全 文 ：书犇犗犐：１０．１１６８６／犮狔狓犫２０１４５３３ 犺狋狋狆：／／犮狔狓犫．犾狕狌．犲犱狌．犮狀
贾小霞，齐恩芳，马胜，胡新元，王一航，文国宏，龚成文，李建武．转犇犚犈犅１犃／犅犪狉双价基因马铃薯的耐旱性及除草剂抗性分析．草业学报，２０１５，２４
（１１）：５８６４．
ＪＩＡＸｉａｏＸｉａ，ＱＩＥｎＦａｎｇ，ＭＡＳｈｅｎｇ，ＨＵＸｉｎＹｕａｎ，ＷＡＮＧＹｉＨａｎｇ，ＷＥＮＧｕｏＨｏｎｇ，ＧＯＮＧＣｈｅｎｇＷｅｎ，ＬＩＪｉａｎＷｕ．Ａｎａｌｙｓｉｓｏｆｄｒｏｕｇｈｔ
ｔｏｌｅｒａｎｃｅａｎｄｈｅｒｂｉｃｉｄｅｒｅｓｉｓｔａｎｃｅｉｎｔｒａｎｓｇｅｎｉｃｐｏｔａｔｏｐｌａｎｔｓｏｖｅｒｅｘｐｒｅｓｓｉｎｇ犇犚犈犅１犃／犅犪狉．ＡｃｔａＰｒａｔａｃｕｌｔｕｒａｅＳｉｎｉｃａ，２０１５，２４（１１）：５８６４．
转犇犚犈犅１犃／犅犪狉双价基因马铃薯的
耐旱性及除草剂抗性分析
贾小霞１，２，齐恩芳１，２，马胜１，２，胡新元１，２，王一航１，２，文国宏１，２，龚成文１，２，李建武１，２
（１．甘肃省农业科学院马铃薯研究所，甘肃省马铃薯种质资源创新工程实验室，甘肃 兰州７３００７０；
２．农业部西北旱作马铃薯科学观测实验站，甘肃 渭源７４８２０１）
摘要：在前期获得犇犚犈犅１犃／犅犪狉双价转基因马铃薯的基础上，对转基因植株进行了耐旱性和除草剂抗性分析。耐
旱性分析显示，在正常浇水条件下，对照和各转基因马铃薯株系生长状态良好且大致相同，各株系的丙二醛含量、
相对电导率和ＳＯＤ酶活性无显著差异（犘＞０．０５）。经过控水１０ｄ后，非转基因对照植株叶片明显萎蔫卷曲，而转
基因植株仍然保持良好的生长状态；转基因株系的丙二醛含量和相对电导率显著低于非转基因株系（犘＜０．０５），而
ＳＯＤ酶活性显著高于非转基因对照（犘＜０．０５）。控水１８ｄ时，大部分对照植株死亡，死亡率为７４．３３％；转基因植
株只有极少数植株死亡，ＤＲ２和ＤＲ５的死亡率分别为２０．４３％和５．６５％。用０．３％的市售草铵膦喷施各株系，１０ｄ
后，对照植株全部枯死，转基因株系的个别叶片干枯，绝大多数叶片及所有茎秆生长状态良好。以上分析表明，
犇犚犈犅１犃和犅犪狉基因的导入，明显增强了转基因马铃薯对干旱和除草剂的抗性。
关键词：转基因马铃薯；犇犚犈犅１犃；犅犪狉；抗旱性；除草剂
犃狀犪犾狔狊犻狊狅犳犱狉狅狌犵犺狋狋狅犾犲狉犪狀犮犲犪狀犱犺犲狉犫犻犮犻犱犲狉犲狊犻狊狋犪狀犮犲犻狀狋狉犪狀狊犵犲狀犻犮狆狅狋犪狋狅狆犾犪狀狋狊
狅狏犲狉犲狓狆狉犲狊狊犻狀犵犇犚犈犅１犃／犅犪狉
ＪＩＡＸｉａｏＸｉａ１，２，ＱＩＥｎＦａｎｇ１，２，ＭＡＳｈｅｎｇ１，２，ＨＵＸｉｎＹｕａｎ１，２，ＷＡＮＧＹｉＨａｎｇ１，２，ＷＥＮＧｕｏＨｏｎｇ１，２，
ＧＯＮＧＣｈｅｎｇＷｅｎ１，２，ＬＩＪｉａｎＷｕ１，２
１．犘狅狋犪狋狅犚犲狊犲犪狉犮犺犐狀狊狋犻狋狌狋犲，犌犪狀狊狌犃犮犪犱犲犿狔狅犳犃犵狉犻犮狌犾狋狌狉犪犾犛犮犻犲狀犮犲狊，犌犪狀狊狌犈狀犵犻狀犲犲狉犻狀犵犔犪犫狅狉犪狋狅狉狔狅犳犘狅狋犪狋狅犌犲狉犿狆犾犪狊犿犚犲
狊狅狌狉犮犲狊犐狀狀狅狏犪狋犻狅狀，犔犪狀狕犺狅狌７３００７０，犆犺犻狀犪；２．犜犺犲犕犻狀犻狊狋狉狔狅犳犃犵狉犻犮狌犾狋狌狉犲，犛犮犻犲狀狋犻犳犻犮犗犫狊犲狉狏犪狋犻狅狀犪狀犱犈狓狆犲狉犻犿犲狀狋犛狋犪狋犻狅狀狅犳
犇狉狔狆狅狋犪狋狅犻狀狋犺犲犖狅狉狋犺狑犲狊狋，犠犲犻狔狌犪狀７４８２０１，犆犺犻狀犪
犃犫狊狋狉犪犮狋：Ｉｎｏｒｄｅｒｔｏｃｏｍｐａｒｅｄｒｏｕｇｈｔｒｅｓｉｓｔａｎｃｅｏｆ犇犚犈犅１犃／犅犪狉ｔｒａｎｓｇｅｎｉｃｐｏｔａｔｏｐｌａｎｔｓ，ｗｉｔｈａｃｏｎｔｒｏｌｃｕｌ
ｔｉｖａｒ（ｎｏｎｔｒａｎｓｇｅｎｉｃＬｏｎｇｓｈｕ１０），５－７ｃｍｓｅｅｄｌｉｎｇｓｏｆ犇犚犈犅１犃ｔｒａｎｓｇｅｎｉｃｌｉｎｅｓｗｅｒｅｇｒｏｗｎｉｎｐｏｔｓｕｓｉｎｇ
ｖｅｒｍｉｃｕｌｉｔｅａｎｄｒｅｇｕｌａｒｌｙｗａｔｅｒｅｄ．Ｗａｔｅｒｉｎｇｃｏｎｔｉｎｕｅｄｔｏｔｈｅ１５－１６ｌｅａｆｓｔａｇｅａｆｔｅｒｗｈｉｃｈｐｌａｎｔｓｗｅｒｅｎｏｔｗａ
ｔｅｒｅｄｆｏｒ１８ｄａｙｓｔｏｉｍｐｏｓｅｆｏｒｄｒｏｕｇｈｔｓｔｒｅｓｓ．Ｄｕｒｉｎｇｔｈｅｄｒｏｕｇｈｔｓｔｒｅｓｓ，ｐｌａｎｔｐｈｅｎｏｔｙｐｉｃｆｅａｔｕｒｅｓｗｅｒｅｒｅ
ｃｏｒｄｅｄｕｓｉｎｇｖｉｓｕａｌｏｂｓｅｒｖａｔｉｏｎａｎｄｄｉｇｉｔａｌｃａｍｅｒａｉｍａｇｅｓ．Ａｆｔｅｒ１０ｄａｙｓｏｆｄｒｏｕｇｈｔｓｔｒｅｓｓ，ｓｔｒｅｓｓｒｅｌａｔｅｄｐｈｙｓ
ｉｏｌｏｇｉｃａｌａｎｄｂｉｏｃｈｅｍｉｃａｌｐａｒａｍｅｔｅｒｓｗｅｒｅｄｅｔｅｒｍｉｎｅｄ．Ｄｕｒｉｎｇｔｈｅｎｏｒｍａｌｗａｔｅｒｉｎｇｐｈａｓｅｂｏｔｈｔｈｅｎｏｎｔｒａｎｓ
第２４卷 第１１期
Ｖｏｌ．２４，Ｎｏ．１１
