全 文 ：书柠条锦鸡儿犆犽犖犆犈犇１基因启动子的
克隆及表达分析
任爱琴１，２，易津１，高洪文２，李俊２，王学敏２
（１．内蒙古农业大学农学院，内蒙古 呼和浩特０１００１８；２．中国农业科学院北京畜牧兽医研究所，北京１００１９３）
摘要：利用染色体步移（Ｇｅｎｏｍｅｗａｌｋｉｎｇ）技术，克隆柠条锦鸡儿犆犽犖犆犈犇１基因上游启动子序列。经顺式元件预
测分析，该序列除基本的启动元件之外，还含有２个脱落酸诱导响应元件 ＡＢＲＥ、此外还含有多个逆境相关的元
件。将犆犽犖犆犈犇１基因启动子区连接到ｐＧＷＢ５３３植物表达载体上，构建Ｐｒｏｍｏｔｅｒ：：ＧＵＳ载体，ＧＵＳ组织化学染
色结果表明，犆犽犖犆犈犇１基因在植物的叶、根、茎、花和角果的维管组织中均有表达，且在叶片中表达强度最高。以
上研究确定了柠条锦鸡儿犆犽犖犆犈犇１基因的表达部位和强度。进一步说明犆犽犖犆犈犇１基因在ＡＢＡ合成调控中发
挥重要作用，为深入研究基因功能奠定基础。
关键词：柠条锦鸡儿；犆犽犖犆犈犇１基因启动子；ＧＵＳ组织化学染色；ＡＢＡ响应元件
中图分类号：Ｓ５４０．３；Ｑ９４３．２　　文献标识码：Ａ　　文章编号：１００４５７５９（２０１３）０２０１６５０６
　　脱落酸（ａｂｓｃｉｓｉｃａｃｉｄ，ＡＢＡ）是植物的五大激素之一，不仅在植物生长发育中起着重要作用，而且在植物干
旱、高盐和低温胁迫反应中也具有广泛而重要的作用［１］。９顺式新黄质或９顺式紫黄质裂解形成黄质醛是ＡＢＡ
的生物合成途径中的限速步骤，催化该裂解反应的９顺式环氧类胡萝卜素双加氧酶（９ｃｉｓｅｐｏｘｙｃａｒｏｔｅｎｏｉｄｄｉｏｘ
ｙｇｅｎａｓｅ，ＮＣＥＤ）是调控高等植物ＡＢＡ生物合成的关键酶［２，３］。
自从玉米（犣犲犪犿犪狔狊）突变体ｖｐ１４［４］中克隆第１个犣犿犞犘１４（犖犆犈犇）基因以来，已相继在拟南芥（犃狉犪犫犻
犱狅狆狊犻狊狋犺犪犾犻犪狀犪）［５］、番茄（犔狔犮狅狆犲狉狊犻犮狅狀犲狊犮狌犾犲狀狋狌犿）［６］、菜豆（犘犺犪狊犲狅犾狌狊狏狌犾犵犪狉犻狊）［７］、豇豆（犞犻犵狀犪狌狀犵狌犻犮狌犾犪
狋犪）［８］、柱花草（犛狋狔犾狅狊犪狀狋犺犲狊犵狌犻犪狀犲狀狊犻狊）［９］等植物中克隆了犖犆犈犇 基因。研究发现，在拟南芥、烟草（犖犻犮狅狋犻犪狀犪
狋犪犫犪犮狌犿）和番茄等植物中，过量表达犖犆犈犇基因可以造成ＡＢＡ累积并促进ＡＢＡ的代谢，从而可以提高植物的
抗旱能力［５，１０，１１］。Ｙａｎｇ和Ｇｕｏ［９］将柱花草犖犆犈犇１基因转入烟草，犖犆犈犇１基因的过量表达提高了转基因烟草
的抗旱和耐盐性。
柠条锦鸡儿（犆犪狉犪犵犪狀犪犽狅狉狊犺犻狀狊犽犻犻）是一种优良的豆科牧草，具有极强的抗逆性，一直以来颇受关注［１２］。本
实验室在前期研究工作中已经从柠条锦鸡儿的脱水叶片中分离到了一个犖犆犈犇 基因，犆犽犖犆犈犇１（ＧｅｎＢａｎｋａｃ
