全 文 ：植物病理学报
ＡＣＴＡ ＰＨＹＴＯＰＡＴＨＯＬＯＧＩＣＡ ＳＩＮＩＣＡ　 ４３(４): ４３５￣４３９(２０１３)
收稿日期: ２０１２￣０５￣２０ꎻ 修回日期: ２０１３￣０３￣２６
基金项目: 农业部公益性行业(农业)科研专项( ２０１００３０２９ꎻ ２０１００３０６６)ꎻ 国家自然科学基金资助项目(３０８７１６５５)
通讯作者: 谢关林ꎬ博士ꎬ教授ꎬ主要从事植物病原细菌及病害生物防治研究ꎻ Ｔｅｌ:０５７１￣８８９８２７１０ꎬ Ｅ￣ｍａｉｌ: ｇｌｘｉｅ＠ｚｊｕ. ｅｄｕ. ｃｎꎮ
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研究简报
番茄细菌性软腐病病原的分离与鉴定
张国庆１ꎬ 翟 婧１ꎬ 周 青１ꎬ 王 笑２ꎬ 崔舟琦１ꎬ 谢关林１∗
( １浙江大学生物技术研究所水稻生物学国家重点实验室ꎬ农业部病虫分子生物学重点开放实验室ꎬ 杭州 ３１００２９ꎻ
２ 宁波市江北区农技推广服务总站ꎬ 宁波 ３１５０２１)
Ｉｓｏｌａｔｉｏｎ ａｎｄ ｉｄｅｎｔｉｆｉｃａｔｉｏｎ ｏｆ ｔｈｅ ｐａｔｈｏｇｅｎ ｃａｕｓｉｎｇ ｔｏｍａｔｏ ｂａｃｔｅｒｉａｌ ｓｏｆｔ ｒｏｔ
ＺＨＡＮＧ Ｇｕｏ￣ｑｉｎｇ１ꎬ ＺＨＡＩ Ｊｉｎｇ１ꎬ ＺＨＯＵ Ｑｉｎｇ１ꎬ ＷＡＮＧ Ｘｉａｏ２ꎬ ＣＵＩ Ｚｈｏｕ￣ｑｉ１ꎬ ＸＩＥ Ｇｕａｎ￣ｌｉｎ１ 　 ( １ Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ ｏｆ
Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙꎬ Ｚｈｅｊｉａｎｇ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙꎬ Ｓｔａｔｅ Ｋｅｙ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ ｏｆ Ｒｉｃｅ Ｂｉｏｌｏｇｙꎬ Ｋｅｙ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ ｏｆ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ ｏｆ Ｃｒｏｐ Ｐａｔｈｏ￣
ｇｅｎｓ ａｎｄ Ｉｎｓｅｃｔｓ Ｍｉｎｉｓｔｒｙ ｏｆ Ａｇｒｉｃｕｌｔｕｒｅꎬ Ｈａｎｇｚｈｏｕ ３１００２９ꎬ Ｃｈｉｎａꎻ ２Ａｇｒｉｃｕｌｔｕｒａｌ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ Ｃｅｎｔｅｒ ｆｏｒ Ｅｘｔｅｎｓｉｏｎ ａｎｄ Ｓｅｒｖｉｃｅ
