全 文 ：植物病理学报
ACTA PHYTOPATHOLOGICA SINICA　 43(5): 509-517(2013)
收稿日期: 2013-04-03; 修回日期: 2013-07-16
基金项目: 中国烟草总公司资助项目(110200902065-4); 山东省自然科学基金(ZR2010CM037); 农业部科研项目(2130108); 山东省
“泰山学者”建设工程专项经费
通讯作者: 武 侠,教授,主要从事植物线虫学的研究; Tel: 13884956250, E-mail: wuxia3897@163. com
第一作者: 林 森,男,山东青岛人,硕士研究生,主要从事植物线虫学的研究; Tel: 15269200080, E-mail: linsen910@yahoo. com. cn。
产生几丁质酶的交枝顶孢(Acremonium
implicatum)对南方根结线虫生防潜力
林 森1, 武 侠1*, 曹君正2, 王凤龙2
( 1青岛农业大学 农学与植物保护学院, 山东省植物病虫害综合防控重点实验室, 青岛 266109;
2 中国农业科学烟草研究所, 青岛 266101)
摘要:由于化学杀线剂给环境带来了污染问题,寄生线虫的生防真菌成为研究热点。 为进一步鉴定和筛选高效食线虫真
菌,从山东日照五莲烟草北方根结线虫卵中分离到 1 株较高应用潜力菌株WLE1。 根据形态学和 rDNA-ITS序列分析方法
鉴定该菌为交枝顶孢 Acremonium implicatum。 该菌是 1 株能够产生几丁质酶的食线虫真菌,在第 4 天几丁质酶活性到达高
峰,为 18. 49 μmol·h -1·mL -1,直到第 16 天依然维持较高活性;活性电泳测定其几丁质酶分子量分别为 98. 0、82. 9、70. 2
和 35. 9 kDa;交枝顶孢几丁质粗酶液处理南方根结线虫卵,第 7 天卵的孵化抑制率为 80. 17% 。 该菌能够寄生南方根结线
虫卵、2 龄幼虫和雌虫。 第 6 天卵和 2 龄幼虫的寄生率分别为 82. 11%和 73. 97% 。 说明具有高效产生几丁质酶特性且能
寄生南方根结线虫不同生活史阶段的交枝顶孢WLE1 对南方根结线虫具有巨大生防潜力。
关键词:交枝顶孢; 南方根结线虫; 寄生; 几丁质酶活性
Biocontrol potential of chitinase-producing nematophagous fungus Acremonium
implicatum against Meloidogyne incognita 　 LIN Sen1, WU Xia1, CAO Jun-zheng2, WANG
Feng-long2 　 ( 1 College of agronomy and plant protection,Qingdao Agricultural University, Key Lab of Integrated Crop Pest
Management of Shandong Province, Qingdao 266109, China; 2 Tobacco research institute, CAAS,Qingdao 266101, China)
Abstract: Due to the recent environmental concerns of the nematicides, increasing amounts of research have
been diverted to investigating natural fungi for the control of nematodes. To screen and identify fungi with chiti-
nolytic and nematophagous activity, WLE1 fungal isolate was isolated from eggs of Meloidogyne hapla on tobac-
co of Wulian, Shandong, China. Based on the morphological and phylogenetic analysis, it was designated as
Acremonium implicatum. The fungus was a chitinolytic-nematophagous microorganism. WLE1 chitinase activity
reached the highest level of 18. 49 μmol·h -1·mL -1 on the fourth day and then plateared until 16th day. The
molecular weights of chitinase were estimated as 98. 0 kDa, 82. 9 kDa, 70. 2 kDa, 35. 9 kDa on SDS-PAGE
analysis with 0. 01 glycol chitin. Crude chitinase from A. implicatum caused lysis of the eggshell of M. incogni-
ta, and the inhibitory rate of eggs hatching achieved 80. 17% on the 7th day following treatment. The fungus
parasized in different life stages of M. incognita including eggs, the second juveniles and females. The rate of
parasitism on eggs and the second juveniles of M. incognita were 82. 11% and 73. 97% on the 6th day after
treatment,respectively. These results demonstrated that A. implicatum WLE1 with the strong chitinolytic and
nematophagous activity had a great biocontrol potential against M. incognita.
