全 文 :林业科学研究 2015,28(4):518 523
ForestResearch
文章编号:10011498(2015)04051806
不同砧木嫁接甜柿苗期生长生理特性
及亲和性评价
马 攀,龚榜初,江锡兵,吴开云,徐 阳
(中国林业科学研究院亚热带林业研究所,浙江 杭州 311400)
收稿日期:20141222
项目基金:浙江省科技厅“果品农业新品种选育”重大科技专项重点项目(2012C12904-10)
作者简介:马 攀(1988-),女,湖南常德人,在读硕士研究生,主要从事经济林栽培与育种研究.
通讯作者:男,研究员,主要从事经济林栽培与育种研究.Email:gongbc@126.com.
摘要:以浙江柿、君迁子、油柿及537号和514号2种不同柿品种为砧木的‘阳丰’甜柿嫁接苗为试材,对不同砧木的
嫁接苗高生长、抗氧化物酶活性、丙二醛(MDA)含量及叶绿素含量等指标的年动态变化进行观测分析,初步评价不
同砧木的甜柿嫁接苗苗期亲和性差异。结果表明:(1)以浙江柿、柿537号、柿514号为砧木的甜柿嫁接苗生长速率
高于以油柿和君迁子为砧木的嫁接苗;(2)以油柿为砧木嫁接苗的叶绿素及可溶性蛋白含量最低,嫁接苗出现提前
衰老的现象;(3)以油柿为砧木的嫁接苗MDA含量均高于其余4种嫁接苗,在生长后期表现更明显;而以油柿为砧
木的嫁接苗抗氧化物酶活性在生长前期低于其余4种嫁接苗,在生长后期高于其余4种嫁接苗,砧穗间相互适应性
较弱;(4)根据各指标的年动态变化,结合生长及生理指标的主成分分析和隶属函数法分析,得出5种不同砧木的
甜柿嫁接苗苗期亲和性强弱顺序:浙江柿>柿537号>柿514号>君迁子>油柿。浙江柿、柿537号、柿514号适宜
作‘阳丰’甜柿的砧木,而油柿不宜作‘阳丰’甜柿的砧木。
关键词:砧木;甜柿;嫁接;生长性状;MDA;抗氧化物酶;叶绿素
中图分类号:S718.43 文献标识码:A
EvaluationonAfinity,GrowthTraitandPhysiologyIndicatorsof
PersimmonGraftedonDifferentStocks
MAPan,GONGBangchu,JIANGXibing,WUKaiyun,XUYang
(ResearchInstituteofSubtropicalForestry,ChineseAcademyofForestry,Hangzhou 311400,Zhejiang,China)
Abstract:Taking‘PCNAYouhou’persimmongraftedontherootstocksofDiospyrosglaucifolia,D.lotus,D.ole
ifera,D.kakiof‘537’,‘514’Astestmaterial,theannualdynamicchangeofgrowth,activityofmembranelipid
antioxidantenzymes,contentofmalomdiadehydeandchlorophylofdiferentgraftedpersimmonduringseedlingperi
odwerestudied.Theresultswereusedtoevaluatethegraftcompatibilityofdiferentgraftedpersimmon.Itwasindi
catedthat:(1)ThegrowthrateofD.glaucifolia,D.kakiof‘537’,‘514’graftedseedlingswashigherthanthat
ofD.lotus,D.oleiferagraftedseedlings.(2)ThecontentsofchlorophylandsolubleproteinweretheleastinD.
oleiferagraftedseedlingsandittendedtoshowearlyaging.(3)Thecontentsofmalomdiadehydewashigherthan
thatoftheothergraftedseedlings,especialywhentherootstockswasD.oleiferaduringthelaterstageofgrowth.
