全 文 ：林业科学研究摇 圆园员源袁圆苑渊圆冤院圆猿猿 圆猿怨云燥则藻泽贼 砸藻泽藻葬则糟澡
摇 摇 文章编号院员园园员鄄员源怨愿渊圆园员源冤园圆鄄园圆猿猿鄄园苑
油桐油质蛋白 韵造藻燥泽蚤灶编码基因 缘个 灾枣韵蕴耘
转录本的克隆与表达分析
吴庆珂袁 杨素素袁 汪阳东袁 高摇 暝袁 陈益存鄢
渊中国林业科学研究院亚热带林业研究所袁浙江 富阳摇 猿员员源园园冤
收稿日期院 圆园员猿鄄员员鄄园圆
基金项目院 浙江省自然科学基金重点项目渊蕴在员猿悦员远园园园员冤
作者简介院 吴庆珂渊员怨愿怨要冤袁男袁山东菏泽人袁硕士研究生袁主要从事能源植物功能基因研究援
鄢 通讯作者院副研究员袁硕导袁主要从事能源植物育种分子基础研究遥 耘鄄皂葬蚤造院赠蚤糟怎灶赃糟澡藻灶岳 员远猿援 糟燥皂
摘要院植物种子中袁油脂主要贮藏在一种分散的尧相对稳定的亚细胞微滴野油体冶中袁油质蛋白 韵造藻燥泽蚤灶是油体结构组
成和功能调节的最主要蛋白质袁在种子成熟尧休眠和萌发过程中发挥重要作用遥 通过油桐种仁 耘杂栽 文库构建与测
序袁获得了油桐 韵造藻燥泽蚤灶渊韵蕴耘冤蛋白编码基因的 缘 个转录本 灾枣韵蕴耘员尧灾枣韵蕴耘圆尧灾枣韵蕴耘猿尧灾枣韵蕴耘源尧灾枣韵蕴耘缘袁完整阅读框长
度分别为 源苑源尧源远缘尧源员源尧源员源尧源圆怨 遭责遥 通过实时荧光定量 孕悦砸技术分析了 缘 个 灾枣韵蕴耘转录本在油桐不同组织以及种
仁成熟过程中的表达变化遥 结果表明袁缘 个 灾枣韵蕴耘转录本在成熟的种子中特异高效表达袁其它组织中微弱表达曰缘 个
灾枣韵蕴耘表达趋势与桐酸尧桐油积累趋势一致袁其中在桐酸快速合成尧桐油快速积累时期袁灾枣韵蕴耘员尧灾枣韵蕴耘圆 表达迅速上
升并且表达量显著高于 灾枣韵蕴耘猿尧灾枣韵蕴耘源尧灾枣韵蕴耘缘遥 试验结果为进一步研究 灾枣韵蕴耘 基因在桐油合成中的生物学功能
提供了参考遥
关键词院韵造藻燥泽蚤灶曰油桐曰基因表达
中图分类号院杂苑员愿援 源远 文献标识码院粤
陨泽燥造葬贼蚤燥灶 葬灶凿 耘曾责则藻泽泽蚤燥灶 粤灶葬造赠泽蚤泽 燥灶 灾藻则灶蚤糟蚤葬 枣燥则凿蚤蚤 韵造藻燥泽蚤灶 郧藻灶藻
燥枣 云蚤增藻 灾枣韵蕴耘 陨泽燥枣燥则皂泽
宰哉 匝蚤灶早鄄噪藻袁 再粤晕郧 杂怎鄄泽怎袁 宰粤晕郧 再葬灶早鄄凿燥灶早袁 郧粤韵 酝蚤灶早袁 悦匀耘晕 再蚤鄄糟怎灶
渊砸藻泽藻葬则糟澡 陨灶泽贼蚤贼怎贼藻 燥枣 杂怎遭贼则燥责蚤糟葬造 云燥则藻泽贼则赠袁 悦澡蚤灶藻泽藻 粤糟葬凿藻皂赠 燥枣 云燥则藻泽贼则赠袁 云怎赠葬灶早摇 猿员员源园园袁 在澡藻躁蚤葬灶早袁 悦澡蚤灶葬冤
粤遭泽贼则葬糟贼院 孕造葬灶贼 造蚤责蚤凿 蚤灶 燥蚤造泽藻藻凿泽 蚤泽 早藻灶藻则葬造造赠 泽贼燥则藻凿 蚤灶 葬 凿蚤泽责藻则泽蚤增藻 葬灶凿 泽贼葬遭造藻 泽怎遭鄄糟藻造造怎造葬则 凿则燥责造藻贼 野燥蚤造 遭燥凿赠冶援 粤灶凿
燥造藻燥泽蚤灶 责则燥贼藻蚤灶袁 葬泽 贼澡藻 皂葬蚤灶 泽贼则怎糟贼怎则葬造 责则燥贼藻蚤灶 燥枣 燥蚤造 遭燥凿赠袁 蚤泽 则藻泽责燥灶泽蚤遭造藻 枣燥则 蚤贼泽 枣怎灶糟贼蚤燥灶葬造 皂燥凿蚤枣蚤糟葬贼蚤燥灶援 韵造藻燥泽蚤灶
责造葬赠泽 葬灶 蚤皂责燥则贼葬灶贼 则燥造藻 蚤灶 贼澡藻 责则燥糟藻泽泽 燥枣 燥蚤造泽藻藻凿 皂葬贼怎则葬贼蚤燥灶袁 凿燥则皂葬灶糟赠 葬灶凿 早藻则皂蚤灶葬贼蚤燥灶援 陨灶 贼澡蚤泽 泽贼怎凿赠袁 枣蚤增藻 燥造藻燥泽蚤灶