ｃｅｓｓｉｏｎｎｏ．ＧＱ３９５７７２），并发现该基因主要受干旱和盐胁迫诱导表达，且基因的诱导表达趋势和体内ＡＢＡ含量
协同变化［１３］。为进一步研究犆犽犖犆犈犇１基因表达的调控机制，研究分离犆犽犖犆犈犇１基因５′端上游启动子序列，
通过构建Ｐｒｏｍｏｔｅｒ：：ＧＵＳ报告基因表达载体，分析犆犽犖犆犈犇１基因在转基因拟南芥中的表达特点，确定了
犆犽犖犆犈犇１基因在植物体内的表达部位和强度，为下一步分离启动子的逆境胁迫响应元件，进一步鉴定基因的功
能奠定基础。
１　材料与方法
１．１　材料
１．１．１　植物材料　２０１０年９月，柠条锦鸡儿种子氯气消毒２４ｈ后，播种于铺有滤纸的培养皿中，在光照培养箱
（温度２４℃，１４ｈ光照／１０ｈ黑暗）中培养至种子发芽。将发芽后的种子移至营养土蛭石和珍珠岩比例为３∶３∶１
的花盆中继续生长３０ｄ。拟南芥Ｃｏｌｕｍｂｉａ生态型，由中国农业科学院北京畜牧兽医研究所牧草种质资源实验
第２２卷　第２期
Ｖｏｌ．２２，Ｎｏ．２
草　业　学　报
ＡＣＴＡＰＲＡＴＡＣＵＬＴＵＲＡＥＳＩＮＩＣＡ 　　
１６５－１７０
２０１３年４月
收稿日期：２０１２０２１７；改回日期：２０１２０３１９
基金项目：国家自然科学基金项目（３１１０１７５５）资助。
作者简介：任爱琴（１９８４），女，内蒙古鄂尔多斯人，在读硕士。Ｅｍａｉｌ：ｒｅｎａｉｑｉｎ３１０＠１６３．ｃｏｍ
通讯作者。Ｅｍａｉｌ：ｗａｎｇｘｕｅｍｉｎ＠ｃａａｓ．ｃｎ
室保存。
１．１．２　菌株和载体　大肠杆菌菌株ＤＨ５ａ、根癌农杆菌菌株ＧＶ３１０１由本实验室保存。克隆载体ｐＭＤ１９Ｔ购
自宝生物（ＴａＫａＲａ）工程有限公司，ｐＧＷＢ５３３植物表达载体由浙江省农科院病生所王栩鸣博士惠赠。
１．２　犆犽犖犆犈犇１启动子序列克隆及序列分析
１．２．１　犆犽犖犆犈犇１基因启动子序列克隆　利用植物基因组ＤＮＡ提取试剂盒（ＴａＫａＲａ）提取柠条锦鸡儿基因组
ＤＮＡ。根据以ＰＣＲ为基础的染色体步移原理，利用染色体步移试剂盒（ＵｎｉｖｅｒｓａｌＧｅｎｏｍｅＷａｌｋｅｒＴＭ ＤＮＡ
Ｗａｌｋｉｎｇｋｉｔ，ＣＬＯＮＴＥＣＨ）进行启动子序列的扩增。分别用４个限制性内切酶：犈犮狅ＲＶ、犇狉犪Ｉ、犘狏狌ＩＩ和犛狋狌Ｉ酶
解基因组ＤＮＡ，酶解后的ＤＮＡ经等体积苯酚、氯仿抽提后，用无水乙醇沉淀，最终得到纯化的基因组ＤＮＡ片
段。然后在酶切所得到的平末端ＤＮＡ片段上连接双链接头，构建成４个不同“ＤＮＡ片段库”。根据犆犽犖犆犈犇１
基因的ｃＤＮＡ序列（ＧｅｎＢａｎｋａｃｃｅｓｓｉｏｎｎｏ．ＧＱ３９５７７２），设计非重叠的特异性引物：
ＧＳＰ１：５′ＧＧＴＴＧＴＧＧＴＴＧＴＧＧＡＴＴＧＧＧＧＴＴＧＧＴＡ３′
ＧＳＰ２：５′ＧＴＴＣＴＣＴＡＴＴＴＴＴＴＧＡＡＡＧＡＧＴＧＴＧＴＧ３′
