全 文 ：书瑞香狼毒细胞悬浮培养及黄酮积累的研究
王文星，安琪，汪莹，王猛，曹成有
（东北大学理学院生物技术研究所，辽宁 沈阳１１０００４）
摘要：以瑞香狼毒顶芽、叶片和茎段为外植体，考察不同植物生长调节剂对愈伤组织诱导率及生长状态的影响。由
疏松型的愈伤组织建立稳定的瑞香狼毒细胞悬浮培养体系，采用正交试验法初步研究碳源种类和植物生长调节剂
对细胞生长和黄酮积累的影响。结果表明，在附加了２，４Ｄ１．０ｍｇ／Ｌ＋ＮＡＡ０．１ｍｇ／Ｌ的 ＭＳ培养基上诱导茎段
可获得适于悬浮培养的疏松型愈伤组织，诱导率达到９０％。正交试验中各因素对细胞生长和黄酮含量的影响效应
均为２，４Ｄ＞碳源＞ＮＡＡ＞６ＢＡ；较高浓度的２，４Ｄ、ＮＡＡ和６ＢＡ均有利于细胞生长和黄酮积累；蔗糖最有利于
细胞生长和黄酮积累，其次是葡萄糖和果糖；适于细胞生长和黄酮积累的培养基为：ＭＳ＋２，４Ｄ２．０ｍｇ／Ｌ＋ＮＡＡ
１．０ｍｇ／Ｌ＋６ＢＡ０．５ｍｇ／Ｌ＋蔗糖３０ｇ／Ｌ。细胞生长与黄酮积累呈极显著正相关（犚２＝０．９６７），犘＜０．０１，这属于
生长偶联型的次生代谢模型。
关键词：瑞香狼毒；细胞悬浮培养；黄酮；碳源；植物生长调节剂
中图分类号：Ｑ９４９．７６１．１；Ｑ９４２ 文献标识码：Ａ 文章编号：１００４５７５９（２０１０）０６０１３２０８
瑞香狼毒（犛狋犲犾犾犲狉犪犮犺犪犿犪犲犼犪狊犿犲）为瑞香科狼毒属多年生草本植物，又名断肠草，分布于东北、华北、西南、西
北等地的干草原、沙质草原和典型草原上，是我国重要的传统中药［１］。自２０世纪６０年代起，我国学者已从瑞香
狼毒中分离并鉴定出３０多种化合物，主要包括甾醇、酚类成分、氨基酸、三萜类、蒽甙、狼毒甙及有毒高分子有机
酸等［２］。其中酚类成分中的黄酮类化合物［３，４］因有抗肿瘤［５］、抗 ＨＩＶ［６］、抑菌［７］、杀虫［８，９］等药用价值而被广泛研
究。
由于瑞香狼毒这些药用成分主要通过定期到生长地取材再分离纯化来获取，难免会受到植物收获期、地理环
境、土壤结构、季节气候、植物病虫害等因素影响，因而，在产业化过程的研究中还可以考虑用细胞悬浮培养方式
来获取。这一途径具有生产周期相对较短，不受地区和季节限制，避免病虫危害，所得产物品质稳定，利于大规模
培养，且可人为调控细胞生长及其药用成分的代谢途径获得“高产细胞株”等优点［１０］，已成为开发药用植物资源
的重要途径。利用植物细胞悬浮培养生产黄酮类化合物的研究报道已有不少。其中，袁宗泉等［１１］报道了细胞生
长期、苯丙氨酸和放线菌－Ｄ对银杏（犌犻狀犽犵狅犫犻犾狅犫犪）黄酮产量的影响；赵德修等［１２，１３］报道了不同理化因子对水母
雪莲（犛犪狌狊狊狌狉犲犪犿犲犱狌狊犪）培养细胞中黄酮形成的影响以及高产黄酮雪莲细胞系的筛选等。Ｓｍｉｔｈ和Ｒｅｉｄ［１４］对植
物细胞悬浮培养与黄酮类化合物的积累关系及李燕等［１５］对植物组织和细胞培养中黄酮类物质积累的影响因素
进行了阐述；罗建平等［１６，１７］报道了茉莉酸甲酯、水杨酸和一氧化氮诱导及稀土元素对怀槐（犕犪犪犮犽犻犪犪犿狌狉犲狀狊犻狊）
悬浮培养细胞异黄酮合成的影响及细胞结构变化；崔兴华等［１８］报道了黑暗培养条件下甘薯（犐狆狅犿狅犲犪犫犪狋犪狋犪狊）悬
浮细胞黄酮类物质的积累情况。尽管上述这些报道为其他植物细胞培养及黄酮积累的研究提供参考，但是每种
植物基因型及生长条件等存在差异，因而没有标准的培养条件来适合所有植物的细胞培养及产物积累。由于目
前尚未见到有建立瑞香狼毒细胞悬浮培养体系以及用来积累黄酮的研究报道，所以本研究通过不同植物生长调
节剂组合诱导瑞香狼毒顶芽、叶片和茎段，得到松散型愈伤组织，然后建立稳定的细胞悬浮培养体系，用正交试验
方法初步研究碳源种类、２，４二氯苯氧乙酸（２，４ｄｉｃｈｌｏｒｏｐｈｅｎｏｘｙａｃｅｔｉｃａｃｉｄ，２，４Ｄ）、α萘乙酸（ｎａｐｈｔｈａｌｅｎｅａｃｅ
ｔｉｃａｃｉｄ，ＮＡＡ）和６苄氨基腺嘌呤（６ｂｅｎｚｙｌａｍｉｎｏｐｕｒｉｎｅ，６ＢＡ）对瑞香狼毒细胞生长和黄酮积累的影响，为进
一步研究和开发利用瑞香狼毒细胞生产黄酮类物质提供参考。
１３２－１３９
２０１０年１２月
草 业 学 报
ＡＣＴＡＰＲＡＴＡＣＵＬＴＵＲＡＥＳＩＮＩＣＡ
第１９卷 第６期
Ｖｏｌ．１９，Ｎｏ．６
收稿日期：２０１００３２９；改回日期：２０１００５２５
基金项目：国家“十一五”科技支撑计划项目（２００６ＢＡＤ２６Ｂ０４）和国家大学生创新性实验计划项目（０８０１０５）资助。
