全 文 :书不同化学处理对稻草体外发酵动态变化的影响
马艳艳,李袁飞,成艳芬,朱伟云
(南京农业大学动物科技学院消化道微生物研究室,江苏 南京210095)
摘要:采用瘤胃体外发酵技术评定了不同化学处理对稻草体外发酵特性的影响。试验以3头装有永久性瘤胃瘘管
的荷斯坦奶牛为瘤胃液供体,用复合碱、氨及尿素处理稻草后,称量1g样品于含有10mL瘤胃液和90mL培养基
的39℃发酵瓶内体外发酵,分别于24,48,72,96h冰浴终止发酵,测定产气量、发酵液中挥发性脂肪酸、氨态氮及
微生物蛋白浓度。结果表明,化学处理提高了稻草发酵的产气量、挥发性脂肪酸、氨态氮以及微生物蛋白浓度。其
中复合碱处理组的发酵速度最快,累计产气量、干物质消失率和挥发性脂肪酸浓度最高,显著高于其他各组,其次
为尿素处理组和氨化处理组,对照组最低;尿素处理组的pH、氨态氮浓度和微生物蛋白含量最高,显著高于其他各
组,氨化处理组和碱化处理组次之,对照组最低。化学处理提高了稻草的体外降解率,其中复合碱化处理的效果最
好。
关键词:稻草;化学处理;体外发酵;降解率
中图分类号:S816.6 文献标识码:A 文章编号:10045759(2014)03035006
犇犗犐:10.11686/cyxb20140341
稻草是我国反刍动物主要粗饲料之一,但由于其粗纤维含量高,适口性差,消化利用率低,造成了资源浪费及
环境污染。为了提高稻草的饲用价值,除了添加矿物质和能量饲料外,生产中常对其进行适当的加工处理。常见
的处理方式有物理、化学和生物处理,其中化学处理又包括稀酸处理、碱化处理、氨化处理以及氨碱复合处理。化
学处理能降低稻草粗纤维含量,提高粗蛋白含量。陈广银等[1]对秸秆进行碱化处理研究表明,碱化处理不仅能破
坏木质纤维结构,也能破坏核酸、氨基酸等含氮物的结构,将其中的氮以NO3N和NH4+N的形式释放,提高
氮的利用率。
反刍动物通过瘤胃微生物发酵粗纤维获得能量,但秸秆中的木质素与纤维素和半纤维素相互交联[2],导致瘤
胃微生物难以降解利用。而化学处理则可破坏木质素与纤维素、半纤维素间的紧密连接,提高微生物对秸秆的降
解率。同时,氨化处理可形成铵盐,提高秸秆的总含氮量,使微生物合成微生物蛋白所需的氮营养素含量增加,促
进微生物增长[3]。王佳等[4]利用尿素处理稻草发现,尿素可以破坏纤维酯键,使纤维素暴露,加速纤维素和半
纤维素的溶解。Rezaeian等[5]研究也发现,碱化处理能够提高木聚糖酶活性,从而提高秸秆降解能力。
目前,对秸秆化学处理的研究多侧重于处理前后营养成分变化的比较,而对瘤胃微生物发酵预处理秸秆的动
态变化研究较少。本研究通过体外发酵技术研究化学预处理对秸秆发酵动态变化的影响,寻求提高稻草秸秆降
解率的最佳处理方法。
1 材料与方法
1.1 材料
1.1.1 稻草采集与化学处理 稻草取自浙江大学农场。选择清洁、无污染及无霉变样品于65℃烘干,粉碎过1
mm筛并保存备用。分别添加3.6% NaOH与NH3·H2O、9% NH4HCO3 及10%尿素对稻草进行复合碱化、
氨化及尿素化处理。将原料混合均匀并拌湿后装入密封袋中压紧,堆放15d后65℃烘干备用。不同化学处理稻
草的营养成分含量见表1。
350-355
2014年6月
草 业 学 报
ACTAPRATACULTURAESINICA
第23卷 第3期
Vol.23,No.3
收稿日期:20130621;改回日期:20131012
基金项目:公益性行业(农业)科研专项(200903003)资助。
作者简介:马艳艳(1987),女,山东菏泽人,在读硕士。Email:mayan0230@163.com.cn
通讯作者。Email:yanfencheng@njau.edu.cn