利用特异性引物和试剂盒中所带的接头引物ＡＰ１、ＡＰ２，分别以４个“ＤＮＡ片段库”为模板，进行ｐｒｉｍａｒｙ
ＰＣＲ（ＧＳＰ１和ＡＰ１）和ｓｅｃｏｎｄａｒｙＰＣＲ（ＧＳＰ２和ＡＰ２）２次ＰＣＲ反应，扩增柠条锦鸡儿犆犽犖犆犈犇１基因５′端上游
的启动子序列，回收扩增产物，克隆到ｐＭＤ１９Ｔ载体上，送阳性克隆至上海英骏生物技术有限公司测序部，测序
结果经过拼接比对，最终得到犆犽犖犆犈犇１基因上游的启动子序列。
１．２．２　犆犽犖犆犈犇１基因启动子序列的生物信息学分析　利用（ｈｔｔｐ：／／ｂｉｏｉｎｆｏｒｍａｔｉｃｓ．ｐｓｂ．ｕｇｅｎｔ．ｂｅ／ｗｅｂｔｏｏｌｓ／
ｐｌａｎｔｃａｒｅ／ｈｔｍｌ／）［１４］植物顺式作用元件数据库中的信号扫描程序，对其进行生物信息学分析，寻找该启动子序列
中可能的响应外界环境刺激和发育信号的顺式作用元件。
１．３　启动子与ＧＵＳ基因融合表达载体的构建
采用Ｇａｔｅｗａｙ技术构建植物表达载体。首先构建入门载体，按照ＴＯＰＯ试剂盒（ＧａｔｅｗａｙｐＥＮＴＲＤｉｒｅｃ
ｔｉｏｎａｌＴＯＰＯＣｌｏｎｉｎｇＫｉｔｓ，Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）说明书的要求设计启动子全长引物，５′端引物加ＣＡＣＣ确定克隆方向：
ＮＰ１：５′ＣＡＣＣＣＴＡＴＡＡＴＴＧＡＧＣＣＡＴＴＧＴＧＧＴＡＧＣ３′
ＮＰ２：５′ＡＧＧＧＡＣＴＧＡＣＣＡＣＣＣＧＧＧＴＴＣＴＣＴＡＴＴＴＴＴＴＧＡＡＡＧ３′
ＰＣＲ扩增启动子全长序列，将目的片段与ｐＥＮＴＲＤｉｒｅｃｔｉｏｎａｌＴＯＰＯＶｅｔｏｒ以摩尔比３∶１混合，室温下连
接５ｍｉｎ，将连接产物热激转化大肠杆菌ＤＨ５ａ后涂布在含有５０ｍｇ／Ｌｋａｎａｍｙｃｉｎ的ＬＢ平板上筛选，挑取单克
隆进行ＰＣＲ鉴定并送英骏公司测序。
测序正确的阳性克隆经质粒制备试剂盒（Ａｘｙｇｅｎ）提取质粒后，进行ＬＲ反应，构建转化载体。参照ＬＲＣｌｏ
ｎａｓｅ说明书（ＧａｔｅｗａｙＬＲＣｌｏｎａｓｅＩＩＥｎｚｙｍｅＭｉｘ，Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ），在０．５ｍＬＥＰ管中，分别加入以上构建好的Ｅｎ
ｔｒｙｃｌｏｎｅ质粒（５０～１５０ｎｇ）２μＬ，ｐＧＷＢ５３３质粒（１５０ｎｇ）１μＬ，ＴＥｂｕｆｆｅｒ（ｐＨ８．０）４μＬ，ＬＲＣｌｏｎａｓｅＩＩＥｎ
ｚｙｍｅＭｉｘ２μＬ，短暂混匀后２５℃孵育１ｈ，待反应完全后加入１μＬ蛋白酶Ｋ于３７℃１０ｍｉｎ终止反应。在上述
ＬＲ方向反应中，ａｔｔＬ１序列只能与ａｔｔＲ１序列重组，ａｔｔＬ２序列只能与ａｔｔＲ２序列重组，生成新的位点ａｔｔＰ和
ａｔｔＢ。取１μＬ反应液热激转化大肠杆菌ＤＨ５ａ后涂布在含有１００ｍｇ／Ｌ壮观霉素和３０ｍｇ／Ｌ氯霉素的平板上