蚤泽燥枣燥则皂泽袁 灶葬皂藻凿 灾枣韵蕴耘员袁 灾枣韵蕴耘圆袁 灾枣韵蕴耘猿袁 灾枣韵蕴耘源袁 灾枣韵蕴耘缘袁 憎藻则藻 蚤泽燥造葬贼藻凿 枣则燥皂 灾藻则灶蚤糟蚤葬 枣燥则凿蚤蚤 渊 贼怎灶早 贼则藻藻冤援
匝怎葬灶贼蚤贼葬贼蚤增藻 则藻葬造 贼蚤皂藻 孕悦砸 皂藻贼澡燥凿 憎葬泽 藻皂责造燥赠藻凿 贼燥 蚤凿藻灶贼蚤枣赠 贼澡藻 藻曾责则藻泽泽蚤燥灶 皂燥凿藻 燥枣 燥造藻燥泽蚤灶 早藻灶藻 燥枣 贼澡藻 缘 蚤泽燥枣燥则皂泽袁
葬灶凿 贼澡藻 则藻泽怎造贼泽 泽澡燥憎藻凿 贼澡葬贼 贼澡藻 枣蚤增藻 灾枣韵蕴耘泽 憎藻则藻 葬造造 藻曾责则藻泽泽藻凿 藻曾糟造怎泽蚤增藻造赠 蚤灶 贼澡藻 燥蚤造泽藻藻凿泽援 云怎则贼澡藻则皂燥则藻袁 贼澡藻 则怎造藻 燥枣
贼澡藻 枣蚤增藻 灾枣韵蕴耘泽 藻曾责则藻泽泽蚤燥灶 蚤灶 贼澡藻 贼怎灶早 贼则藻藻 凿藻增藻造燥责蚤灶早 泽藻藻凿泽 憎葬泽 蚤灶 葬糟糟燥则凿葬灶糟藻 憎蚤贼澡 贼澡燥泽藻 燥枣 贼怎灶早 燥蚤造 葬灶凿 琢鄄藻造藻燥泽贼藻鄄
葬则蚤糟 葬糟蚤凿 葬糟糟怎皂怎造葬贼蚤燥灶援 陨灶 葬凿凿蚤贼蚤燥灶袁 贼澡藻 灾枣韵蕴耘员 葬灶凿 灾枣韵蕴耘圆 藻曾责则藻泽泽蚤燥灶 蚤灶糟则藻葬泽藻凿 蚤皂皂藻凿蚤葬贼藻造赠 葬灶凿 澡蚤早澡藻则 贼澡葬灶
贼澡燥泽藻 燥枣 贼澡藻 燥贼澡藻则 灾枣韵蕴耘泽 蚤灶 贼怎灶早 燥蚤造 葬灶凿 琢鄄藻造藻燥泽贼藻葬则蚤糟 葬糟蚤凿 遭蚤燥泽赠灶贼澡藻泽蚤泽援
运藻赠 憎燥则凿泽院 韵造藻燥泽蚤灶曰 灾藻则灶蚤糟蚤葬 枣燥则凿蚤蚤曰 早藻灶藻 藻曾责则藻泽泽蚤燥灶
油桐渊灾藻则灶蚤糟蚤葬 枣燥则凿蚤蚤 渊匀藻皂泽造援 冤 粤蚤则赠 杂澡葬憎冤隶属
大戟科渊耘怎责澡燥则遭蚤葬糟藻葬藻冤油桐属渊灾藻则灶蚤糟蚤葬 蕴燥怎则援 冤袁是
重要的工业油料树种袁干种仁含油率达 远园豫
苑园豫 袁是最好的干性油之一袁用途广泛袁是环保型新
林摇 业摇 科摇 学摇 研摇 究 第 圆苑 卷
型化工产品原料袁具有绝缘尧耐酸碱尧防腐防锈等优
良性能袁可用来研制新型天然涂料尧合成树脂尧粘合
剂尧药品等咱员 原 圆暂 遥 油桐种仁中袁桐油主要以甘油三酯
渊栽则蚤葬糟赠造早造赠糟藻则燥造泽袁 栽粤郧冤的形式贮藏在一种分散的尧
相对稳定的亚细胞微滴中袁这些小的不连续的亚细
胞器叫野油体渊韵蚤造 遭燥凿赠冤冶遥 油体不仅是能量尧碳营
养的贮藏单位袁也是一个涉及油脂合成尧降解和平衡
的动力结构咱猿暂 遥 作为植物体中最小的细胞器袁油体
直径一般为 园郾 缘 圆郾 缘 滋皂袁外部是由磷脂单分子层
渊孕蕴冤及其镶嵌其中的油质蛋白 渊 韵造藻燥泽蚤灶尧悦葬造藻燥泽蚤灶
等冤组成的野半单位冶膜袁内部是甘油三酯渊栽粤郧冤液
态基质咱源暂 遥 在成熟的种子中袁栽粤郧泽尧孕蕴泽 和 韵造藻燥泽蚤灶
都在内质网上合成袁再以油体的形式从内质网释放
出来咱缘暂 遥 与脂质体及人工脂滴不同袁其表面结合的
油质蛋白 韵造藻燥泽蚤灶渊韵蕴耘冤可以确保油体贮藏在成熟
的种子中或在提取制备过程中不会发生聚集遥
油质蛋白 韵造藻燥泽蚤灶 是油体结构组成和功能调节
最主要的蛋白咱远暂 遥 利用拟南芥渊粤则葬遭蚤凿燥责泽蚤泽 贼澡葬造蚤葬灶葬
渊蕴援 冤 匀藻赠灶澡冤的突变体研究发现袁韵造藻燥泽蚤灶 蛋白决定
了油体大小咱苑暂 遥 韵造藻燥泽蚤灶作为油体主要蛋白质袁占油
体总成分的 员豫 源豫 咱愿暂 袁而油体中 怨园豫以上的蛋
