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Effect of nitrogen levels on the changes of phenol and flavonoid contents under rice monocropping and intercropping system

单/间作条件下氮肥水平对水稻总酚和类黄酮的影响


Plant N nutrition is important for plant metabolisms and its resistance to plant diseases. Two rice varieties with different resistance to rice blast, Huangkenuo(HKN) and Hexi-41 (HX41), were used to investigate the effect of nitrogen fertilizer rates on the changes of phenol and flavonoid contents in Huangkenuo rice plant and on its relationship to rice blast occurrence under rice monocropping and intercropping system. Results showed that high nitrogen level (N 300 kg/ha) reduced the biomass, yield, phenol and flavonoid contents in rice leaves, but increased the rice blast severity index, especially in monocropping Huangkenuo. Under rice intercropping treatment, high nitrogen rate had no significant effect on the yield and phenol content. However, the reduction of flavonoid content and increase of rice blast incidence were not as significant as in rice with the monocropping treatment. Under low nitrogen level, Hexi-41 and Huangkenuo intercropping increased the biomass, yield, phenol and flavonoid contents and decreased the occurrence and severity of rice blast. Results also suggested that negative correlation existed between the contents of phenol and flavonoid in leaves, and the rice blast incidence.


全 文 :收稿日期:!""#$"%$&& 接受日期:!""’$"($!#
基金项目:“)#*”计划前期研究专项(!""’+,&&#"&&);国家自然科学基金(*"(-""-&)资助。
作者简介:卢国理(&)’"—),男,湖南邵阳人,硕士研究生,主要从事植物营养与病虫害控制研究。./0123:343&)’"%"-5 62718 9:0
! 通讯作者 ;<3:"’#&$%!!#-%",./0123:=1743&5 >1?::8 9:0,3=1745 >71@8 单 !间作条件下氮肥水平对水稻
总酚和类黄酮的影响
卢国理,汤 利!,楚轶欧,周文利,苏海鹏,刘自红,郑 毅
(云南农业大学资源与环境学院,云南昆明 -%"!"&)
摘要:采用田间试验研究了主栽杂交稻合系$(&和优质糯稻黄壳糯间作条件下,高氮供应(B*"")对易感病品种黄壳
糯叶片中总酚和类黄酮含量、生物量、产量和稻瘟病发生的影响。结果表明,高氮供应(B*"")显著降低了单作黄壳
糯的生物量、产量及体内总酚和类黄酮含量,增加了稻瘟病发生的严重程度;而对间作黄壳糯产量和总酚含量无显
著影响,对类黄酮含量的降低及稻瘟病发生的增加不及单作显著。在低氮供应(B&’")下,合系$(&与黄壳糯间作中
黄壳糯较其单作明显提高了生物量和产量,提高了间作黄壳糯叶片中总酚和类黄酮含量,降低了稻瘟病发生。黄
壳糯叶片中总酚和类黄酮含量与稻瘟病的发生呈负相关趋势。
关键词:氮肥水平;单作;间作;总酚;类黄酮
中图分类号:C(*%D&&&D( E &;C%&&D"- 文献标识码:F 文章编号:&""’$%"%G(!""’)"-$&"-($"-
