全 文 ：书不同防褐化措施对苏丹草愈伤诱导以及
抗褐化的效果研究
吕宗友，苏衍菁，赵国琦，邬彩霞
（扬州大学动物科学与技术学院，江苏 扬州２２５００９）
摘要：苏丹草组织材料在组织培养过程中会产生酚类物质，影响愈伤组织的生长，甚至导致愈伤组织死亡。本试验
以苏丹草幼穗为外植体，探讨了不同防褐化措施对苏丹草愈伤诱导的影响及抗褐化的效果防止。结果表明，活性
炭、ＶＣ、ＰＶＰ和 ＡｇＮＯ３ 均能不同程度地提高愈伤诱导率和降低褐化率。其中，培养基中低浓度的蔗糖（１０～２０
ｇ／Ｌ）能降低褐化率，但同时也降低了愈伤诱导率，而高浓度的蔗糖（４０～５０ｇ／Ｌ）能提高愈伤诱导率但同时也增加
了褐化率。柠檬酸能提高愈伤诱导率但不能防止褐化。当活性炭的添加量为０．１５ｇ／Ｌ时，愈伤的诱导及褐化防
止效果最好。
关键词：苏丹草；愈伤诱导；防褐化措施
中图分类号：Ｓ５４４＋．１０８；Ｓ４３５．４ 文献标识码：Ａ 文章编号：１００４５７５９（２０１１）０３０１７４０８
苏丹草（犛狅狉犵犺狌犿狊狌犱犪狀犲狀狊犲）为高粱属牧草，原产于非洲北部苏丹地区，主要以收获营养体为主［１］。苏丹草
具有产量高、耐刈割、再生性能强、营养价值丰富、适口性好以及耐贫瘠、抗逆能力强、适应范围广等优点，在世界
各地均有栽培，是中国南方主要栽培的牧草之一。但苏丹草易患病虫害，且消化率较低。通过转基因技术能够提
高苏丹草的抗病性，也能改良苏丹草的品质，提高利用率，获得优质高产的苏丹草，缓解南方粗饲料短缺的现状，
推动奶牛养殖业发展。
组织培养技术是转基因技术的基础，苏丹草和所有高粱属植物一样，在组织培养过程中易褐化，褐化产生的
酚类物质影响愈伤的生长，严重时导致愈伤死亡。褐化包括酶促褐化和非酶促褐化，褐化主要是由酶引起的，过
氧化物酶（ＰＯＤ）和多酚氧化酶（ＰＰＯ）在褐化过程中起主要作用［２］。酶促褐化必须具有酶、底物和氧３个条件。
褐化的发生是由于组织中多酚氧化酶被激活，酚类物质化合物被氧化形成褐色的醌类物质。引起褐化的酶的底
物主要是酚类化合物。
在组织培养防止褐化的研究中，抗褐化剂主要有活性炭（ａｃｔｉｖｅｃａｒｂｏｎ，ＡＣ）、维生素Ｃ（ＶＣ）、硝酸银 （Ａｇ
ＮＯ３）、聚乙烯吡咯烷酮（ｐｏｌｙｖｉｎｙｌｐｙｒｒｏｌｉｄｏｎｅ，ＰＶＰ）及柠檬酸（ｃｉｔｒｉｃａｃｉｄ）等。此外，培养基中糖浓度与次生代
谢产物的分泌量有一定的关系［３］。目前，尚未有苏丹草愈伤褐化防止的研究报道。本试验拟探讨不同防褐化措
施对苏丹草褐化的防止及对其愈伤诱导的影响，为开展苏丹草转基因研究提供依据。
１ 材料与方法
１．１ 材料
以从日本引进的苏丹草恢复系２０９８幼穗为外植体，该材料由南京农业科学院钟小仙老师惠赠。
１．２ 方法
１．２．１ 外植体的准备 采取大小均匀的苏丹草幼穗在４℃冷藏２４ｈ，用含７５％（ｖ／ｖ）酒精棉擦拭幼穗苞壳表面，
在无菌的环境下小心剥离出幼穗，剪成３～４ｃｍ小段，先用７５％的酒精表面灭菌３０ｓ，再用０．１％（ｗ／ｖ）的升汞灭
菌１５ｍｉｎ，同时加入１～２滴的吐温（ｔｗｅｅｎ），最后用无菌水清洗４～５次［４６］。
１．２．２ 培养基的配制及外植体的接种 以 ＭＳ培养基［７］为基本培养基，培养基的ｐＨ调至５．８，在１２１℃、１０４
ｋＰａ下灭菌２５ｍｉｎ，后分装在培养皿中（直径：９０ｍｍ；高：１５ｍｍ）。激素添加量［８］分别为２，４Ｄ３．０ｍｇ／Ｌ，激动
１７４－１８１
２０１１年６月
草 业 学 报
ＡＣＴＡＰＲＡＴＡＣＵＬＴＵＲＡＥＳＩＮＩＣＡ
第２０卷 第３期
Ｖｏｌ．２０，Ｎｏ．３
收稿日期：２０１００４１２；改回日期：２０１００５１７
基金项目：江苏省研究生科技创新基金资助。
作者简介：吕宗友（１９８３），男，四川德阳人，硕士。Ｅｍａｉｌ：２ｚｏｎｇｙｏｕ＠１６３．ｃｏｍ
通讯作者。Ｅｍａｉｌ：ｊｓｚｈａｏｇｕｏｑｉ＠ｓｏｈｕ．ｃｏｍ
素（ｋｉｎｅｔｉｎ，ＫＴ）０．１ｍｇ／Ｌ。抗褐化剂活性炭、ＰＶＰ、ＶＣ、柠檬酸、亚硫酸钠、硝酸银及不同浓度蔗糖的添加方式
如表１。
将外植体接种在培养皿中，每个培养皿中６～９个，重复５次。暗培养箱中（２５±２）℃培养，４周后计数。
表１ 防褐化物质浓度
犜犪犫犾犲１ 犜犺犲犫狉狅狑狀犻狀犵犪犵犲狀狋犮狅狀犮犲狀狋狉犪狋犻狅狀
防褐化物质
Ｂｒｏｗｎｉｎｇａｇｅｎｔ
