全 文 ：书西北植物学报!
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文章编号$
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收稿日期$
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基金项目$云南省科技厅项目"
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#%中国烟草总公司项目"
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#%中国烟草总公司云南省公司项目"
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作者简介$李
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岩"
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#!女!硕士研究生!主要从事烟草分子生物学研究&
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通信作者$肖炳光!博士!研究员!主要从事烟草育种与生物技术研究&
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基于
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标记对
##
份烟草材料的聚类分析
李
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岩#!!童治军!!焦芳婵!!吴兴富!!高玉龙!!姬广海#!肖炳光!"
"
#
云南农业大学!昆明
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云南省烟草农业科学研究院!昆明
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#
摘
!
要$利用与烟草赤星病抗性连锁的
,
对
AAB
标记和随机选取的
!#
对
AAB
标记!对
$$
份具有不同赤星病抗性
的烟草种质资源的遗传关系进行了分析&结果表明$基于
$
个烟草赤星病抗性
CDE
两侧的
,
个
AAB
标记可以较
好地将抗病品种和感病品种区分开来&在遗传相似系数"
!"
#为
";**
的水平上!可将
$$
个烟草品种分为
*
个类
群$具有净叶黄"国内#和
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"美国#赤星病抗源的烟草品种聚为一类"
"
类#%抗赤星病的
GH
系列烟草
品种聚为一类"
#
类#%长脖黄
I#*"

/G(!
等感病品种聚为一类"
$
类#%香甜烟草"
#$%&()*+),%
#单独聚为一类
"
%
类#&基于随机选取的
AAB
标记的聚类结果则不能看出与赤星病抗性的联系&
关键词$烟草%
AAB
标记%赤星病%聚类分析
中图分类号$
C&(%
文献标志码$
J
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烟草赤星病的病原链格孢菌"
-+.)/,/0+.)/1 ,.
#属半知菌亚门真菌!其寄主范围较广!烟草棉
花花生大豆等多种作物均可浸染并产生病斑&目
前!赤星病病菌种群对不同品种的致病性因明显专
化性差异而区分为不同的两类生理小种$柑桔致病
性和柠檬致病性(#)&烟草赤星病自
#(%!
年首次报
道以来!给世界烟草产业带来重大经济损失&在中
国!其呈间歇式爆发!尤其
!"
世纪
("
年代至今!由
于烟草赤星病生理小种多变环境气候复杂烟草品
种抵抗力差等诸多影响因素!使其成为威胁中国烟
草安全生产的主要真菌病害之一(!)&虽然选育抗烟
草赤星病的优良品种是预防该病最经济有效的途
径!但因在育种上面临着对种质资源的挖掘力度不
够优质抗病资源匮乏及种质资源遗传背景狭窄等
问题($)而很难通过常规育种手段实现&利用分子标
记技术对烟草种质资源进行遗传多样性与亲缘关系
分析!已成为烟草遗传资源研究的重要内容!其研究
结果可为种质资源在烟草育种中的科学利用提供重
要的理论依据&
在分子水平上对栽培烟草种质资源的研究中!
国内外的报道绝大多数集中在利用非特异性标记
BJ^ _
(
*),
)

ABJ^
(
&
)

JQE^
(
)%
)