作者简介：王文星 （１９７３），女，辽宁沈阳人，讲师，博士。Ｅｍａｉｌ：ｗａｎｇｗｅｎｘｉｎｇ＠１２６．ｃｏｍ
通讯作者。Ｅｍａｉｌ：ｃａｏｃｈｅｎｇｙｏｕ＠１６３．ｃｏｍ
１ 材料与方法
１．１ 供试材料
本试验所采用的材料是瑞香狼毒幼苗，于２００８年５月上旬采自内蒙古翁牛特旗乌兰敖都地区碱化草场
（４３°０２′Ｎ，１１９°３９′Ｅ），幼苗连根取回后栽在花盆中复壮，备用。
１．２ 方法
１．２．１ 愈伤组织的诱导与继代 在离体培养中，外植体是决定培养是否成功的关键因素之一，大多数植物在其
生长刚开始的季节采样较好，往往较易培养成功［１９］。在天气晴朗的中午１２：００－１４：００时，从瑞香狼毒幼苗上剪
取生长旺盛的新枝置于烧杯中，用纱布封口后流水冲洗４～５ｈ，在超净工作台上取其顶芽（约１．０ｃｍ长）、叶片
（沿叶脉剪几个裂口）或无腋芽的茎段（约１．０ｃｍ长），先用７５％乙醇浸泡３０ｓ，再用５％次氯酸钠溶液消毒１０
ｍｉｎ和无菌水漂洗５遍后，无菌滤纸吸干表面水分，接种于附加不同植物生长调节剂的 ＭＳ固体培养基（含３０
ｇ／Ｌ蔗糖和７ｇ／Ｌ琼脂，ｐＨ５．８～６．０）上。每组１５瓶，每瓶接种３个外植体。在培养温度为（２５±２）℃，光照强
度为４０μｍｏｌ／（ｍ
２·ｓ），光照１２ｈ／ｄ下，诱导愈伤组织。愈伤组织诱导率＝（每组诱导愈伤组织数÷每组接种外
植体总数）×１００％。以附加１．０ｍｇ／Ｌ２，４Ｄ和０．１ｍｇ／ＬＮＡＡ的 ＭＳ固体培养基为继代培养基，每２５ｄ愈伤
组织继代１次。
１．２．２ 细胞悬浮培养体系的建立 取继代培养２或３次的松散型愈伤组织，转入与继代培养基相同配方的１００
ｍＬ液体培养基中，接种量为鲜重４０ｇ／Ｌ，１２０ｒ／ｍｉｎ振荡悬浮培养。每７ｄ将细胞经４０目筛网过滤后接种入新
鲜培养基中，经过４或５代的培养，逐渐形成稳定的悬浮细胞系。自细胞悬浮培养开始，每３ｄ用已灭菌的吸管
吸取１滴约黄豆粒大小的培养液置于载玻片上，放在相差显微镜（德国徕卡）下观察悬浮细胞的形态、分散程度，
用成像系统拍照。
１．２．３ 细胞生长测定 参照文献［２０］，自接种日起，每３ｄ取１０ｍＬ细胞悬浮液测定１次，５０００ｒ／ｍｉｎ离心１０
ｍｉｎ，去上清液，蒸馏水洗涤３次，过滤后称得细胞鲜重（ＦＷ，ｇ／Ｌ），６０℃烘干至恒重即得细胞干重（ＤＷ，ｇ／Ｌ），试
验重复３次。
１．２．４ 黄酮的提取和含量测定 参照文献［２１］方法提取和测定细胞黄酮。收获瑞香狼毒悬浮细胞，蒸馏水漂洗
３次，６０℃干燥至恒重，称取０．５ｇ研磨并过１００目筛网后，加７５％乙醇１５ｍＬ，超声提取６０ｍｉｎ。取出，放冷至
室温，用０．２２μｍ一次性滤膜过滤，补足损失溶液。取２．５ｍＬ于１０ｍＬ容量瓶中，用甲醇稀释至刻度，摇匀，即
得供试品溶液，试验重复３次。以芦丁为标准品（购自中国药品生物制品检定所），用 ＵＶ２１００分光光度计测定
５１０ｎｍ下的吸光度值并绘制标准曲线，得芦丁质量浓度犆（ｇ／Ｌ）与吸光度犃的线性回归方程为犃＝０．０１２７犆＋
０．０００５，相关系数狉＝０．９９９９。然后测定供试品溶液的吸光度值，从标准曲线上计算出该溶液的黄酮含量。
１．２．５ 试验设计与统计分析 在前面基础上，利用正交试验考察培养基中碳源种类、２，４Ｄ、ＮＡＡ和６ＢＡ 四种
因素对瑞香狼毒细胞生长和黄酮积累的影响。选用Ｌ９（３４）正交表进行４因素３水平（表１），共９种组合试验，所
用碳源浓度均为３０ｇ／Ｌ，ｐＨ均为５．８～６．０。各组合均采用２５０ｍＬ三角瓶，装液量为１００ｍＬ，接种量为鲜重４０
ｇ／Ｌ，ＭＳ培养基为基本培养基，每组接种５瓶，试验重复３次，结果取平均值。培养温度均为（２５±１）℃，振摇速
度为１２０ｒ／ｍｉｎ，暗培养。细胞培养１８ｄ时收获每Ｌ细胞干重，用细胞增长量（ｇ／Ｌ）＝细胞收获量－接种量，细胞
增长率（％）＝细胞增长量×１００／接种量，表示各组合
的细胞生长变化。同时根据１．２．４中方法测定各组合
的细胞黄酮含量。用ＳＰＳＳ１１．５软件分析数据，以方
差分析、极差分析、相关性分析和最小显著差数法
（ＬＳＤ）多重比较。
２ 结果与分析
２．１ 愈伤组织的诱导与继代
外植体和植物生长调节剂是获得所要愈伤组织的
关键因素［２２，２３］，即使相同品种的不同外植体之间也会
表１ 犔９（３４）正交设计的因素与水平
犜犪犫犾犲１ 犔９（３４）狅狉狋犺狅犵狅狀犪犾犱犲狊犻犵狀犳犪犮狋狅狉狊犪狀犱犾犲狏犲犾狊