筛选，挑取单菌落进行ＰＣＲ鉴定，阳性克隆提取质粒后测序正确的即为构建成功的表达载体ｐＣｋＮＣＥＤ１：：
ＧＵＳ。
１．４　拟南芥转化与ＧＵＳ基因的表达检测
用冻融法将构建好的质粒ｐＣｋＮＣＥＤ１：：ＧＵＳ转化ＧＶ３１０１根癌农杆菌菌株。采用花序浸润法转化拟南
芥［１５］，获得Ｔ０代拟南芥种子。将种子播在含有２０ｍｇ／Ｌ潮霉素（Ｒｏｃｈ公司）的 ＭＳ平板上筛选Ｔ１代阳性转基
因拟南芥，对成熟的转基因植株进行ＧＵＳ（５溴４氯３吲哚βＤ葡萄糖苷酸酯，ＸＧ１ｕ，Ｓｉｇｍａ）组织化学染色。
染色参照Ｊｅｆｆｅｒｓｏｎｙ等［１６］的方法染色过夜，脱色后，在体式镜（ＮｉｋｏｎＤＩＧＩＴＡＬＣＡＭＥＲＡＤｘｍ１２００Ｆ，Ｊａｐａｎ）
下观察拍照。
２　结果与分析
２．１　犆犽犖犆犈犇１基因启动子序列的生物信息学分析
利用染色体步移技术，从犈犮狅ＲＶ酶切的ＤＮＡ库获得了２１４４ｂｐ的步移产物，该产物序列经ＢＬＡＳＴ比对，
６６１ ＡＣＴＡＰＲＡＴＡＣＵＬＴＵＲＡＥＳＩＮＩＣＡ（２０１３） Ｖｏｌ．２２，Ｎｏ．２
在ＧｅｎＢａｎｋ中没有发现显著同源的序列。利用ＰＬＡＣＥ软件对犆犽犖犆犈犇１的启动子区进行犮犻狊ｅｌｅｍｅｎｔ预测，发
现该序列除含有启动子基本的ＴＡＴＡｂｏｘ和ＣＡＡＴｂｏｘ外，还含有许多其他元件，包括２个ＡＢＡ诱导响应元
件，２个茉莉酸甲酯响应元件ＣＧＴＣＡｍｏｔｉｆ，１个 ＭＢＳ干旱胁迫响应元件，１个 ＨＳＥ热应激响应元件，１个水杨
酸响应元件ＴＣＡｅｌｅｍｅｎｔ，１个响应逆境胁迫的富含ＴＣ重复序列ＴＣｒｉｃｈｒｅｐｅａｔｓ，２个５′ＵＴＲＰｙｒｉｃｈｓｔｒｅｔｃｈ
元件等（图１，表１）。这些顺式作用元件可能在犆犽犖犆犈犇１基因响应ＡＢＡ、干旱胁迫、高温胁迫等各种环境刺激
时发挥着重要调控作用。
图１　犆犽犖犆犈犇１启动子区所含重要顺式作用元件
犉犻犵．１　犆犻狊犪犮狋犻狀犵狉犲犵狌犾犪狋狅狉狔犲犾犲犿犲狀狋狊狅犳犆犽犖犆犈犇１犵犲狀犲狆狉狅犿狅狋犲狉
　下划箭头ＡＴＧ为犆犽犖犆犈犇１基因的起始密码子；方框序列表示推测的重要顺式作用元件；下划线代表ＴＡＴＡ盒、ＣＡＡＴ盒。Ｔｈｅａｒｒｏｗｉｎｄｉｃａｔｅｓ
ｔｈｅｓｔａｒｔｃｏｄｏｎｏｆ犆犽犖犆犈犇１ｇｅｎｅ；Ｔｈｅｐｕｔａｔｉｖｅｃｉｓａｃｔｉｎｇｍｏｔｉｆｓａｒｅｉｎｔｈｅｅｎｃｌｏｓｅｄｂｏｘｅｓ；ＴｈｅｅｌｅｍｅｎｔＴＡＴＡａｎｄＣＡＡＴｂｏｘｅｓａｒｅｕｎｄｅｒｌｉｎｅｄ．
２．２　ＧＵＳ基因的表达检测结果
对获得１０株成熟的Ｔ１代转基因材料重复进行３次ＧＵＳ组织化学染色的结果表明，犆犽犖犆犈犇１启动子在成
熟转基因植株的叶片、根、侧枝、叶、花和角果等器官中都有表达，特别是在植株叶片的维管组织、组织分支处，
ＧＵＳ的活性最强。在根部，主要在侧根发生部位表达（图２Ａ）。在叶片中，ＧＵＳ在叶脉中表达较强 （图２Ｂ）。