草 业 学 报
ＡＣＴＡＰＲＡＴＡＣＵＬＴＵＲＡＥＳＩＮＩＣＡ
２０１５年１１月
Ｎｏｖ，２０１５
收稿日期：２０１４１２１９；改回日期：２０１５０２１１
基金项目：甘肃省自然科学基金（１４５ＲＪＺＡ０８８），国家自然科学基金（３１０６０２００），甘肃省农业科学院中青年基金（２０１４ＧＡＡＳ２０）和国家马铃薯产
业技术体系（ＣＡＲＳ１０Ｐ０５）资助。
作者简介：贾小霞（１９７８），女，甘肃定西人，副研究员，博士。Ｅｍａｉｌ：ｊｉａｘｘ０６０１＠１６３．ｃｏｍ
通讯作者Ｃｏｒｒｅｓｐｏｎｄｉｎｇａｕｔｈｏｒ．Ｅｍａｉｌ：ｊｉａｘｘ０６０１＠１６３．ｃｏｍ
ｇｅｎｉｃｃｏｎｔｒｏｌａｎｄｔｈｅｔｒａｎｓｇｅｎｉｃｐｏｔａｔｏｌｉｎｅｓｇｒｅｗｗｅｌ，ｔｈｅＭＤＡｃｏｎｔｅｎｔ，ｒｅｌａｔｉｖｅｅｌｅｃｔｒｉｃａｌｃｏｎｄｕｃｔｉｖｉｔｙａｎｄ
ｓｕｐｅｒｏｘｉｄｅｄｉｓｍｕｔａｓｅ（ＳＯＤ）ａｃｔｉｖｉｔｙｗｅｒｅｎｏｔｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔｌｙｄｉｆｆｅｒｅｎｔ（犘＞０．０５）．Ａｆｔｅｒ１０ｄａｙｓｏｆｄｒｏｕｇｈｔ
ｓｔｒｅｓｓｔｈｅｃｏｎｔｒｏｌｐｌａｎｔｓｂｅｇａｎｔｏｗｉｌｔ，ｂｕｔｔｈｅｔｒａｎｓｇｅｎｉｃｌｉｎｅｓｒｅｍａｉｎｅｄｉｎｇｏｏｄｃｏｎｄｉｔｉｏｎ．ＭＤＡｃｏｎｔｅｎｔａｎｄ
ｒｅｌａｔｉｖｅｅｌｅｃｔｒｉｃａｌｃｏｎｄｕｃｔｉｖｉｔｙｉｎｔｈｅｔｒａｎｓｇｅｎｉｃｌｉｎｅｗａｓｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔｌｙｌｏｗｅｒｔｈａｎｔｈｏｓｅｏｆｔｈｅｎｏｎｔｒａｎｓｇｅｎｉｃ
ｐｌａｎｔｓ（犘＜０．０５），ｗｈｉｌｅｔｈｅＳＯＤａｃｔｉｖｉｔｙｗａｓｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔｌｙｈｉｇｈｅｒｔｈａｎｔｈａｔｏｆｎｏｎｔｒａｎｓｇｅｎｉｃｐｌａｎｔｓ（犘＜０．
０５）．Ａｆｔｅｒｆｏｒ１８ｄａｙｓｏｆｄｒｏｕｇｈｔｓｔｒｅｓｓ７４．３３％ ｏｆｔｈｅｃｏｎｔｒｏｌｐｌａｎｔｓｗｅｒｅｄｅａｄｗｈｅｒｅａｓｆｅｗｅｒｔｒａｎｓｇｅｎｉｃ
ｐｌａｎｔｓｈａｄｄｉｅｄ；ｔｈｅｍｏｒｔａｌｉｔｙｏｆＤＲ２ａｎｄＤＲ５ｗａｓ２０．４３％ ａｎｄ５．６５％ ｒｅｓｐｅｃｔｉｖｅｌｙ．Ｔｈｅｒｅｓｉｓｔａｎｃｅｏｆ
犇犚犈犅１犃／犅犪狉ｔｒａｎｓｇｅｎｉｃｐｏｔａｔｏｅｓｔｏｇｌｕｆｏｓｉｎａｔｅ，ａｓｙｓｔｅｍｉｃｎｏｎｓｅｌｅｃｔｉｖｅｈｅｒｂｉｃｉｄｅ，ｃｏｍｐａｒｅｄｗｉｔｈｎｏｎｔｒａｎｓ
ｇｅｎｉｃｌｉｎｅｓｗａｓｄｅｔｅｒｍｉｎｅｄｂｙｔｒｅａｔｉｎｇｐｌａｎｔｓｗｉｔｈａ０．３％ｇｌｕｆｏｓｉｎａｔｅｓｐｒａｙ．Ｔｅｎｄａｙｓａｆｔｅｒｔｒｅａｔｍｅｎｔａｌｎｏｎ
ｔｒａｎｓｇｅｎｉｃｐｌａｎｔｓｈａｄｄｉｅｄ，ｗｈｉｌｅｔｈｅｔｒａｎｓｇｅｎｉｃｐｌａｎｔｓｗｅｒｅａｆｆｅｃｔｅｄｓｌｉｇｈｔｌｙ．Ｔｈｅｓｔｕｄｙｉｎｄｉｃａｔｅｄｔｈａｔｉｎｔｒｏ
ｄｕｃｔｉｏｎｏｆ犇犚犈犅１犃ａｎｄ犅犪狉ｇｅｎｅｓｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔｌｙｅｎｈａｎｃｅｄｄｒｏｕｇｈｔｔｏｌｅｒａｎｃｅａｎｄｈｅｒｂｉｃｉｄｅｒｅｓｉｓｔａｎｃｅｉｎｔｒａｎｓ
ｇｅｎｉｃｐｏｔａｔｏｐｌａｎｔｓ．
犓犲狔狑狅狉犱狊：ｔｒａｎｓｇｅｎｉｃｐｏｔａｔｏ；犇犚犈犅１犃；犅犪狉；ｄｒｏｕｇｈｔｔｏｌｅｒａｎｃｅ；ｈｅｒｂｉｃｉｄｅ
马铃薯（犛狅犾犪狀狌犿狋狌犫犲狉狅狊狌犿）不仅产量高，而且营养丰富，是甘肃省的战略性主导产业之一。然而，甘肃地
处黄河上游，深居内陆，远离海洋，成雨机会少，大部分地区气候干燥，马铃薯生产常受干旱影响，产量低而不稳。
因此，培育综合性状优良的抗旱品种非常迫切。
过去，育种工作者采用品种间杂交和诱变育种等传统技术，在马铃薯抗旱育种方面取得了显著成就。但由于
栽培种马铃薯一般是四倍体无性繁殖材料，育种中存在基因分离复杂、花粉不育和现有栽培种基因库狭窄等缺
陷，极大地限制了可以利用的基因资源。转基因育种技术能有效弥补传统育种的不足，打破物种间的界限，实现
有针对性的改良品种的目的。
目前，马铃薯抗旱转基因的研究，绝大多数用ＣａＭＶ３５Ｓ启动子驱动单个功能基因的表达［１３］。植物的耐旱
性是一个复杂的多基因控制系统［４］，通过转入单个功能基因改良的方式，作用单一，很难奏效。转录因子
犇犚犈犅１犃可以调控４０多个与干旱、高盐和低温胁迫有关的功能基因的表达［５６］，利用它提高植物抗逆性比单基
