全 文 ：BU L L E T IN O F B O T A N IC A L R ES EA RC H
第 巧卷
VO I
.
15
第 4 期
N O
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4
199 5年 10月
oc t
. ,
19 9 5
四种落叶松种子球蛋白免疫血清学的初步研究 *
杨 茜 乔 辰 穆 霖 敖登其其格
T H E S T U D Y O F G L O B U L I N S I N T H E
O F FO U R D I F F E R E N T S P E C I E S O F
S E E D S
L A R I X
Y a n g C hi a n Q i a o C h e n M u L i n A o d e n g q iq ig e
〔摘 要〕 本文对兴安落叶才如 火白落叶松 、 华北落叶松和新疆落叶松种子
的球蛋白进行了免疫血清学研究 。 远建双扩及免疫电泳分析 , 结果表明四种落叶松
之间的抗原距 离为零 。 这可提示 用球 土 : 进行免疫血清学方法不能鉴别这四个种 。
关键词 落叶松 ; 球蛋白 ; 免疫血清学
我国落叶松属植物有 10 个种 , 均为优良的经济树种 , 其种子鉴别问题不仅是种子分类
的一个难题 , 也是生产上巫待解决的问题 。 特别需要指出的是兴安落叶松占大兴安岭森林覆
被率的 53 % 。 然而近些年来 , 兴安落叶松的结实率比较低 , 为了满足造林的需要 , 需收购
种子 , 可兴安 、 长白和华北落叶松的种子外形十分相似 , 难以辨认 . 而不同树种又需不同的
生态环境 , 这样一来 , 就给生产上出了一道棘手的难题 。 目前 , 国内一些科学工作者对这个
问题进行了一些研究 〔 1,2 .5 〕 , 研究结果有的有鉴别效果 , 但由于技术难度大 , 在生产上还
不易推广 。 鉴于此种情况 , 我们试图采用特异性强 、 灵敏度高 、 操作简便 、 便于商品化的免
疫血清学方法对兴安落叶松 、 长白落叶松 、 华北落叶松和新疆落叶松的种子进行鉴别研究 .
现将结果报道如下 。
1
、 材料与方法
1
.
1 实验材料
本实验所采用的材料见表 l 。
杨茜 ` 呼和浩特 , 内蒙古医学院基础部生物教研究室 ( T h e D e匹 r t m e n t o f B i o lo g y ,n n e r M o n g o一i a M e d i` a -
C o ll e ,
,
H o h e h o t e 0 100 59 )
.
乔辰 : 呼和浩特 . 内蒙古林学院地治沙系 ( 仆 e D e s e r t C o n t r o l D e娜 r t m e n t o f I n n e r M o n g o ri a F o r e s t即
c o l ,亡 g e 0 100 59 )
.
穆霖 : 敖登其其格 , 内蒙古林学院林学系 94 年毕业生 .
. 内蒙古教育厅基金资助的课题 .
1995 年 5月收到本文 .
4期 杨茜等 :四种落叶松种子球蛋白免疫血清学的初步研究
表 1用于分析的四种落叶松种子名录
编 号 树 种 学 名 产 地
1兴安落叶松 La r i x g i n el i ni i (r u Pr ) Ru Pr .内蒙古阿尔山
2长白落叶松 L .o l g e ns i s Her ny 黑龙江省穆棱
3华北落叶松 L .Pr i n ei Pi s 一 r u P Pr e e h ti i Ma y r 内蒙古赤峰
4新疆落叶松 L . Si bi r i a C Led e b 新疆阿勒泰布尔津林场
1
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2实验方法
1
.
2
.
1种子球蛋白的提取
按 《植物生物化学分析方法》 〔 8〕 提取蛋白质 , 方法略有改变 。 称取干种子 3 克 , 切
碎后脱脂 、 去溶在醇和水中的一些物质 , 再用 0 . m m ol / l 、 P H 值 7 . 4 、 T ir s 一 H CI 缓冲
液提取球蛋白 (共三次 ) 。
2
.