水平数
Ｌｅｖｅｌｓ
因素Ｆａｃｔｏｒｓ
Ａ／碳源
Ｃａｒｂｏｎｓｏｕｒｃｅ
Ｂ／２，４Ｄ
（ｍｇ／Ｌ）
Ｃ／ＮＡＡ
（ｍｇ／Ｌ）
Ｄ／６ＢＡ
（ｍｇ／Ｌ）
１ 蔗糖Ｓｕｃｒｏｓｅ ０．５ ０．１ ０．０
２ 葡萄糖Ｇｌｕｃｏｓｅ １．０ ０．５ ０．１
３ 果糖Ｆｒｕｃｔｏｓｅ ２．０ １．０ ０．５
３３１第１９卷第６期 草业学报２０１０年
存在差异［２４］。结果表明，瑞香狼毒顶芽、叶片和茎段的
图１ 不同外植体和植物生长调节剂组合
对愈伤组织诱导率的影响
犉犻犵．１ 犈犳犳犲犮狋狅犳犱犻犳犳犲狉犲狀狋犲狓狆犾犪狀狋狊犪狀犱狆犾犪狀狋犵狉狅狑狋犺狉犲犵狌犾犪狋狅狉
犮狅犿犫犻狀犪狋犻狅狀狊狅狀犮犪犾狌狊犻狀犱狌犮狋犻狅狀狉犪狋犲
Ａ：６ＢＡ１．０ｍｇ／Ｌ＋ＮＡＡ０．０１ｍｇ／Ｌ；Ｂ：６ＢＡ０．１ｍｇ／Ｌ＋ＮＡＡ
１．０ｍｇ／Ｌ；Ｃ：６ＢＡ１．０ｍｇ／Ｌ＋ＮＡＡ０．１ｍｇ／Ｌ；Ｄ：２，４Ｄ１．０ｍｇ／Ｌ；
Ｅ：２，４Ｄ２．０ｍｇ／Ｌ；Ｆ：２，４Ｄ１．０ｍｇ／Ｌ＋ＮＡＡ０．１ｍｇ／Ｌ
脱分化能力存在明显的差别（图１）。在相同生长调节
剂组合下，茎段的愈伤诱导率都是最高，其次是叶片，
最低是顶芽。比较不同生长调节剂组合可看出，附加
２．０ｍｇ／Ｌ２，４Ｄ的培养基对所有外植体的愈伤诱导
率皆最高，其次是附加了１．０ｍｇ／Ｌ２，４Ｄ＋０．１ｍｇ／Ｌ
ＮＡＡ组合，而所有附加了６ＢＡ的培养基上的外植体
愈伤诱导率均较低。从愈伤组织生长状态来看，顶芽
仅能诱导出绿色致密的小团愈伤组织，且生长缓慢，少
数能由芽生芽途径出苗（图２Ａ）；叶片和茎段在附加
６ＢＡ的培养基上都诱导出绿色致密的愈伤组织，且生
长较慢（图２Ｂ，Ｃ）；叶片在附加２，４Ｄ的培养基上能诱
导出黄绿色较致密的愈伤组织；茎段在附加了１．０
ｍｇ／Ｌ２，４Ｄ＋０．１ｍｇ／ＬＮＡＡ的培养基上才能诱导
出黄绿色、质地松散易碎、颗粒小、生长旺盛的愈伤组
织（图２Ｄ），它们常作为悬浮培养的起始材料，在此培
养基上继代这种生长旺盛、松散易碎的愈伤组织。
图２ 瑞香狼毒细胞悬浮培养体系的建立
犉犻犵．２ 犈狊狋犪犫犾犻狊犺犿犲狀狋狅犳犮犲犾狊狌狊狆犲狀狊犻狅狀犮狌犾狋狌狉犲狊狔狊狋犲犿狅犳犛．犮犺犪犿犪犲犼犪狊犿犲
Ａ：一个顶芽形成一株苗Ａｐｌａｎｔｌｅｔｇｅｎｅｒａｔｅｄｆｒｏｍａｂｕｄ；Ｂ：诱导叶片获得愈伤组织Ｃａｌｕｓｉｎｄｕｃｅｄｆｒｏｍｌｅａｆ；Ｃ：ＭＳ＋６ＢＡ０．１ｍｇ／Ｌ＋ＮＡＡ１．０
ｍｇ／Ｌ诱导茎段获得愈伤组织ＣａｌｕｓｉｎｄｕｃｅｄｆｒｏｍｓｔｅｍｓｅｇｍｅｎｔｏｎｔｈｅｍｅｄｉｕｍｏｆＭＳ＋６ＢＡ０．１ｍｇ／Ｌ＋ＮＡＡ１．０ｍｇ／Ｌ；Ｄ：ＭＳ＋２，４Ｄ１．０ｍｇ／Ｌ
＋ＮＡＡ０．１ｍｇ／Ｌ诱导茎段获得愈伤组织ＣａｌｕｓｉｎｄｕｃｅｄｆｒｏｍｓｔｅｍｓｅｇｍｅｎｔｏｎｔｈｅｍｅｄｉｕｍｏｆＭＳ＋２，４Ｄ１．０ｍｇ／Ｌ＋ＮＡＡ０．１ｍｇ／Ｌ；Ｅ：悬浮细
胞启动Ｔｈｅｓｔａｒｔｕｐｏｆｓｕｓｐｅｎｓｉｏｎｃｅｌ；Ｆ：悬浮培养细胞系Ｓｕｓｐｅｎｓｉｏｎｃｕｌｔｕｒｅｃｅｌｌｉｎｅｓ；Ｇ：初期悬浮细胞（×２００）Ｓｕｓｐｅｎｓｉｏｎｃｅｌｓａｔｅａｒｌｙｓｔａｇｅ
（×２００）；Ｈ：继代３次悬浮细胞（×４００）Ｓｕｓｐｅｎｓｉｏｎｃｅｌｓｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｅｄ３ｔｉｍｅｓ（×４００）；Ｉ：继代４次悬浮细胞（×４００）Ｓｕｓｐｅｎｓｉｏｎｃｅｌｓｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｅｄ４
ｔｉｍｅｓ（×４００）
４３１ ＡＣＴＡＰＲＡＴＡＣＵＬＴＵＲＡＥＳＩＮＩＣＡ（２０１０） Ｖｏｌ．１９，Ｎｏ．６
２．２ 细胞悬浮培养体系的建立及形态观察
挑选继代２或３次后的松散易碎的愈伤组织转入与继代培养基相同配方的液体培养基中振荡培养。初代培
养时细胞生长缓慢，细胞分散不均匀，底部有大小不一的细胞团（图２Ｅ），继代４代后生长加快，悬浮系分散均匀，
没有明显的大颗粒细胞团出现（图２Ｆ）。通过相差显微镜观察，第１代细胞多数成团，细胞内含物少，形状不规
则，似钩形向外延伸（图２Ｇ）；第２和３次继代后，细胞团变小，形状趋于长圆形（图２Ｈ）；第４次继代后，基本由多
个细胞组成，形状接近球形，细胞核大，内含物较多（图２Ｉ）。经过４或５次继代以后，就建立起分散性好、生长周
