全 文 ：植物病理学报
ＡＣＴＡ ＰＨＹＴＯＰＡＴＨＯＬＯＧＩＣＡ ＳＩＮＩＣＡ ４４(６): ６２０￣６２８(２０１４)
收稿日期: ２０１３￣０６￣１９ꎻ 修回日期: ２０１４￣０８￣２６
基金项目: 国家自然科学基金项目(３１１００４７９)
通讯作者: 周国英ꎬ教授ꎬ主要从事森林保护研究ꎻＥ￣ｍａｉｌ:ｃｓｕｆｔｌｉｈｅ＠１６３.ｃｏｍ
第一作者: 李河ꎬ男ꎬ湖南永州人ꎬ讲师ꎬ主要从事森林保护研究ꎻＥ￣ｍａｉｌ: ｌｉｈｅ＠ｃｓｕｆｔ.ｅｄｕ.ｃｎꎮ
ｄｏｉ:１０.１３９２６ / ｊ.ｃｎｋｉ.ａｐｐｓ.２０１４.０６.００８
引起油茶炭疽病胶孢炭疽菌种群遗传结构研究
李 河１ꎬ 朱丹雪２ꎬ 徐建平１ꎬ 周国英１∗ꎬ 胡 茉１ꎬ 田 丰１
( １经济林培育与保护教育部重点实验室ꎬ中南林业科技大学ꎬ长沙 ４１０００４ꎻ ２中南林业科技大学生命科学与技术学院ꎬ长沙 ４１０００４)
摘要:胶孢炭疽菌是引起油茶炭疽病的主要病原之一ꎮ 目前对于该病原菌种群的遗传结构尚未见报道ꎮ 研究病菌种群的
遗传结构对制定科学的防治方法具有重要意义ꎮ 本研究比较中国 ６个省 １２个不同地区的 １２６个胶孢炭疽菌的 ＩＴＳ序列的
差异ꎬ以期研究各不同群体的单倍体型多样性ꎬ不同地区群体之间的遗传关系ꎬ以及遗传距离与地理距离的线性关系ꎮ 遗
传分析发现ꎬ得到的 １２６个胶孢炭疽菌样品 ＩＴＳ 序列可定义为 ２７ 种单倍体型ꎮ ２７ 种单倍体型中ꎬ一个主要的单倍体型
(Ｈａｐｌｏｔｙｐｅ１２)含有 ７８个样品ꎬ且基本上每个样品采集地都有分布ꎮ 遗传分化指数(Ｆｓｔ)表明病菌不同地理种群间的遗传
分化较大ꎮ ＡＭＯＶＡ分析显示ꎬ种群间的遗传变异占总变异的 ６％ꎬ种群内部变异占总变异的 ９４％ꎮ Ｍａｎｔｅｌ 测试显示地理
距离与遗传距离没有显著的线性关系ꎮ 对所有地理种群病原菌 ＩＴＳ 序列的核苷酸不配对进行分析ꎬ发现油茶炭疽病菌未
经历过大规模的种群扩张过程ꎮ 系统发育分析表明ꎬ来自不同地区的油茶炭疽病菌散乱的分布在系统树中ꎮ 研究结果表
明油茶炭疽病菌种群具有丰富的遗传多样性ꎮ
关键词:油茶炭疽病菌ꎻ 遗传多样性ꎻ ＩＴＳ－５.８Ｓ序列ꎻ 遗传分化
Ｐｏｐｕｌａｔｉｏｎ ｇｅｎｅｔｉｃ ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ ｏｆ Ｃｏｌｌｅｔｏｔｒｉｃｈｕｍ ｇｌｏｅｏｓｐｏｒｉｏｉｄｅｓ ｃａｕｓｉｎｇ ａｎｔｈｒａｃｎｏｓｅ
ｏｆ Ｃａｍｅｌｌｉａ ｏｌｅｉｆｅｒａ ｉｎ Ｃｈｉｎａ ＬＩ Ｈｅ１ꎬ ＺＨＵ Ｄａｎ￣ｘｕｅ２ꎬ ＸＵ Ｊｉａｎ￣ｐｉｎｇ１ꎬ ＺＨＯＵ Ｇｕｏ￣ｙｉｎｇ１ꎬ ＨＵ
Ｍｏ１ꎬ ＴＩＡＮ Ｆｅｎｇ１ ( １Ｔｈｅ Ｋｅｙ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ ｆｏｒ Ｎｏｎ￣ｗｏｏｄ Ｆｏｒｅｓｔ Ｃｕｌｔｉｖａｔｉｏｎ ａｎｄ Ｃｏｎｓｅｒｖａｔｉｏｎ ｏｆ Ｍｉｎｉｓｔｒｙ ｏｆ Ｅｄｕｃａｔｉｏｎꎬ Ｃｅｎ￣
ｔｒａｌ Ｓｏｕｔｈ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ ｏｆ Ｆｏｒｅｓｔｒｙ ａｎｄ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙꎬ Ｃｈａｎｇｓｈａ ４１０００４ꎬ Ｃｈｉｎａꎻ ２ Ｃｏｌｌｅｇｅ ｏｆ Ｌｉｆｅ Ｓｃｉｅｎｃｅ ａｎｄ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙꎬ Ｃｅｎｔｒａｌ
Ｓｏｕｔｈ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ ｏｆ Ｆｏｒｅｓｔｒｙ ａｎｄ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙꎬ Ｃｈａｎｇｓｈａ ４１０００４ꎬ Ｃｈｉｎａ)
Ａｂｓｔｒａｃｔ: Ａｎｔｈｒａｃｎｏｓｅ ｏｆ Ｃａｍｅｌｌｉａ ｏｌｅｉｆｅｒａ ｉｓ ｏｎｅ ｏｆ ｔｈｅ ｍｏｓｔ ｄｅｖａｓｔａｔｉｎｇ ｄｉｓｅａｓｅｓ ｃａｕｓｅｄ ｂｙ Ｃｏｌｌｅｔｏｔｒｉｃｈｕｍ
ｇｌｏｅｓｐｏｒｉｏｉｄｅｓ ｉｎ Ｃｈｉｎａ. Ｇｅｎｅｔｉｃ ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ ｏｆ Ｃ. ｇｌｏｅｓｐｏｒｉｏｉｄｅｓ ｐｏｐｕｌａｔｉｏｎ ｉｓ ｐｏｏｒｌｙ ｕｎｄｅｒｓｔｏｏｄ. Ｓｔｕｄｙｉｎｇ ｔｈｅ
ｇｅｎｅｔｉｃ ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ ｏｆ ｔｈｅ ｐｏｐｕｌａｔｉｏｎ ｗｉｌｌ ｈｅｌｐ ｕｓ ｔｏ ｕｎｄｅｒｓｔａｎｄ ｔｈｅ ｅｖｏｌｕｔｉｏｎ ｏｆ ｔｈｅ ｐａｔｈｏｇｅｎꎬ ａｎｄ ｔｏ ｄｅｓｉｇｎ ｂｅｔｔｅｒ
ｓｔｒａｔｅｇｉｅｓ ｔｏ ｃｏｎｔｒｏｌ ｔｈｅ ｄｉｓｅａｓｅ. Ｉｎ ｔｈｉｓ ｓｔｕｄｙꎬ ＩＴＳ￣５.８Ｓ ｒＤＮＡ ｓｅｑｕｅｎｃｉｎｇ ｗａｓ ｕｓｅｄ ｔｏ ａｎａｌｙｚｅ ｔｈｅ ｇｅｎｅｔｉｃ
ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ ａｎｄ ｇｅｎｅｔｉｃ ｄｉｖｅｒｓｉｔｙ ｏｆ Ｃ. ｇｌｏｅｓｐｏｒｉｏｉｄｅｓ ｐｏｐｕｌａｔｉｏｎｓ ｃｏｎｓｉｓｔｉｎｇ ｏｆ １２６ ｓｔｒａｉｎｓ ｉｓｏｌａｔｅｄ ｆｒｏｍ １２ ｓｉｔｅｓ.
