全 文 ：书西北植物学报!
"#$
!
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"
&
#$
#!()#%*
!"#$%&#%&()$*+,""-.)/#0-/
!!
文章编号$
#"""+*"!$
"
!"#$
#
"&+#!(+"
!!!!!!!!!!!!!!!
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$
#",-"-
%
.
,/001,#"""+*"!$,!"#$,"&,#!(
!!
收稿日期$
!"#$+"$+"
&修改稿收到日期$
!"#$+"+#-
!!
基金项目$国家自然科学基金"
%##"-$!
!
%#*#&"$
#
!!
作者简介$安维忠"
#&(&)
#!男!在读硕士研究生!主要从事分子育种的研究
2+34/5
$
#"-&!##!"*
!66
,783
!!"
通信作者$刘雅莉!硕士!教授!博士生导师!主要从事园林植物遗传育种研究
2+34/5
$
5
9
5-#$#
!
#!-,783
葡萄风信子
1$!20
基因及启动子的克隆与分析
安维忠!刘雅莉"!刘红利!陈凯利
"西北农林科技大学 旱区作物逆境生物学国家重点实验室!农业部西北地区园艺作物生物学与种质创制重点实验室!陕西杨陵
#!#""
#
摘
!
要$该研究根据转录组测序结果!在葡萄风信子"
!"#$%&%&()*%$"(
#(亚美尼亚)中克隆到花青素合酶
"
:;<
#基因的
7=;:
与
=;:
序列!该基因命名为
!%+,-
采用荧光实时定量分析
!%+,-
时空表达模型!同时
利用染色体步移法克隆到
!%+,-
上游
#"**>
?
的一段序列信息学分析表明$
!%+,-
开放阅读框为
#"-$>
?
!
编码
%$$
个氨基酸&
=;:
与
7=;:
的一致性为
(&,-!@
!
=;:
序列在
:AB
下游
$#$
"
$&*>
?
之间插入
#
个
&>
?
内含子&启动子序列在
)">
?
位置有
#
个
A:A:+>8C
!有多个光响应元件及
DEF
结合位点等荧光实时定量分
析表明!
!%+,-
基因在花中优势表达!并且在完全着色期表达量最高该研究结果为深入研究
!%+,-
基因功
能*分析葡萄风信子着色机理奠定了基础
关键词$葡萄风信子&
!%+,-
&启动子&荧光实时定量
中图分类号$
G($
&
G(-
!!!
文献标志码$
:
$%"&(#"))!*)&
+
%#%",134"$(-$(5)/-$"351$!20-.).)!$(%/0"1"(.0
:; HI/JK81
L
!
MNOE45/
"
!
MNOP81
L
5/
!
QP2;R4/5/
"
9
M4>8T4S8T
9
8UQT8
?
L9
/1:T/V:TI40
!
D/1/0ST
9
8U:
L
T/7W5SWTIRI
9
M4>8T4S8T
9
8UP8TS/7W5SWT45X541SF/858+
L9
41VBIT3
?
5403N118Y4S/81/1;8TSKZI0SQK/14
!
;8TSKZI0S:[\O1/YIT0/S
9
!
E41
L
5/1
L
!
!
QK/14
#
*2%(03(
$
N1SK/00SWV
9
!
ZI7581IV7=;:41V=;:0I
6
WI17I08U41SK87
9
41/10
9
1SK40I
"
:;<
#
L
I1I
!
143IV
!%+,-
!
>40IV81ST4107T/
?
S83I0I
6
WI17/1
L
/1!"#$%&%&()*%$"(,HIV/VTI45+S/3IU5W8TI07I17I
6
W41S/+
S4S/YI4145
9
0/04>8WS!%+,-,HK/5IS4]/1
L
4VY41S4
L
I8U7KT838083IZ45]/1
L
,HI7581IV4#"**>
?
W
?