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56-%)/$%:R317= 72=S:4<7(B)7@=S2=2:7 26 20P:S=17= T:S P317= 0<=1U:32606 17A 2=6 S<626=179< =: P317= A26<16<6 8 ;V: S29<
W1S2<=2<6 V2=? A2TT=2:76?2P =: S29< U316= :99@SS<79< @7A6=<08 \<6@3=6 6?:V32<3A,P?<7:3 17A T31W:7:2A 9:7=<7=6 27 S29< 3<1W<6,U@= 279S<16U316= 6 27A 27 0:7:9S:PP274 K@174X<7@:8 I7A7: 62472T2917= 2<3A 17A P?<7:3 9:7=<7= 8 K:VU316= 2792A<79< V16 7:= 16 62472T2917= 16 27 S29< V2=? =?< 0:7:9S:PP274 =S<1=0<7= 8 I7AK@174X<7@: 27=2<3A,P?<7:3 17A T31W:7:2A 9:7=<7= 17A A<9S<166 :T S29< U316= 8 \<6@3=6 136: 6@44<6=27 3<1W<6,17A =?< S29< U316= 2792A<79<8
7#4 8&)1-:72=S:4<7 3水稻品种多样性种植具有抗病、抗倒伏,增产增
收的特点[&]。研究表明,在田间条件下,通过水稻不
同基因型品种混种间作,使粳稻稻瘟病减少 ’-D!^
!))D’^,杂交稻稻瘟病减少 *(D)^!%!D"^[!]。唐
旭等[*]研究也表明,在不同氮、硅营养条件下,水稻
间作能显著降低水稻叶瘟病发病率和病情指数。间
植物营养与肥料学报 !""’,&((-):&"-($&"-)
""""""""""""""""""""""""""""""""""""""""""""""""""""""""""""""
R317= B@=S2=2:7 17A _作对水稻黄壳糯叶瘟和穗瘟的防效分别为 !"#$%
和 $&#$%;叶瘟和穗瘟的病情指数分别降低 $’#’%
和 ()#*%。目前,有关不同品种水稻间作提高水稻
稻瘟病抗病性的可能机制,已从水稻遗传多样性、稀
释作用和阻隔作用、诱导抗性和田间微气候变化等
方面进行了研究[!+,]。另有研究也表明,不同水稻
品种间作降低水稻稻瘟病的危害程度与氮肥供应水
平和水稻氮素营养水平密切相关[$+(]。
据报道,水稻稻瘟病的发生程度与氮肥施用量
有关[$+*]。施氮肥越多,发病越重[-],增施氮肥显著
促进水稻叶瘟和穗瘟病的发生,加重病害的严重程
度;虽然抗性丧失的程度和快慢还受其他因素影响,
但抗瘟性的丧失往往首先出现在氮肥施用量大的稻
田,["]。水稻稻瘟病的发病率随施氮水平的增加而
增加,可能与具有显著抗稻瘟病病菌特性的酚类化
合物和黄酮类物质的含量下降有关[)+&]。缺氮植物
的酚类化合物含量通常很高,当大量供应氮素时,酚
代谢的一些关键酶活性下降[!’],酚的含量和抗稻瘟
病的能力就降低[!!]。但有关水稻不同品种间作系
统中水稻叶片酚类和类黄酮等抗病性物质含量的变
化、氮肥供应水平对间作水稻叶片酚类和类黄酮等
抗病性物质含量的影响及其对水稻稻瘟病发生的影
响,目前尚未见系统的研究报道。
因此,研究了不同水稻品种间作条件下,高水平
氮素供应时水稻抗病性物质(酚类、类黄酮)含量、水
稻生物量和产量及稻瘟病的发生;探讨水稻间作对
水稻体内酚类、类黄酮等抗病物质的影响及其与间
作抗稻瘟病的关系,以期为揭示水稻品种多样性种
植提高抗病性的机制和利用生物多样性持续控制水
稻病害提供理论基础。
! 材料与方法
!"! 试验设计
试验设在云南省陆良县板桥镇左里堡村
(!’(#"(./,,-#’(.0),海拔 !)$( 1。供试土壤系红壤
性母质发育的水稻土,前茬作物为油菜。土壤基本
理化性质为:23 *#)$,有机质 !&#,( 4 5 64,全氮 !#$’
4 5 64,速效磷 ,-#&* 14 5 64,速效钾 *,#,, 14 5 64。
供试水稻品种为当地主栽的矮杆杂交稻品种合
系 + (!(37(!)和高秆优质糯稻品种黄壳糯(380),
其主要农艺性状见表 !。
表 ! 供试水稻品种的主要农艺性状
#$%&’ ! ()*’ +$,)’-)’. $/0 -1’), $2,3/34)* -,$)-.
品种
9:;<=><=?
类型
@A2=?
抗瘟性
B=?:CD= >E FG:?>
株高(D1)
HG:C> I=<4I>
千粒重(4)
!’’’J4;:
产量(64 5 I1,)
L<=GM
合系J(! 3=N:C> !’, ,"#- &*-’
黄壳糯 3P:C46=CPE 糯稻 QGP>试验采用 ,种种植模式,即:间作(合系+(! 与
黄壳糯间作),记做 ST,单作(合系+(!、黄壳糯分别单
作),记做 UT;, 个氮肥施用水平,即 0 $’’ 和 !)’
