全 文 ：第 源员 卷摇 第 源 期
圆园员源 年 愿 月
植摇 物摇 保摇 护摇 学摇 报
粤悦栽粤 孕匀再栽韵孕匀再蕴粤悦陨悦粤 杂陨晕陨悦粤
灾燥造援 源员摇 晕燥援 源
粤怎早援 摇 圆园员源
摇
基金项目院 国家自然科学基金渊猿员圆园员缘缘缘冤袁江苏省自主创新基金项目渊悦载渊员圆冤猿园圆圆冤
作者简介院 刘邮洲袁女袁员怨苑缘年生袁副研究员袁研究方向为植物病害生物防治袁 耘鄄皂葬蚤造院 泽澡蚤贼燥怎则藻灶愿愿愿愿愿岳 员远猿援 糟燥皂袁 栽藻造院 园圆缘 原 愿源猿怨园圆圆愿
收稿日期院 圆园员猿 原 员园 原 圆缘
枯草芽胞杆菌 孕栽杂鄄猿怨源的 郧云孕标记及其定殖能力
刘邮洲摇 梁雪杰摇 乔俊卿摇 张荣胜摇 陈志谊
渊江苏省农业科学院植物保护研究所袁 南京 圆员园园员源冤
摘要院 为探明枯草芽胞杆菌 孕栽杂鄄猿怨源 在番茄根围的定殖能力袁采用电转化法获得绿色荧光蛋白
渊早则藻藻灶 枣造怎燥则藻泽糟藻灶贼 责则燥贼藻蚤灶袁 郧云孕冤标记菌株 孕栽杂鄄郧云孕袁构建其生长曲线袁采用对峙生长法评价其室内
抑菌活性袁并应用抗生素平板回收结合激光扫描共聚焦显微镜观察标记菌株在番茄根围的定殖数
量遥 结果显示院与原始菌株 孕栽杂鄄猿怨源 相比袁标记菌株 孕栽杂鄄郧云孕 的生长尧对青枯病菌和 源 种病原真菌
的室内抑菌能力无明显差异遥 标记菌株 孕栽杂鄄郧云孕和青枯病菌菌液单独或混合处理番茄苗袁灌根当
天标记菌株初始菌量接近 员园愿 悦云哉 辕 早袁处理 猿 凿后种群数量迅速下降袁约 员园远 悦云哉 辕 早袁随后缓慢下降袁
处理 员园 凿后种群数量约 员园源 悦云哉 辕 早袁处理 猿园 凿后袁标记菌株仍然能被检测到袁约 圆园 悦云哉 辕 早遥 表明枯
草芽胞杆菌 孕栽杂鄄猿怨源 在番茄根际土壤中具有一定的定殖能力遥
关键词院 枯草芽胞杆菌 孕栽杂鄄猿怨源曰 绿色荧光蛋白曰 定殖
月葬糟蚤造造怎泽 泽怎遭贼蚤造蚤泽 孕栽杂鄄猿怨源 造葬遭藻造藻凿 遭赠 早则藻藻灶 枣造怎燥则藻泽糟藻灶贼 责则燥贼藻蚤灶
葬灶凿 蚤贼泽 糟燥造燥灶蚤扎葬贼蚤燥灶
蕴蚤怎 再燥怎扎澡燥怎摇 蕴蚤葬灶早 载怎藻躁蚤藻摇 匝蚤葬燥 允怎灶择蚤灶早摇 在澡葬灶早 砸燥灶早泽澡藻灶早摇 悦澡藻灶 在澡蚤赠蚤
渊陨灶泽贼蚤贼怎贼藻 燥枣 孕造葬灶贼 孕则燥贼藻糟贼蚤燥灶袁 允蚤葬灶早泽怎 粤糟葬凿藻皂赠 燥枣 粤早则蚤糟怎造贼怎则葬造 杂糟蚤藻灶糟藻泽袁 晕葬灶躁蚤灶早 圆员园园员源袁 允蚤葬灶早泽怎 孕则燥增蚤灶糟藻袁 悦澡蚤灶葬冤
粤遭泽贼则葬糟贼院 栽燥 蚤灶增藻泽贼蚤早葬贼藻 贼澡藻 糟燥造燥灶蚤扎葬贼蚤燥灶 燥枣 月葬糟蚤造造怎泽 泽怎遭贼蚤造蚤泽 孕栽杂鄄猿怨源 蚤灶 贼澡藻 则澡蚤扎燥泽责澡藻则藻 燥枣 贼燥皂葬贼燥袁 贼澡藻
郧云孕鄄造葬遭藻造藻凿 泽贼则葬蚤灶 孕栽杂鄄郧云孕 憎葬泽 燥遭贼葬蚤灶藻凿 遭赠 藻造藻糟贼则燥责燥则葬贼蚤灶早 贼澡藻 泽澡怎贼贼造藻 增藻糟贼燥则 责郧云孕圆圆袁 澡葬则遭燥则蚤灶早 贼澡藻
早枣责 早藻灶藻袁 蚤灶贼燥 贼澡藻 燥则蚤早蚤灶葬造 泽贼则葬蚤灶 孕栽杂鄄猿怨源援 阅赠灶葬皂蚤糟 早则燥憎贼澡 葬灶葬造赠泽藻泽 葬灶凿 葬灶贼蚤皂蚤糟则燥遭蚤葬造 葬糟贼蚤增蚤贼蚤藻泽 蚤灶 增蚤贼则燥
燥枣 孕栽杂鄄郧云孕 憎藻则藻 贼藻泽贼藻凿 蚤灶 贼澡蚤泽 泽贼怎凿赠援 孕栽杂鄄郧云孕 糟燥造燥灶蚤扎葬贼蚤燥灶 蚤灶 贼澡藻 则澡蚤扎燥泽责澡藻则藻 燥枣 贼燥皂葬贼燥 憎葬泽 糟燥灶凿怎糟贼藻凿
遭赠 糟燥皂遭蚤灶蚤灶早 葬灶贼蚤遭蚤燥贼蚤糟泽 责造葬贼藻 则藻糟燥增藻则赠 葬灶凿 造葬泽藻则 泽糟葬灶灶蚤灶早 糟燥灶枣燥糟葬造 皂蚤糟则燥泽糟燥责藻援 栽澡藻 则藻泽怎造贼泽 泽澡燥憎藻凿 贼澡葬贼
贼澡藻则藻 憎葬泽 灶燥 燥遭增蚤燥怎泽 凿蚤枣枣藻则藻灶糟藻 蚤灶 贼澡藻 糟藻造造 早则燥憎贼澡 葬灶凿 蚤灶澡蚤遭蚤贼蚤燥灶 葬早葬蚤灶泽贼 贼澡藻 贼藻泽贼藻凿 责葬贼澡燥早藻灶泽 遭藻贼憎藻藻灶