+
0STI430I
6
WI17I8U!%+,-,F/8/1U8T34S/74145
9
0/00K8ZIVSK4S!%+,-781S4/104#"-$>
?
8
?
I1TI4V/1
L
UT43I
!
I178V/1
L
%$$43/1847/V0,AKI7810/0SI17
9
8U7581IV=;:41V7=;:/0(&,-!@
!
=;:0I
6
WI17I/1+
0ITS04&>
?
/1ST81UT83$#$>
?
S8$&*>
?
81V8Z10STI438U:AB,A:A:+>8C/04S)">
?
8USKI
?
T838S+
ITZK/7KK404
?
5WT45/S
9
8U5/
L
KS+TI0
?
810/YII5I3I1S041VDEF>/1V/1
L
0/SI0,^I45+S/3IU5W8TI07I17I
6
W41S/+
S4S/YI4145
9
0/00K8ZIV!%+,-Z40
?
TIV83/141SIC
?
TI00/81/1U58ZIT41VSKIIC
?
TI00/815IYI54SUW5
9
785+
8TIV0S4
L
IZ40SKIK/
L
KI0S,N1SK/00SWV
9
!
L
I1I7581/1
L
41VIC
?
TI00/814145
9
0/081!%+,-4TI/3
?
8TS41SS8
/1+VI
?
SK0SWV
9
SKIUW17S/818U!%+,-
L
I1I41V4145
9
JISKI7858TIV3I7K41/038U!"#$%&%&()*%$"(,
4.
+
5"0!%
$
!"#$%&%&()*%$"(
&
!%+,-
&
?
T838SIT
&
TI45+S/3I
6
W41S/S4S/YI
!!
黄酮类物质是植物中普遍存在的次生代谢物
质!在植物生长繁殖中作用广泛+#,花青素作为具
有代表性的黄酮类物质!可以使植物组织呈现红到
蓝的色素沉淀!从而吸引授粉者+!,此外!花青素有
益于人类健康!已有研究表明!花青素有抗氧化*抗
炎*抗癌和抗菌的作用!可以预防心脑血管疾病*糖
尿病!并且可以改善视力植物中的花青素合成途
径分为早期和晚期在花青素合成途径的晚期!花
青素合酶"
:;<
#*二氢黄酮醇还原酶"
=\^
#和黄酮
%+
葡糖基转移酶"
O\BA
#对花青素合成途径的调控
最终导致花青素的形成+%,
花青素合酶是花青素合成途径中的一种酶!催
化无色花青素到有色花青素的转变+*,花青素合酶
属于
!+
酮戊二酸
+
双加氧酶"
!+_==0
#蛋白家族!这
个家族的蛋白都以分子氧为共有基质!并且都含有
二价铁*
!+
酮戊二酸或者抗坏血酸盐+$+-,
:;<
蛋
白氨基酸序列存在典型的
=N_`
-
;
结构域"具有
!+
酮戊二酸
+
加双氧酶活性的
;
端区域#和
!_B+\INN
-
_C
9
超家族结构域已有研究表明!白色蛇莓的形
成是由于
+,-
基因的低表达造成+,
./-
*
012
*
+,-
基因表达活性的上调!使得桑树的果实变为红
色+(,大丽花冠*芍药花冠的颜色形成都需要
+,-
表达!这些物种中
+,-
基因的表达受阻都会形成
白色或无色花冠!
+,-
在植物器官颜色形成中起着
重要的作用+&+#",
葡萄风信子的花瓣形状独特*蓝色纯正!并且带
着淡淡的花香!是自然界重要的观赏性花卉!具有很
重要的美观*生态与科研价值+##,本实验室对葡萄
风信子蓝色品种及白色品种进行了转录组测序分
析!构建了葡萄风信子蓝白花色差异的分子机理模
型图+#!,葡萄风信子类黄酮代谢途径的关键酶
012
*
13-
基因已经被克隆得到+#%+#*,本研究在蓝
色葡萄风信子(亚美尼亚)品种中克隆了
+,-
基因
及其启动子序列!并进行了初步信息学分析!为深入
研究
+,-
基因的生物学功能和单子叶蓝色模式植
物葡萄风信子的着色机理研究提供理论依据
#
!