64 5 I1,(分别记做 0$’’和 0!)’),组成 (个处理,分别
为 0$’’+S,0!)’+S,0$’’+U和 0!)’+U,$次重复。其中间
作以杂交稻合系+(!为主栽品种,优质稻黄壳糯为间
栽品种,种植规格是 "行合系+(!间 !行黄壳糯。小
区面积 -( 1,。氮肥按基肥 -’%,分蘖肥 ,-%,抽穗
肥 ,-%分 $ 次施用。磷、钾肥水平全部做基肥施
用,用量分别为 H,V- &" 64 5 I1, 和 8,V !-’ 64 5 I1,。
小区间打埂覆膜以防止肥料串流,每小区单独排灌
与施肥管理。水稻于 ,’’- 年 $ 月 !& 日播种,,’’-
年 -月 !(日移栽,,’’- 年 & 月 ,) 日收获。当地纹
枯病不严重,整个生育期不使用杀菌剂和杀虫剂,其
他按当地常规管理。田间调查、采样与室内分析同
步进行。
!"5 取样与分析
分别在水稻移栽后 *) M(分蘖盛期)、)) M(孕穗
期)、&( M(抽穗期)、!’) M(灌浆期)对黄壳糯单、间作
小区取样,每个小区每次随机采 (丛,分别测定平均
每丛生物量,黄壳糯植株叶片总酚、类黄酮等化合
物含量。合系+(! 不发稻瘟病,没有进行采样和分
析。
总酚和类黄酮含量采用 !%的盐酸化甲醇溶液
于暗处提取 ,( I((W),蒸馏水稀释后,于紫外分光
光度计上测定 VX,)’C1和 VX$,-C1值,类黄酮含量以
14 5 4,YZ表示,总酚含量以没食子酸标准曲线加以
计算[!,]。
!"6 病害调查与统计分析
于水稻移栽后 *) M(分蘖盛期)、)) M(孕穗期)、
-"’!"期 卢国理,等:单 5间作条件下氮肥水平对水稻总酚和类黄酮的影响
!" #(抽穗期)、$%& #(灌浆初期)调查黄壳糯叶瘟发
病情况;于 $%! #(灌浆初期)、$$’ #(灌浆期)、$() #
(灌浆末期)调查黄壳糯穗瘟发病情况(合系*"$不发
病)。采用 +点调查法,每点 )丛。稻瘟病的分级标
准、发病率和病情指数均按中华人民共和国国家标
准(,- . /$+0!%*$!!+)中的稻瘟病调查和测报法规的
标准进行[$)]。
发病率(1)2发病株(叶、穗)数 .调查总株(叶、
穗)数 3 $%%1
病情指数 2!(各级发病数 3代表值).(总叶或
穗数 3最高级代表值)3 $%%
测定数据用 45678和 9:99软件进行统计分析。
! 结果与分析
!"# 供氮水平对黄壳糯生物量和产量的影响
试验表明,高氮供应(;)%%)显著影响黄壳糯的
生物量和产量,但对黄壳糯间作和单作的影响不同。
表 (看出,;)%%条件下,合系*"$与黄壳糯间作显著提
高了黄壳糯的生物量和产量。在各生育期内,黄壳
糯的生物量间作较单作黄壳糯分别增加了 $(<01、
$)<+1、+<01、"&<01;在分蘖期、抽穗期、成熟期生
物量差异达到了显著水平。间作黄壳糯的子粒产量
较单作增加了 "$<&1,差异显著;而 ;$&%条件下,间
作产量略高于单作,未达显著差异水平。
在单作条件下,高氮供应显著降低了黄壳糯的
生物量和子粒产量,成熟期 ;)%%比 ;$&%处理分别降
低了 )(<01和 (!<+1。在分蘖期、抽穗期和灌浆
期,生物量增加,且分蘖期和灌浆期差异显著,分别
比常规氮处理增加了 ("<&1和 $)<)1。在间作条
件下,除分蘖期外,抽穗期、灌浆期和成熟期,高氮处
理生物量比常规氮处理分别增加了 ++<01、)!<(1
和 $+<01;而子粒产量无明显差异。
表 ! 供氮水平对水稻黄壳糯生物量和产量的影响($ % &’()*+,,- . #!)
/01’+ ! 233+&*) 43 50,64() 3+,*6’676-$ *,+0*8+-*) 4- 16480)) 4, 96+’: 43 ;(0-$<+-(4
处理
/=7>?@7A?