浓度设置
Ａｄｊｕｓｔｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎ（ｇ／Ｌ）
灭菌方式
Ｓｔｅｒｉｌｉｚａｔｉｏｎｍｅｔｈｏｄ
添加方式
Ｍｅｔｈｏｄ
ＡＣ ０．０５，０．１５，０．１８，０．２７ 高温灭菌 Ｍｏｉｓｔｈｅａｔｓｔｅｒｉｌｉｚａｔｉｏｎ 配制培养基时加入Ａｄｄｉｎｇｉｎｔｏｍｅｄｉｕｍｄｉｒｅｃｔｌｙ
ＰＶＰ ０．０１，０．０４，０．０８，０．１６ 过滤灭菌Ｆｉｌｔｒａｔｉｏｎ 培养基灭菌后加入Ａｄｄｉｎｇｉｎｔｏｍｅｄｉｕｍａｆｔｅｒｓｔｅｒｉｌｉｚａｔｉｏｎ
ＶＣ ０．０５，０．１５，０．２５，０．３５，０．４５ 过滤灭菌ｆｉｌｔｒａｔｉｏｎ 培养基灭菌后加入Ａｄｄｉｎｇｉｎｔｏｍｅｄｉｕｍａｆｔｅｒｓｔｅｒｉｌｉｚａｔｉｏｎ
ＡｇＮＯ３ ０．００５，０．０１０，０．０１５，０．０２０ 过滤灭菌ｆｉｌｔｒａｔｉｏｎ 培养基灭菌后加入Ａｄｄｉｎｇｉｎｔｏｍｅｄｉｕｍａｆｔｅｒｓｔｅｒｉｌｉｚａｔｉｏｎ
柠檬酸Ｃｉｔｒｉｃａｃｉｄ ０．５，１．０，１．５，２，５ 过滤灭菌ｆｉｌｔｒａｔｉｏｎ 培养基灭菌后加入Ａｄｄｉｎｇｉｎｔｏｍｅｄｉｕｍａｆｔｅｒｓｔｅｒｉｌｉｚａｔｉｏｎ
蔗糖Ｓｕｃｒｏｓｅ １０，２０，３０，４０，５０ 高温灭菌 Ｍｏｉｓｔｈｅａｔｓｔｅｒｉｌｉｚａｔｉｏｎ 配制培养基时加入Ａｄｄｉｎｇｉｎｔｏｍｅｄｉｕｍｄｉｒｅｃｔｌｙ
ＡＣ：活性炭Ａｃｔｉｖｅｃａｒｂｏｎ；ＰＶＰ：聚乙烯吡咯烷酮Ｐｏｌｙｖｉｎｙｌｐｙｒｒｏｌｉｄｏｎｅ；ＶＣ：维生素ＣＶｉｔａｍｉｎＣ；下同Ｔｈｅｓａｍｅｂｅｌｏｗ．
１．３ 统计分析
褐化率＝
褐化数
接种数×１００％
诱导率＝
愈伤个数
接种数 ×１００％
采用Ｅｘｃｅｌ２００３软件和ＳＰＳＳ１６．０方差分析过程（ＡＮＯＶＡ）进行统计分析。
２ 结果与分析
２．１ 活性炭的作用效果
将幼穗接种在培养基上后，幼穗的绿色缓慢转变为黄色，大约１７ｄ时，开始有愈伤长出。大部分愈伤在花序
轴上长出，仅有少量在花序上长出。经过幼穗诱导得到的愈伤大都是致密、黄色的胚性愈伤。当培养基中活性炭
的浓度为０．０５ｇ／Ｌ时愈伤诱导率增加，但未达显著水平（犘＞０．０５）；当活性炭的浓度增加到０．１５ｇ／Ｌ时，愈伤的
诱导率显著增加（犘＜０．０５）；当活性炭的浓度超过０．１５ｇ／Ｌ时，诱导率又有所下降（图１）。活性炭的浓度为０．２７
和０．１５ｇ／Ｌ时，褐化率较小，但差异不显著（图２）。以上结果表明，活性炭的浓度为０．１５ｇ／Ｌ时，愈伤诱导率最
大，褐化率最低，是活性炭添加的最适浓度。
图１ 不同活性炭浓度对诱导率的影响
犉犻犵．１ 犈犳犳犲犮狋狅犳犱犻犳犳犲狉犲狀狋犃犆犮狅狀犮犲狀狋狉犪狋犻狅狀
狅狀犮犪犾狌狊犻狀犱狌犮狋犻狅狀
图２ 不同活性炭浓度对褐化的影响
犉犻犵．２ 犈犳犳犲犮狋狅犳犱犻犳犳犲狉犲狀狋犃犆犮狅狀犮犲狀狋狉犪狋犻狅狀
狅狀犮犪犾狌狊犫狉狅狑狀犻狀犵
不同字母表示差异显著（犘＜０．０５），下同 Ｄｉｆｆｅｒｅｎｔｓｍａｌｌｅｔｔｅｒｓａｒｅｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔｌｙｄｉｆｆｅｒｅｎｔａｔ犘＜０．０５，ｔｈｅｓａｍｅｂｅｌｏｗ
５７１第２０卷第３期 草业学报２０１１年
２．２ ＶＣ 对褐化的影响
当培养基中ＶＣ 的添加量为０．０５ｇ／Ｌ时，诱导率增加。随着ＶＣ 浓度的增加，诱导率有增加的趋势。当添加
量为０．３５ｇ／Ｌ时，诱导率达到了最大。ＶＣ 的添加量继续增加时，诱导率不再增加，有下降的趋势（图３）。当ＶＣ
的添加量为０．３５ｇ／Ｌ时，愈伤的褐化率最低，当 ＶＣ 的浓度继续增加时，愈伤褐化率并没有减少，反而增加
（图４）。
图３ 不同犞犆 浓度对诱导率的影响
犉犻犵．３ 犈犳犳犲犮狋狅犳犱犻犳犳犲狉犲狀狋犞犆犮狅狀犮犲狀狋狉犪狋犻狅狀
狅狀犮犪犾狌狊犻狀犱狌犮狋犻狅狀
图４ 不同犞犆 浓度对褐化的影响
犉犻犵．４ 犈犳犳犲犮狋狅犳犱犻犳犳犲狉犲狀狋犞犆犮狅狀犮犲狀狋狉犪狋犻狅狀
狅狀犮犪犾狌狊犫狉狅狑狀犻狀犵
２．３ ＰＶＰ的作用效果
试验中随着ＰＶＰ添加量的增加，愈伤率逐渐增加，当ＰＶＰ添加到０．０８ｇ／Ｌ时，愈伤率最大，ＰＶＰ的添加量