白是 韵造藻燥泽蚤灶咱源暂 遥 韵造藻燥泽蚤灶蛋白享有共同的结构特征袁
在中间部分含有一个约 苑圆 个氨基酸组成的疏水性
区域袁目前还未在其它生物体中发现含有如此长疏
水性区域的蛋白质遥 在这个长疏水性区域中间有个
由 员圆 个 氨 基 酸 组 成 的 脯 氨 酸 结 渊 孕则燥噪灶燥贼袁鄄
孕载缘杂孕载猿孕鄄冤 咱怨暂 袁可形成发卡结构使 韵造藻燥泽蚤灶 能够渗
入到油体的磷脂单分子层中袁并且 韵造藻燥泽蚤灶 蛋白之间
可能通过该区域互相结合遥 韵造藻燥泽蚤灶 蛋白氨基和羧
基端可能作为受体和脂酶相结合咱缘暂 袁这对 韵造藻燥泽蚤灶 发
挥生物学功能具有重要作用遥 迄今袁很多物种如咖
啡 渊 悦燥枣枣藻葬 糟葬灶藻责澡燥则葬 孕援 冤尧芝麻 渊 杂藻泽葬皂怎皂 蚤灶凿蚤糟怎皂
蕴援 冤尧拟南芥等 韵造藻燥泽蚤灶 基因被相继报道咱员园 原 员员暂 袁基因
转录本数量在物种中存在差异袁但都可归并为 匀鄄燥造鄄
泽燥藻蚤灶和 蕴鄄燥造藻燥泽蚤灶两个大的亚型袁两者的主要区别在
于 匀鄄燥造藻燥泽蚤灶羧基端的 员愿 个氨基酸残基遥 最新研究
报道袁作为油体结构蛋白的 韵造藻燥泽蚤灶 与油脂合成关键
酶基因 阅郧粤栽和油脂合成调控转录因子 宰砸陨员 共同
表达袁可以使烟草渊晕蚤糟燥贼蚤葬灶葬 贼葬遭葬糟怎皂 蕴援 冤叶片组织
中产生干质量占 员缘豫的油脂 栽粤郧咱员圆暂 遥 蕴蚤怎 等将大
豆渊郧造赠糟蚤灶藻 皂葬曾 蕴援 冤的两个 圆源 噪阅葬 的 韵造藻燥泽蚤灶蛋白编
码基因利用胚胎特异启动子在水稻 渊韵则赠扎葬 泽葬贼蚤增葬
蕴援 冤中进行过表达袁导致种子中油脂含量从 猿远郾 怨猿豫
提高到 源远郾 园远豫 咱员猿暂 遥 本文通过油桐种仁 耘杂栽文库构
建及大规模测序获得了油桐 韵造藻燥泽蚤灶基因 缘 个 灾枣韵蕴耘
转录本袁对其在不同组织和种子成熟过程中的表达
情况进行了分析袁为进一步研究 灾枣韵蕴耘 基因在桐油
合成中的生物学功能提供参考遥
员摇 材料与方法
员援 员摇 试验材料
员援 员援 员摇 实验材料摇 在浙江省金华市婺城区东方红
林场国家级油桐基因库袁选取油桐品种 耶陈家圩
怨鄄圆源爷种子为试材遥 在始开花后第 怨园 天 渊苑 月 员远
日冤开始袁每次摘取 猿 个单株果实袁每个单株取 猿 个
果实袁此后每隔 员缘 凿摘取 员 次袁共 远 个发育时期遥 果
实采摘后立即剥去果皮袁将种子用液氮速冻袁存于
原 愿园益保存备用遥
员援 员援 圆摇 实验试剂及仪器摇 试验中使用的主要大型
仪器为微量分光光度计渊哉灾鄄灾蚤泽 杂责藻糟贼则燥责澡燥贼燥皂藻贼藻则
匝缘园园园袁 匝怎葬憎藻造造 公司 冤尧 实时荧光定量 孕悦砸 仪
渊粤月陨苑猿园园袁 粤责责造蚤藻凿 月蚤燥泽赠泽贼藻皂泽 公司冤遥 主要试剂
砸晕粤提取试剂盒渊砸晕猿愿 耘粤杂再泽责蚤灶 责造怎泽 孕造葬灶贼 砸晕粤
噪蚤贼冤购自北京艾德来生物科技有限公司袁杂怎责藻赠杂糟则蚤责贼
芋反转录试剂盒购自 陨灶增蚤贼则燥早藻灶 公司袁栽葬择 阅晕粤聚合
酶尧阅晕粤 凝胶回收试剂盒尧大肠杆菌 阅匀缘琢 感受态
细胞尧 责酝阅鄄员愿栽 杂蚤皂责造藻 灾藻糟贼燥则 和荧光定量试剂盒
杂再月砸 孕则蚤皂藻则杂糟则蚤责贼栽酝 砸栽鄄孕悦砸 运蚤贼 购自 栽葬噪葬则葬 公司遥
引物合成和 阅晕粤 测序均在上海生物工程技术服务
有限公司进行遥
员援 圆摇 研究方法
员援 圆援 员摇 油桐 灾枣韵蕴耘 基因 糟阅晕粤 序列分离摇 在本实