燥则蚤早蚤灶葬造 泽贼则葬蚤灶 孕栽杂鄄猿怨源 葬灶凿 贼则葬灶泽枣燥则皂葬灶贼 孕栽杂鄄郧云孕援 栽澡藻 责燥责怎造葬贼蚤燥灶 燥枣 孕栽杂鄄郧云孕 燥灶 贼澡藻 则燥燥贼泽 燥枣 贼燥皂葬贼燥
则藻葬糟澡藻凿 员园愿 悦云哉 辕 早 葬枣贼藻则 蚤灶燥糟怎造葬贼蚤灶早 孕栽杂鄄郧云孕 葬造燥灶藻 燥则 糟燥皂遭蚤灶藻凿 憎蚤贼澡 砸葬造泽贼燥灶蚤葬 泽燥造葬灶葬糟藻葬则怎皂袁 葬灶凿 贼澡藻灶
凿藻糟则藻葬泽藻凿 泽澡葬则责造赠 猿 凿葬赠泽 造葬贼藻则袁 葬贼 员园远 悦云哉 辕 早袁 葬灶凿 则藻皂葬蚤灶藻凿 葬贼 员园源 悦云哉 辕 早 员园 凿葬赠泽 造葬贼藻则援 孕栽杂鄄郧云孕 蚤灶
贼澡藻 则澡蚤扎燥泽责澡藻则藻 燥枣 贼燥皂葬贼燥 糟燥怎造凿 泽怎则增蚤增藻 枣燥则 燥增藻则 猿园 凿葬赠泽袁 葬灶凿 藻增藻灶贼怎葬造造赠 则藻皂葬蚤灶藻凿 葬贼 圆园 悦云哉 辕 早援 栽澡藻
则藻泽怎造贼泽 蚤灶凿蚤糟葬贼藻凿 贼澡葬贼 月援 泽怎遭贼蚤造蚤泽 孕栽杂鄄猿怨源 凿蚤泽责造葬赠藻凿 早燥燥凿 糟燥造燥灶蚤扎葬贼蚤燥灶 葬遭蚤造蚤贼赠 蚤灶 贼澡藻 则澡蚤扎燥泽责澡藻则藻 燥枣 贼燥皂葬贼燥援
运藻赠 憎燥则凿泽院 月葬糟蚤造造怎泽 泽怎遭贼蚤造蚤泽 孕栽杂鄄猿怨源曰 早则藻藻灶 枣造怎燥则藻泽糟藻灶贼 责则燥贼藻蚤灶曰 糟燥造燥灶蚤扎葬贼蚤燥灶
摇 摇 生防微生物所具有的在植株上定殖尧扩散和生
存竞争能力是其生防作用机制的一个重要方面咱员暂 遥
很多研究报道生防菌定殖成功与否和防效密切相
关咱圆 原 猿暂 遥 因此了解生防菌在植物上的定殖能力袁对
提高和稳定菌剂的生防效果尧制定科学的施用技术
具有重要意义咱源 原 缘暂 遥
生防菌定殖的追踪和监测首先要求对其进行标
记咱远暂 袁抗生素标记是最早使用的一种标记方法袁简
单易行袁主要有抗利福平尧氨苄青霉素尧卡那霉素等
抗生素标记法咱苑 原 愿暂 袁但这种方法不易区别环境中对
标记抗生素有同样抗性的土著微生物遥 标记基因技
术的建立与发展袁为生防细菌定殖的微生态学研究
提供了有效手段遥 绿色荧光蛋白渊 早则藻藻灶 枣造怎燥则藻泽糟藻灶贼
责则燥贼藻蚤灶袁 郧云孕冤编码基因小渊约 员 噪遭冤袁对细胞安全尧稳
定袁已成功用于微生物定殖尧微生物动态监测等研
究咱怨暂 遥 车建美等咱员园暂将绿色荧光蛋白基因转导青枯
病生防菌蜡状芽胞杆菌 月葬糟蚤造造怎泽 糟藻则藻怎泽 中袁发现其生
物学特性与野生型菌株相同遥 张淑梅等咱员员暂研究发
现绿色荧光蛋白基因标记的枯草芽胞杆菌 月援 泽怎遭贼蚤造蚤泽
月杂远愿菌株能在黄瓜根部和茎基部定殖袁随后标记菌
株从根部向黄瓜茎部和叶部传导遥 郧觟贼扎 等咱员圆暂比较
了绿色荧光蛋白基因标记的 圆 个生防菌恶臭假单胞
菌 孕泽藻怎凿燥皂燥灶葬泽 责怎贼蚤凿葬 孕砸阅员远 和肠杆菌属 耘灶贼藻则鄄
燥遭葬糟贼藻则 糟燥憎葬灶蚤蚤 孕砸云员 员远 在根际土壤和番茄植株内的
定殖能力及其对根际微生态的影响遥
枯草芽胞杆菌 孕栽杂鄄猿怨源 是江苏省农业科学院植
物保护研究所从蔬菜根围分离获得的一株对番茄青
枯病菌和多种病原真菌均有较强拮抗作用的生防
菌咱员猿暂 遥 为探明枯草芽胞杆菌 孕栽杂鄄猿怨源 在植物根围
的定殖能力袁本研究构建其绿色荧光蛋白标记菌株
孕栽杂鄄郧云孕袁用抗生素平板回收结合激光扫描共聚焦
显微镜观察标记菌株在番茄根围的定殖数量变化袁
以期为进一步探明枯草芽胞杆菌 孕栽杂鄄猿怨源 的生防机
制以及该菌株的实际应用提供依据遥
员 材料与方法
员援 员 材料
供试菌株院生防枯草芽胞杆菌 月援 泽怎遭贼蚤造蚤泽 孕栽杂鄄
猿怨源 由江苏省农业科学院植物保护研究所生物防治
研究室分离获得遥 病原真菌包括立枯丝核菌 砸澡蚤鄄
扎燥糟贼燥灶蚤葬 泽燥造葬灶蚤尧番茄灰霉病菌 月燥贼则赠贼蚤泽 糟蚤灶藻则藻葬尧油菜菌
核病菌 杂糟噪则燥贼蚤灶蚤葬 泽糟造藻则燥贼蚤燥贼怎皂 和甘蓝黑斑病菌 粤造贼藻则鄄
