全 文 ：书西北植物学报!
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文章编号$
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收稿日期$
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&修改稿收到日期$
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基金项目$国家公益性行业"农业#科研专项"
!"#!"%"%$
#&现代农业"梨#产业体系资助
作者简介$刘
!
普"
#+1!
#!男!博士!讲师!主要从事果树抗病分子育种研究
2)34.5
$
6
75.7
!
4847,9:7,;0
"
通信作者$朱立武!硕士!教授!主要从事果树分子生物学的研究
2)34.5
$
<875.=7
!
4847,9:7,;0
梨树腐烂病抗性种质筛选及
相关生理生化特性研究
刘
!
普#!施园园#!薛
!
程#!吴婷婷#!吴湘琴#!曹玉芬!!田路明!!朱立武#"
"
#
安徽农业大学 园艺学院!合肥
!%""%&
&
!
中国农业科学院果树研究所!辽宁兴城
#!*#""
#
摘
!
要$以
$&
份不同类型梨树种质资源的休眠期枝条为试材!连续
!
年分析枝条的腐烂病抗病性!并测定枝条韧
皮部组织
>?@
(
A?@
活性!以及总酚含量和组织疏松度&采用酶联免疫分析法"
2BCAD
#测定抗病品种)秋白*和感病
品种)茌梨*枝干中内源水杨酸"
AD
#和茉莉酸"
ED
#的含量&并依据转录组文库中
AD
和
ED
合成相关基因"
!"#
(
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(
"&
和
"%
#片段的序列信息!通过实时荧光定量"
F
GH)>IG
#技术分析基因的相对表达量结果表明$"
#
#不
同类型的梨树种质资源之间腐烂病发病程度表现出较大的差异和多样性!并以秋子梨种类抗性最强!西洋梨抗性
最弱"
!
#梨树种质资源种类腐烂病发病程度与其枝条韧皮部
>?@
(
A?@
活性和组织疏松度无显著相关性!与枝
条韧皮部总酚含量呈显著正相关关系"
%
#在病菌接种情况下!抗病品种)秋白*枝干中
AD
和
ED
含量显著上升!
同时其相关合成酶基因
!"#
和
"&
表达量也显著升高!而感病品种)茌梨*枝干中
AD
和
ED
含量变化不明显!相
关合成酶基因
!"#
(
$%&
(
"&
和
"%
的表达量则显著下降研究发现!梨树不同类型种质的腐烂病抗性有明显
差异!其发病程度与枝条韧皮部总酚含量呈显著正相关关系&内源
AD
和
ED
可能参与抗病梨树种质资源对腐烂病
的抵御过程
关键词$梨&梨树腐烂病&种质资源&抗病性&水杨酸"
AD
#&茉莉酸"
ED
#
中图分类号$
J+$*,(1
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J(1+
文献标志码$
D
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#
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梨树腐烂病"
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#是最为严重的病害
之一!主要危害主干(主枝和侧枝该病具有发生区
域广(发病率高(难以控制的特点!发病严重的梨园!
树体病疤累累(枝干残缺不全!甚至造成大量死树或
毁园目前!梨树腐烂病在中国各梨主产区均有发
生!并以新疆(西北(华北以及黄河故道等地发生较
重低温(干旱和洪涝等异常气候条件会加重梨树
腐烂病的发生!严重威胁中国梨产业的发展+#)%,迄
今国内外对梨腐烂病病原菌种类及其归属依然很不
明确有报道表明梨黑腐皮壳菌"
,-.+--/7034+
#(
苹果黑腐皮壳梨变种"
,-.+-/-.0X4W,
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)0
#(
,-.+-
53)-86+
1
3)/-
均可引起梨树腐烂病+$)&,周玉霞
等+%,对中国
#*
个省"市#梨产区分离获得的
#&1
份
梨树腐烂病菌分离株进行了序列系统进化分析!认
为中国梨树腐烂病病原菌为"
,2/-.0X4W,
1(
)0
#
建立快速准确的抗病评价方法(筛选出抗病种
质资源进而选育抗病新品种!是控制梨树腐烂病发
生的有效途径中国梨树种质资源十分丰富!不同
材料间抗病性有明显差异!但缺乏系统的研究对
现有品种资源抗病性评价!主要局限于人工接种鉴
定和自然发病调查两种方式+()1,田间自然发病调
查结果表明!秋子梨类型种质最抗病!白梨类型种
质(砂梨类型种质和新疆梨类型种质次之!西洋梨类
型种质易感病+#,通过人工接种鉴定!避免了田间
自然环境条件和病原种类(数量差异的干扰!可以获
得相对准确的结果然而!与苹果种质资源抗腐烂
病的研究相比!梨树种质资源抗腐烂病的评价指标(
抗性资源筛选研究较少!尚需进一步加强+)#!,
本实验从中国农业科学院果树研究所国家梨种
质资源圃选取梨树
$&
份代表资源类型!通过离体枝
条接种法对其抗病性进行检验!测定枝条韧皮部组
织中过氧化物酶"
>?@
#(超氧化物歧化酶"
A?@
#活
性!以及总酚含量和组织疏松度!分析梨树对腐烂病
抗性与相关指标的关系同时!通过
2BCAD
和
F
GH)>IG
分析抗病品种)秋白*和感病品种)茌梨*
枝干中内源水杨酸"
AD
#和茉莉酸"
ED
#的含量及其
合成相关基因的相对表达量!明确
AD
和
ED
与梨树
抗病力之间的关系
#
!