期较短的稳定瑞香狼毒悬浮细胞系，用于其次生代谢产物的研究中。
２．３ 悬浮细胞生长及黄酮积累的时间进程
图３ 瑞香狼毒细胞生长和黄酮积累的时间进程
犉犻犵．３ 犜犻犿犲犮狅狌狉狊犲狅犳犮犲犾犵狉狅狑狋犺犪狀犱犳犾犪狏狅狀狅犻犱狊
犪犮犮狌犿狌犾犪狋犻狅狀犻狀犛．犮犺犪犿犪犲犼犪狊犿犲
图３是在附加１．０ｍｇ／Ｌ２，４Ｄ＋０．１ｍｇ／Ｌ
ＮＡＡ的 ＭＳ液体培养基上继代５次后的瑞香狼毒
悬浮细胞生长以及黄酮积累随培养时间的变化情
况。悬浮细胞的生长曲线基本符合“Ｓ”型，０～６ｄ
为延迟期，６～１５ｄ为指数生长期，１５ｄ后进入稳定
期。悬浮细胞的干重以及黄酮的积累都随培养时间
的增加而增加，培养１８ｄ后细胞干重和黄酮含量都
基本保持不变（图３），表明瑞香狼毒悬浮培养细胞
中黄酮生物合成与细胞生长属于生长偶联型的次生
代谢模型。
２．４ 不同因素组合对瑞香狼毒细胞生长和黄酮含
量的影响
在上面研究的基础上，进一步采用Ｌ９（３４）正交
试验，考察不同碳源种类和植物生长调节剂对瑞香狼毒细胞生长和黄酮积累的影响。收获培养１８ｄ的悬浮细胞
进行细胞增长率和黄酮含量的测定，其结果见表２。９种组合之间的细胞生长有较大差异：分别利用葡萄糖和果
糖作碳源的４和７号细胞生长最慢，黄酮含量也最少，为０．４６ｍｇ／ｇ；利用蔗糖作碳源的３号细胞生长最旺盛，细
胞增长率达到４５３％，黄酮含量最多，达到２．１４ｍｇ／ｇＤＷ。
４种因素对瑞香狼毒细胞生长和黄酮含量的影响效应关系均为２，４Ｄ＞碳源＞ＮＡＡ＞６ＢＡ（表２，３）。对细
胞生长而言，２，４Ｄ和碳源的影响均达到显著水平（犘＜０．０５），其中以２．０ｍｇ／Ｌ２，４Ｄ和蔗糖影响最为显著（表
２，３）；对细胞中黄酮含量而言，４种因素均有显著影响（犘＜０．０５），其中以２．０ｍｇ／Ｌ２，４Ｄ、蔗糖、１．０ｍｇ／Ｌ
ＮＡＡ和０．５ｍｇ／Ｌ６ＢＡ影响最为显著。各因素的理论最佳水平组合为：适宜细胞生长的培养基为 ＭＳ＋２，４Ｄ
２．０ｍｇ／Ｌ＋ＮＡＡ０．５ｍｇ／Ｌ＋６ＢＡ０．５ｍｇ／Ｌ＋蔗糖３０ｇ／Ｌ；利于细胞中黄酮积累的培养基为 ＭＳ＋２，４Ｄ２．０
ｍｇ／Ｌ＋ＮＡＡ１．０ｍｇ／Ｌ＋６ＢＡ０．５ｍｇ／Ｌ＋蔗糖３０ｇ／Ｌ（表２）。由于ＮＡＡ对细胞生长影响不显著，而对黄酮
含量影响显著，所以ＮＡＡ含量可用１．０ｍｇ／Ｌ而不受影响。综合上述结果，可以得出既适于瑞香狼毒细胞生长
又利于细胞中黄酮积累的适宜培养基为：ＭＳ＋２，４Ｄ２．０ｍｇ／Ｌ＋ＮＡＡ１．０ｍｇ／Ｌ＋６ＢＡ０．５ｍｇ／Ｌ＋蔗糖３０
ｇ／Ｌ。
２．５ 瑞香狼毒细胞增长率与黄酮积累的关系
瑞香狼毒细胞增长率与黄酮含量的变化趋势相一致（表２），其线性相关系数（犚２）为０．９６７（狀＝９），犘＜０．０１，
呈极显著正相关关系。这表明随着细胞密度的增加，细胞中黄酮类物质积累也越多，这与２．３的结果一致，也与
黑暗条件下甘薯悬浮细胞黄酮类物质积累的结果一致［１８］，因而在瑞香狼毒悬浮细胞培养中，黄酮含量受细胞密
度等因素的显著影响，可通过调节细胞密度等手段来提高黄酮类物质的积累。
３ 讨论
３．１ 愈伤组织的诱导与悬浮细胞系的建立
建立悬浮细胞培养是实现植物次生代谢产物工业化生产的重要途径，愈伤组织的外观形态和生长状态直接
５３１第１９卷第６期 草业学报２０１０年
影响到建立的悬浮细胞系的质量，通常挑选颗粒小、松散易脆、生长旺盛的愈伤组织作为悬浮培养的材料［２５］。要
获得理想的愈伤组织，选择适宜的外植体和植物生长调节剂组合是关键。本试验发现，只有茎段在附加了２，４Ｄ
与ＮＡＡ的培养基上能诱导出结构松散，颗粒状，生长旺盛的愈伤组织，且愈伤诱导率也较高，为９０％，而顶芽和
叶片不论在附加了何种植物生长调节剂组合的培养基上都只能诱导出结构致密、生长慢的愈伤组织类型。此外，
６ＢＡ、ＮＡＡ和２，４Ｄ的不同激素组合对诱导的愈伤组织类型也有很大的影响：在附加了６ＢＡ和ＮＡＡ组合的
培养基上不论哪种外植体都只能诱导出绿色致密，生长缓慢的愈伤组织类型；仅附加了２，４Ｄ的培养基上只能诱
导出黄绿色较致密，生长较慢的愈伤组织类型，但是当２，４Ｄ与少量ＮＡＡ组合后愈伤组织状态转变为黄绿色松
散，表面润湿，生长旺盛的愈伤组织类型，表明２，４Ｄ对瑞香狼毒愈伤组织的诱导能力最强，ＮＡＡ能够有效地调
节愈伤组织的生长状态，６ＢＡ不太适于瑞香狼毒用于悬浮培养的愈伤组织诱导。
表２ 犔９（３４）正交试验设计与试验结果