材料和方法
6,6
!
材
!
料
本研究于
!"#*
年在西北农林科技大学旱区作
物逆境生物学国家重点实验室进行材料为进口的
葡萄风信子"
!"#$%&%&()*%$"(
#(亚美尼亚)种
球!种植于大棚
!"#*
年
%
月底开始取材!
*
月中旬
取材完毕分别采集$完全未着色的花蕾"
<#
#*开
始着色的花蕾"
#*完全着色未开放的花蕾"
<%
#*
完全开放的花蕾"
<*
#*衰败的花蕾"
<$
#*根*茎*叶!
于液氮中速冻后置于
)("a
冰箱中备用
6,7
!
方
!
法
68786
!
9:*
与
;:*
提取
!
采用
_3I
L
4
试剂盒提
取葡萄风信子总
;^:
!
=;:
的提取参照
QA:F
法+#$,!
#@
琼脂糖凝胶电泳检测!并用紫外分光光度
计检测
;^:
及
=;:
纯度及浓度
68787
!
!20
基因
3;:*
!
;:*
及其启动子克隆
!
使用
XTI3I<7T/
?
S A^TI4
L
I1S]/S
试剂盒"
A4R4^4
公司#进行
A^+XQ^
反应合成
7=;:
第一链分析
转录组中
+,-
序列!
F540S
数据库中分析其序列特
征!初步确定其为全长!根据此序列设计正向引物
<
!反向引物
:
"表
#
#!以反转录
7=;:
为模板!克隆
+,-
基因
7=;:
序列扩增条件为$
&*a
预变性
%3/1
!
&*a
变性
%"0
!
$(a
退火
%"0
!
!a
延伸
&"
0
&
%"
个循环!
!a
延伸
!3/1
扩增产物用
#@
琼
脂糖凝胶电泳检测!纯化回收目的条带后!与
?
D=+
#&AbI7S8T
"
A4R4^4
#
#-a
连接
*K
!将
#"
#
M
连接
产物转化
%"
#
M
大肠杆菌"
4#$5)&$5%$67
#感受态
细胞
A8
?
#"
中!经涂有
NXAB
和
+`
L
45
的
:3
?
平板
上筛选白斑阳性克隆!菌落
XQ^
鉴定重组质粒后!
挑取白色菌落于
#""3
L
%
M:3
?
液体
MF
培养基
中!
%a
*
#("T
%
3/1
培养
#*K
!保存菌液!使用通用
引物
D#%
由北京奥科鼎盛测序部测序
=;:
克隆以基因组
=;:
为模板!引物与
7=+
;:
克隆采用同一对特异性引物启动子克隆采用
染色体步移法!设计
#
组特异性引物
*
和
"表
#
#!克隆体系严格参照
BI183/7H45]/1
L
R/S
产品说明书
+,-
的
=;:
及启动子克隆程序
同上述
7=;:
克隆!分别送样测序鉴定
6878<
!
!20
基因序列及其编码蛋白生物信息学分
析
!
;QFN
数据库中的
F540S
?
"
KSS
?
$%%
>540S,17>/,
153,1/K,
L
8Y
%
F540S,7
L
/
.
X:B2cXT8SI/10
#在线网
页完成同源序列的搜索!导出同源序列!利用
=;:+
D:;
软件对同源序列作多重比对及系统进化树分
析&
_^ \\/1VIT
"
KSS
?
$%%
ZZZ,17>/,153,1/K,
L
8Y
%
?
T8
.
I7S0
%
L
8TU
%#在线查找开放阅读框&利用
2CX:<
9
工具包中的
XT8SX4T43
"
KSS
?
$%%
ZI>,IC
?