材料和方法
?,?
!
梨树资源类型
根据梨树的生物学特性!从中国农业科学院果
树研究所"兴城#国家梨种质资源圃!选取各种类品
种资源代表类型
$&
份!包括不同国家与地区来源的
#!
个种和
#
个种间杂种"表
#
#
?,@
!
枝条离体接种和抗病性鉴定
接种用的梨腐烂病病原菌为
L_)#
和
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!它
们分别分离于河北保定和安徽砀山!通过形态学和
CHA
分子鉴定确定上述分离株为
,2/-.0X4W,
1(
)0

致病性检测显示!上述分离株致病力都较强菌株
利用甘油超低温保存!使用
>@D
培养基扩繁!使用
一年生灭菌梨树枝条产生分生孢子
供试材料为上述种质资源直径为
",&
"
",+;3
的一年生休眠期枝条!去掉末端和梢端!截成长度为
%";3
的枝段每份资源取
*
根枝段!每根枝段的
枝皮上用电烙铁制造
%
个直径约
*33
的伤口!深
达木质部!每孔添加直径为
*33
培养
$:
的
>@D
菌饼!以灭菌的
>@D
菌饼接种作为对照接种后
的枝段放入塑料保鲜盒中!无菌纱布保湿!置于
!*
`
恒温培养在接种后
#$:
统计发病情况!计算病
斑直径和发病严重程度!实验分别于
!"##
年
#!
月
和
!"#!
年
#!
月重复
!
次发病程度为
!
年数据的
平均值!并以此计算标准误
发病程度
a
#
"每处理
#
每孔测量病斑直径%发
病孔数#%总接种伤口数+#",
梨树种质资源腐烂病抗病性按照发病程度分为
$
级!即抗"
G9/./R40R
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枝条生理指标的测定
分别取各种质资源一年生休眠期枝条的韧皮部
于液氮中研磨至粉状!每份样品分别取
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P
装入离
心管中于
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超低温保存!用于
A?@
(
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活性
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期
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刘
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普!等$梨树腐烂病抗性种质筛选及相关生理生化特性研究
表
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!
试验采用的梨树资源代表类型
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!
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54/3W9/V7W;9/VS
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种类
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编号
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资源
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N6
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原产地
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P
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发病程度
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抗病性
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砂梨
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博多青
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日本
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满顶雪
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河北昌黎
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中感
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兴隆酥
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河北兴隆
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感
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茌梨
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山东
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!1,*1 %(,!*
感
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秋子梨
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辽宁
B.4V0.0
P
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六月鲜
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N
79[.40
辽宁鞍山
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抗
G9/,
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尖把梨
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吉林
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八里香
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辽宁兴城
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辽宁
B.4V0.0
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中抗
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甜秋子
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辽宁北镇
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P
#1,"1 #1,+!
中抗
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大香水
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辽宁
B.4V0.0
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中感
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南果梨
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P
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辽宁
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感
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新疆
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乃希木特
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武威猪头
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甘肃临泽
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抗
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德国
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P
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中抗
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安古列姆
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法国
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中感
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顺香
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云南
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感
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6.0-_
P
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杜梨
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!,8
N
YW.: $&
康特
B9IV0R9
美国
D39W.;4 %+,1% !(,"1
感
A7/,
!!