犜犪犫犾犲２ 犔９（３４）狅狉狋犺狅犵狅狀犪犾狋犲狊狋犱犲狊犻犵狀犪狀犱狋狉犻犪犾狉犲狊狌犾狋狊
编号
Ｎｏ．
Ａ／碳源
Ｃａｒｂｏｎｓｏｕｒｃｅ
Ｂ／２，４Ｄ
（ｍｇ／Ｌ）
Ｃ／ＮＡＡ
（ｍｇ／Ｌ）
Ｄ／６ＢＡ
（ｍｇ／Ｌ）
细胞增长率
Ｉｎｃｒｅａｓｅｒａｔｅｏｆｃｅｌｄｒｙｗｅｉｇｈｔ（％）
黄酮含量
Ｆｌａｖｏｎｏｉｄｓｃｏｎｔｅｎｔ（ｍｇ／ｇＤＷ）
１ 蔗糖Ｓｕｃｒｏｓｅ ０．５ ０．１ ０．０ ２０８ ０．８８
２ 蔗糖Ｓｕｃｒｏｓｅ １．０ ０．５ ０．１ ３１７ １．１８
３ 蔗糖Ｓｕｃｒｏｓｅ ２．０ １．０ ０．５ ４５３ ２．１４
４ 葡萄糖Ｇｌｕｃｏｓｅ ０．５ ０．５ ０．５ １５１ ０．４６
５ 葡萄糖Ｇｌｕｃｏｓｅ １．０ １．０ ０．０ ２３３ ０．９４
６ 葡萄糖Ｇｌｕｃｏｓｅ ２．０ ０．１ ０．１ ３１２ １．２４
７ 果糖Ｆｒｕｃｔｏｓｅ ０．５ １．０ ０．１ ９６ ０．４６
８ 果糖Ｆｒｕｃｔｏｓｅ １．０ ０．１ ０．５ １７７ ０．６７
９ 果糖Ｆｒｕｃｔｏｓｅ ２．０ ０．５ ０．０ ２６８ １．３５
犓１ ９７８ａ ４５５ｃ ６９７ ７０９
犓２ ６９６ｂ ７２７ｂ ７３６ ７２５
犓３ ５４１ｃ １０３３ａ ７８２ ７８１
犚１ ４３７ ５７８ ８５ ７２
犕１ ４．２０ａ １．８０ｃ ２．７９ｂ ３．１７ａ
犕２ ２．６４ｂ ２．７９ｂ ２．９９ｂ ２．８８ｂ
犕３ ２．４８ｂ ４．７３ａ ３．５４ａ ３．２７ａ
犚２ １．７２ ２．９３ ０．７５ ０．３９
注：同列数字后不同字母分别代表０．０５水平差异显著。犓１、犓２、犓３、犚１为细胞增长率数据；犕１、犕２、犕３、犚２为黄酮含量数据。
Ｎｏｔｅ：Ｍｅａｎｓｐｒｅｃｅｄｉｎｇｔｈｅｄｉｆｆｅｒｅｎｔｌｅｔｔｅｒｓｆｏｒｅａｃｈｌｉｎｅｗｅｒｅｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔｄｉｆｆｅｒｅｎｃｅａｔ５％ｐｒｏｂａｂｉｌｉｔｙａｓｄｅｔｅｒｍｉｎｅｄｂｙＬＳＤｍｕｌｔｉｐｌｅｃｏｍｐａｒｉｓｏｎｓ．
犓１，犓２，犓３，犚１ａｒｅｔｈｅｄａｔａｏｆｔｈｅｉｎｃｒｅａｓｅｒａｔｅｏｆｃｅｌｄｒｙｗｅｉｇｈｔ；犕１，犕２，犕３，犚２ａｒｅｔｈｅｄａｔａｏｆｆｌａｖｏｎｏｉｄｓｃｏｎｔｅｎｔ．
表３ 瑞香狼毒细胞增长率和黄酮含量的方差分析
犜犪犫犾犲３ 犞犪狉犻犪狀犮犲犪狀犪犾狔狊犻狊狅犳狋犺犲犻狀犮狉犲犪狊犲狉犪狋犲狅犳犮犲犾犱狉狔狑犲犻犵犺狋犪狀犱犳犾犪狏狅狀狅犻犱狊犮狅狀狋犲狀狋狅犳犛．犮犺犪犿犪犲犼犪狊犿犲
项目
Ｉｔｅｍ
细胞增长率Ｉｎｃｒｅａｓｅｒａｔｅｏｆｃｅｌｄｒｙｗｅｉｇｈｔ（％）
Ａ Ｂ Ｃ Ｄ
黄酮含量Ｆｌａｖｏｎｏｉｄｓｃｏｎｔｅｎｔ（ｍｇ／ｇＤＷ）
Ａ Ｂ Ｃ Ｄ
犛犛 ９８５２０．９６ １６７５９１．１８ ３６４９．８５ ２８７６．７４ １．８０ ４．４２ ０．３０ ０．０８
犉 ８６．４３ １４７．０３ ３．２０ ２．５２ １６０５．２４ ３９４９．０５ ２６８．５３ ６９．３８
注： 表示差异达到显著水平（犘＜０．０５），犉０．０５（２，１８）＝３．５５。
Ｎｏｔｅ： ｍｅａｎｓｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔｄｉｆｆｅｒｅｎｃｅａｔ犘＜０．０５，犉０．０５（２，１８）＝３．５５．
６３１ ＡＣＴＡＰＲＡＴＡＣＵＬＴＵＲＡＥＳＩＮＩＣＡ（２０１０） Ｖｏｌ．１９，Ｎｏ．６
建立细胞悬浮培养体系，还要考虑培养条件对悬浮细胞的影响。一般悬浮细胞生活力较弱，强光容易引起细
胞膜的光氧化，对细胞生活力造成损伤［２５］，所以本试验采用光照条件下诱导瑞香狼毒的愈伤组织，而细胞悬浮培
养时转入暗培养条件下。本试验中发现摇床转速超过１３０ｒ／ｍｉｎ或低于１００ｒ／ｍｉｎ都不利于瑞香狼毒细胞的生
长。还有，当细胞接种量超过鲜重４０ｇ／Ｌ时，细胞增长率下降，培养液有粘稠挂壁以及细胞褐化的现象。
３．２ 碳源种类对悬浮细胞生长和黄酮积累的影响
碳源是细胞生长的能量来源和构成细胞骨架的重要成分以及调节细胞渗透压作用。碳源对植物次生代谢的
作用，首先表现在不同的碳源对次生代谢产物的积累及细胞的生长不一样上［１２］。研究表明，蔗糖对人参（犘犪狀犪狓
