全 文 ：植物病理学报
ＡＣＴＡ ＰＨＹＴＯＰＡＴＨＯＬＯＧＩＣＡ ＳＩＮＩＣＡ ４５(１): １０１￣１０５(２０１５)
收稿日期: ２０１３￣０７￣１１ꎻ 修回日期: ２０１４￣０９￣０９
基金项目: 国家“十二五”粮食丰产科技工程项目(２０１２ＢＡＤ０４Ｂ０７)ꎻ河南省现代农业产业技术体系专项(Ｓ２０１０￣０２￣Ｇ０５)ꎻ中国科学院知识
创新重大项目(ＫＳＣＸ２￣ＥＷ￣Ｎ￣０８)
通讯作者: 李洪连ꎬ博士、教授ꎬ研究方向为植物病害监测与防控ꎻＥ￣ｍａｉｌ: ｈｏｎｇｌｉａｎｌｉ＠ｓｉｎａ.ｃｏｍꎻ
施艳ꎬ博士、讲师ꎬ主要从事植物病毒学研究ꎻＥ￣ｍａｉｌ: ｓｈｉｙａｎ００９２５＠１２６.ｃｏｍꎮ
ｄｏｉ:１０.１３９２６ / ｊ.ｃｎｋｉ.ａｐｐｓ.２０１５.０１.０１６
研究简报
引起玉米粗缩病的水稻黑条矮缩病毒河南分离物
的分子特征
刘瑞丽ꎬ 袁 媛ꎬ 王振跃ꎬ 王英志ꎬ 袁虹霞ꎬ 张晓婷ꎬ 施 艳∗ꎬ 李洪连∗
(河南农业大学植物保护学院植物病理学系ꎬ郑州ꎬ４５０００２)
Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ ｃｈａｒａｃｔｅｒｉｚａｔｉｏｎ ｏｆ Ｒｉｃｅ ｂｌａｃｋ￣ｓｔｒｅａｋｅｄ ｄｗａｒｆ ｖｉｒｕｓ ｉｓｏｌａｔｅｓ ｃａｕｓｉｎｇ ｍａｉｚｅ
ｒｏｕｇｈ ｄｗａｒｆ ｄｉｓｅａｓｅ ｉｎ Ｈｅｎａｎ ＬＩＵ Ｒｕｉ￣ｌｉꎬ ＹＵＡＮ Ｙｕａｎꎬ ＷＡＮＧ Ｚｈｅｎ￣ｙｕｅꎬ ＷＡＮＧ Ｙｉｎｇ￣ｚｈｉꎬ
ＹＵＡＮ Ｈｏｎｇ￣ｘｉａꎬ ＺＨＡＮＧ Ｘｉａｏ￣ｔｉｎｇꎬ ＳＨＩ Ｙａｎꎬ ＬＩ Ｈｏｎｇ￣ｌｉａｎ (Ｃｏｌｌｅｇｅ ｏｆ Ｐｌａｎｔ Ｐｒｏｔｅｃｔｉｏｎꎬ Ｈｅｎａｎ Ａｇｒｉｃｕｌｔｕｒａｌ
Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙꎬ Ｚｈｅｎｇｚｈｏｕ ４５０００２ꎬ Ｃｈｉｎａ)
Ａｂｓｔｒａｃｔ: Ｒｉｃｅ ｂｌａｃｋ￣ｓｔｒｅａｋｅｄ ｄｗａｒｆ ｖｉｒｕｓ (ＲＢＳＤＶ) ｉｓ ｔｈｅ ｍａｉｎ ｐａｔｈｏｇｅｎ ｔｈａｔ ｃａｕｓｅｓ ｍａｉｚｅ ｒｏｕｇｈ ｄｗａｒｆꎬ
ｒｉｃｅ ｂｌａｃｋ￣ｓｔｒｅａｋｅｄ ｄｗａｒｆ ａｎｄ ｗｈｅａｔ ｇｒｅｅｎ ｄｗａｒｆ ｉｎ Ｃｈｉｎａꎬ ｌｅａｄｉｎｇ ｔｏ ｓｅｖｅｒｅ ｄａｍａｇｅ ｏｆ ｃｒｏｐ ｙｉｅｌｄ ａｎｄ ｑｕａｌｉｔｙ.