注$抗病性以
!"##
年和
!"#!
年的发病程度平均值来计算
TVR9
$
H89W9/./R40;9=4/4;
F
7.W9:Y
N
7/.0
P
R894X9W4
P
9VSR89:./94/9.0;.:90;9VS!"##40:!"#!,
&&##
西
!
北
!
植
!
物
!
学
!
报
!!!!!!!!!!!!!!!!!!!
%$
卷
和总酚含量测定其中!
A?@
活性的测定采用氮蓝
四唑法!样品加入
#"3B
(
$`
预冷的
*"33V5
%
B
>_A
"
6
L(,1
#!充分涡旋震荡后于
$`
冷冻离心机
#""""d
P
离心
#*3.0
!取上清液参照王学奎+#%,测
定&
>?@
活性测定采用愈创木酚法!样品加入
#"
3B
(
$`
预冷的
*"33V5
%
B>_A
"
6
L(,"
#!充分涡
旋震荡后于
$ `
冷冻离心机
#""""d
P
离心
#*
3.0
!取上清液参照王学奎+#%,测定&总酚含量采用
]V5.0)
酚法+#$,!以没食子酸为标准品建立标准曲线
?,B
!
枝条组织结构的显微观察
取一年生枝条中部的韧皮部组织"
$33
!
#!以
]DD
固定液固定!常规石蜡切片法切片!番红固绿
对染后超薄切片机切片!制片后在光学显微镜下对
组织结构进行观察!并通过测定组织表皮的厚度和
层数以及单个细胞的面积来表征组织疏松度
?CD
!
枝条
E;
和
F;
含量测定
一年生枝条在腐烂病病菌接种后
#!8
!取伤口
周围韧皮部组织!称取液氮研磨后组织材料
!
P
于
离心管中!加入
!"3B
甲醇超声浸提
%"3.0
!
$`
条件下
#""""d
P
离心
#"3.0
!转移上清液!沉淀再
次加入
!"3B
甲醇重复提取!合并提取液上清液
过
I)#1
固相萃取柱!氮气吹干后样品使用稀释液定
容
AD
和
ED
的测定分别使用美国
G@
公司的
G@
/45.;
N
5.;4;.:
"
AD
#
25./4
和
G@E4/3V0.;4;.:
"
ED
#
25./4
测定试剂盒按照试剂盒的说明操作
?CG
!
E;
和
F;
合成酶相关基因相对表达量测定
采用改良
IHD_
法提取枝干韧皮部组织中总
GTD
+
#*
,
利用
\)\B^
反转录酶+
H4c4G4
!宝生物
"大连#有限公司,合成
;@TD
!具体操作按说明书
依据从
GTD)A9
F
中获得的基因片段信息使用
>W.39W2[
6
W9//%,"
设计荧光扩增引物!甘油醛
)%)
磷酸脱氢酶"
P
5
N
;9W45:98
N
:9)%)
6
8V/
6
84R9:98
N
:WV)
P
904/9
!
bD>@L
#作为内参扩增引物"表
!
#使用
D_AR9
6
?09
实时荧光定量
>IG
仪!
"
#
B
反应体
系包括
AM_G>W93.[2O?-
@
"
H4c4G4
#!正(反向
引物和
;@TD
模板+#&,反应程序为
+*`
预变性
+"/
!
+*`
变性
%"/
!
&"`$"/
!
$"
个循环!每个样
品设置
%
次重复使用
!


IR法!以未接种病原菌
的韧皮部组织为对照!进行
AD
和
ED
合成酶相关基
因相对表达量的测定
?,H
!
数据处理与分析
利用
2[;95!""%
软件进行数据录入!使用
A>AA#%,"SVWQ.0:V=/
软件进行方差显著性分析
与
@70;40
"
!
$
","*
#多重比较
!
!
结果与分析
@,?
!
BG
份梨种质资源离体枝条接种后的发病程度
连续两年测定的结果表明!