Ｏｕｒ ｇｅｎｅｔｉｃ ａｎａｌｙｓｉｓ ｉｄｅｎｔｉｆｉｅｄ ａ ｔｏｔａｌ ｏｆ ２７ ＩＴＳ ｈａｐｌｏｔｙｐｅｓꎬ ａｍｏｎｇ ｗｈｉｃｈ ｔｈｅ ｍａｊｏｒ ｈａｐｌｏｔｙｐｅ (Ｈａｐｌｏｔｙｐｅ１２)
ｄｉｓｔｒｉｂｕｔｅｄ ｉｎ ７８ ｓｐｅｃｉｍｅｎｓ ｆｒｏｍ ａｌｍｏｓｔ ａｌｌ ｏｆ ｔｈｅ １２ ｓｉｔｅｓ. Ｔｈｅ ｇｅｎｅｔｉｃ ｄｉｆｆｅｒｅｎｔｉａｔｉｏｎ ｉｎｄｅｘꎬ Ｆｓｔꎬ ｒｅｖｅａｌｅｄ ｓｉｇ￣
ｎｉｆｉｃａｎｔ ｇｅｎｅｔｉｃ ｄｉｆｆｅｒｅｎｔｉａｔｉｏｎ ａｍｏｎｇ Ｃ.ｇｌｏｅｓｐｏｒｉｏｉｄｅｓ ｐｏｐｕｌａｔｉｏｎｓ ｏｂｔａｉｎｅｄ ｆｒｏｍ ｄｉｆｆｅｒｅｎｔ ｇｅｏｇｒａｐｈｉｃａｌ ｌｏｃａ￣
ｔｉｏｎｓ. ＡＭＯＶＡ ｔｅｓｔ ｓｈｏｗｅｄ ｔｈａｔ ｔｈｅ ｌｅｖｅｌｓ ｏｆ ｇｅｎｅｔｉｃ ｄｉｆｆｅｒｅｎｔｉａｔｉｏｎ ｗｅｒｅ ６％ ａｎｄ ９４％ ａｍｏｎｇ ａｎｄ ｗｉｔｈｉｎ ｌｏｃａｌ
ｐｏｐｕｌａｔｉｏｎｓꎬｒｅｓｐｅｃｔｉｖｅｌｙ. Ｔｈｅ Ｍａｎｔｅｌ ｔｅｓｔ ｓｈｏｗｅｄ ｔｈａｔ ｔｈｅ ｇｅｎｅｔｉｃ ｄｉｓｔａｎｃｅ ｗａｓ ｎｏｔ ｌｉｎｅａｒ ￣ｃｏｒｒｅｌａｔｅｄ ｗｉｔｈ ｇｅｏ￣
ｇｒａｐｈｉｃａｌ ｄｉｓｔａｎｃｅ. Ｍｉｓｍａｔｃｈ ｄｉｓｔｒｉｂｕｔｉｏｎ ａｎａｌｙｓｉｓ ｓｕｇｇｅｓｔｅｄ ｔｈｅｒｅ ｉｓ ｎｏ ｐｏｐｕｌａｔｉｏｎ ｅｘｐａｎｓｉｏｎ ｆｏｒ Ｃ. ｇｌｏｅｓｐｏ￣
ｒｉｏｉｄｅｓ. Ｔｈｅ ｒｅｓｕｌｔｓ ｓｈｏｗｅｄ ｔｈａｔ Ｃ. ｇｌｏｅｓｐｏｒｉｏｉｄｅｓ ｎａｔｕｒａｌ ｐｏｐｕｌａｔｉｏｎ ｈａｄ ｒｉｃｈ ｇｅｎｅｔｉｃ ｄｉｖｅｒｓｉｔｙ.