因更有优势。目前，已利用基因转化技术将犇犚犈犅１犃 基因转入拟南芥（犃狉犪犫犻犱狅狆狊犻狊狋犺犪犾犻犪狀犪）［７８］、烟草 （犖犻犮
狅狋犻犪狀犪狋犪犫犪犮狌犿）［９］、水稻（犗狉狔狕犪狊犪狋犻狏犪）［１０］、小麦（犜狉犻狋犻犮狌犿狋狌狉犵犻犱狌犿）［１１１２］等作物中，提高了转基因植物的抗逆
性。犇犚犈犅１犃转化马铃薯的研究已有报道［１３］，但马铃薯的耐旱性是否得到提高，尚未见报道。
杂草防治也是马铃薯稳产高产的一个重要环节。随着经济快速发展和城市化进程的加深，大量农村劳动力
进入城市，导致农村劳动力相对短缺，加之农村渐渐富起来，人工和机械除草方式已不现实，对化学除草的需求紧
迫。犅犪狉基因除作为选择标记外，还能给作物带来抗除草剂的特性。使用与抗除草剂基因相配的除草剂，能有
效除去杂草，大大减少劳动力，解决农田的草荒问题。
本研究在课题组已获得犇犚犈犅１犃／犅犪狉双价转基因马铃薯植株的基础上，进一步扩繁转基因株系，利用植物
抗旱性评价通用方法进行耐旱性鉴定，并进行除草剂抗性试验，以期筛选获得抗旱性强并具除草剂抗性的马铃薯
种质资源，为马铃薯的抗逆转基因研究提供依据。
１ 材料与方法
１．１ 试验材料
供试转基因株系及受体陇薯１０号，由甘肃省农业科学院马铃薯研究所生物技术与种质资源研究室提供，转
基因材料利用农杆菌介导法获得［１３］。整个试验完成时间为２０１３年９月到２０１４年１０月。
１．２ 分子生物学鉴定
以含犇犚犈犅１犃的质粒为阳性对照，非转基因马铃薯为阴性对照，提取的草铵膦抗性植株基因组ＤＮＡ为模
板，以犇犚犈犅１犃 特异引物Ｄ１（５′ＡＴＧＡＡＣＴＣＡＴＴＴＴＣＴＧＣＴＴＴＴＴＣ３′）和Ｄ２（５′ＴＴＡＡＴＡＡＣＴ
９５第１１期 贾小霞 等：转犇犚犈犅１犃／犅犪狉双价基因马铃薯的耐旱性及除草剂抗性分析
ＣＣＡＴＡＡＣＧＡＴＡＣ３′）进行ＰＣＲ检测，ＰＣＲ产物长度为６９１ｂｐ。
马铃薯植株的ＰＣＲＳｏｕｔｈｅｒｎ检测，参照李淑洁和张正英［１４］的方法，利用Ｐｒｉｍｅｒ５．０软件设计特异性探针
引物，由北京奥科生物公司合成。引物序列为：ＤＲＵ（５′ＧＣＣＧＡＴＣＡＧＣＣＴＧＴＣＴＣＡＡＴ３′），ＤＲＤ（５′ＴＣＴ
ＧＣＣＡＴＡＴＴＡＧＣＣＡＡＣＡＡＡＣＴＣ３′），参照 Ｒｏｃｈｅ公司ＤＩＧ ＨｉｇｈＰｒｉｍｅＤＮＡＬａｂｅｌｉｎｇａｎｄＤｅｔｅｃｔｉｏｎ
ｓｔａｒｔｅｒＫｉｔＩ（货号：１１７４５８３２００１）说明书和分子生物学操作技术［１５］，进行探针制备、转膜及固定、分子杂交和免
疫检测。
１．３ 犇犚犈犅１犃在转基因株系中的表达分析
挑选Ｓｏｕｔｈｅｒｎ杂交呈阳性的转基因株系进行干旱胁迫。２０１４年５月，将５～７ｃｍ转犇犚犈犅１犃基因和未转
化马铃薯的试管苗移栽于甘肃省农业科学院生物技术研究所温室花盆（盆高为１３ｃｍ，上口径１３ｃｍ，下口径１１
ｃｍ）的蛭石中，参试的马铃薯株系通过无性繁殖，挑选生长势一致的植株随机盆栽，每个株系栽９盆，每盆３株。
待马铃薯植株长到１５～１６个叶片时，浇水至饱和状态，开始干旱胁迫（停止浇水），处理１０ｄ时，随机剪取６盆植
株中部３～４层叶片进行生理指标测定（重复３次），其余３盆继续胁迫（不浇水），一直持续１８ｄ，逐日观察植株
生长情况。
用ＲＮＡｓｉｍｐｌｅＴｏｔａｌＲＮＡＫｉｔ（ＴＩＡＮＧＥＮ）试剂盒提取胁迫１０ｄ各转基因株系和非转基因对照中部３～４
层叶片总ＲＮＡ，采用ＦｉｒｓｔｓｔｒａｎｄｃＤＮＡＳｙｎｔｈｅｓｉｓＫｉｔ（ＴＨＥＲＭＯ）试剂盒反转录成ｃＤＮＡ。以反转录的ｃＤＮＡ
为模板，用ＡＢＩＰＲＩＳＭＲ７３００实时荧光定量ＰＣＲ仪（ＡＢＩ，美国）进行实时荧光定量分析，试验设３次重复。反应
体系为２５μＬ，按照ＳＹＢＲＰｒｅｍｉｘＥｘＴａｑ（ＴａＫａＲａ）反应系统，以马铃薯犜狌犫狌犾犻狀基因 （犜狌犫狌犾犻狀Ｆ：５′ＡＣＣ
ＴＣＴＣＧＴＧＧＡＴＣＡＣＡＧＣＡＡＴ３′和犜狌犫狌犾犻狀Ｒ：５′ＴＣＡＴＣＡＧＣＧＧＣＣＴＣＡＴＣＡＴＣＡＴ３′）为内参，
用ＤＲＵ／ＤＲＤ特异引物进行犇犚犈犅１犃 的特异扩增。反应条件为９５℃预变性３ｍｉｎ，然后９５℃变性１０ｓ，
５６．９℃退火３０ｓ，４０个循环。用２－ΔΔＣＴ方法［１６］计算转基因马铃薯相对于受体陇薯１０号马铃薯的犇犚犈犅１犃基
因的相对表达量。
１．４ 生理生化指标的测定
采用电导仪法［１７］测定质膜透性，硫代巴比妥酸法［１７］测定 ＭＤＡ含量，氮蓝四唑 （ＮＢＴ）光化还原法［１７］测定
ＳＯＤ活性。
１．５ 转基因植株除草剂抗性分析
转基因植株进行抗除草剂的检测是用市售除草剂草铵膦直接喷洒，将１０％的市售草铵膦用自来水稀释到
０．３％的浓度，于２０１４年８月２２日１５：４０，用喷壶对被检测植株整株进行喷施，至药剂在叶片上开始凝结成水珠
时停止，７ｄ后观察结果。
２ 结果与分析
２．１ 转基因植株的分子生物学鉴定