$&
份种质资源离体
枝条接种梨树腐烂病病原菌后发病程度表现丰富多
样!且两年表现基本一致"图
#
#其中!秋子梨类型
资源"平均发病程度为
#*,#
#抗腐烂病能力较强!砂
梨类型"平均发病程度为
#&,&
#(白梨类型"平均发
病程度为
#&,+
#和新疆梨类型"平均发病程度为
#&,(
#等抗病性次之!且这
%
种类型种质之间发病程
度差异不明显!而西洋梨类型"平均发病程度为
!#,
+
#腐烂病抗性表现最差若仅对砧木而言!)杜梨*
抗腐烂病能力最强!)大果川梨*和)河北梨*次之!
)杏叶梨*和)豆梨*抗病性最弱
同时!对种内种质资源而言!其发病程度同样表
现出多样性"图
#
#在砂梨类型中!)博多青*和)明
月*抗腐烂病能力最强!)浦城雪*抗病性最弱!其他
品种介于两者之间&在白梨类型中!)秋白*()半斤
酥*和)鹅头梨*发病严重程度处于较低
)
极低之间!
而)茌梨*和)兴隆酥*发病严重程度较高&在秋子梨
类型中!)满园香*和)六月鲜*的抗病性要明显强于
)大香水*和)南果梨*&在新疆梨类型中!)绿句句*(
表
@
!
所用引物序列
H4Y59!
!
H89/9
F
790;9/VSR89
6
W.39W/
基因名称
b9090439
正向引物
]VW=4W:
6
W.39W
"
*e
(
%e
#
反向引物
G9X9W/9
6
W.39W
"
*e
(
%e
#
A"!BC
!!!
bHbIIIDIHbHHbDHbHHHII
!!!
IIHHIHbDIHIIHIIHHbDHDbI
!"#
!!!
bDDDHHbIIDHbbIbHIIHD
!!!
HbDIDbbbHHbIIDDbbDD
$%&
!!!
DIDIbHbbIDDIIHHbID
!!!
bbIDDHIDbbbHbIIHIHH
"&
!!!
IIIbDHHbbIIbDHbD
!!!
bDHHHHHIIbIIbHHbbD
"%
!!!
bbIDbIIIDbIDHDIIHDDb
!!!
bDHIbIIbDbbbDbHHbD
!!
注$
!"#,
苯丙氨酸解氨酶基因&
$%&,
异分支酸合酶基因&
"&,
丙二烯氧化物合酶基因&
"%,
丙二烯氧化物环化酶基因&下同
TVR9
$
!"#,>890
N
54540.09433V0.4)5
N
4/9
P
909
&
$%&,C/V;8VW./34R9/
N
0R84/9
P
909
&
"&,D5909V[.:9/
N
0R84/9
P
909
&
"%,D5909V[.:9;
N
)
;54/9
P
909
&
H89/4394/Y95V=,
(&##
&
期
!!!!!!!!!!!
刘
!
普!等$梨树腐烂病抗性种质筛选及相关生理生化特性研究
图
#
!
梨种质资源枝条离体接种腐烂病菌后发病情况
#
"
$&
为表
#
资源编号&
$
,
砂梨&
%
,
白梨&
&
,
秋子梨&

,
新疆梨&
(
,
西洋梨&
)
,
其他&下同
].
P
,#
!
2X4574R.V0VSW9/./R40;9;84W4;R9W./R.;/VS!
(
)*+
P
9W3
6
54/3/RV
6
94W;40Z9W
#
"
$&,H89;V:9073Y9W.0:.;4R9/
P
90VR
N6
9;V:9.0H4Y59#
&
$
,!2
1(
)0
9
6.0-T4Z4.
&
%
,!27)38+5:430;3)0G98:,
&
&
,!2*++*)034+0+\4[.3,
&

,!2+04<0-4
=
34+0+M7
&
(
,!256//*40+B,
&
)
,?R89W/
6
9;.9/,H89/4394/Y95V=
)早熟句句*()乃希木特*和)武威猪头*等品种的抗
病性明显强于)色尔克甫*等&在西洋梨类型中!除
)路易斯*外!其他品种抗病性都较差
@,@
!
不同类型梨树种质资源枝条韧皮部抗病性相
关生理(生化特性分析
根据
$&
份不同类型梨树种质抗病性相关生理(
生化性状测定结果"表
%
#!并进行其与梨树腐烂病
抗性相关分析!得出梨树资源抗腐烂病理化性状之
间的相关性
结果表明!