Ｋｅｙ ｗｏｒｄｓ: Ｃｏｌｌｅｔｏｔｒｉｃｈｕｍ ｇｌｏｅｏｓｐｏｒｉｏｉｄｅｓꎻ ｇｅｎｅｔｉｃ ｄｉｖｅｒｓｉｔｙꎻ ＩＴＳ￣５.８Ｓ ｓｅｑｕｅｎｃｅꎻ ｇｅｎｅｔｉｃ ｄｉｖｅｒｇｅｎｃｅ
中图分类号: Ｓ４３２.４４ 文献标识码: Ａ 文章编号: ０４１２￣０９１４(２０１４)０６￣０６２０￣０９
６期 李 河ꎬ等:引起油茶炭疽病胶孢炭疽菌种群遗传结构研究
胶孢炭疽菌(Ｃｏｌｌｅｔｏｔｒｉｃｈｕｍ ｇｌｏｅｏｓｐｏｒｉｏｉｄｅｓ)
是引起油茶炭疽病的主要病原之一ꎮ 油茶炭疽病
广泛分布于我国的南方各省ꎬ引起的落果率通常在
２０ ％ 左右ꎬ有时高达 ４０ ％ 以上[１~３]ꎮ 目前ꎬ对油
茶炭疽病生物学、生态学和流行学研究不够全面是
制约油茶炭疽病防治的一个重要原因ꎮ 即便已经
确定的同一种病原ꎬ其基因型(ｇｅｎｏｔｙｐｅ)也可能不
一样ꎮ 不同基因型的同一种病原对同(不同)种化
学农药或生物控制因子的适应性也不同[４]ꎮ 因
此ꎬ研究分析油茶炭疽病菌种群分子遗传结构对控
制油茶炭疽病具有重要意义ꎮ
ＩＴＳ( ｉｎｔｅｒｎａｌ ｔｒａｎｓｃｒｉｂｅｄ ｓｐａｃｅｒ)(包括 ５.８Ｓ)区
是介于 １８Ｓ 和 ２６Ｓ 之间的非编码转录间隔区ꎬ承
受的选择压力较小ꎬ进化速率快ꎬ能提供比较丰富
的核苷酸变异位点和信息位点ꎬ且由于协同进化使
得这个片段在不同的重复单元之间十分一致ꎬ近年
来被广泛地应用于解决较低分类单元层次上的真
菌系统发育问题[５~６]ꎮ ＩＴＳ 序列能反映出属间、种
间以及菌株间的碱基对差异ꎬ此外 ＩＴＳ 序列片段大
小适中ꎬ易于测序和分析ꎬ是目前广泛用于探讨真
菌种间变异和种内变异以及近缘属间系统关系的
重要分子标记ꎮ 国内部分学者通过分析 ＩＴＳ 基因
序列ꎬ研究了中国南方地区松乳菇、中国西南地区
松口蘑以及湖南地区橙黄乳菇的遗传多样性和遗
传结构ꎬ研究结果表明这些物种在相应的地区具有
丰富的遗传多样性ꎬ遗传结构复杂ꎬ这说明 ＩＴＳ 基
因序列可用于研究真菌种内遗传多样性和群体遗
传结构[７~９]ꎮ
我们将用油茶炭疽病原菌的 ＩＴＳ￣５.８Ｓ 区序列
来分析以下五个方面的问题:第一ꎬ来自同一个地
区的油茶炭疽病原菌种群的个体间存在的变异ꎻ第
二ꎬＩＴＳ 单倍型在不同地区中的分布规律ꎻ第三ꎬ油
茶炭疽病原菌不同的地理种群间是否具有显著的
遗传分化? 如果有ꎬ遗传分化的水平与地理距离是
否存在明确的关系ꎻ第四ꎬ油茶炭疽病原菌种群是
否经历过种群扩张ꎻ第五ꎬ在系统分析中ꎬ当与相近
种进行比较时ꎬ来自不同地区的所有油茶炭疽病原
菌样品是否会紧密地聚为一支ꎮ
１ 材料与方法
１.１ 样品来源
经形态和分子鉴定ꎬ确定为油茶炭疽病原菌
———胶孢炭疽菌的 １２６ 个菌株来自 １２ 个地区:湖
南马家河(１５ 个)、湖南攸县(９ 个)、湖南常德(１２
个)、湖南天际岭(１６ 个)、湖南浏阳(１７ 个)、湖南
怀化(１３ 个)、湖北随州(１３ 个)、海南五指山(７
个)、福建龙岩(１０个)、广西南宁(４个)、江西长埠
(５个)、江西观上(５ 个)ꎮ 样品采集地点、经纬度
等相关信息见表 １ꎮ
Ｔａｂｌｅ １ Ｄａｔａ ｏｆ ｓａｍｐｌｅ ｃｏｌｌｅｃｔｅｄ
Ｓｉｔｅ Ｌａｔｉｔｕｄｅ Ｌｏｎｇｉｔｕｄｅ Ｃｏｄｅ Ｎｕｍｂｅｒ ｏｆ ｓｐｅｃｉｍｅｎｓ Ｃｏｌｌｅｃｔｉｏｎ ｄａｔｅ
ＭａｊｉａｈｅꎬＨｕｎａｎꎬＣｈｉｎａ ２７.４９ １１３.０２ ＨＮＭＪＨ １５ ２０１２.０５
ＹｏｕｘｉａｎꎬＨｕｎａｎꎬＣｈｉｎａ ２７.０１ １１３.３２ ＨＮＹＸ ９ ２０１２.０６
ＣｈａｎｇｄｅꎬＨｕｎａｎꎬＣｈｉｎａ ２９.０２ １１１.５１ ＨＮＣＤ １２ ２０１２.０７
ＴｉａｎｊｉｌｉｎｇꎬＨｕｎａｎꎬＣｈｉｎａ ２８.０６ １１３.０２ ＨＮＴＪＬ １６ ２０１２.０５
ＬｉｕｙａｎｇꎬＨｕｎａｎꎬＣｈｉｎａ ２８.２１ １１３.２６ ＨＮＬＹ １７ ２０１２.０４
ＨｕａｉｈｕａꎬＨｕｎａｎꎬＣｈｉｎａ ２７.５２ １０９.９５ ＨＮＨＨ １３ ２０１２.０８
ＳｕｉｚｈｏｕꎬＨｕｂｅｉꎬＣｈｉｎａ ３１.７６ １１３.２６ ＨＢＳＺ １３ ２０１２.０７
ＷｕｚｈｉｓｈａｎꎬＨａｉｎａｎꎬＣｈｉｎａ １８.７８ １０９.５２ ＨＮＷＺＳ ７ ２０１２.０８
ＬｏｎｇｙａｎꎬＦｕｊｉａｎꎬＣｈｉｎａ ２５.１９ １１７.１８ ＦＪＬＹ １０ ２０１２.０８
