全 文 ：书秋水仙素诱导获得自交结实的
海滨雀稗体细胞突变体
钟小仙，刘智微，常盼盼，吴娟子，张建丽
（江苏省农业科学院畜牧所，江苏 南京２１００１４）
摘要：以海滨雀稗Ａｄａｌａｙｄ幼穗离体诱导获得的胚性愈伤组织为材料，在愈伤组织继代培养基中添加５００～２０００
ｍｇ／Ｌ秋水仙素，诱变处理２４，４８和７２ｈ后，离体筛选得到浅黄色颗粒状愈伤组织在分化培养基上再生出植株，再
生植株结实性调查结果显示，获得的１９６０株不同秋水仙素处理的再生植株和６８８株原始对照组织培养再生植株
中，经１０００ｍｇ／Ｌ秋水仙素诱变处理２４ｈ获得的２个单株上分别收获了４和３粒种子，５００ｍｇ／Ｌ秋水仙素诱变处
理２４ｈ获得的１个单株上收获到１粒种子；３个单株上收获的 Ｍ１ 种子各取１粒播种于盆体，均可发芽成坪，分别
记为ＳＰ２００８１、ＳＰ２００８２和ＳＰ２００８３，Ｍ１ 种子苗上分别收获到了自交结实的 Ｍ２ 代种子２５３，３８和４５粒，种子千
粒重分别为０．４７１，０．４４０和０．４９６ｇ。染色体计数结果表明，ＳＰ２００８１和ＳＰ２００８２染色体数２狀＝２０，与原始对照
Ａｄａｌａｙｄ染色体数目相同，为二倍体；ＳＰ２００８３的染色体数为２０和４０条的分别占８６．７％和１３．３％，是二倍体和四
倍体的嵌合体。ＲＡＰＤ检测结果表明，ＳＰ２００８１、ＳＰ２００８２和ＳＰ２００８３在分子水平上均与对照 Ａｄａｌａｙｄ存在差
异，为自交结实型海滨雀稗体细胞突变体。
关键词：海滨雀稗；二倍体；自交结实；秋水仙素；体细胞突变体
中图分类号：Ｓ５４３；Ｑ９４３ 文献标识码：Ａ 文章编号：１００４５７５９（２０１３）０６０２０５０８
犇犗犐：１０．１１６８６／ｃｙｘｂ２０１３０６２６
海滨雀稗（犘犪狊狆犪犾狌犿狏犪犵犻狀犪狋狌犿，ｓｅａｓｈｏｒｅｐａｓｐａｌｕｍ）为禾本科（Ｇｒａｍｉｎｅａ）黍族（Ｐａｎｉｃｅａ）雀稗属（犘犪狊狆犪犾
狌犿）的多年生暖季型草本植物，是潮间带草滩植被的主要组分，以能适应各种恶劣的环境而闻名，耐１００％海水灌
溉，适于ｐＨ３．６～１０．２的环境中生长，耐渍、抗旱、耐践踏、耐低氧和弱光照，肥料利用效率高，能利用废水灌溉，
以及通过重金属和有机化学物质高效转化或积累进行生物修复，海滨雀稗叶色翠绿，景观优于狗牙根（犆狔狀狅犱狅狀
ｓｐｐ．）和假俭草（犈狉犲犿狅犮犺犾狅犪狅狆犺犻狌狉狅犻犱犲狊），已成为２１世纪最具发展潜力的坪饲兼用型生态草［１４］。但全世界目
前只有一个商品化种子直播型二倍体海滨雀稗杂交品种“ＳｅａＳｐｒａｙ”，以来自以色列的海滨雀稗生态型Ｑ３６３１３
为母本、未知亲本来源的Ｈｙｂ７为父本间植生产种子，由美国纯种子测试机构（ＰｕｒｅＳｅｅｄＴｅｓｔｉｎｇ）与乔治亚大学
研究基金会（ＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙｏｆＧｅｏｒｇｉａＲｅｓｅａｒｃｈＦｏｕｎｄａｔｉｏｎ）合作培育而成［５］，２００５年引入中国试种，主要以华南地
区推广为主，尚未在其他地区大面积种植，推测除与其生态适应性和抗寒性有关外，可能还与种子价格高和供应
量不足有关［６］。国内尚无海滨雀稗育成品种。
二倍体海滨雀稗Ａｄａｌａｙｄ起源于澳大利亚，２０世纪８０年代引入美国，是１９８８年美国洛杉矶奥林匹克运动
会建在盐湖床和沼泽地的高尔夫球场用草种［７］，２０世纪末从美国引进中国，因其耐盐性和抗寒性强、景观效果
好，目前在长江中下游及其以南地区备受关注，并已在浙江省杭州湾跨海大桥周围新围垦海涂地低成本草地绿化
中取得明显成效［８９］。但由于Ａｄａｌａｙｄ与其他二倍体海滨雀稗等一样自交不亲和，同时，因染色体组属ＤＤ，不同
于海滨雀稗属其他种，异交困难，只能无性繁殖，显著影响其大面积推广应用［１０１１］。
随着科学技术的进步，人们逐渐掌握了创造突变体的各种手段，利用化学药剂诱发植物产生遗传变异，进而
获得自然界没有的或一般常规方法难以获得的新表现型、新突变、新基因，丰富了遗传变异范畴［１２］。本研究以海
滨雀稗幼穗离体培养获得的胚性愈伤组织为材料，通过不同浓度和不同处理时间秋水仙素诱变和进一步分化培
第２２卷 第６期
Ｖｏｌ．２２，Ｎｏ．６
草 业 学 报
ＡＣＴＡＰＲＡＴＡＣＵＬＴＵＲＡＥＳＩＮＩＣＡ
２０５－２１２
２０１３年１２月
收稿日期：２０１３０５２７；改回日期：２０１３０７０１
基金项目：国家牧草产业技术体系盐城综合试验站（ＣＡＲＳ３５３１）和江苏省科技支撑计划（ＢＥ２０１０３０８）资助。
作者简介：钟小仙（１９６８），女，浙江余姚人，研究员，博士。Ｅｍａｉｌ：ｘｉａｏｘｉａｎ＠ｊａａｓ．ａｃ．ｃｎ