灶葬则蚤葬 遭则葬泽泽蚤糟葬藻袁以及病原细菌番茄青枯病菌 砸葬造泽贼燥鄄
灶蚤葬 泽燥造葬灶葬糟藻葬则怎皂 均由江苏省农业科学院植物保护
研究所生物防治研究室提供遥
病原真菌培养用马铃薯葡萄糖琼脂培养基
渊责燥贼葬贼燥 凿藻曾贼则燥泽藻 葬早葬则袁 孕阅粤冤院马铃薯 圆园园 早尧葡萄糖
圆园 早尧琼脂 圆园 早尧蒸馏水 员 园园园 皂蕴遥 枯草芽胞杆菌
孕栽杂鄄猿怨源 及标记菌株 孕栽杂鄄郧云孕尧番茄青枯病菌培养
用肉汤培养基渊造怎则蚤葬鄄遭藻则贼葬灶蚤 葬早葬则袁 蕴月冤院蛋白胨 员园 早尧
酵母粉 缘 早尧晕葬悦造 员园 早尧蒸馏水 员园园园 皂蕴遥 复苏培养基
渊则藻泽怎泽糟蚤贼葬贼蚤燥灶 皂藻凿蚤怎皂袁 砸酝冤院员园 皂蕴 蕴月 培养基中加
入山梨醇 园援 怨员 早尧甘露醇 园援 远怨 早遥
供试番茄品种院江蔬 员 号袁由江苏省农业科学院
蔬菜研究所提供遥
试剂和仪器院阅晕粤 酝葬则噪藻则尧限制性内切酶尧栽葬择
阅晕粤聚合酶购自宝生物工程渊大连冤有限公司曰氯霉
素尧青霉素尧质粒提取试剂盒等购自上海生工生物工
程技术服务有限公司曰细菌基因组 阅晕粤提取试剂盒
购自北京全式金生物技术渊栽则葬灶泽郧藻灶 月蚤燥贼藻糟澡冤有限
公司曰其它试剂均为国产分析纯遥 耘造藻糟贼则燥责燥则葬贼燥则
圆缘员园 电转化仪购自德国 耘责责藻灶凿燥则枣 公司曰激光共聚
焦显微镜渊造葬泽藻则 泽糟葬灶灶蚤灶早 糟燥灶枣燥糟葬造 皂蚤糟则燥泽糟燥责藻袁 蕴杂悦酝冤
购自卡尔窑蔡司公司股份公司渊悦葬则造 在藻蚤泽泽 粤郧冤遥 带
有绿色荧光标记的表达载体 责郧云孕圆圆 由江苏省农业
科学院植物保护研究所生物防治研究室提供遥 本试
验引物合成和基因测序由上海生工生物工程技术服
务有限公司完成遥
员援 圆 方法
员援 圆援 员 绿色荧光蛋白标记菌株 孕栽杂鄄郧云孕的构建
枯草芽胞杆菌 孕栽杂鄄猿怨源 感受态细胞的制备参照
悦葬燥等咱员源暂的方法遥 每管感受态细胞 员园园 滋蕴遥 加入
本实验室构建的表达载体 缘园 滋早 辕 皂蕴 责郧云孕圆圆咱员缘暂
圆 滋蕴遥 冰上孵育 圆 皂蚤灶袁加入预冷的 员 皂皂 电转杯中袁
圆援 园 噪灾 电击遥 电击后立即加入复苏培养基 砸酝袁
猿园 益尧圆园园 则 辕 皂蚤灶振荡培养 猿 澡袁涂于 缘 滋早 辕 皂蕴氯霉素
的 蕴月平板上袁猿园 益过夜培养遥 挑取转化子袁荧光显
微镜下观察发光情况遥 利用 孕则蚤皂藻则 缘援 园 软件设计
早枣责 基因的特异性引物袁 早枣责鄄云院粤悦粤栽悦粤悦郧郧悦粤郧粤鄄
悦粤粤粤悦粤粤袁早枣责鄄砸院粤粤栽悦悦悦粤郧悦粤郧悦粤郧栽栽粤悦粤粤遥 对
发光单菌落进行 孕悦砸 验证遥 构建成功的绿色荧光
蛋白标记菌株命名为 孕栽杂鄄郧云孕遥
员援 圆援 圆 标记菌株 孕栽杂鄄郧云孕的生长曲线
挑取标记菌株 孕栽杂鄄郧云孕 单菌落接种到 员园园 皂蕴
含氯霉素 缘 滋早 辕 皂蕴 的 蕴月 液体培养基中袁猿园 益尧
员缘园 则 辕 皂蚤灶 过夜培养袁用无菌水稀释至菌含量达 圆 伊
员园愿 悦云哉 辕 皂蕴遥 按 员豫的接种量接种于 员园园 皂蕴 含氯
霉素 缘 滋早 辕 皂蕴的 蕴月液体培养基袁猿园 益尧员缘园 则 辕 皂蚤灶培
养遥 以原始菌株 孕栽杂鄄猿怨源 为对照袁同等条件下培养袁
每隔 圆 耀 源 澡 测定菌液的 韵阅远园园值袁绘制原始菌株孕栽杂鄄猿怨源 和标记菌株 孕栽杂鄄郧云孕的生长曲线遥
员援 圆援 猿 标记菌株 孕栽杂鄄郧云孕的室内拮抗性能
各病原真菌在 孕阅粤平板上长满平板后袁沿菌落
边缘用孔径为 缘 皂皂 的灭菌打孔器打孔遥 将病原真
菌菌饼置于空白 孕阅粤平板中央袁直径方向左右两侧
渊距平板边缘 圆圆援 缘皂皂冤分别滴原始菌株 孕栽杂鄄猿怨源 及
苑员源源 期 刘邮洲等院 枯草芽胞杆菌 孕栽杂鄄猿怨源 的 郧云孕标记及其定殖能力
标记菌株 孕栽杂鄄郧云孕菌液各 缘 滋蕴袁菌含量 圆 伊员园愿 悦云哉 辕