ｉｎ Ｊｉａｎｇｂｅｉꎬ Ｎｉｎｇｂｏ ３１５０２１ꎬ Ｃｈｉｎａ)
Ａｂｓｔｒａｃｔ: Ｔｏｍａｔｏ ｂａｃｔｅｒｉａｌ ｓｏｆｔ ｒｏｔ ｈａｓ ｂｅｅｎ ｂｅｃｏｍｅ ｓｅｒｉｏｕｓｌｙ ｉｎ ｒｅｃｅｎｔ ｙｅａｒｓ ｉｎ ｓｏｍｅ ａｒｅａｓ ｏｆ Ｃｈｉｎａ. Ｈｏｗ￣
ｅｖｅｒꎬ ｌｉｔｔｌｅ ｉｓ ｋｎｏｗｎ ａｂｏｕｔ ｔｈｅ ｃａｕｓａｌ ａｇｅｎｔ. Ｉｔ ｗａｓ ｉｓｏｌａｔｅｄ ａｎｄ ｉｄｅｎｔｉｆｉｅｄ ｆｏｒ ｅｆｆｅｃｔｉｖｅ ｍａｎａｇｅｍｅｎｔ ｏｆ ｔｈｅ
ｄｉｓｅａｓｅ. Ｔｈｅ ｓｙｍｐｔｏｍｓ ｏｆ ｔｈｅ ｄｉｓｅａｓｅ ｗｅｒｅ ｄｅｓｃｒｉｂｅｄ ａｎｄ ｔｈｅ ｐａｔｈｏｇｅｎ ｗａｓ ｔｅｓｔｅｄ ｉｎ ｃｌｏｎｙ ｍｏｒｐｈｏｌｏｇｙꎬ ｐａｔｈｏ￣
ｇｅｎｉｃｉｔｙꎬ ｔｒａｎｓｍｉｓｓｉｏｎ ｅｌｅｃｔｒｏｎ ｍｉｃｒｏｓｃｏｐｙꎬ ｂｉｏｌｏｇ ａｎｄ ｆａｔ ａｃｉｄ ａｎａｌｙｓｉｓ. Ｔｈｅ ｒｅｓｕｌｔｓ ｉｎｄｉｃａｔｅｄ ｔｈａｔ ｔｈｅ ｃａｕｓａｌ
ａｇｅｎｔ ｗａｓ ｂｅｌｏｎｇｅｄ ｔｏ Ｐｅｃｔｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ. Ｔｈｅ １６Ｓ ｒＤＮＡ ｗａｓ ａｌｓｏ ｓｅｑｕｅｎｃｅｄ ａｎｄ ｈａｄ ９９％ ｓｉｍｉｌａｒｉｔｙ ｗｉｔｈ Ｐｅｃ￣
ｔｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｃａｒｏｔｏｖｏｒｕｍ ｓｕｂｓｐ. ｃａｒｏｔｏｖｏｒｕｍ. Ｉｔ ｗａｓ ｆｏｒｍｅｄ ｉｎ ａ ｇｒｏｕｐ ｗｉｔｈ Ｐ. ｃ. ｓｕｂｓｐ. ｃａｒｏｔｏｖｏｒｕｍ
ＡＴＣＣ１５７１３ꎬ ＬＭＧ２４０４ꎬ ＤＳＭ３０１６８ ａｎｄ Ｐｅｃｔｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｃａｒｏｔｏｖｏｒｕｍ ｓｕｂｓｐ. ｏｄｏｒｉｆｅｒｕｍ ＬＭＧ１７５６６ꎬ ｗｈｉｃｈ
ｉｎｄｉｃａｔｅｄ ｔｈａｔ ｔｈｅ ｐａｔｈｏｇｅｎ ｗａｓ Ｐｅｃｔｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｃａｒｏｔｏｖｏｒｕｍ.