养，试图获得自交结实型海滨雀稗体细胞突变体，为率先育成具有自主知识产权的海滨雀稗新品种奠定基础。
１ 材料与方法
１．１ 试验材料
海滨雀稗品种“Ａｄａｌａｙｄ”，２０世纪末从美国夏威夷引进我国，２００６年江苏省农业科学院从杭州白云草业研究
所有限公司引进扩繁。２００８年５月，以幼穗诱导产生的颗粒状愈伤组织为试验材料。
１．２ 试验方法
１．２．１ 培养基 以ＭＳ无机盐、Ｂ５有机成分，３０ｇ／Ｌ蔗糖为基本培养基。愈伤组织继代培养基为基本培养基添
加２．０ｍｇ／Ｌ２，４二氯苯氧乙酸，０．０５ｍｇ／Ｌ６苄基氨基嘌呤，８ｇ／Ｌ琼脂。愈伤组织分化培养基为基本培养基
添加２．０ｍｇ／Ｌ６苄基氨基嘌呤，８ｇ／Ｌ琼脂。培养基在高压灭菌前用氢氧化钠或盐酸调ｐＨ值至５．８～６．０。
１．２．２ 秋水仙素诱导获得体细胞再生植株 ２００８年４月２９日，选择颗粒状胚性愈伤组织在愈伤组织继代培养
基上进行２５ｄ的增殖培养，分别挑选生长良好的淡黄色颗粒状愈伤组织各５００块，接种到分别添加０，２５０，５００，
１０００，１５００和２０００ｍｇ／Ｌ秋水仙素的愈伤组织继代培养基中，处理２４，４８，７２ｈ后转入愈伤组织分化培养基，在
光照条件下培养４５ｄ，绿苗和绿芽再转到添加２．０ｍｇ／Ｌ６苄基氨基嘌呤的分化培养基上继续生长４０ｄ，具有完
整３片叶的再生植株移栽至盆钵。培养室温度为２６～２８℃，光照度为２０００ｌｘ，每天光照１６ｈ。
１．２．３ 再生植株自交结实性调查 经过一个冬季春化作用的体细胞再生植株，２００９年１０月底植株抽穗，检查
结实性，成熟后收获 Ｍ１ 种子；２０１０年５月１５日，将 Ｍ１ 种子播种于盆钵，出苗后植株成坪；２０１１年植株抽穗期，
检查自交结实性，收获成熟的 Ｍ２ 种子，测定千粒重、种子长度和宽度。
１．２．４ 细胞学鉴定 分别取综合性状优良的体细胞突变体 Ｍ１ 种子苗和对照Ａｄａｌａｙｄ成坪后的茎节２０个，将
其放入１／２Ｈｏａｇｌａｎｄ营养液中培养生根，待根长至１～２ｃｍ时，于上午８：４５－９：１５取根尖，经自来水冲洗后加
入到装有预处理液８羟基喹啉的离心管中，置于４℃冰箱中预处理２～４ｈ，用自来水冲洗根尖３０ｍｉｎ，接着用卡
诺氏固定液于冰箱中固定２４ｈ，固定后的材料用蒸馏水冲洗后放入装有预热的１ｍｏｌ／Ｌ盐酸的离心管中，于
６０℃恒温水浴中解离４～６ｍｉｎ，解离后的材料用蒸馏水冲洗３０ｍｉｎ后，置于卡宝品红中染色３０ｍｉｎ，采用常规
方法压片［１４］，之后镜检，分别选择３０个染色体分散良好，形态清晰的中期分裂相细胞，进行观察拍照和染色体数
目统计。
对染色体分散好，着丝粒清晰者，采用李懋学等［１５１６］提出的标准进行核型分析；根据Ｌｅｖａｎ等［１７］的命名法
则，来确定染色体的着丝点位置；染色体核型分类按照Ｓｔｅｈｂｉｎｓ［１８］提出的根据最长与最短染色体的比值和臂比
值，来区分核型对称和不对称程度；染色体相对长度系数Ｉ（ｉｎｄｅｘｏｆｒｅｌａｔｉｖｅｌｅｎｇｔｈ，ＩＲＬ）参考Ｋｕｏ［１９］提出的方法
计算；核型不对称系数（ａｓｙｍｍｅｔｒｉｃａｌｋａｒｙｏｔｙｐｅｃｏｅｆｆｉｃｉｅｎ，ＡＳＫ）参考 Ａｒａｎｏ［２０］的方法计算。相关公式为：臂
比＝长臂／短臂；相对长度＝［单个染色体绝对长度／单套染色体组总长度］×１００％；相对长度系数＝染色体长度／
全组染色体平均长度；核型不对称系数＝［长臂总长／全组染色体总长］×１００％。
１．２．５ ＲＡＰＤ分子鉴定 取海滨雀稗体细胞突变体、原始对照 （Ａｄａｌａｙｄ）的幼嫩叶片，采用ＣＴＡＢ法提取各样
品的总ＤＮＡ。选取ＲＡＰＤ随机引物２４条委托上海英俊生物技术有限公司合成。扩增反应在美国 ＡＢ公司
ＰＣＲ热循环仪上进行，反应体积２５μＬ，内含１×Ｂｕｆｆｅｒ，２ｍｍｏｌ／ＬＭｇＣｌ２，２μｍｏｌ／ＬｄＮＴＰｓ，ＴａｑＤＮＡ聚合酶
０．６Ｕ，引物０．４μｍｏｌ／Ｌ，总ＤＮＡ模板２５ｎｇ。ＰＣＲ反应程序为：９５℃预变性３ｍｉｎ；９５℃变性３５ｓ，３８℃退火３５
ｓ，７２℃延伸２ｍｉｎ，共３５个循环，最后在７２℃ 延伸８ｍｉｎ，４℃ 保存。扩增产物用１．２％的琼脂糖凝胶电泳分离，
经ＪＳ７８０全自动凝胶成像分析系统观察并记录结果。对表现多态性的引物，进行３次重复实验，选择重复性好
的随机引物进行分析。
２ 结果与分析
２．１ 秋水仙素诱导获得体细胞再生植株
选浅黄色、干燥、紧密的颗粒状愈伤组织（图１），接种到分别添加０，２５０，５００，１０００，１５００和２０００ｍｇ／Ｌ秋水
仙素的愈伤组织继代培养基中，处理２４，３６或７２ｈ后转入愈伤组织分化培养基，结果表明 （表１）：秋水仙素
