全 文 ：收稿日期:2011 － 05 － 03
作者简介:强伟，女(1985 －) ，硕士研究生，主要从事天然药物化学
研究，E － mail:qiangwei0407@ 126． com
* 通讯作者 E － mail:yrsuo@ nwipb． ac． cn
考马斯亮蓝 G － 250 染色法测定柠条锦鸡儿
种子中可溶性蛋白含量
强 伟1，2，王洪伦1，周昌范1，索有瑞1*
(1 中国科学院西北高原生物研究所，西宁 810001;2 中国科学院研究生院，北京 100049)
摘要:目的:建立快速、灵敏的蛋白质含量测定方法，对柠条锦鸡儿种子中可溶性蛋白质含量进行测定;方法:运用超声与
研磨两种方法提取柠条锦鸡儿种子中的可溶性蛋白，采用考马斯亮蓝 G －250 染色法对其进行测定;结果:超声提取与研磨提
取得到可溶性蛋白含量分别为 6． 91%、6． 87%，RSD分别为 0． 72%，0． 67%;结论:考马斯亮蓝 G －250 染色法简单、迅速，且两
种方法提取的蛋白质含量差别不大。
关键词:柠条锦鸡儿种子;超声;研磨;考马斯亮蓝 G －250;蛋白质含量
中图分类号:Q5 文献标识码:A 文章编号:1006 － 8376(2011)03 － 0074 － 03
柠条锦鸡儿(Caragana korshinskii Kom．)别名
大柠条、白柠条、毛条、牛筋条、明条、老虎刺、马集
柴，蒙名查干 －哈日格那，广泛分布在我国的甘肃、
宁夏、内蒙古、山西、陕西、蒙古等地区。属于亚洲中
部荒漠的阿拉善地方种，为荒漠沙生旱生的较高灌
木［1］。长期以来国内外人士对柠条锦鸡儿进行了
大量的研究，主要集中在分类学、植物区系分布、植
物资源的开发利用(饲用)、造林技术、水土保持效
益、抗旱性、水分生理等方面［2 ～ 5］，尚未见柠条锦鸡
儿种子成分方面的报道。在对柠条锦鸡儿种子籽油
的提取、成分鉴定及矿质元素测定的基础上，本文对
柠条锦鸡儿中可溶性蛋白质含量进行了测定。通过
对蛋白质含量分析，为柠条锦鸡儿种子资源评价提
供参考依据。
近年来，基因工程学、分子生物学和现代分离技
术快速发展，蛋白质也作为一项质量和资源评价的
指标，但是部分植物中蛋白质含量很低且纯化相当
困难，不易获得，而其蛋白质含量必需明确，故探索
测定蛋白质含量的方法有重要的意义。目前测定蛋
白质含量的常用方法主要有凯氏定氮法、双缩脲法、
Folin －酚试剂法(Lowry 法)、紫外吸收法、考马斯亮
蓝染色法(Bradford 染料结合法)和胶体金测定法
等［6］。凯氏定氮法是测定粗蛋白经典的标准方法，
但由于样品中非蛋白质含氮化合物的干扰，使得测
定结果不能完全反映被测样品中真实蛋白质的含
量;双缩脲法常用于需要快速但并不需要十分精确
的测定;Folin －酚比色法是灵敏度较高的方法之一，
但是，由于酚类及柠檬酸的干扰，导致测定结果偏
高;紫外吸收法在测定酪氨酸和色氨酸含量差异较
大的蛋白质时，有一定的误差［7］。考马斯亮蓝比色
法具有快速、稳定、灵敏度高、测量结果准确等特
点［8］。本文采用考马斯亮蓝染色法测定柠条锦鸡
儿种子中蛋白质含量，并对该方法的线性关系、回收
率、精密度、稳定性等进行了考察，旨在为建立一种
快速、灵敏的测定柠条锦鸡儿种子中可溶性蛋白质
含量的方法。
1 仪器与材料
1． 1 实验仪器
UV721 可见分光光度计(上海菁华科技有限公
司) ;KQ320DE超声波清洗器(昆山市超声仪器有限
公司) ;低速离心机(常州国华电器有限公司) ;万分
之一电子天平(ACCULAB)
1． 2 实验试剂
小牛血清蛋白，进口分装;考马斯亮蓝 G － 250
进口分装;95%乙醇，磷酸(市售分析纯) ，蒸馏水。
2 标准溶液及供试品的制备［9］
2． 1 蛋白质标准溶液的制备
准确称取牛血清白蛋白 100． 00 mg 用少量蒸馏
水溶解，定容至 1000 mL，此即为 100 mg·L －1蛋白
质标准储备液，冰箱中保存。
2． 2 考马斯亮蓝 G －250 溶液的制备
精密称取考马斯亮蓝 G －250 100． 00 mg，加入
95%乙醇 50 mL (蓝色) ，再加入 85% H3PO4 100
氨基酸和生物资源 2011，33(3) :74 ～ 76
Amino Acids ＆ Biotic Resources
DOI:10.14188/j.ajsh.2011.03.015
mL (血红色)最后用蒸馏水定容至 1000 mL (褐
色)。常温下放置一个月后不能再使用。
2． 3 供试品溶液的制备
2． 3． 1 超声提取
称取粉碎过 60 目筛的柠条锦鸡儿干燥种子 1
g，加 20 mL 蒸馏水，在超声微波清洗器中超声 0． 5
h，将所得匀浆置于离心机中 4000 r·min －1离心 10
min。所得上清置于 50 mL容量瓶中，离心管中的残