在新生的分枝处，ＧＵＳ的活性也很强（图２Ｃ）。在花器官中，ＧＵＳ主要在花丝和花托中表达，但在花瓣、雌蕊、花
梗中见不到ＧＵＳ染色（图２Ｄ）。在角果上由两心皮合生的假隔膜和果柄与角果的连接处也能观察到有ＧＵＳ表
达（图２Ｆ）。从所有组织染色结果图中可以看到，犆犽犖犆犈犇１基因尤其在叶片的维管组织、组织与组织交接处表
达最强，并且在新生组织部位表达较为明显。
７６１第２２卷第２期 草业学报２０１３年
表１　犆犽犖犆犈犇１启动子区所含顺式调控元件
犜犪犫犾犲１　犆犻狊犪犮狋犻狀犵狉犲犵狌犾犪狋狅狉狔犲犾犲犿犲狀狋狊狅犳犆犽犖犆犈犇１犵犲狀犲狆狉狅犿狅狋犲狉
元件名称Ｔｈｅ
ｎａｍｅｏｆｅｌｅｍｅｎｔ
位置
Ｐｏｓｉｔｉｏｎ
核心序列
Ｃｏｒｅｓｅｑｕｅｎｃｅ（５′３′）
功能
Ｆｕｎｃｔｉｏｎ
数量
Ｎｕｍｂｅｒ
５′ＵＴＲＰｙｒｉｃｈ
ｓｔｒｅｔｃｈ
－５４５ ＴＴＴＣＴＴＣＴＣＴ 高转录水平的顺式作用元件Ｃｉｓａｃｔｉｎｇｅｌｅｍｅｎｔｉｎｖｏｌｖｅｄｉｎｔｈｅｈｉｇｈｔｒａｎｓｃｒｉｐｔｉｏｎｌｅｖｅｌｓ ２
－５４０ ＴＴＴＣＴＣＴＣＴＣＴＣＴＣ
ＡＢＲＥ －２５７ ＣＡＣＧＴＧ 脱落酸响应元件Ｃｉｓａｃｔｉｎｇｅｌｅｍｅｎｔｉｎｖｏｌｖｅｄｉｎｔｈｅａｂｓｃｉｓｉｃａｃｉｄｒｅｓｐｏｎｓｉｖｅｎｅｓｓ ２
－７７８ ＣＡＣＧＴＧ
ＣＧＴＣＡｍｏｔｉｆ －１０２４ ＣＧＴＣＡ 茉莉酸甲酯响应元件ＣｉｓａｃｔｉｎｇｅｌｅｍｅｎｔｉｎｖｏｌｖｅｄｉｎｔｈｅＭｅＪＡｒｅｓｐｏｎｓｉｖｅｎｅｓｓ ２
－２１０５ ＣＧＴＣＡ
ＭＢＳ －１６０８ ＴＡＡＣＴＧ 干旱响应元件Ｃｉｓａｃｔｉｎｇｅｌｅｍｅｎｔｉｎｖｏｌｖｅｄｉｎｔｈｅｄｅｈｙｄｒａｔｉｏｎｒｅｓｐｏｎｓｉｖｅｎｅｓｓ １
ＨＳＥ －１２８０ ＡＡＡＡＡＡＴＴＴＣ 热应激响应元件Ｃｉｓａｃｔｉｎｇｅｌｅｍｅｎｔｉｎｖｏｌｖｅｄｉｎｔｈｅｈｅａｔｓｔｒｅｓｓｒｅｓｐｏｎｓｉｖｅｎｅｓｓ １
ＴＣｒｉｃｈｒｅｐｅａｔｓ －２６８ ＡＴＴＴＴＣＴＴＣＡ 逆境相关响应元件Ｃｉｓａｃｔｉｎｇｅｌｅｍｅｎｔｉｎｖｏｌｖｅｄｉｎｔｈｅｄｅｆｅｎｓｅａｎｄｓｔｒｅｓｓｒｅｓｐｏｎｓｉｖｅｎｅｓｓ １
ＴＣＡｅｌｅｍｅｎｔ －２９８ ＣＣＡＴＣＴＴＴＴＴ 水杨酸响应元件Ｃｉｓａｃｔｉｎｇｅｌｅｍｅｎｔｉｎｖｏｌｖｅｄｉｎｓａｌｉｃｙｌｉｃａｃｉｄｒｅｓｐｏｎｓｉｖｅｎｅｓｓ １
图２　犆犽犖犆犈犇１狆：：犌犝犛转基因拟南芥犌犝犛染色结果
犉犻犵．２　犜犺犲狉犲狊狌犾狋狊狅犳犌犝犛狊狋犪犻狀犻狀犵犻狀犆犽犖犆犈犇１狆：：犌犝犛狋狉犪狀狊犵犲狀犻犮犃狉犪犫犻犱狅狆狊犻狊狆犾犪狀狋狊
　Ａ．根，箭头示侧根发生部位；Ｂ．叶片；Ｃ．分枝处；Ｄ．花器官，①花丝，②花托；Ｅ．角果，①假隔膜，②果柄；Ｆ．根茎连接处；Ｇ．侧枝。Ａ．Ｒｏｏｔ，ａｒｒｏｗ