皂蕴遥 每处理 猿 次重复遥 设清水对照遥 猿园 益恒温培
养袁待对照平板菌落长满时袁测量各处理病原菌菌落
生长带宽袁计算抑制率遥 病原真菌抑制率 越 渊对照
病原菌菌丝带宽 原处理病原菌菌丝带宽冤 辕对照病
原菌菌丝带宽 伊员园园豫 遥
青枯病菌在 蕴月 固体斜面上活化后袁移入 缘园 皂蕴
蕴月培养液中袁猿园 益尧员缘园 则 辕 皂蚤灶 过夜培养袁用无菌水
稀释至菌含量达 圆 伊 员园愿 悦云哉 辕 皂蕴遥 蕴月 平板中央分
别滴原始菌株 孕栽杂鄄猿怨源 及标记菌株 孕栽杂鄄郧云孕菌液各
缘 滋蕴袁菌含量 圆 伊 员园愿 悦云哉 辕 皂蕴遥 每处理 猿 次重复遥
设清水对照遥 猿园 益培养 圆源 澡袁用青枯病菌稀释液瞬
间喷雾后袁猿园 益恒温培养遥 待对照平板病原细菌长
满平板时袁调查抑菌圈直径遥
员援 圆援 源 标记菌株 孕栽杂鄄郧云孕的稳定性测定
挑取标记菌株 孕栽杂鄄郧云孕 单菌落分别接种于含
氯霉素和不含氯霉素的 缘 皂蕴液体培养基中袁过夜培
养作为 园 代袁隔天按 员豫 渊增 辕 增冤的接种量分别转接含
氯霉素和不含氯霉素的液体培养基袁连续摇床培养
猿园 代遥 每隔 圆源 澡 取传代菌液平板稀释后涂布于非
抗性 蕴月 平板袁猿园 益恒温培养后挑取 员园园 个单菌落
到含有氯霉素抗性的 蕴月 平板上袁培养后在荧光下
统计菌落数遥 计算标准菌株的稳定性咱员暂 院质粒稳定
性渊泽贼葬遭蚤造蚤贼赠袁杂责冤 越可以生长的发光菌落数 辕 员园园遥
员援 圆援 缘 标记菌株 孕栽杂鄄郧云孕在番茄根际定殖
将番茄种播于灭菌土壤中袁当番茄苗长出 远 片
真叶时袁将幼苗移栽至装有基质渊无菌土 颐 蛭石按
员 颐 员混合冤的盆钵中袁每盆 员 株袁设 猿园 个重复遥 病原
菌接种前针刺伤根咱员远暂 遥 试验设 猿 个处理院淤番茄苗
灌根 圆园 皂蕴标记菌株 孕栽杂鄄郧云孕 菌液曰于番茄苗先灌
根 圆园 皂蕴标记菌株 孕栽杂鄄郧云孕菌液袁圆源 澡后灌根 圆园 皂蕴
青枯菌液曰盂番茄苗先灌根 圆园 皂蕴 青枯菌液袁圆源 澡 后
灌根 圆园 皂蕴标记菌株 孕栽杂鄄郧云孕菌液遥
标记菌株 孕栽杂鄄郧云孕在番茄根际的定殖情况院标
记菌株 孕栽杂鄄郧云孕菌液灌根后 员 澡 取番茄苗主根和须
根渊包括附着的小土粒冤员 早袁切成 园援 缘 糟皂小段后溶于
无菌水中振荡 圆 澡袁梯度稀释涂布平板渊含氯霉素
缘 滋早 辕 皂蕴冤袁培养 圆源 澡 后统计菌落数袁即为第 园 天标
记菌株 孕栽杂鄄郧云孕定殖量遥 随后第 员尧猿尧缘尧苑尧员园尧员缘尧
猿园 凿分别取样测定遥 同时袁激光扫描共聚焦显微镜
观察标记菌株在番茄根围的定殖情况遥
员援 猿 数据分析
采用 杂孕杂杂 员远援 园 软件进行统计分析袁阅怎灶糟葬灶 氏
新复极差法进行差异显著性检验遥
圆 结果与分析
圆援 员 绿色荧光蛋白标记菌株 孕栽杂鄄郧云孕的构建
将重组表达载体 责郧云孕圆圆 电击转入原始菌株
孕栽杂鄄猿怨源 感受态细胞中袁利用质粒自带的抗生素标
记挑取转化子袁移入 蕴月 液体培养基中过夜培养袁吸
取 缘 滋蕴菌液制成玻片袁荧光显微镜 源园 倍物镜下可
观察到菌体发出亮绿色的荧光渊图 员冤遥 用 郧云孕 特
异性引物扩增的 孕悦砸产物片段大小为 圆员缘 遭责袁凝胶
电泳结果如图 圆 所示遥 枯草芽胞杆菌 孕栽杂鄄猿怨源 绿色
荧光蛋白标记菌株命名为 孕栽杂鄄郧云孕遥
图 员 标记菌株 孕栽杂鄄郧云孕菌体在荧光显微镜下的
发光情况 渊源园 伊 冤
云蚤早援 员 栽澡藻 遭葬糟贼藻则蚤葬造 糟藻造造泽 燥枣 孕栽杂鄄郧云孕 怎灶凿藻则 枣造怎燥则藻泽糟藻灶糟藻
皂蚤糟则燥泽糟燥责藻 渊源园 伊 冤
图 圆 特异性引物 早枣责鄄云 辕 早枣责鄄砸的 孕悦砸扩增产物电泳图
云蚤早援 圆 耘造藻糟贼则燥责澡燥则藻泽蚤泽 憎蚤贼澡 泽责藻糟蚤枣蚤糟 责则蚤皂藻则泽 早枣责鄄砸 辕 早枣责鄄云
燥枣 早枣责 早藻灶藻
摇 摇 酝院 阅晕粤分子量标准曰 员院 空白对照曰 圆院 重组质粒 责郧云孕圆圆曰