Key words: Acremonium implicatum; Meloidogyne incognita; parasitism; chitinolytic activity
　
植物病理学报 43 卷
中图分类号: S432. 1　 　 　 　 　 文献标识码: A　 　 　 　 　 文章编号: 0412-0914(2013)05-0509-09
　 　 根结线虫Meloidogyne spp.引起的根结线虫病
是威胁农业生产的世界性病害。 近年来,随着保护
地蔬菜生产的快速发展,根结线虫病害也越发严
重,已影响了保护地蔬菜的生产和发展。 传统防治
根结线虫的措施主要包括轮作、抗线虫品种的选育
和杀线剂的使用,由于其施行的困难以及对环境破
坏等原因,迄今生产上尚无安全有效防治根结线虫
病害的措施。 由于农药残留和环境污染等原因,某
些传统的化学杀线剂已经或即将被禁用[1]。 寻找
和替代传统防治根结线虫的可持续治理措施是当
前农业上亟待解决的问题之一。 土壤生态调控和
应用微生物制剂控制根结线虫是可持续治理的核
心,已成为国内外研究和应用的热点[2 ~ 5]。
侵染定居性线虫雌虫和卵的寄生真菌具有巨
大的生物防治潜力[6]。 此类真菌对线虫的致病性
是评价他们生物防治能力的重要指标之一。 侵染
前寄生真菌首先吸附到线虫体表,识别并形成侵入
结构(如附着胞和侵染钉),随后形成侵染钉穿透
线虫表皮或卵壳。 侵染初期线虫卵寄生真菌形成
的附着胞以及分泌的蛋白酶和几丁质酶使卵壳破
损和透性下降而失水,此过程是附着胞机械压力和
酶解作用共同完成的[7]。
线虫的卵壳是防御土壤微生物侵入的有效屏
障,主要由几丁质(约占 40% )和蛋白质构成[8]。
食线虫真菌产生的几丁质降解酶系在线虫卵壳降
解或软化过程中发挥重要作用,降低卵壳透性,干
扰根结线虫卵孵化或使 2 龄幼虫提早破壳而出不
能在土壤中存活[9]。 卵寄生真菌如厚垣普奇尼亚
菌(Pochonia chlamydosporia)不同菌系间几丁质
降解酶系活性存在明显差异,培养滤液或纯化酶系
的活性与根结线虫卵孵化抑制率呈正相关。 线虫
卵寄生或产毒真菌分泌的几丁质降解酶系活性是
筛选和评价其生物防治潜力的重要指标之
一[10 ~ 11]。
离体测定食线虫真菌对线虫的直接寄生以及
分泌具有杀线活性的次生代谢产物或水解酶系降
低线虫的生命力,是评价食线虫真菌生防潜力的一
种重要方法[12]。 枝顶孢属(Acremonium)是一种
世界性分布的丝状真菌,具有丰富的遗传和生态多
样性,对根结线虫的生物防治具有重要的应用潜
力。 Goswami 等[13 ~ 14]和 Singh 等[15]发现细小枝
顶孢(A. strictum)为一具有良好应用前景的食线
虫真菌,该菌能够寄生南方根结线虫卵,培养滤液
抑制卵孵化,还可以通过产生毒害物质杀死南方根
结线虫 2 龄幼虫,或抑制 2 龄幼虫对寄主植物的侵
染;温室盆栽条件下能够明显地降低为害番茄的南
方根结线虫种群数量,病根形成的根结小,卵块内
卵大多数变空。 Lin 等[16]在为害烟草的北方根结
线虫卵上分离到交枝顶孢(A. implicatum),目前
尚未见该菌对根结线虫生防潜力研究的系统报道。
本项研究旨在探明交枝顶孢对根结线虫不同
生活阶段的寄生性,分析其产生的几丁质酶活性,
为进一步开发利用该菌奠定理论基础。
1　 材料与方法
1. 1　 供试菌株
本实验所用菌株来源:交枝顶孢 A. implica-
tum WLE1 于 2011 年 10 月分离自山东日照五莲为
害烟草的北方根结线虫卵,现保存于青岛农业大学