Ｋｅｙ ｗｏｒｄｓ: ｔｏｍａｔｏꎻ ｂａｃｔｅｒｉａｌ ｓｏｆｔ ｒｏｔꎻ ｂｉｏｌｏｇꎻ ＦＡＭＥｓꎻ １６Ｓ ｒＤＮＡ
文章编号: ０４１２￣０９１４(２０１３)０４￣０４３５￣０５
　 　 Ｐｅｃｔｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｃａｒｏｔｏｖｏｒｕｍ ｓｕｂｓｐ. ｃａｒｏｔｏｖｏ￣
ｒｕｍ(ｓｙｎ. Ｅｒｗｉｎｉａ ｃａｒｏｔｏｖｏｒａ ｓｕｂｓｐ. ｃａｒｏｔｏｖｏｒａ)是
引起作物腐烂的常见病原细菌ꎬ主要侵染亚热带及
温带地区的作物ꎮ 如ꎬ大白菜、马铃薯、茄子、辣椒
等ꎮ
近年来ꎬ山东省以及浙江省部分地区ꎬ番茄陆
续出现茎秆严重腐烂现象ꎮ 发病初期ꎬ番茄茎秆、
枝条上出现椭圆或条状灰褐色腐斑ꎬ然后逐渐扩
散、腐烂ꎮ 湿度大的情况下ꎬ植株表皮湿腐ꎬ伴随异
味产生ꎬ茎秆很快腐烂直至整株死亡ꎬ给菜农造成
严重的经济损失ꎮ 目前国内对番茄软腐病虽有调
查报道ꎬ但未见该病原的分离鉴定研究ꎮ 因此ꎬ明
确该病原菌ꎬ尤其是该病原菌的生理生化及分子生
物学特征ꎬ为该病害的防治提供可行依据ꎬ从而解
决生产上的实际问题ꎬ显得尤为迫切ꎮ
１　 材料与方法
１. １　 标准菌株、病原细菌分离、过敏反应及致病
性测定
供鉴定对照用的 ２ 个标准细菌菌株 Ｂｕｒｋｈｏｌ￣
ｄｅｒｉａ ｇｌｕｍａｅ ＬＭＧ ２１９６ 和 Ｐｅｃｔｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｃｈｒｙｓａｎ￣
ｔｈｅｍｉ ＬＭＧ ２８０４ 由比利时根特大学 Ｓｗｉｎｇｓ 教授
提供ꎻＰ. ｃ. ｓｕｂｓｐ. ｃａｒｏｔｏｖｏｒｕｍ ＣＢ０１００６ 由本实验
室 ２００１ 年分离于大白菜软腐病ꎮ
　
植物病理学报 ４３ 卷
从山东采集的番茄软腐病株作为诊断和病原
分离的样本ꎮ 采取四区划线法对病样浸出液进行
分离ꎬ将疑似病原菌的单菌落 ＳＤ￣１、ＳＤ￣２、ＳＤ￣３ 纯
培养ꎮ 烟草过敏反应(ｈｙｐｅｒｓｅｎｓｉｔｉｖｅ ｒｅａｃｔｉｏｎ ＨＲ)
采取背面注射法将菌液(约 ３ × １０８ ｃｆｕ / ｍＬ)接种
于普通烟叶片上ꎬ２８℃培养ꎬ２４ ｈ 后观察结果ꎮ 采
用针刺法将菌液 ＳＤ￣１ 接种于健康番茄植株茎秆
上ꎬ套袋保湿ꎬ置于 ３０℃光照培养箱中ꎬ３ ｄ 后观察
发病情况ꎮ
１. ２　 病原细菌的主要细菌学特征测定
革兰氏染色、菌落形态和主要碳、氮源的利用
测定参照 Ｓｃｈａａｄ等[１]方法ꎮ 电镜观察通过透射电
子显微镜(ＫＹＫＹ￣１０００Ｂ)完成ꎮ