２．１．１ 转基因马铃薯植株的ＰＣＲ检测 以转录因子犇犚犈犅１犃基因的特异引物为引物进行ＰＣＲ检测，结果
阳性对照（质粒ｐＢＩ１２１ｒｄ２９ＢＤＲ）和１８株抗性苗扩增出约７００ｂｐ的片段，而阴性对照（未转化马铃薯）和部分
转化植株无扩增条带（图１为部分转化植株的检测结果）。图１可以看出，以转化植株２，３，４，５和６号的基因组
ＤＮＡ为模板扩增出了目的基因条带，而１号没有目的条带出现，初步表明２，３，４，５和６号植株的基因组中有
犇犚犈犅１犃基因的整合，为转基因植株，而１号没有目的基因的整合，为非转基因植株。
２．１．２ ＰＣＲＳｏｕｔｈｅｒｎ检测 为进一步验证转基因马铃薯材料的正确性，在ＰＣＲ检测为阳性的转基因材料中
选取５株作为ＰＣＲＳｏｕｔｈｅｒｎ检测的对象，以２５０ｂｐ的犇犚犈犅１犃基因片段为探针与从转基因马铃薯叶片ＤＮＡ
中扩增出的犇犚犈犅１犃全长基因进行杂交，ＳｏｕｔｈｅｒｎＢｌｏｔｔｉｎｇ检测结果与上一步ＰＣＲ结果相吻合，验证了ＰＣＲ
的可靠性。表明选取的这几个材料均为转基因阳性植株（图２）。
２．１．３ 实时荧光定量（ｑＲＴ－ＰＣＲ）分析 ｑＲＴ－ＰＣＲ结果分析表明，转基因植株中犇犚犈犅１犃 的相对表达量
均显著高于未转基因对照马铃薯陇薯１０号，但不同株系中表达量存在差异（图３）。
０６ 草 业 学 报 第２４卷
图１ 转基因马铃薯犇犚犈犅１犃基因的犘犆犚检测
犉犻犵．１ 犘犆犚犱犲狋犲犮狋犻狅狀狅犳狆狅狋犪狋狅狋狉犪狀狊犳狅狉犿犪狀狋
Ｍ：Ｄ２０００标记。Ｄ２０００Ｍａｒｋ；１～６：转化植株以Ｄ１／Ｄ２为引物
的扩增结果。ＡｍｐｌｉｆｉｅｄｂｙＤ１／Ｄ２ｏｆｐｏｔａｔｏｔｒａｎｓｆｏｒｍａｎｔ；Ｐ：阳性对
照（ｐＢＩ１２１ｒｄ２９ＢＤＲ）。Ｐｏｓｉｔｉｖｅｃｏｎｔｒｏｌ（ｐＢＩ１２１ｒｄ２９ＢＤＲ）；Ｎ：阴
性对照。Ｐｏｔａｔｏｎｏｎｔｒａｎｓｆｏｒｍａｎｔ．
图２ 转基因马铃薯犇犚犈犅１犃基因的犘犆犚犛狅狌狋犺犲狉狀检测
犉犻犵．２ 犘犆犚犛狅狌狋犺犲狉狀犪狀犪犾狔狊犻狊狅犳狋狉犪狀狊犵犲狀犻犮
狆犾犪狀狋狊犳狅狉犇犚犈犅１犃犵犲狀犲
Ｎ：非转基因植株。Ｕｎｔｒａｎｓｆｏｒｍｅｄｐｌａｎｔｌｅｔ；Ｐ：阳性对照（目的基因
犇犚犈犅１犃的ＰＣＲ产物）。Ｐｏｓｉｔｉｖｅｃｏｎｔｒｏｌ（ＰＣＲｐｒｏｄｕｃｔｉｏｎｏｆ犇犚犈犅１犃
ｇｅｎｅ）；１～５：马铃薯转基因植株。Ｐｏｔａｔｏｔｒａｎｓｇｅｎｉｃｐｌａｎｔｓ．
２．２ 转基因马铃薯的耐旱性分析
图３ 转基因马铃薯中犇犚犈犅１犃基因表达的实时荧光定量分析
犉犻犵．３ 犙－犚犜－犘犆犚犪狊狊犪狔狊狅狀犇犚犈犅１犃狋狉犪狀狊犮狉犻狆狋
犻狀狋狉犪狀狊犵犲狀犻犮狆狅狋犪狋狅狆犾犪狀狋狊
ＣＫ：未转基因马铃薯陇薯１０号。ＵｎｔｒａｎｓｆｏｒｍｅｄｐｏｔａｔｏＬｏｎｇｓｈｕ
Ｎｏ．１０；１～５：转基因株系Ｔｒａｎｓｇｅｎｉｃｌｉｎｅｓ；表示转基因株系表达
量与未转基因马铃薯陇薯１０号有极显著差异（犘＜０．０１）。Ｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔｌｙ
ｄｉｆｆｅｒｅｎｔｂｅｔｗｅｅｎｔｈｅｔｒａｎｓｇｅｎｉｃｌｉｎｅａｎｄｕｎｔｒａｎｓｆｏｒｍｅｄｐｏｔａｔｏＬｏｎｇｓｈｕ
Ｎｏ．１０ａｔ犘＜０．０１．
选取ｑＲＴ－ＰＣＲ检测中犇犚犈犅１犃相对表达量较
高的２个转基因株系（ＤＲ２和ＤＲ５）及对照（未转基因
陇薯１０号）进行组织扩繁，移至盆栽后正常浇水，待各
株系长至１５～１６叶期时进行干旱胁迫，对转基因与对
照株系进行耐旱性分析。
２．２．１ 干旱胁迫下马铃薯的生长状况 在正常浇
水条件下，转基因植株与对照马铃薯生长状态良好且
大致相同（图４Ａ），表明犇犚犈犅１犃基因的导入并未对
马铃薯的生长发育造成影响。停止浇水１０ｄ时，对照
陇薯１０号生长发育受到抑制，叶片明显萎蔫卷曲，而
转基因植株仍保持良好的生长状态（图４Ｂ）。停止浇
水１８ｄ时，大部分对照植株死亡，死亡率为７４．３３％，
存活植株的叶片基本全部干枯，只有茎秆呈现黄绿色；
转基因植株只有极少数植株死亡，ＤＲ２和ＤＲ５的死亡
率分别为２０．４３％和５．６５％，存活植株的生长虽有所
抑制，但表现明显好于对照（图４Ｃ）。
图４ 转基因马铃薯干旱胁迫表型分析
犉犻犵．４ 犘犺犲狀狅狋狔狆犲狊狅犳狋狉犪狀狊犵犲狀犻犮狆狅狋犪狋狅狌狀犱犲狉犱狉狅狌犵犺狋狊狋狉犲狊狊
Ａ：无胁迫对照 Ｎｏｓｔｒｅｓｓｃｏｎｔｒｏｌ；Ｂ，Ｃ：分别为干旱胁迫１０ｄ和１８ｄ的植株。Ｐｌａｎｔｓｔｒｅａｔｅｄｗｉｔｈｄｒｏｕｇｈｔｓｔｒｅｓｓｆｏｒ１０ｄａｎｄ１８ｄｒｅｓｐｅｃｔｉｖｅｌｙ；
ＣＫ：非转基因植株Ｎｏｎｔｒａｎｓｇｅｎｉｃｐｌａｎｔｓ；ＤＲ２和ＤＲ５：转基因株系 Ｔｒａｎｓｇｅｎｉｃｌｉｎｅｓ．下同Ｔｈｅｓａｍｅｂｅｌｏｗ．