渣再加 5 mL 蒸馏水 4000 r·min －1离心 10 min。合
并上清，加蒸馏水定容至 50 mL。
2． 3． 2 研磨提取
称取粉碎过 60 目筛的柠条锦鸡儿干燥种子 1
g，加 20 mL 蒸馏水，研磨 0． 5 h，将所得匀浆按标题
2． 3． 1 方法定容至 50 mL。
3 实验方法
3． 1 标准曲线绘制
在试管中分别精确移取牛血清白蛋白标准溶液
0． 0、0． 2 、0． 4 、0． 6 、0． 8 、1． 0 mL，加蒸馏水至 1
mL，配制成浓度为 0 、20 、40 、60 、80 、100 mg ·L －1
的蛋白质标准溶液。然后在各支试管中分别加入 5
mL 考马斯亮蓝 G －250 溶液，摇匀，在室温下反应 5
min。在 595 nm 波长处测定吸光度。以牛血清白蛋
白标准溶液浓度为横坐标，以吸光度为纵坐标，绘制
标准曲线。回归方程为 Y = 0． 0057X + 0． 068 (r =
0． 9914)。具体见表 1。
表 1 蛋白质标准曲线各试剂加入量及吸光度值
操作项目
管 号
1 2 3 4 5 6
标准蛋白质溶液 /mL 0 0． 2 0． 4 0． 6 0． 8 1． 0
蒸馏水 /mL 1． 0 0． 8 0． 6 0． 4 0． 2 0
G － 250 /mL 5 5 5 5 5 5
蛋白质含量 /mg ·L －1 0 20 40 60 80 100
吸光度值 0 0． 165 0． 290 0． 435 0． 540 0． 605
3． 2 精密度试验
精密移取牛血清白蛋白标准溶液 6 份，按照标
题 3． 1 方法测定蛋白质的含量，结果表明蛋白质吸
光度的 RSD为 0． 72 %。
3． 3 重现性试验
精密称取样品 6 份，按标题 2． 3 和 3． 1 项操作，
计算蛋白质含量的 RSD 值。结果表明蛋白质的
RSD值为 1． 82%，表明其重复性好。
3． 4 加样回收率试验
取 1 mL标题 2． 3 制备的溶液，分别准确加入牛
血清白蛋白标准溶液 0． 2 mL 、0． 3 mL 和 0． 4 mL，
按标题 3． 1 操作，测定蛋白质含量，并计算回收率。
平均回收率为 99． 4 %，RSD为 1． 65 %。
3． 5 显色稳定性试验
精密吸取标题 2． 3 制备的样品 0． 05 mL，按照
标题 3． 1 操作，每隔 5 min 测定一次吸光值。结果表
明，在显色 1 h内吸光度无变化，RSD为 0． 86 %。
3． 6 样品含量测定
按标题 3． 1 的方法测定不同提取方法中柠条锦
鸡儿种子中可溶性蛋白质含量，每种样品取 3 份，3
次测定的平均值作为该种方法提取的可溶性蛋白质
含量的实测值，结果见表 2。
表 2 不同提取方法柠条锦鸡儿种子中可溶性蛋白质质量
浓度(n = 3)
提取方法 蛋白质质量浓度 /mg·L －1 RSD
超声提取 6． 91 0． 72%
研磨提取 6． 87 0． 67%
4 讨论
考马斯亮蓝比色法是由 Bradford 等人建立的一
种测定微量蛋白质的方法，考马斯亮蓝所含疏水基
团在酸性条件下与蛋白质的疏水微区具有亲和力，
通过疏水作用与蛋白质相结合，形成的蓝色蛋白质
－染料复合物，在 595 nm 处有最大吸光度，复合物
1 h 内保持稳定。在一定的蛋白质浓度范围内，蛋
白质 －染料复合物在 595nm 处的吸光度与蛋白质
含量成正比(符合郎贝比尔定律) ，故可以用于蛋白
质含量测定［8］。采用考马斯亮蓝比色法测定柠条
锦鸡儿种子中的蛋白质含量时，用小牛血清白蛋白
作为对照品，其浓度在一定范围内与吸光度有良好
的线性关系。该法具有精密度高、稳定性和重现性
好，且对设备要求较低等优点。本文仅对柠条锦鸡
儿种子中可溶性蛋白含量进行了测定，其中的结合
蛋白以及蛋白质的种类和单体含量有待进一步深入
研究。
·57·强 伟等: 考马斯亮蓝 G －250 染色法测定柠条锦鸡儿种子中可溶性蛋白含量
参考文献
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述［J］．西北植物学报，1999，19(5)107 ～ 133．
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林果研究，2009，24(3) :280 ～ 283．
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1990，10(4) :93 － 99．
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tion of microgram of protein utilizing the principle of pro-
tein － dye bingding［J］． Analytical Biochemistry，1976，