ＮａｎｇｎｉｎｇꎬＧｕａｎｇｘｉꎬＣｈｉｎａ ２２.５５ １０８.２１ ＧＸＮＮ ４ ２０１２.０８
ＣｈａｎｇｂｕꎬＪｉａｎｇｘｉꎬＣｈｉｎａ ２７.３３ １１４.３７ ＪＸＣＢ ５ ２０１２.０９
ＧｕａｎｓｈａｎｇꎬＪｉａｎｇｘｉꎬＣｈｉｎａ ２８.００ １１５.３９ ＪＸＧＳ ５ ２０１２.０９
１２６
植物病理学报 ４４卷
１.２ 样品 ＤＮＡ 提取
油茶炭疽病原菌 ＤＮＡ提取参照 ＣＴＡＢ 法[１０]ꎮ
１.３ ＰＣＲ 扩增
ＰＣＲ 反应引物[１１]:采用 ＩＴＳ 序列通用引物
( ＩＴＳ４: ５′￣ＴＣＣＴＣＣＧＣＴＴＡＴＴＧＡＴＡＴＧＣ￣３′ꎻ ＩＴＳ５:
５′￣ＧＧＡＡＧＴＡＡＡＡＧＴＣＧＴＡＡＣＡＡＧＧ￣３′)ꎮ
ＰＣＲ 反应体系(２５ μＬ):１０×缓冲液 ２.５ μＬꎬ
ｄＮＴＰ(各 ２.５ ｍｍｏｌＬ－１)１ μＬꎬ引物各 １ μＬꎬＴａｑ
酶(５ ＵμＬ－１)０.２５ μＬꎬ模板 ＤＮＡ １ μＬꎬｄｄＨ２Ｏ
１８.２５ μＬꎮ ＰＣＲ 反应条件:９５℃变性 ５ ｍｉｎꎻ９５℃
变性 ３０ ｓꎬ５６℃ 退火 ３０ ｓꎬ７２℃ 延伸 １ ｍｉｎꎬ共 ３６
个循环ꎻ７２℃ 延伸 １０ ｍｉｎꎻ４℃ 保存ꎮ
１.４ 测序
ＰＣＲ 产物分别用正反向引物进行双向测序ꎬ
以保证测序的准确率ꎮ 测序委托上海铂尚生物科
技科技有限公司完成ꎮ
１.５ 数据分析
采用 ＢｉｏＥｄｉｔ 软件[１２]对 ＤＮＡ 序列进行比对
和编辑ꎬ同时辅以手工矫正ꎮ 用 Ｍｅｇａ ５.０[１３]软件
统计碱基组成、变异位点数等序列特征ꎮ
使用 ＧｅｎＡＬＥｘ６[１４]分析各不同地区油茶炭疽
病菌群体的 ＩＴＳ 单倍型ꎬ研究:(１)各不同群体的
单倍型多样性ꎻ(２)不同地区群体之间的遗传关
系ꎻ(３)遗传分化与地理隔离的关系ꎮ 其中ꎬ每个
单独的群体及群体间的单倍型多样性和群体遗传
分化 ＦＳＴ值分开计算ꎮ 遗传分化与地理距离的关
系使用 Ｍａｎｔｅｌ 检验法分析[１５]ꎮ 地理群体间的距
离使用经纬度与坐标共同表示ꎮ 最后ꎬ分子变异分
析(ａｎａｌｙｓｉｓ ｏｆ ｍｏｌｅｃｕｌａｒ ｖａｒｉａｎｃｅꎬＡＭＯＶＡ)用于估
算地理隔离对病菌 ＩＴＳ 单倍型分布的相对影
响[１６]ꎮ 用 ＤｎａＳＰ ５.０ 软件[１７]统计 ＩＴＳ 序列的核
苷酸多样性(ｎｕｃｅｌｏｔｉｄｅ ｄｉｖｅｒｓｉｔｙꎬ Ｐｉ)和群体间遗
传分化指数( ｆｉｘａｔｉｏｎ ｉｎｄｅｘꎬ Ｆｓｔ)ꎻ根据 ＩＴＳ 序列的
单倍型频率和核苷酸差异ꎬ用 ＴＣＳ１.２１ 软件[１８]构
建单倍型的网状亲缘关系图ꎮ 采用 ＤｎａＳＰ５.０ 软
件对所有地理种群序列的单倍型错配进行分析ꎮ
第二种类型的分析中ꎬ每个 ＩＴＳ 单倍型序列
都用于从 ＧｅｎＢａｎｋ 中搜索近缘的序列ꎮ 然后用
ＣｌｕｓｔａｌＷ 软件[１９]对我们的序列及搜索得到的序列
进行排列ꎬ手工适当校正后用 Ｍｅｇａ ５.０ 软件进行
分析ꎮ 使用 Ｋｉｍｕｒａ 双参数模型ꎬ排列中产生的空
位(ｇａｐ)被处理为缺失(ｍｉｓｓｉｎｇ)构建分子系统发
育树(Ｎ￣Ｊ ｔｒｅｅ)ꎬ利用自展法(Ｂｏｏｔｓｔｒａｐꎬ１ ０００ 次重
复)检验各分支的置信度[２０]ꎮ
２ 结果与分析
２.１ ＩＴＳ 序列多态性和单倍型多样性
油茶炭疽病原菌 １２６ 个样品的 ＩＴＳ￣５. ８Ｓ
ｒＤＮＡ核苷酸序列、采集地和其它相关信息见表 １ꎮ
对所有序列进行核苷酸组成分析ꎬ碱基 Ａ、Ｔ、Ｇ、Ｃ
的平均含量分别为 ２３. ５％ꎬ ２４. ９％、 ２４. ２％ 和
２７.４％ꎬＡ＋Ｔ 含量为 ４８.４％ꎬＧ＋Ｃ 含量为 ５１.６％ꎮ
共发现多态性位点 ２１ 个ꎬ其中简约信息位点 １４
个ꎬ单碱基变异位点 ７个ꎻ转换与颠换比值(Ｔｓ / Ｔｖ)
为 ４.４ꎬ表明油茶炭疽病原菌 ＩＴＳ￣５.８Ｓ ｒＤＮＡ基因序
列未达到突变饱和状态ꎬ适合遗传变异分析[２１]ꎮ
油茶炭疽病原菌 ＩＴＳ￣５.８Ｓ ｒＤＮＡ 基因序列共
有 ２１个多态性位点ꎬ推导出 ２７ 种单倍型( ｈａｐｌｏ￣
ｔｙｐｅ)ꎮ 单倍型分布及其它遗传多样性信息见表 ２ꎮ
在 ２７种单倍型中ꎬ一个主要单倍型(Ｈａｐｌｏｔｙｐｅ１２)
包含了大部分样品ꎬ共 ７８个样品ꎬ占总样品数量的
６２％ꎬ而且分布广泛ꎬ每一个地理种群中均含有该
