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Comparation of Tolerance under NaCl Stress between Two Salvia Plants and Study of the Physiological Mechanisms

2种鼠尾草对NaCl胁迫的耐受性比较及其生理机制研究



全 文 :书西北植物学报!
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文章编号$
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收稿日期$
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&修改稿收到日期$
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基金项目$中国科学院战略生物资源科技支撑体系运行专项"
12324*#
#&广东省高等学校教育教学改革项目"
5657!"#)!&#%
#&广东省大
学生创新训练项目"
!"#)#%#++"%)
#
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作者简介$许
!
华"
#8#(
#!硕士!副教授!主要从事植物生理生态学研究
9*:;.<
$
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通信作者$魏宇昆!博士!高级工程师!主要从事植物生态学与保育生物学研究
9*:;.<
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$
种鼠尾草对
%&(
胁迫的耐受性比较
及其生理机制研究

!
华#!梁春虹#!赵美棠#!魏宇昆!"!黄艳波!
"
#
北京师范大学珠海分校 工程技术学院!广东珠海
"+
&
!
上海辰山植物园!中国科学院上海辰山植物科学研究中心!上海
!"#$"!
#

!
要$以具有较高药用和观赏价值的美丽鼠尾草和贵州鼠尾草为实验材料!分析
!
种鼠尾草在
G;1<
"(
!""
(
%""
(
)""
(
&""
(
$""::H<
)
I
(#
#胁迫下的生长(叶绿素含量(保护酶活性和有机渗透调节物质含量的变化!以明确
!
种鼠
尾草对
G;1<
胁迫的耐受性差异及其生理机制结果显示$"
#
#在实验
G;1<
浓度范围内!美丽鼠尾草的受害程度均
高于贵州鼠尾草&"
!
#随着
G;1<
浓度的提高!贵州鼠尾草叶片叶绿素含量无显著变化!而美丽鼠尾草叶绿素含量逐
渐显著降低&"
%
#当
G;1<
浓度从
"
增加到
&""::H<
)
I
(#时!
!
种鼠尾草叶片的
JK6
(
1LM
活性以及可溶性糖(可
溶性蛋白质和脯氨酸含量逐渐升高!且美丽鼠尾草叶片的
NK6
活性也逐渐升高&"
)
#当
G;1<
浓度达到
$""::H<
)
I
(#时!美丽鼠尾草叶片可溶性糖(可溶性蛋白质和脯氨酸含量继续增加!
NK6
(
JK6