１６第１１期 贾小霞 等：转犇犚犈犅１犃／犅犪狉双价基因马铃薯的耐旱性及除草剂抗性分析
２．２．２ 干旱胁迫下相对电导率和丙二醛（ＭＤＡ）含量变化 在正常生长情况下，转基因株系和非转基因对照
的相对电导率无显著差异（犘＞０．０５）（图５Ａ）。表明犇犚犈犅１犃在马铃薯中的表达不但未影响植株的生长也未改
变其生理生化特性。干旱胁迫１０ｄ后各株系相对电导率明显上升，但转基因株系的电导率显著低于对照 （图
５Ａ）。转基因株系丙二醛含量在干旱胁迫前后的变化显著低于对照，但各转基因株系间无显著差异（图５Ｂ）。
图５ 转基因马铃薯的相对电导率及 犕犇犃含量
犉犻犵．５ 犚犲犾犪狋犻狏犲犲犾犲犮狋狉犻犮犮狅狀犱狌犮狋犻狏犻狋狔犪狀犱犕犇犃犮狅狀狋犲狀狋狅犳狋狉犪狀狊犵犲狀犻犮狆狅狋犪狋狅
不同字母表示相同处理条件下株系间差异显著（犘＜０．０５）。Ｌ１０为非转基因对照。下同。Ｄｉｆｆｅｒｅｎｔｌｅｔｔｅｒｓｉｎｄｉｃａｔｅｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔｄｉｆｆｅｒｅｎｃｅａｍｏｎｇ
ｌｉｎｅｓｕｎｄｅｒｔｈｅｓａｍｅｃｏｎｄｉｔｉｏｎ（犘＜０．０５）．Ｌ１０ｉｓｎｏｎｔｒａｎｓｇｅｎｉｃＣＫ．Ｔｈｅｓａｍｅｂｅｌｏｗ．
２．２．３ 干旱胁迫下超氧化物歧化酶（ＳＯＤ）活性变化
图６ 干旱胁迫下转基因马铃薯的犛犗犇活性
犉犻犵．６ 犛犗犇犪犮狋犻狏犻狋狔犻狀狋狉犪狀狊犵犲狀犻犮狆犾犪狀狋狊狌狀犱犲狉犱狉狅狌犵犺狋狊狋狉犲狊狊
在正常浇水条件下，转犇犚犈犅１犃 基因株系和对照马
铃薯叶片中ＳＯＤ酶活性较低，并且各株系差异不明
显。胁迫１０ｄ后，各株系的ＳＯＤ活性增强，２个转基
因株系的ＳＯＤ活性相近且高于对照（陇薯１０号），差
异显著（Ｐ＜０．０５）（图６）。犇犚犈犅１犃基因的表达提高
了转基因马铃薯的ＳＯＤ活性，有利于保护细胞内的蛋
白和膜系统免受氧化胁迫的伤害，增强其在干旱环境
下的耐受能力。
２．３ 转基因植株除草剂抗性分析
用０．３％的市售除草剂草铵膦喷施７ｄ时，未转基
因对照萎蔫，茎秆枯黄，而各转基因株系生长状态良
好；喷施１０ｄ后，对照植株全部枯死，转基因株系的个别叶片干枯，绝大多数叶片及所有茎秆生长状态良好（图
７）。表明除草剂抗性基因犅犪狉已整合到马铃薯基因组中，并得到有效的表达。
３ 讨论
逆境是指对植物生存和生长发育不利的各种环境因子的总称。当植物机体处于逆境时，由于受外界不良环
境的刺激，细胞内产生大量的活性氧并形成一系列氧化活性物质，在这些氧化物质的作用下，膜脂发生过氧化，细
胞质膜透性发生变化，细胞内的电解质外渗导致离子交换规律被破坏［１８］。引起质膜透性发生变化的物质有很多
种，其中丙二醛（ＭＤＡ）因其化学性质稳定，检测方法简单易行，科研工作者常常通过测定丙二醛含量来评估植物
细胞质膜的过氧化水平，进而评价植物遭受逆境伤害的程度［１９］。为了消弱甚至消除细胞遭受氧化物质的毒害而
使植物适应不良的环境条件，植物细胞内清除活性氧的酶促体系和非酶促体系形成一系列反应机制来维持整个
防御系统的动态平衡。超氧化物歧化酶（ＳＯＤ）作为酶促体系的重要成员，在维持植物细胞内活性氧代谢平衡中
２６ 草 业 学 报 第２４卷
图７ 转基因马铃薯的除草剂抗性分析
犉犻犵．７ 犎犲狉犫犻犮犻犱犲狉犲狊犻狊狋犪狀狋犪狀犪犾狔狊犻狊狅犳狋狉犪狀狊犵犲狀犻犮狆狅狋犪狋狅
Ａ：喷施草铵膦前的各株系。Ｐｌａｎｔｓｂｅｆｏｒｅｔｒｅａｔｅｄｗｉｔｈ０．３％ｇｌｕｆｏｓｉｎａｔｅｓｏｌｕｔｉｏｎ；Ｂ：喷施０．３％草铵膦溶液７ｄ的各株系。Ｐｌａｎｔｓｔｒｅａｔｅｄｗｉｔｈ
０．３％ｇｌｕｆｏｓｉｎａｔｅｓｏｌｕｔｉｏｎｆｏｒ７ｄ；Ｃ：喷施０．３％草铵膦溶液１０ｄ的各株系。Ｐｌａｎｔｓｔｒｅａｔｅｄｗｉｔｈ０．３％ｇｌｕｆｏｓｉｎａｔｅｓｏｌｕｔｉｏｎｆｏｒ１０ｄ．ＣＫ：未转基因
陇薯１０号。ＮｏｎｔｒａｎｓｇｅｎｉｃｐｌａｎｔｓＬｏｎｇｓｈｕＮｏ．１０；１～５：转基因株系 Ｔｒａｎｓｇｅｎｉｃｌｉｎｅｓ．
起着非常重要的作用，常被用来衡量逆境胁迫条件下细胞活性氧清除能力的强弱［２０］。本研究发现，在干旱胁迫
条件下，转基因株系的超氧化物歧化酶活性显著高于非转基因对照植株，电导率和丙二醛含量则显著低于对照，
表明犇犚犈犅１犃基因的转入，提高了超氧化物歧化酶的活性，该酶活性的提高，有效的增强了细胞清除活性氧的
能力，进而减轻了活性氧对质膜造成的伤害，增强了转基因马铃薯在干旱环境下的耐受力。该结论与犇犚犈犅１犃
基因转化拟南芥［７８］、烟草［９］、水稻［１０］和小麦［１１１２］等作物的研究结果一致，都明显提高了转基因植物的耐旱性。
随着转基因技术的快速发展，世界各国已培育出大量的抗除草剂转基因作物，这些转基因产品不仅涉及繁多