猿院 标记菌株 孕栽杂鄄郧云孕 基因组曰 源院 原始菌株 孕栽杂鄄猿怨源 基因组曰
缘院 青枯病菌基因组遥 酝院 阅晕粤 皂葬则噪藻则曰 员院 悦运曰 圆院 责造葬泽皂蚤凿
责郧云孕圆圆曰 猿院 早藻灶燥皂蚤糟 阅晕粤 燥枣 孕栽杂鄄郧云孕曰 源院 早藻灶燥皂蚤糟 阅晕粤 燥枣 孕栽杂鄄
猿怨源曰 缘院 早藻灶燥皂蚤糟 阅晕粤 燥枣 砸援 泽燥造葬灶葬糟藻葬则怎皂援
愿员源 植摇 物摇 保摇 护摇 学摇 报 源员 卷
圆援 圆 标记菌株 孕栽杂鄄郧云孕的生长性状
原始菌株 孕栽杂鄄猿怨源 和标记菌株 孕栽杂鄄郧云孕生长曲
线如图 猿 所示遥 原始菌株 孕栽杂鄄猿怨源 和标记菌株 孕栽杂鄄
郧云孕 的生长趋势大致相同袁生长曲线基本重合遥 菌
株在培养后 圆 澡进入对数生长期袁员园 澡后进入稳定生
长期袁直到 源园 澡一直保持缓慢稳定增长遥 表明原始
菌株 孕栽杂鄄猿怨源 进行绿色荧光蛋白标记后袁外源质粒
责郧云孕圆圆 的存在及绿色荧光蛋白的表达未对菌株
孕栽杂鄄猿怨源 的生长特性产生明显的不利影响遥
圆援 猿 标记菌株 孕栽杂鄄郧云孕的拮抗性能和稳定性
标记菌株 孕栽杂鄄郧云孕 与原始菌株 孕栽杂鄄猿怨源 相比袁
对番茄青枯病菌和 源 种病原真菌的室内抑菌活性无
明显差异渊图 源冤遥 对参试的 源 种病原真菌抑制率均
较高袁均大于 缘缘豫 袁能形成明显的抑菌带遥
图 猿 原始菌株 孕栽杂鄄猿怨源 和标记菌株 孕栽杂鄄郧云孕的生长曲线
云蚤早援 猿 栽澡藻 早则燥憎贼澡 糟怎则增藻 燥枣 月葬糟蚤造造怎泽 泽怎遭贼蚤造蚤泽 孕栽杂鄄猿怨源 葬灶凿 孕栽杂鄄郧云孕
图 源 拮抗细菌 孕栽杂鄄猿怨源 和标记菌株 孕栽杂鄄郧云孕对番茄青枯病菌和 源 种病原真菌的室内抑制作用
云蚤早援 源 陨灶澡蚤遭蚤贼蚤燥灶 藻枣枣蚤糟蚤藻灶糟赠 燥枣 憎蚤造凿 贼赠责藻 泽贼则葬蚤灶 孕栽杂鄄猿怨源 葬灶凿 郧云孕鄄造葬遭藻造藻凿 泽贼则葬蚤灶 孕栽杂鄄郧云孕 葬早葬蚤灶泽贼 贼澡藻 早则燥憎贼澡
燥枣 砸葬造泽贼燥灶蚤葬 泽燥造葬灶葬糟藻葬则怎皂 葬灶凿 枣燥怎则 责葬贼澡燥早藻灶蚤糟 枣怎灶早蚤 蚤灶 增蚤贼则燥
摇 摇 图中分别为可见光和紫外光照射观察遥 葬院 孕栽杂鄄猿怨源对番茄青枯病菌的抑制曰 遭院 孕栽杂鄄郧云孕对番茄青枯病菌的抑制曰 糟院 孕栽杂鄄猿怨源和 孕栽杂鄄
郧云孕对立枯丝核菌的抑制曰 凿院 孕栽杂鄄猿怨源和 孕栽杂鄄郧云孕对番茄灰霉病菌的抑制曰 藻院 孕栽杂鄄猿怨源和 孕栽杂鄄郧云孕对油菜菌核病菌的抑制曰 枣院 孕栽杂鄄猿怨源
和 孕栽杂鄄郧云孕对甘蓝黑斑病菌的抑制遥 栽则藻葬贼皂藻灶贼 憎蚤贼澡 增蚤泽蚤遭造藻 葬灶凿 怎造贼则葬增蚤燥造藻贼 造蚤早澡贼援 葬院 陨灶澡蚤遭蚤贼蚤燥灶 葬早葬蚤灶泽贼 砸援 泽燥造葬灶葬糟藻葬则怎皂 憎蚤贼澡 孕栽杂鄄猿怨源曰 遭院 蚤灶澡蚤遭蚤鄄
贼蚤燥灶 葬早葬蚤灶泽贼 砸援 泽燥造葬灶葬糟藻葬则怎皂 憎蚤贼澡 孕栽杂鄄郧云孕曰 糟院 蚤灶澡蚤遭蚤贼蚤燥灶 葬早葬蚤灶泽贼 砸援 泽燥造葬灶蚤 憎蚤贼澡 孕栽杂鄄猿怨源 葬灶凿 孕栽杂鄄郧云孕曰 凿院 蚤灶澡蚤遭蚤贼蚤燥灶 葬早葬蚤灶泽贼 月援 糟蚤灶藻则藻葬 憎蚤贼澡 孕栽杂鄄
猿怨源 葬灶凿 孕栽杂鄄郧云孕曰 藻院 蚤灶澡蚤遭蚤贼蚤燥灶 葬早葬蚤灶泽贼 杂援 泽糟造藻则燥贼蚤燥贼怎皂 憎蚤贼澡 孕栽杂鄄猿怨源 葬灶凿 孕栽杂鄄郧云孕曰 枣院 蚤灶澡蚤遭蚤贼蚤燥灶 葬早葬蚤灶泽贼 粤援 遭则葬泽泽蚤糟葬藻 憎蚤贼澡 孕栽杂鄄猿怨源 葬灶凿 孕栽杂鄄郧云孕援
怨员源源 期 刘邮洲等院 枯草芽胞杆菌 孕栽杂鄄猿怨源 的 郧云孕标记及其定殖能力
摇 摇 标记菌株 孕栽杂鄄郧云孕 质粒稳定性试验结果表明袁
在没有选择压力的情况下袁随着传代次数的增加袁标
记菌株的稳定性有降低的趋势遥 培养液中不加氯霉
素时袁菌株 孕栽杂鄄郧云孕 连续传 员园 代袁质粒稳定性为