1LM
活性开始降低但仍显
著高于对照!而贵州鼠尾草叶片的
JK6

1LM
活性继续增加!可溶性糖(可溶性蛋白质和脯氨酸含量开始降低但
仍显著高于对照研究表明!贵州鼠尾草在
G;1<
胁迫下具有较高的渗透调节物质含量!而且随着
G;1<
浓度的增
加能够维持较高的保护酶活性!因此对
G;1<
胁迫的耐受性强于美丽鼠尾草
关键词$
G;1<
胁迫&贵州鼠尾草&美丽鼠尾草&渗透调节物质&保护酶
中图分类号$
O8)&,+8
!!!
文献标志码$
L
")
*
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#
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[
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]
D
:A
!!
近年来!土壤盐渍化逐渐成了生态环境和农业
发展中的严峻问题*#+植物在盐渍化环境中!生长
缓慢!代谢活动被抑制!甚至会出现盐斑(叶片萎蔫!
甚至死亡等现象*!+据最新的研究!国内盐碱地总
面积达到了
%+,)^#"
$
?:
!
!仍然呈现逐渐增长的
趋势*%+目前!对土壤盐碱地改良的生物措施主要
是筛选或培育一些具有耐盐和抗盐能力的植物!以
及在盐碱土壤上引种和驯化有经济价值的盐生植物
和耐盐植物随着生物技术的发展!利用传统的杂
交技术和遗传工程方法培育抗盐新品种和培育转抗
盐基因植物也是一种土壤盐碱地改良的生物
措施*)+
美丽鼠尾草"
!"#$%"(%#%()*%*
#和贵州鼠尾草
"
!&+"$"#(,%(%
#同属于唇形科"
I;F.;U;A
#鼠尾草属
"
!"#$%"
#荔枝草亚属"
N>F
S
,!+#",("
#丹参组"
NACU,
.,
/
0*
1
2"+(
#中的植物美丽鼠尾草主要分布在
安徽西部海拔
)""
"
#%"":
的山坡(林下及草丛&
贵州鼠尾草主要分布在湖北(广东(广西(四川(贵州
海拔
&%"
"
#%"":
的山坡(林下(水沟边*&+美丽
鼠尾草和贵州鼠尾草均是重要的中药材美丽鼠尾
草的干燥根在安徽地区被代作丹参入药*$+中药丹
参是丹参"
!"#$%"%#3%0,,2%4"
#的干燥根及根茎!具
有祛瘀止痛!活血通经!清心除烦的功效!以丹参组
成的复方制剂在治疗心脑血管疾病方面疗效显
著*++贵州鼠尾草是全草均可入药!用于治疗吐血!
咳血!血痢!血崩!刀伤出血!月经过多!胃腕痛&外用
于跌打损伤!疖肿*+丹酚酸
3
是丹参活血化瘀功
效的主要成分!景鹏飞*8+研究表明贵州鼠尾草的丹
酚酸
3
含量高于丹参同时!在我们的前期引种(
栽培和驯化研究中发现! 种鼠尾草还具有一定的
观赏价值和较强的生态适应性
目前!对美丽鼠尾草的研究报道仅在于其化学
成分*#"+!贵州鼠尾草的研究报道仅在于其化学成
分*##+和药理研究*#!*#%+!而关于美丽鼠尾草和贵州鼠
尾草的抗逆性以及对逆境的适应机制的研究尚未见
报道对于植物抗逆性包括抗盐性的生理机制!国
内外学者做了大量的研究工作!发现植物的渗透调
节能力和保护酶活性与植物的抗逆性有重要的关
系*#)*#++为此!本研究以美丽鼠尾草和贵州鼠尾草
为实验材料!研究了不同浓度的
G;1<
胁迫下! 种
鼠尾草生长(叶绿素含量(保护酶活性和有机渗透调
节物质含量的变化!比较了
!
种鼠尾草的耐
G;1<
胁迫能力及耐受性差异的生理机制!旨在为其引种(
栽培等提供一定的理论依据
#
!
材料与方法
>,>
!
实验材料
美丽鼠尾草和贵州鼠尾草分别引种自安徽省岳
西县郊外和湖南张家界市!供试材料均为一年生的
实生苗!栽植于北京师范大学珠海分校苗圃
>,$
!
实验设计
选择生长良好(长势基本一致的美丽鼠尾草和
贵州鼠尾草各
%"
株种植于高度为
!"C:
(直径为
#C:
的花盆中!每盆
#
株培养基质厚度为
#+
C:
!基质为土
_
鸡粪按
%_#
配比待植株生长正
常后!设
&

G;1<
胁迫处理浓度$
!""
(
%""
(
)""
(
&""

$""::H<
)
I
(#
G;1<

#
个对照"去离子
水#!处理和对照各
&
次重复!进行一次性
G;1<

迫处理每盆植株浇灌相应浓度的
G;1<
处理液
#&":I
!对照浇灌等量的去离子水处理后随机排
列于室外进行培养每天观察并拍照记录每盆植株
的外部形态当发现有植株濒临死亡时将所有植株
收获!清洗植株并用吸水纸吸干残留水分取第
+
片叶立即测定叶绿素含量!取
!
种鼠尾草植株的第
)
片叶密封于封口袋后立即保存于
)`
冰箱用于测
定渗透调节物质的含量!取第
%
片叶密封于封口袋
8&&
%
期 许
!
华!等$
!
种鼠尾草对
G;1<
胁迫的耐受性比较及其生理机制研究
后立即保存于
(+"`
冰箱中用于测定保护酶活性
>,?
!
项目测定
>,?,>
!
植株受害等级评定
!
观察植株的生长情况!
划分为
&
个伤害等级$
L*
生长正常&
3*
部分叶片发
黄&
1*
叶片发黄且叶缘卷曲&
6*
叶片局部变暗&
9*