单倍型ꎬ说明种群间存在基因交流ꎮ 湖南天际岭样
品包含单倍体型最多ꎬ共有 ８ 种单倍体型ꎻ湖南马
家河和湖南常德单倍型次之ꎬ各有 ７ 种单倍体型ꎻ
福建龙岩和湖南浏阳各有 ５ 种单倍体型ꎻ江西长
埠、海南五指山、广西南宁、江西观上 ４个地理种群
单倍体型数量最少ꎬ分别只有 ２种单倍体型ꎮ 大部
分地理种群都有自己独特的单倍体型ꎬ说明各地区
的病原菌存在遗传分化现象ꎮ
油茶炭疽病菌各地理种群的单倍型多样性在
０.２４５~０.８０６之间(表 ２)ꎬ其中湖南常德种群的单
倍型多样性最高为 ０.８０６ꎻ湖南天际岭种群的单倍
型多样性次之ꎬ为 ０.７５８ꎻ海南五指山种群单倍型多
样性最低ꎬ为 ０.２４５ꎻ各地区种群具有较高的单倍型
多样性ꎬ这可能与样品采集地的地理环境及气候条
件有关ꎮ 油茶炭疽病菌种群 ＩＴＳ 区核苷酸多态性
(Ｐｉ)处于较高的水平ꎮ 除了湖南攸县种群 ＩＴＳ 区
核苷酸多态性为 ０ꎬ海南五指山、广西南宁种群的
Ｐｉ 分别 ０.０００ ７４和 ０.０００ ５３外ꎬ其它 ９个地理种群
的 ＩＴＳ区核苷酸多态性(Ｐｉ)在 ０.００１ ２４ ~ ０.００５ ２１
之间(表 ２)ꎮ
２２６
６期 李 河ꎬ等:引起油茶炭疽病胶孢炭疽菌种群遗传结构研究
Ｔａｂｌｅ ２ Ｇｅｎｅｔｉｃ ｄｉｖｅｒｓｉｔｙ ｏｆ ｓａｍｐｌｅｓ ｏｆ Ｃｏｌｌｅｔｏｔｒｉｃｈｕｍ ｇｌｏｅｏｓｐｏｒｉｏｉｄｅｓ
Ｓｉｔｅｓ
Ｎｕｍｂｅｒ ｏｆ
ｓｐｅｃｉｍｅｎｓ
Ｈａｐｌｏｔｙｐｅ(ｎｕｍｂｅｒ)
Ｈａｐｌｏｔｙｐｅ
ｄｉｖｅｒｓｉｔｙ(ｈ)
Ｎｕｃｌｅｏｔｉｄｅ
ｄｉｖｅｒｓｉｔｙ(ｐｉ)
ＣｈａｎｇｂｕꎬＪｉａｎｇｘｉ(ＪＸＣＢ) ５ １２(４)ꎻ １１(１) ０.３２０ ０.００３ ７２
ＷｕｚｈｉｓｈａｎꎬＨａｉｎａｎ(ＨＮＷＺＳ) ７ １２(６)ꎻ１６(１) ０.２４５ ０.０００ ７４
ＮａｎｇｎｉｎｇꎬＧｕａｎｇｘｉ(ＧＸＮＮ) ４ １２(２)ꎻ７(２) ０.５００ ０.０００ ５３
ＬｏｎｇｙａｎꎬＦｕｊｉａｎ(ＦＪＬＹ) １０ １２(６)ꎻ１１(１)ꎻ１３(１)ꎻ１４(１)ꎻ１８(１) ０.６００ ０.００１ １２
ＨｕａｉｈｕａꎬＨｕｎａｎ(ＨＮＨＨ) １３ １２(１０)ꎻ２２(１)ꎻ４(１)ꎻ６(１) ０.３９１ ０.００１ ９６
ＬｉｕｙａｎｇꎬＨｕｎａｎ(ＨＮＬＹ) １７ １２(１３)ꎻ７(１)ꎻ１５(１)ꎻ４(１)ꎻ１０(１) ０.４０１ ０.００１ ４５
ＳｕｉｚｈｏｕꎬＨｕｂｅｉ(ＨＢＳＺ) １３ １２(８)ꎻ２３(１)ꎻ２４(４) ０.５２１ ０.００１ ２４
ＣｈａｎｇｄｅꎬＨｕｎａｎ(ＨＮＣＤ) １２ １２(２)ꎻ１(１)ꎻ３(４)ꎻ６(２)ꎻ２７(１)ꎻ２１(１)ꎻ１９(１) ０.８０６ ０.００５ ９０
ＭａｊｉａｈｅꎬＨｕｎａｎ(ＨＮＭＪＨ) １５ １２(９)ꎻ７(１)ꎻ２６(１)ꎻ４(１)ꎻ５(１)ꎻ１５(１)ꎻ１９(１) ０.６１３ ０.００３ ３０
ＴｉａｎｊｉｌｉｎｇꎬＨｕｎａｎ(ＨＮＴＪＬ) １６ １２(７)ꎻ４(２)ꎻ７(２)ꎻ８(１)ꎻ９(１)ꎻ２０(１)ꎻ２５(１)ꎻ２７(１) ０.７５８ ０.００３ ８５
ＧｕａｎｓｈａｎｇꎬＪｉａｎｇｘｉ(ＪＸＧＳ) ５ １２(４)ꎻ２(１) ０.３２０ ０.００５ ２１
ＹｏｕｘｉａｎꎬＨｕｎａｎ(ＨＮＹＸ) ９ １２(７)ꎻ１５(１)ꎻ１７(１) ０.３７０ ０.０００ ００
２.２ 单倍型网络分析
利用 ＴＣＳ软件绘制单倍型网络结构图见图 １ꎬ
从图中可以看出病原菌产生了较大的遗传分化ꎬ各
单倍体型并没有依采样地点形成各自的分支ꎬ而是
呈现非典型星状的发散图ꎮ 单倍型 Ｈ１２ 处于辐射
中心ꎬ为原始单倍型ꎬ其他单倍型都是在此单倍型
基础上经过一次或数次变异而产生ꎻ单倍型 Ｈ７、
Ｈ１５通过逐步变异ꎬ并得到固定ꎬ逐步形成亚中心ꎮ
２.３ 遗传分化分析
ＩＴＳ￣５.８Ｓ序列数据的 ＡＭＯＶＡ分析结果见表 ３ꎮ
Ｆｉｇ. １ Ｐａｒｓｉｍｏｎｙ ｎｅｔｗｏｒｋ ｏｆ ｈａｐｌｏｔｙｐｅｓ ｏｆ Ｃｏｌｌｅｔｏｔｒｉｃｈｕｍ ｇｌｏｅｏｓｐｏｒｉｏｉｄｅｓ
Ｎｏｔｅ: Ｅａｃｈ ｍｕｔａｔｉｏｎ ｉｓ ｓｈｏｗｎ ａｓ ａ ｌｉｎｅ ｂｅｔｗｅｅｎ ｅｖｅｒｙ ｔｗｏ ｈａｐｌｏｔｙｐｅｓ. Ｓｍａｌｌ ｄｏｔｓ ｒｅｐｒｅｓｅｎｔ ｕｎｓａｍｐｌｅｄ ｈａｐｌｏｔｙｐｅｓ.