40
9
,8T
L
%
?
T8S
?
4T43
%#程序分析氨基酸序列的组成成分*分子
量*等电点及编码蛋白的亲%疏水性&
A3
?
TIV"
KSS
?
$%%
ZZZ,7K,I3>1IS,8T
L
%
08USZ4TI
%
AD+
X^ 2=
-
U8T3,KS35
#在线网页分析蛋白的跨膜结构
域&利用
L
145X,"
KSS
?
$%%
ZZZ,7>0,VSW,
表
6
!
克隆及实时定量引物
A4>5I#
!
XT/3IT0I
6
WI17I0W0IV/17581/1
L
41V
TI45+S/3I
6
W41S/S4S/YIXQ^
引物
XT/3IT
序列
6
WI17I
"
$d
#
%d
#
< Q:QQ:ABBQQ:BQ:QQ:::BAB:AB
: QBQBQAQ:AQ:A:A:AQ:BQQBAB:
S^< AAQQ:QQAQ:A:AAQQQQBQ
S^: B:BQQAQAQQQQAAQQ:BQQ
&!#
&
期 安维忠!等$葡萄风信子
!%+,-
基因及启动子的克隆与分析
V]
%
0ITY/7I0
%
L
145X
%#分析信号肽&
X<_^ A
软件
"
KSS
?
$%%
?
08TS,K
L
7,
.?
%
U8T3,KS35
#进行编码蛋白亚
细胞定位分析&
;ISXK80,"
KSS
?
$%%
ZZZ,7>0,
VSW,V]
%
0ITY/7I0
%
;ISXK80
%#预测蛋白磷酸化位点&
蛋白二级结构在
<_XD:
"
KSS
?
$%%
1
?
04+
?
>/5,/>7
?
,
UT
%
7
L
/+>/1
%
1
?
04
-
4WS834S,
?
5
.
?
4
L
Ic
%
;X<:
%
1
?
04
-
08
?
34,KS35
#网页中预测&三级结构预测由
XK
9
TI
"
KSS
?
$%%
ZZZ,0>
L
,>/8,/7,47,W]
%
"?
K
9
TI
%#在线工
具完成&启动子及内含子的预测在
X541SQ:^ 2
"
KS+
S
?
$%%
>/8/1U8T34S/70,
?
0>,W
L
I1S,>I
%
ZI>S8850
%
?
541S74TI
%
KS35
%#网页中完成
6878=
!
!20
基因表达模式分析
!
各取
$""1
L
葡萄
风信子不同发育时期的花蕾*根*茎和叶的
;^:
!用
XTI3I<7T/
?
S A^TI4
L
I1S]/S
反转录为
7=;:
在
XT/3IT$,"
软件中设计实时定量正反向引物
S^<
和
S^:
"表
#
#在
FN_+^ :=Q
9
75ITNG
荧光定量
XQ^
仪上进行
!%+,-
基因的表达分析!方法参照
A4R4^4
公司的
$
XTI3/C2CA4
6
AD
%
说明书!
反应程序和体系参照焦淑珍等+&,!内参基因为葡萄
风信子
+$8*
基因
!
!
结果与分析
786
!
1$!20
基因全长
3;:*
克隆
根据转录组测序获得的
+,-
序列!分析其具
有完整的开放读码框并设计
7=;:
全长引物!正向
引物
<
!反向引物
:
"表
#
#以反转录
7=;:
为模
板!扩增得到
#
条
#"&->
?
条带"图
#
!
:
#!测序后拼
接所得序列与转录组序列相似性为
&-,!%@

_^ \\/1VIT
鉴定开放阅读框为
#"-$>
?
!编码
%$$
个氨基酸该基因命名为
!%+,-
核苷酸及推导
图
#
!
!%+,-
基因扩增结果
D,!"""
?
5W0
&
:,7=;:
&
F,=;:
&
Q
"
2,
启动子第一轮*第二轮和第三轮扩增
\/
L
,#
!