ｓｈｏｗｓｔｈｅｂａｓｅｏｆｌａｔｅｒａｌｒｏｏｔｓ；Ｂ．Ｌｅａｆ；Ｃ．Ｂａｓｅｏｆｂｒａｎｃｈ；Ｄ．Ｆｌｏｗｅｒ，①ｆａｌｉｍｅｎｔ；②ｒｅｃｅｐｔａｃｌｅ；Ｅ．Ｓｉｌｉｑｕｅ，①ｐｓｅｕｄｏｓｅｐｔｕｍ，②ｃａｒｐｏｐｏｄｉｕｍ；Ｆ．
Ｔｈｅｐｏｉｎｔｏｆａｔｔａｃｈｍｅｎｔｏｆｒｏｏｔｔｏｓｔｅｍ；Ｇ．Ｌａｔｅｒａｌｓｔｅｍ．
３　讨论
启动子是ＤＮＡ链上一段能与ＲＮＡ聚合酶结合并能起始 ｍＲＮＡ合成的序列，决定基因转录的起始和转录
起始特异性。启动子区含有一系列特异的蛋白质结合序列，统称为顺式作用元件，不同启动子的顺式作用元件决
定了基因具有不同的表达特性［１７］。研究克隆了犆犽犖犆犈犇１启动子，该启动子除了含有基本的启动子元件外，还
含有２个与ＡＢＡ调控有关的ＡＢＲＥ元件和大量与逆境相关的顺式元件。ＡＢＡ在植物响应多种非生物胁迫中
发挥重要作用，而 ＡＢＲＥ元件是对 ＡＢＡ 起响应的主要顺式作用元件，存在于许多胁迫诱导基因的启动子
区［１８，１９］。另外，ＣＧＴＣＡｍｏｔｉｆ和ＴＣＡｅｌｅｍｅｎｔ是参与茉莉酸甲酯和水杨酸响应的顺式元件，这两种信号在植物
８６１ ＡＣＴＡＰＲＡＴＡＣＵＬＴＵＲＡＥＳＩＮＩＣＡ（２０１３） Ｖｏｌ．２２，Ｎｏ．２
抗逆机制调控中发挥着重要作用［２０］。这些元件的出现可能说明，犆犽犖犆犈犇１基因受复杂调控机制的调节，并参
与了多种逆境胁迫响应。
ｐＣｋＮＣＥＤ１ｐ：：ＧＵＳ在拟南芥的叶片、组织分支处以及花丝和花托中表达。表明犆犽犖犆犈犇１可能参与植物
的多种营养和生殖器官的发育调控，这与对ＡＢＡ的大量研究结果是相符的，研究证明，ＡＢＡ参与了植物的多种
生长和发育过程［１］。此外，ＧＵＳ在侧根发生部位的染色很强，表明犆犽犖犆犈犇１基因可能影响了植物侧根生长发
育（图２Ａ，侧根）。此前，有研究表明，外源施加ＡＢＡ对拟南芥侧根发育有抑制作用［２１］。
目前在多种植物中已经发现了ＮＣＥＤ基因的成员，并对这些基因的表达进行了研究。来自于花生（ｐｅａｎｕｔ，
犃狉犪犮犺犻狊犺狔狆狅犵犪犲犪）的犃犺犖犆犈犇１基因，同属 ＮＣＥＤ１类，主要在叶片和胚轴部位表达［２２］。拟南芥中的犃狋
犖犆犈犇３基因主要在根部（根尖、中柱鞘和侧根发生部位），发育中的花药以及发育中的种子中表达［２３］。这些表达
上的差异说明，犖犆犈犇１基因在不同的物种中在表达和功能上可能存在差异。
研究分离了柠条锦鸡儿的启动子序列，并且对启动子进行了顺式元件的预测和ＧＵＳ表达分析，这些研究证
明犆犽犖犆犈犇１基因参与了ＡＢＡ相关的抗逆性和植物发育方面的调控，在ＡＢＡ合成调控中发挥重要作用，为进
一步鉴定逆境响应元件，深入研究犆犽犖犆犈犇１基因功能奠定基础。
参考文献：