Whileitsactivityofantioxidantenzymeswaslowerthanthatoftheothersintheearlygrowthstageandhigherduring
thelaterstageofgrowth,andtheadaptationbetweenstocksandscionwasweak.(4)Analyzingthegrowthand
physiologyindicatorsofthegraftedpersimmonbyprincipalcomponentandmembershipfunctionanalysis,itturned
outthattheafinityorderwas:D.glaucifolia>D.kakiof‘537’>D.kakiof‘514’>D.lotus>D.oleifera.
第4期 马 攀等:不同砧木嫁接甜柿苗期生长生理特性及亲和性评价
Combiningtheannualdynamicchangeofindicators,theresultsshowedthattheD.glaucifolia,D.kakiof‘537’,
and‘514’weresuitableto‘PCNAYouhou’,whiletheD.oleiferawasnot.
Keywords:rootstock;malomdiadehyde;persimmon;growthtrait;antioxidantenzymes;chlorophyl
嫁接作为一种无性繁殖技术,广泛应用于植物
的繁殖、良种选育和遗传稳定性的测定等研究,嫁接
成功与否受内外因素的共同影响,其中嫁接亲和性
是影响嫁接成功与否最关键的因子[1]。嫁接亲和性
是砧穗遗传物质表达的结果,由于砧穗来自不同基
因型个体,砧穗间的亲和性存在差异。在嫁接系统
内,砧穗水分、营养物质、遗传物质[2]相互交换,有研
究发现,嫁接后砧穗发生代谢变化,过氧化物酶活
性[3-4]、可溶性糖和可溶性蛋白含量[5-6]、酚类物质
含量[7-8]、多酚氧化酶活性[9-10]等代谢变化产物的
活性及含量差异可在一定程度上反应嫁接亲和性
强弱。
研究表明,甜柿对砧木的要求比涩柿严格[11],
不同砧木影响甜柿嫁接苗叶片的矿质营养和碳水化
合物含量[12]及光合速率[13]。目前,主要通过对甜
柿嫁接苗的生长特性、砧穗愈合状况[14]、砧穗及结
合部位解剖结构的差异[15]等方面研究其亲和性,但
甜柿嫁接苗苗期生长及生理特性年变化与亲和性关
系的研究较少。因此,本试验通过观测不同砧木甜
柿嫁接苗苗期生长及生理特性年动态变化,分析评
价不同砧木嫁接苗的亲和性差异,为探索甜柿嫁接
苗苗期亲和性机理提供理论依据。
1 材料与方法
1.1 试验材料
2014年3月在中国林科院亚热带林业研究所
甜柿苗圃,以浙江柿(DiospyrosgalucifoliaMetc.)、油
柿(D.oleiferaCheng)、君迁子(D.lotusL.)及537
号和514号 2种不同柿(D.KakiThunb.)为砧木
(其中君迁子为山东君迁子,其余砧木为本地砧
木),以‘阳丰’(D.Kaki‘Youhou’)甜柿品种为接
穗进行嫁接,5个处理,每个处理120株。
1.2 试验方法
自2014年5月11日至2014年10月3日,每隔
20d左右进行取样,共7次。各嫁接组合选取10
15株健康且长势相当的嫁接苗作为取样对象,取中