KAAB
(
#")#!
)或
BJ^ _
和
JQE^
相结合(#$)#*)等对遗传多样性与亲缘关系
进行分析上!而在利用与抗性连锁标记对烟草种质
资源抗性遗传多样性分析方面的研究则较少&
PO438
等(%)利用已报道的分别与烟草
H^.
霜霉病和根黑
腐病抗性基因连锁的
JQE^
标记对其收集到的
%!
份烟草材料"
$(
份烤烟
!,
份白肋烟
#(
份晾晒烟
(
份香料烟和
!
份雪茄烟#的
H^.
霜霉病和根黑
腐病抗性资源进行了遗传多样性分析&迄今为止!
利用基于赤星病抗性连锁的分子标记对烟草种质的
遗传关系进行分析!在国内外尚未见报道&
本研究利用
D8:
>
等(#+)已报道的与烟草赤星病
抗性基因连锁的
AAB
标记!首次对烟草材料进行遗
传多样性及其亲缘关系研究!为利用烟草抗赤星病
种质资源合理选配亲本等提供理论依据&
#
!
材料和方法
@;@
!
供试材料
参试的
$$
份烟草材料"表
#
#!均由云南省烟草
农业科学研究院提供&其中!抗烟草赤星病的材料
"品种#有
!+
份!分别属于
$
个抗源$即
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#"""
"美国#净叶黄"中国#和香甜烟草"
#$%&()*1
+),%
#%烟草感赤星病材料有
(
份&
@AB
!
!!"
引物
参试的
!&
对
AAB
引物分为两部分$一部分是
D8:
>
等(#+)公布的
,
对与
$
个烟草赤星病抗性
CDE
"基因#连锁的
AAB
引物"表
!
的前
,
对引物#%
另一部分是在参照
D8:
>
等(#,)所公布的烟草
!*
条
连锁群中的
!#
条"除去
$
个
CDE
所在的连锁群#上
分别随机选取
#
对
AAB
引物&
AAB
引物序列由宝
生物"大连#有限公司合成&
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甲叉丙烯酰胺购自
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和
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购自
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表
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供试材料的名称抗性及来源
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编号
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品种名称
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抗性
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净叶黄
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由长脖黄选育出的抗赤星病品种
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由净叶黄中系统选育而成
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中抗赤星病和
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由净叶黄中选变异株培育而成
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中抗赤星病和
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抗赤星病!中抗
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中烟
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中烟
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抗赤星病和黑胫病!中抗气候型斑点病!感青枯病
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份烟草材料的聚类分析
续表
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中烟
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耐赤星病和花叶病!中抗黑胫病!感根结线虫病和
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中抗赤星病!中感根结线虫病和
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!感黑胫病
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中抗赤星病和根结线虫病!中感黑胫病!感青枯病
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号