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浓度为２５０ｍｇ／Ｌ的不同处理，与对照相比绿芽愈伤数
图１ 外表呈干燥、紧密、颗粒状的愈伤组织
犉犻犵．１ 犇狉狔，犮狅犿狆犪犮狋犪狀犱狆犲犾犲狋犮犪犾犻
和绿苗分化率差异不大；相同秋水仙素处理浓度，绿芽
愈伤数和绿苗分化率随着处理时间的延长而减少；相
同秋水仙素处理时间，绿芽愈伤组织数和绿苗分化率
也随秋水仙素处理浓度的提高而减少。秋水仙素处理
浓度为１０００ｍｇ／Ｌ、处理时间为２４，４８和７２ｈ，绿芽愈
伤比率分别为４５％，４２％和３９％，比对照分别降低
３２．８４％，３５．３８％和３８．１０％，绿苗分化率分别比对照
降低２９．５５％，２０．４３％和２９．３８％。共获得不同秋水
仙素处理的再生植株１９６０株和对照植株６８８株。
表１ 秋水仙素浓度和处理时间对愈伤组织分化的影响
犜犪犫犾犲１ 犈犳犳犲犮狋狅犳犮狅犾犮犺犻犮犻狀犲犮狅狀犮犲狀狋狉犪狋犻狅狀犪狀犱犱犻狊狆狅狊犲犱狋犻犿犲狅狀犮犪犾狌狊犱犻犳犳犲狉犲狀狋犻犪狋犻狅狀
浓度
Ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎ
（ｍｇ／Ｌ）
２４ｈ
绿芽愈伤数
Ｎｏ．ｏｆｃａｌｕｓ
ｗｉｔｈｓｈｏｏｔ
绿苗分化率
Ｒａｔｅｏｆｓｈｏｏｔ
ｒｅｇｅｎｅｒａｔｉｏｎ（％）
４８ｈ
绿芽愈伤数
Ｎｏ．ｏｆｃａｌｕｓ
ｗｉｔｈｓｈｏｏｔ
绿苗分化率
Ｒａｔｅｏｆｓｈｏｏｔ
ｒｅｇｅｎｅｒａｔｉｏｎ（％）
７２ｈ
绿芽愈伤数
Ｎｏ．ｏｆｃａｌｕｓ
ｗｉｔｈｓｈｏｏｔ
绿苗分化率
Ｒａｔｅｏｆｓｈｏｏｔ
ｒｅｇｅｎｅｒａｔｉｏｎ（％）
０ ３３５ ７３．６０ａｂＡ ３２５ ６８．２７ｃＡＢ ３１５ ６９．４３ａｂｃＡＢ
２５０ ３４０ ７３．８９ａＡ ３２０ ６８．８９ａｂｃＡＢ ３１０ ６８．５２ＢＣＡＢ
５００ ２４５ ６４．６６ｃｄＢＣ ２２０ ６５．５３ｃｄＢＣ ２１０ ６０．８３ｄＣ
１０００ ２２５ ５１．８５ｅｆＤ ２１５ ５４．３２ｅＤ ２００ ４９．０３ｆｇＤＥ
１５００ ２２０ ４５．００ｇｈＥＦ ２１０ ４３．０１ｈＥＦ １９５ ４０．００ｈＦ
２０００ ２１０ ４２．３０ｈＥＦ ２００ ４１．３３ｈＥＦ １９０ ３９．６０ｈＦ
注：不同小写字母表示差异显著（犘＜０．０５）；不同大写字母表示差异极显著（犘＜０．０１）。
Ｎｏｔｅ：Ｄｉｆｆｅｒｅｎｔｓｍａｌａｎｄｃａｐｉｔａｌｌｅｔｔｅｒｍｅａｎｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔｄｉｆｆｅｒｅｎｃｅｓａｔ犘＜０．０５ａｎｄ犘＜０．０１ｒｅｓｐｅｃｔｉｖｅｌｙ．
２．２ 体细胞再生植株自交结实性观察
不同秋水仙素诱导处理和对照的再生植株，２００８年８月中下旬移栽后，当年不能抽穗，２００９年１０月上中旬
开始陆续抽穗，１１月中下旬检查结实性，６８８个对照单株上未发现有任何种子；秋水仙素诱导处理的再生植株上
共获得种子８粒，其中，秋水仙素浓度１０００ｍｇ／Ｌ、诱变处理２４ｈ共获得１１７株再生植株，其中２个单株上分别
获得４和３粒种子（图２Ａ），自交结实株诱导率为１．７１％，秋水仙素浓度５００ｍｇ／Ｌ、诱变处理２４ｈ共获得１５８株
再生植株，仅从１个单株上获得１粒种子，自交结实株诱导率为０．６３％；其余不同浓度的秋水仙素处理获得的再
生植株上均未收到任何种子。２０１０年５月１５日，３个自交结实单株各取１粒种子播种于小周转箱中，１０ｄ后发
芽，分别记为体细胞突变体ＳＰ２００８１、ＳＰ２００８２和ＳＰ２００８３（图２Ｂ、图２Ｃ、图２Ｄ）。在自交结实体细胞突变体
ＳＰ２００８１、ＳＰ２００８２和ＳＰ２００８３田间植株上，２０１１年于６月上旬和１１月上旬共收获了２５３，３５和４４粒种子，种
子千粒重分别为０．４７１，０．４４０和０．４９６ｇ，种子长度平均值分别为２．３６，２．４４和２．４８ｍｍ，种子宽度平均值分别
为１．０６，１．０９和１．０８ｍｍ（图２Ｅ），６月上旬收获ＳＰ２００８１种子时发现，部分枝条上的自交结实率达８０％以上。
２．３ 体细胞突变体再生植株根尖染色体分析
海滨雀稗Ａｄａｌａｙｄ染色体数为２狀＝２０（图３Ａ），染色体平均长度为３．１８μｍ，绝对长度和相对长度的变化范
围分别为２．１５～４．７５μｍ和６．８０％～１４．８６％，平均臂比值为１．６０。最长染色体与最短染色体之比为２．１９，臂