分蘖期
/B887=BAC D?>C7
抽穗期
E7>#BAC D?>C7
灌浆期
FB88BAC D?>C7
成熟期
GBH7ABAC D?>C7
生物量 -BI@>DD 生物量 -BI@>DD 生物量 -BI@>DD 生物量 -BI@>DD 产量 JB78#
;)%%*KL $)<0( M %<&+ > ))<’0 M %<&( > +0<(& M "<+& > ’&<)’ M $<’( > ("<+’ M (<$+ >
;)%%*NL $(<$0 M % "+;$&%*KL $(<)’ M %<&& >O ($<’) M (<(! 6 "$<$+ M %<’0 6 +!<%! M $<$! O (+<(" M $
;$&%*NL !<0+ M %<)& 6 (&<)0 M (
注(;I?7D):同列数据后不同字母表示在 ! P %<%+水平差异显著,下同。Q8R7D SI88IT7# OU #BSS7=7A? 87??7=D BA D>@7 6I8R@A >=7 DBCABSB6>A? >? +1
87V78 W /X7 D>@7 O78ITW
!"! 供氮水平对黄壳糯抗病性物质的影响
(<(<$ 黄壳糯总酚含量 ;)%%条件下,各生育期黄
壳糯叶片总酚含量均是间作明显高于单作(表 ))。
在移栽后 0&、&&、!" #,间作黄壳糯总酚含量与单作
差异均达显著水平,增幅分别为 $!<$1、$"$"<)1。在 ;$&%条件下,间作黄壳糯叶片总酚含量
也较单作呈增加的趋势,但仅在移栽后 &&、!" # 时
达到显著差异水平,分别较单作黄壳糯增加了
+了水稻生长期叶片总酚含量,在高氮条件下尤为显
著。
在单作条件下,;)%%处理黄壳糯在移栽后 0&、&&
#时,叶片总酚含量较 ;$&%处理分别下降了 $’和 $%<’1;但在间作条件下,高氮处理与常规氮肥
处理无显著差异。
(<(<( 黄壳糯类黄酮含量 合系*"$与黄壳糯间作
增加了黄壳糯叶片的类黄酮含量,尤在高氮水平下
显著。表 )看出,在 ;)%%处理,间作显著增加了黄壳
糯叶片的类黄酮含量。与单作黄壳糯相比,在各生
育期内间作黄壳糯叶片的类黄酮含量显著增加,增
幅分别为 !<&1、$+件下,间作黄壳糯在移栽后 &&、!"、$%& #时,叶片类
黄酮含量也比单作分别增加了 &<01、"<&1、
((<+1。单作条件下,高氮处理黄壳糯类黄酮含量
在移栽后 0&、&&、!" # 时较常规氮处理分别降低了
("理较常规氮处理则分别降低 $(<)1、$’<%1 和
+<01。高氮处理(;)%%)对降低单作黄壳糯类黄酮含
量较间作更为明显。
’’%$ 植 物 营 养 与 肥 料 学 报 $"卷
表 ! 供氮水平对黄壳糯叶片总酚和类黄酮含量的影响("# $ #,% & ’()
)*+,- ! .//-012 3/ 45//-6-%1 %5163#-% *77,50*153% 3% 78-%3, *%4 /,*93%354 03%1-%12 3/ :;*%#<-%;3
处理
!"#$% &
移栽后天数 ’$() $*%#" %"$+),-$+%.+/(0)
12 22 34 562
总酚
78#+9-
类黄酮
:-$;9+9.0
总酚
78#+9-
类黄酮
:-$;9+9.0
总酚
78#+9-
类黄酮
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总酚
78#+9-
类黄酮
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<=66>?@ 5A3= B 6A65 $ CCA44 B 6A22 D 5A3= B 6A6E $F C4A31 B 5AG2 D 6A1E B 6A61 $F 53A4= B 6AC= F 6ACC B 6A56 $ E=A4G B EA66 $