犵犻狀狊犲狀犵）色素细胞生长及花苷的积累效果最好，其次是葡萄糖［２６］。在银杏细胞悬浮培养中，蔗糖最有利于细胞
中黄酮合成，葡萄糖最有利于细胞生长［２７］。还有研究报道高浓度的蔗糖可提高细胞的生物量和次生代谢产物的
含量［２８，２９］。通常认为，蔗糖作为很好的碳源，是通过植物细胞壁上的转化酶，在微酸性环境下迅速被分解成等分
子量的果糖和葡萄糖，细胞优先吸收葡萄糖后再利用果糖［３０］。本试验中发现，蔗糖对瑞香狼毒细胞生长和黄酮
积累都是最有利的，其次是葡萄糖和果糖。葡萄糖和果糖之间对黄酮积累的差异不显著，而对细胞生长有显著差
异，葡萄糖要优于果糖。
３．３ 植物生长调节剂对悬浮细胞生长和黄酮积累的影响
植物生长调节剂的种类与浓度以及组合方式等是植物细胞生长和次生代谢产物积累研究中要考虑的重要影
响因素。研究表明，在银杏细胞悬浮培养中，ＮＡＡ与激动素（６ｆｕｒｉｆｕｒｙｌａｍｉｎｏｐｕｒｉｎｅ，ＫＴ）组合有利于细胞生长
和黄酮糖苷的积累，而２，４Ｄ、赤霉素（ｇｉｂｂｅｒｅｌｉｎｓ，ＧＡ３）和玉米素（ｚｅａｔｉｎ，ＺＴ）对其有抑制作用［３１］。在喜树
（犆犪犿狆狋狅狋犺犲犮犪犪犮狌犿犻狀犪狋犪）细胞培养中，适当浓度的２，４Ｄ可以显著提高花青素的产量，但是高浓度会产生抑制
作用［３２］。在巨峰葡萄（犞犻狋犻狊狏犻狀犻犳犲狉犪）细胞悬浮培养中，１．０ｍｇ／ＬＮＡＡ和０．５ｍｇ／Ｌ６ＢＡ能够促进细胞快速
生长，而２，４Ｄ的添加会产生抑制作用［３３］。由此可看出，不同植物生长调节剂对不同植物细胞生长和产物的积
累有明显的差异。在本试验中发现，２，４Ｄ是最主要的影响因素，较高浓度的２，４Ｄ对瑞香狼毒细胞生长和黄酮
积累都是有利的；ＮＡＡ和６ＢＡ对瑞香狼毒细胞生长影响不显著，但是对细胞中黄酮含量的影响显著，其中较高
浓度的ＮＡＡ和６ＢＡ有利于黄酮的积累。由较高浓度组成的３号组合即２，４Ｄ２．０ｍｇ／Ｌ＋ＮＡＡ１．０ｍｇ／Ｌ＋
６ＢＡ０．５ｍｇ／Ｌ＋蔗糖３０ｇ／Ｌ，所获得的细胞增长率还是黄酮含量都是最高的，分别为４５３％和２．１４ｍｇ／ｇ。
本研究成功地建立了稳定的瑞香狼毒细胞悬浮培养体系，并在此基础上初步研究了碳源种类和植物生长调
节剂对瑞香狼毒细胞生长和黄酮积累的影响。要获得更高产黄酮的瑞香狼毒悬浮细胞系，碳源浓度、培养基成分
以及诱导前体等将是进一步试验要考虑的重要因素。
参考文献：
［１］ 刘英，龙瑞军，姚拓．草地狼毒研究进展［Ｊ］．草业科学，２００４，２１（６）：５５５８．
［２］ 裴月湖，冯宝民，华会明，等．瑞香狼毒化学及药理研究进展［Ｊ］．中草药，２００１，３２（８）：７６４７６６．
［３］ 宋晓平，曹光荣，李绍君．瑞香狼毒中总黄酮的提取分离及其毒性研究［Ｊ］．西北农业大学学报，１９９６，２４（４）：３５３８．
［４］ 冯宝民，裴月湖，韩冰．瑞香狼毒中的黄酮类化合物［Ｊ］．中草药，２００１，３２（１）：１４１５．
［５］ 王敏，贾正平，马骏，等．瑞香狼毒总黄酮提取物的抗肿瘤作用［Ｊ］．中国中药杂志，２００５，３０（８）：６０３６０６．
［６］ ＩｋｅｇａｗａＴ，ＩｋｅｇａｗａＡ．Ｃｈａｍａｅｊａｓｍｉｎａｎｄｅｕｃｈａｍａｅｊａｓｍｉｎｅｘｔｒａｃｔｉｏｎｆｒｏｍ犛狋犲犾犾犲狉犪犮犺犪犿犪犲犼犪狊犿犲ａｎｄｔｈｅｉｒａｎｔｉｖｉｒａｌａｃｔｉｖｉｔｉｅｓ：
Ｊａｎｐａｎ，０８３１１０５６［Ｐ］．１９９５０５１９．
［７］ 秦宝福，周乐，苗芳，等．瑞香狼毒根的抑菌活性研究（Ⅰ）［Ｊ］．西北植物学报，２００３，２３（１１）：１９７７１９８０．
［８］ 王亚维，张国洲，徐汉虹，等．瑞香狼毒杀虫活性成分的提取与分离［Ｊ］．安徽农业科学，２００４，３２（４）：６７１６７２．
［９］ 段晓明．狼毒根提取物的杀虫活性测定［Ｊ］．中国农学通报，２００６，２２（１２）：３４５３４７．
［１０］ 胡凯，谈锋．药用植物细胞的大规模培养技术［Ｊ］．植物生理学通讯，２００４，４０（２）：２５１２５９．
［１１］ 袁宗泉，刘淑兰，吴改道，等．细胞生长期、苯丙氨酸和放线菌Ｄ对银杏黄酮产量的影响［Ｊ］．农业生物技术学报，１９９７，
５（２）：１１８１２４．
［１２］ 赵德修，汪沂，赵敬芳．不同理化因子对雪莲培养细胞中黄酮类形成的影响［Ｊ］．生物工程学报，１９９８，１４（３）：２５９２６４．
７３１第１９卷第６期 草业学报２０１０年
［１３］ 赵德修，乔传令，汪沂．水母雪莲的细胞培养和高产黄酮细胞系的筛选［Ｊ］．植物学报，１９９８，４０（６）：５１５５２０．