验室构建的油桐种仁 糟阅晕粤文库基础上咱员源 原 员缘暂 袁通过
大规模测序获得 员员愿 条 韵蕴耘 耘杂栽 序列袁经序列同源
性比对袁归并为 缘 个 灾枣韵蕴耘 基因袁命名为 灾枣韵蕴耘员尧
灾枣韵蕴耘圆尧灾枣韵蕴耘猿尧灾枣韵蕴耘源尧灾枣韵蕴耘缘遥
员援 圆援 圆摇 砸晕粤提取及逆转录摇 将 原 愿园益保存的油桐
种子迅速取出袁敲碎去除种皮袁将种仁放在液氮中快
速研磨袁按照 砸晕粤 提取试剂盒说明书 渊 砸晕猿愿
耘粤杂再泽责蚤灶 责造怎泽 孕造葬灶贼 砸晕粤 噪蚤贼冤袁提取油桐品种耶陈家
圩 怨鄄圆源爷远 个发育时期的种子 砸晕粤袁设置 猿 个生物学
重复遥 用 哉灾鄄灾蚤泽 杂责藻糟贼则燥责澡燥贼燥皂藻贼藻则 匝缘园园园 微量分光
光度计测定 砸晕粤浓度袁并进行 员豫琼脂糖电泳分析
其完整性遥 反转录时各取 砸晕粤 猿 滋早袁使用 杂怎责藻则鄄
杂糟则蚤责贼 芋反转录试剂盒反转录合成一链袁合成后的
糟阅晕粤稀释后用于实时荧光定量 孕悦砸遥
源猿圆
第 圆 期 吴庆珂等院油桐油质蛋白 韵造藻燥泽蚤灶编码基因 缘 个 灾枣韵蕴耘转录本的克隆与表达分析
员援 圆援 猿摇 实时荧光定量 孕悦砸 法摇 油桐 缘 个 灾枣韵蕴耘 转
录本的 择砸栽鄄孕悦砸 引物序列尧栽皂 值以及扩增片段见
表 员遥 引物分别是各个基因的特异性片段序列袁以
避免基因间的非特异性扩增遥 实时荧光定量 孕悦砸
扩增的反应体系为院 糟阅晕粤 模版 圆 滋蕴袁圆 伊 杂再月砸
孕则藻皂蚤曾 耘曾 栽葬择栽酝 员园 滋蕴袁特异引物渊员园 滋皂燥造窑蕴 原员 冤
园郾 源 滋蕴袁缘园 伊 砸韵载 砸藻枣藻则藻灶糟藻 阅赠藻 园郾 源 滋蕴袁用水补足
圆园 滋蕴遥 孕悦砸扩增条件为院怨缘益 猿园 泽 预变性后袁怨缘益
变性 缘 泽袁远园益复性 猿员 泽袁共 源园 个循环袁同时对实时荧
光定量 孕悦砸产物进行 杂再月砸 熔解曲线分析袁每个试
样平行做 源 次反应袁生物学试验重复 猿 次袁基因的相
对表达量分析参考 孕枣葬枣枣造 野 阅藻造贼葬鄄凿藻造贼葬冶 方法计算
圆–咱驻悦孕泽葬皂责造藻鄄驻悦孕糟燥灶贼则燥造暂 值反应基因表达量咱员远暂 遥 基因相对
表达量数值之间的差异采用统计学软件 孕粤杂宰 杂贼葬鄄
贼蚤泽贼蚤糟泽 员愿 进行单因素方差分析袁显著性水平渊杂蚤早灶蚤枣蚤鄄
糟葬灶糟藻 蕴藻增藻造冤 约 园郾 园缘 为显著差异遥
表 员摇 油桐 缘 个 灾枣韵蕴耘转录本 择砸栽鄄孕悦砸和 糟阅晕粤完整阅读框扩增的引物
基因简称 基因名称 引物序列 渊缘爷贼燥 猿爷冤 渊上游 辕下游冤 栽皂 辕 益 扩增子 辕 遭责
耘云员葬 耘造燥灶早葬贼蚤燥灶 枣葬糟贼燥则 员鄄葬 郧悦悦栽郧郧栽粤栽郧郧栽栽郧栽郧粤悦悦栽 辕 郧郧粤栽悦粤栽悦悦栽栽郧郧粤郧栽栽郧郧粤 愿猿郾 怨 员愿园
灾枣韵蕴耘员 韵造藻燥泽蚤灶员 郧悦悦悦栽栽悦粤粤悦栽栽悦粤悦粤郧粤栽栽栽 辕 悦悦郧粤悦粤粤郧悦悦粤粤栽粤粤悦郧粤粤 愿源郾 员 员苑愿
灾枣韵蕴耘圆 韵造藻燥泽蚤灶圆 悦悦郧悦栽粤栽郧粤栽郧悦悦栽粤悦粤粤郧 辕 粤郧粤粤悦粤郧郧郧悦栽粤粤粤郧粤栽郧粤粤粤 愿猿郾 愿 员苑苑
灾枣韵蕴耘猿 韵造藻燥泽蚤灶猿 栽郧郧栽郧郧栽栽栽栽郧郧悦郧栽悦郧悦粤 辕 郧悦粤悦栽栽悦栽悦粤粤郧栽粤栽郧栽栽郧郧悦悦悦郧 愿远郾 员 员愿愿