Ｉｎ ｔｈｉｓ ｓｔｕｄｙ ＲＢＳＤＶ ｉｎｆｅｃｔｅｄ ｍａｉｚｅ ｌｅａｖｅｓ ｗｅｒｅ ｃｏｌｌｅｃｔｅｄ ｆｒｏｍ ｅｉｇｈｔ ａｒｅａｓ ｉｎ Ｈｅｎａｎ ｐｒｏｖｉｎｃｅ. ＲＴ￣ＰＣＲ ｗａｓ
ｃｏｎｄｕｃｔｅｄ ｔｏ ａｍｐｌｉｆｙ ｔｈｅ ｆｕｌｌ￣ｌｅｎｇｔｈ ｓ１０ ｇｅｎｅ ｆｏｒ ｓｅｑｕｅｎｃｉｎｇ. Ｔｈｅ ｒｅｓｕｌｔｓ ｓｈｏｗｅｄ ｔｈａｔ ｔｈｅ ｓ１０ ｏｆ ａｌｌ ｔｈｅ ｅｉｇｈｔ
ｉｓｏｌａｔｅｓ ｗｅｒｅ １ ８０１ ｂｐ ｉｎ ｌｅｎｇｔｈ ｗｈｉｃｈ ｅｎｃｏｄｅｄ ａ ｐｒｏｔｅｉｎ ｏｆ ５５８ ａｍｉｎｏ ａｃｉｄｓ (ａａ) . Ｔｈｅ ｎｕｃｌｅｏｔｉｄｅ ａｎｄ ａｍｉｎｏ
ａｃｉｄ ｈｏｍｏｌｏｇｙ ａｍｏｎｇ ｔｈｅ ｅｉｇｈｔ ｉｓｏｌａｔｅｓ ｗｅｒｅ ９３.０％~９９.８８％ ａｎｄ ９８.２０％ ~９９.８０％ꎬ ｒｅｓｐｅｃｔｉｖｅｌｙꎬ ｉｎｄｉｃａｔｉｎｇ
ｔｈａｔ ｔｈｅ ｖａｒｉａｔｉｏｎ ｏｆ ｎｕｃｌｅｏｔｉｄｅｓ ｗａｓ ｍｏｒｅ ｏｂｖｉｏｕｓ ｔｈａｎ ｔｈａｔ ｏｆ ａｍｉｎｏ ａｃｉｄｓ.
Ｋｅｙ ｗｏｒｄｓ: ｍａｉｚｅ ｒｏｕｇｈ ｄｗａｒｆꎻ Ｒｉｃｅ ｂｌａｃｋ￣ｓｔｒｅａｋｅｄ ｄｗａｒｆ ｖｉｒｕｓꎻ Ｈｅｎａｎ ｉｓｏｌａｔｅｓꎻ Ｓ１０ꎻ ｍｏｌｅｃｕｌａｒ ｃｈａｒａｃｔｅｒｉ￣
ｚａｔｉｏｎ
文章编号: ０４１２￣０９１４(２０１５)０５￣０１０１￣０５
目前已报道的造成玉米粗缩病的病原有 ３ 种ꎬ
分别是玉米粗缩病毒 (Ｍａｉｚｅ ｒｏｕｇｈ ｄｗａｒｆ ｖｉｒｕｓꎬ
ＭＲＤＶ)ꎬ水稻黑条矮缩病毒(Ｒｉｃｅ ｂｌａｃｋ￣ｓｔｒｅａｋｅｄ
ｄｗａｒｆ ｖｉｒｕｓꎬＲＢＳＤＶ)和南方水稻黑条矮缩病毒
( Ｓｏｕｔｈｅｒｎ ｒｉｃｅ ｂｌａｃｋ￣ｓｔｒｅａｋｅｄ ｄｗａｒｆ ｖｉｒｕｓꎬ ＳＲＢＳ￣
ＤＶ) [１]ꎮ 我国于 １９５４ 年在新疆和甘肃发现该病ꎬ
上世纪 ６０年代曾在中东部夏玉米区流行ꎬ至 ７０ 年
代以来各玉米产区已陆续发生[２]ꎬ近年来在黄淮
海夏玉米区特别是套播或晚春播、早夏播玉米田发
生危害严重ꎮ
水稻黑条矮缩病毒属于呼肠孤病毒科斐济病
毒属(Ｆｉｊｉｖｉｒｕｓ)ꎬ基因组由 １０ 条双链 ＲＮＡ( ｄｓＲ￣
ＮＡ)组成ꎬ按其大小依次称为 Ｓ１ ~ Ｓ１０[２]ꎬ依靠灰