愿愿豫 袁传 圆园 代质粒稳定性为 苑远豫 袁传 猿园 代后的质
粒稳定性为 远缘豫 遥 培养液中加氯霉素时袁标记菌株
的质粒稳定性很好袁传 猿园 代后仍可达到 怨愿豫 遥 表
明外源质粒 责郧云孕圆圆 在标记菌株 孕栽杂鄄郧云孕 中基本可
以稳定遗传遥
圆援 源 标记菌株 孕栽杂鄄郧云孕在番茄根部的定殖情况
标记菌株 孕栽杂鄄郧云孕 在番茄根围的定殖动态如
图 缘 所示遥 显微镜观察灌根当天标记菌株的绿色菌
体大量定殖在番茄根围袁包括纤毛上袁形成一层绿色
的保护膜渊图 缘鄄葬冤曰处理 猿 凿后标记菌株数量迅速下
降袁之后标记菌株在番茄根部定殖数量变化不大
渊图 缘鄄遭冤曰处理 员园 凿后袁标记菌株在番茄根围仍有一
定的种群数量渊图 缘鄄糟冤曰处理 圆园 凿后袁在番茄根围标
记菌株仍然能被观测到渊图 缘鄄凿冤遥
图 缘 激光扫描共聚焦显微镜观察标记菌株 孕栽杂鄄郧云孕在番茄根围的定殖情况 渊员园园 伊 冤
云蚤早援 缘 悦燥造燥灶蚤扎葬贼蚤燥灶 蚤皂葬早藻泽 燥枣 孕栽杂鄄郧云孕 燥灶 贼燥皂葬贼燥 则燥燥贼泽 遭赠 造葬泽藻则 泽糟葬灶灶蚤灶早 糟燥灶枣燥糟葬造 皂蚤糟则燥泽糟燥责藻 渊员园园 伊 冤
摇 摇 葬 耀 藻院 图中分别为灌根处理后 园尧猿尧缘尧员园尧圆园 凿遥 葬 原 藻院 栽则藻葬贼皂藻灶贼 葬枣贼藻则 园袁 猿袁 缘袁 员园袁 圆园 凿袁 则藻泽责藻糟贼蚤增藻造赠援
摇 摇 标记菌株 孕栽杂鄄郧云孕 单独或与病原菌先后灌根
处理后袁其在番茄根际土壤中种群数量的变化趋势
一致袁灌根后当天初始菌量接近 员园愿 悦云哉 辕 早曰处理 猿 凿
后袁种群数量迅速下降袁约 员园远 悦云哉 辕 早曰随后种群数
量缓慢下降袁处理 员园 凿 后袁种群数量约为 员园源 悦云哉 辕
早曰处理 猿园 凿 后标记菌株仍然能被检测到袁约为
圆园 悦云哉蛐早渊图 远冤遥 同时袁标记菌株 孕栽杂鄄郧云孕 单独处
理每次取样所测得的种群数量都略高于标记菌株
孕栽杂鄄郧云孕与青枯病菌先后混合灌根处理曰在接种青
枯病菌的顺序上袁园 耀 苑 凿 内先接种标记菌株 孕栽杂鄄
郧云孕再接种青枯病菌处理下标记菌株 孕栽杂鄄郧云孕 的
定殖数量高遥
猿 讨论
生物防治上应用最多的是促进植物生长的根际
细菌渊责造葬灶贼 早则燥憎贼澡 责则燥皂燥贼蚤灶早 遭葬糟贼藻则蚤葬袁 孕郧孕月冤袁孕郧孕月
通过定殖植物根系和优先占领植物根系或抑制根部
有害微生物来发挥作用咱员苑 原 员愿暂 遥 郧云孕 是一种良好的
标记物袁可直接尧准确地观测 孕郧孕月 在植物的根部行
为和作用方式咱员怨暂 遥 近年来袁以 郧云孕 为报告基因已
广泛应用于真菌的分子生物学研究中遥 郧云孕 基因
通过随机插入真菌基因组的方法袁已经被成功地用
来研究病原真菌生态尧病原菌侵染及病原菌与其寄
主的关系等咱圆园 原 圆圆暂 遥 本研究对枯草芽胞杆菌 孕栽杂鄄
猿怨源 进行了 郧云孕 标记袁并借助荧光显微镜对标记菌
株在番茄根部的定殖进行了初步研究袁为进一步阐
明枯草芽胞杆菌 孕栽杂鄄猿怨源 在植物根际的定殖尧扩展
和消长规律奠定了基础遥
本试验对研究室前期获得的一株高效生防菌
孕栽杂鄄猿怨源 成功进行绿色荧光蛋白标记后袁分别进行了
抑菌试验尧生长动力学分析和稳定性测试遥 结果表
明标记菌株孕栽杂鄄郧云孕生长速率尧抑菌活性与原始菌
园圆源 植摇 物摇 保摇 护摇 学摇 报 源员 卷
图 远 不同处理下标记菌株 孕栽杂鄄郧云孕在番茄根际土壤中的定殖数量
云蚤早援 远 阅赠灶葬皂蚤糟泽 燥枣 糟燥造燥灶蚤扎葬贼蚤燥灶 蚤灶 贼澡藻 贼燥皂葬贼燥 则澡蚤扎燥泽责澡藻则藻 燥枣 孕栽杂鄄郧云孕 葬枣贼藻则 凿蚤枣枣藻则藻灶贼 贼则藻葬贼皂藻灶贼泽
株 孕栽杂鄄猿怨源 相比没有明显差异袁这与殷幼平等咱员暂报
道一致遥 但不同枯草芽胞杆菌的生长周期不同袁殷
幼平等咱员暂报道的枯草芽胞杆菌 悦匝月杂园猿 及其标记菌
株在 蕴月培养基中培养 圆 澡后即进入对数生长期袁源 澡