XQ^
?
T8VW7S08U!%+,-
D,!"""
?
5W0
&
:,7=;:
&
F,=;:
&
Q+2,AKIU/T0S
!
SKI0I781V41VSKISK/TVT8W1VXQ^
?
T8VW7S08U!%+,-
?
T838SIT
图
!
!
!%+,-
基因的核苷酸序列及推导的氨基酸序列
\/
L
,!
!
;W75I8S/VI0I
6
WI17I41VVIVW7IV43/1847/V
0I
6
WI17I8U!%+,-
图
%
!
!%+,-
启动子序列及关健元件
\/
L
,%
!
6
WI17I41V]I
9
783
?
81I1S08U!%+,-
?
T838SIT
"%#
西
!
北
!
植
!
物
!
学
!
报
%$
卷
的氨基酸序列如图
!

787
!
1$!20
基因
;:*
及启动子序列克隆与分析
=;:
序列克隆所用引物与
7=;:
克隆所用引
物相同"表
#
#!克隆到
#
条
##**>
?
条带"图
#
!
F
#
测序分析
=;:
序列!在
:AB
下游
$#$
"
$&*>
?
之
间插入了
#
个
&>
?
内含子!
=;:
与
7=;:
的一致
性为
(&,-!@
在
?
541S74TI
数据库中分析内含子
序列!发现此内含子序列中含有
#
个
Q::A+>8C
!
#
个茉莉酸甲酯响应元件
QBAQ:+38S/U
!
#
个
DEF
结合位点
DF<
!
#
个胚乳表达元件
<]1+#
-
38S/U

根据
=;:
序列设计启动子克隆引物
*
和
"表
#
#!克隆到
#
条
#"**>
?
条带"图
#
!
2
#
X541S74TI
数据库分析启动子序列"图
%
#!显示!
!%+,-
启动子中含有转录起始关键元件
A:A:+
>8C
!启动子和增强子区域广泛存在的
Q::A+>8C
!
厌氧诱导元件
:^ 2
*
BQ+38S/U
!光响应元件
F8C+*
*
BA#+38S/U
*
<
?
#
*
AQQQ+38S/U
!茉莉酸甲酯响应元件
QBAQ:+38S/U
*
AB:QB+38S/U
!
DEF
结合位点
DF<
*
D 2^
!胚乳表达调控元件
<]1+#38S/U
!水杨酸响应
元件
AQ:+I5I3I1S
等
图
*
!
D4:;<
与其他植物
:;<
氨基酸序列比较
粗黑线部分为
=N_`
-
;
结构域!细黑线部分为
!_B+\INN
-
_C
9
超家族结构域&氨基酸序列相同的部分用深色阴影表示!
相近的部分用浅色阴影表示
\/
L
,*
!
:3/1847/V0I
6
WI17I45/
L
13I1S4381
L
D4:;<41V:;?
541S0
?
I7/I0
F85V>547]5/1I0S41V0U8TSKIV834/18U=N_`
-
;
!
SK/1>547]5/1I0S41VU8TSKI0W
?
ITU43/5
9
V834/18U!_B+\INN
-
_C
9
&
AKI043I41V0/3/54T43/1847/VTI0/VWI04TIK/
L
K5/
L
KSIV/1V4T]7858T41V5/
L
KS7858T
!
TI0
?
I7S/YI5
9
#%#
&
期 安维忠!等$葡萄风信子
!%+,-
基因及启动子的克隆与分析
78<
!
>*:?
蛋白进化树分析
;QFNF540S
?
数 据 库 中 检 索 葡 萄 风 信 子
!%+,-
!结果显示!
D4:;<
蛋白与东方美人荷兰
鸢尾"
9&#:5677%*;$%
#*中国石蒜"
3
<
$6&#$5*)*=
##
#的相似性最高!分别为
("@
和
(@
与其他物
种的相似性在
-%@
"
$@
之间与其他物种进行
蛋白序列分析"图
*
#!显示!