继续增加时，愈伤率减少（图５）。而当ＰＶＰ的添加量为０．０１ｇ／Ｌ时，褐化率有最大值，当添加量增加到０．１６ｇ／Ｌ
时褐化率最低（图６）。
图５ 不同犘犞犘浓度对诱导率的影响
犉犻犵．５ 犈犳犳犲犮狋狅犳犱犻犳犳犲狉犲狀狋犘犞犘犮狅狀犮犲狀狋狉犪狋犻狅狀
狅狀犮犪犾狌狊犻狀犱狌犮狋犻狅狀
图６ 不同犘犞犘浓度对褐化的影响
犉犻犵．６ 犈犳犳犲犮狋狅犳犱犻犳犳犲狉犲狀狋犘犞犘犮狅狀犮犲狀狋狉犪狋犻狅狀
狅狀犮犪犾狌狊犫狉狅狑狀犻狀犵
２．４ 硝酸银对褐化的影响
硝酸银在组织培养中运用很广泛，其中起主要作用的是Ａｇ＋。试验中Ａｇ＋的添加量为０．０１ｇ／Ｌ，愈伤诱导
率最大。当Ａｇ＋添加量大于０．０１ｇ／Ｌ时，愈伤诱导率降低，当Ａｇ＋的添加量达到０．０２ｇ／Ｌ时，严重制约愈伤的
诱导（图７）。Ａｇ＋的添加量为０．０１ｇ／Ｌ时，褐化率最低。当Ａｇ＋的添加量大于０．０１ｇ／Ｌ时，褐化率升高（图８）。
６７１ ＡＣＴＡＰＲＡＴＡＣＵＬＴＵＲＡＥＳＩＮＩＣＡ（２０１１） Ｖｏｌ．２０，Ｎｏ．３
图７ 不同犃犵犖犗３ 浓度对诱导率的影响
犉犻犵．７ 犈犳犳犲犮狋狅犳犱犻犳犳犲狉犲狀狋犃犵犖犗３犮狅狀犮犲狀狋狉犪狋犻狅狀
狅狀犮犪犾狌狊犻狀犱狌犮狋犻狅狀
图８ 不同犃犵犖犗３ 浓度对褐化的影响
犉犻犵．８ 犈犳犳犲犮狋狅犳犱犻犳犳犲狉犲狀狋犃犵犖犗３犮狅狀犮犲狀狋狉犪狋犻狅狀
狅狀犮犪犾狌狊犫狉狅狑狀犻狀犵
２．５ 柠檬酸对褐化的影响
柠檬酸的添加量为０．５ｇ／Ｌ时，愈伤诱导率略低于对照组。柠檬酸添加量为１．０ｇ／Ｌ时，愈伤的诱导率增
加，之后诱导率有降低的趋势，柠檬酸添加量增大到２．０ｇ／Ｌ时，愈伤率增加。柠檬酸添加量为５．０ｇ／Ｌ时，愈伤
诱导率达到最大（图９）。柠檬酸的添加量为０．５ｇ／Ｌ时，褐化率最大，之后，随着柠檬酸的添加增加到１．０和１．５
ｇ／Ｌ时，褐化率降低，但差异不显著（犘＞０．０５）。柠檬酸添加量增加到２．０ｇ／Ｌ时，褐化率显著高于对照组（犘＜
０．０５）（图１０）。
图９ 不同柠檬酸浓度对诱导率的影响
犉犻犵．９ 犈犳犳犲犮狋狅犳犱犻犳犳犲狉犲狀狋犮犻狋狉犻犮犪犮犻犱犮狅狀犮犲狀狋狉犪狋犻狅狀
狅狀犮犪犾狌狊犻狀犱狌犮狋犻狅狀
图１０ 不同柠檬酸浓度对褐化的影响
犉犻犵．１０ 犈犳犳犲犮狋狅犳犱犻犳犳犲狉犲狀狋犮犻狋狉犻犮犪犮犻犱犮狅狀犮犲狀狋狉犪狋犻狅狀
狅狀犮犪犾狌狊犫狉狅狑狀犻狀犵
２．６ 蔗糖浓度对褐化的影响
不同的蔗糖浓度也能影响愈伤的诱导率和褐化率。蔗糖浓度为１０～４０ｇ／Ｌ时，随着蔗糖浓度的增加，愈伤
褐化率增加（图１１），而同样在蔗糖浓度为１０～４０ｇ／Ｌ时，愈伤率最大，当蔗糖浓度大于４０ｇ／Ｌ时，愈伤率下降，
褐化率增加。
３ 讨论
３．１ 活性炭对褐化的影响
Ｎｇｕｙｅｎ等［９］报道，在培养基中添加活性炭的量为１～５ｇ／Ｌ时，能够明显减少高粱幼胚产生的酚类物质。本
试验表明，当活性炭的添加量为０．１５和０．２７ｇ／Ｌ时，能显著减轻褐化作用，在０．１５ｇ／Ｌ时，苏丹草幼穗的组织
产生愈伤诱导数最大。活性炭能提高诱导率可能是因为活性炭能释放吸收的生长调节剂（ＰＧＲ）物质，促进愈伤
７７１第２０卷第３期 草业学报２０１１年
的出愈。光照能分解生长激素类物质。而活性炭的添
图１１ 不同蔗糖浓度对诱导率和褐化的影响
犉犻犵．１１ 犈犳犳犲犮狋狅犳犱犻犳犳犲狉犲狀狋狊狌犮狉狅狊犲犮狅狀犮犲狀狋狉犪狋犻狅狀
狅狀犮犪犾狌狊犫狉狅狑狀犻狀犵犪狀犱犻狀犱狌犮犲犱
加也能为外植体提供暗环境，减少因光照而降解的激
素类物质［１０］，保证了外植体所需的足够浓度的激素，
提高了诱导率。
据报道，蔗糖经过高温灭菌后，部分降解产生了
５羟甲基糠醛（５ｈｙｄｒｏｘｙｍｅｔｈｙｌ２ｆｕｒａｌｄｅｈｙｄｅ），该类
物质对愈伤组织的生长有抑制作用［１１］。在培养基中
添加活性炭，能吸附该物质，保持愈伤的正常生长。本
试验中活性炭的添加量为０．０５ｇ／Ｌ时，愈伤的诱导数
增加不明显，可能是由于活性炭的添加量不足造成的，
当活性炭的添加量达到０．１５ｇ／Ｌ时，能吸附５羟甲基
糠醛等生长抑制物质，此时愈伤数最多。活性炭也能
诱导胚性愈伤的形成［１２］。本试验添加活性炭所得到
的均为白色、致密的胚性愈伤。外植体接种在培养基中既能吸收 ＮＯ３－，又能吸收 ＮＨ４＋，正常情况下吸收