部偏上的健康完整的成熟功能叶,将采回的新鲜叶
片用液氮处理后,取混合冻样叶充分研磨后进行生
理指标测定,每个指标重复测3次。
株高调查:各嫁接组合随机选取15株左右生长
势一致且无明显病虫害嫁接苗,株高用精度为1mm
的刻度尺测定。
参照王学奎[16]的方法测定叶绿素含量;考马斯
亮蓝法测定可溶性蛋白含量[17];硫代巴比妥酸法测
定丙二醛(MDA)含量[16];氮蓝四唑(NBT)法测定超
氧化物歧化酶(SOD)活性[18];愈创木酚法测定过氧
化物酶(POD)活性[18]。
1.3 数据处理
隶属函数的基本计算方法为:R(Xj)=(Xj-
Xmin)/(Xmax-Xmin),式中 Xj为指标测定值,Xmin、
Xmax为所有参试材料某一指标的最小值和最大值。
将亲和性隶属函数值累加,取其平均值。
采用 SPSS19.0和 Excel2003统计分析软件进
行数据分析及图形、表格处理。
2 结果与分析
2.1 不同砧木甜柿嫁接苗苗高生长的年动态变化
不同砧木甜柿嫁接苗苗高生长年动态变化如图
1所示。从图中可以看出,不同砧木甜柿嫁接苗苗
高生长趋势基本一致。6月28日之前,嫁接苗苗高
生长均较缓慢,而6月28日之后,嫁接苗苗高进入
快速生长期,尤以浙江柿、柿537号为砧木的嫁接苗
生长速率最快,8月18日之后,嫁接苗苗高生长趋
缓或基本停止生长。
图1 不同砧木甜柿嫁接苗苗高生长的年动态变化
不同砧木甜柿嫁接苗在不同时期苗高存在差
异。在5月11日,5种嫁接苗苗高差异不明显,6月
4日至6月28日,以柿514号为砧木的嫁接苗高于
其余砧木嫁接苗,而7月22日以后,5种砧木嫁接苗
915
林 业 科 学 研 究 第28卷
苗高差异较为明显,以浙江柿、柿537号、柿514号
为砧木的嫁接苗苗高显著高于以油柿、君迁子为砧
木的嫁接苗,其中以浙江柿为砧木的嫁接苗苗高值
最大,在10月3日达到153.69cm。
2.2 不同砧木甜柿嫁接苗叶绿素含量的年动态
变化
如图2所示,不同砧木甜柿嫁接苗叶绿素及类
胡萝卜素含量的年变化有明显差异。以油柿为砧木
的嫁接苗,其叶绿素 a、叶绿素 b、叶绿素总量、类胡
萝卜素含量均呈降低趋势,其余嫁接组合均呈先升
后降的变化趋势,其中以君迁子为砧木的嫁接苗,
图2 不同砧木甜柿嫁接苗叶绿素含量的年动态变化
其叶绿素a、叶绿素b和叶绿素总量变化幅度不明显,
类胡萝卜素有明显的上升和下降趋势,其余3种嫁接
苗叶绿素a、叶绿素b、叶绿素总量、类胡萝卜素的上
升和下降幅度均较明显。6月28日之前,除以油柿为
砧木的嫁接苗叶绿素及类胡萝卜素含量呈下降趋势,
其余砧木嫁接苗均缓慢增加,6月28日之后,嫁接苗
叶绿素及类胡萝卜素含量迅速增加,以浙江柿、柿537
号为砧木的嫁接苗增加更快。9月11日,除以油柿为
砧木的嫁接苗,其余各嫁接苗的叶绿素及类胡萝卜素
含量达到最大值,此时以浙江柿、柿537号、柿514号
为砧木的嫁接苗,其叶绿素a含量分别高于以油柿和
君迁子为砧木的嫁接苗 26516% 342.96%和
1593% 40.63%,叶绿素b、叶绿素总量及类胡萝卜
素含量也均高于以油柿和君迁子为砧木的嫁接苗,9
月11日之后所有不同砧木嫁接苗的叶绿素及类胡萝
卜素含量均呈下降趋势。
2.3 不同砧木甜柿嫁接苗可溶性蛋白含量的年动
态变化
从图3可以看出,不同砧木甜柿嫁接苗可溶性
蛋白含量的年变化均呈先升高后降低的趋势,但峰
值出现时间不一致。6月28日之前,各嫁接苗可溶