线虫学研究室。
1. 2　 菌株的形态学观察
1. 2. 1　 菌落观察 　 将活化好的菌株移入直径 9
cm的 PDA平板上,27℃暗箱培养。 从第 2 天开始
记录菌落的颜色、形态和菌落生长情况,直至菌落
长满平板。
1. 2. 2　 形态学观察　 采用玻片培养法,将 PDA培
养基分成 5 mm ×5 mm的小薄片,挑于载玻片上,
再将已活化的菌丝挑至培养基上。 27℃培养箱保
湿培养,在显微镜下连续观察该菌的分生孢子、分
生孢子梗等的形成情况,测量并照相。
1. 3　 菌株的分子生物学鉴定
1. 3. 1　 菌株 DNA 的提取　 将已活化的菌株接于
直径 9 cm的 PD平板上,液体培养,待菌落长满平
板后置于虑瓶中,抽干水分,将菌丝块在液氮中研
磨成菌丝粉末, - 20℃ 保存备用。 采用 CTAB
法[17]提取 DNA。
1. 3. 2　 ITS-rDNA 序列的扩增和测定　 采用通用
PCR 扩 增 引 物[9]: ITS1-F 5′-CTTGGTCATT-
TAGAGGAAGT-3′和 ITS4-R 5′-CCTCCGCTTAT-
015
　
　 5 期 林 森,等:产生几丁质酶的交枝顶孢(Acremonium implicatum)对南方根结线虫生防潜力
TGATATGC-3′,由上海生工生物工程技术服务有
限公司合成;PCR反应体系(20 μL):模板 DNA 1
μL、PCR Master Mix、引物各 1 μL,补充去离子水
至 20 μL。 反应条件:94℃ 4 min;94℃ 1 min,55℃
30 s,72℃ 90 s,35 个循环;72℃ 10 min。 PCR 产
物经 1%凝胶电泳检测后送交上海生工生物工程
技术服务有限公司测序。
1. 3. 3　 分子系统发育分析　 将测得的 ITS-rDNA
序列在 NCBI 数据库中进行 BLAST,用 CLUST-
AL1. 83 进行比对,用 MEGA4. 0 软件采用 Neigh-
bour-joining进行系统进化树的分析。
1. 4　 交枝顶孢对根结线虫卵、2 龄幼虫和雌虫的
寄生能力测定
1. 4. 1　 南方根结线虫的制备　 根结线虫样本来源
于青岛即墨国家农业高新技术产区黄瓜大棚内
(前茬为番茄)。 将病根洗净,在解剖镜下直接挑
取新鲜的卵块和健康雌虫。 用 1%次氯酸钠震荡
解离卵块,收集游离卵,经 2%次氯酸钠表面消毒
后制成 1 000 个卵 / mL 的悬浮液。 将洗净的新鲜
病根剪成小段,置于贝曼漏斗孵化 48 h,制成 1 000
条 2 龄幼虫 / mL的悬浮液。
1. 4. 2　 卵寄生测定 　 在直径为 90 mm 培养皿中
倒入 2%WA(加入链霉素),培养基边缘平铺 4 片
经消毒的 18 ×18 mm2 盖玻片,并用 WA埋入培养
基内,挑取 PDA 平板上培养 5 d 的纯培养物边缘
直径 6 mm菌块于WA平板培养基中央,27℃暗箱
培养至菌落长至盖玻片边缘时,分别取 30 μL约含
有 100 个卵悬液滴加在对应的盖玻片上,重复 10
次。 对照组为不接菌的 WA(加入链霉素)培养
基。 6 d 后将 WA 内平铺的盖玻片取出,上层用
0． 1%乳酸棉兰染色 10 min,用清水轻轻冲洗,制成
临时玻片,在显微镜下检查卵的寄生情况并照相,
计算卵的寄生率。
1. 4. 3　 2 龄幼虫寄生测定 　 挑取 PDA 平板上培
养 5 d的纯培养物边缘直径 6 mm菌块于上述WA
平板培养基中央,27℃暗箱培养至菌落长至盖玻片
边缘时,取 30 μL含有约 50 个表面消毒的 2 龄幼