比值＞２．０的染色体所占比例为２５％，核型不对称系数为６０．３２％，属２Ｂ核型，１０对染色体中有５对为中部着丝
粒染色体，５对为近中着丝粒染色体，第５对染色体上带随体。染色体相对长度组成为：５ｍ＋５ｓｍ＋１ｓｔ（图３Ｂ，图
７０２第２２卷第６期 草业学报２０１３年
３Ｃ）。
选择３０个染色体分散良好的细胞观察计数，体细胞突变体ＳＰ２００８１、ＳＰ２００８２分别有２７和２８个细胞染色
体数目为２０条（图４Ａ，图４Ｂ），分别占统计细胞总数的９０．０％和９３．３％，有２～３个细胞染色体数为１９条，可能
与压片时个别染色体重叠难以计数有关。在统计的３０个染色体分散良好、形态清晰的中期分裂相细胞中，
ＳＰ２００８３中有２６个细胞的染色体数目为２０条，有４个细胞染色体数为４０条，是一个二倍体和四倍体的嵌合体
（图４Ｃ，图４Ｄ）。
图２ 秋水仙素诱导获得的自交结实海滨雀稗体细胞突变体种子和植株
犉犻犵．２ 犛犲犲犱狊犪狀犱狆犾犪狀狋狊狅犳狊犲犾犳犳犲狉狋犻犾犻狕犲犱狊狅犿犪狋犻犮犿狌狋犪狀狋狊犻狀犱狌犮犲犱犫狔犮狅犾犮犺犻犮犻狀犲犳狉狅犿狆犪狊狆犪犾狌犿狏犪犵犻狀狀犪狋狌犿
Ａ．：Ｍ１代种子 Ｍ１ｓｅｅｄｓ；Ｂ：ＳＰ２００８１植株ＰｌａｎｔｏｆＳＰ２００８１；Ｃ：ＳＰ２００８２植株ＰｌａｎｔｏｆＳＰ２００８２；Ｄ：ＳＰ２００８３
植株ＰｌａｎｔｏｆＳＰ２００８３；Ｅ：Ｍ２代种子 Ｍ２ｓｅｅｄｓ．
图３ 海滨雀稗 犃犱犪犾犪狔犱染色体中期分裂相（犃）、核型图（犅）和核型模式图（犆）
犉犻犵．３ 犕犻狋狅狋犻犮犿犲狋犪狆犺犪狊犲犮犺狉狅犿狅狊狅犿犲（犃），犻犱犲狅犵狉犪犿（犅）犪狀犱犽犪狉狔狅犵狉犪犿（犆）狅犳犃犱犪犾犪狔犱（犫犪狉＝５μ犿）
２．４ ＲＡＰＤ分子鉴定
用２４个合成引物对自交结实型海滨雀稗体细胞突变体和对照Ａｄａｌａｙｄ植株进行ＲＡＰＤ－ＰＣＲ扩增，筛选
出３个多态性和重复性好的随机引物Ｓ１、Ｓ２和Ｓ３。Ｓ１的碱基序列为５′ＣＣＣＴＡＣＣＧＡＣ３′，原始对照Ａｄａｌａｙｄ扩
增出了６条明显的特异性条带，ＳＰ２００８１缺少１条约２．５ｋｂ条带和１条小于１ｋｂ的条带，ＳＰ２００８２缺少了１条
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图４ 体细胞突变体犛犘２００８１（犃）、犛犘２００８２（犅）和犛犘２００８３（犆和犇）有丝分裂中期染色体
犉犻犵．４ 犆犺狉狅犿狅狊狅犿犲狅犳犿狌狋犪狀狋犛犘２００８１（犃），犛犘２００８２（犅），犪狀犱犛犘２００８３（犆，犇）犪狋犿犻狋狅狋犻犮犿犲狋犪狆犺犪狊犲（犫犪狉＝５μ犿）
小于１ｋｂ的条带，ＳＰ２００８３缺少了１条约２．５ｋｂ的
图５ 海滨雀稗突变体犚犃犘犇分析
犉犻犵．５ 犚犃犘犇犪狀犪犾狔狊犲狊狅犳犿狌狋犪狀狋狊犻狀犛犲犪狊犺狅狉犲狆犪狊狆犪犾狌犿
Ｍ：ＤＮＡ标记ＤＮＡＭａｒｋｅｒ；ＣＫ：Ａｄａｌａｙｄ；１：ＳＰ２００８１；
２：ＳＰ２００８２；３：ＳＰ２００８３．
条带，可明显区分３个体细胞突变体以及对照（图５）；
Ｓ２碱基序列为５′ＧＡＧＡＧＡＧＡＧＡ３′，对照 Ａｄａｌａｙｄ
和ＳＰ２００８２中均扩增获得７条特异性条带，ＳＰ２００８１
缺少了２条条带，１条约４ｋｂ，１条约１．２ｋｂ，ＳＰ２００８
３缺少约２．５ｋｂ的条带，但多１条约１ｋｂ的条带；Ｓ３
的碱基序列为５′ＧＡＴＧＡＴＧＡＴＧＡ３′，Ａｄａｌａｙｄ中扩
增获得６条特异性条带，ＳＰ２００８１与Ａｄａｌａｙｄ基本一
致，ＳＰ２００８２相比Ａｄａｌａｙｄ多了１条２．７ｋｂ左右的条
带，缺少了１条约３ｋｂ的条带，ＳＰ２００８３缺少了约１．４
ｋｂ的条带，多了１条２．７ｋｂ左右的条带。
３ 讨论
３．１ 秋水仙素诱导海滨雀稗体细胞突变体的机理初探
秋水仙素作为一种常用化学诱变剂被广泛应用于植物育种工作中，因作用时期不同，诱变机理和结果不同。
当秋水仙素作用时期为细胞分裂前期时，秋水仙素通过抑制微管的形成使细胞内染色体加倍［２１］；秋水仙素作用
于有丝分裂间期—ＤＮＡ复制期，因秋水仙素的结构类似于核酸碱基，容易作为合成ＤＮＡ的成分渗入引起ＤＮＡ
复制错误，从而产生机体的突变［１２］。秋水仙素诱导染色体加倍的研究国内外报道很多，但国内外仅有少量文献
报道秋水仙素诱导对染色体结构和基因突变体筛选的文献。李卓等［２２］研究表明，秋水仙素能明显诱导黑麦（犛犲
犮犪犾犲犮犲狉犲犪犾犲）根尖细胞染色体变异，除加倍外，光学显微镜下还可观察到多种畸变现象。Ｒａｊｉｂ和Ｊａｇａｔｐａｔｉ［２３］研
究了化学诱变剂甲基磺酸乙酯、叠氮化钠和秋水仙素对康乃馨（犇犻犪狀狋犺狌狊犮犪狉狔狅狆犺狔犾犾狌狊）突变体育种的影响，结果