１. ３　 Ｂｉｏｌｏｇ鉴定
将经过致病性测定证实的菌株 ＳＤ￣１、ＳＤ￣２、
ＳＤ￣３ 进行 Ｂｉｏｌｏｇ 鉴定ꎬ以标准菌株 ＬＭＧ２１９６、
ＬＭＧ２８０４ 和 ＣＢ０１００６ 作为阳性对照ꎮ Ｂｉｏｌｏｇ 测
定参照 Ｚｈｕ等[２]方法ꎬ通过 Ｂｉｏｌｏｇ Ｍｉｃｒｏｓｔａｔｉｏｎ ＴＭ
全自动细菌鉴定程序(４. ２ 版本)进行分析ꎮ
１. ４　 脂肪酸(ＦＡＭＥｓ)鉴定
ＦＡＭＥｓ鉴定参照 Ｘｕ 等[３]方法ꎬ通过全自动
微生物鉴定系统—美国 Ａｇｉｌｅｎｔ ６８９０ 型气相色谱
系统进行分析ꎮ
１. ５　 １６Ｓ ｒＤＮＡ序列测定及系统发育分析
利用 １６Ｓ ｒＤＮＡ 通 用 引 物 ( １６ＳＰ０: ５′￣
ＧＡＡＧＡＧＴＴＴＧＡＴＣＣＴＧＧＣＴＣＡＧ￣３′ꎻ １６ＳＰ６: ５′￣
ＣＴＡＣＧＧＣＴＡＣＣＴＴＧＴＴＡＣＧＡ￣３′)对病原基因组
进行 ＰＣＲ 扩增ꎮ ＡｘｙＰｒｅｐ ＴＭ ＤＮＡ Ｇｅｌ Ｅｘｔｒａｃｔｉｏｎ
Ｋｉｔ回收 ＰＣＲ产物ꎬ华大基因公司测序ꎮ
利用 ＭＥＧＡ ４. ０ 软件对分离菌的 １６Ｓ ｒＤＮＡ
序列进行分析ꎬ采用 Ｃｌｕｓｔａｌ Ｗ 方法进行多序列全
局比对ꎬ采用邻近相连法(Ｎｅｉｇｈｂｏｒ￣ｊｏｉｎｉｎｇ)构建
系统发育树[４]ꎮ
２　 结果与分析
２. １　 番茄软腐病症状及致病性
２４ ｈ后ꎬ菌株 ＳＤ￣１、ＳＤ￣２、ＳＤ￣３ 引起烟草过敏
性反应(图 １￣ａ)ꎮ 菌株 ＳＤ￣１ 接种番茄植株茎秆
４８、７２ ｈ后的症状(图 １￣ｃ、ｄ)ꎬ对照无明显变化(图
１￣ｂ)ꎬ接种 ＳＤ￣１ 的植株 ４８ ｈ 后ꎬ茎秆出现条状腐
斑ꎬ逐渐沿枝条扩散ꎬ茎秆开始缢缩、腐烂ꎬ７２ ｈ 后
植株萎蔫死亡ꎮ 上述症状和田间采集时的症状基
本相似ꎮ
Ｆｉｇ. １　 Ｐａｔｈｏｇｅｎｉｃｉｔｙ ｔｅｓｔ ｏｆ ｔｈｅ ３ ｉｓｏｌａｔｅｄ ｓｔｒａｉｎｓ ｏｎ ｔｏｂａｃｃｏ ａｎｄ ｔｏｍａｔｏ
ａ: Ｈｙｐｅｒｓｅｎｓｉｔｉｖｅ ｒｅａｃｔｉｏｎ ｉｎｄｕｃｅｄ ｂｙ ｉｓｏｌａｔｅ ＳＤ￣１ꎬ ＳＤ￣２ ａｎｄ ＳＤ￣３ ｏｎ ｔｏｂａｃｃｏꎻ
ｂ: Ｃｏｎｔｒｏｌ ｔｏｍａｔｏ ｐｌａｎｔ ｉｎｏｃｕｌａｔｅｄ ｗｉｔｈ ｓｔｅｒｉｌｅ ｗａｔｅｒꎻ
ｃ: Ｓｙｍｐｔｏｍ ｏｆ ｔｏｍａｔｏ ｉｎｏｃｕｌａｔｅｄ ｗｉｔｈ ｉｓｏｌａｔｅ ＳＤ￣１ａｆｔｅｒ ４８ ｈꎻ
ｄ: Ｓｙｍｐｔｏｍ ｏｆ ｔｏｍａｔｏ ｉｎｏｃｕｌａｔｅｄ ｗｉｔｈ ｉｓｏｌａｔｅ ＳＤ￣１ａｆｔｅｒ ７２ ｈ.