虫的悬液滴加在对应的盖玻片上,重复 10 次。 对
照组为不接菌的 WA(加入链霉素)培养基。 6 d
后将WA内平铺的盖玻片取出,上层用 0. 1%乳酸
棉兰染色 10 min,清水轻轻冲洗,制成临时玻片,在
显微镜下检查 2 龄幼虫的寄生情况并照相,计算 2
龄幼虫的寄生率。
1. 4. 4　 雌虫寄生测定　 挑取 PDA平板上培养 5 d
的纯培养物边缘直径 6 mm 菌块于上述 WA 平板
培养基中央,27℃暗箱培养至菌落长至盖玻片边缘
时,取表面消毒的雌虫放置于对应的盖玻片上,每
片放 3 个雌虫,重复 3 次,对照组为不接菌的 WA
(加入链霉素)培养基。 6 d后,将WA内平铺的盖
玻片取出,将上层培养基用 0. 1%乳酸棉兰染色 10
min,制成临时玻片,在显微镜下观察其寄生情况
并照相。
1. 5　 几丁质降解酶系活性测定[18]
1. 5. 1　 产几丁质酶培养条件　 250 mL 锥形瓶内
加入 120 mL 液体培养基 (0. 2% 胶体几丁质,
0． 3% KNO3,0. 2% Na2HPO4,0. 1% KH2PO4,0.
03% NaCl,0. 05% MgSO4·7H2O,0. 001% FeSO4
和 0. 3% Tryptone),调 pH值为 5. 0,121℃灭菌 30
min备用。
将活化 6 d菌株菌落边缘的菌块(直径 6 mm)
3 块接种于装有 120 mL 几丁质液体培养基中,
27℃、150 rpm 摇培,3 次重复;从第 2 天开始每隔
2 d取 1. 5 mL培养滤液直到第 16 天,将培养滤液
11 000 rpm离心 15 min,上清液 - 20℃保存,供几
丁质酶活性测定。
1. 5. 2　 几丁质降解酶系活性测定　 几丁质降解酶
系活性依据胶体几丁质生成的 N-乙酰葡萄糖胺
(NAG, N-acetyglucosamine)含量测定。 酶促反应
体系包括: 0. 1 mL 几丁质酶粗提液、 0. 5 mL
1． 0%胶体几丁质、0. 4 mL 0. 1 mol / L pH 4. 5 醋酸
缓冲液,3 次重复,以反应前加 200 μL 1 mol / L
NaOH不发生酶促反应为对照,置于摇床中 37℃,
150 rpm 反应 2 h,反应后立即加 200 μL 1 mol / L
NaOH 终止反应,11 000 rpm 离心 10 min,分别取
上清液 500 μL 于 1 mL Schales液中,沸水显色反
应 15 min,420 nm 波长测其吸光度。 以已知含量
N-乙酰葡萄糖胺(NAG) (0 ~ 100 μg)制作标准曲
线,以 1 h产生 1 μmol NAG 量计算为 1 个酶活单
位(U) 。
1. 5. 3　 几丁质降解酶系活性染色　 聚丙烯酰胺凝
胶电泳(SDS-PAGE)荧光染色法,在 10%丙烯酰
胺中加入糖基化几丁质(glycol chintin)作为几丁
115
　
植物病理学报 43 卷
质酶反应底物,4℃下电泳,电泳结束后,将凝胶浸
泡于 0. 1 mol / L pH 5. 5 醋酸缓冲液(含有 1%
Triton X-100 和 1% skimmilk)中,37℃轻微震荡 2
h,去除 SDS。 然后将胶片取出置入 0. 1 mol / L
pH 5. 5 醋酸缓冲液中,37℃复性反应 6 ~ 8 h。 底
物胶片用 M2R 染色 2 h,取出底物胶片放入超纯
水褪色,去除多余荧光素,将胶片置 UVP紫外灯下
观察, 所看到的黑色胶带即为几丁质酶活性带。