表明，种子发芽率和花粉活力与诱变剂浓度线性相关。Ｎｕｒａ等［２４］试验表明，芝麻（犛犲狊犪犿狌犿犻狀犱犻犮狌犿）突变体的
发芽率、株高、节间长、叶面积和千粒重等产量性状随秋水仙素处理浓度的升高而极显著下降，０．１和２．０
ｍｍｏｌ／Ｌ的秋水仙素浓度具有改变芝麻遗传多样性潜力，从而改善芝麻的产量。Ｒｅｙ等［２５］对巴拉圭茶的研究表
明，秋水仙素浓度为０．１％和０．２％、处理２４或４８ｈ均未获得染色体加倍的植株，秋水仙素浓度为０．５％、处理４８
ｈ，获得的２８株再生植株中只有２株染色体加倍，但观察到染色体数没有改变的植株其胚芽形态与对照不同。
本研究结果表明，原始对照Ａｄａｌａｙｄ自交不亲和，秋水仙素诱导获得的１９６０株再生植株中，秋水仙素浓度
５００和１０００ｍｇ／Ｌ、诱变处理２４ｈ获得了３株能自交结实的海滨雀稗体细胞突变体。与原始对照Ａｄａｌａｙｄ相比，
ＳＰ２００８１和ＳＰ２００８２染色体数目没有改变，仍然为２狀＝２０；ＳＰ２００８３根尖体细胞染色体鉴定结果表明，８６．７％
的细胞染色体数没有改变，为２狀＝２０，只有１３．３％的细胞染色体数加倍，为２狀＝４０，是二倍体和四倍体的嵌合
体，但以二倍体细胞为主。已有研究表明，染色体核型分析技术能明确识别各个染色体的特征，有助于了解生物
的遗传变异规律和发育机制，并对预测鉴定种间杂交和多倍体育种的结果具有重要的参考价值，但对染色体制片
技术要求高［２６］。本研究中对照Ａｄａｌａｙｄ的染色体核型分析结果显示，２狀＝２狓＝２０，１０对染色体中有５对为中部
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着丝粒染色体，５对为近中着丝粒染色体，第５对染色体上带随体，属２Ｂ核型，但由于尚未获得适于体细胞突变
体染色体核型分析的图片，体细胞突变体是否存在染色体结构的变异，有待于进一步研究。ＲＡＰＤ分析结果进一
步显示，３个体细胞突变体在ＤＮＡ水平上与对照均存在差异。
３．２ 二倍体自交结实型海滨雀稗种质创新的意义
国外对二倍体海滨雀稗属内不同种的研究结果表明，海雀稗（犘犪狊狆犪犾狌犿狏犪犵犻狀犪狋狌犿）是一个有性繁殖的匍匐
型二倍体种，自交不亲和，染色体数为２狀＝２０，染色体组为ＤＤ，除犘．犻狀犱犲犮狅狉狌犿部分属于ＤＤ染色体组，雀稗属
的其他种犘．狆狌犿犻犾狌犿、犘．犮犺狉狅犿狔狅狉犺狔狕狅狀、犘．狀狅狋犪狋狌犿的染色体组为ＮＮ，犘．狇狌犪犱狉犻犳犪狉犻狌犿、犘．犻狀狋犲狉犿犲犱犻狌犿、
犘．犫狉狌狀狀犲狌犿、犘．犺犪狌犿犪狀犻犻和犘．犱犲狀狊狌犿 的染色组为ＩＩ，犘．犼狌狉犵犲狀狊犻犻和犘．狆犪狀犻犮狌犾犪狋狌犿 的染色组为ＪＪ，犘．
狊犲狋犪犮犲狌犿的染色体组为ＳＳ，还有一些种染色体组尚未确定［２７］。已有的大量海滨雀稗属种间杂交表明，许多杂交
种不能产生有活力的种子，或种子的活力极低，平均发芽率只有１０．１％［２８３０］，进一步的研究表明，种子活力和发
芽率还与种植地的夜间温度有关，夜间温度低有利于提高种子的发芽率［３０］，种子发芽必须经过春化作用处理，温
度高于２０℃，并且最佳发芽温度为２５～３０℃［１１］。海滨雀稗商品化种子生产的关键在于明确最适宜的地点，以及
找到能有效杂交授粉的亲本组合［３１］。
迄今大面积种子繁殖的商品种只有 “ＳｅａＳｐｒａｙ”１个，是２个不同来源的海滨雀稗的杂交种。海滨雀稗品种
“ＳＤＸ１”是由佛罗里达海滨雀稗本地种与Ａｄａｌａｙｄ的杂交种［３２］，品种“ＳｅａＩｓｌｅ２０００”是从种植１２年Ａｄａｌａｙｄ的
高尔夫球场中观察到深绿色的一小块突变体并进一步筛选育成的，叶片极细、叶片宽度≤１．５ｍｍ，ＳＤＸ１和Ｓｅａ
Ｉｓｌｅ２０００均只能无性繁殖，但专利中描述了ＳｅａＩｓｌｅ２０００观察到有极少量的种子产生，种子长度和宽度分别为
２．５ｍｍ和１．５ｍｍ［３３］。本研究结果表明，由海滨雀稗品种Ａｄａｌａｙｄ幼穗离体培养获得的胚性愈伤组织为材料，
经１０００ｍｇ／Ｌ秋水仙素处理２４ｈ获得的再生植株上收获到了种子，播种的３粒种子均可发芽成苗，体细胞突变
体ＳＰ２００８１和ＳＰ２００８２染色体数与原始对照相同，但均可自交结实。ＳＰ２００８１在南京地区有个别枝条５月上
旬抽穗，部分枝条的自交结实率达到８０％以上。３个体细胞突变体ＳＰ２００８１、ＳＰ２００８２和ＳＰ２００８３均有部分枝
条７和８月抽穗，未收获到种子，大部分枝条１０月下旬抽穗，收获到部分种子，但结实率较低，而相同环境中种植
的Ａｄａｌａｙｄ植株，不结实未收获到任何种子。有关体细胞突变体自交结实率是否与抽穗期温度有关，以及自交结