性蛋白含量缓慢增加,6月28日之后,可溶性蛋白
含量迅速增加,以浙江柿、柿537号为砧木的嫁接苗
增加速率更快,7月22日,以君迁子和油柿为砧木
的嫁接苗可溶性蛋白含量达到最大值,分别为
1628mg·g-1、28.39mg·g-1,以君迁子为砧木的
嫁接苗可溶性蛋白含量高于以浙江柿、柿537号、柿
514号为砧木的嫁接苗4.11% 23.06%。7月22
日至8月18日,以浙江柿、柿537号、柿514号为砧
木的嫁接苗可溶性蛋白含量持续增加,8月18日达
到峰值,峰值分别为37.30mg·g-1、32.02mg·g-1、
29.81mg·g-1,高于以油柿、君迁子为砧木的嫁接苗
45% 131.25%。8月18日至10月3日,不同砧木
嫁接苗可溶性蛋白含量均呈降低趋势。
图3 不同砧木甜柿嫁接苗可溶性蛋白含量的年动态变化
025
第4期 马 攀等:不同砧木嫁接甜柿苗期生长生理特性及亲和性评价
2.4 不同砧木甜柿嫁接苗抗氧化物酶活性的年动
态变化
如图4所示,不同砧木甜柿嫁接苗 SOD活性年
变化趋势基本一致。6月4日之前,各嫁接苗 SOD
活性呈增加趋势,6月4日至6月28日,除以油柿为
砧木的嫁接苗呈降低趋势外,其余嫁接苗均呈增加
趋势,尤以浙江柿为砧木的嫁接苗增加最快。6月
28日至7月22日,各嫁接苗SOD活性呈降低趋势,
7月22日至8月18日,各嫁接苗 SOD活性变化不
大,9月11日至10月3日,以油柿和君迁子为砧木
的嫁接苗SOD活性基本保持不变,其余3种嫁接苗
的SOD活性缓慢增加。
图4 不同砧木甜柿嫁接苗膜脂抗氧化物酶活性的
年动态变化
不同砧木甜柿嫁接苗的 POD活性年动态变化
趋势基本一致。6月28日之前,各嫁接苗POD活性
均呈增加趋势,尤以浙江柿为砧木的嫁接苗增加速
率最快,6月 28日达到峰值,此时 POD活性为
18536U·g-1,高于其余嫁接组合 26.34%
4842%。6月28日至7月22日,各嫁接苗POD活
性均呈降低趋势,7月22日至8月18日,除以油柿
为砧木的嫁接苗呈增加趋势,其余4种嫁接苗 POD
活性变化不大,8月18日至9月11日,以君迁子、油
柿为砧木的嫁接苗POD活性明显增加,9月11日至
10月3日,各嫁接苗POD活性均继续增加。
2.5 不同砧木甜柿嫁接苗丙二醛含量的年动态
变化
由图5可以看出,不同砧木甜柿嫁接苗丙二醛
(MDA)含量的年动态变化基本一致。6月28日之
前,各嫁接苗MDA含量均呈增加趋势,6月28日达
到峰值,此时以油柿和君迁子为砧木的嫁接苗 MDA
含量均较高,分别为35.01μmol·g-1和32.95μmol
·g-1,高于其余3种嫁接苗45.88% 94.50%和
37.29% 83.06%。6月28日至8月11日,各嫁接
苗MDA含量均呈降低趋势,其中以浙江柿、柿537
号、柿514号为砧木的嫁接苗降低速率较快,8月18
日至10月3日,各嫁接苗MDA含量均有增加趋势,
以油柿为砧木的嫁接苗增加最显著,其次为以君迁
子为砧木的嫁接苗。
图5 不同砧木甜柿嫁接苗MDA含量的年动态变化
2.6 不同砧木甜柿嫁接苗生长与生理指标相关性
分析
对5种不同砧木甜柿嫁接苗8月生长与生理
指标进行相关性分析,各指标间的相关性及相关系
数如表1所示。苗高(接穗高)、叶绿素含量、可溶性
蛋白含量、SOD活性两两间显著正相关,其中叶绿素
含量及SOD活性与可溶性蛋白含量的相关系数均
达0.94;MDA含量与其它各指标均呈显著负相关,