６３４
　
　 ４ 期 　 　 张国庆ꎬ等:番茄细菌性软腐病病原的分离与鉴定
２. ２　 病原细菌的菌落及菌体形态
分离菌 ＳＤ￣１ 革兰氏染色呈阴性ꎬ在 ＮＡ 培养
基上菌落圆形、隆起、边缘整齐ꎬ灰白色(图 ２￣ａ)ꎻ
菌体短杆状、无芽孢(图 ２￣ｂ)ꎬ大小为(０. ５ ~ １)μｍ
× (１ ~ １３)μｍ ꎬ周生鞭毛(图 ２￣ｃ)ꎮ
２. ３　 Ｂｉｏｌｏｇ与脂肪酸(ＦＡＭＥｓ)鉴定
选取分离菌 ＳＤ￣１、ＳＤ￣２、ＳＤ￣３ 经 Ｂｉｏｌｏｇ Ｍｉ￣
ｃｒｏｓｔａｔｉｏｎ ＴＭ全自动细菌鉴定程序分析ꎬ其 ＳＩＭ 平
均值分别为 ０. ６９３、０. ６４３、０. ６５４ꎬ系统将其匹配为
Ｐ. ｃ. ｓｕｂｓｐ. ｃａｒｏｔｏｖｏｒｕｍ(表 １)ꎮ ＦＡＭＥｓ 鉴定结
果匹配程度遵循 Ｂｕｙｅｒ等[５]的原则:相似性系数 <
０. ２ꎬ结果不可用ꎻ相似性系数≥０. ５ꎬ鉴定到属ꎮ
ＳＤ￣１、 ＳＤ￣２、 ＳＤ￣３ 经全自动微生物鉴定系统—美
国 Ａｇｉｌｅｎｔ ６８９０ 型气相色谱系统分析后ꎬ其 ＳＩＭ平
均值分别为 ０. ４３２、０. ４１０、０. ４２１ꎬ系统将其匹配为
Ｐ. ｃ. ｓｕｂｓｐ. ｃａｒｏｔｏｖｏｒｕｍ(表 ２)ꎬ３ 株标准菌株与
原鉴定结果完全一致ꎬ证明了结果的可靠性ꎮ 综合
ｂｉｏｌｏｇ与 ＦＡＭＥｓ鉴定结果ꎬ病原菌应属于果胶杆
菌属(Ｐｅｃｔｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ)ꎮ
２. ４　 生理生化分析
通过对分离菌 ＳＤ￣１、ＳＤ￣２、ＳＤ￣３ 和标准菌株
ＣＢ０１００６ 和 ＡＴＣＣ１５７１３ ( Ｐ. ｃ. ｓｕｂｓｐ. ｃａｒｏｔｏｖｏ￣
ｒｕｍ)主要碳、氮源的利用分析ꎬ发现这 ３ 个分离菌
株和标准菌株除了在 Ｄ￣ｔｒｅｈａｌｏｓｅ、Ｌ￣ｌａｃｔｉｃ ａｃｉｄ 利
用上存在差异外ꎬ其他的碳、氮源利用完全相同
(表 ３)ꎬ进一步验证了上述鉴定结果的可靠性ꎮ
Ｆｉｇ. ２　 Ｃｏｌｏｎｉａｌ ｍｏｒｐｈｏｌｏｇｙ ａｎｄ ｔｈｅ ｔｒａｎｓｍｉｓｓｉｏｎ ｅｌｅｃｔｒｏｎ ｍｉｃｒｏｓｃｏｐｙ (ＴＥＭ)
ｏｆ ｔｈｅ ｐａｔｈｏｇｅｎｉｃ ｉｓｏｌａｔｅ ＳＤ￣１
ａ: Ｃｏｌｏｎｉａｌ ｍｏｒｐｈｏｌｏｇｙ ｏｆ ｉｓｏｌａｔｅ ＳＤ￣１ꎻ ｂ: ＴＥＭ (２０ ０００ × ) ｏｆ ｉｓｏｌａｔｅ ＳＤ￣１ꎻ ｃ: ＴＥＭ (４０ ０００ × ) ｏｆ ｉｓｏｌａｔｅ ＳＤ￣１.