［１４］ ＳｍｉｔｈＭＡＬ，ＲｅｉｄＪＦ．Ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎｏｆｉｍａｇｉｎｇｔｏｏｌｓｔｏｐｌａｎｔｃｅｌｃｕｌｔｕｒｅ：Ｒｅｌａｔｉｏｎｓｈｉｐｂｅｔｗｅｅｎｐｌａｎｔｃｅｌａｇｇｒｅｇａｔｉｏｎａｎｄ
ｆｌａｖｏｎｏｉｄｐｒｏｄｕｃｔｉｏｎ［Ｊ］．ＩｎＶｉｔｒｏＣｅｌｕｌａｒ＆ＤｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔａｌＢｉｏｌｏｇｙＰｌａｎｔ，１９９９，３５（４）：２９０２９５．
［１５］ 李燕，王春兰，郭顺星，等．植物组织和细胞培养物中黄酮类物质积累影响因素的研究进展［Ｊ］．中国药学杂志，２００６，
４１（９）：６５１６５５．
［１６］ 罗建平，夏宁，沈国栋．茉莉酸甲酯、水杨酸和一氧化氮诱导怀槐悬浮细胞合成异黄酮及细胞结构变化［Ｊ］．分子细胞生物
学报，２００６，３９（５）：４３８４４４．
［１７］ 罗建平，曹磊，潘利华，等．稀土元素对怀槐悬浮培养细胞异黄酮合成及氧化还原态的影响［Ｊ］．应用与环境生物学报，
２００８，１４（３）：３６２３６５．
［１８］ 崔兴华，李兴林，蔡津，等．黑暗培养条件下甘薯悬浮细胞黄酮类物质积累的初步研究［Ｊ］．浙江大学学报（农业与生命科学
版），２００８，３４（５）：５０２５０８．
［１９］ 郭晔红，蔺海明，武睿．唐古特白刺组织培养及其培养基筛选研究［Ｊ］．草业学报，２００９，１８（６）：５９６４．
［２０］ 李明军，李萍，赵喜亭，等．怀牛膝细胞悬浮培养及多糖含量变化的研究［Ｊ］．西北植物学报，２００８，２８（３）：４９４５００．
［２１］ 王磊，杨英，周圆圆，等．甘草细胞培养物黄酮含量测定方法的建立［Ｊ］．时珍国医国药，２００７，１８（１２）：３０４６３０４８．
［２２］ 赵智燕，潘俊松，何亚丽，等．两个高羊茅无性系的营养器官组织培养及再生体系的建立［Ｊ］．草业学报，２００９，１８（５）：１６８
１７５．
［２３］ 赵洁，张博，王玉祥，等．疏叶骆驼刺茎段离体快繁技术的研究［Ｊ］．草业科学，２００９，２６（５）：７２７５．
［２４］ 王友生，王瑛，李阳春．三叶草愈伤组织诱导及分化的研究［Ｊ］．草业学报，２００９，１８（２）：２１２２１５．
［２５］ 汤行春，刘幼琪．连翘悬浮细胞系的建立及不同理化因子对细胞生长和次生产物积累的影响［Ｊ］．湖北大学学报（自然科学
版），２００７，２９（４）：４０９４１２．
［２６］ 李树敏，朱蔚华．人参色素细胞培养的研究［Ｊ］．植物学报（英文版），１９９０，３２（２）：１０３１１１．
［２７］ 李春斌，王关林，岳玉莲，等．培养条件对银杏悬浮培养细胞黄酮合成影响研究［Ｊ］．大连理工大学学报，２００３，４３（３）：
２８７２９１．
［２８］ ＰａｓｑｕａｌｉＧ，ＥｒｖｅｎＡＳ，ＯｕｗｅｒｋｅｒｋＰＢ．Ｔｈｅｐｒｏｍｏｔｅｒｏｆｔｈｅｓｔｒｉｃｔｏｓｉｄｉｎｅｓｙｎｔｈａｓｅｇｅｎｅｆｒｏｍｐｅｒｉｗｉｎｋｌｅｃｏｎｆｅｒｓｅｌｉｃｉｔｏｒｉｎ
ｄｕｃｉｂｌｅｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎｉｎｔｒａｎｓｇｅｎｉｃｔｏｂａｃｃｏａｎｄｂｉｎｄｓｎｕｃｌｅａｒｆａｃｔｏｒｓＧＴ１ａｎｄＧＢＦ［Ｊ］．ＰｌａｎｔＭｏｌｅｃｕｌａｒＢｉｏｌｏｇｙ，１９９９，３９（６）：
１２９９１３１０．
［２９］ ＺｈａｏＪ，ＺｈｕＷ，ＨｕＱ．Ｅｎｈａｎｃｅｄｃａｔｈａｒａｎｔｈｉｎｅｐｒｏｄｕｃｔｉｏｎｉｎ犆犪狋犺犪狉犪狀狋犺狌狊狉狅狊犲狌狊ｃｅｌｃｕｌｔｕｒｅｓｂｙｃｏｍｂｉｎｅｄｅｌｉｃｉｔｏｒｔｒｅａｔｍｅｎｔ
ｉｎｓｈａｋｅｆｌａｓｋｓａｎｄｂｉｏｒｅａｃｔｏｒｓ［Ｊ］．ＥｎｚｙｍｅａｎｄＭｉｃｒｏｂｉａｌＴｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，２００１，２８（７８）：６７３６８１．
［３０］ 丁世萍，严菊强，季道藩．糖类在植物组织培养中的效应［Ｊ］．植物学通报，１９９８，１５（６）：４２４６．
［３１］ 姜玲，章文才．植物生长调节剂对银杏悬浮细胞生长和黄酮糖苷含量的影响［Ｊ］．果树科学，２０００，１７（２）：１１０１１３．