ＮＨ４＋的量大于ＮＯ３－，从而使ｐＨ降低［１３］。如果在培养基中添加活性炭，活性炭能够使ｐＨ保持在５．５～６．０的
正常水平，有利于愈伤的正常生长［１４］。本试验的活性炭添加量为０．１５ｇ／Ｌ时，有最大的诱导率，也可能与这有
关。也有试验表明，活性炭的添加对褐化没有帮助［１５］，而本试验表明活性炭在一定程度上能抑制褐化，提高愈伤
数。
３．２ ＶＣ 对褐化的影响
ＶＣ 作为褐化抑制剂在组织培养中使用频率很高，目前有２种处理方式：一是通过对外植体预处理［１６］（浸泡
在ＶＣ 溶液中一段时间）；二是直接添加到培养基中［１７］。其防止褐化的机理也有３点：一是ＶＣ 能清除组织中产
生的自由基，减少次生代谢产物酚类物质的积累；二是引起褐化的多酚氧化酶（ＰＰＯ）是一种含铜的蛋白质，其活
性依赖于铜的氧化还原作用。ＶＣ 能将Ｃｕ２＋还原成Ｃｕ＋，抑制了该酶的活性，该种酶不耐热，在４０～５０℃时活性
迅速下降，而在室温至４０℃时则保持稳定的活性。
本试验将ＶＣ 直接加在高温灭菌后的培养基中，也能明显降低褐化，当ＶＣ 的添加量为０．３５ｇ／Ｌ效果最好。
也有报道认为，ＶＣ 不但降低了酚类物质的含量，也延长了愈伤的存活时间［１７］。但Ｌｉｎｉｎｇｔｏｎ［１８］认为，在培养基中
添加ＶＣ 对防止褐化没有效果。这可能是由于将ＶＣ 添加到培养基中经高温灭菌破坏了ＶＣ，使ＶＣ 丧失了功能所
致。ＶＣ 也能消除有毒有害物质的积累，如ＧＡ３，各种生长激素等，提高愈伤的诱导率［１９］。本试验添加ＶＣ 也提
高了诱导率，当ＶＣ 的添加量为０．２５ｇ／Ｌ时效果最好。
３．３ ＰＶＰ对褐化的影响
ＰＶＰ是一种水溶性物质，通过氢键与酚类物质结合，以此来减少酚类物质的毒害。Ｂａｂｂａｒ和Ｇｕｐｔａ［２０］认为
花药的褐化是因为积累了大量的酚类物质，ＰＶＰ能够吸收酚类物质，提高花药的诱导率。Ｏｇｉｔａ［２１］的试验也表
明，添加０．２５ｇ／ＬＰＶＰ不但能防止褐化，而且也能提高外植体的诱导率。本试验中添加０．０８ｇ／ＬＰＶＰ时有最
大的诱导率，但此时的褐化数不是最少，当增大ＰＶＰ的浓度到０．１６ｇ／Ｌ时，褐化数最少。也有试验表明，ＰＶＰ
能够防止愈伤组织因产生的酚类物质导致的坏死而提高愈伤数［２２］，本试验中愈伤数增加来自两部分，一部分是
增加了愈伤诱导数，二是减少了愈伤的死亡数。虽然ＰＶＰ能防止褐化，但不能完全消除褐化［２０］，当ＰＶＰ的添加
量为０．１６ｇ／Ｌ时，ＰＶＰ能最大限度的防止褐化，同时，愈伤数降低。这可能是高浓度ＰＶＰ既吸收了酚类物质，
又吸收了各种生长调节剂（ＰＧＲ），降低了其在培养基中的浓度，影响了愈伤的诱导。
３．４ 硝酸银对褐化的影响
植物材料在密闭容器中或受伤后都会产生乙烯［２３］，乙烯大量积累会使愈伤褐化。硝酸银作为一种褐化抑制
剂，其主要作用是抑制乙烯的产生。银离子通过竞争性结合位于细胞膜上的乙烯受体蛋白，阻止或降低乙烯的作
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用［２４］，从而防止褐化。乙烯的积累影响了愈伤的生长及植物形态的建成，乙烯也能促进或抑制愈伤的形成［２５］。
本试验中添加不同浓度的硝酸银都能降低褐化，在０．０１ｇ／Ｌ时能将褐化愈伤数控制在最低水平，但并没有完全
消除褐化。多数试验表明，添加乙烯抑制剂硝酸银均能促进细胞的生长［２６］和诱导率［２７］。本试验添加０．０１ｇ／Ｌ
的硝酸银有最多愈伤数，但随着硝酸银浓度的升高，愈伤数减少，这可能是高浓度的银离子对愈伤造成了伤害。
３．５ 柠檬酸对褐化的影响
柠檬酸在组织培养中往往作为前处理剂处理外植体来防止褐化［２８］。柠檬酸是一种酸性物质，当外植体浸泡
在其中时，因其酸性作用降低了外植体本身的ｐＨ。多酚氧化酶在ｐＨ为６．５左右时活性最大，随着ｐＨ的降低，
多酚氧化酶的活性也降低，柠檬酸通过提供酸性环境抑制多酚氧化酶的活性防止褐化［２９］。这是因为ｐＨ在４．０
以下时，ＰＰＯ酶活性中心的Ｃｕ２＋与周围的结合开始松弛，在有柠檬酸的条件下，Ｃｕ２＋和柠檬酸生成了螯合物，除
去了ＰＰＯ酶中的Ｃｕ２＋，使ＰＰＯ酶变性失活，从而抑制褐化［３０］。本试验用柠檬酸预处理外植体后，褐化不仅没有
降低，反而更严重了，这可能是柠檬酸对外植体造成了损伤，此点需深入研究。