1.1.2 瘤胃液采集及培养基配制 瘤胃液采自南京农业大学江浦农场3头装有永久性瘤胃瘘管的健康成年荷
斯坦奶牛。每天7:00和17:00饲喂干物质9kg[青贮玉米秸秆∶苜蓿(犕犲犱犻犮犪犵狅狊犪狋犻狏犪)∶羊草(犔犲狔犿狌狊
犮犺犻狀犲狀狊犻狊)∶精料=20∶20∶30∶30;精料主要由玉米(犣犲犪犿犪狔狊)、麸皮、豆粕组成;先粗后精],自由饮水。早饲
前采集瘤胃液并保存于充满CO2 的39℃热水瓶内,迅速带回实验室,整个过程严格厌氧。参照Theodorou等[6]
方法配制培养基,然后与经4层纱布过滤的瘤胃液在厌氧条件下充分混合(体积比为10∶90),厌氧分装100
mL/瓶(含1g发酵底物),39℃静置培养96h。
1.2 测定指标与测定方法
1.2.1 常规营养成分分析 按美国公职分析化学师协会(AssociationofOfficialAnalyticalChemists,
AOAC)[7]的方法测定试验样品中干物质(drymatter,DM)、粗蛋白(crudeprotein,CP)、粗脂肪(etherextract,
EE)和粗灰分(ashcontent,Ash)含量,采用VanSoest和Robertson[8]的方法测定中性洗涤纤维(neutraldeter
gentfiber,NDF)及酸性洗涤纤维(aciddetergentfiber,ADF)含量。计算底物干物质消失率(disappearancerate
ofdrymatter,DMD)、中性洗涤纤维消失率(disappearancerateofneutraldetergentfiber,NDFD)和酸性洗涤纤
维消失率(disappearancerateofaciddetergentfiber,ADFD)。
表1 不同化学处理稻草营养成分分析
犜犪犫犾犲1 犆犺犲犿犻犮犪犾犮狅犿狆狅狊犻狋犻狅狀狅犳犲狓狆犲狉犻犿犲狀狋犪犾狉狅狌犵犺犪犵犲狊 %
组别
Group
干物质
Drymatter
粗蛋白
Crudeprotein
粗脂肪
Etherextract
灰分
Ashcontent
中性洗涤纤维
Neutraldetergentfiber
酸性洗涤纤维
Aciddetergentfiber
对照组Control 89.69 4.83 0.14 8.42 71.34 42.93
碱化组Sodiumhydroxide 89.32 5.48 0.15 10.65 58.44 39.99
氨化组Ammoniumbicarbonate 90.82 7.29 0.13 8.28 68.35 43.13
尿素组Urea 91.20 12.52 0.17 8.04 67.92 42.60
注:所有数据均为实测值。
Note:Aldataweremeasuredvalues.
1.2.2 发酵指标测定 发酵过程中测定动态产气量,于24,48,72及96h时结束发酵并测定发酵液pH值、挥
发性脂肪酸(volatilefattyacids,VFA)、氨态氮(NH3N)及微生物蛋白(microbialprotein,MCP)浓度。参照
Theodorou等[6]的方法测定产气量;参照秦为琳[9]的方法测定VFA含量;参照 Weathburn[10]的方法测定NH3
N浓度;采用考马斯亮蓝比色法测定 MCP浓度。
1.3 数据分析
图1 不同化学处理稻草体外发酵96犺累计产气量
犉犻犵.1 犆狌犿狌犾犪狋犻狏犲犵犪狊狆狉狅犱狌犮狋犻狅狀狅犳狉犻犮犲狊狋狉犪狑
狑犻狋犺犱犻犳犳犲狉犲狀狋犮犺犲犿犻犮犪犾狋狉犲犪狋犿犲狀狋犻狀狏犻狋狉狅
CK:对照组Control;SH:碱化组Sodiumhydroxide;AB:氨化组Am
moniumbicarbonate;UR:尿素组Urea;下同Thesamebelow.