［３２］ ＰａｓｑｕａＧ，ＭｏｎａｃｅｌｉＩＬ，ＭｕｌｉｎａｃｃｉＮ．Ｔｈｅｅｆｆｅｃｔｏｆｇｒｏｗｔｈｒｅｇｕｌａｔｏｒｓａｎｄｓｕｃｒｏｓｅｏｎａｎｔｈｏｃｙａｎｉｎｐｒｏｄｕｃｔｉｏｎｉｎ犆犪犿狆狋狅狋犺
犲犮犪犪犮狌犿犻狀犪狋犪ｃｅｌｃｕｌｔｕｒｅｓ［Ｊ］．ＰｌａｎｔＰｈｙｓｉｏｌｏｇｙａｎｄＢｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ，２００５，４３（３）：２９３２９８．
［３３］ 杜晓映，张振文，夏惠，等．葡萄悬浮细胞系的建立［Ｊ］．西北农林科技大学学报（自然科学版），２００９，３７（１）：１９９２０４．
８３１ ＡＣＴＡＰＲＡＴＡＣＵＬＴＵＲＡＥＳＩＮＩＣＡ（２０１０） Ｖｏｌ．１９，Ｎｏ．６
犃狊狋狌犱狔狅狀犮犲犾狊狌狊狆犲狀狊犻狅狀犮狌犾狋狌狉犲犪狀犱犳犾犪狏狅狀狅犻犱狊犪犮犮狌犿狌犾犪狋犻狅狀狅犳犛狋犲犾犾犲狉犪犮犺犪犿犪犲犼犪狊犿犲
ＷＡＮＧＷｅｎｘｉｎｇ，ＡＮＱｉ，ＷＡＮＧＹｉｎｇ，ＷＡＮＧＭｅｎｇ，ＣＡＯＣｈｅｎｇｙｏｕ
（ＩｎｓｔｉｔｕｔｅｏｆＢｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，ＣｏｌｅｇｅｏｆＳｃｉｅｎｃｅｓ，ＮｏｒｔｈｅａｓｔｅｒｎＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，Ｓｈｅｎｙａｎｇ１１０００４，Ｃｈｉｎａ）
犃犫狊狋狉犪犮狋：Ａｃｅｌｓｕｓｐｅｎｓｉｏｎｃｕｌｔｕｒｅｓｙｓｔｅｍｗａｓｅｓｔａｂｌｉｓｈｅｄｕｓｉｎｇｃｕｌｔｕｒｅｓｏｆｌｏｏｓｅｃａｌｉｏｆ犛狋犲犾犾犲狉犪犮犺犪犿犪犲犼犪狊犿犲
ｔｏｉｎｖｅｓｔｉｇａｔｅｔｈｅｅｆｆｅｃｔｓｏｆｄｉｆｆｅｒｅｎｔｐｌａｎｔｇｒｏｗｔｈｒｅｇｕｌａｔｏｒｓｏｎｃａｌｕｓｉｎｄｕｃｔｉｏｎｒａｔｅａｎｄｇｒｏｗｔｈｓｔａｔｅｆｒｏｍ
ｅｘｐｌａｎｔｓｓｕｃｈａｓｂｕｄｓ，ｌｅａｖｅｓａｎｄｓｔｅｍｓｅｇｍｅｎｔｓｏｆ犛．犮犺犪犿犪犲犼犪狊犿犲，ａｎｄｔｏｓｔｕｄｙｔｈｅｅｆｆｅｃｔｓｏｆｃａｒｂｏｎｓｐｅｃｉｅｓ
ａｎｄｐｌａｎｔｇｒｏｗｔｈｒｅｇｕｌａｔｏｒｓｏｎｃｅｌｇｒｏｗｔｈａｎｄｆｌａｖｏｎｏｉｄｓａｃｃｕｍｕｌａｔｉｏｎｕｓｉｎｇｏｒｔｈｏｇｏｎａｌｔｅｓｔｓ．Ｔｈｅｌｏｏｓｅｃａｌｉ
ｓｕｉｔａｂｌｅｆｏｒｓｕｓｐｅｎｓｉｏｎｃｕｌｔｕｒｅｃａｎｂｅｉｎｄｕｃｅｄｆｒｏｍｓｔｅｍｓｅｇｍｅｎｔｓｏｎＭＳｗｉｔｈ２，４Ｄ１．０ｍｇ／Ｌ＋ＮＡＡ０．１
ｍｇ／Ｌ，ａｎｄｔｈｅｉｎｄｕｃｔｉｏｎｒａｔｅｃａｎｒｅａｃｈ９０％．Ｔｈｅｅｆｆｅｃｔｓｏｆｆａｃｔｏｒｓｉｎｔｈｅｏｒｔｈｏｇｏｎａｌｔｅｓｔｏｎｃｅｌｇｒｏｗｔｈａｎｄ
ｆｌａｖｏｎｏｉｄｓｃｏｎｔｅｎｔａｒｅｃｏｎｓｉｓｔｅｎｔａｎｄｉｎｔｈｅｏｒｄｅｒ２，４Ｄ＞ｃａｒｂｏｎｓｏｕｒｃｅ＞ＮＡＡ＞６ＢＡ．Ｈｉｇｈｅｒｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎｓ
ｏｆ２，４Ｄ，ＮＡＡｏｒ６ＢＡａｒｅｍｏｒｅｃｏｎｄｕｃｉｖｅｔｏｃｅｌｇｒｏｗｔｈａｎｄｆｌａｖｏｎｏｉｄｓａｃｃｕｍｕｌａｔｉｏｎ．Ｓｕｃｒｏｓｅｉｓｍｏｓｔｃｏｎｄｕ
ｃｉｖｅｔｏｃｅｌｇｒｏｗｔｈａｎｄｆｌａｖｏｎｏｉｄｓａｃｃｕｍｕｌａｔｉｏｎ，ｆｏｌｏｗｅｄｂｙｇｌｕｃｏｓｅａｎｄｆｒｕｃｔｏｓｅ．Ｔｈｅｏｐｔｉｍｕｍｍｅｄｉｕｍｆｏｒ
ｃｅｌｇｒｏｗｔｈａｎｄｆｌａｖｏｎｏｉｄｓａｃｃｕｍｕｌａｔｉｏｎｉｓＭＳ＋２，４Ｄ２．０ｍｇ／Ｌ＋ＮＡＡ１．０ｍｇ／Ｌ＋６ＢＡ０．５ｍｇ／Ｌ＋ｓｕｒｃｒｏｓｅ
３０ｇ／Ｌ．Ｔｈｅｒｅｉｓａｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔｐｏｓｉｔｉｖｅｃｏｒｒｅｌａｔｉｏｎｂｅｔｗｅｅｎｃｅｌｇｒｏｗｔｈａｎｄｆｌａｖｏｎｏｉｄｓｃｏｎｔｅｎｔ（犚２＝０．９６７，犘＜
０．０１），ｂｅｌｏｎｇｉｎｇｔｏｇｒｏｗｔｈｃｏｕｐｌｉｎｇｔｙｐｅｏｆｔｈｅｓｅｃｏｎｄａｒｙｍｅｔａｂｏｌｉｓｍｍｏｄｅｌ．
犓犲狔狑狅狉犱狊：犛狋犲犾犾犲狉犪犮犺犪犿犪犲犼犪狊犿犲；ｃｅｌｓｕｓｐｅｎｓｉｏｎｃｕｌｔｕｒｅ；ｆｌａｖｏｎｏｉｄｓ；ｃａｒｂｏｎｓｏｕｒｃｅ；ｐｌａｎｔｇｒｏｗｔｈｒｅｇｕｌａｔｏｒｓ
９３１第１９卷第６期 草业学报２０１０年