灾枣韵蕴耘源 韵造藻燥泽蚤灶源 郧郧栽郧郧栽栽栽栽郧郧悦郧栽悦郧悦粤郧 辕 悦悦悦粤悦郧粤栽悦粤粤栽悦栽栽悦粤粤栽悦栽悦粤粤悦粤栽 愿远郾 员 员愿苑
灾枣韵蕴耘缘 韵造藻燥泽蚤灶缘 栽郧栽悦栽悦粤郧粤栽郧粤栽悦悦郧栽郧粤粤郧悦 辕 粤郧郧粤悦栽粤粤粤悦粤郧郧粤悦悦粤郧粤粤栽 愿猿郾 远 员远源
灾枣韵蕴耘员 韵造藻燥泽蚤灶员 悦粤粤栽栽粤粤郧悦悦栽粤郧悦栽粤郧悦栽悦悦 辕 粤郧悦栽悦郧栽悦栽栽悦栽悦栽悦郧栽郧栽悦 缘圆 源苑远
灾枣韵蕴耘圆 韵造藻燥泽蚤灶圆 栽栽悦栽悦栽郧栽粤粤栽悦粤悦悦栽悦郧 辕 悦郧粤悦粤悦粤粤粤栽郧悦粤粤悦粤粤粤郧 缘缘 远源缘
灾枣韵蕴耘猿 韵造藻燥泽蚤灶猿 悦粤粤郧郧悦粤栽悦粤粤栽悦粤粤栽郧 辕 悦悦粤栽悦粤粤粤粤郧悦粤悦栽栽悦 缘圆 源源源
灾枣韵蕴耘源 韵造藻燥泽蚤灶源 郧郧郧悦悦粤粤郧郧悦粤栽悦粤粤栽悦粤 辕 悦粤粤悦栽粤郧栽悦粤栽悦粤郧粤粤悦栽郧 缘缘 缘园猿
灾枣韵蕴耘缘 韵造藻燥泽蚤灶缘 郧悦粤郧栽粤悦郧悦粤栽栽粤悦郧粤郧粤粤郧粤 辕 粤郧粤栽郧悦栽悦郧粤郧栽栽栽郧粤郧栽粤郧栽粤郧悦悦 缘缘 缘猿园
员援 圆援 源摇 桐油提取及桐酸含量测定摇 采用索氏热萃
取法提取油桐种仁油脂遥 具体步骤是袁首先去除种
壳袁将种仁置于 远园益真空干燥箱中干燥 圆源 澡曰取出
烘干后的种仁研磨至粉末袁称取 员郾 缘 早 粉末装入一
个烘干的滤纸包内渊烘干滤纸包称质量 酝员冤袁每个
时期样品装 猿 个滤纸包袁将带有种仁粉末的滤纸包
置于 远园益真空烘箱中干燥 源 澡曰取出带有样品的滤
纸包袁真空干燥器中冷却 猿园 皂蚤灶袁称取样品与滤纸包
的质量 酝圆曰将样品包装入索氏抽提器抽提筒中进行
抽提曰将回收的石油醚进行真空旋转蒸发袁收集油
脂曰取出滤纸包袁在 员园缘益烘箱中干燥 源 澡袁真空干燥
器中冷却 猿园 皂蚤灶袁称取滤纸包与样品残渣的质量
酝猿曰计算种仁的含油率院渊酝圆 原 酝猿冤渊酝圆 原 酝员冤遥
桐酸测定采用气相色谱分析袁称取桐油 远园 皂早
左右至具塞试管中袁加入 源 皂蕴 异辛烷溶解曰加入
圆园园 滋蕴 运韵匀鄄悦匀猿韵匀溶液渊圆 皂燥造窑蕴 原员 冤袁盖上玻璃
塞猛烈振摇 猿园 泽 进行甲酯化曰加入 员 早 晕葬圆匀杂韵源窑匀圆韵袁然后猛烈振摇 员缘 泽袁盐沉淀后取上清液待测
定曰色谱条件为 匀孕鄄陨晕晕韵宰粤载 毛细管色谱柱渊猿园 皂
伊 园郾 圆缘 滋皂 伊 园郾 圆缘 滋皂冤曰程序升温院初始温度
员源园益袁保持 员 皂蚤灶袁以 源益窑 皂蚤灶 原员升至 圆缘园益袁保持
缘 皂蚤灶曰进样口温度 圆圆园益袁进样量 员 滋蕴曰载气为高纯
氮气袁纯度逸怨怨郾 怨怨怨豫 遥 各组分参考标准品出峰情
况进行定性定量遥
圆摇 结果与分析
圆援 员摇 油桐 缘 个 灾枣韵蕴耘转录本序列分析
从油桐种仁 糟阅晕粤 中所分离到的 灾枣韵蕴耘员尧
灾枣韵蕴耘圆尧灾枣韵蕴耘猿尧灾枣韵蕴耘源尧灾枣韵蕴耘缘 完整阅读框渊韵责藻灶
砸藻葬凿蚤灶早 云则葬皂藻袁 韵砸云冤长度分别为 源苑源尧源远缘尧源员源尧源员源尧
源圆怨 遭责袁 在 郧藻灶月葬灶噪 上 的 登 陆 号 分 别 为 韵蕴耘员
渊郧砸圆员愿苑缘源冤尧韵蕴耘圆 渊郧砸圆员愿怨源猿冤尧韵蕴耘猿渊郧砸圆员怨园园缘冤尧
韵蕴耘源渊郧砸圆员怨员缘愿 冤尧韵蕴耘缘渊郧砸圆员愿员怨愿冤遥
表 员 中列出了从种仁 糟阅晕粤 中扩增 缘 个 灾枣韵蕴耘
转录本的引物袁扩增子序列等于或者大于各个基因
的 韵砸云 长度遥 扩增结果如图 员袁灾枣韵蕴耘员尧灾枣韵蕴耘圆尧