的作物品种，也涉及多种多样的除草剂类型［２２２３］。自１９９６年美国首次商业化了转基因作物之后，欧美等发达国
家已培育并商品化了多种抗除草剂作物［２４２６］。抗除草剂转基因作物的大面积种植，不仅为杂草的防治做出了重
大的贡献，而且对于降低劳动强度、节约农业生产成本具有十分重要的意义。草铵膦属于有机磷类除草剂，因其
具有活性高、药效快和无土壤活性等优点而广受研究者的青睐［２７］。为研究抗草铵膦转犅犪狉基因马铃薯的除草剂
抗性，本研究用０．３％的市售除草剂草铵膦喷施未转基因对照和５个转基因株系，喷施１０ｄ后，对照植株全部枯
死，转基因株系的个别叶片干枯，绝大多数叶片及所有茎秆生长状态良好（图７）。表明除草剂抗性基因犅犪狉已整
合到马铃薯基因组中，并得到有效的表达，明显提高了转基因马铃薯的除草剂抗性。
犚犲犳犲狉犲狀犮犲狊：
［１］ ＢｕｓｓｉｓＤ，ＭｅｉｎｅｋｅＤ，ＳｏｎｎｅｗａｌｄＵ，犲狋犪犾．Ｓｏｌｕｔｅａｃｃｕｍｕｌａｔｉｏｎａｎｄｄｅｃｒｅａｓｅｄｐｈｏｔｏｓｙｎｔｈｅｓｉｓｉｎｌｅａｖｅｓｏｆｐｏｔａｔｏｐｌａｎｔｓｅｘ
ｐｒｅｓｓｉｎｇｙｅａｓｔｄｅｒｉｖｅｄｉｎｖｅｒｔａｓｅｅｉｔｈｅｒｉｎｔｈｅａｐｏｐｌａｓｔ，ｖａｃｕｏｌｅｏｒｃｙｔｏｓｏｌ．Ｐｌａｎｔａ，１９９７，２０２（１）：１２６１３６．
［２］ ＹｅｏＥＴ，ＨａｗｋｂｉｎＫ，ＳａｎｇＥｕｎＨ，犲狋犪犾．Ｇｅｎｅｔｉｃｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇｏｆｄｒｏｕｇｈｔｒｅｓｉｓｔａｎｔｐｏｔａｔｏｐｌａｎｔｓｂｙｉｎｔｒｏｄｕｃｔｉｏｎｏｆｔｈｅｔｒｅｈａ
ｌｏｓｅ６ｐｈｏｓｐｈａｔｅｓｙｎｔｈａｓｅ（ＴＰＳ１）ｇｅｎｅｆｒｏｍ犛犪犮犮犺犪狉狅犿狔犮犲狊犮犲狉犲狏犻狊犻犪犲．ＭｏｌｅｃｕｌｅｓａｎｄＣｅｌｓ，２０００，１０（３）：２６３２６８．
［３］ ＺｈａｎｇＮ，ＳｉＨＪ，ＬｉＬ，犲狋犪犾．Ｄｒｏｕｇｈｔａｎｄｓａｌｉｎｉｔｙｔｏｌｅｒａｎｃｅｉｎｔｒａｎｓｇｅｎｉｃｐｏｔａｔｏｅｘｐｒｅｓｓｉｎｇｔｈｅｂｅｔａｉｎｅａｌｄｅｈｙｄｅｄｅｈｙｄｒｏｇｅｎ
ａｓｅｇｅｎｅ．ＡｃｔａＡｇｒｏｎｏｍｉｃａＳｉｎｃａ，２００９，３５（６）：１１４６１１５０．
［４］ ＣｏｕｒｔｏｉｓＢ，ＭｃＬａｒｅｎＧ，ＳｉｎｈａＰＫ，犲狋犪犾．ＭａｐｐｉｎｇＱＴＬａｓｓｏｃｉａｔｅｄｗｉｔｈｄｒｏｕｇｈｔａｖｏｉｄａｎｃｅｉｎｕｐｌａｎｄｒｉｃｅ．ＭｏｌｅｃｕｌａｒＢｒｅｅｄ
ｉｎｇ，２０００，６：５５６６．
［５］ ＳｅｋｉＭ，ＮａｒｕｓａｋａＭ，ＡｂｅＨ，犲狋犪犾．Ｍｏｎｉｔｏｒｉｎｇｔｈｅｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎｐａｔｔｅｒｎｏｆ１３００犃狉犪犫犻犱狅狆狊犻狊ｇｅｎｅｓｕｎｄｅｒｄｒｏｕｇｈｔａｎｄｃｏｌｄ
ｓｔｒｅｓｓｅｓｂｙｕｓｉｎｇａｆｕｌｌｅｎｇｔｈｃＤＮＡｍｉｃｒｏａｒｒａｙ．ＰｌａｎｔＣｅｌ，２００１，１３：６１７２．
［６］ ＦｏｗｌｅｒＳ，ＴｈｏｍａｓｈｏｗＭＦ．犃狉犪犫犻犱狅狆狊犻狊ｔｒａｎｓｃｒｉｐｔｉｏｎｐｒｏｆｉｌｉｎｇｉｎｄｉｃａｔｅｓｔｈａｔｍｕｌｔｉｐｌｅｒｅｇｕｌａｔｏｒｙｐａｔｈｗａｙｓａｒｅａｃｔｉｖａｔｅｄｄｕｒ
ｉｎｇｃｏｌｄａｃｃｌｉｍａｔｉｏｎｉｎａｄｄｉｔｉｏｎｔｏｔｈｅＣＢＦｃｏｌｄｒｅｓｐｏｎｓｅｐａｔｈｗａｙ．ＰｌａｎｔＣｅｌ，２００２，１４：１６７５１６９０．
［７］ ＬｉｕＱ，ＫａｓｕｇａＭ．Ｔｗｏｔｒａｎｓｃｒｉｐｔｉｏｎｆａｃｔｏｒｓ，ＤＲＥＢ１ａｎｄＤＲＥＢ２，ｗｉｔｈａｎＥＲＥＢＰ／ＡＰ２ＤＮＡｂｉｎｄｉｎｇｄｏｍａｉｎｓｅｐａｒａｔｅｔｗｏ
ｃｅｌｕｌａｒｓｉｇｎａｌｔｒａｎｓｄｕｃｔｉｏｎｐａｔｈｗａｙｓｉｎｄｒｏｕｇｈｔａｎｄｌｏｗｔｅｍｐｅｒａｔｕｒｅｒｅｓｐｏｎｓｉｖｅｇｅｎｅｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ，ｒｅｓｐｅｃｔｉｖｅｌｙ，ｉｎ犃狉犪犫犻犱狅狆
狊犻狊．ＰｌａｎｔＣｅｌ，１９９８，１０：１３９１１４０６．
［８］ Ｋａｓｕｇａｍ Ｍ，ＬｉｕＱ，ＭｉｕｒａＳ，犲狋犪犾．Ｉｍｐｒｏｖｉｎｇｐｌａｎｔｄｒｏｕｇｈｔ，ｓａｌｔ，ａｎｄｆｒｅｅｚｉｎｇｔｏｌｅｒａｎｃｅｂｙｇｅｎｅｔｒａｎｓｆｅｒｏｆａｓｉｎｇｌｅｓｔｒｅｓｓ
ｉｎｄｕｃｉｂｌｅｔｒａｎｓｃｒｉｐｔｉｏｎｆａｃｔｏｒ．ＮａｔｕｒｅＢｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，１９９９，１７：２８７２９２．
３６第１１期 贾小霞 等：转犇犚犈犅１犃／犅犪狉双价基因马铃薯的耐旱性及除草剂抗性分析