片萎蔫!植株濒临死亡
>,?,$
!
叶绿素含量测定
!
叶绿素含量测定采用比
色法*#+!用乙醇
_
丙酮
a%_#
混合液溶解叶绿素!
分别在波长
$$%

$)&0:
下测定吸光度!再计算单
位鲜重中叶绿素的含量"
:
S
)
S
(#
#
>,?,?
!
酶活性测定
!
NK6
活性测定采用氮蓝四唑
光还原法*#+!在
&$"0:
下以抑制
G3M
光化还原
&"b
所需酶含量为
#
个酶活力单位"
P
#
1LM

力测定采用高锰酸钾滴定法*#8+!以每克鲜重样品
%
:.0
内分解过氧化氢的毫克数为酶活力单位
JK6
活性测定采用愈创木酚法*#+!在
)+"0:
波长下以
每分钟
K6
增加
","#

#
个活力单位
>,?,@
!
有机渗透调节物质含量的测定
!
可溶性蛋
白质含量的测定采用考马斯亮蓝
5*!&"
法*#+!用结
晶牛血清白蛋白制作标准曲线!在波长
&8&0:

测定吸光度!再计算单位鲜重中可溶性蛋白质含量
"
:
S
)
S
(#
#可溶性糖含量的测定采用蒽酮比色
法*#+!在
$!&0:
波长下测定吸光度!再计算单位鲜
重中可溶性糖含量"
:
S
)
S
(#
#脯氨酸含量的测定
采用酸性茚三酮比色法*#+!以脯氨酸制作标准曲
线!在波长
&!"0:
处测定吸光度!再计算单位鲜重
中脯氨酸含量"
#
S
)
S
(#
#
>,@
!
数据分析
利用
NJNN!!,"
统计软件进行单因素方差分
析!并对平均值进行
6>0C;0
多重比较!显著性水平

","&
绘图采用
T.CYH/HXU9=CA
!
!
结果与分析
$A>
!
%&(
胁迫对
$
种鼠尾草植株外部形态的影响
由表
#
可知!随着
G;1<
浓度的增加!植株表现
出不同的盐害症状当
G;1<
浓度为
!""::H<
)
I
(#时!美丽鼠尾草植株叶片开始发黄&随着
G;1<
浓度的增加!美丽鼠尾草大部分植株叶片发黄且叶
缘卷曲&当
G;1<
浓度升高到
$""::H<
)
I
(#时!美
丽鼠尾草受害更加严重!有植株叶片萎蔫甚至濒临
死亡而在
%""::H<
)
I
(#
G;1<
胁迫下!贵州鼠尾
草仅有
!
盆植株叶片发黄!即使在
G;1<
浓度增加

$""::H<
)
I
(#时!贵州鼠尾草也仅有
%
盆植株
叶片发黄且叶缘卷曲! 盆植株部分叶片发黄!并无
植株枝叶枯焦甚至濒临死亡可见!贵州鼠尾草受
盐害程度较美丽鼠尾草轻
$A$
!
%&(
胁迫对
$
种鼠尾草新叶叶绿素含量的
影响
!!
由图
#
可以看出!无
G;1<
胁迫时贵州鼠尾草
叶片的叶绿素
;
(
F
和总含量均高于美丽鼠尾草随
G;1<
浓度的增加!贵州鼠尾草叶片叶绿素
;
(
F
和总
含量均无显著变化&而美丽鼠尾草叶片叶绿素
;
(
F
和总含量呈下降的趋势!三者含量在
G;1<
浓度为
!""::H<
)
I
(#时!较对照即已有显著降低在所