本试验中诱导率随着柠檬酸添加量的增加而增加，在１．０ｇ／Ｌ时，有较大诱导率，之后随着添加浓度的增加，
诱导率降低；当柠檬酸的添加量增大到５．０ｇ／Ｌ时，诱导率达到最大，这可能与柠檬酸也能减少愈伤的坏死有
关［３１］。当柠檬酸的添加量达到一定值时，就会有负面的效果，这可能是高浓度柠檬酸会影响愈伤生长能量代谢
过程中的电子转移［３２］。本试验柠檬酸的添加量并没有达到最大量。
３．６ 蔗糖浓度对褐化的影响
蔗糖在组织培养中作为主要碳源物质，在组织培养中作为细胞分裂与生长的能量来源。经高压灭菌后，部分
降解为Ｄ葡萄糖、Ｄ果糖。蔗糖也是细胞渗透调节物质，对愈伤组织的诱导和褐变有制约作用。一般认为，影响
外植体褐变的因素有外植体的基因型、培养基的成分和培养材料所处的培养环境等。适当增加蔗糖的浓度能增
加各种酶的活性［３３］，从而促进次生代谢产物的合成。本试验随着蔗糖浓度的增加，酚类物质的合成增加，褐化的
愈伤数增加。当蔗糖浓度的添加量从１０ｇ／Ｌ增加到４０ｇ／Ｌ时，愈伤褐化数增加不显著（犘＞０．０５），当蔗糖浓度
添加到５０ｇ／Ｌ时，褐化愈伤数显著增加（犘＜０．０５）。Ｐａｒｋ等［３４］的研究也表明，当蔗糖浓度较低时，能促进愈伤
组织的生长，高浓度的蔗糖能促进褐化。本试验中当蔗糖在较低浓度１０～４０ｇ／Ｌ时，愈伤数增加，蔗糖浓度大于
４０ｇ／Ｌ时，愈伤数降低，褐化数增加。
４ 结论
不同的褐化防止手段对苏丹草愈伤的作用效果是不同的。当柠檬酸浓度为５ｇ／Ｌ时，愈伤的诱导数最大，诱
导愈伤效果为：柠檬酸＞活性炭＞ＰＶＰ＞ＶＣ＞蔗糖＞硝酸银；在ＰＶＰ浓度为０．１６ｇ／Ｌ时，褐化的防止效果最
好：ＰＶＰ＞硝酸银＞ＶＣ＞活性炭＞蔗糖＞柠檬酸。添加柠檬酸虽然能得到大量的愈伤，但得到的愈伤颗粒细小，
水渍化严重，褐化数高，继代后大部分死亡，因此，柠檬酸不利于用作苏丹草的褐化抑制剂。经活性炭作用后得到
的愈伤诱导数多，呈白色，质密，生长迅速，褐化愈伤少，均为胚性愈伤。在苏丹草幼穗诱导中，活性炭为最佳的褐
化抑制剂，当活性炭的添加量为０．１５ｇ／Ｌ时，能有效防止褐化，提高愈伤的诱导率。
参考文献：
［１］ 李文西，鲁剑巍，杨娟．苏丹草－黑麦草轮作制中施肥对饲草产量及养分吸收的影响［Ｊ］．草业学报，２００９，１８（３）：１６５１７０．
［２］ ＨｅＹ，ＧｕｏＸ，ＬｕＲ，犲狋犪犾．Ｃｈａｎｇｅｓｉｎｍｏｒｐｈｏｌｏｇｙａｎｄｂｉｏｃｈｅｍｉｃａｌｉｎｄｉｃｅｓｉｎｂｒｏｗｎｉｎｇｃａｌｕｓｄｅｒｉｖｅｄｆｒｏｍ犑犪狋狉狅狆犺犪犮狌狉犮犪狊
ｈｙｐｏｃｏｔｙｌｓ［Ｊ］．ＰｌａｎｔＣｅｌ，ＴｉｓｓｕｅａｎｄＯｒｇａｎＣｕｌｔｕｒｅ，２００９，９８：１１１７．
［３］ ＳｕｎｇＪＨ．Ｂａｉｃａｌｉｎｐｒｏｄｕｃｔｉｏｎｉｎｔｒａｎｓｆｏｒｍｅｄｈａｉｒｙｒｏｏｔｃｌｏｎｅｓｏｆ犛犮狌狋犲犾犾犪狉犻犪犫犪犻犮犪犾犲狀狊犻狊［Ｊ］．ＢｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙａｎｄＢｉｏｐｒｏｃｅｓｓＥｎ
ｇｉｎｅｅｒｉｎｇ，２００６，１１：１０５１０９．
［４］ 徐春波，米福贵，王勇，等．影响冰草成熟胚组织培养再生体系频率的因素［Ｊ］．草业学报，２００９，１８（１）：８１８５．
［５］ 王友生，王瑛，李阳春．三叶草愈伤组织诱导及分化的研究［Ｊ］．草业学报，２００９，１８（２）：２１２２１５．
［６］ 李晶，孙吉雄，梁慧敏．日本矮生沿阶草愈伤组织的诱导及其分化［Ｊ］．草业科学，２００９，２６（４）：１５０１５３．
［７］ ＭｕｒａｓｈｉｇｅＴ，ＳｋｏｏｇＦ．Ａｒｅｖｉｓｅｄｍｅｄｉｕｍｆｏｒｒａｐｉｄｇｒｏｗｔｈａｎｄｂｉｏａｓｓａｙｗｉｔｈｔｏｂａｃｃｏｔｉｓｓｕｅｃｕｌｔｕｒｅｓ［Ｊ］．ＰｈｙｓｉｏｌｏｇｉａＰｌａｎｔａ
９７１第２０卷第３期 草业学报２０１１年
ｒｕｍ，１９６２，１５：４７３４９７．
［８］ 钟小仙，佘建明，顾洪如，等．苏丹草幼穗离体培养植株的再生技术［Ｊ］．江苏农业学报，２００５，２１（４）：３３１３３５．
［９］ ＮｇｕｙｅｎＴ Ｖ，ＴｈｕＴＴ，ＣｌａｅｙｓＭ，犲狋犪犾．Ａｇｒｏｂａｃｔｅｒｉｕｍｍｅｄｉａｔｅｄｔｒａｎｓｆｏｒｍａｔｉｏｎｏｆｓｏｒｇｈｕｍ （犛狅狉犵犺狌犿犫犻犮狅犾狅狉 （Ｌ．）