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抗赤星病和黑胫病!中抗
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抗赤星病!中抗黑胫病根结线虫病和
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中抗赤星病!抗黑胫病!中感南方根结线虫病和
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金星
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中抗赤星病黑胫病根结线虫病和气候型斑点病
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从金星烟中系统选育而成
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中抗赤星病和
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中抗赤星病
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从
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的变异株中选育
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抗赤星病!感黑胫病
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抗赤星病!感黑胫病
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D872<<8-F8[:A
Z
8@
%
AOW)
Z
@374?
$
D872<<8-42<\A62:GH+(a
"
I)!(a/G(!
#
!! GH(&
抗赤星病!感黑胫病和
H^.B?W3W@2:$
D872<<8-F8[:A
Z
8@
%
AOW)
Z
@374?
$
D872<<8-42<\A62:\2:Y H^.
GH+(a
"
I)!(a/G(!
#
!$ GH(%
抗赤星病!感黑胫病
B?W3W@2:$
D872<<8-F8[:A
Z
8@
%
AOWZ
@374?
$
D872<<8-42<\A62:GH+(a
"
I)!(a/G(!
#
!* -?3:62F@)#"""
抗赤星病和黑胫病
B?W3W@2:$
D872<<8-F8[:A
Z
8@2:YD872<<8
-42<\A62:源于美国
LF3
>
3:2@?YUF81SAJ
!+ #$%&()*+),%
抗赤星病野火病
H^.
霜霉病白粉病和
D`HB?W3W@2:$
D8)
72<<8-F8[:A
Z
8@
!
D872<<8R34YQ3F?
!
H^.
!
_8[:
9
3`4Y?[
!
8^[)
Y?F
9
3`4Y?[2:YD`H
源于澳大利亚东南部沿海地区
LF3
>
3:2@?YUF81@6?<82W@24
2F?28UW8O@6?2W@JOW@F3432
!,
长脖黄
G62:
>
786O2:
>
感赤星病黑胫病青枯病和根结线虫病
AOWZ
@374?
$
D872<<8
-F8[:A
Z
8@
!
D872<<8-42<\A62:!
D872<<8-2<@?F324R34@2:YB88@
X:8@/?12@8Y?
地方品种
/2@3V?V2F3?@
9
!&
凤城黄金
Q?:
>
<6?:
>
6O2:
>N
3:
感赤星病黑胫病!中抗
D`HAOWZ
@374?
$
D872<<8-F8[:A
Z
8@2:Y
D872<<8-42<\A62:%
3`YY4?B?W3W@2:$
D`H
地方品种
/2@3V?V2F3?@
9
!( I!(
感赤星病和
H^.
!抗黑胫病根结线虫病和青枯病
AOWZ
@374?
$
D8)
72<<8-F8[:A
Z
8@2:Y H^.
%
B?W3W@2:$
D872<<8-42<\A62:!
B88@
X:8@/?12@8Y?2:YD872<<8-2<@?F324R34@
"
G8F\?F#$%aL=U8FY#)#(#
#
a/G%+
!% I#*"
感赤星病和根结线虫病!中抗黑胫病和青枯病!
AOWZ
@374?
$
D872<)
<8-F8[:A
Z
8@2:YB88@X:8@/?12@8Y?
%
3`YY4?B?W3W@2:$
D872<)
<8-42<\A62:\2:YD872<<8-2<@?F324R34@
A
Z
?3
>
6@I)&aA
Z
?3
>
6@I)$
$" /G(!
感赤星病青枯病根结线虫病和病毒病!抗黑胫病
AOWZ
@374?
$
D8)
72<<8-F8[:A
Z
8@
!
D872<<8-2<@?F324R34@
!
B88@X:8@/?12@8Y?2:Y
H3FOWY3W?2W?
%
B?W3W@2:$
D872<<8-42<\A62:,#!%aG8\?F$#%
$# GH#,)!
中感赤星病黑胫病!抗
D`H 3`YY4?AOWZ
@374?
$
D872<<8-F8[:
A
Z
8@2:YD872<<8-42<\A62:%
B?W3W@2:$
D`H
不详
S:\:8[:
$! 2`F
9
42:Y,"%