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［３］　ＴａｙｌｏｒＩＢ，ＳｏｎｎｅｖｅｌｄＴ，ＢｕｇｇＴＤＨ，犲狋犪犾．Ｒｅｇｕｌａｔｉｏｎａｎｄｍａｎｉｐｕｌａｔｉｏｎｏｆｔｈｅｂｉｏｓｙｎｔｈｅｓｉｓｏｆａｂｓｃｉｓｉｃａｃｉｄ，ｉｎｃｌｕｄｉｎｇｔｈｅ
ｓｕｐｐｌｙｏｆｘａｎｔｈｏｐｈｙｌｓｐｒｅｃｕｒｓｏｒｓ［Ｊ］．ＪｏｕｒｎａｌｏｆＰｌａｎｔＧｒｏｗｔｈＲｅｇｕｌａｔｉｏｎ，２００５，２４（４）：２５３２７３．
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９６１第２２卷第２期 草业学报２０１３年
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犆犾狅狀犻狀犵犪狀犱犲狓狆狉犲狊狊犻狅狀犪狀犪犾狔狊犻狊狅犳狋犺犲狆狉狅犿狅狋犲狉狅犳犆犪狉犪犵犪狀犪犽狅狉狊犺犻狀狊犽犻犵犲狀犲
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２．ＩｎｓｔｉｔｕｔｅｏｆＡｎｉｍａｌＳｃｉｅｎｃｅ，ＣＡＡＳ，Ｂｅｉｊｉｎｇ１００１９３，Ｃｈｉｎａ）
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ｍｏｔｅｒｓｅｑｕｅｎｃｅｉｎｃｌｕｄｅｄｔｗｏＡＢＡｒｅｓｐｏｎｓｉｖｅｅｌｅｍｅｎｔｓ（ＡＢＲＥ）ａｎｄｍａｎｙｏｔｈｅｒｓｔｒｅｓｓｒｅｓｐｏｎｓｅｅｌｅｍｅｎｔｓ．Ｔｈｅ
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ｒｏｏｔ，ｓｔｅｍ，ｆｌｏｗｅｒａｎｄｓｉｌｉｑｕｅ，ａｎｄｗａｓｅｓｐｅｃｉａｌｙｈｉｇｈｅｒｉｎｌｅａｖｅｓ．Ｔｈｅｓｅｒｅｓｕｌｔｓｉｄｅｎｔｉｆｉｅｄｔｈｅｌｏｃａｌｉｚａｔｉｏｎａｎｄ
ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎｏｆｔｈｅ犆犽犖犆犈犇１ｇｅｎｅ犻狀狏犻狏狅，ｗｈｉｃｈｓｕｇｇｅｓｔｅｄｔｈａｔ犆犽犖犆犈犇１ｇｅｎｅｐｌａｙｓａｎｉｍｐｏｒｔａｎｔｒｏｌｅｉｎｂｉｏ
ｓｙｎｔｈｅｓｉｓｒｅｇｕｌａｔｉｏｎｏｆＡＢＡ．Ｔｈｅｓｔｕｄｙｌａｙａｆｏｕｎｄａｔｉｏｎｆｏｒｆｕｒｔｈｅｒａｎａｌｙｓｉｓｏｆｔｈｅｇｅｎｅｆｕｎｃｔｉｏｎ．
犓犲狔狑狅狉犱狊：犆犪狉犪犵犪狀犪犽狅狉狊犺犻狀狊犽犻犻；犆犽犖犆犈犇１ｐｒｏｍｏｔｅｒ；ＧＵＳｈｉｓｔｏｃｈｅｍｉｃａｌｓｔａｉｎｉｎｇ；ＡＢＡｒｅｓｐｏｎｓｉｖｅｅｌｅｍｅｎｔ
０７１ ＡＣＴＡＰＲＡＴＡＣＵＬＴＵＲＡＥＳＩＮＩＣＡ（２０１３） Ｖｏｌ．２２，Ｎｏ．２