灾枣韵蕴耘猿尧灾枣韵蕴耘源尧灾枣韵蕴耘缘 扩增子的长度分别为 源苑远尧
远源缘尧源源源尧缘园猿尧缘猿园 遭责袁因为引物序列覆盖了基因的
阅读框袁所以扩增子的长度大于等于基因阅读框的
长度遥 缘 个 灾枣韵蕴耘 转录本的阅读框 韵砸云 序列见图
圆袁中间序列比较保守袁氨基端和羧基端序列存在多
样性袁灾枣韵蕴耘猿尧灾枣韵蕴耘源 序列氨基端序列一致袁羧基端
不同遥 此外袁缘 个 灾枣韵蕴耘 转录本编码氨基酸的序列
分析及同源性比对情况见文献咱员缘暂遥
缘猿圆
林摇 业摇 科摇 学摇 研摇 究 第 圆苑 卷
员院灾枣韵蕴耘员曰圆院灾枣韵蕴耘圆曰猿院灾枣韵蕴耘猿曰源院灾枣韵蕴耘源曰缘院灾枣韵蕴耘缘曰酝院酝葬则噪藻则 圆园园园
图 员摇 油桐 缘 个 灾枣韵蕴耘转录本 糟阅晕粤扩增图
图 圆摇 油桐 缘 个 灾枣韵蕴耘转录本的 韵砸云序列
圆援 圆摇 缘 个 灾枣韵蕴耘转录本在油桐不同组织中的表达
分析
实时荧光定量 孕悦砸选用 耘云员琢渊耘造燥灶早葬贼蚤燥灶 枣葬糟贼燥则
员琢冤基因袁实验室前期试验表明袁耘云员琢 基因是不同
组织以及种子不同成熟时期的最适内参照基因之
一咱员苑暂 遥 本试验结果表明袁缘 个 灾枣韵蕴耘 转录本在油桐
不同组织中表达均有显著差异袁所检测组织包括根尧
茎尧叶尧花瓣尧雌蕊尧雄蕊尧幼果渊开花后 员园园 凿冤和发
育中的种子渊开花后 员源缘 凿冤遥 缘 个 灾枣韵蕴耘 转录本在
油桐发育中的种子中均特异高效表达袁表达量显著
高于根尧茎尧叶尧花瓣尧雄蕊尧雌蕊等其它组织渊表 圆冤遥
此外袁 灾枣韵蕴耘猿 在根尧叶中有微弱表达袁 灾枣韵蕴耘员尧
灾枣韵蕴耘圆 在叶片中也有微弱表达遥
圆援 猿摇 油桐 缘 个 灾枣韵蕴耘转录本在油桐种仁成熟过程
中的表达分析
利用表 员 中设计的 缘 个 灾枣韵蕴耘转录本及内参照
基因特异性的引物袁采用实时荧光定量 孕悦砸 的方法
检测 灾枣韵蕴耘员尧灾枣韵蕴耘圆尧灾枣韵蕴耘猿尧灾枣韵蕴耘源尧灾枣韵蕴耘缘 基因
在油桐不同组织以及种仁成熟过程中不同时期的表
达袁从图 猿 中 缘 个 灾枣韵蕴耘转录本和内参照基因 耘云员琢
择砸栽鄄孕悦砸 溶解曲线可以看出袁所设计的各个扩增子
的引物扩增均显示出良好的特异性遥
远猿圆
第 圆 期 吴庆珂等院油桐油质蛋白 韵造藻燥泽蚤灶编码基因 缘 个 灾枣韵蕴耘转录本的克隆与表达分析
表 圆摇 油桐 缘 个 灾枣韵蕴耘转录本在油桐不同组织中的表达量分析
油桐组织 灾枣韵蕴耘员 灾枣韵蕴耘圆 灾枣韵蕴耘猿 灾枣韵蕴耘源 灾枣韵蕴耘缘
根 园郾 苑圆 依 园郾 员愿猿 园郾 员源 依 园郾 园远 怨郾 远园 依 园郾 怨苑 员郾 圆员 依 园郾 圆怨 园郾 园愿 依 园郾 园源缘
茎 园郾 园源 依 园郾 园猿 园郾 园源 依 园郾 园圆 园郾 园远 依 园郾 园员 园郾 园员 依 园郾 园园 园郾 园圆 依 园郾 园园
叶 猿郾 园源 依 园郾 缘缘 圆郾 远缘 依 园郾 圆缘 源郾 猿猿 依 园郾 园员 园郾 园源 依 园郾 园园 员郾 愿员 依 园郾 远园
花瓣 园郾 园猿 依 园郾 园员 园郾 园源 依 园郾 园圆 园郾 园愿 依 园郾 园圆 园郾 园员 依 园郾 园园 园郾 园员 依 园郾 园园
雌蕊 园郾 圆园 依 园郾 园源 园郾 园怨 依 园郾 园圆 园郾 园苑 依 园郾 园圆 园郾 园园 依 园郾 园园 园郾 园源 依 园郾 园园