72:248 ～ 254．
［9］ 赵英永，戴云，崔秀明，等．考马斯亮蓝 G － 250 染色法
测定草乌中可溶性蛋白质含量［J］． 云南民族大学学
报(自然科学版) ，2006，，15(3) :235 ～ 237．
Determination of Protein Contents from Caragana korshinskii Kom．
Seeds Using Coomassie Brilliant Blue G － 250 Dyeing
QIANG Wei1，2，Wang Hong － lun1，Zhou Chang － fan1，SUO You － rui1*
(1 Northwest Institute of Plateau Biology，Chinese Academy of Sciences，Xining 810001;
2 Graduate School of Chinese Academy of Sciences，Beijing 100049，China)
Abstract:The rapid and sensitive methods of determining protein contents from Caragana korshinskii Kom．
seeds have been established． Caragana korshinskii Kom． seed dissolubility protein was extracted by ultrasonic and
rubbing，and determined by Coomassie Brilliant Blue G － 250 dyeing． Protein contents of ultrasonic and rubbing
were 6． 91%，6． 87% and the RSD was 0． 72%，0． 67%，respectively． The difference of protein contents extracted
by two methods was not significant and the Coomassie Brilliant Blue G －250 dyeing was of simplicity and rapidity．
Key words:Caragana korshinskii Kom． seeds;ultrasonic;rubbing;Coomassie Brilliant Blue G － 250 dye-
ing;
檾檾檾檾檾檾檾檾檾檾檾檾檾檾檾檾檾檾檾檾檾檾檾檾檾檾檾檾檾檾檾檾檾檾檾檾檾檾檾檾檾檾檾檾檾檾
protein contents
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(1． Institute of Agriculture Quality Standards＆Testing Technique，Yunnan Academy
of Agricultural Science，Kunming 650223;2． Institute of Medicinal Plants Research，Yunnan Academy
of Agricultural Sciences，Kunming 650223，China )
Abstract:The determination of amino acids in Laggera pterodonta(DC．)Benth． leaves by the L － 8800 amino
acid mobile analyzer was studied for the first time． And the content of free amino acid was compared to the content
of hydrolyzed amino acid． The results showed that there were 18 kinds of amino acids in the leaves． The total con-
tent of hydrolyzed amino acid and free amino acid were 18． 68% and 2． 75% respectively． The content of GABA
was up to 0． 1% ．
Key words:Laggera pterodonta(DC．)Benth．;amino acids;L － 8800 amino acid mobile analyzer;analysis of
chemical components
·67· 氨基酸和生物资源