$&
份种质资源之间
>?@
和
A?@
活
性差异很大!其中
>?@
活性介于
",&"
和
(1,#*K
-
3
P
#
-
3.0
#之间!
A?@
活性则处于
#!,(*
和
$%&,((K
-
3
P
#之间抗病力强弱与
>?@
和
A?@
活性没有表现出明显规律!如在砂梨中!)博多
青*和)明月*两者抗病力相当!而
>?@
(
A?@
活性却
相差很大&在白梨类型中!)半斤酥*
>?@
活性明显
高于同为抗病品种的)秋白*和)鹅头*相关分析结
果显示
>?@
和
A?@
活性与梨休眠枝条腐烂病发病
程度相关系数分别为
",#(!#
和
","**
!但相关性不
显著!而其总酚含量与休眠枝条腐烂病发病程度的
相关系数为
",%""
!且达到显著正相关水平"
!
$
",
"*
#!即休眠枝条韧皮部酚类物质含量越高!其腐烂
病发病越严重!如在砂梨中!抗病品种)博多青*的酚
类物质含量只有感病品种)浦城雪*的
(,(f

@,A
!
不同类型梨树种质资源枝条的组织结构分析
对不同梨树种质资源一年生枝条进行石蜡切
片!观察其韧皮部细胞的结构特征"图
!
#!并结合表
%
结果可知!各种质资源类型枝条的表皮细胞厚度
和层数(韧皮部细胞大小(排列紧密程度是不同的!
如抗病力弱的)南果梨*()浦城雪*韧皮部细胞相对
较大(排列疏松"图
!
!
D
(
_
#&抗病力强的)绿句句*(
)乃希木特*细胞体积较小(排列整齐(紧密"图
!
!
2
(
]
#&发病严重程度介于上述两者之间的)满顶雪*和
)玉璧林达*!其细胞大小(紧密程度介于两者之间
"图
!
!
I
(
@
#由此可见!梨树一年生枝条韧皮部细
胞大小(排列紧密程度与其腐烂病的发病程度相关
另外!然而通过对
$&
份材料间表皮细胞厚度(
层数和韧皮部细胞大小分析!结果显示$整体上!梨
树表皮厚度
!,+!
"
1,("
#
3
&表皮层数
!
"
&
层&单
细胞面积
#%,11
"
!&,(+
#
3
!
!各资源类型之间没有
明显差异表皮细胞厚度(层数和韧皮部细胞大小
与腐烂病发病程度的相关性未达显著水平!其间相
关系数分别为
","+&
(
","*!
和
",#$*
"
!
)
","*
#
@CB
!
不同腐烂病抗性梨树韧皮部
E;
和
F;
含量及
其合成酶相关基因的表达分析
在植物防御体系中!
AD
和
ED
在调节
G
基因表
达和基础抗性的响应中具有重要的作用因此!本
实验测定了在病菌诱导情况下发病程度差异明显的
白梨品种)秋白*"抗病性强#和)茌梨*"抗病性弱#枝
干韧皮部组织内源
AD
和
ED
的含量结果表明"图
%
#!在未经病原菌接种诱导情况下!)秋白*和)茌梨*
AD
含量分别为
(&+1,!%
和
%#11,"1
6
3V5
%
P
!
ED
含量分别为
$"+1,(&
和
!(+1,&&%
6
3V5
%
P
&病原菌
接种诱导
#!8
后!)秋白*和)茌梨*
AD
含量分别为
#!(#(,#%
和
%*&*,1*
6
3V5
%
P
!比接种前分别增加
&*,!"f
和
##,1*f
!
ED
含量分别为
##%&",(&
和
!#!!,*&
6
3V5
%
P
!比接种前分别增加
#((,#&f
和
!$,#&f
由此可见!抗腐烂病能力强的)秋白*品
1&##
西
!
北
!
植
!
物
!
学
!
报
!!!!!!!!!!!!!!!!!!!
%$
卷
种内源激素
AD
和
ED
含量在接种前和接种后均显
著高于抗病力弱的)茌梨*!且接种后强抗病品种内
源激素含量增加的幅度更大!而弱抗病品种
ED
含
量甚至有降低的趋势
同时!通过病菌接种诱导后!强抗病品种)秋白*
枝条韧皮部组织中
AD
合成关键酶基因
!"#
和
表
A
!