Ｔａｂｌｅ １　 Ｂｉｏｌｏｇ ｉｄｅｎｔｉｆｉｃａｔｉｏｎ ｏｆ ｔｈｅ ｃａｕｓａｌ ｐａｔｈｏｇｅｎ ｏｆ ｔｏｍａｔｏ ｂａｃｔｅｒｉａｌ ｓｏｆｔ ｒｏｔ
Ｓｔｒａｉｎ Ｏｒｉｇｉｎａｌ ｉｄｅｎｔｉｔｙ
Ｂｉｏｌｏｇ ｉｄｅｎｔｉｆｉｃａｔｉｏｎ
ＳＩＭ Ｓｙｓｔｅｍ ｉｄｅｎｔｉｔｙ
ＬＭＧ ２１９６ Ｂｕｒｋｈｏｌｄｅｒｉａ ｇｌｕｍａｅ ０. ７７４ Ｂｕｒｋｈｏｌｄｅｒｉａ ｇｌｕｍａｅ
ＬＭＧ ２８０４ Ｐ. ｃｈｒｙｓａｎｔｈｅｍｉ(Ｄｉｃｋｅｙａ ｓｐ. ) ０. ６３５ Ｐ. ｃｈｒｙｓａｎｔｈｅｍｉ
ＣＢ ０１００６ Ｐ. ｃ. ｓｕｂｓｐ. ｃａｒｏｔｏｖｏｒｕｍ ０. ６６７ Ｐ. ｃ. ｓｕｂｓｐ. ｃａｒｏｔｏｖｏｒｕｍ
ＳＤ￣１ ＿ ０. ６９３ Ｐ. ｃ. ｓｕｂｓｐ. ｃａｒｏｔｏｖｏｒｕｍ
ＳＤ￣２ ＿ ０. ６４３ Ｐ. ｃ. ｓｕｂｓｐ. ｃａｒｏｔｏｖｏｒｕｍ
ＳＤ￣３ ＿ ０. ６５４ Ｐ. ｃ. ｓｕｂｓｐ. ｃａｒｏｔｏｖｏｒｕｍ
ＬＭＧ ａｎｄ ＣＢ ｃｏｄｅ ａｒｅ ｔｈｅ ｒｅｆｅｒｅｎｃｅ ｓｔｒａｉｎｓꎬ ｐｏｓｉｔｉｖｅ ｃｏｎｔｒｏｌ.
７３４
　
植物病理学报 ４３ 卷
Ｔａｂｌｅ ２　 ＦＡＭＥｓ ｉｄｅｎｔｉｆｉｃａｔｉｏｎ ｏｆ ｔｈｅ ｃａｕｓａｌ ｐａｔｈｏｇｅｎ ｏｆ ｔｏｍａｔｏ ｂａｃｔｅｒｉａｌ ｓｏｆｔ ｒｏｔ
Ｓｔｒａｉｎ Ｏｒｉｇｉｎａｌ ｉｄｅｎｔｉｔｙ
ＦＡＭＥｓ ｉｄｅｎｔｉｆｉｃａｔｉｏｎ
ＳＩＭ Ｓｙｓｔｅｍ ｉｄｅｎｔｉｔｙ
ＬＭＧ ２１９６ Ｂｕｒｋｈｏｌｄｅｒｉａ ｇｌｕｍａｅ ０. ６５３ Ｂｕｒｋｈｏｌｄｅｒｉａ ｇｌｕｍａｅ
ＬＭＧ ２８０４ Ｐ. ｃｈｒｙｓａｎｔｈｅｍｉ(Ｄｉｃｋｅｙａ ｓｐ. ) ０. ５６１ Ｐ. ｃｈｒｙｓａｎｔｈｅｍｉ
ＣＢ ０１００６ Ｐ. ｃ. ｓｕｂｓｐ. ｃａｒｏｔｏｖｏｒｕｍ ０. ５０１ Ｐ. ｃ. ｓｕｂｓｐ. ｃａｒｏｔｏｖｏｒｕｍ
ＳＤ￣１ ＿ ０. ４３２ Ｐ. ｃ. ｓｕｂｓｐ. ｃａｒｏｔｏｖｏｒｕｍ
ＳＤ￣２ ＿ ０. ４１０ Ｐ. ｃ. ｓｕｂｓｐ. ｃａｒｏｔｏｖｏｒｕｍ
ＳＤ￣３ ＿ ０. ４２１ Ｐ. ｃ. ｓｕｂｓｐ. ｃａｒｏｔｏｖｏｒｕｍ
ＬＭＧ ａｎｄ ＣＢ ｃｏｄｅ ａｒｅ ｔｈｅ ｒｅｆｅｒｅｎｃｅ ｓｔｒａｉｎｓꎬ ｐｏｓｉｔｉｖｅ ｃｏｎｔｒｏｌ.