［９］ ＫａｓｕｇａＭ，ＭｉｕｒａＳ，ＳｈｉｎｏｚａｋｉＫ，犲狋犪犾．Ａｃｏｍｂｉｎａｔｉｏｎｏｆｔｈｅ犃狉犪犫犻犱狅狆狊犻狊ＤＲＥＢ１Ａｇｅｎｅａｎｄｓｔｒｅｓｓｉｎｄｕｃｉｂｌｅｒｄ２９Ａｐｒｏｍｏｔ
ｅｒｉｍｐｒｏｖｅｄｄｒｏｕｇｈｔａｎｄｌｏｗｔｅｍｐｅｒａｔｕｒｅｓｔｒｅｓｓｔｏｌｅｒａｎｃｅｉｎｔｏｂａｃｃｏｂｙｇｅｎｅｔｒａｎｓｆｅｒ．ＰｌａｎｔａｎｄＣｅｌ Ｐｈｙｓｉｏｌｏｇｙ，２００４，
４５（３）：３４６３５０．
［１０］ ＬｉｕＬＸ，ＺｈａｏＬＳ，ＬｉａｎｇＸＸ，犲狋犪犾．Ｓｔｕｄｙｏｎｐｒｏｄｕｃｔｉｏｎｏｆｔｒａｎｓｇｅｎｉｃｗｈｅａｔｗｉｔｈａｓｔｒｅｓｓｉｎｄｕｃｉｂｌｅｔｒａｎｓｃｒｉｐｔｉｏｎｆａｃｔｏｒ
ｇｅｎｅＤＲＥＢ１Ａｂｙｍｉｃｒｏｐｒｏｊｅｃｔｉｌｅｂｏｍｂａｒｄｍｅｎｔ．ＣｈｉｎａＢｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，２００３，２３（１１）：５３５６．
［１１］ ＪａｇｌｏＯｔｔｏｓｅｎＫＲ，ＧｉｌｍｏｕｒＳＪ，ＺａｒｋａＤＧ，犲狋犪犾．犃狉犪犫犻犱狅狆狊犻狊ａＢＦ１ｏｖｅｒｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎｉｎｄｕｃｅｓＣｏＲｇｅｎｅｓａｎｄｅｎｈａｎｃｅｓｆｒｅｅｚ
ｉｎｇｔｏｌｅｒａｎｃｅ．Ｓｃｉｅｎｃｅ，１９９８，２８０：１０４１０６．
［１２］ ＰｅｌｅｇｒｉｎｅｓｃｈｉＡ，ＲｅｙｎｏｌｄｓＭ，ＰａｃｈｅｃｏＭ，犲狋犪犾．Ｓｔｒｅｓｓｉｎｄｕｃｅｄｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎｉｎｗｈｅａｔｏｆｔｈｅ犃狉犪狅犫犻犱狅狆狊犻狊狋犺犪犾犻犪狀犪ＤＲＥＢ１Ａ
ｇｅｎｅｄｅｌａｙｓｗａｔｅｒｓｔｒｅｓｓｓｙｍｐｔｏｍｓｕｎｄｅｒｇｒｅｅｎｈｏｕｓｅｃｏｎｄｉｔｉｏｎｓ．Ｇｅｎｅｍｅ，２００４，４７（３）：４９３５００．
［１３］ ＪｉａＸＸ，ＱｉＥＦ，ＷａｎｇＹＨ，犲狋犪犾．ＣｏｎｓｔｒｕｃｔｉｏｎｏｆｂｉｖａｌｅｎｔｐｌａｎｔｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎｖｅｃｔｏｒｏｆＤＲＥＢ１ＡａｎｄＢａｒｇｅｎｅｓａｎｄｓｔｕｄｉｅｓｏｆ
ｇｅｎｅｔｉｃｔｒａｎｓｆｏｒｍａｔｉｏｎｏｆｐｏｔａｔｏ．ＡｃｔａＰｒａｔａｃｕｌｔｕｒａｅＳｉｎｉｃａ，２０１４，２３（３）：１１０１１７．
［１４］ ＬｉＳＪ，ＺｈａｎｇＺＹ．ＥｘｐｒｅｓｓｉｏｎｏｆｔｈｅＴａ６ＳＦＴｇｅｎｅｉｎ犅狉犪狊狊犻犮犪狀犪狆狌狊ｕｎｄｅｒｄｒｏｕｇｈｔｓｔｒｅｓｓ．ＡｃｔａＰｒａｔａｃｕｌｔｕｒａｅＳｉｎｉｃａ，
２０１４，２３（５）：１６１１６７．
［１５］ ＷｅｉＱ，ＣｕｉＬＨ，ＹａｎｇＳＪ．ＥｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌＧｕｉｄａｎｃｅｏｆＭｏｌｅｃｕｌａｒＢｉｏｌｏｇｙ［Ｍ］．Ｂｅｉｊｉｎｇ：ＨｉｇｈｅｒＥｄｕｃａｔｉｏｎＰｒｅｓｓ，２００５．
［１６］ ＬｉｖａｋＫＪ，ＳｃｈｍｉｔｔｇｅｎＴＤ．ＡｎａｌｙｓｉｓｏｆｒｅｌａｔｉｖｅｇｅｎｅｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎｄａｔａｕｓｉｎｇｒｅａｌｔｉｍｅｑｕａｎｔｉｔａｔｉｖｅＰＣＲａｎｄｔｈｅ２ΔΔＣＴ ｍｅｔｈｏｄ．
Ｍｅｔｈｏｄｓ，２００１，２５：４０２４０８．
［１７］ ＺｈａｎｇＺＡ，ＺｈａｎｇＭＳ，ＷｅｉＲＨ．ＥｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌＧｕｉｄａｎｃｅｏｆＰｌａｎｔＰｈｙｓｉｏｌｏｇｙ［Ｍ］．Ｂｅｉｊｉｎｇ：ＣｈｉｎａＡｇｒｉｃｕｌｔｕｒａｌＳｃｉｅｎｃｅａｎｄ
ＴｅｃｈｎｏｌｏｇｙＰｒｅｓｓ，２００４．
［１８］ ＧａｏＷＪ，ＸｕＪ，ＸｉｅＫＹ，犲狋犪犾．Ｐｈｙｓｉｏｌｏｇｉｃａｌｒｅｓｐｏｎｓｅｓｏｆ犃犵狉狅狆狔狉狅狀犮狉犻狊狋犪狋狌犿ｕｎｄｅｒＮａ２ＣＯ３ａｎｄＮａＨＣＯ３ｓｔｒｅｓｓ．Ａｃｔａ
ＰｒａｔａｃｕｌｔｕｒａｅＳｉｎｉｃａ，２０１１，２０（４）：２９９３０４．
［１９］ ＬｉＹ，ＬｉｕＧＢ，ＧａｏＨ Ｗ，犲狋犪犾．Ａｃｏｍｐｒｅｈｅｎｓｉｖｅｅｖａｌｕａｔｉｏｎｏｆｓａｌｔｔｏｌｅｒａｎｃｅａｎｄｔｈｅｐｈｙｓｉｏｌｏｇｉｃａｌｒｅｓｐｏｎｓｅｏｆ犕犲犱犻犮犪犵狅
狊犪狋犻狏犪ａｔｔｈｅｓｅｅｄｌｉｎｇｓｔａｇｅ．ＡｃｔａＰｒａｔａｃｕｌｔｕｒａｅＳｉｎｉｃａ，２０１０，１９（４）：７９８６．