后进入稳定生长期遥 本试验中枯草芽胞杆菌 孕栽杂鄄
猿怨源及其标记菌株在同样培养条件下袁圆 耀 愿 澡 是对
数生长期袁随后才进入稳定生长期遥
田兆丰等咱怨暂认为随着传代次数的增加袁工程菌
株的稳定性一般均有降低的趋势袁如绿色荧光蛋白
标记菌株 早枣责鄄运糟贼怨怨 在连续继代培养 员园 次后渊约
缘园 澡冤袁重组质粒的遗传稳定性为 愿怨豫 遥 芽胞杆菌在
自然条件下分裂一代所需时间为 缘园 耀 员园园 澡袁在实验
室适宜条件下约 圆园 皂蚤灶 分裂一代袁因此标记菌株可
以满足一般作物生育期研究的需要遥 殷幼平等咱员暂
报道袁在无选择压力培养条件下袁悦匝月杂园猿 标记菌株
连续传代 圆园 次袁质粒保有率为 苑圆豫 袁传代 猿园 次后
标记菌株的稳定性为 缘缘豫 遥 本试验中标记菌株在
没有选择压力的情况下袁连续传 员园 代袁质粒稳定性
为 愿愿豫 袁传 猿园 代后质粒稳定性为 远缘豫 袁因此可以用
来观测枯草芽胞杆菌 孕栽杂鄄猿怨源 在番茄根部的定殖
情况遥
田兆丰等咱怨暂研究绿色荧光蛋白标记菌株 早枣责鄄
运糟贼怨怨 在甘蓝根围的定殖时袁发现拮抗菌株在 猿 种
处理下袁即提前于甘蓝枯萎病菌 缘 凿 接种尧同时接种
或滞后接种袁其定殖数量及其对甘蓝枯萎病的防治
效果差异极显著曰提前接种拮抗菌株定殖能力强袁防
效最好袁同时接种次之袁病原菌接种 缘 凿 后再以拮抗
菌灌根防效较差袁定殖能力下降遥 与本试验结果一
致遥 标记菌株 孕栽杂鄄郧云孕 单独处理番茄苗每次取样
所测得的种群数量都略高于标记菌株 孕栽杂鄄郧云孕 和
青枯病菌菌液混合处理袁推测混合处理中袁拮抗细菌
和病原细菌之间可能存在定殖位点的抢占和营养竞
争袁青枯病菌的存在不利于标记菌株 孕栽杂鄄郧云孕 的定
殖遥 同时标记菌株处理的时间顺序对其定殖数量也
有一定影响袁处理 猿 凿 后先喷施标记菌株再接种番
茄青枯病菌的定殖数量较先接种青枯病菌后再喷施
标记菌株高袁推测先接种青枯病菌袁可能不利于标记
菌株定殖袁这还需要进一步验证遥
参 考 文 献 渊砸藻枣藻则藻灶糟藻泽冤
咱员暂 殷幼平袁 袁训娥袁 李强袁 等援 生防菌枯草芽孢杆菌 悦匝月杂园猿
的绿色荧光蛋白基因标记及其在柑橘叶片上的定殖援 中国
农业科学袁 圆园员园袁 源猿渊员苑冤院 猿缘缘缘 原 猿缘远圆
咱圆暂 酝葬扎扎燥造葬 酝袁 悦燥燥噪 砸 允袁 栽澡燥皂葬泽澡燥憎 蕴 杂援 悦燥灶贼则蚤遭怎贼蚤燥灶 燥枣 责澡藻灶葬鄄
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燥早赠袁 员怨怨怨袁 缘员院 远缘猿 原 远缘愿
咱源暂 李永刚袁 宋兴舜袁 赵雪莹袁 等援 生防枯草芽孢杆菌 蕴员 特性
的初步研究援 植物保护袁 圆园园愿袁 猿源渊员冤院 缘苑 原 远员
咱缘暂 王光华袁 砸葬葬蚤躁皂葬噪藻则泽 允 酝援 生防细菌产生的拮抗物质及其在
生物防治中的作用援 应用生态学报袁 圆园园源袁 员缘渊远冤院 员员园园 原
员员园源
咱远暂 车建美袁 刘波袁 蓝江林援 短短芽孢杆菌 允运鄄圆 的 郧云孕标记及
其抑菌作用援 中国生物防治袁 圆园员园袁 圆远渊圆冤院 圆猿园 原 圆猿源
咱苑暂 晕葬怎贼蚤赠葬造 悦 杂袁 允燥澡则蚤 允 运袁 杂蚤灶早澡 匀 月援 杂怎则增蚤增葬造 燥枣 贼澡藻 则澡蚤扎燥鄄
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糟则燥遭蚤燥造燥早赠袁 圆园园圆袁 源愿渊苑冤院 缘愿愿 原 远园员
员圆源源 期 刘邮洲等院 枯草芽胞杆菌 孕栽杂鄄猿怨源 的 郧云孕标记及其定殖能力
咱愿暂 砸葬皂燥泽 匀 允 韵袁 砸燥灶糟葬贼燥鄄酝葬糟糟葬则蚤 蕴 阅 月袁 杂燥怎扎葬 耘 酝袁 藻贼 葬造援 酝燥鄄
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早藻灶藻泽 糟燥灶泽贼蚤贼怎贼蚤增藻造赠 藻曾责则藻泽泽藻凿 枣则燥皂 葬 灶藻憎 遭则燥葬凿鄄澡燥泽贼 则葬灶早藻 增藻糟鄄