数据经Excel2007初步整理后用SPSS17.0进
行OneWayANOVA分析,用Duncan’s法进行多
重比较。试验结果以平均值±标准误(Mean±SEM)
表示,当犘<0.05时认为差异显著。
2 结果与分析
2.1 不同化学处理对稻草体外发酵累计产气量的影
响
稻草体外厌氧发酵累计产气量变化见图1。各
处理组体外发酵产气量变化趋势基本一致,发酵前
36h累计产气量迅速增加,随后增长缓慢。发酵36
h时,碱化组累计产气量最高,其次为尿素组和氨化
组,对照组最低;发酵结束时,各组累计产气量差异显
153第23卷第3期 草业学报2014年
著(犘<0.05),碱化组最高,为(208.27±0.87)mL;其次为尿素组和氨化组,分别为(197.15±0.88)和(196.03±
0.60)mL;对照组最低,为(192.18±0.43)mL;其中氨化组稻草和对照组差异不显著(犘>0.05)。
2.2 不同化学处理稻草体外发酵DMD、NDFD、ADFD变化
稻草体外发酵DMD、NDFD和ADFD变化见图2。各处理组DMD、NDFD和ADFD均随发酵时间的延长
逐渐升高,其中碱化组稻草显著高于其他各组(犘<0.05),对照组最低,尿素组与氨化组间差异不显著(犘>
0.05)。发酵结束时,碱化组与对照组相比,DMD由31.58%提高到51.36%,NDFD由63.62%提高到82.26%,
ADFD由64.39%提高到71.37%。
图2 不同化学处理稻草体外发酵犇犕犇、犖犇犉犇、犃犇犉犇变化
犉犻犵.2 犇犕犇,犖犇犉犇,犃犇犉犇狅犳狉犻犮犲狊狋狉犪狑狑犻狋犺犱犻犳犳犲狉犲狀狋犮犺犲犿犻犮犪犾狋狉犲犪狋犿犲狀狋犻狀狏犻狋狉狅
2.3 不同化学处理稻草体外发酵pH值变化
图3 不同化学处理稻草体外发酵的狆犎值变化
犉犻犵.3 狆犎狏犪犾狌犲狅犳狉犻犮犲狊狋狉犪狑狑犻狋犺犱犻犳犳犲狉犲狀狋
犮犺犲犿犻犮犪犾狋狉犲犪狋犿犲狀狋犻狀狏犻狋狉狅
不同化学处理稻草体外发酵pH 值变化见图3。
各处理组发酵液pH值随发酵时间不断降低且发酵过
程中尿素组pH值均为最高。发酵结束时尿素组和氨
化组的pH显著高于对照组(犘<0.05),碱化组与其
他各组差异不显著(犘>0.05)。
2.4 不同化学处理稻草体外发酵VFA变化
稻草体外发酵过程中 VFA变化情况见表2。随
发酵时间延长,各处理组 VFA浓度逐渐升高;碱化、
氨化和尿素组乙/丙呈先升高后降低的趋势,48h时
达到最高,而对照组乙/丙则逐渐降低。发酵结束时,
氨化和尿素组发酵液中乙/丙显著低于其他2组(犘<
0.05),其中氨化组和尿素组差异不显著(犘>0.05),
碱化组和对照组差异不显著(犘>0.05)。发酵不同时间点各处理组相比,碱化组乙酸、丙酸、丁酸以及总挥发酸
浓度均显著高于其他各组(犘<0.05),其次为尿素组和氨化组,对照组最低。
2.5 不同化学处理稻草体外发酵NH3N和 MCP变化
稻草体外发酵NH3N及MCP浓度变化见图4。随发酵时间延长,对照组和氨化组NH3N浓度呈先升高后
降低趋势,碱化组和尿素组则为升高-降低-升高。发酵各时间点不同处理组相比,尿素组NH3N浓度均显著
高于其他各组(犘<0.05),其次为氨化组和碱化组,对照组最低,碱化组与对照组差异不显著(犘>0.05)。不同化
学处理稻草体外发酵 MCP浓度介于13.54~20.64mg/100mL之间。随发酵时间延长,各处理组 MCP浓度先
升高后降低,发酵48h时 MCP浓度最高。发酵24,48及72h不同处理组相比,尿素组 MCP浓度最高,对照组