2 蛋白质含量测定
按双缩脉法测定 〔 5 〕 。 落叶松种子的球蛋白含匆见表 2 。
表 2 落叶松种子球蛋 白含量
树 种 兴安落叶松 长白落叶松 华北落叶松 新疆落叶松
球蛋白的含最 6 . 4 4 7 . 0 9 7 . 19 6 . 5 0
m g l m l
1
.
2
.
3 抗血清的制备
选体重 2一 3k g 的健康雄兔进行免疫 。 全程注射 4 次 , 每次间隔 7 天 。 注射时 , 取抗原
液 1. sm l( 蛋白质含量约 9 . 7一 10 . 7m g /m l) 加完全福 氏佐剂 lm l , 充分混匀乳化后 , 对兔子
进行皮下少量多点注射 。 全程结束后进行颈动脉采血 , 待血液凝集后 , 放人 4 ℃冰箱让血清
自动析出 , 将析出的血清分装于灭菌瓶中 , 待用 。
1
.
2
.
4 双扩实验
用 1. 5% 生理盐水琼脂糖制作凝胶板 〔 3,4 ,7 〕 , 第二天打孑助口样 , 进行各种种内及种间
的抗原与抗血清反应 . 各反应重复 2 次 。
1
.
2
.
5 免疫电泳
用巴 比妥缓冲液制备琼脂糖凝胶板 〔 3,4 ,7 〕 , 第二天打孔 , 加抗原进行电泳 。 电流为
40 m A
, 电压为 l o V 、 时间 l 小时 30 分钟 。 结束后在凝胶板中央开槽 , 加抗血清 , 置 37 ℃
温箱中过夜 , 第二天观察 . 种内及种间的抗原与抗血清反应各重复 2 次 .
2结果与分析
2
.
1 双扩
各树种种内及种间的抗原与抗血清反应结果见图 1一 3 。 从结果看各反应都有两条明显
的沉淀带 , 且相邻沉淀带吻合 , 边缘光滑 , 与对照间均无沉淀带 。 无论是抗体在中央孔 , 外


植 物 研 究 巧 卷
用四种落叶松种子里的球蛋白制备抗血清 , 进行了双扩和免疫电泳分析 , 结果表明这四个种
的抗原距离为零 , 不能用种子里的球蛋白作为抗原进行血清学的鉴定 。 rP ag er 等用三种落
叶松 ( 1. liar e in a . L . d e e id u a . L . le p t o l e p i s ) 种子里的白蛋白进行血清学的分析 , 也证明这
三种落叶松种子里的白蛋白无差别 , 用白蛋白的免疫血清学方法不能鉴别这三个种 。 种子里
的其它蛋白质作为抗原能否进行血清学鉴别 , 尚有待于今后进一步的研究 。
3
.
2 我们进行了种内和种间的双扩和免疫电泳分析 。 双扩实验中均产生 2 条平行沉淀 ,
带 , 而免疫电泳中的均产生 3条沉淀带 , 其中一条与另外两条存在明显位置差异所以 , 从沉
淀带的数目 、 位置来看 , 免疫电泳分析要 比双扩分析的灵敏度高 .
3
.
3 在免疫血清学实验之前 , 我们对四种落叶松种子的球蛋白进行了聚丙稀酸 l疑胶电
泳分析 . 这四种球蛋白均有 3条谱带 , 其 fR 值分别为 0 . 58 ,0 . 50 ,0 . 41 , 从谱带上看 , 这四
种落叶松无差别 。 后经血清学研究也证明了这一点 。 因此 , 在用某种蛋白质作为抗原进行血
清学研究之前 , 不妨先对此种蛋白质进行电泳分析 , 根据电泳谱带 , 可做为血清学研究的一
个参考 . 如果抗原有区别 , 再进行血清学研究 , 这样可节省时间和人力 .
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参 考 文 献
〔 l 〕
〔 2 〕
〔 3 〕
〔 4 〕
〔 5 〕
〔 6 〕
( 7 〕
( 8 〕
〔 9 〕
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