雄蕊 园郾 远缘 依 园郾 园远 园郾 园员 依 园郾 园员 园郾 园员 依 园郾 园园 园郾 园员 依 园郾 园园 园郾 园园 依 园郾 园园
幼果 园郾 园猿 依 园郾 园圆 园郾 园员 依 园郾 园员 园郾 员源 依 园郾 园员 园郾 园园 园郾 园园 依 园郾 园园
种子 圆猿远郾 员猿 依 圆园郾 圆园 圆苑远郾 远怨 依 员圆郾 猿怨 缘园员郾 源愿 依 员远郾 源苑 员员猿郾 愿怨 依 苑郾 缘猿怨 员园郾 员源 依 园郾 猿愿源
图 猿摇 油桐 缘 个 灾枣韵蕴耘转录本以及内参照基因 耘云员琢实时荧光定量 孕悦砸 溶解曲线
在油桐种仁成熟过程中的不同时期袁缘 个 灾枣韵蕴耘
转录本表达分析结果显示渊图 源冤袁各个基因表达趋
势与桐酸尧桐油积累趋势一致袁其中在桐酸快速合
成尧桐油快速积累时期渊苑 月 圆远 日至 愿 月 圆缘 日冤袁
灾枣韵蕴耘员尧灾枣韵蕴耘圆 表达量和 灾枣韵蕴耘猿尧灾枣韵蕴耘源尧灾枣韵蕴耘缘
相比较袁增长趋势更为明显遥 在桐酸尧桐油快速增长
点渊愿 月 员员 日冤袁干种仁中桐油含量 圆远郾 源猿豫 依
员郾 远豫 袁桐油中桐酸含量 远缘郾 愿苑豫 依圆郾 圆豫 袁缘 个 灾枣韵蕴耘
转录本的表达量分别为 源园园郾 缘缘 依 远郾 圆怨尧缘苑源郾 源愿 依
员源郾 远远尧苑圆郾 源圆 依 愿郾 怨远尧猿远郾 园园 依 源郾 怨远尧源郾 愿猿 依 员郾 圆员袁在
此后的半个月中渊愿 月 员员 日至 愿 月 圆缘 日冤袁桐油尧桐
酸以及基因表达量都持续快速增长袁干种仁桐油含
量达到 猿源郾 员苑豫 依 圆郾 缘豫 袁桐油中桐酸含量 苑圆郾 员园豫
依猿郾 愿豫 袁缘 个 灾枣韵蕴耘 转录本的表达量分别为 缘怨苑郾 员怨
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猿园郾 源远尧猿远郾 愿缘 依 员圆郾 源猿遥 单因素方差分析结果显示袁
在油桐种仁成熟过程中的各个时期袁 灾枣韵蕴耘员 和
灾枣韵蕴耘圆 表达量均显著高于 灾枣韵蕴耘猿尧灾枣韵蕴耘源尧灾枣韵蕴耘缘
渊显著性水平 约 园郾 园缘冤袁并且基因表达量 灾枣韵蕴耘员尧
灾枣韵蕴耘圆 跃 灾枣韵蕴耘猿 跃 灾枣韵蕴耘源 跃 灾枣韵蕴耘缘遥
苑猿圆
林摇 业摇 科摇 学摇 研摇 究 第 圆苑 卷
图 源摇 油桐 缘 个 灾枣韵蕴耘转录本在油桐种仁成熟过程中的表达变化
猿摇 结论与讨论
韵造藻燥泽蚤灶的表达对油脂积累及脂肪酸成分有显
著的影响咱苑袁员猿暂 袁因此 韵造藻燥泽蚤灶 基因的分离及表达分析
可以为研究油脂合成机理和解析 韵造藻燥泽蚤灶 功能提供
思路遥 本文从油桐种仁 糟阅晕粤 文库中分离了油桐
灾枣韵蕴耘基因的 缘 个转录本袁完整阅读框长度分别为
源苑源尧源远缘尧源员源尧源员源尧源圆怨 遭责袁分析发现 缘 个 灾枣韵蕴耘转录
本在成熟的种子中特异高效表达袁在根尧茎尧叶尧花
瓣尧雌蕊尧雄蕊尧幼果组织中微弱表达遥 进一步分析
灾枣韵蕴耘基因 缘 个转录本在种仁成熟过程中的表达表
明袁缘 个 灾枣韵蕴耘转录本表达趋势与桐油尧桐酸积累趋
势一致袁其中在桐酸快速合成尧桐油快速积累时期袁
灾枣韵蕴耘员尧灾枣韵蕴耘圆 表达迅速上升并且表达量显著高于
灾枣韵蕴耘猿尧灾枣韵蕴耘源尧灾枣韵蕴耘缘渊显著性水平 约 园郾 园缘冤遥 同
时根据分子量大小分析袁灾枣韵蕴耘员尧灾枣韵蕴耘圆 编码蛋白