Ｍｏｅｎｃｈ）ｕｓｉｎｇａｎｉｍｐｒｏｖｅｄｉｎｖｉｔｒｏｒｅｇｅｎｅｒａｔｉｏｎｓｙｓｔｅｍ［Ｊ］．ＩｎＰｌａｎｔＣｅｌＴｉｓｓＯｒｇａｎＣｕｌｔｕｒｅ，２００７，９１：１５５１６４．
［１０］ ＮｗａｎｋｏＢＡ，ＫｒｉｋｏｒｉａｎＡＤ．Ｍｏｒｐｈｏｇｅｎｅｔｉｃｐｏｔｅｎｔｉａｌｏｆｅｍｂｒｙｏａｎｄｓｅｅｄｌｉｎｇｄｅｒｉｖｅｄｃａｌｕｓｏｆ犈犾犪犲犻狊犵狌犻狀犲犲狀狊犻狊Ｊａｃｑ．ｖａｒ．
ｐｉｓｉｆｅｒａＢｅｃｃ［Ｊ］．ＡｎｎａｌｓｏｆＢｏｔａｎｙ，１９８３，５１：６５７６．
［１２］ ＴｈｏｍａｓＴＤ．Ｔｈｅｒｏｌｅｏｆａｃｔｉｖａｔｅｄｃｈａｒｃｏａｌｉｎｐｌａｎｔｔｉｓｓｕｅｃｕｌｔｕｒｅ［Ｊ］．ＩｎＢｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙＡｄｖａｎｃｅｓ，２００８，２６（６）：６２８６３１．
［１３］ ＰｉｎｔｏＧ，ＳｉｌｖａＳ，ＰａｒｋＹＳ，犲狋犪犾．Ｆａｃｔｏｒｓｉｎｆｌｕｅｎｃｉｎｇｓｏｍａｔｉｃｅｍｂｒｙｏｇｅｎｅｓｉｓｉｎｄｕｃｔｉｏｎｉｎ犈狌犮犪犾狔狆狋狌狊犵犾狅犫狌犾狌狊Ｌａｂｉｌ．：ｂａｓａｌ
ｍｅｄｉｕｍａｎｄａｎｔｉｂｒｏｗｎｉｎｇａｇｅｎｔｓ［Ｊ］．ＰｌａｎｔＣｅｌ，ＴｉｓｓｕｅａｎｄＯｒｇａｎＣｕｌｔｕｒｅ，２００８，９５：７９８８．
［１４］ ＥｙｍａｒＥ，ＡｌｅｇｒｅＪ，ＴｏｒｉｂｉｏＭ，犲狋犪犾．Ｅｆｆｅｃｔｏｆａｃｔｉｖａｔｅｄｃｈａｒｃｏａｌａｎｄ６ｂｅｎｚｙｌａｄｅｎｉｎｅｏｎｉｎｖｉｔｒｏｎｉｔｒｏｇｅｎｕｐｔａｋｅｂｙ犔犪犵犲狉
狊狋狉狅犲犿犻犪犻狀犱犻犮犪［Ｊ］．ＰｌａｎｔＣｅｌ，ＴｉｓｓｕｅａｎｄＯｒｇａｎＣｕｌｔｕｒｅ，２０００，６３：５７６５．
［１５］ ＷｅｉＸ，ＧｏｕＸ，ＹｕａｎＴ，犲狋犪犾．ＡｈｉｇｈｌｙｅｆｆｉｃｉｅｎｔｉｎｖｉｔｒｏｐｌａｎｔｒｅｇｅｎｅｒａｔｉｏｎｓｙｓｔｅｍａｎｄＡｇｒｏｂａｃｔｅｒｉｕｍｍｅｄｉａｔｅｄｔｒａｎｓｆｏｒｍａ
ｔｉｏｎｉｎ犘犾狌犿犫犪犵狅狕犲狔犾犪狀犻犮犪［Ｊ］．ＰｌａｎｔＣｅｌＲｅｐｏｒｔｅｒｓ，２００６，２５：５１３５２１．
［１６］ ＱｕＲ，ＣｈａｕｄｈｕｒｙＡ．Ｉｍｐｒｏｖｅｄｙｏｕｎｇｉｎｆｌｏｒｅｓｃｅｎｃｅｃｕｌｔｕｒｅａｎｄｒｅｇｅｎｅｒａｔｉｏｎｏｆ‘ｔｉｆｗａｙ’ｂｅｒｍｕｄａｇｒａｓｓ（犆狔狀狅犱狅狀狋狉犪狀狊
狏犪犪犾犲狀狊犻狊ｘｃ．ｄａｃｔｙｌｏｎ）［Ｊ］．ＩｎＩｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌＴｕｒｆｇｒａｓｓＳｏｃｉｅｔｙＲｅｓｅａｒｃｈＪｏｕｒｎａｌ，２００１，９：１９８２０１．
［１７］ ＪａｙａｂａｌａｎＰＢＡＮ．Ｉｎｖｉｔｒｏｍａｓｓｐｒｏｐａｇａｔｉｏｎａｎｄｄｉｖｅｒｓｅｃａｌｕｓｏｒｉｅｎｔａｔｉｏｎｏｎ犛犲狊犪犿狌犿犻狀犱犻犮狌犿Ｌ．－ａｎｉｍｐｏｒｔａｎｔｏｉｌｐｌａｎｔ［Ｊ］．
ＪｏｕｒｎａｌｏｆＡｇｒｉｃｕｌｔｕｒａｌＴｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，２００６，２：２５９２６９．
［１８］ ＬｉｎｉｎｇｔｏｎＩＭ．Ｉｎｖｉｔｒｏｐｒｏｐａｇａｔｉｏｎｏｆ犇犻狆狋犲狉狅犮犪狉狆狌狊犪犾犪狋狌狊ａｎｄ犇犻狆狋犲狉狅犮犪狉狆狌狊犻狀狋狉犻犮犪狋狌狊［Ｊ］．ＰｌａｎｔＣｅｌ，ＴｉｓｓｕｅａｎｄＯｒｇａｎ
Ｃｕｌｔｕｒｅ，１９９１，２７：８１８８．
［１９］ ＪｏｙＲＷ，ＰａｔｅｌＫＲ，ＴｈｏｒｐｅＴＡ．Ａｓｃｏｒｂｉｃａｃｉｄｅｎｈａｎｃｅｍｅｎｔｏｆｏｒｇａｎｏｇｅｎｅｓｉｓｉｎｔｏｂａｃｃｏｃａｌｕｓ［Ｊ］．ＰｌａｎｔＣｅｌ，Ｔｉｓｓｕｅａｎｄ
ＯｒｇａｎＣｕｌｔｕｒｅ，１９８８，１３：２１９２２８．
［２０］ ＢａｂｂａｒＳ，ＧｕｐｔａＳ．Ｉｎｄｕｃｔｉｏｎｏｆａｎｄｒｏｇｅｎｅｓｉｓａｎｄｃａｌｕｓｆｏｒｍａｔｉｏｎｉｎｖｉｔｒｏｃｕｌｔｕｒｅｄａｎｔｈｅｒｓｏｆａｍｙｒｔａｃｅｏｕｓｆｒｕｉｔｔｒｅｅ（犘狊犻犱犻
狌犿犵狌犪犼犪狏犪Ｌ．）［Ｊ］．ＪｏｕｒｎａｌｏｆＰｌａｎｔＲｅｓｅａｒｃｈ，１９８６，９９：７５８３．