G;1<
浓度胁迫下!贵州鼠尾草叶片的叶绿素
;
(
F
和总含量均显著高于美丽鼠尾草
$A?
!
%&(
胁迫对
$
种鼠尾草保护酶活性的影响
由图
!
!
L
可知!贵州鼠尾草在不同浓度
G;1<
胁迫下
NK6
活性与对照相比无显著变化美丽鼠
尾草
NK6
活性随着
G;1<
浓度的增加呈先下降后
上升再下降的趋势在
!""::H<
)
I
(#
G;1<
浓度
时!美丽鼠尾草
NK6
活性较对照降低但差异不显

>
!
%&(
胁迫对
$
种鼠尾草的伤害等级
M;F!
6;:;
S
A
S
Y;BAHXUEH*"#$%">0BAYG;1G;1<
浓度
G;1%"
::H<
)
I
(#
#
美丽鼠尾草
!"#$%"(%#%()*%*
$ % & (
贵州鼠尾草
!"#$%"+"$"#(,%(%
$ % & (
" L L L L L L L L L L
!"" 3 3 3 3 3 L L L L L
%"" 3 1 3 3 3 L L 3 L 3
)"" 1 1 6 1 1 3 3 3 3 3
&"" 6 6 6 1 1 3 1 3 6 3
$"" 6 9 6 9 9 3 1 1 1 3
!!
注$
L,
生长正常&
3,
部分叶片发黄&
1,
叶片发黄且叶缘卷曲&
6,
叶片局部变暗&
9,
叶片萎蔫!植株濒临死亡&
$
(
%
(
&
(

(
(
表示每个处理

&
个重复
GHUA
$
L,GHY:;<
S
YHEU?
&
3,J;YU.;<D
A&
1,M?AD
AS
.0EAYAC>Y<
D
&
6,IHC;<&
9,M?A[
<;0U/EAYAH0U?AZAY
S
AHXBA;U?
&
$
!
%
!
&
!

;0B
(
:A;0UX.ZAYA
[
<.C;U.H0/HXA;C?UYA;U:A0U,
"$&
西
!

!

!

!

!

%$

不同小写字母表示处理间差异显著"
5
#
","&
#&下同

#
!
不同浓度
G;1<
胁迫对美丽鼠尾草和
贵州鼠尾草新叶叶绿素含量的影响
6.XXAYA0US
0.X.C;0UB.XXAYA0CA;:H0
S
UYA;U:A0U/;U","&&
M?A/;:A;/FAc.
S
,#
!
9XXACU/HXB.XXAYA0UCH0CA0UY;U.H0/HXG;1CH0UA0UHXC?[
?
D
<.0
D
H>0
S
;0B!&+"$"#(,%(%
著!之后随
G;1<
浓度的增加
NK6
活性逐渐升高!

G;1<
浓度为
&""::H<
)
I
(#时达到峰值!当
G;1<
浓度达到
$""::H<
)
I
(#时!
NK6
活性相对

&""::H<
)
I
(#显著降低!但仍显著高于对照
由图
!
!
3
(
1
可知!随着
G;1<
浓度的增加!贵州鼠尾
草的
JK6

1LM
活性呈持续上升趋势!而美丽鼠
尾草的
JK6

1LM
活性呈先上升后下降的趋势!
即贵州鼠尾草在
G;1<
浓度为
$""::H<
)
I
(#时
JK6

1LM
活性仍在增加!而美丽鼠尾草
JK6

1LM
活性却开始下降!其中
1LM
活性相对于
&""
::H<
)
I
(#显著降低!但都显著高于对照
$A@
!
%&(
胁迫对
$
种鼠尾草叶片有机渗透调节物
质含量的影响
!!
由图
%
可知!随着
G;1<
浓度的增加!美丽鼠尾
草的脯氨酸(可溶性糖和可溶性蛋白
%
种渗透调节

!
!
G;1<
胁迫对美丽鼠尾草和贵州鼠尾草叶片抗氧化
保护酶"
NK6
(
JK6
(
1LM
#活性的影响
c.
S
,!
!
9XXACU/HXB.XXAYA0UCH0CA0UY;U.H0/HXG;1!
JK6
!
1LM;CU.Z.U.A/.0;0B!&+"$"#(,%(%