３２６
植物病理学报 ４４卷
Ｔａｂｌｅ ３ Ｓｕｍｍａｒｙ ｏｆ ＡＭＯＶＡ ｔｅｓｔｓ ｗｉｔｈｉｎ ａｎｄ ａｍｏｎｇ ｐｏｐｕｌａｔｉｏｎｓ
ｏｆ Ｃｏｌｌｅｔｏｔｒｉｃｈｕｍ ｇｌｏｅｏｓｐｏｒｉｏｉｄｅｓ
Ｓｏｕｒｃｅ ｄｆ ＳＳ ＭＳ Ｅｓｔ. Ｖａｒ.％ Ｓｔａｔ Ｖａｌｕｅ Ｐｒｏｂ
Ａｍｏｎｇ Ｐｏｐｓ １１ ５.３４７ ０.４８６ ０.０１９ ６％
Ｗｉｔｈｉｎ Ｐｏｐｓ １１４ ３２.９５４ ０.２８９ ０.２８９ ９４％ ＰｈｉＰＴ ０.０６２ ０.０１０
Ｔｏｔａｌ １２５ ３８.３０２ ０.７７５ ０.３０８
由表 ３可知ꎬ油茶炭疽病菌种群变异主要发生在不
同地理种群内ꎬ占总变异的 ９４％ꎻ而群体间的遗传
差异较小ꎬ仅占总变异的 ６％ꎬ说明病菌群体间基
因交流频繁ꎮ 种群内的变异显著大于 ０ꎬ表明油茶
炭疽病菌自然地理种群内的遗传变异显著(Ｐ <
０.０５)ꎮ 说明油茶炭疽病菌群体产生了分化ꎬ这和
单倍型的简约网络图分析结果一致ꎮ
油茶炭疽病菌不同地理种群间遗传分化 Ｆｓｔ
值见表 ４ꎮ 根据 Ｗｒｉｇｈｔ(１９７８)提出遗传分化指数
(Ｆｓｔ)介于 ０ ~ ０.０５ 之间的种群遗传分化很弱ꎬ可
不考虑群体间遗传分化ꎻＦｓｔ 值介于 ０.０５ ~ ０.１５ 之
间ꎬ群体间存在中等程度遗传分化ꎻＦｓｔ值介于 ０.１５
~０.２５ 之间ꎬ群体间遗传分化较大ꎻＦｓｔ 值大于
０.２５ꎬ表明群体间遗传分化极大[２２]ꎮ 从表 ４ 中我
们可以看出ꎬ湖南马家河 (ＨＨＭＪＨ)、广西南宁
(ＧＸＮＮ)、江西观上(ＪＸＧＳ) ３ 个地里种群相互之
间的遗传分化值为负值ꎻ湖南浏阳(ＨＮＬＹ)和江西
观上(ＪＸＧＳ) 、广西南宁(ＧＸＮＮ)和湖南天际岭
(ＨＮＴＪＬ)、湖南马家河(ＨＨＭＪＨ)和湖南天际岭
(ＨＮＴＪＬ)、湖南马家河 (ＨＨＭＪＨ) 和湖南浏阳
(ＨＮＬＹ)地理种群之间的遗传分化值为负值ꎮ 江
西观上 ( ＪＸＧＳ)、江西长埠 ( ＪＸＣＢ)、福建龙岩
(ＦＪＬＹ)、海 南 五 指 山 ( ＨＮＷＺＳ )、 湖 南 怀 化
(ＨＮＨＨ)、湖南攸县(ＨＮＹＸ)和湖南浏阳(ＨＮＬＹ)
７个地理种群相互之间的遗传分化值都小于 ０.０５ꎻ
湖南怀化(ＨＮＨＨ)和湖南天际岭(ＨＮＴＪＬ)种群、
湖南天际岭(ＨＮＴＪＬ)和江西观上( ＪＸＧＳ) 种群之
间的遗传分化值都小于 ０.０５ꎮ 说明这些种群间遗
传分化极弱ꎬ基因交流极度频繁ꎮ
广西南宁(ＧＸＮＮ)与江西长埠( ＪＸＣＢ)、福建
龙岩 ( ＦＪＬＹ)、湖北随州 (ＨＢＳＺ)、海南五指山
(ＨＮＷＺＳ)、湖南攸县(ＨＮＹＸ)之间遗传分化极
大ꎬ遗传分化值在 ０.２７７ ７８~０.３３３ ３３之间ꎻ江西长
埠 ( ＪＸＣＢ )与湖南常德 ( ＨＮＣＤ ) 、湖南天际岭
Ｔａｂｌｅ ４ Ｐａｉｒｗｉｓｅ Ｆｓｔ ｖａｌｕｅｓ ｂｅｔｗｅｅｎ ｇｅｏｇｒａｐｈｉｃａｌ ｐｏｐｕｌａｔｉｏｎｓ ｏｆ Ｃｏｌｌｅｔｏｔｒｉｃｈｕｍ ｇｌｏｅｏｓｐｏｒｉｏｉｄｅｓ
ＧＸＮＮ ＪＸＣＢ ＨＮＷＺＳ ＦＪＬＹ ＨＮＨＨ ＨＮＬＹ ＨＢＳＺ ＨＮＣＤ ＨＮＭＪＨ ＨＮＴＪＬ ＪＸＧＳ ＨＮＹＸ
ＧＸＮＮ
ＪＸＣＢ ０.２９４ １２
ＨＮＷＺＳ ０.３０４ ３５ ０.０００ ００
ＦＪＬＹ ０.２７７ ７８ ０.０８６ ９６ ０.０００ ００
ＨＮＨＨ ０.１１８ ５２ ０.０１７ ３６ ０.０１８ ８２ ０.０１５ ２９