1. 5. 4　 培养滤液对卵孵化抑制的测定 　 将培养
4 d的交枝顶孢培养滤液(20% )和根结线虫卵悬
浮液加入到 24 孔板中,每孔约 100 个卵,以 95℃
以上加热 4 min 的灭活培养滤液为对照,27℃培
养 7 d。 观察卵壳的变化情况,并计算卵孵化相
对抑制率。
2　 结果
2. 1　 交枝顶孢的形态学描述及分子生物学鉴定
2. 1. 1　 交枝顶孢的培养性状和形态特征　 交枝顶
孢菌落生长较慢,在 PDA培养基培养 10 d 直径为
20 ~ 25 mm,气生菌丝白色,奶油状,随后变为橙黄
色;菌落背面橙黄色。 分生孢子长椭圆形,链生或
簇生,4. 8 ~ 6. 4 ×1. 2 ~ 1. 8 μm,有厚垣孢子产生。
2. 1. 2　 菌株 rDNA-ITS 序列分子鉴定　 以 ITS-F
和 ITS-R为引物,从交枝顶孢基因组 DNA 中扩增
出 1 条约 600 bp 的序列,PCR 产物经测序后所得
序列通过 Blast 与 GenBank 中已有的核酸序列进
行比对,结果表明,菌株 WLE1 的 rDNA-ITS 序列
和 A. implicatum GU189520 的相应序列同源性高
达 97% 。 通过邻接法(Neigbor-joining method)构
建系统发育树(图 2),该菌与 A. implicatum 属于
同一类群。
2. 2　 交枝顶孢菌对南方根结线虫卵的寄生
被寄生的卵,初期卵壳周围布满菌丝,菌丝接
触卵壳表面,形成侵染钉,有的可以看到大量的分
生孢子(图 3 A);随后菌丝穿透卵壳进入卵内,在
卵内生长,卵壳内充满菌丝,使卵内容物聚集,胚胎
停止发育(图 3 B);最后卵壳皱缩或者破裂,内容
物外渗(图 3 C),被寄生的卵不能正常孵化出 2 龄
幼虫。 交枝顶孢对即将孵化出 2 龄幼虫的胚后期
卵可形成侵染钉,幼虫发育停止(图 3 D);该菌对
南方根结线虫卵的寄生第 2 天可开始看到,第 6 天
达到高峰,寄生率为 82. 11% 。 而未接菌的卵,卵
壳表面光滑,内容物均匀(图 3 E),3 d后可见胚胎
发育明显(图 3 F),5 d 后大部分可孵化出幼虫或
破壳而出。
Fig. 1　 The morphology and culture characteristics of Acremonium implicatum
(A:Colony face view; B:Colony reverse view; C-D:Conidiophores and conidia; E: chlamydospore.
215
　
　 5 期 林 森,等:产生几丁质酶的交枝顶孢(Acremonium implicatum)对南方根结线虫生防潜力
Fig. 2　 Phylogenetic tree constructed with ITS sequences of rDNA genes from
WLE1 isolate and the other fungi deposited in GenBank
Fig. 3　 Meloidogyne incognita eggs parasitized by Acremonium implicatum
A:Hyphal attachment to egg surface; B: Hyphae bound to eggshell; C: Egg is destroyed;
D: Egg in advanced stage of embryonic development is infected; E and F: Control group.