［２１］ ＯｇｉｔａＳ．Ｃａｌｕｓａｎｄｃｅｌｓｕｓｐｅｎｓｉｏｎｃｕｌｔｕｒｅｏｆｂａｍｂｏｏｐｌａｎｔ［Ｊ］．ＰｈｙｌｏｓｔａｃｈｙｓｎｉｇｒａＩｎＰｌａｎｔＢｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，２００５，２２：１１９
１２５．
［２２］ ＢｒｕｋｈｉｎＶＢ，ＭｏｌｅｖａＩＲ，ＦｉｌｏｎｏｖａＬＨ，犲狋犪犾．Ｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｉｖｅａｃｔｉｖｉｔｙｏｆｃａｌｕｓｃｕｌｔｕｒｅｓｏｆ犜犪狓狌狊犫犪犮犮犪狋犪Ｌ．ｉｎｒｅｌａｔｉｏｎｔｏａｎ
ｔｉｃａｎｃｅｒｄｉｔｅｒｐｅｎｏｉｄｔａｘｏｌｂｉｏｓｙｎｔｈｅｓｉｓ［Ｊ］．ＢｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙＬｅｔｔｅｒｓ，１９９６，１８：１３０９１３１４．
［２３］ ＶｉｎｏｄＫ，ＧｉｒｉｄｈａｒＰ，ＧｏｋａｒｅＡＲ．ＡｇＮＯ３－ａｐｏｔｅｎｔｉａｌｒｅｇｕｌａｔｏｒｏｆｅｔｈｙｌｅｎｅａｃｔｉｖｉｔｙａｎｄｐｌａｎｔｇｒｏｗｔｈｍｏｄｕｌａｔｏｒ［Ｊ］．Ｅｌｅｃ
ｔｒｏｎｉｃＪｏｕｒｎａｌｏｆＢｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，２００９，（１２）：１１５．
［２４］ ＧｏｈＣＪ，ＮｇＳＫ，ＬａｋｓｈｍａｎａｎＰ，犲狋犪犾．Ｔｈｅｒｏｌｅｏｆｅｔｈｙｌｅｎｅｏｎｄｉｒｅｃｔｓｈｏｏｔｂｕｄｒｅｇｅｎｅｒａｔｉｏｎｆｒｏｍｍａｎｇｏｓｔｅｅｎ（犌犪狉犮犻狀犻犪
犿犪狀犵狅狊狋犪狀犪Ｌ．）ｌｅａｖｅｓｃｕｌｔｕｒｅｄｉｎｖｉｔｒｏ［Ｊ］．ＰｌａｎｔＳｃｉｅｎｃｅ，１９９７，１２４（２）：１９３２０２．
［２５］ ＤｉｍａｓｉＴｈｅｒｉｏｕＫ，ＥｃｏｎｏｍｏｕＡＳ，ＳｆａｋｉｏｔａｋｉｓＥＭ．Ｐｒｏｍｏｔｉｏｎｏｆｐｅｔｕｎｉａ（犘犲狋狌狀犻犪犺狔犫狉犻犱犪Ｌ．）ｒｅｇｅｎｅｒａｔｉｏｎｉｎｖｉｔｒｏｂｙ
ｅｔｈｙｌｅｎｅ［Ｊ］．ＰｌａｎｔＣｅｌ，ＴｉｓｓｕｅａｎｄＯｒｇａｎＣｕｌｔｕｒｅ，１９９３，３２：２１９２２５．
［２６］ ＮｉｒｏｕｌａＲＫ，ＢｉｍｂＨＰ．Ｅｆｆｅｃｔｏｆｇｅｎｏｔｙｐｅａｎｄｃａｌｕｓｉｎｄｕｃｔｉｏｎｍｅｄｉｕｍｏｎｇｒｅｅｎｐｌａｎｔｒｅｇｅｎｅｒａｔｉｏｎｆｒｏｍａｎｔｈｅｒｏｆｎｅｐａｌｅｓｅ
ｒｉｃｅｃｕｌｔｉｖａｒｓ［Ｊ］．ＡｓｉａｎＪｏｕｒｎａｌｏｆＰｌａｎｔＳｃｉｅｎｃｅｓ，２００９，８：３６８３７４．
［２７］ ＢｏｈｏｒｏｖａＮＥ，ＬｕｎａＢ，ＢｒｉｔｏＲＭ，犲狋犪犾．Ｒｅｇｅｎｅｒａｔｉｏｎｐｏｔｅｎｔｉａｌｏｆｔｒｏｐｉｃａｌ，ｓｕｂｔｒｏｐｉｃａｌ，ｍｉｄａｌｔｉｔｕｄｅａｎｄｈｉｇｈｌａｎｄｍａｉｚｅ
ｉｎｂｒｅｄｓ［Ｊ］．Ｍａｙｄｉｃａ，１９９５，４０：２７５２８１．
［２８］ ＤａｎＹ．Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌｆｕｎｃｔｉｏｎｓｏｆａｎｔｉｏｘｉｄａｎｔｓｉｎｐｌａｎｔｔｒａｎｓｆｏｒｍａｔｉｏｎ［Ｊ］．ＩｎＶｉｔｒｏＣｅｌｕｌａｒ＆ ＤｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔａｌＢｉｏｌｏｇｙＰｌａｎｔ，
２００８，４４：１４９１６１．
［２９］ ＴｅｉｘｅｒｉａＪＢ，ＳｏｎｄａｈｌＭＲ，ＫｉｒｂｙＥＧ．Ｓｏｍａｔｉｃｅｍｂｒｙｏｇｅｎｅｓｉｓｆｒｏｍｉｍｍａｔｕｒｅｉｎｆｌｏｒｅｓｃｅｎｃｅｓｏｆｏｉｌｐａｌｍ［Ｊ］．ＰｌａｎｔＣｅｌＲｅ
ｐｏｒｔｅｒｓ，１９９４，１３：２４７２５０．
［３０］ ＶｉｃｔｏｒｉａＭＭ，ＷｈｉｔａｋｅｒＪＲ．Ｔｈｅｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙａｎｄｃｏｎｔｒｏｌｏｆｅｎｚｙｍａｔｉｃｂｒｏｗｎｉｎｇ［Ｊ］．ＴｒｅｎｄｓｉｎＦｏｏｄＳｃｉｅｎｃｅａｎｄＴｅｃｈｎｏｌｏ
ｇｙ，１９９５，６（６）：１９６２００．