ＨＮＬＹ ０.１０８ ４９ ０.０３６ ０６ ０.０３９ ７７ ０.０３０ ９９ －０.０５３ ６０
ＨＢＳＺ ０.３２０ ２６ ０.１９３ ８０ ０.２１２ １２ ０.１６８ ３５ ０.１４１ ０３ ０.１７２ ０６
ＨＮＣＤ ０.０８８ ２４ ０.２７２ １１ ０.２７８ ６１ ０.２６１ ４４ ０.１４９ ８７ ０.１９３ ３９ ０.２９３ １４
ＨＮＭＪＨ －０.０６７ ３９ ０.１４２ ８６ ０.１４９ ６１ ０.１３２ ４０ ０.００６ ４５ －０.０００ ７１ ０.２０２ ３０ ０.１１９９４
ＨＮＴＪＬ －０.１４１ ５２ ０.３００ ２４ ０.３１０ ３０ ０.２８４ １２ ０.１４２ １５ ０.１３７ ９４ ０.３２４ ７８ ０.１４８ ４７ －０.０１２ ２４
ＪＸＧＳ －０.０４３ ４８ ０.０００ ００ ０.０００ ００ ０.０００ ００ －０.０６０ ７３ －０.０７１ ３０ ０.０６８ ８７ ０.０５２ ９１ －０.０６４ ７７ ０.００６ ８０
ＨＮＹＸ ０.３３３ ３３ ０.０００ ００ ０.０００ ００ ０.０００ ００ ０.０２３ ８１ ０.０５３ ５７ ０.２７７ ７８ ０.２９６ ３０ ０.１６９ ６４ ０.３３８ ６７ ０.０００ ００
４２６
６期 李 河ꎬ等:引起油茶炭疽病胶孢炭疽菌种群遗传结构研究
(ＨＮＴＪＬ) 之间遗传分化极大ꎬ遗传分化值在
０.２７２ １１~０.３００ ２４之间ꎻ海南五指山(ＨＮＷＺＳ)与
湖南常德(ＨＮＣＤ)、湖南天际岭(ＨＮＴＪＬ)之间遗
传分化极大ꎬ遗传分化值在 ０.２７ ８６１ ~ ０.３１０ ３０ 之
间ꎻ 福建龙岩(ＦＪＬＹ)与湖南常德(ＨＮＣＤ)、湖南
天际岭(ＨＮＴＪＬ)之间遗传分化极大ꎬ遗传分化值
在 ０.２６１ ４４~０.２８４ １２之间ꎻ湖北随州(ＨＢＳＺ)与湖
南常德(ＨＮＣＤ)、湖南天际岭(ＨＮＴＪＬ)、湖南攸县
(ＨＮＹＸ) 遗传分化极大ꎬ遗传分化值在 ０.２７７ ７８~
０.３２４ ７８ 之间ꎻ湖南常德 (ＨＮＣＤ)与湖南攸县
(ＨＮＹＸ) 的遗传分化值为 ０.２９６ ３０ꎬ以及湖南天
际岭(ＨＮＴＪＬ)与湖南攸县(ＨＮＹＸ) 的遗传分化值
为０.３３８ ６７ꎬ遗传分化显著ꎬ同为一个省份的不同
地区的样品遗传分化如此之大ꎬ这有可能是样品所
在地区的环境条件、人为影响所致ꎬ受地理条件影
响不显著ꎮ 其它的地里种群间的 Ｆｓｔ值介于 ０.０５~
０.２５之间ꎬ群体间存在一定程度遗传分化ꎮ Ｍａｎｔｅｌ
测试显示ꎬ油茶炭疽病菌地理距离与种群遗距离之
间无显著的线性关系(Ｐ>０.０５)(图 ２)ꎮ
２.４ 种群扩张分析
对所有油茶炭疽病菌地理种群 ＩＴＳ 序列的核
苷酸不配对进行分析ꎬ分布曲线呈多峰型曲线ꎬ不
符合种群扩张的单峰曲线模式(图 ３)ꎬ说明油茶炭
疽病菌可能未经历过大规模的种群扩张过程ꎮ
Ｆｉｇ. ２ Ｒｅｌａｔｉｏｎｓｈｉｐ ｂｅｔｗｅｅｎ ｔｈｅ ｌｅｖｅｌｓ ｏｆ ｇｅｎｅｔｉｃ ｄｉｆｆｅｒｅｎｔｉａｔｉｏｎ ａｎｄ ｇｅｏｇｒａｐｈｉｃａｌ ｄｉｓｔａｎｃｅ
ｂｅｔｗｅｅｎ ｐａｉｒｓ ｏｆ ｌｏｃａｌ ｐｏｐｕｌａｔｉｏｎｓ
Ｆｉｇ. ３ Ｍｉｓｍａｔｃｈ ｄｉｓｔｒｉｂｕｔｉｏｎ ｏｆ Ｃｏｌｌｅｔｏｔｒｉｃｈｕｍ ｇｌｏｅｏｓｐｏｒｉｏｉｄｅｓ ｐｏｐｕｌａｔｉｏｎ
Ｅｘｐ ｓｔａｎｄｓ ｆｏｒ ｅｘｐｅｃｔｅｄ ｖａｌｕｅ
Ｏｂｓ ｓｔａｎｄｓ ｆｏｒ ｏｂｓｅｒｖｅｄ ｖａｌｕｅ.