且MDA含量与SOD活性和POD活性呈极显著负相
关,相关系数分别为-0.87和-0.97。
表1 不同砧木甜柿嫁接苗生长与生理指标相关性分析
项目 苗高
MDA
含量
叶绿素
含量
SOD
活性
可溶性蛋
白含量
POD
活性
苗高 1.00
MDA含量 -0.51 1.00
叶绿素含量 0.52 -0.92 1.00
SOD活性 0.79 -0.87 0.88 1.00
可溶性蛋白含量 0.78 -0.84 0.94 0.94 1.00
POD活性 0.41 -0.97 0.79 0.76 0.69 1.00
注:表示 0.01水平极显著相关,表示 0.05水平显著
相关。
2.7 不同砧木甜柿嫁接苗生长与生理指标主成分
分析
对5种不同砧木甜柿嫁接苗的6个生长和生
理指标相关矩阵的特征根、特征向量及主成分累计
125
林 业 科 学 研 究 第28卷
贡献率进行计算,结果见表 2。根据贡献率大于
85%的原则,保留2个主成分,由各特征向量值大小
可知2个主成分的生物学意义。对第1主成分影响
较大的指标有苗高、叶绿素含量、SOD活性、POD活
性和可溶性蛋白含量,因此第1主成分主要反映嫁
接苗生长特性及膜脂抗氧化物酶活性的高低,第1
主成分值越大,则说明嫁接苗的这些性状值越大。
MDA含量则对第2主成分值影响最大。
由表3可以看出,5种不同砧木甜柿嫁接苗的
2个主成分值存在差异。第1主成分值较大的砧木
类型有浙江柿、柿537号和柿514号,说明这3种嫁
接苗的苗高、叶绿素含量、SOD活性和 POD活性值
较大。第2主成分值较大的砧木类型有君迁子和油
柿,说明这2种嫁接苗 MDA含量较其余嫁接苗高。
因此以浙江柿、柿537号、柿514号为砧木时,嫁接
苗高生长快,生长量较大,MDA含量较低。
表2 不同砧木甜柿嫁接苗生长和生理指标
主成分分析
项目 第1主成分 第2主成分
特征值 4.91 0.77
累计贡献率/% 81.16 94.67
苗高 0.72 0.65
MDA含量 -0.95 0.30
特征向量
叶绿素含量 0.94 -0.16
SOD活性 0.96 0.15
POD活性 0.95 0.18
可溶性蛋白含量 0.85 -0.41
表3 不同砧木甜柿嫁接苗的主成分值
砧木类型 第1主成分 第2主成分
浙江柿 0.83 -0.57
君迁柿 -0.92 1.46
油柿 -1.30 0.57
柿537号 0.61 -0.50
柿514号 0.74 -0.96
2.8 不同砧木甜柿嫁接苗生长与生理指标隶属函
数分析
植物嫁接亲和性是一个复合性状,用模糊数学
的隶属函数法对不同砧木甜柿嫁接苗的亲和性进行
综合评价,用不同砧木甜柿嫁接苗的各指标隶属度
平均值作为嫁接苗亲和性综合鉴定标准,隶属度平
均值越大,亲和性越强。由表4可以看出,浙江柿、
君迁子、油柿、柿537号、柿514号作‘阳丰’甜柿砧
木时的隶属度平均值分别为0.83、0.25、0.23、0.64、
0.67,则亲和性强弱顺序为:浙江柿>柿514号>柿
537号>君迁子>油柿,这与主成分分析结果一致。
表4 不同砧木甜柿嫁接苗隶属函数分析
评价指标 浙江柿 君迁子 油柿 柿537号 柿514号
苗高 1.00 0.00 0.38 0.57 0.47
叶绿素含量 1.00 0.56 0.00 0.96 0.97
POD活性 0.43 0.00 0.00 0.86 1.00