飞虱传播ꎮ 病毒粒子为 ２０ 面体对称球状结构ꎬ直
径 ６５~７０ ｎｍꎮ 在完整的病毒粒体中ꎬ至少含有 ６
种结构蛋白ꎬ其中 ＲＢＳＤＶ Ｓ１０ 编码含 ５８８ 个氨基
酸分子量为 ６３ ｋＤａ 的 Ｐ１０ 是主要结构蛋白[３]ꎮ
ＲＢＳＤＶ Ｓ７ 与 ＭＲＤＶ Ｓ６、ＲＢＳＤＶ Ｓ８ 与 ＭＲＤＶ
Ｓ７、ＲＢＳＤＶ Ｓ１０与 ＭＲＤＶ Ｓ１０ 具有较高的一致性
和相似的结构[４]ꎮ 迄今为止ꎬ中国已经报道 ２ 个
植物病理学报 ４５卷
ＲＢＳＤＶ分离物的全基因组序列[４]ꎮ
本文通过采集河南省 ８ 个地区的玉米粗缩病
病叶进行 ＲＴ￣ＰＣＲ 扩增获得 ＲＢＳＤＶ Ｓ１０ 全长基
因ꎬ分析了不同地区 ＲＢＳＤＶ分离物的分子特征及
变异情况ꎬ为河南省玉米粗缩病的监测和防控工作
提供了依据ꎮ
１ 材料与方法
１.１ 材料
２０１２ 年 ８ 月份从郑州、洛阳、安阳、南阳、信
阳、濮阳、焦作和驻马店 ８ 个地市玉米田采集玉米
粗缩病病样ꎮ 克隆载体 ｐＭＤ１９￣Ｔ 和 Ｅｘ Ｔａｑ 购自
ＴａＫａＲａ公司ꎬＴ４ ＤＮＡ 连接酶购自 ＮＥＢ 公司ꎬ逆
转录酶 Ｍ￣ＭＬＶ购自 Ｐｒｏｍｅｇａ公司ꎬ胶回收试剂盒
购自百泰克公司ꎬＴｒｉｚｏｌ 购自 Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ 公司ꎬ其他
化学试剂均为国产分析纯ꎮ
１.２ 植物总 ＲＮＡ的提取
利用 Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ的 Ｔｒｉｚｏｌ提取植物总 ＲＮＡꎬ具
体操作按照说明书进行ꎮ
１.３ 反转录￣聚合酶链式反应(ＲＴ￣ＰＣＲ)
合成正向引物 Ｆ (５′￣ＡＡＧＴＴＴＴＴＴＴＣＣＴＣＡＣ￣
ＣＣＡ￣３′)和反向 Ｒ (５′￣ＧＡＣＡＡＴＡＧＣＴＧＡＡＴＴＴＣ￣
ＣＣＣＣＴＡ￣３′)ꎬ引物由南京金斯瑞生物科技有限公司
合成ꎮ 以提取的总 ＲＮＡ为模板进行反转录ꎮ 反转
录体系包括: ５×ＭＬＶ ｂｕｆｆｅｒ ４ μＬꎬ１０ ｎｍｏｌＬ－１
ｄＮＴＰ １ μＬꎬ反向引物 １ μＬꎬＲＮａｓｉｎ ０.５ μＬꎬＲＮＡ
４ μＬꎬＭＬＶ １ μＬꎬ用 ＤＥＰＣ Ｈ２Ｏ补足 ２０ μＬꎮ 以反
转录产物( ｃＤＮＡ)为模板进行 ＰＣＲ 扩增ꎮ ２５ μＬ