感赤星病青枯病根结线虫病
D`H
!抗黑胫病
AOWZ
@374?
$
D8)
72<<8-F8[:A
Z
8@
!
D872<<8-2<@?F324R34@
!
B88@X:8@/?12@8Y?2:Y
D`H
%
B?W3W@2:$
D872<<8-42<\A62:`_B873:W8:aQ48F3Y2$"#
$$ 2`F
9
42:Y(&!
感赤星病青枯病和根结线虫病!抗黑胫病和
D`HAOWZ
@374?
$
D872<<8-F8[:A
Z
8@
!
D872<<8-2<@?F324R34@2:YB88@X:8@/?12)
@8Y?
%
B?W3W@2:$
D872<<8-42<\A62:\2:YD`H
`_,"%aR34W8:
*&%#
西
!
北
!
植
!
物
!
学
!
报
!!!!!!!!!!!!!!!!!!!
$$
卷
表
B
!
!!"
引物序列信息
D274?!
!
D6?3:U8F12@38:8U@6?AAB
Z
F31?F
Z
23FW
引物
F^31?F
上游"
+c
#
$c
#
Q8F[2FYW?
]
O?:下游 "
+c
#
$c
#
B?V?FW?W?
]
O?:退火温度
D1
*
d
基序
8`@3UW
产物长度
F^8YO<@W35?
*
7
Z
D #`"&$& GDIDGGJJDDIIDDDJIGJJGJ GIGGJJJGJJIGGJDDJIDD ," JD #&!
D 0`"+$* DDDIGGDIDIDJDGIIDIDI JGJGJGJGJIIIJIIIJIJG +& DG #%$
D #`"+(% JDGGIDGGJDIGJGJGJIDJ GDIJIDIJIJIIGDDGIDIJ ," GD !",
D #`"!#, DGDGGJDGDGIDDGJIIDJGJDD GJGJDJDGDGGDGDDGGDIJGGJ ," JJD !""
D #`"**$ GJGJGJJGGGJGJGGJJGJD JJGIDIGJJGJGIGJDJIJG ," DJI !#(
D^,",,% JJIIJJJGJDDDIJDGIDJGJGJ GGJDGJJJDDGJJDJIDGDIJGGDD +& JD !##
D #`"""$ JIIIDGIIIDJGGDGDIDDD DDIDIJJDDGDGIJIGDGJDID +& DJ #%(
D #`""!, DIIJIIDIDDDIIJIJDIID GGJJIJDGJJJDGDGJGGGJDD ," JDJ !!"
D #`""$" JDDIGIDGIGDJGJJGJJGJ JJIGJIGGGJDIJGJDDGDG ,! JJD !#$
D #`"#"& DIIIJGGJIDDGDGDGJIGDJ JGDJJGJDJGGIGGGDIGDI ,! JD #%(
D #`"#$" DIIJJDGJDGGDDDJIGDDIG GJGIGJGJGDGDGGGJJID +& DJD !"#
D #`"!+* IIIJJIIIIDIDDDIDGJDJ IGJDJDIGIGDJDDDDIJJII ," JG #(%
D #`"$&% IIGIIGIJJIJDIDJDDDJI DDDDIJIIIIDDDIIDIJJI ," GD #%!
D #`"+,! GIIJDIJGGDDDGGJGDGDG GJGIGJJJGJGJGJGJGJJG ," GJ #%*
D #`"&#" JJIIGGJIDIDJDGDIIIJID DGIJDDJIGJIDGJGGDGGDG ," JG !""
D #`"%"# DIJIJDDDGJGJIGJGJGJGG IDIGJJGJDDGDDGJGJDDIG ," JD !,"
D #`#"%# IDGJIJIIJJJDGIIGGJDJ IGGGJJGDGDGJJDGGGDDD ," JGD !,"
D #`#$+% GIJJGIGDJGIIDGJIJDDD GJDJDDDGGGDGGGGJIJGG ," GDD !+%
D 0`""!* DGDIGDGGJDGDDDDIJGIJ IGJDDIGDDGJGDGGJDGJJ ," JD #((
D 0`","+ IGJIJGDGGGJJDDGGJJJJ GGGGGDDDDJIGGDGDIDDG ," IJJ !"$
D 0`!"&+ DGDGGGJJDGGJIJJIJIIJ IDJDIIDJIIJIGGGGIDDD ," JD #%!
D 0`+#$& GJJJDIIJIIGDIJIIDIJI GGDGGGGDIJJJDIDDGJJD ," DG #%#
D^+"!!& JIGDGGIGGJGDIJGDJDID GGJJIJJIDGJJDIIIDIDGJ ++ DJ !""
D^+$%++ GGJJIGJDIGJJIJGJJIJJ DDIGGJDJJDJDGDDDGJJGGJJJ ++ GJ !"%
D^,"*"+ IGDIJJGDDJIGJDIJJGJJII IIIDGGGDJGJIJJJDIGJJ +& GJ !#"
D^,#$%$ DDDGDIGJJIDIGDGGDDGDD GGJJGJJIDJDDGGJIGIID +& IJ #%!
D^,#+&$ JJGJDIIIJIIJJGJJDGJJJ DDJIDIIIGGJIDDIGDDDG ++ DJ #((
@A#
!
!!"
反应
烟草基因组
_/J
的提取采用
GDJ-
大量法!
提取纯化及检测方法参照
_?B3?等(#&)并作适当
修改&
G^B
反应体系为
!"
&
E
!其中
!"