贼燥则援 允燥怎则灶葬造 燥枣 月蚤燥贼藻糟澡灶燥造燥早赠袁 圆园园圆袁 怨苑院 圆源猿 原 圆缘圆
咱怨暂 田兆丰袁 刘伟成袁 董丹袁 等援 生防枯草芽孢杆菌 运糟贼怨怨 的
郧云孕标记及其在甘蓝根部的定殖示踪援 华北农学报袁 圆园员圆袁
圆苑渊远冤院 缘猿 原 缘苑
咱员园暂 车建美袁 刘波袁 张彦袁 等援 青枯病生防菌蜡状芽孢杆菌
渊粤晕栽陨鄄愿园怨愿粤冤的绿色荧光蛋白基因渊早枣责冤转导及其生物学
特性的变化援 农业生物技术学报袁 圆园员园袁 员愿渊圆冤院 猿猿苑 原 猿源缘
咱员员暂 张淑梅袁 王玉霞袁 李晶袁 等援 基因标记枯草芽孢杆菌 月杂鄄
远愿粤在黄瓜上定殖援 生物技术袁 圆园园远袁 员远渊源冤院 苑猿 原 苑源
咱员圆暂 郧觟贼扎 酝袁 郧燥皂藻泽 晕 悦 酝袁 阅则葬贼憎蚤灶泽噪蚤 粤袁 藻贼 葬造援 杂怎则增蚤增葬造 燥枣 早枣责鄄
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糟则燥遭蚤燥造燥早赠 耘糟燥造燥早赠袁 圆园园远袁 缘远渊圆冤院 圆园苑 原 圆员愿
咱员猿暂 刘邮洲袁 陈志谊袁 梁雪杰袁 等援 番茄枯萎病和青枯病拮抗
细菌的筛选尧评价与鉴定援 中国生物防治学报袁 圆园员圆袁 圆愿
渊员冤院 员园员 原 员园愿
咱员源暂 悦葬燥 郧 匝袁 在澡葬灶早 载 匀袁 在澡燥灶早 蕴袁 藻贼 葬造援 粤 皂燥凿蚤枣蚤藻凿 藻造藻糟贼则燥鄄
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蕴藻贼贼藻则泽袁 圆园员员袁 猿猿渊缘冤院 员园源苑 原 员园缘员
咱员缘暂 姚震声袁 陈中义袁 陈志谊袁 等援 绿色荧光蛋白基因标记野
生型生防枯草芽胞杆菌的研究援 生物工程学报袁 圆园园猿袁 员怨
渊缘冤院 缘缘员 原 缘缘缘
咱员远暂 杨琦凤袁 尹贤贵袁 潘光辉袁 等援 重庆番茄青枯病病原鉴定
及抗源材料筛选援 西南农业学报袁 圆园园源袁 员苑渊员冤院 缘苑 原 远园
咱员苑暂 悦燥皂责葬灶贼 杂袁 阅怎枣枣赠 月袁 晕燥憎葬噪 允袁 藻贼 葬造援 哉泽藻 燥枣 责造葬灶贼 早则燥憎贼澡 责则燥鄄
皂燥贼蚤灶早 遭葬糟贼藻则蚤葬 枣燥则 遭蚤燥糟燥灶贼则燥造 燥枣 责造葬灶贼 凿蚤泽藻葬泽藻泽院 责则蚤灶糟蚤责造藻泽袁
皂藻糟澡葬灶蚤泽皂泽 燥枣 葬糟贼蚤燥灶袁 葬灶凿 枣怎贼怎则藻 责则燥泽责藻糟贼泽援 粤责责造蚤藻凿 葬灶凿 耘灶鄄
增蚤则燥灶皂藻灶贼葬造 酝蚤糟则燥遭蚤燥造燥早赠袁 圆园园缘袁 苑员渊怨冤院 源怨缘员 原 源怨缘怨
咱员愿暂 蕴怎早贼藻灶遭藻则早 月袁 运葬皂蚤造燥增葬 云援 孕造葬灶贼鄄早则燥憎贼澡鄄责则燥皂燥贼蚤灶早 则澡蚤扎燥遭葬糟鄄
贼藻则蚤葬援 粤灶灶怎葬造 砸藻增蚤藻憎 燥枣 酝蚤糟则燥遭蚤燥造燥早赠袁 圆园园怨袁 远猿院 缘源员 原 缘缘远
咱员怨暂 郝变青袁 马利平袁 乔雄梧援 郧云孕标记的植物促生菌 月怨远鄄陨陨鄄
早枣孕的定殖能力研究援 中国生态农业学报袁 圆园员园袁 员愿渊源冤院
愿远员 原 愿远缘
咱圆园暂 李丽珺袁 杨明秀袁 崔人方袁 等援 增强型绿色荧光蛋白基因
转化大豆疫霉菌及其表达援 植物保护学报袁 圆园员圆袁 猿怨渊员冤院
缘愿 原 远圆
咱圆员暂 肖荣凤袁 刘波袁 史怀袁 等援 生防菌哈茨木霉 云允粤栽鄄怨园源园 的
郧云孕标记及土壤定殖示踪援 植物保护学报袁 圆园员员袁 猿愿渊远冤院
缘园远 原 缘员圆
咱圆圆暂 闫立敏袁 王晓鸣袁 徐荣旗袁 等援 利用绿色荧光蛋白报告基
因标记研究麦根腐平脐孺孢对小麦根和叶片的侵染援 中
国农业科学袁 圆园员圆袁 源缘渊员苑冤院 猿缘园远 原 猿缘员源
渊责任编辑院高摇 峰冤
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