ＰＣＲ反应体系包括:ｄｄＨ２Ｏ １０.５ μＬꎬｃＤＮＡ １ μＬꎬ１０
μｍｏｌＬ－１ Ｐｒｉｍｅｒ Ｆ和 Ｒ分别 ０.５ μＬꎬＥｘ Ｔａｑ ｐｒｅｍｉｘ
１２.５ μＬꎮ 反应条件:９４℃ ３ ｍｉｎꎬ然后 ９４℃ ３０ ｓꎬ５２℃
３０ ｓꎬ７２℃ ２ ｍｉｎꎬ共 ３５个循环ꎬ最后 ７２℃延伸 １０ ｍｉｎꎮ
ＰＣＲ产物经 １％琼脂糖凝胶电泳(１００ Ｖꎬ３０ ｍｉｎ)ꎬ经
ＥＢ染色后ꎬ用 ＡｌｐｈａＩｍａｇｅｒ ２２００成像ꎮ
１.４ 目的片段的连接、转化及重组子鉴定
将 ＰＣＲ产物进行琼脂糖凝胶电泳ꎬ回收目的片
段ꎮ 回收的目的片段进行琼脂糖凝胶电泳确定其纯
度ꎮ 然后将纯化的 ＤＮＡ 片段连接到 ｐＭＤ１９￣Ｔ
载体上ꎬ随后将连接产物转化到大肠杆菌 ＤＨ５ａ感
受态细胞中ꎬ在含氨苄抗生素的 ＬＢ固体培养基于
３７℃培养 １２ ｈꎮ 用灭菌牙签挑取单菌落ꎬ接种于含
氨苄青霉素的 ＬＢ 液体培养基中ꎬ在 ３７℃、２００ ｒ
ｍｉｎ－１的摇床中振荡培养 １２ ｈꎬ提取质粒进行 ＰＣＲ
验证ꎮ
１.５ 序列测定与分析
经 ＰＣＲ鉴定为阳性的克隆送南京金斯瑞生物
科技有限公司测序ꎬ每个分离物至少测定 ３个独立
的 ＰＣＲ获得的克隆各一个ꎮ 用 ＤＮＡＭａｎ 软件对
所得序列与 ＮＣＢＩ 的 ＧｅｎＢＡＮＫ 进行比对ꎬ用
ＭＥＧＡ５.２软件构建系统树(保留 Ｂｏｏｔｓｔｒａｐ 值大于
５０％的分支ꎬ注明大于 ８０％的分支)ꎮ
２ 结果与分析
２.１ ＲＴ￣ＰＣＲ扩增及序列特征
ＲＴ￣ＰＣＲ 扩增得到一个 １.８ ｋｂ 左右的特异性
片段(图 １)ꎮ 回收后克隆至 ｐＭＤ１９￣Ｔ 载体ꎬ将检
测为阳性的克隆用于序列测定ꎬ结果表明 ｓ１０ 的全
长为 １ ８０１ ｂｐꎬ其中 ５′ＵＴＲ长度为 ２１ ｂｐꎬ３′ＵＴＲ长
度为 １０３ ｂｐꎬ中间是一个长度为 ｌ ６７７ ｂｐ的开放阅
读框ꎬ编码 ５５８ ａａꎮ 序列比较发现各个 ＲＢＳＤＶ 分
离物的核苷酸变异主要是同类碱基的转换ꎬ即 ＡＧ
或 ＣＴ之间的转换ꎬ而且大多数变异发生在密码子
的第三位碱基上ꎬ不引起蛋白质水平上的变化ꎮ 在
氨基酸水平上ꎬ也多是同类氨基酸的替代ꎮ
Ｆｉｇ. １ ＲＴ￣ＰＣＲ ａｍｐｌｉｆｉｃａｔｉｏｎ ｏｆ ｓ１０
Ｍ: ＤＬ ５ ０００ ｍａｒｋｅｒꎻ Ｌａｎｅ １: ＲＴ￣ＰＣＲ ｐｒｏｄｕｃｔ.