+":
>
*
&
E
_/J
样品
#;+
&
E

#"a G^BF?2<@38:-OUU?F
"
`
>
!e
Z
4OW
#
!
&
E

!+1184
*
EY/D^ W#;+
&
E

#"
&
184
*
E
正反向引物各
#;+
&
E

F2
3
";&+S
!最后用
YYb
!
L
补足至
!"
&
E
&
G^B
扩增在
0
ZZ
?:Y8FU 2`W@?F<
9
)
<4?F
Z
F8A
上进行!反应程序为
%*d
预变性
+13:
%
%*d
变性
$"W
!退火"退火温度随引物的不同而改
变!表
!
#
$"W
!
$"
个循环!
&!d
延伸
$"W
!最后
&!d
延伸
+

&13:
!
*d
保存&
G^B
扩增产物中加
#
*
,
体积的
,aE82Y3:
>
-OUU?F
!然后取
!;"

!;+
&
E
上样!利用
,f
的非变
性聚丙烯酰胺凝胶在
_..)#!
型电泳仪"北京六一
厂#上进行电泳分离"
!!"H
!
$6
#!最后参照许绍斌
等(#()的方法进行银染检测&
@;C
!
数据分析
扩增产物按同一迁移位置上条带在各个材料中
的有"记为
#
#无"记为
"
#和缺失"记为
!
#进行统
计&参试的每
!
份材料间的遗传相似系数"
IA
#用
/?3
等(#%)的公式计算&利用
/DA.A
Z
!;##
软件(!")按照类平均法"
S^ I`J
#进行聚类分
析!构建分子进化系统树&
!
!
结果与分析
BA@
!
!!"
标记的多态性分析
利用分布在
!*
个连锁群上共计
!&
对
AAB
引
物!对
$$
份具有不同赤星病抗性的烟草种质资源进
行
G^B
扩增!扩增产物的分子量均符合预期目标
"
#""

$""7
Z
#"图
#

$
#&
!&
对
AAB
引物在
$$
份
烟草材料中共扩增出
#+%
个多态性条带"即在
!&
个
AAB
位点上共检测到
#+%
个等位基因#!每对
AAB
+&%#
#"
期
!!!!!!!!!!!!!
李
!
岩!等$基于
AAB
标记对
$$
份烟草材料的聚类分析
引物可检测的等位基因数为
!

##
个!平均为
+;(%
个&其中!分布在
$
个连锁群上且与烟草赤星病抗
性连锁的
,
对
AAB
引物在
$$
份烟草材料中共扩增
出
+$
个多态性条带!每对
AAB
引物可检测的等位
基因数为
*

##
个!平均为
(;($
个%分布在另外
!#
条连锁群上的
!#
对
AAB
引物在
$$
份烟草材料中
共扩增出
#",
个多态性条带!每对
AAB
引物可检测
的等位基因数为
!

%
个!平均为
+;"+
个&表明
AAB
标记在检测烟草基因组遗传多态性上有十分
显著的检出效率&
B;B
!
##
份具有不同赤星病抗性烟草种质的遗传相
似性
基于
,
对与烟草赤星病抗性连锁的
AAB
标记
分析结果!计算
$$
份参试烟草材料间的遗传相似系
数"表
$
#!供试材料间的遗传相似系数在
";"%

#;""
之间!平均为
";++
&其中属于野生烟草的香甜
烟草"
#$%&()*+),%
#与其他
$!
份材料间的遗传相
似系数最低!平均为
";"%
%而具有净叶黄赤星病抗
性的+庆胜
!
号,+襄颖
#
号,和+许金
&
号,之间及
同属于
GH
系列且具有赤星病抗性的+
GH&$
,
+
GH(+
,+
GH(&
,和+
GH(%
,间的遗传相似系数!达
到
#;""
&说明此
$$
份具体不同赤星病抗性烟草材
料的遗传相似性相对较低!变异范围较大!亲缘关系
较远&
基于剩余
!#
个连锁群上随机选取的
!#
个
AAB
标记分析结果!计算
$$
份参试烟草材料间的遗传相
似系数"表
$
#!供试材料间的遗传相似系数在
";"*

#;""
之间!平均为
";+!
&其中属于野生烟草的香
图
#
!
基于烟草赤星病抗性连锁标记
D #`"+(%
的扩增结果
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_/J42YY?F
%
#

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同表
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%图
!

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同
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;#
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Z
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#