<=66>H@ 5ACE B 6A6E F C6AG5 B 6AC= 0 5AC2 B 6A63 D GCA6G B EA6E 0 6AC= B 6A65 D 5CA11 B 6AE= D 6AGC B 6A6= $ 51AC6 B 6AE4 F
<526>?@ 5A3C B 6A6E $ 1GA13 B 5AG4 F 5A33 B 6A5E $ 11A=2 B 5A6C $ 6A1C B 6A6E $ E6AC5 B 6A5G $ 6AC1 B 6A56 $ E4A41 B 5A16 $
<526>H@ 5A3G B 6A56 $ 26AG= B 5A6G $ 5A22 B 6A6G F 15A52 B 6A3G F 6ACG B 6A6= FD 53ACC B 6A=1 F 6AC5 B 6A6= $ 53A31 B 5AEG F
(=! 供氮水平对黄壳糯稻瘟病发生的影响
EA=A5 黄壳糯叶瘟 随着水稻生育期的推移,黄壳
糯叶瘟呈加重趋势,但不同种植方式下,叶瘟发生的
严重程度不同。图 5表明,合系>45与黄壳糯间作显
著降低了黄壳糯叶瘟的发生和病情指数,高氮供应
时尤为显著。<=66条件下,间作黄壳糯 4 个生育期
(分蘖盛期、孕穗期、抽穗期、灌浆初期)叶瘟发病率
较单作分别降低了 56AGI、5EA6I、E1A5I、4A4I;
病情指数分别降低了 55A5I、2A2I、2A6I、=A=I。
在 <526条件下,相应的发病率分别降低了 5GA2I、
E5A6I、5EA5I、E6A1I;相应的病情指数分别降低
了 1A5I、4AEI、56AGI、EEAEI。
在单作条件下,<=66处理叶瘟的发病率较 <526分
别增加 E6A6I、=3A1I、16AEI和 4=AEI,病情指数
分别增加 E2ACI、45A1I、=5ACI和 54A2I;在间作
条件下,相应的叶瘟的发病率分别增加了 E2A1I、
=3A1I、45AEI和 1EA1I,相应的病情指数分别增加
E=A5I、=4A2I、=GA=I和 4EA3I。
图 ’ 供氮水平对黄壳糯叶瘟发病率和病情指数的影响
>5#?’ .//-012 3/ %5163#-% ,-9-,2 3% 5%054-%0- *%4 452-*2- 5%4-@ 3/ ,-*/ +,*21 3/ :;*%#<-%;3
EA=AE 黄壳糯穗瘟 与叶瘟相似,无论是高氮处理
(<=66)还是低氮处理(<526),黄壳糯的穗瘟发病率和
病情指数在各生育期内均是间作低于单作。在高氮
(<=66)供应条件下,间作更有利于降低黄壳糯穗瘟
的发生。
图 E表明,<=66处理的间作黄壳糯穗瘟发病率和
病情指数较单作显著降低。灌浆初期、灌浆期、灌浆
末期穗瘟发病率较单作分别降低了 CGA1I、G2A3I
和 4CA4I,病情指数分别降低了 C6A6I、C1AGI、
CEA=I。<526处理的间作黄壳糯穗瘟发病率比单作
分别降低 EAEI、CGA=I、GGAEI,病情指数分别下降
E6A6I、CCA1I、CCA1I。
高氮供应显著增加了黄壳糯穗瘟发生和危害程
度,尤其是单作条件下。在间作条件,<=66处理穗瘟
发病率高于 <526处理,相应生育期增幅分别为
5A4I、5G4A5I、34A6I,病情指数增幅分别为
1GA6I、5C6A6I、E6A6I。在单作条件下,<=66较 <526
处理穗瘟发病率增幅达 523A5I、554AGI、CEA=I,
病情指数增幅为 EG6A6I、5CCA1I、24A2I。
1C65C期 卢国理,等:单 J间作条件下氮肥水平对水稻总酚和类黄酮的影响
图 ! 供氮水平对黄壳糯穗瘟发病率和病情指数的影响
"#$%! &’’()*+ ,’ -#*.,$(- /(0(/+ ,- #-)#1(-)( 2-1 1#+(2+( #-1(3 ,’ 42-#)/( 5/2+* ,’ 672-$8(-7,
!9: 有关抗病物质与稻瘟病发生的关系
本研究表明,随着氮肥水平提高,单作黄壳糯叶
片总酚和类黄酮含量明显减少,稻瘟病发生也变得
严重。统计分析(表 !)表明,移栽后 "! #(抽穗期),
黄壳糯叶片中的总酚和类黄酮含量与稻瘟病的发生