２０１
１期 刘瑞丽ꎬ等:引起玉米粗缩病的水稻黑条矮缩病毒河南分离物的分子特征
２.２ 一致性分析
８个分离物中安阳(Ａｎｙａｎｇ)、焦作( Ｊｉａｏｚｕｏ)、
南阳 (Ｎａｎｙａｎｇ)和濮阳 ( Ｐｕｙａｎｇ)四地区的 Ｓ１０
ＯＲＦ 编码蛋白序列一致性较高ꎬ达到 ９８. ８１ ~
９９.８８％ꎬ其中安阳与焦作分离物一致性最高ꎬ为
９９. ８８％ꎻ 这 ４ 个分离物与日本的一个分离物
(Ｄ００６０６)一致性均较低ꎬ分别为 ９２.８４％ꎬ９２.８４％ꎬ
９３.１４％ꎬ９２.９１％ꎮ 南阳分离物与江苏分离物 ＪＳＸ￣
ＨＲ３６(ＨＭ２０９０７６)一致性较高ꎬ为 ９９.４６％ꎬ濮阳分
离物与山东分离物 Ｓｄ (ＡＦ３６７４７８)一致性较高ꎬ为
９８.５７％ꎮ
驻马店 (Ｚｈｕｍａｄｉａｎ)分离物与湖北分离物
Ｗｕｈａｎ(ＡＪ９１７０７)一致性最高ꎬ为 ９９.２８％ꎬ与日本
的一个分离物(Ｄ００６０６)一致性最低ꎬ为 ９２.７８％ꎮ
信阳 ( Ｘｉｎｙａｎｇ ) 分离物与湖北分离物 ( Ｈｂｒꎬ
ＡＦ２２７２０６)一致性最高ꎬ为 ９９.１７％ꎬ与日本最低为
９２.８４％ꎮ
洛阳(Ｌｕｏｙａｎｇ)分离物与安徽分离物 ＡＨＢＢ１２
(ＨＭ１８８４９６)一致性最高ꎬ为 ９９.５８％ꎬ与山东分离物
(Ｓｄꎬ ＡＦ３６７４７８)最低为 ９４.０１％ꎮ 郑州(Ｚｈｅｎｇｚｈｏｕ)
与洛阳分离物一致性最高ꎬ为 ９９.３４％ꎬ与浙江水稻
Ｚｈｊｒ(ＡＹ０５０４８９)ꎬ浙江小麦 Ｚｈｊｗ(ＡＹ０５０４８８)ꎬ浙江
Ｚｈｊｓ(ＡＦ４５９８１３) 一致性均为 ９９. ２２％ꎬ而与 Ｓｄ
(ＡＦ３６７４７８)最低ꎬ为 ９３.９８％ꎮ
２.３ 系统发育树分析
用ＭＥＧＡ３.１对克隆的 ８个分离物的 Ｓ１０ ＯＲＦ
编码蛋白序列构建了系统树(图 ２)ꎮ 从图 ２ 可以
看到安阳与焦作分离物一致性最高ꎬ安阳、南阳、濮
阳和焦作分离物一致性较高ꎮ 洛阳与郑州分离物
一致性最高ꎬ信阳与驻马店分离物一致性最高ꎮ
用 ＭＥＧＡ３.１ 再对本实验克隆的 ８ 个分离物
的 Ｓ１０ ＯＲＦ编码蛋白序列与 ＧｅｎＢａｎｋ 中的 １５ 个
ＲＢＳＤＶ序列构建系统树(图 ３)ꎬ其中 １６ 个序列分
别取自中国的河北省ꎬ湖北省ꎬ山东省ꎬ江西省ꎬ江
苏省ꎬ山西省ꎬ安徽省和浙江省ꎬ国外的日本和意大
利ꎬ以 ＭＲＤＶ(Ｌ７６５６０)为外组ꎮ 由图 ３ 可见这 ２４
个分离物明显分为 Ａ 和 Ｂ 两组ꎮ Ａ 组有 １６ 个分
离物ꎬ它们一致性在 ９６.１０％~ ９９.８％ꎮ 河南省驻马
店、安阳、焦作、南阳、濮阳和信阳的 ６ 个分离物与
河北省、湖北省、山东省、江西省、江苏省和山西省
分离物形成一个小组ꎬ而与浙江水稻上的分离物