实率高的枝条收获的种子长成的植株或扦插成活的植株，能否保持高的自交结实率，正在进一步研究。
二倍体自交结实型海滨雀稗特异种质的获得，打破了现有文献资料上“二倍体海滨雀稗自交不亲和”的理论，
为研究海滨雀稗自交不亲和机制提供了可能，并为国内率先育成可自交结实的海滨雀稗新品种创造了基础条件。
参考文献：
［１］ ＤｕｎｃａｎＲＲ，ＣａｒｒｏｗＲＮ．ＳｅａｓｈｏｒｅＰａｓｐａｌｕｍｔｈｅＥｎｖｉｒｏｎｍｅｎｔａｌＴｕｒｆｇｒａｓｓ［Ｍ］．Ｈｏｂｏｋｅｎ：ＪｏｈｎＷｉｌｅｙ＆Ｓｏｎｓ，Ｉｎｃ．，１９９９：
４．
［２］ ＨｕａｎｇＢ，ＤｕｎｃａｎＲＲ，ＣａｒｒｏｗＲＮ．Ｄｒｏｕｇｈｔｒｅｓｉｓｔａｎｃｅｍｅｃｈａｎｉｓｍｓｏｆｓｅｖｅｎｗａｒｍｓｅａｓｏｎｔｕｒｆｇｒａｓｓｕｎｄｅｒｓｕｒｆａｃｅｓｏｉｌｄｒ
ｙｉｎｇ：Ｉ．Ｓｈｏｏｔｒｅｓｐｏｎｓｅ［Ｊ］．ＣｒｏｐＳｃｉｅｎｃｅ，１９９７，３７（６）：１８５８１８６３．
［３］ ＨｕａｎｇＢ，ＤｕｎｃａｎＲＲ，ＣａｒｒｏｗＲＮ．Ｄｒｏｕｇｈｔｒｅｓｉｓｔａｎｃｅｍｅｃｈａｎｉｓｍｓｏｆｓｅｖｅｎｗａｒｍｓｅａｓｏｎｔｕｒｆｇｒａｓｓｕｎｄｅｒｓｕｒｆａｃｅｓｏｉｌｄｒ
ｙｉｎｇ：Ⅱ．Ｒｏｏｔａｓｐｅｃｔｓ［Ｊ］．ＣｒｏｐＳｃｉｅｎｃｅｓ，１９９７，３７（６）：１８６３１８６９．
［４］ 解新明，卢小良．海雀稗种质资源的优良特性及其利用价值［Ｊ］．华南农业大学学报，２００４，２５：６４６７．
［５］ ＦｒｉｃｋｅｒＣ，ＷｉｐｆｆＪＫ，ＤｕｎｃａｎＲＲ．Ｈｙｂｒｉｄｓｅａｓｈｏｒｅｐａｓｐａｌｕｍａｖａｉｌａｂｌｅｆｒｏｍｓｅｅｄｃａｌｅｄ“ＳｅａＳｐｒａｙ”［Ｐ］．ＵｎｉｔｅｄＳｔａｔｅｓＰａ
ｔｅｎｔ：７２６２３４１Ｂ１，２００７０８２８．
［６］ 常盼盼，钟小仙，刘智微．海滨雀稗体细胞突变体ＳＰ２００８３的特异性分析［Ｊ］．草业学报，２０１２，２１（６）：２０７２１２．
［７］ ＤｕｎｃａｎＲＲ，ＣａｒｒｏｗＲＮ．ＳｅａｓｈｏｒｅＰａｓｐａｌｕｍｔｈｅＥｎｖｉｒｏｎｍｅｎｔａｌＴｕｒｆｇｒａｓｓ［Ｍ］．Ｈｏｂｏｋｅｎ：ＪｏｈｎＷｉｌｅｙ＆Ｓｏｎｓ，Ｉｎｃ．，
１９９９：２４．
［８］ 邹轶，顾洪如，钟小仙，等．海盐胁迫对海滨雀稗生长及植株体内阳离子含量的影响［Ｊ］．草业科学，２００９，２６（４）：１１７１２０．
［９］ 钟小仙，邹轶，张建丽，等．海盐胁迫对海滨雀稗植株形态与生长的影响［Ｊ］．江苏农业科学，２００９，（６）：２３５２３６．
［１０］ ＥｓｐｉｎｏｚａＦ，ＱｕａｒｉｎＣＬ．Ｃｙｔｏｅｍｂｒｙｏｌｏｇｙｏｆ犘犪狊狆犪犾狌犿犮犺犪狊犲犪狀狌犿ａｎｄｓｅｘｕａｌｄｉｐｌｏｉｄｂｉｏｔｙｐｅｓｏｆｔｗｏａｐｏｍｉｃｔｉｃ犘犪狊狆犪犾狌犿
０１２ ＡＣＴＡＰＲＡＴＡＣＵＬＴＵＲＡＥＳＩＮＩＣＡ（２０１３） Ｖｏｌ．２２，Ｎｏ．６
ｓｐｅｃｉｅｓ［Ｊ］．ＡｕｓｔｒａｌｉａｎＪｏｕｒｎａｌｏｆＢｏｔａｎｙ，１９９７，（４５）：８７１８７７．
［１１］ ＣａｒｐｅｎｔｅｒＪＡ．Ｐｒｏｄｕｃｔｉｏｎａｎｄｕｓｅｏｆｓｅｅｄｉｎｓｅａｓｈｏｒｅｐａｓｐａｌｕｍ［Ｊ］．ＡｕｓｔｒａｌｉａｎＩｎｓｔｉｔｕｔｅｏｆＡｇｒｉｃｕｌｔｕｒａｌＳｃｉｅｎｃｅａｎｄＴｅｃｈｎｏｌ
ｏｇｙ，１９５８，（２４）：２５２２５６．
［１２］ 徐明，路铁刚．植物诱变技术的研究进展［Ｊ］．生物技术进展，２０１１，１（２）：９０９７．
［１３］ 李杰勤，王丽华，詹秋文，等．蓝天堂黑麦草的ＮａＮ３ 诱变及其ＲＡＰＤ分析［Ｊ］．草业学报，２０１３，１２（１）：２７６２８１．
［１４］ 刘祖洞，江绍慧．遗传学实验［Ｍ］．北京：高等教育出版社，１９７９：１０．
［１５］ 李懋学，陈瑞阳．关于植物核型分析的标准化问题［Ｊ］．武汉植物研究，１９８５，３（４）：２９７３０２．
［１６］ 李懋学，张赞平．作物染色体及其研究技术［Ｍ］．北京：中国农业出版社，１９９６：１３７．
［１７］ ＬｅｖａｎＡ，ＦｒｅｄｇａＫ，ＳａｎｄｂｅｒｇＡＡ．Ｎｏｍｅｎｃｌａｔｕｒｅｆｏｒｃｅｎｔｒｏｍｅｒｉｃｐｏｓｉｔｉｏｎｏｎｃｈｒｏｍｏｓｏｍｅｓ［Ｊ］．Ｈｅｒｅｄｉｔａｓ，１９６４，５２：１９７
２０１．
［１８］ ＳｔｅｈｂｉｎｓＧＬ．ＣｈｒｏｍｏｓｏｍａｌＥｖｏｌｕｔｉｏｎｉｎＨｉｇｈｅｒＰｌａｎｔｓ［Ｍ］．Ｌｏｎｄｏｎ：ＥｄｗａｒｄＡｒｎｏｌｄＬＴＤ，１９７１：８７８９．
［１９］ ＫｕｏＳＲ．ＫａｒｙｏｔｙｐｅａｎａｌｙｓｉｓｏｆｓｏｍｅＦｏｒｍｏｓａｎｇｙｍｎｏｓｐｅｒｍｓ［Ｊ］．Ｔａｉｗａｎｉａ，１９７２，１７（１）：６６８０．