呈明显负相关关系;高氮供应和单作黄壳糯叶片类
黄酮含量与稻瘟病发生呈显著或极显著负相关。虽
然稻瘟病发病率和类黄酮与总酚含量的相关关系可
能还受其他因素的影响,如气候、遗传等,但至少说
明水稻体内存在这些物质,其含量与稻瘟病的发生
率呈负相关,特别是在高氮供应和单作条件下。
表 : 水稻黄壳糯叶片中类黄酮和总酚含量与稻瘟病叶瘟发病率的关系(移栽后 ;: 1)
<25/( : =,..(/2*#,- 5(*>((- ’/20,-,#1,*,*2/ 4?(-,/+ 5@ .#)(’+ /(2’ 2-1 #-)#1(-)( ,’ .#)( 5/2+*(;:AB<)
处理
$%&’()&*(
稻瘟病
+,-& ./’0(
类黄酮 1/’23*3,# 总酚 $3(’/ 45&*3/0
相关方程
63%%&/’(,3* &78’(,3* %
相关方程
63%%&/’(,3* &78’(,3* %
9:;; 发病率 <*-,#&*-& = > ? @ABB"CD E FG;AH ;A";G! = > ? CGA:"BD E FF:AG" ;AG:;
9FC; 发病率 <*-,#&*-& = > ? !A;C!:D E FFBABF ;AB;H = > ? ::A@G!D E @"AFC" ;AGGC
<6 发病率 <*-,#&*-& = > ? BAFG"@D E FC:A@B ;AGB; = > ? !!AFC@D E BHAB@: ;A:;:
I6 发病率 <*-,#&*-& = > ? CA"@;:D E HF!A;@ ;A"C@!! = > ? :;BAC!D E H!BA@! ;A!G:
C 讨论
本试验表明,水稻间作显著降低了水稻叶瘟和
穗瘟的发病率及病情指数,这与以往的许多研究结
果一致[F?!]。与单作相比,间作显著降低了高氮条
件下稻瘟病特别是穗瘟的发生和危害程度(图 F、
图 H),因而显著提高了高氮条件下黄壳糯的产量
(表 H)。进一步证明了水稻间作的控病效果和产量
提高与氮肥施用水平密切相关[:?!]。
总酚和类黄酮是植物体内重要的次生代谢物
质。稻瘟病的发生与水稻叶片总酚和类黄酮含量关
系较为密切。有研究表明,大量施用氮肥使合成酚
的关键酶—苯丙氨酸解氨酶、酪氨酸解氨酶活性下
降,导致植株总酚以及类黄酮含量下降[FF]。
高氮供应显著增加了水稻稻瘟病的发病率和病
情指数,这与以往的研究结果一致[:?B]。其原因可
能是施氮促进植物生长,幼嫩组织增加,增加了感病
的机会[F!?F@],也可能与具有显著抗稻瘟病病菌特性
的酚类化合物和黄酮类物质的含量下降有关[C?"],
或者是增加了植株质外体中氨基酸、酰胺的浓度,而
酚代谢酶活性降低,木质素含量下降及硅积累减
少[FG]。
本试验初步说明,高氮条件下,间作水稻减轻稻
瘟病的发生与水稻体内总酚和类黄酮含量增加密切
相关。但关于间作对提高水稻叶片的总酚和类黄酮
含量,是间作促进了高氮供应时氮的同化,还是间作
提高了酚代谢酶的活性;是与水稻叶片游离氨基酸
和可溶性糖含量有关,还是与种间间作引起他感作
用导致该类物质含量的变化有关,尚有待进一步研
究。
CG;F 植 物 营 养 与 肥 料 学 报 F!卷
参 考 文 献:
[!] 朱有勇,陈海如,范静华,等 " 利用水稻品种多样性控制稻瘟病
研究[#]" 中国农业科学,$%%&,&’(():($!)($*+
,-. / /,0-12 3 4,562 # 3 !" #$ % 7-1 .81 9: ;<=1 >6;<1?@ A<>1;8:9; ;<=1 BC68? =92?;9C[#]" D=< " EF;<=" D<2",$%%&,&’(():($!)($*+
[$] ,-. / /,0-12 3 4,562 # 3 !" #$ % G121?<= A<>1;8=92?;9C <2 ;<=1[#]" H6?.;1,$%%%,I%’(!*):*!J)*$$+
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