梨枝条韧皮部
0IJ
(
EIJ
活性及其总酚含量和细胞组织疏松度
H4Y59%
!
D045
N
/./VS>?@40:A?@4;R.X.R.9/
!
RVR45
6
890V5.;;V0R90R
!
590R.;95
4W9440:R.//795VV/909//.0!
(
)*+
P
9W3
6
54/3/
编码
IV:9
>?@
活性
>?@4;R.X.R
N
%"
K
-
3
P
#
-
3.0
#
#
A?@
活性
A?@4;R.X.R
N
%"
K
-
3
P
#
#
总酚含量
HVR45
6
890V5.;
;V0R90R
%"
3
P
-
P
#
#
表皮厚度
2
6
.:9W345
R8.;Z09//
%
#
3
表皮层数
2
6
.:9W3./54
N
9W
单细胞面积
A.0
P
59;95
4W94
%
#
3
!
# !,+$ &",&$ #,$( *,!! %,"" #+,*%
! !&,!+ #+",&* %,(1 $,!% $,"" !%,*#
% #$,%$ &","! %,+# $,(+ $,"" !%,*#
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$* (1,#* #(%,1# *,(+ !,+! !,"" #&,+$
$& &,"& (",$" $,%! *,(* $,"" !",*(
+&##
&
期
!!!!!!!!!!!
刘
!
普!等$梨树腐烂病抗性种质筛选及相关生理生化特性研究
$%&
的表达量分别为对照的
!,$"
和
#,##
倍!
ED
合
成关键酶基因
"&
和
"%
的表达量分别为对照的
1,($
和
#,!*
倍&而弱抗病品种)茌梨*枝条韧皮部组
织中相应
!"#
(
$%&
(
"&
和
"%
基因的表达量分
图
!
!
梨树一年生枝条韧皮部组织结构石蜡切片观察
D,
南果梨&
_,
蒲城雪&
I,
玉璧林达&
@,
满顶雪&
2,
乃希木特&
],
绿句句
].
P
,!
!
H89
6
85V93/RW7;R7W9VS
6
94WV09)
N
94W)V5:YW40;8Y
N6
4W4SS.0/9;R.V04045
N
/./
D,T40
P
7V5.
&
_,>7;890
P
[79
&
I,M7Y.5990@4W
&
@,\40:.0
P
[79
&
2,T4.[.37R9
&
],Bg
-
7
-
7
图
%
!
不同抗病性梨品种组织
AD
含量"
D
#及其关键合成酶相关基因的表达"
_
#
图中字母表示品种与处理间差异达
","*
水平&下同
].
P
,%
!
H89;V0R90RVSAD
"
D
#
40:W954R.X99[
6
W9//.V0/
"
_
#
VSAD/
N
0R89/./W954R9:
P
909/.0:.SS9W90RW9/./R40;9!
(
)*+
P
9W3
6
54/3/
H8959RR9W/3940/.
P
0.S.;40R:.SS9W90;943V0
P
X4W.R.9/40:RW94R390R/4R","*59X95
&
H89/4394/].
P
,$
图
$
!
不同抗病性梨品种组织
ED
含量"
D
#及其关键合成酶相关基因的表达"
_
#
].
P
,$
!
H89;V0R90RVSED
"
D
#
40:W954R.X99[
6
W9//.V0/
"
_
#
VSED/
N
0R89/./W954R9:
P
909/.0:.SS9W90RW9/./R40;9!
(
)*+
P
9W3
6
54/3/
"(##
西
!
北
!
植
!
物
!
学
!
报
!!!!!!!!!!!!!!!!!!!
%$
卷
别为对照的
",&$
(
",*#
(
",&&
和
",#&
倍"图
$
#由
此可见!梨树腐烂病病菌接种后强抗病品种)秋白*
组织中
AD
和
ED
关键合成酶相关基因的表达量明
显高于对照!而弱抗病品种)茌梨*组织中
AD
和
ED
关键合成酶相关基因的表达量低于对照&且同期)秋
白*组织中
$
个相关基因的表达量均显著高于
)茌梨*
%
!
讨
!
论
通过离体休眠期枝条烫伤法接种病菌来筛选抗
病种质资源已在苹果上得到应用+#")#!,本研究利用
具强致病力的腐烂病菌进行离体休眠期枝接种!对
$&
份梨种质资源进行了抗病性鉴定!共鉴定出
#!