［２０］ ＡｒａｎｏＨ．Ｔｈｅｋａｒｏｔｙｐｅｓａｎｄｔｈｅｓｐｅｃｉａｔｉｏｎｓｉｎｓｕｂｆａｍｉｌｙ犆犪狉犱狌狅犻犱犲犪犲ｏｆＪａｐａｎ［Ｊ］．ＪａｐａｎｅｓｅＪｏｕｒｎａｌｏｆＢｏｔａｎｙ，１９６５，
１９（３）：３１６７．
［２１］ 郑永强，徐坤．秋水仙素在植物体细胞染色体加倍中的应用研究进展［Ｊ］．中国农学通报，２００３，１９（５）：８９９１．
［２２］ 李卓，沈彬，张竞秋．秋水仙素诱导黑麦根尖细胞染色体的畸变效应［Ｊ］．麦类作物学报，２００９，２９（１）：４４４８．
［２３］ ＲａｊｉｂＲ，ＪａｇａｔｐａｔｉＴ．ＡｓｓｅｓｓｍｅｎｔｏｆｃｈｅｍｉｃａｌｍｕｔａｇｅｎｉｃｅｆｆｅｃｔｓｉｎｍｕｔａｔｉｏｎｂｒｅｅｄｉｎｇｐｒｏｇｒａｍｍｅｆｏｒＭ１ｇｅｎｅｒａｔｉｏｎｏｆＣａｒｎａ
ｔｉｏｎ（犇犻犪狀狋犺狌狊犮犪狉狔狅狆犺狔犾犾狌狊）［Ｊ］．ＲｅｓｅａｒｃｈｉｎＰｌａｎｔＢｉｏｌｏｇｙ，２０１１，１（４）：２３３２．
［２４］ ＮｕｒａＳ，ＡｄａｍｕＡＫ，ＡｚｕＳＭ，犲狋犪犾．Ｅｆｆｅｃｔｏｆｃｏｌｃｈｉｃｉｎｅｉｎｄｕｃｅｄｍｕｔａｇｅｎｅｓｉｓｏｎｇｒｏｗｔｈａｎｄｙｉｅｌｄｏｆｓｅｓａｍｅ（犛犲犪犿狌犿犻狀
犱犻犮狌犿Ｌ．）［Ｊ］．Ｂａｊｏｐａｓ，２０１１，４（１）：１２１１２５．
［２５］ ＲｅｙＨＹ，ＳａｎｓｂｅｒｒｏＰＡ，ＣｏｌａｖｉｎｏＭ Ｍ，犲狋犪犾．Ｃｏｌｃｈｉｃｉｎｅ，ｔｒｉｆｌｕｒａｌｉｎ，ａｎｄｏｒｙｚａｌｉｎｐｒｏｍｏｔｅｄｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔｏｆｓｏｍａｔｉｃｅｍ
ｂｒｙｏｓｉｎＩｌｅｘｐａｒａｇｕａｒｉｅｎｓｉｓ（犃狇狌犻犳狅犾犻犪犮犲犪犲）［Ｊ］．Ｅｕｐｈｙｔｉｃａ，２００２，１２３：４９５６．
［２６］ 杨宁，谈永霞，李巧峡，等．百里香染色体制片优化及核型分析［Ｊ］．草业学报，２０１２，２１（１）：１８４１８９
［２７］ ＤｕｎｃａｎＲＲ，ＣａｒｒｏｗＲＮ．ＳｅａｓｈｏｒｅＰａｓｐａｌｕｍｔｈｅＥｎｖｉｒｏｎｍｅｎｔａｌＴｕｒｆｇｒａｓｓ［Ｍ］．Ｈｏｂｏｋｅｎ：ＪｏｈｎＷｉｌｅｙ＆Ｓｏｎｓ，Ｉｎｃ．，
１９９９：１２．
［２８］ ＢｕｒｓｏｎＢＬ．Ｃｙｔｏｇｅｎｅｔｉｃｒｅｌａｔｉｏｎｓｂｅｔｗｅｅｎ犘犪狊狆犪犾狌犿犼狌狉犵犲狀狊犻犻ａｎｄ犘．犻狀狋犲狉犿犲犱狌犿，犘．狏犪犵犻狀犪狋狌犿，ａｎｄ犘．狊犲狋犪犮犲狌犿ｖａｒ．
犮犻犾犻犪狋犻犳狅犾犻狌犿［Ｊ］．ＣｒｏｐＳｃｉｅｎｃｅ，１９８１，２１：５１５５１９．
［２９］ ＱｕａｒｉｎＣ，ＢｕｒｓｏｎＢＬ．Ｃｙｔｏｇｅｎｅｔｉｃｒｅｌａｔｉｏｎｓａｍｏｎｇ犘犪狊狆犪犾狌犿狀狅狋犪狋狌犿ｖａｒ．狊犪狌狉犪犲，犘．狆狌犿犻犾狌犿，犘．犻狀犱犲犮狅狉狌犿，ａｎｄ犘．
狏犪犵犻狀犪狋狌犿［Ｊ］．ＢｏｔａｎｉｃａｌＧａｚｅｔｔｅ，１９８３，１４４：４３３４３８．
［３０］ ＤｕｎｃａｎＲＲ．Ｅｎｖｉｒｏｎｍｅｎｔａｌｃｏｍｐａｔｉｂｉｌｉｔｙｏｆｓｅａｓｈｏｒｅｐａｓｐａｌｕｍ（ｓａｌｔｗａｔｅｒｃｏｕｃｈ）ｆｏｒｇｏｌｆｃｏｕｒｓｅｓａｎｄｏｔｈｅｒｒｅｃｒｅａｔｉｏｎａｌｕ
ｓｅｓ．Ⅰ．Ｂｒｅｅｄｉｎｇａｎｄｇｅｎｅｔｉｃｓ［Ｊ］．ＩｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌＴｕｒｆｇｒａｓｓＳｏｃｉｅｔｙＲｅｓｅａｒｃｈＪｏｕｒｎａｌ，１９９９，８（Ⅱ）：１２０８１２１５．
［３１］ ＤｕｎｃａｎＲＲ，ＣａｒｒｏｗＲＮ．ＳｅａｓｈｏｒｅＰａｓｐａｌｕｍｔｈｅＥｎｖｉｒｏｎｍｅｎｔａｌＴｕｒｆｇｒａｓｓ［Ｍ］．Ｈｏｂｏｋｅｎ：ＪｏｈｎＷｉｌｅｙ＆Ｓｏｎｓ，Ｉｎｃ．，
１９９９：３０．
［３２］ ＭｉｃｈａｅｌＤ，ＳｔｅｗａｒｔＢ，ＰａｕｌＨＴ．Ｓｅａｓｈｏｒｅｐａｓｐａｌｕｍ“ＳＤＸ１”［Ｐ］．ＵｎｉｔｅｄＳｔａｔｅｓＰａｔｅｎｔ：００９５７０７Ｐ１，２００２０７１８．
［３３］ ＤｕｎｃａｎＲＲ．Ｓｅａｓｈｏｒｅｐａｓｐａｌｕｍｐｌａｎｔ“ＳｅａＩｓｌｅ２０００”［Ｐ］．ＵｎｉｔｅｄＳｔａｔｅｓＰａｔｅｎｔ：１２６２５Ｐ２，２００２０５１４．
１１２第２２卷第６期 草业学报２０１３年
犃犮狇狌犻狉犲犿犲狀狋狅犳狊犲犾犳犮狅犿狆犪狋犻犫犾犲狊狅犿犪狋犻犮犿狌狋犪狀狋狊犻狀犱狌犮犲犱犫狔犮狅犾犮犺犻犮犻狀犲犻狀犘犪狊狆犪犾狌犿狏犪犵犻狀犪狋狌犿
ＺＨＯＮＧＸｉａｏｘｉａｎ，ＬＩＵＺｈｉｗｅｉ，ＣＨＡＮＧＰａｎｐａｎ，ＷＵＪｕａｎｚｈｉ，ＺＨＡＮＧＪｉａｎｌｉ