［３１］ ＫｒｉｓｈｎａＨ，ＳａｉｒａｍＲＫ，ＳｉｎｇｈＳＫ，犲狋犪犾．Ｍａｎｇｏｅｘｐｌａｎｔｂｒｏｗｎｉｎｇ：Ｅｆｆｅｃｔｏｆｏｎｔｏｇｅｎｉｃａｇｅｍｙｃｏｒｒｈｉｚａｔｉｏｎａｎｄｐｒｅｔｒｅａｔ
ｍｅｎｔｓ［Ｊ］．ＳｃｉｅｎｔｉａＨｏｒｔｉｃｕｌｔｕｒａｅ，２００８，１１８（２）：１３２１３８．
０８１ ＡＣＴＡＰＲＡＴＡＣＵＬＴＵＲＡＥＳＩＮＩＣＡ（２０１１） Ｖｏｌ．２０，Ｎｏ．３
［３２］ ＡｎｔｈｏｎｙＪＭ，ＳｅｎａｒａｔｎａＴ，ＤｉｘｏｎＫＷ，犲狋犪犾．Ｔｈｅｒｏｌｅｏｆａｎｔｉｏｘｉｄａｎｔｓｆｏｒｉｎｉｔｉａｔｉｏｎｏｆｓｏｍａｔｉｃｅｍｂｒｙｏｓｗｉｔｈ犆狅狀狅狊狋犲狆犺犻狌犿
狆犲狀犱狌犾狌犿 （Ｅｒｉｃａｃｅａｅ）［Ｊ］．ＰｌａｎｔＣｅｌ，ＴｉｓｓｕｅａｎｄＯｒｇａｎＣｕｌｔｕｒｅ，２００４，７８：２４７２５２．
［３３］ ＲｏｈＫ，ＣｈｏｉＢ．Ｓｕｃｒｏｓｅｒｅｇｕｌａｔｅｓｇｒｏｗｔｈａｎｄａｃｔｉｖａｔｉｏｎｏｆｒｕｂｉｓｃｏｉｎｔｏｂａｃｃｏｌｅａｖｅｓｉｎｖｉｔｒｏ［Ｊ］．ＢｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙａｎｄＢｉｏｐｒｏｃｅｓｓ
Ｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ，２００４，９：２２９２３５．
［３４］ ＰａｒｋＹＧ，ＫｉｍＳＪ，ＫａｎｇＹＭ，犲狋犪犾．Ｐｒｏｄｕｃｔｉｏｎｏｆｇｉｎｋｇｏｌｉｄｅｓａｎｄｂｉｌｏｂａｌｉｄｅｆｒｏｍｏｐｔｉｍｉｚｅｄｔｈｅ犌犻狀犽犵狅犫犻犾狅犫犪ｃｅｌｃｕｌｔｕｒｅ［Ｊ］．Ｂｉ
ｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙａｎｄＢｉｏｐｒｏｃｅｓｓＥｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ，２００４，９：４１４６．
犈犳犳犲犮狋狊狅犳犪狀狋犻犫狉狅狑狀犻狀犵犪犵犲狀狋狊狅狀狋犺犲犻狀犱狌犮狋犻狅狀狅犳狊狌犱犪狀犵狉犪狊狊犮犪犾狌狊
ＬＶＺｏｎｇｙｏｕ，ＳＵＹａｎｊｉｎｇ，ＺＨＡＯＧｕｏｑｉ，ＷＵＣａｉｘｉａ
（ＩｎｓｔｉｔｕｔｅｏｆＡｎｉｍａｌＳｃｉｅｎｃｅａｎｄＴｅｃｈｎｏｌｏｇｙｏｆＹａｎｇｚｈｏｕＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，Ｙａｎｇｚｈｏｕ２２５００９，Ｃｈｉｎａ）
犃犫狊狋狉犪犮狋：Ｓｕｄａｎｇｒａｓｓｃａｎｅａｓｉｌｙｐｒｏｄｕｃｅｐｈｅｎｏｌｉｃｃｏｍｐｏｕｎｄｓｗｈｅｎｉｔｉｓｇｒｏｗｎｉｎｔｉｓｓｕｅｃｕｌｔｕｒｅ．Ｔｈｅｂｒｏｗｎｉｎｇ
ｐｈｅｎｏｍｅｎｏｎｉｓｈａｒｍｆｕｌｔｏｃａｌｕｓｇｒｏｗｔｈ，ｌｅａｄｉｎｇｔｏｃａｌｕｓｄｅａｔｈ．Ａｎｔｉｂｒｏｗｎｉｎｇａｇｅｎｔｓｗｅｒｅｕｓｅｄｔｏｓｔｕｄｙ
ｂｒｏｗｎｉｎｇ．Ａｃｔｉｖｅｃａｒｂｏｎ（ＡＣ），ｖｉｔａｍｉｎＣ（ＶＣ），ｐｏｌｙｖｉｎｙｌｐｙｒｒｏｌｉｄｏｎｅ（ＰＶＰ），ａｎｄＡｇＮＯ３ａｌｉｍｐｒｏｖｅｄｔｈｅ
ｎｕｍｂｅｒｏｆｉｎｄｕｃｔｉｏｎｓａｎｄｒｅｄｕｃｅｄｔｈｅｎｕｍｂｅｒｓｂｒｏｗｎｉｎｇ．Ｌｏｗｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎｓｏｆｓｕｃｒｏｓｅ（１０－２０ｇ／Ｌ）ｒｅｄｕｃｅｄ
ｔｈｅｎｕｍｂｅｒｓｂｒｏｗｎｉｎｇｂｕｔｄｉｄｎｏｔｉｍｐｒｏｖｅｔｈｅｉｎｄｕｃｔｉｏｎｎｕｍｂｅｒ，ｗｈｉｌｅｈｉｇｈｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎｓｉｎｃｒｅａｓｅｄｂｏｔｈ．
Ｃｉｔｒｉｃａｃｉｄｉｍｐｒｏｖｅｄｏｎｌｙｔｈｅｉｎｄｕｃｔｉｏｎｎｕｍｂｅｒｓａｎｄｄｉｄｎｏｔａｆｆｅｃｔｔｈｅｎｕｍｂｅｒｓｂｒｏｗｎｉｎｇ．Ｗｈｅｎｔｈｅｃｏｎｃｅｎｔｒａ
ｔｉｏｎｏｆＡＣｗａｓ０．１５ｇ／Ｌ，ｔｈｅｃａｌｕｓｗａｓｂｅｓｔｂｏｔｈｉｎｔｅｒｍｓｏｆｉｎｄｕｃｔｉｏｎｎｕｍｂｅｒａｎｄａｎｔｉｂｒｏｗｎｉｎｇ．
犓犲狔狑狅狉犱狊：ｓｕｄａｎｇｒａｓｓ；ｉｎｄｕｃｉｎｇｃａｌｕｓ；ｂｒｏｗｎｉｎｇｃｏｎｔｒｏｌｍｅｔｈｏｄ
１８１第２０卷第３期 草业学报２０１１年