬ与本研究
结果基本一致ꎮ 与来源于基因组的 ＳＳＲ 相比ꎬＥＳＴ￣
ＳＳＲ标记来源于相对保守的转录组区域ꎬ所以比基
因组 ＳＳＲ 标记多态性低一些ꎬ但具有更高的通用
性ꎮ 这就为有些特定物种或缺乏相关序列的物种提
供了有效和可用的标记资源ꎬ为遗传图谱的绘制节
约了成本ꎬ也为比较基因组学的研究提供了有效途
径ꎮ 因此ꎬ开发 ＥＳＴ￣ＳＳＲ标记是丰富物种分子标记
简便而有效的途径ꎮ 本研究开发的 ＳＳＲ 引物对尖
镰孢菌与其近缘种的比较基因组学研究具有重要的
利用价值ꎮ
参 考 文 献 (Ｒｅｆｅｒｅｎｃｅｓ)
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Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｅｃｏｌｏｇｙꎬ １５(６): １４９３ － １５０５
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ｐｏｒｔｈｅ ｇｒｉｓｅａ ａｎｄ ｔｈｅｉｒ ｉｎｔｅｇｒａｔｉｏｎ ｉｎｔｏ ａｎ ｅｓｔａｂｌｉｓｈｅｄ ｇｅｎｅｔｉｃ
ｌｉｎｋａｇｅ ｍａｐ. Ｆｕｎｇａｌ Ｇｅｎｅｔｉｃｓ ａｎｄ Ｂｉｏｌｏｇｙꎬ ４０(３): ２０７ － ２１４
Ｋｕｍａｒ Ｓꎬ Ｒａｉ Ｓꎬ Ｍａｕｒｙａ ＤＫꎬ Ｋａｓｈｙａｐ ＰＬꎬ Ｓｒｉｖａｓｔａｖａ ＡＫꎬ Ａｎ￣
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ｔｅｌｌｉｔｅ ｍａｒｋｅｒｓ ｆｒｏｍ Ｆｕｓａｒｉｕｍ ｏｘｙｓｐｏｒｕｍ ｆｏｒ ｔｈｅ ａｓｓｅｓｓｍｅｎｔ ｏｆ
ｇｅｎｅｔｉｃ ｄｉｖｅｒｓｉｔｙ ｉｎ Ｆｕｓａｒｉｕｍ ｕｄｕｍ. Ｐｈｙｔｏｐａｒａｓｉｔｉｃａꎬ ４１(５):
６１５ － ６２２
Ｌｅｅｓ ＡＫꎬ Ｗａｔｔｉｅｒ Ｒꎬ Ｓｈａｗ ＤＳꎬ Ｓｕｌｌｉｖａｎ Ｌꎬ Ｗｉｌｌｉａｍｓ ＮＡꎬ Ｃｏｏｋｅ
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ｃｉａｌｅｓ ｏｆ Ｆｕｓａｒｉｕｍ ｏｘｙｓｐｏｒｕｍ ａｎｄ ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ ｏｆ ＥＳＴ￣ＳＳＲ
ｍａｒｋｅｒｓ ｆｏｒ ｐｏｌｙｍｏｒｐｈｉｓｍ ｓｔｕｄｉｅｓ. ＦＥＭＳ Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌｏｇｙ Ｌｅｔｔｅｒｓꎬ
３２８(１): ５４ － ６０
Ｍｉｓｈｒａ ＲＫꎬ Ｐａｎｄｅｙ ＢＫꎬ Ｓｉｎｇｈ Ｖꎬ Ｍａｔｈｅｗ ＡＪꎬ Ｐａｔｈａｋ Ｎꎬ Ｚｅｅｓｈａｎ
Ｍ. ２０１３. Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ ｄｅｔｅｃｔｉｏｎ ａｎｄ ｇｅｎｏｔｙｐｉｎｇ ｏｆ Ｆｕｓａｒｉｕｍ ｏｘ￣
ｙｓｐｏｒｕｍ ｆ. ｓｐ. ｐｓｉｄｉｉ ｉｓｏｌａｔｅｓ ｆｒｏｍ ｄｉｆｆｅｒｅｎｔ ａｇｒｏ￣ｅｃｏｌｏｇｉｃａｌ ｒｅ￣
ｇｉｏｎｓ ｏｆ Ｉｎｄｉａ. Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌｏｇｙꎬ ５１(４): ４０５ － ４１２
Ｎａｅｆ Ａꎬ Ｄéｆａｇｏ Ｇ. ２００６. Ｐｏｐｕｌａｔｉｏｎ ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ ｏｆ ｐｌａｎｔ ｐａｔｈｏｇｅｎｉｃ
Ｆｕｓａｒｉｕｍ ｓｐｅｃｉｅｓ ｉｎ ｏｖｅｒｗｉｎｔｅｒｅｄ ｓｔａｌｋ ｒｅｓｉｄｕｅｓ ｆｒｏｍ Ｂｔ￣ｔｒａｎｓ￣
ｆｏｒｍｅｄ ａｎｄ ｎｏｎ￣ｔｒａｎｓｆｏｒｍｅｄ ｍａｉｚｅ ｃｒｏｐｓ. Ｅｕｒｏｐｅａｎ Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ
Ｐｌａｎｔ Ｐａｔｈｏｌｏｇｙꎬ １１６(２): １２９ － １４３
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Ｒｏｄｒíｇｕｅｚ￣Ｍｏｌｉｎａ ＭＣꎬ Ｍｏｒａｌｅｓ￣Ｒｏｄｒíｇｕｅｚ ＭＣꎬ Ｐａｌｏ Ｃꎬ Ｏｓｕｎａ ＭＤꎬ
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ｏｎ ｏｆ ｎｏｖｅｌ Ｆｕｓａｒｉｕｍ ｇｒａｍｉｎｅａｒｕｍ ｍｉｃｒｏｓａｔｅｌｌｉｔｅ ｍａｒｋｅｒｓ ｉｎ ｄｉｆ￣
ｆｅｒｅｎｔ Ｆｕｓａｒｉｕｍ ｓｐｅｃｉｅｓ ｆｒｏｍ ｖａｒｉｏｕｓ ｃｏｕｎｔｒｉｅｓ. Ｅｕｒｏｐｅａｎ Ｊｏｕｒ￣
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(责任编辑:李美娟)
６８７ 植　 物　 保　 护　 学　 报 ４２ 卷