%
!
G;1<
胁迫对美丽鼠尾草和贵州鼠尾草叶片脯氨酸(
可溶性糖和可溶性蛋白质含量的影响
c.
S
,%
!
9XXACU/HXB.XXAYA0UCH0CA0UY;U.H0/HXG;1[
YH<.0A
!
/H<>F

S
;Y;0B/H<>F[
YHUA.0CH0UA0U/
.0#$&
%
期 许
!
华!等$
!
种鼠尾草对
G;1<
胁迫的耐受性比较及其生理机制研究
物质的含量均呈持续增加趋势!而贵州鼠尾草
%

渗透调节物质的含量却呈先增加后减少的趋势由

%
!
L
可见!无
G;1<
胁迫时
!
种鼠尾草的脯氨酸
含量基本相当!在
G;1<
浓度为
!""
(
%""
(
&""::H<
)
I
(#时! 种鼠尾草脯氨酸含量均无显著差异!仅

)""

$""::H<
)
I
(#时!美丽鼠尾草脯氨酸含
量显著高于贵州鼠尾草&由图
%
!
3
可见!无
G;1<

迫时
!
种鼠尾草的可溶性糖含量基本相当!但在所

G;1<
浓度胁迫下贵州鼠尾草可溶性糖含量均显
著高于美丽鼠尾草&由图
%
!
1
可见!无
G;1<
胁迫时
贵州鼠尾草可溶性蛋白质含量显著高于美丽鼠尾
草!当
G;1<
浓度为
!""
(
%""
(
)""
(
&""::H<
)
I
(#
时!贵州鼠尾草可溶性蛋白质含量仍显著高于美丽
鼠尾草!仅在
G;1<
浓度为
$""::H<
)
I
(#时! 种
鼠尾草可溶性蛋白质含量基本相当!无显著差异
%
!

!

叶绿素含量可以反映植物光合作用能力的强弱
和植物光合产物含量的高低!从而间接反映植物的
生长状况*!"+本实验以第
+
片新叶比较了贵州鼠
尾草和美丽鼠尾草叶绿素的含量!对照中贵州鼠尾
草的叶绿素
;
(
F
和总含量均高于美丽鼠尾草!说明
贵州鼠尾草本身就具有比美丽鼠尾草较高的光合色
素!且其叶绿素含量在各浓度的
G;1<
胁迫下均无
显著变化!而美丽鼠尾草第
+
片新叶的叶绿素含量

G;1<
浓度的增加逐渐降低!使其叶绿素含量在
所试
G;1<
浓度胁迫下均显著低于贵州鼠尾草!表
明贵州鼠尾草具有耐盐性!而美丽鼠尾草具有盐敏
感性!这一结果与
TA等*!#+对不同棉花品种在
盐胁迫下叶绿素含量的变化情况相似!即盐敏感型
品种叶绿素含量降低!而耐盐型品种的叶绿素含量
无显著变化
!
种鼠尾草植株其它叶位的叶片!由
于发生早!受盐害时间长!使得盐敏感性的美丽鼠尾
草叶片黄化(变暗等程度明显高于耐盐性的贵州鼠
尾草
超氧化物歧化酶"
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#(过氧化氢酶"
1LM
#和
过氧化物酶"
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#是保护酶系统中的重要酶!它们
协同起作用清除细胞内的活性氧!如
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!提高植物对逆境胁迫的适应性*!!+低盐胁
迫能诱导植物产生适应性反应!使植物细胞内
NK6
(
1LM

JK6
等抗氧化酶的活性升高!防御活
性氧对膜系统的攻击!减轻盐胁迫对细胞的伤
害*!%*!&+本实验结果与之相似!
G;1<
浓度从
!""
::H<
)
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(#增加到
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)
I
(#
!美丽鼠尾草和
贵州鼠尾草
JK6