Ｚｈｅｊｉａｎｇ(ＡＪ２９７４３３)形成亚小组ꎮ
本研究中的洛阳与郑州分离物在另一个组ꎬ与
浙江的 ３个分离物和安徽的 １ 个分离物一致性最
高ꎬ一致性为 ９９.１０~９９.８０％ꎬ而与日本的 １ 个分离
物(Ｄ００６０６) 一致性较低ꎬ日本的 １ 个分离物
(Ｄ００６０６)形成一个独立分支ꎮ
２.４ 氨基酸变异分析
本实验取 ＧｅｎＢＡＮＫ 中河南分离物 Ｈｎ
(ＡＦ２２７２０７)与郑州、洛阳、安阳、南阳、信阳、濮阳、
焦作和驻马店分离物的氨基酸序列在 ＭＥＧＡＺＨ
中进行对比ꎬ由表 １可见ꎬ氨基酸变异率在 ０.２％ ~
１.８％ꎬ说明各分离物的氨基酸序列一致性较高ꎮ
Ｆｉｇ. ２ Ｐｈｙｌｏｇｅｎｅｔｉｃ ｔｒｅｅ ｃｏｎｓｔｒｕｃｔｅｄ ｗｉｔｈ ｓ１０ ｇｅｎｅ ｏｆ ｅｉｇｈｔ
Ｒｉｃｅ ｂｌａｃｋ￣ｓｔｒｅａｋｅｄ ｄｗａｒｆ ｖｉｒｕｓ ｉｓｏｌａｔｅｓ
Ｉｓｏｌａｔｅｓ ｗｅｒｅ ｌｉｓｔｅｄ ｉｎ ｔｈｅ ｏｒｄｅｒ ｏｆ ｎａｍｅ / ｌｏｃａｔｉｏｎ / ｏｒｉｇｉｎａｌ ｈｏｓｔ / ＧｅｎＢＡＮＫ ａｃｃｅｓｓｉｏｎ ｎｕｍｂｅｒ.
３０１
植物病理学报 ４５卷
Ｔａｂｌｅ １ Ａｍｉｎｏ ａｃｉｄ ｖａｒｉａｔｉｏｎ ｏｆ Ｒｉｃｅ ｂｌａｃｋ￣ｓｔｒｅａｋｅｄ ｄｗａｒｆ ｖｉｒｕｓ ｉｓｏｌａｔｅｓ ｉｎ Ｈｅｎａｎ ｐｒｏｖｉｎｃｅ
Ｈｎ￣Ｈｅｎａｎ￣ｚｅａ＿ｍａｙｓ￣ＡＦ２２７２０７ ０.００３ ０.００３ ０.００３ ０.００６ ０.００３ ０.００３ ０.００４ ０.００５
Ｚｈｕｍａｄｉａｎ￣Ｈｅｎａｎ￣ｍａｉｚｅ ０.００５ ０.００２ ０.００２ ０.００５ ０.００２ ０.００３ ０.００３ ０.００５
Ａｎｙａｎｇ￣Ｈｅｎａｎ￣ｍａｉｚｅ ０.００５ ０.００４ ０.００２ ０.００５ ０.００２ ０.００３ ０.００３ ０.００５
Ｊｉａｏｚｕｏ￣Ｈｅｎａｎ￣ｍａｉｚｅ ０.００４ ０.００２ ０.００２ ０.００５ ０.０００ ０.００２ ０.００３ ０.００５
Ｌｕｏｙａｎｇ￣Ｈｅｎａｎ￣ｍａｉｚｅ ０.０１８ ０.０１６ ０.０１６ ０.０１４ ０.００５ ０.００６ ０.００６ ０.００３
Ｎａｎｙａｎｇ￣Ｈｅｎａｎ￣ｍａｉｚｅ ０.００４ ０.００２ ０.００２ ０.０００ ０.０１４ ０.００２ ０.００３ ０.００５
Ｐｕｙａｎｇ￣Ｈｅｎａｎ￣ｍａｉｚｅ ０.００７ ０.００５ ０.００５ ０.００４ ０.０１８ ０.００４ ０.００３ ０.００５
Ｘｉｎｙａｎｇ￣Ｈｅｎａｎ￣ｍａｉｚｅ ０.００７ ０.００５ ０.００５ ０.００４ ０.０１８ ０.００４ ０.００７ ０.００５