2. 3 　 交枝顶孢菌对南方根结线虫 2 龄幼虫的
寄生
被寄生的 2 龄幼虫被菌丝缠绕(图 4 A),形成
侵染钉并穿透体壁(图 4 B),有的可看到大量孢子
(图 4 C),而未接菌的 2 龄幼虫体壁光滑完整,有
的可看到缓慢蠕动(图 4 D)。 6 d 后交枝顶孢对 2
龄幼虫的寄生率高达 73. 97% 。
2. 4　 交枝顶孢菌对南方根结线虫雌虫的寄生
被寄生的雌虫,菌丝接触虫体在体壁表面形成
侵染结构(图 5 A),随后菌丝穿透雌虫体壁,在虫
体内生长繁殖,菌丝充满体壁(图 5 B),雌虫体壁
皱缩变形,内容物外渗(图 5 C)。 而未接菌培养基
上的雌虫,体壁表面光滑,内容物均匀完整(图 5
D)。
315
　
植物病理学报 43 卷
Fig. 4　 Parasitism of Acremonium implicatum to the 2nd stage juvenile
A: Networks of hyphac around 2nd stage juvenile; B: Hyphal penetration inside the J2;
C: Produce of many conidiums; D: Control.
Fig. 5　 The fungus-invaded Meloidogyne incognita female by fungus Acremonium implicatum
A: Hypha attached to female surface; B: Hyphal growth inside the female;
C: Females is destroyed, ooplasm extravasate; D: Control.
2. 5　 几丁质降解酶系活性测定结果
由图 6 可以看出,交枝顶孢菌在几丁质酶液体
培养基中,从第 2 天开始产生几丁质酶,第 4 天开
始达到酶活高峰,为 18. 49 μmol·h -1·mL -1,至
第 16 天仍保持高峰活性水平。
415
　
　 5 期 林 森,等:产生几丁质酶的交枝顶孢(Acremonium implicatum)对南方根结线虫生防潜力
Fig. 6　 Chitinolytic activity in culture filtrates
from Acremonium implicatum
2. 6　 几丁质酶活性染色结果
图 7 表明,培养 4 d 的交枝顶孢发酵液有 4 条
几丁质酶活性电泳谱带,分子量分别为 98. 0、
82． 9、70. 2 和 35. 9 kDa。
Fig. 7 　 Analysis of chitinase activity from
Acremonium implicatum using n-
ative polyacrylamide gels.
2. 7　 培养滤液对卵孵化制的影响
用培养滤液处理的卵,初期卵壳表面粗糙(图
8 A1),7 d 后卵壳破裂,大量内容物外渗 (图 8
A2)。 而用高温灭活的培养滤液处理的卵,发育正
Fig. 8　 Effects of the culture filtrates of Acremonium implicatum
on development of Meloidogyne incognita eggs
A1:On the third day after A. implicatum incubation, inclusion of egg was observed on eggshell;
A2: On the seventh day after A. implicatum incubation, eggshell was destroyed and ooplasm extravasate.
515
　
植物病理学报 43 卷
常,可看到孵化的 2 龄幼虫(图 8 B1,B2)。 27℃恒
温下,用交枝顶孢培养滤液处理南方根结线虫 7 d
后,卵孵化抑制率为 80. 17% 。
3　 讨论
食线虫真菌的生防活性包括直接对雌成虫、卵
孵化和 2 龄幼虫发育的影响,以及他们分泌的次生
杀线代谢产物和降解酶系对线虫的毒害和降解作
用[19 ~ 20]。 高效产生几丁质降解酶系的线虫卵寄生
真菌如 Pochonia chlamydosporia[19]、Purpureocilli-
um lilacinum[20]和 Lecanicillium antillanum[9]等对
南方根结线虫具有巨大应用前景的生防真菌。 寄
生性测定是评价一株菌株是否具有生防潜力的第
一步,也是非常重要的一步[21]。
本项研究通过培养性状、形态学观察结合 ITS
序列分析技术鉴定的交枝顶孢 WLE1 菌系能寄生
南方根结线虫卵、雌虫和 2 龄幼虫,同时还能高效
分泌几丁质降解酶系,说明是一株具有良好应用潜
力的生防真菌。 交枝顶孢寄生南方根结线虫雌虫
和 2 龄幼虫,首先菌丝接触线虫角质层,形成浸染
结构,随后菌丝穿透体壁,进入虫体,致使虫体出现
皱缩变形,最后虫体破裂或空壳,从而杀死线虫。
侵染线虫菌丝产生大量孢子,说明线虫是交枝顶孢
生长发育的适宜营养源。 该菌对南方根结线虫卵
和 2 龄幼虫的寄生率分别为 82. 11%和 73. 97% ,
这与 Cao 等[22]报道的高效菌株 L. psalliotae 对卵
和 2 龄幼虫的寄生率 85. 76%和 79. 23%基本相
符。 枝顶孢属真菌寄生南方根结线虫 2 龄幼虫为
首次报道。
几丁质酶活性的强弱在降解卵壳的时候发挥
了重要的作用[23 ~ 24]。 交枝顶孢WLE1 从第 4 天开
始表现出较高的几丁质酶活性,直到第 16 天仍处