1LM
活性逐渐增加!表明这
!
种鼠尾草对适度的
G;1<
胁迫均产生适应性反应!
以此来降低活性氧对细胞膜的破坏在高浓度盐胁
迫下!陈娟等*!%+研究发现穿心莲"
6)7,0
8
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1
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")%+9#"3"
#细胞内酶系统的稳定性被打破!体内保
护酶的活性已不能维持较高水平!导致代谢紊乱!进
而抑制了穿心莲的生长和发育!这说明植物保护酶
对胁迫的适应性反应具有一定的阈值本实验在
G;1<
浓度达到
$""::H<
)
I
(#时!贵州鼠尾草的
JK6

1LM
活性仍继续升高!说明其在高浓度的
G;1<
胁迫下仍然可以产生适应性反应!以此来减轻
膜脂的过氧化!但美丽鼠尾草在此
G;1<
浓度下
NK6
(
JK6

1LM
活性虽仍显著高于对照!但已开
始呈下降趋势!其中
NK6

1LM
活性相对于
&""
::H<
)
I
(#显著降低!表明美丽鼠尾草的适应性反
应能力已开始衰退!清除活性氧的能力开始减弱!是
其受害程度加重的重要原因这与本实验中美丽鼠
尾草受害程度较贵重鼠尾草严重的结果相符合
渗透调节机制是植物在长期进化过程中演化出
的适应不利环境的策略和重要的生理基础*!$*!++在
盐胁迫下!脯氨酸(可溶性糖和可溶性蛋白质等有机
渗透调节物质的积累可以帮助植物细胞维持正常膨
压!便于植物在盐渍环境中吸收水分!保证细胞正常
生理代谢*!*!8+本实验中!
G;1<
浓度从
!""::H<
)
I
(#增加到
$""::H<
)
I
(#
!美丽鼠尾草和贵州
鼠尾草的脯氨酸(可溶性糖和可溶性蛋白质的含量
均高于各自的对照!说明
!
种鼠尾草对
G;1<
胁迫
均产生适应性反应!通过提高这
%
种渗透调节物质
的含量来降低水势!增强对土壤水分的吸收能力!一
定程度上缓解盐害这与张超强等*%"+对酸浆
"
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%
#试管苗的研究结果相似然
而!在所试
G;1<
浓度胁迫下!贵州鼠尾草可溶性糖
含量均显著高于美丽鼠尾草!
G;1<
浓度为
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(
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)
I
(#时!贵州鼠尾草可溶性蛋
白质含量也显著高于美丽鼠尾草!使得贵州鼠尾草

G;1<
胁迫下具有比美丽鼠尾草更强的渗透调节
能力!这可能是其耐盐性强于美丽鼠尾草的重要
原因
综上所述!贵州鼠尾草的保护酶比美丽鼠尾草

G;1<
胁迫的适应性阈值高!是贵州鼠尾草受害
较美丽鼠尾草轻的原因之一其次!在
G;1<
胁迫
下贵州鼠尾草可溶性糖和可溶性蛋白
!
种渗透调节
物质的含量均显著高于美丽鼠尾草!可能是贵州鼠
尾草受害较美丽鼠尾草低的原因之二
!
种鼠尾草
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西
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G;1<
胁迫的耐受性差异与其各自的生物学特性
及其原生境息息相关本研究供试的美丽鼠尾草生
长于林缘路边水分条件较好的生境!其根系为直根
系!主根较粗壮!喜土层深厚且排水良好的沙壤土&
而贵州鼠尾草为须根系!植株矮小!生境为溪边裸露
的岩壁或土层较浅的石缝中在长期的进化适应过
程中! 种鼠尾草形成了各自迥异的生理生态特性
和抗逆机制!从本研究中所表现出的对
G;1<
胁迫
耐受性的差异得到了证实因此!在对贵州鼠尾草
和美丽鼠尾草进行引种(栽培时!应充分考虑
!
种鼠
尾草对逆境的适应能力!才能做到因地制宜从而使
经济效益最大化
本研究仅从生理适应的角度初步阐明了
!
种鼠
尾草对
G;1<
胁迫的耐受差异!显然还不能揭示
!
种鼠尾草对
G;1<
胁迫耐受性差异的深层次机制!
因此!相关抗逆性基因的表达(信号通路以及相关渗
透物质生物化学代谢的调节过程将是今后研究的
重点
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