$$;D6?W21?2WD274?#
%
D6?W21?2W7?48[
图
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!
基于烟草赤星病抗性连锁标记
D^,",,%
的扩增结果
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;!
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B?WO4@W8U G^B21
Z
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Z
F31?F D^,",,%
图
$
!
随机引物
D #`#$+%
的扩增结果
Q3
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西
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物
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学
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卷
书书书
表
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!
!
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份
具
有
不
同
赤
星
病
抗
性
的
烟
草
材
料
间
的
遗
传
相
似
系
数
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的
C
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记
的
遗
传
相
似
性
系
数
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左
下
为
随
机
选
取
的
C
C
D
标
记
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相
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岩!等$基于
AAB
标记对
$$
份烟草材料的聚类分析
甜烟草"
#$%&()*+),%
#与其他
$!
份材料间的遗传
相似系数最低!平均为
";"*
!这与基于
,
对连锁标
记分析的结果一致%而+长脖黄,+
/G(!
,和+
GH&()
*
,!+许金
+
号,和+
%#*&
,!+许金
(
号,和+千金黄,!
+
GH&$
,和+
GH(%
,及+净叶黄,和+
I#*"
,之间的遗
传相似系数达到
#;""
&同样也说明此
$$
份烟草材
料的遗传相似性相对较低!变异范围较大!亲缘关系
较远&
上述结果表明!供试的
$$
份烟草品种间存在着
较丰富的变异!遗传基础相对比较宽!遗传差异性较
显著&
B;#
!
具有不同赤星病抗性的烟草品种的聚类分析
根据遗传相似性系数矩阵按
S^ I`J
方法构
建
$$
份具有不同赤星病抗性烟草种质的聚类图"图
*
#&基于赤星病抗性连锁的
AAB
标记聚类结果显
示$在遗传相似系数为
";**
的水平上!可以明显地
将
$$
份烟草材料划分为
*
个类群!即!属于野生烟
草的香甜烟草"
#$%&()*+),%
#单独成一类"
%
类#!
与香甜烟草具有独特的赤星病抗性一致%+净叶黄,
的衍生品种大都与+净叶黄,聚在一个类群"
"
类#!
此类群中除+龙江
%##
,和+
-?3:62F@)#"""
,外共有
#+
份具有+净叶黄,来源的赤星病抗性%
GH
系列与
%#*&
及+中烟
%"
,聚为一类"
#
类#%剩余的+
I#*"
,
+
I!(
,和+长脖黄,等聚为一类"
$
类#!此类群中除
地方品种+塘蓬,中抗烟草赤星病外!其余
(
份材料
与+长脖黄,一样属于高感烟草赤星病的材料"图
*
!
2
#&该聚类结果说明!利用与烟草赤星病抗性连锁
的
AAB
标记可以很好地将赤星病感病品种与抗性
品种区分开!同时也能很好地将抗病品种中
$
个不
同烟草赤星病抗源区分开!+
-?3:62F@)#"""
,和
GH
系列品种"美国#!+净叶黄,"中国#和香甜烟草&利
用其余
!#
条连锁群上随机选取的
!#
对
AAB
标记
对此
$$
份烟草材料的聚类结果则显示$在遗传相似
系数为
";#%
的水平上!可以明显将
$$
个品种划分
为两大类群!即!野生烟草类群"
#
类#与栽培烟草类
群"
"
类#&因此!利用随机选取的
AAB
标记的聚类
结果则看不出与烟草赤星病抗性的关系"图
*
!
7
#&
图
*
!
$$
份烟草品种聚类图
2;
基于与赤星病抗性连锁的
AAB
标记的聚类图%
7;
基于随机选取的
AAB
标记的聚类图%
$$
份材料编号同表
#
Q3
>
;*
!
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>
F21Y?F3V?YUF81S^ I`J<4OW@?F2:24
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W3W72W?Y8:AAB2:24
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W3W8U$$@872<<82;D6?Y?:YF8
>
F21Y?F3V?YUF81@6?7F8[:W
Z
8@F?W3W@2:@43:\?YAAB12F\?FW
%
7;D6?Y?:YF8
>
F21Y?F3V?YUF81@6?F2:Y81
AAB
Z
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%
D6?$$V2F3?@3?W<8Y?W[?F?2W@6?W21?2W@6?D274?#
(&%#
西
!
北
!
植
!
物
!
学
!
报
!!!!!!!!!!!!!!!!!!!
$$
卷
$!
讨
!
论
#A@
!
基于抗性连锁的
!!"
标记在烟草种质资源研
究中的应用
利用
AAB
标记对烟草种质资源遗传多样性的
研究报道较少&直到
!""&
年!
-3:Y4?F
等(!#)才首次
报道了利用
AAB
标记揭示
#,
份普通烟草品种的亲
缘关系&随后!
8`8:
等(!!)!*)利用
-3:Y4?F
等(!#)释
放的烟草
AAB
引物对分别属于
#+
个种的
+#
份烟
草材料进行了遗传多样性分析!
*,
对
AAB
引物在
+#
份材料中共检测到
+!%
个多态性位点!平均每对
引物可检测出
##;+
个等位位点&而利用与抗性连
锁的
AAB
标记对烟草种质资源进行聚类分析的研
究!迄今尚未见报道&
PO438
等(%)利用与烟草霜霉
病
H^.
和根黑腐病抗性连锁的
JQE^
标记对
%!
份烟草材料进行了聚类分析!
##
个
JQE^
组合共获
得
+!*
个扩增片段!其中
$$
个片段"约
,;$f
#为多
态性片段&此
$$
个多态性片段能较好地将分别具
有烟草霜霉病
H^.
和根黑腐病抗源的烟草材料划
分开!并成功地将其中与抗烟草
H^.
连锁的
JQE^
扩增片段转化成
AGJB
标记&本研究中!分别利用
与烟草赤星病抗性连锁的
,
个
AAB
标记和随机选
取的
!#
个
AAB
标记!在
$$
份烟草材料中分别扩增
出
+$
和
#",
个多态性条带!每对
AAB
引物可检测
的等位基因数分别为
*