于一个较高的酶活水平,用培养滤液处理线虫卵,
可破坏卵壳,抑制其正常发育,培养 7 d 后对卵的
相对孵化抑制率高达 80. 17% ,高于 Singh 等[15]分
离到的优良菌株 A. strictum 的 75. 3% ,说明该菌
几丁质降解酶系活性较强,能有效破坏线虫卵壳,
是一株有较高生防潜力的菌株。
本研究结果表明,交枝顶孢能有效侵染南方根
结线虫卵、2 龄幼虫和雌虫,并能够高效产生几丁
质酶。 进一步研究是验证该菌的田间防效试验,为
该菌的生防菌剂研发提供理论依据。
参考文献
[1] 　 Rich J R, Dunn R, Noling J. Nematicides: past and
present uses[A] . Chen S Y, Dickson D W. Nematol-
ogy advances and perspectives, vol 2. Nematode man-
agement and utilization[M] . Oxfordshire: CABI Pub-
lishing, 2004: 1041 -1082.
[2] 　 Dong Z F, Cao Z P, Wang X H, et al . Effect of
Nematode Resistant Rootstocks on Growth Characteris-
tics and Yields of Tomato ( in Chinese) [ J] . Acta
Horticulturae Sinica(园艺学报), 2007, 34(6): 1305 -
1308.
[3] 　 Esmenjand D, Voisin R, Van Ghelder C, et al. Ge-
netic dissection of resistance to root-knot nematodes
Meloidogyne spp. in plum, peach, almond, and apri-
cot from various segregating interspecific Prunus prog-
enies[ J] . Tree Genetics & Genomes, 2009, 5 (2):
279 -289.
[4] 　 Atkins S D, Hidalgo-Diaz L, Kalisz H, et al. Devel-
opment of a new management strategy for the control
of root-knot nematodes(Meloidogyne spp) in organic
vegetable production[ J] . Pest Management Science,
2003, 59(1): 183 -189.
[5] 　 Kery B R. An assessment of progress toward microbial
control of plant parasitic nematode [ J ] . Journal of
Nematology,1990,22 (4S):621 -631.
[6] 　 Stirling G R. Biological control of plant parasitic nema-
todes:progress, problems and prospects[M] . Walling-
ford:CABI, 1991, 106 -108.
[7] 　 Lopez-Llorca L V, Olivares-Bernabeu C, Salinas J, et
al. Pre-penetration events in fungal parasitism of nem-
atode eggs [ J ] . Mycological Research, 2002, 106
(4): 499 -506.
[8] 　 Mohammad-Reza M, Rasoul Z, Hamid-Reza Z, et al.
Pathogenicity of Verticillium epiphytum isolates against
Meloidogyne javanica[J] . International Journal of Pest
Management, 2011, 57(4): 291 -297.
[9] 　 Nguyen V N,Kim Y J,Oh K T, et al. . The role of
chitinase from Lecanicilliun antillanum B-3 in parasit-
ism to root-knot nematode Meloidogyne incognita eggs
[J] . Biocontrol Science and Technology, 2007, 17
(10): 1047 -1058.
615
　
　 5 期 林 森,等:产生几丁质酶的交枝顶孢(Acremonium implicatum)对南方根结线虫生防潜力
[10] Zhang C M, Wu X, Cai X H. Effect of chitinases pro-
duced by Pochonia chlamydosporia on egg-hatching of
Meloidogyne incognita ( in Chinese)[J] . Scientia Ag-
ricultura Sinica (中国农业科学), 2009, 42 (10):
3509 -3515.