D4:;<
蛋白氨基酸序
列存在典型的
=N_`
-
;
结构域"具有
!+8C8
L
5WS4T+
4SI
%
\I
"
NN
#
+VI
?
I1VI1SV/8C
9L
I140I
蛋白活性的
;
端区域#和
!_B+\INN
-
_C
9
超家族结构域其结构
域位置分别在
D4:;<
氨基酸序列的
$%
"
#*&
和
!!"
"
%#"
的位置
基于
D4:;<
及其他物种的氨基酸序列构建系
统进化树"图
$
#结果显示!葡萄风信子
D4:;<
蛋
白最先与单子叶的早花中国石蒜*洋葱*东方美人荷
兰鸢尾等聚为一类!最后与苹果*碧桃等双子叶植物
聚为一类
78=
!
葡萄风信子
>*:?
蛋白的生物信息学分析
利用
XT8S<745I
分析!
D4:;<
蛋白亲水区大于
疏水区所以为亲水性蛋白!其最大值为
!,*-
!最小
值为
)!,**

XT8SX4T43
预测分析表明!
D4:;<
理论分子量为
%&,((]=
!该蛋白的等电点为
$,%$
!
蛋白不稳定系数为
*!,("
!属于不稳定蛋白
X<_^ A
在线预测
D4:;<
蛋白定位于线粒体和细胞质基质
中的可能性最大!其预测数值分别为
",**
和
",*$"

利用在线工具
AD
?
TIV
对
D4:;<
蛋白的跨膜结构
进行了预测!发现在
#(!
"
#&&
区存在一个跨膜区
运用
L
145X,预测表明!
D4:;<
蛋白不具
有信号肽!表明其不是分泌蛋白磷酸化是蛋白质
最重要的翻译后修饰之一!在细胞信号转导过程中
起重要作用用
;ISXK80
预测
D4:;<
磷酸化位
点!
D4:;<
蛋白有
&
个
磷酸化位点*
#
个
AKT
磷酸化位点和
$
个
A
9
T
磷酸化位点
<_XD
预测的
D4:;<
蛋白二级结构结果表
明!
!%+,-
基因编码的
%$$
个氨基酸残基中!
&
螺
旋占
*%,(!@
!无规则卷曲占
!(,%@
!延伸链占
#,*!@
!

+
转 角 占
#",%&@
用
XK
9
TI
预 测
D4:;<
蛋白三级结构!发现其折叠方式为双链

螺旋折叠
78@
!
1$!20
基因时空表达模型分析
为了研究
!%+,-
基因在不同组织以及花发
育不同时期的表达情况!分别提取葡萄风信子根*
茎*叶以及花发育的
$
个不同时期花蕾"
<#
"
<$
#的
总
;^:
!反转录获得
7=;:
!以之为模板!通过荧光
定量
XQ^
方法检测
!%+,-
的表达模式结果"图
-
#表明!
!%+,-
在花中优势表达!在其他组织"根*
图
$
!
D4:;<
蛋白与其他物种的
:;<
蛋白的系统进化树
标尺代表遗传距离&数值代表从
#"""
次重复计算得到的
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百分比值
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西
!
北
!
植
!
物
!
学
!
报
%$
卷
图
-
!
!%+,-
基因表达量分析
<#,
未着色的花蕾&
开始着色的花蕾&
<%,
完全着色未开放的花蕾&
<*,
完全开放的花蕾&
<$,
衰败的花蕾
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茎和叶#中微量表达花组织中!
!%+,-
从未着色
的花蕾已经开始表达!到完全着色但未开放的花蕾
中表达量最高!之后表达量开始降低
%
!
讨
!