５２６
植物病理学报 ４４卷
２.５ 基于 ＩＴＳ序列的系统发育关系分析
我们从 ＧｅｎＢａｎｋ 数据库中选择 Ｃｏｌｌｅｔｏｔｒｉｃｈｕｍ
属 ４条不同种的 ＩＴＳ 序列(ＧｅｎＢａｎｋ 编号见图 ４)
作为外类群ꎬ构建 ２７ 种不同单倍型序列系统发育
树ꎮ 从图中可以看出将所有单倍型划分为 ４ 个主
要分支ꎮ 分支 １共有 １７种单倍型ꎬ支持率为 ８５％ꎻ
分支 ２共有 ５种单倍型ꎬ支持率为 ４１％ꎻ分支 ３ 共
有 ３种单倍型ꎬ支持率为 ６１％ꎻ分支 ４ 共有 ２ 种单
倍型ꎬ支持率为 ９５％ꎮ 在系统树中没有发现同一
个地区的单倍型能聚在一起ꎬ而是散乱的分布在系
统树中ꎬ说明其间存在有效基因流ꎬ部分地里种群
虽然各自具有独特的单倍型ꎬ但各单倍型的差异不
大(图 ４)ꎮ
３ 讨论
遗传多样性是评价一个物种的进化潜能和抵
制自然界各种生存压力的重要遗传学指标ꎮ 一个
物种的遗传多样性愈丰富ꎬ对环境变化的适应性
Ｆｉｇ. ４ Ａ ｎｅｉｇｈｂｏｕｒ￣ｊｏｉｎｉｎｇ ｔｒｅｅ ｏｆ ｔｈｅ ＩＴＳ ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ ｏｆ Ｃｏｌｌｅｔｏｔｒｉｃｈｕｍ ｇｌｏｅｏｓｐｏｒｉｏｉｄｅｓ ａｎｄ
ｒｅｐｒｅｓｅｎｔａｔｉｖｅ ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ ｆｒｏｍ ｏｔｈｅｒ ｓｐｅｃｉｅｓ ｏｆ ｔｈｅ ｇｅｎｅｒａ Ｃｏｌｌｅｔｏｔｒｉｃｈｕｍ
６２６
６期 李 河ꎬ等:引起油茶炭疽病胶孢炭疽菌种群遗传结构研究
就愈强ꎮ 在本研究中ꎬ油茶炭疽病菌各地区种群具
有较高的遗传多样性ꎬ揭示了油茶炭疽病发生面积
广和危害程度重的遗传基础ꎮ
Ｋｅｌｅｍｕ 等[２３]对 ４５ 个来自南美的圭亚那柱花
草胶孢炭疽菌菌株进行了 ＲＡＰＤ 遗传多态性分
析ꎬ结果表明供试菌株具有显著多态性ꎬ来自长期
种植区的菌株的遗传多态性比新植区的丰富ꎮ 这
与本研究中ꎬ湖南常德、湖南天际岭和株洲马家河
这些超过 ５０年树龄的三个地区病菌遗传多样性极
为丰富相一致ꎮ
Ｙａｎｇ 等[２４]对来自四川、湖北、湖南等七个省
份的柑橘病叶或健叶的 ２５个胶孢炭疽菌菌株比较
研究发现我国柑橘炭疽病菌存在种类差异和种群
内的遗传上分化ꎬ这与本研究中油茶炭疽病菌遗传
分化较大结果相似ꎮ Ｌｉｕ等[２５]研究 １７个果树胶孢
炭疽菌的 ＲＡＰＤ 分析ꎬ同一个遗传聚类组内包括
不同地理来源的菌株ꎬ而相同寄主来源的菌株又分
布于不同遗传聚类组中ꎬ显示了菌株间的遗传分化
与寄主ꎬ地理来源无关ꎮ 这与本研究结果油茶炭疽
病菌遗传分化显著ꎬ地理距离与种群遗距离之间无
显著的线性关系结论一致ꎮ 但与 Ｙｉ 等[２６]研究的
柱花草炭疽菌来自于同一个地理区域或同一个寄
主基因型的菌株聚成一类或亚类ꎬ说明来自不同寄
主基因型或物种的炭疽菌在遗传基因上具有一定
的专化性ꎬ而地理上隔离的国家或地区的柱花草炭
疽病原菌各自具有相对独立的进化途径的结论不
同ꎮ
本研究中单倍型 Ｈ１２ 在每个群体中均有分
布ꎬ为优势单倍型ꎮ 说明油茶炭疽病菌具有长距离
传递基因流的潜力ꎬ 病菌丝在不同地区间扩散的
无性繁殖方式导致每个群体中存在相同的基因型ꎬ
且克隆生长有利于基因型在种群内维持ꎮ 暗示油
茶炭疽病菌种群曾经发生过种群扩张或者起源于
较小的奠基种群ꎬ从起源地向其它地区的扩张过程
中ꎬ不同环境条件下的种群受到了不同程度的选择
作用ꎬ种群因为还未能获得足够的时间建立更加复
杂的结构故而呈非典型“星状”ꎮ
本研究所采用的试验材料虽然涉及的地理分
布范围很广ꎬ但不同地区间菌株数相差较大ꎮ 比如
广西南宁只有 ４ 个菌株样品ꎬ江西观上、江西长埠
也分别只有 ５个菌株样品ꎬ不能客观地反映这些地
区的单倍型数量和多样性ꎻ而湖南浏阳、湖南天际
岭的菌株样品分别为 １７个和 １６个ꎬ这些地区的单
倍型数量就表现出了多样性ꎮ 但就现有的样品数
量结果ꎬ也充分的说明了我国油茶炭疽病菌积累了
非常高的单倍型多样性和核苷酸多样性ꎬ 说明病
菌对环境变化的潜在适应能力强ꎬ 容易扩展其分
布范围ꎬ揭示了我国油茶炭疽病发生面积广和危害
程度重ꎮ 总之ꎬ由于采样方式、采样条件、试验设备
及样品数量等诸多因素的影响ꎬ 可能会对某些试
验结果产生影响ꎮ 为了能更加全面地掌握我国油
茶炭疽病菌分布区内各地理种群间的关系ꎬ从分子
生物学上为制定油茶炭疽病菌防治总体策略提供
更加准确的可靠依据ꎮ 在下一步的研究中ꎬ 需要
增加研究各病菌种群的个体数量ꎬ 增加其它分子
标记ꎬ 以获得更多有效的遗传信息ꎮ
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ｓｅｑｕｅｎｃｅ ａｌｉｇｎｍｅｎｔ ｔｈｒｏｕｇｈ ｓｅｑｕｅｎｃｅ ｗｅｉｇｈｔｉｎｇꎬ ｐｏｓｉ￣
ｔｉｏｎ￣ｓｐｅｃｉｆｉｃ ｇａｐ ｐｅｎａｌｔｉｅｓ ａｎｄ ｗｅｉｇｈｔ ｍａｔｒｉｘ ｃｈｏｉｃｅ
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责任编辑:杨爱东
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