［２０］ ＺｈａｎｇＨＮ，ＬｉＸＪ，ＬｉＣＤ，犲狋犪犾．Ｅｆｆｅｃｔｓｏｆｏｖｅｒｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎｏｆｗｈｅａｔｓｕｐｅｒｏｘｉｄｅｄｉｓｍｕｔａｓｅ（ＳＯＤ）ｇｅｎｅｓｏｎｓａｌｔｔｏｌｅｒａｎｔｃａ
ｐａｂｉｌｉｔｙｉｎｔｏｂａｃｃｏ．ＡｃｔａＡｇｒｏｎｏｍｉｃａＳｉｎｉｃａ，２００８，３４：１４０３１４０８．
［２１］ ＷａｎｇＹＸ，ＺｈａｎｇＢ，ＷａｎｇＴ．Ｅｆｆｅｃｔｏｆｓａｌｔｓｔｒｅｓｓｏｎｔｈｅｃｏｎｔｅｎｔｓｏｆｃｈｌｏｒｏｐｈｙｌａｎｄｂｅｔａｉｎｅａｎｄｉｔｓｍｅｍｂｒａｎｅｐｅｒｍｅａｂｉｌｉｔｙ
ｏｆ犕犲犱犻犮犪犵狅狊犪狋犻狏犪．ＰｒａｔａｃｕｌｔｕｒａｌＳｃｉｅｎｃｅ，２００９，２６（３）：５３５６．
［２２］ ＨｕａｎｇＤＮ．Ｐｒｏｇｒｅｓｓｏｎｇｅｎｅｔｉｃａｌｙｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇｈｅｒｂｉｃｉｄｅｒｅｓｉｓｔａｎｃｅｉｎｔｏｃｒｏｐｓ．ＢｉｏｌｏｇｉｃａｌＥｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇＰｒｏｇｒｅｓｓ，１９９７，
１７（５）：１４１７．
［２３］ ＷｕＡＺ，ＴａｎｇＫＸ，ＰａｎＪＳ，犲狋犪犾．Ｐｒｏｄｕｃｔｉｏｎｏｆｈｅｒｂｉｃｉｄｅｒｅｓｉｓｔａｎｔｒｉｃｅｗｉｔｈｔｒａｎｓｆｏｒｍｉｎｇｈｅｔｅｒｏｇｅｎｅ．ＡｃｔａＧｅｎｅｔｉｃａＳｉｎｉ
ｃａ，２０００，２１（１７）：９９２９９８．
［２４］ ＭａｎａｂｅＴ．ＢｅｎｅｆｉｔｓｏｆｇｌｙｐｈｏｓａｔｅｔｏｌｅｒａｎｔｓｏｙｂｅａｎｓｉｎＪａｐａｎｅｓｅｓｏｙｂｅａｎｐｒｏｄｕｃｔｉｏｎ［Ｃ］．Ｔｈｅ１８ｔｈＡｓｉａｎＰａｃｉｆｉｃＷｅｅｄＳｃｉ
ｅｎｃｅＳｏｃｉｅｔｙＣｏｎｆｅｒｅｎｃｅ．Ｂｅｉｊｉｎｇ，ＰＲＣｈｉｎａ，２００１：４４９４５２．
［２５］ ＭａｒｌａｎｄｅｒＢ．ＧｅｎｅｔｉｃａｌｙｍｏｄｉｆｉｅｄｖａｒｉｅｔｉｅｓｉｎＧｅｒｍａｎｙｓｔａｔｕｓａｎｄｐｒｏｓｐｅｃｔｓｗｉｔｈｓｐｅｃｉａｌｒｅｓｐｅｃｔｏｆｓｕｓｔａｉｎａｂｌｅｓｕｇａｒｂｅｅｔ
ｃｕｌｔｉｖａｔｉｏｎ．Ｚｕｋｅｒｉｎｄｕｓｔｒｉｅ，１９９９，１２４（１２）：９４３９４６．
［２６］ ＯａｒｄＪＨ．Ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ，ｆｉｅｌｄｅｖａｌｕａｔｉｏｎ，ａｎｄａｇｒｏｎｏｍｉｃｐｅｒｆｏｒｍａｎｃｅｏｆｔｒａｎｓｇｅｎｉｃｈｅｒｂｉｃｉｄｅｒｅｓｉｓｔａｎｔｒｉｃｅ．ＭｏｌｅｃｕｌａｒＢｒｅｅｄ
ｉｎｇ，１９９６，２（４）：３５９３６８．
［２７］ ＶａｓｉｌＩＫ．ＰｈｏｓｐｈｉｎｏｔｈｒｉｃｉｎｒｅｓｉｓｔａｎｔＣｒｏｐｓ［Ｍ］．ＢｏｃａＲａｔｏｎＦＬ：ＣＲＣ，Ｎ．Ｙ．，１９９６：８５８９．
参考文献：
［３］ 张宁，司怀军，栗亮，等．转甜菜碱醛脱氢酶基因马铃薯的抗旱耐盐性．作物学报，２００９，３５（６）：１１４６１１５０．
［１０］ 刘录祥，赵林姝，梁欣欣，等．基因枪法获得逆境诱导转录因子ＤＲＥＢ１Ａ转基因小麦的研究．中国生物工程杂志，２００３，
２３（１１）：５３５６．
［１３］ 贾小霞，齐恩芳，王一航，等．转录因子ＤＲＥＢ１Ａ基因和Ｂａｒ基因双价植物表达载体的构建及对马铃薯遗传转化的研究．
草业学报，２０１４，２３（３）：１１０１１７．
［１４］ 李淑洁，张正英．Ｔａ６ＳＦＴ基因对油菜的转化及抗旱性分析．草业学报，２０１４，２３（５）：１６１１６７．
［１５］ 魏群，崔丽华，杨淑杰．分子生物学实验指导［Ｍ］．北京：高等教育出版社，２００５．
［１７］ 张治安，张美善，蔚荣海．植物生理学实验指导［Ｍ］．北京：中国农业科学技术出版社，２００４．
［１８］ 高文俊，徐静，谢开云，等．Ｎａ２ＣＯ３ 和ＮａＨＣＯ３ 胁迫下冰草的生长及生理响应．草业学报，２０１１，２０（４）：２９９３０４．
［１９］ 李源，刘贵波，高洪文，等．紫花苜蓿种质耐盐性综合评价及盐胁迫下的生理反应．草业学报，２０１０，１９（４）：７９８６．
［２０］ 张海娜，李小娟，李存东，等．过量表达小麦超氧化物歧化酶（ＳＯＤ）基因对烟草耐盐能力的影响．作物学报，２００８，３４：
１４０３１４０８．
［２１］ 王玉祥，张博，王涛．盐胁迫对苜蓿叶绿素、甜菜碱含量和细胞膜透性的影响．草业科学，２００９，２６（３）：５３５６．
［２２］ 黄大年．农作物抗除草剂遗传工程研究进展．生物工程进展，１９９７，１７（５）：１４１７．
［２３］ 吴爱忠，唐克轩，潘俊松，等．转基因培育抗除草剂水稻．遗传学报，２０００，２１（１７）：９９２９９８．
４６ 草 业 学 报 第２４卷