[11] Yu P F, Wu X, Zhang C M, et al. Effect of chiti-
nase-producing nematophagous fungus Gliocladium vi-
rens CFCC80915 on gee hatching of Meloidogyne in-
cognita ( in Chinese)[J] . Acta Phytopathologica Sini-
ca(植物病理学报), 2008, 38(5): 496 -500.
[12] Nitao, J K, Meyer S L F, Chitwood D J. Isolation of
flavipin, a fungus compound antagonistic to plant-para-
sitic nematodes[ J] . Nematology, 2002, 4(1): 55 -
63.
[13] Goswami J, Pandey R K, Tiwari J P, et al. Manage-
ment of root-knot nematode on tomato through applica-
tion of fungal antagonists Acremonium strictum and Tri-
choderma harzianum [ J] . Journal of Environmental
Science and Health Part-B, Pesticide Food Contami-
nants and Agricultural Wastes, 2008, 43(2): 237 -
240.
[14] Goswami B K, Singh S. Fungal bioagents for the man-
agement of root-knot nematode in tomato[ J] . Pesti-
cide Research Journal, 2004, 16(1): 9 -12.
[15] Singh S, Mathur N. In vitro studies of antagonistic
fungi against the root-knot nematode, Meloidogyne in-
cognita [ J ] . Biocontrol Science and Technology,
2010, 20(3): 275 -282.
[16] Lin S, Wu X, Wang F L, et al. Diversity of oppor-
tunistic fungi colonizing egg and female of root-knot
nematodes of tobacco ( in Chinese)[J], Chinese Jour-
nal of Eco-Agriculture(中国生态农业学报), 2012,
20(10): 1353 -1358.
[17] Kim D H, Martyn R D, Magill C W. Restriction frag-
ment length polymorphism groups and physical map of
mitochondrial DNA from Fusarium oxysporum f. sp.
niveum[J] . Mol. Plant. Pathol. , 1992, 82(3): 346 -
353.
[18] Nguyen V N, Oh K T, Kim Y J, et al. Purification
and characterization of chitinases from Paecilomyces
variotii DG-3 parasitizing on Meloidogyne incognita
eggs[ J] . Journal of Industrial Microbiology and Bio-
technology, 2009, 36(2): 195 -203.
[19] Tikhonov V E, Lopez-Llorac L V, Salinas J, et al.
Purification and characterization chitinases from the
Nematophagous fungi Verticillium chlamydosporium
and suchlasporium[ J] . Fungal genetics and biology,
2002, 35(1): 67 -78.
[20] Khan A, Williams K, Molloy M P, et al. Purification
and characterization of a serine protease and chitinases
from paecilomyces lilacinus and detection of chitinase
activity on 2D gels[J] . Protein Expression & Purifica-
tion, 2003, 32(2): 210 -220.
[21] Edna S, Han C, Ada V, et al. Parasitism of Tri-
choderma on Meloidogyne javanica and role of the ge-
latinous matrix[J] . European Journal of Plant Patholo-
gy, 2007, 118(3): 247 -258.
[22] Cao J Z, Wu X, Lin S. The identification of fungus
Lecanicillium psalliotae and its colonization in different
life stages of Meloidogyne incognita ( in Chinese)[J] .
Scientia Agricultura Sinica(中国农业科学), 2012, 45
(12): 2404 -2411.
[23] Huang X, Zhao N, Zhang K. Extracellular enzymes
serving as virulence factors in nematophagous fungi in-
volved in infection of the host[ J] . Res. Microbiol. ,
2004, 155(10): 811 -816.
[24] Morton C O, Hirsch P R, Kerry B R. Infection of
plant-parasitic nematodes by nematophagous fungi-a re-
view of the application of molecular biology to under-
stand infection processes and to improve biological
control[J] . Nematology, 2004, 6(2): 161 -170.
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