##
和
!

%
个!平均为
(;($
和
+;"+
个&相较于随机挑选的
!#
对
AAB
引物!与
烟草赤星病抗性连锁的
,
个标记在检测
$$
份具有
不同赤星病抗性的烟草种质资源遗传多态性上具有
更高的效率&
#;B
!
基于赤星病抗性连锁标记的烟草品种聚类分析
基于分子标记进行烟草种质资源聚类的相关报
道已有很多!但已有研究仅仅是针对烟草材料进行
选择!如烟草核心种质资源聚类分析($!+),!##)栽培种
聚类分析(&)晾晒烟聚类分析(#*)烤烟品种聚类分
析(*!#"!#!)等!均未针对烟草特定性状进行&本研究
利用
D8:
>
等(#+)已报道的烟草赤星病抗性
CDE
分
析获得
$
个
CDE
两侧的
,
个
AAB
标记对长脖黄
净叶黄净叶黄衍生系感赤星病品种和不同赤星病
抗源的
$$
个烟草品种进行聚类分析!得到了基于赤
星病抗性连锁标记的聚类图!其结果显示$利用与烟
草赤星病抗性
CDE
连锁的
AAB
标记不仅可将烟草
赤星病抗感品种区分开!而且还能有效地将具有不
同赤星病抗源的品种划分开&感赤星病的烟草品种
虽然遗传背景有很大差异!但基于赤星病抗性基因
连锁标记的分析!其差异度大大降低!故将此类聚在
一起"
$
类#%具有净叶黄"国内#和
-?3:62F@)#"""
"美国#抗源的烟草品种聚为一类"
"
类#%具有不明
抗源的
GH
系列烟草品种"田间的赤星病表型通常
为中抗#聚为一类"
#
类#%明显不同于上述栽培烟草
抗源的香甜烟草单独聚为一类"
%
类#&而用随机选
取的
AAB
标记的聚类结果则看不出与烟草赤星病
抗性的关系&究其原因!可能为$当利用与抗性
CDE
连锁的标记进行聚类分析时!针对的是特定的
染色体区域!聚类结果主要取决于参试材料是否抗
病及抗病基因的来源!故感病品种聚在一类!而不同
的抗源聚在不同的类别%当利用随机的
AAB
标记进
行聚类分析时!并未针对特定的染色体区域!聚类结
果主要取决于参试材料全基因组水平上的遗传差
异!故
$!
份普通烟草品种聚为一类!香甜烟草属于
不同烟草种单独聚为一类&这一结果间接反映了
已报道的烟草赤星病
CDE
定位的准确性!也为下
一步开展烟草抗赤星病的分子标记辅助育种工作奠
定了基础&
基于赤星病抗性连锁的
AAB
标记不仅可将烟
草赤星病抗感品种区分开!而且还能有效地将具有
不同赤星病抗源的烟草品种划分开&
参考文献!
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