SOD活性 1.00 0.07 0.00 0.62 0.88
可溶性蛋白含量 1.00 0.25 0.00 0.76 0.67
MDA含量 0.11 0.60 1.00 0.05 0.00
隶属度平均值 0.83 0.25 0.23 0.64 0.67
排序 1 4 5 3 2
3 讨论
甜柿嫁接后砧穗愈合成一个整体,由于两者在
生理生化特性、解剖结构及代谢方式上存在差异,对
嫁接苗的生长及生理生化特性有一定影响。本研究
中,生长前期甜柿嫁接苗苗高生长均较缓慢,除以柿
514号为砧木的嫁接苗,其余4种嫁接苗苗高相差
不大,此时嫁接苗 SOD活性、POD活性、MDA含量
明显升高。SOD、POD作为植物抗氧化保护酶类,是
植物的抗氧化防御系统的一部分,能有效地清除体
内的活性氧和过氧化氢,从而减少膜系统受到破坏。
以浙江柿、柿537号、柿514号、君迁子为砧木时,其
较高的POD、SOD活性能有效清除由机械损伤产生
的过量的活性氧[19-20],维持活性氧平衡,且有研究
发现,POD还参与木质素的合成,影响砧穗间维管组
织的木质化过程[21-22],以浙江柿、柿537号、柿514
号、君迁子为砧木时,其较高的 POD活性有利于砧
穗愈合过程中维管组织的木质化,有利于砧穗正常
愈合生长。本试验中,嫁接苗前期可溶性蛋白含量
均呈增加趋势,这与陈红等[23]、孙华丽等[24]的研究
结果一致,且研究发现,可溶性蛋白含量越高,越能
促进嫁接后细胞分裂及愈伤组织的形成[25],以油柿
为砧木的嫁接苗可溶性蛋白含量增加速率低于其余
4种嫁接苗,说明以油柿为砧木时,砧穗细胞分裂及
愈伤组织形成能力较弱,砧穗正常愈合生长受阻,这
与其膜脂过氧化物酶活性及MDA含量变化相吻合。
甜柿嫁接苗进入快速生长期时,其MDA含量和
SOD、POD活性降低,此时,以君迁子为砧木的嫁接
苗可溶性蛋白、叶绿素及类胡萝卜素含量缓慢增加,
以油柿为砧木的嫁接苗可溶性蛋白含量缓慢增加,
但叶绿素及类胡萝卜素含量呈降低趋势,其余3种
嫁接苗可溶性蛋白、叶绿素及类胡萝卜素含量迅速
增加,这与各嫁接组合苗高生长速率相一致。在生
长后期,以浙江柿、柿537号、柿514号为砧木的嫁
接苗POD活性和 MDA含量有升高趋势,可能由于
225
第4期 马 攀等:不同砧木嫁接甜柿苗期生长生理特性及亲和性评价
嫁接苗进入衰老阶段,POD在衰老后期表达,参与活
性氧的生成及叶绿素降解,引发膜脂过氧化[26],
MDA含量增加;而以油柿、君迁子为砧木的嫁接苗
MDA含量和POD活性在8月便有明显升高趋势,且
其存活率较低,嫁接口膨大现象明显,嫁接苗叶片在
8月出现大面积黄化现象,8月后嫁接苗苗高生长几
乎停滞,说明以油柿为砧木的嫁接苗可能提前进入
衰老阶段;以君迁子为砧木时,8月后嫁接苗苗高也
出现生长停滞现象,但嫁接苗叶片未出现黄化现象,
嫁接苗有提前衰老的倾向,但表现不明显,结合君迁
子实生苗的生长状况,该嫁接苗可能由于气候的不
适应性而导致生长及生理表现较弱。
结合生长及生理指标的主成分分析和隶属函数
法分析,对不同砧木甜柿嫁接苗苗期亲和性进行综
合评价,结果表明:浙江柿、柿537号、柿514号适宜
作‘阳丰’甜柿的砧木,而油柿不宜作‘阳丰’甜柿的
砧木,君迁子与‘阳丰’甜柿嫁接苗,在高温多雨、湿
度较大的南方,由于气候的不适应性而导致生长及
生理表现较弱。
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