Ｚｈｅｎｇｚｈｏｕ￣Ｈｅｎａｎ￣ｍａｉｚｅ ０.０１６ ０.０１４ ０.０１４ ０.０１３ ０.００５ ０.０１３ ０.０１６ ０.０１６
Ｆｉｇ. ３ Ｐｈｙｌｏｇｅｎｅｔｉｃ ｔｒｅｅ ｃｏｎｓｔｒｕｃｔｅｄ ｗｉｔｈ ｓ１０ ｇｅｎｅ ｏｆ ２４ Ｒｉｃｅ ｂｌａｃｋ￣ｓｔｒｅａｋｅｄ ｄｗａｒｆ ｖｉｒｕｓ ｉｓｏｌａｔｅｓ
Ｉｓｏｌａｔｅｓ ｗｅｒｅ ｌｉｓｔｅｄ ｉｎ ｔｈｅ ｏｒｄｅｒ ｏｆ ｎａｍｅ / ｌｏｃａｔｉｏｎ / ｏｒｉｇｉｎａｌ ｈｏｓｔ / ＧｅｎＢＡＮＫ ａｃｃｅｓｓｉｏｎ ｎｕｍｂｅｒ.
３ 讨论
本研究测定了河南省 ８ 个地市 ＲＢＳＤＶ 分离
物的 Ｓ１０全长基因ꎬ进行了一致性、系统发育和氨
基酸变异分析ꎬ结果发现河南的 ８ 个 ＲＢＳＤＶ 分离
物的 Ｓ１０核苷酸变异明显ꎬ氨基酸变异较低ꎬ表现
相对保守ꎮ
从系统发育树分析来看ꎬ安阳与焦作分离物同
源性最高ꎬ洛阳与郑州分离物同源性最高ꎬ信阳与
驻马店分离物同源性最高ꎬ由于安阳和焦作都属于
４０１
１期 刘瑞丽ꎬ等:引起玉米粗缩病的水稻黑条矮缩病毒河南分离物的分子特征
豫北地区ꎬ信阳和驻马店都属于豫南地区ꎬ而郑州
属于河南中西部ꎬ与洛阳毗邻ꎬ说明 ＲＢＳＤＶ 不同
分离物的变异与地理分布有一定关系ꎮ 本研究中
扩增的 ＲＢＳＤＶ Ｓ１０ 编码蛋白已经被证实为外壳
蛋白[３]ꎬ通过对 Ｓ１０ 的核苷酸和氨基酸变异情况
进行分析发现虽然核苷酸变异较大ꎬ但是在氨基酸
水平上还是表现较为保守ꎬ说明 Ｓ１０作为外壳蛋白
保守性较高ꎮ 通过系统发育树分析发现 ８ 个分离
物中洛阳和郑州分离物与其它 ６ 个分离物不在一
个组中ꎬ说明这两个分离物与其他地区的分离物变
异较大ꎬ这种现象在山东分离物的研究中已有报
道[５]ꎮ
对河南省不同地区的 ＲＢＳＤＶ 的鉴定为进一
步研究该病毒在河南省的发生规律奠定了基础ꎬ为
研究该病毒的分子变异提供了理论依据ꎬ有助于研
究变异位点与致病性的相关性ꎮ
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ｓｔｒｅａｋｅｄ ｄｗａｒｆ ｖｉｒｕｓꎬ ａｎｄ ｐｒｅｐａｒａｔｉｏｎ ａｎｄ ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎ
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ｃａｕｓｉｎｇ ｍａｉｚｅ ｒｏｕｇｈ ｄｗａｒｆ ｄｉｓｅａｓｅ ｉｎ Ｓｈａｎｄｏｎｇ ( ｉｎ
Ｃｈｉｎｅｓｅ) [Ｊ] . Ａｃｔａ Ｐｈｙｔｏｐａｔｈｏｌｏｇｉｃａ Ｓｉｎｉｃａ (植物病
理学报)ꎬ ２００８ꎬ ３８: ５４０－５４３.
责任编辑:杨爱东
５０１