论
:;<
是花青素合成途径中的重要酶类!属于
!+
酮戊二酸
+
双加氧酶"
!+_==0
#蛋白家族!这个家族
的蛋白都以分子氧为共有基质!并且都含有二价铁*
!+
酮戊二酸或者抗坏血酸盐+$+-,
D4:;<
蛋白氨基
酸序列存在典型的
=N_`
-
;
结构域"具有
!+
酮戊二
酸
+
加双氧酶活性的
;
端区域#和
!_B+\INN
-
_C
9
超
家族结构域拟南芥+#-,*芥菜+#,*芍药+#",*紫薯+#(,
等多种植物的
+,-
基因已经被克隆得到本实验
首次从葡萄风信子中克隆得到
:;<
基因!推测的
:;<
蛋白与其他植物的
:;<
蛋白高度一致!与荷
兰鸢尾*中国石蒜的
:;<
相似性最高!分别为
("@
和
(@
构 建 系 统 发 育 树 显 示!葡 萄 风 信 子
D4:;<
蛋白最先与单子叶的中国石蒜*洋葱*东方
美人荷兰鸢尾等聚为一类!最后与苹果*碧桃等双子
叶 植物聚为一类表明!葡萄风信子
:;<
蛋白与
单子叶植物亲缘关系更近
!%+,-
在花中高表达!从未着色的花蕾开始
表达!到完全着色但未开放的花蕾中表达量最高!之
后表达量开始降低!根*茎*叶中几乎不表达表明
在葡萄风信子中!
!%+,-
的表达具有花特异性
水母雪莲中!红色愈伤组织和红色愈伤长大的幼苗
中
+,-
基因表达强烈!而在黄色的愈伤组织中
+,-
基因表达微弱!根中不表达+#&,芍药中
+,-
基因在花中的表达要远远高于根茎叶中的表达+#*,
这与本研究中
!%+,-
基因在花中的高表达相一
致
E41
等+#,在芥菜中克隆到
#%>
?
的
+,-
序
列!开放阅读框
#"+>
?
!并分析
!
籽株系和黄籽株
系之间
+,-
的表达量与原花青素积累的关系!表
明!黄籽株系中原花青素的缺失是由于
+,-
基因
表达的缺失造成拟南芥中
AA#(
基因编码
:;<
蛋白!当将
AA#(
基因突变后拟南芥种皮中的原花
青素减少!并且形成了与野生型拟南芥种皮颜色明
显不同的黄色种子+!",以上研究表明!
+,-
基因
的表达水平与植物组织器官的颜色形成密切相关
启动子是指
;^:
聚合酶识别*结合和启始转
录的一段
=;:
序列!通常位于基因上游!它可以响
应光*温度*水分等环境因素!能够特定地调控基因
的表达本文克隆到
!%+,-
基因上游
#"**>
?
的一段启动子!
A:A:+>8C
在
:AB
上游
)">
?
的
位置!含有若干光响应元件及
DEF
结合位点类
黄酮生物合成途径基因的上游启动子顺式作用元件
的存在 是 必 要 的+!#,!可 以 充 分 激 活 基 因 的 转
录+!!+!%,
HI/
等+#(,克隆了紫薯中的
+,-
启动子!
A:A:+>8C
在
:AB
上游
)(">
?
的位置!并且有若
干光响应元件及
DEF
转录因子结合位点这与本
研究中
!%+,-
启动子特征相似同时
HI/
等+#(,
通过研究
+,-
启动子与
N>DEF#
转录因子的相互
作用!认为
N>DEF#
在花青素合成途径中起着重要
的作用表明!通过对启动子的研究可以确定调控
功能基因的转录因子!从而在转录水平调控基因的
表达本实验室后期将通过研究
!%+,-
基因与
转录因子的关系!确定葡萄风信子中花青素合成途
径重要的转录调控因子!为葡萄风信子花色研究提
供理论依据同时也将为通过基因工程手段合成特
定的黄酮类物质提供重要的应用价值+!*,
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期 安维忠!等$葡萄风信子
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基因及启动子的克隆与分析
参考文献"
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