Ｔａｂｌｅ ３　 Ｓｅｌｅｃｔｅｄ ｃｈａｒａｃｔｅｒｉｓｔｉｃｓ ｏｆ ｔｈｅ ｐａｔｈｏｇｅｎｉｃ ｉｓｏｌａｔｅｓ ａｎｄ ｒｅｆｅｒｅｎｃｅ ｃｕｌｔｕｒｅ
Ｃｈａｒａｃｔｅｒｉｓｔｉｃｓ ＣＢ０１００６ ＳＤ￣１ ＳＤ￣２ ＳＤ￣３ ＡＴＣＣ１５７１３
Ｄ￣ｇｌｕｃｏｓｅ ＋ ＋ ＋ ＋ ＋
Ｄ￣ｍａｌｔｏｓｅ － － － － －
Ｄ￣ｆｒｕｏｃｔｏｓｅ ＋ ＋ ＋ ＋ ＋
Ｄ￣ｍａｎｎｉｔｏｌ ＋ ＋ ＋ ＋ ＋
Ｄ￣ｃｅｌｌｏｂｉｏｓｅ ＋ ＋ ＋ ＋ ＋
Ｌ￣ａｒａｂｉｔｏｌ － － － － －
Ｄ￣ｌａｃｔｏｓｅ ＋ ＋ ＋ ＋ ＋
Ｄ￣ｓｏｒｂｉｔｏｌ － － － － －
Ｄ￣ｓｕｃｒｏｓｅ ＋ ＋ ＋ ＋ ＋
Ｄ￣ｇａｌａｃｔｏｓｅ ＋ ＋ ＋ ＋ ＋
Ｄ￣ｍａｎｎｏｓｅ ＋ ＋ ＋ ＋ ＋
Ｄ￣ｔｒｅｈａｌｏｓｅ ＋ － － － ＋
Ｌ￣ｌａｃｔｉｃ ａｃｉｄ ＋ － － － ＋
ｐＨ ５. ０ ± ＋ ＋ ＋ ±
“ ＋ ”: Ｐｏｓｉｔｉｖｅꎻ “ － ”: Ｎｅｇａｔｉｖｅꎻ “ ± ”: Ｗｅａｋ ｐｏｓｉｔｉｖｅ.
２. ５　 １６Ｓ ｒＤＮＡ序列分析
对 ３ 个代表菌株 ＳＤ￣１、ＳＤ￣２、ＳＤ￣３ 序列进行
ＢＬＡＳＴ分析ꎬ结果显示与 Ｐ. ｃ. ｓｕｂｓｐ. ｃａｒｏｔｏｖｏ￣
ｒｕｍ的相似性均为 ９９％ ꎮ 进化树显示(图 ３) ＳＤ￣
１、ＳＤ￣２、ＳＤ￣３ 与 Ｐ. ｃ. ｓｕｂｓｐ. ｏｄｏｒｉｆｅｒｕｍ、Ｐ. ｃ.