（ＩｎｓｔｉｔｕｔｅｏｆＡｎｉｍａｌＳｃｉｅｎｃｅ，ＪｉａｎｇｓｕＡｃａｄｅｍｙｏｆＡｇｒｉｃｕｌｔｕｒａｌＳｃｉｅｎｃｅｓ，Ｎａｎｊｉｎｇ２１００１４，Ｃｈｉｎａ）
犃犫狊狋狉犪犮狋：Ｓｅａｓｈｏｒｅｐａｓｐａｌｕｍｐｌａｙｓａｎｉｍｐｏｒｔａｎｔｒｏｌｅｉｎｇｒａｓｓｌａｎｄｓｙｓｔｅｍｓｉｎｓａｌｉｎｅｓｏｉｌｂｅｃａｕｓｅｏｆｉｔｓｓｔｒｏｎｇｓａ
ｌｉｎｉｔｙｔｏｌｅｒａｎｃｅａｎｄｏｔｈｅｒｍｕｌｔｉｐｌｅｓｔｒｅｓｓｒｅｓｉｓｔａｎｃｅａｎｄｈｉｇｈｑｕａｌｉｔｙｐｅｒｆｏｒｍａｎｃｅ．犘．狏犪犵犻狀犪狋狌犿ｉｓａｓｅｌｆｉｎ
ｃｏｍｐａｔｉｂｌｅ，ｓｅｘｕａｌｄｉｐｌｏｉｄ．Ｃｒｏｓｓｆｅｒｔｉｌｉｚａｔｉｏｎｉｓｄｉｆｆｉｃｕｌｔｂｅｃａｕｓｅｉｔｓｇｅｎｏｍｅ（Ｄ）ｉｓｄｉｆｆｅｒｅｎｔｆｒｏｍｔｈａｔｏｆｍｏｓｔ
ｏｔｈｅｒ犘犪狊狆犪犾狌犿ｓｐｅｃｉｅｓ．犘．狏犪犵犻狀犪狋狌犿ｃｖ．ａｄａｌａｙｄｗａｓｉｎｄｕｃｅｄｗｉｔｈｃｏｌｃｈｉｃｉｎｅｉｎｃａｌｕｓｓｕｂｃｕｌｔｕｒｅｍｅｄｉｕｍ，
ａｎｄｅｍｂｒｙｏｇｅｎｉｃｃａｌｉｗｅｒｅｏｂｔａｉｎｅｄｆｒｏｍｉｍｍａｔｕｒｅｉｎｆｌｏｒｅｓｃｅｎｃｅｓｉｎｏｒｄｅｒｔｏｅｘｐｌｏｒｅｔｈｅｐｏｓｓｉｂｉｌｉｔｙｏｆｃｒｅａｔｉｎｇ
ｓｅｌｆｃｏｍｐａｔｉｂｌｅｓｏｍａｔｉｃｍｕｔａｎｔｓ．Ｏｎｅｔｈｏｕｓａｎｄｎｉｎｅｈｕｎｄｒｅｄａｎｄｓｉｘｔｙｐｌａｎｔｌｅｔｓｆｒｏｍｔｒｅａｔｍｅｎｔｓｗｉｔｈ２５０，
５００，１０００，１５００，ａｎｄ２０００ｍｇ／Ｌｃｏｌｃｈｉｃｉｎｅｆｏｒ２４，４８，ａｎｄ７２ｈｏｎｃａｌｕｓ，ａｎｄｓｉｘｈｕｎｄｒｅｄａｎｄｅｉｇｈｔｙｅｉｇｈｔ
ｐｌａｎｔｌｅｔｓｆｒｏｍｔｈｅｃｏｎｔｒｏｌｗｅｒｅｏｂｔａｉｎｅｄ．Ｃｈａｒａｃｔｅｒｉｓｔｉｃｓｏｆｓｅｅｄｓｅｔｆｒｏｍｒｅｇｅｎｅｒａｔｅｄｐｌａｎｔｓｉｎｄｉｃａｔｅｄｔｈａｔｆｏｕｒ
ｓｅｅｄｓａｎｄｔｈｒｅｅｓｅｅｄｓｗｅｒｅｈａｒｖｅｓｔｅｄｆｒｏｍｔｗｏｄｉｆｆｅｒｅｎｔｐｌａｎｔｓｆｒｏｍｔｒｅａｔｍｅｎｔｓｗｉｔｈ１０００ｍｇ／Ｌｃｏｌｃｈｉｃｉｎｅｆｏｒ
２４ｈ，ａｎｄｏｎｅｓｅｅｄｆｒｏｍｔｈｅｔｒｅａｔｍｅｎｔｗｉｔｈ５００ｍｇ／Ｌｃｏｌｃｈｉｃｉｎｅｆｏｒ２４ｈ．Ｏｎｅｓｅｅｄｐｅｒｐｌｏｔｆｒｏｍｔｈｒｅｅｄｉｆｆｅｒ
ｅｎｔｐｌａｎｔｓｏｆＭ１ｇｅｎｅｒａｔｉｏｎｗｅｒｅｓｏｗｎ，ａｎｄｅｖｅｒｙｓｅｅｄｇｅｒｍｉｎａｔｅｄ．Ｔｈｅｔｈｒｅｅｐｌａｎｔｓｆｒｏｍｓｅｅｄｓｗｅｒｅｎａｍｅｄａｓ
ＳＰ２００８１，ＳＰ２００８２，ａｎｄＳＰ２００８３．Ｔｗｏｈｕｎｄｒｅｄｆｉｆｔｙｔｈｒｅｅ，ｔｈｉｒｔｙｅｉｇｈｔ，ａｎｄｆｏｒｔｙｆｉｖｅｓｅｌｆｃｏｍｐａｔｉｂｌｅｓｅｅｄｓ
ｆｒｏｍＳＰ２００８１，ＳＰ２００８２，ａｎｄＳＰ２００８３ｒｅｓｐｅｃｔｉｖｅｌｙｗｅｒｅｈａｒｖｅｓｔｅｄ，ａｎｄｗｅｉｇｈｔｓｐｅｒｏｎｅｔｈｏｕｓａｎｄｓｅｅｄｓｗｅｒｅ
０．４７１，０．４４０，ａｎｄ０．４９６ｇｒｅｓｐｅｃｔｉｖｅｌｙ．Ｔｈｅｓｏｍａｔｉｃｃｈｒｏｍｏｓｏｍｅｎｕｍｂｅｒｗａｓ２狀＝２０ｉｎＳＰ２００８１ａｎｄ
ＳＰ２００８２ａｎｄｂｏｔｈｗｅｒｅｄｉｐｌｏｉｄ．Ｓｏｍａｔｉｃｃｈｒｏｍｏｓｏｍｅｎｕｍｂｅｒ２狀＝２０ｗａｓ８６．７％，ａｎｄｓｏｍａｔｉｃｃｈｒｏｍｏｓｏｍｅ
ｎｕｍｂｅｒ２狀＝４０ｗａｓ１３．３％ｉｎＳＰ２００８３．ＳＰ２００８３ｗａｓａｃｈｉｍｅｒａｍｉｘｅｄｗｉｔｈｄｉｐｌｏｉｄａｎｄｔｅｔｒａｐｌｏｉｄ．ＲＡＰＤａ
ｎａｌｙｓｉｓｃｏｎｆｉｒｍｅｄｔｈａｔＳＰ２００８１，ＳＰ２００８２ａｎｄＳＰ２００８３ｐｌａｎｔｓｗｅｒｅｄｉｆｆｅｒｅｎｔｆｒｏｍｃｏｎｔｒｏｌａｄａｌａｙｄｐｌａｎｔｓａｔ
ｔｈｅｍｏｌｅｃｕｌａｒｌｅｖｅ１．Ｔｗｏｓｅｌｆｃｏｍｐａｔｉｂｌｅｄｉｐｌｏｉｄｓａｎｄｏｎｅｃｈｉｍｅｒａｗｉｔｈｄｉｐｌｏｉｄａｎｄｔｅｔｒａｐｌｏｉｄｓｏｍａｔｉｃｍｕｔａｎｔｓ
ｗｅｒｅｃｒｅａｔｅｄｕｓｉｎｇ犘．狏犪犵犻狀犪狋狌犿ｃｖ．Ａｄａｌａｙｄｃａｌｕｓｉｎｄｕｃｅｄｗｉｔｈｃｏｌｃｈｉｃｉｎｅ．
犓犲狔狑狅狉犱狊：犘犪狊狆犪犾狌犿狏犪犵犻狀犪狋狌犿 （ｓｅａｓｈｏｒｅｐａｓｐａｌｕｍ）；ｄｉｐｌｏｉｄ；ｓｅｌｆｃｏｍｐａｔｉｂｉｌｉｔｙ；ｃｏｌｃｈｉｃｉｎｅ；ｓｏｍａｔｉｃｍｕｔａｎｔ
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