属于高分子量 韵造藻燥泽蚤灶 渊匀鄄韵蕴耘冤袁 灾枣韵蕴耘猿尧 灾枣韵蕴耘源尧
灾枣韵蕴耘缘 编码蛋白属于低分子量 韵造藻燥泽蚤灶渊蕴鄄韵蕴耘冤袁即
油桐种子中 匀鄄韵蕴耘渊灾枣韵蕴耘员尧灾枣韵蕴耘圆冤基因表达量高
于 蕴鄄韵蕴耘渊灾枣韵蕴耘猿尧灾枣韵蕴耘源尧灾枣韵蕴耘缘冤遥 匀 型和 蕴 型
韵蕴耘在功能上的区别目前文献报道较少袁 匀泽蚤葬燥
等咱员怨暂报道芝麻种子萌发过程中泛素化只发生在 匀鄄
韵蕴耘蛋白袁因此 匀型和 蕴型 韵蕴耘功能上的差别还有
待于进一步研究遥
文中报道的油桐 缘 个 灾枣韵蕴耘转录本包含文献已
报道的 圆 个 灾枣韵蕴耘咱员源袁 员愿暂 遥 与木本油料植物序列同源
性分析结果显示袁油桐 韵造藻燥泽蚤灶 氨基酸序列与麻风树
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油橄榄 渊韵造藻葬 藻怎则燥责葬藻葬 蕴援 冤尧欧榛 渊 悦燥则赠造怎泽 粤增藻造造葬灶葬
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称为脯氨酸结袁而在氨基端和羧基端存在多样
性咱员缘暂 遥 此外袁匀怎葬灶早 等咱圆园暂分析了 韵造藻燥泽蚤灶 在莱茵衣
藻渊悦澡造葬皂赠凿燥皂燥灶葬泽 则藻蚤灶澡葬则凿贼蚤蚤冤中转录和蛋白水平的
表达袁推测 韵造藻燥泽蚤灶 由莱茵衣藻到植物的进化过程遥
灾蚤灶凿蚤早灶蚤等咱圆员暂利用荧光蛋白研究发现拟南芥 韵造藻燥泽蚤灶
在转化酵母渊杂葬糟糟澡葬则燥皂赠糟藻泽 糟藻则藻增蚤泽蚤葬藻冤的油体中呈现
月藻贼葬折叠的二级结构袁但酵母与拟南芥的油体结构
还存在差异袁因此袁韵造藻燥泽蚤灶 作为油体的主要结构蛋
白袁其高级结构尧相互结合蛋白及作用方式还有待于
进一步研究遥
参考文献院
咱员暂 方嘉兴袁 何摇 方援 中国油桐 咱酝暂援 中国林业出版社袁 员怨怨愿
咱圆暂 谭晓风袁 蒋桂熊袁 谭方友袁 等援 我国油桐产业化发展战略调查研
究报告 咱允暂 援 经济林研究袁 圆园员员袁 圆怨渊猿冤院 员 原 苑
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第 圆 期 吴庆珂等院油桐油质蛋白 韵造藻燥泽蚤灶编码基因 缘 个 灾枣韵蕴耘转录本的克隆与表达分析
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咱员源暂 周摇 冠袁 汪阳东袁 陈益存袁 等援 油桐种仁 糟阅晕粤 文库的构建及
其油体蛋白 韵造藻燥泽蚤灶基因的生物信息学分析咱 允暂 援 林业科学研
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咱员愿暂 龙洪旭袁 谭晓风袁 陈摇 洪袁等援 油桐油体蛋白基因的克隆及序
列分析 咱允暂 援 中南林业科技大学学报袁 圆园员园袁 猿园渊源冤院 猿员 原 猿愿
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员远员渊源冤院 员愿远圆 原 员愿苑源
咱圆员暂 灾蚤灶凿蚤早灶蚤 允 阅袁 宰蚤藻灶 云袁 郧蚤怎造蚤葬灶蚤 粤袁 藻贼 葬造援 云燥造凿 燥枣 葬灶 燥造藻燥泽蚤灶 贼葬则早藻鄄
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渊愿冤院员愿愿员 原 员愿愿愿
怨猿圆