ｓｕｂｓｐ. ｃａｒｏｔｏｖｏｒｕｍ亲缘关系最近ꎬ类聚在一起ꎮ
３　 讨论
本研究对番茄软腐病病原菌作了分离ꎬ获
得的病原细菌菌株经柯赫氏法则验证ꎬ分离菌
株引起的病害症状与田间采集的软腐病状一
致ꎬ并从接种后的番茄发病部位再次分离到该
病原菌ꎬ证明了这种细菌是引起番茄软腐病菌
的病原菌ꎮ 该病原菌经过形态特征和电镜观
察、生理生化测定、ＢＩＯＬＯＧ 及 ＦＡＭＥｓ 微生物
自动鉴定系统鉴定ꎬ证明该病原与果胶杆菌
(Ｐｅｃｔｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ) 特征基本相似ꎮ 对其 １６Ｓ ｒＤＮＡ
序列进行 ＢＬＡＳＴ 分析ꎬ结果显示与 Ｐ. ｃ. ｓｕｂｓｐ.
ｃａｒｏｔｏｖｏｒｕｍ的相似性为 ９９％ ꎬ通过构建进化树分
析ꎬ 该 病 原 菌 与 Ｐ. ｃ. ｓｕｂｓｐ. ｃａｒｏｔｏｖｏｒｕｍ
ＡＴＣＣ１５７１３、ＬＭＧ２４０４、ＤＳＭ３０１６８ 和 Ｐ. ｃ. ｓｕｂ￣
ｓｐ. ｏｄｏｒｉｆｅｒｕｍ ＬＭＧ１７５６６ 聚集成一个大类群ꎬ因
此ꎬ将该病原鉴定为胡萝卜果胶杆菌(Ｐ. ｃａｒｏｔｏｖｏ￣
ｒｕｍ)ꎮ 对类聚情况进一步分析ꎬ该病原与这 ２ 个
亚种形成 ３ 个小类群ꎬ是否为一个新亚种ꎬ有待进
一步研究ꎮ
８３４
　
　 ４ 期 　 　 张国庆ꎬ等:番茄细菌性软腐病病原的分离与鉴定
Ｆｉｇ. ３　 Ｐｈｙｌｏｇｅｎｅｔｉｃ ｔｒｅｅ ｓｈｏｗｉｎｇ ｔｈｅ ｒｅｌａｔｉｏｎｓｈｉｐ ｏｆ ｐａｔｈｏｇｅｎｉｃ
ｉｓｏｌａｔｅｓ ａｎｄ ｃｌｏｓｅｌｙ ｒｅｌａｔｅｄ ｓｔｒａｉｎｓ
Ｏｎ ｔｈｅ ｂａｓｉｓ ｏｆ ｔｈｅ ａｌｉｇｎｍｅｎｔ ｏｆ １６Ｓ ｒＤＮＡ ｓｅｑｕｅｎｃｅｓꎬ ｔｈｅ ｐｈｙｌｏｇｅｎｅｔｉｃ ｔｒｅｅ ｗａｓ ｃｏｎｓｔｒｕｃｔｅｄ ｕｓｉｎｇ ｔｈｅ
Ｎｅｉｇｈｂｏｒ￣ｊｏｉｎｉｎｇ ｍｅｔｈｏｄ. Ｓｔａｂｉｌｉｔｙ ｏｆ ｔｈｅ ｔｒｅｅ ｗａｓ ａｓｓｅｓｓｅｄ ｂｙ １ ０００ ｂｏｏｔｓｔｒａｐ ｒｅｐｌｉｃａｔｉｏｎｓ.
Ｔｈｅ Ａｃｉｄｏｖｏｒａｘ ａｖｅｎａｅ ｓｕｂｓｐ. ａｖｅｎａｅ ｗａｓ ｕｓｅｄ ａｓ ａｎ ｏｕｔ￣ｇｒｏｕｐ.
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责任编辑:于金枝
９３４