份梨资源抗病性较强!
1
份抗病性较差在梨腐烂
病抗性鉴定中!前期田间调查结果显示秋子梨类型
种质抗病性较强!白梨(砂梨和新疆梨类型种质较感
病!西洋梨类型种质发病最重+#,本研究中离体休
眠枝接种鉴定结果与上述田间调查结果趋势一致!
仍以秋子梨类型种质的抗腐烂病抗性较强!砂梨(白
梨和新疆梨类型种质次之!而西洋梨类型种质腐烂
病抗性表现最差
前期研究表明!梨树腐烂病为弱寄生菌!其主要
的影响因素包括冻害(日灼和剪锯口造成的伤害!以
及皮孔相对面积(大小以及植物自身的抗性水平
等+#,从植物自身的抗性而言!
>?@
和
A?@
的活
性水平已被证实与机体自身的抗性密切相关!且它
们是植物细胞内抵御活性氧"
G?A
#伤害的
!
种主要
保护性酶类!对清除和阻止
G?A
的产生起到重要作
用!其活性程度可以间接反映植物体内
G?A
的代谢
变化!然而本研究结果显示梨树种质腐烂病发病严
重程度与其枝条韧皮部组织
>?@
和
A?@
活性无显
著相关性
G?A
诱导的细胞超敏反应"
LG
#能够阻
止活体寄生性病菌进一步扩展!而对于死体寄生型
病菌梨树腐烂病!
LG
有利于病菌的侵染所以!可
以推测
G?A
可能不是梨树抗腐烂病菌的主要信号
物质+#()#1,
植物酚类物质具有较强的抗氧化活性!能够清
除过量的自由基!保护生物膜的稳定性+#+)!",!因而在
植物的抗病过程中具有重要的作用!与植物的抗性
关系密切+!#)!!,本研究结果显示梨种质腐烂病抗性
与其枝条韧皮部组织总酚含量呈现显著的正相关关
系!即酚类物质含量越高!则种质的发病越重有的
酚类化合物在植物防御病原体侵染的过程中产生!
有的则作为植物的构成抗性而发挥作用+!%,由此
可见!梨树腐烂病抗性与其枝条韧皮部组织酚类物
质的相关性!除总酚含量之外!不同品种之间的酚类
物质组分含量影响可能更大因此!下一步有必要
对酚类物质的组分进行深入分析
梨树腐烂病发病的前提是病原菌在枝干部位大
量繁殖入侵的病原菌首先需要穿透寄主组织的表
皮和皮层表皮作为其与外界的第一道屏障!具有
保护植物免受外界生物以及非生物侵害等作
用+!$)!*,本研究结果显示!梨树枝条韧皮部组织表
皮细胞的厚度(层数与腐烂病的发病严重程度相关
性未达到显著水平田间调查结果显示!腐烂病一
般发生在修剪(冻害和日灼等造成的伤口周围!由此
可见!梨树枝干外在伤口是腐烂病菌入侵的主要
途径
AD
和
ED
在植物防卫信号传导过程中起重要
作用!其介导的信号途径与植物抗性密切相关!是诱
导植物抗病反应的两种重要信号分子由
AD
和
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介导的植物防卫信号传导通过作用某些调控因
子"如
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#!从而实现相互交叉!形
成复杂的信号传导网络!使植物应对不同的生物胁
迫"如病害和虫害#+!&)!1,王文艳等+!+,通过对葡萄
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和
ED
信号转导途径中相关基因的定量分析!发
现两者之间存在着协同或拮抗作用!它们之间的相
对浓度决定着这种关系的变化外源
AD
可以缓解
轮纹病菌对梨叶片的伤害+%",本实验通过对腐烂
病发病严重程度差异明显的品种)秋白*和)茌梨*枝
干韧皮部组织中
AD
和
ED
含量测定以及关键合成
酶相关基因的实时荧光定量分析!证明
AD
和
ED
在
抗病品种)秋白*起着重要的信号作用!调控着)秋
白*枝干组织对腐烂病的抗性然而!在感病品种
)茌梨*枝干中却没有发现类似变化据此推断!梨
树抗腐烂病能力可能受内源
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和
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的浓度和病
菌诱导能力所调控由于
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信号之间关系
复杂!其参与的作用机制还有待于进一步研究探讨
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