最低,氨化组和碱化组差异不显著(犘>0.05),发酵结束时各处理组差异不显著(犘>0.05)。
253 ACTAPRATACULTURAESINICA(2014) Vol.23,No.3
表2 不同化学处理稻草体外发酵犞犉犃变化
犜犪犫犾犲2 犞犉犃狅犳狉犻犮犲狊狋狉犪狑狑犻狋犺犱犻犳犳犲狉犲狀狋犮犺犲犿犻犮犪犾狋狉犲犪狋犿犲狀狋犻狀狏犻狋狉狅
挥发性脂肪酸
VFA(mmoL/L)
时间点
Time(h)
对照组
CK
碱化组
SH
氨化组
AB
尿素组
UR
标准误
S.E.M
犘值
犘value
24 8.80±0.66a 13.11±0.96b 8.41±0.56a 11.29±0.61b 0.65 0.005
乙酸Acetate 48 17.31±0.77a 23.79±0.47c 20.10±0.54b 20.75±0.91b 0.76 0.001
72 21.40±0.77a 23.41±1.02a 22.12±1.21a 20.62±1.27a 0.56 0.371
96 21.93±0.52a 25.82±0.40b 22.70±0.38a 23.28±1.31a 0.55 0.031
24 2.65±0.12a 3.99±0.15c 2.82±0.06a 3.42±0.10b 0.17 <0.000
丙酸Propionate 48 5.28±0.07a 6.50±0.08c 6.15±0.19bc 5.93±0.18b 0.15 0.002
72 8.20±0.19a 8.71±0.37a 8.88±0.37a 8.17±0.31a 0.17 0.341
96 8.44±0.17a 10.05±0.15b 9.37±0.08b 9.40±0.51b 0.21 0.023
24 1.36±0.09ab 1.99±0.24ab 1.10±0.09a 2.33±0.53b 0.20 0.069
丁酸Butyrate 48 1.51±0.14a 2.29±0.33b 1.73±0.27ab 1.83±0.01ab 0.13 0.174
72 2.66±0.38a 2.81±0.38a 2.10±0.22a 1.91±0.10a 0.17 0.179
96 2.18±0.09a 3.24±0.16c 2.67±0.07b 3.01±0.19bc 0.13 0.003
24 3.35±0.36a 3.29±0.24a 2.98±0.15a 3.29±0.10a 0.11 0.674
乙丙比 48 3.27±0.12a 3.66±0.03b 3.27±0.01a 3.49±0.05b 0.06 0.008
Acetate∶Propionate 72 2.61±0.03ab 2.69±0.01b 2.49±0.05a 2.52±0.07a 0.03 0.057
96 2.60±0.02b 2.57±0.03b 2.42±0.02a 2.48±0.02a 0.23 0.002
24 12.62±0.46a 18.99±0.81b 12.26±0.66a 17.15±1.32b 0.95 0.001
总挥发酸 48 24.39±1.14a 32.62±0.70c 28.13±1.20b 27.99±1.10b 0.99 0.004
TotalVFA 72 33.27±0.26ab 36.91±1.94b 34.02±1.95ab 30.85±1.51a 0.94 0.132
96 33.38±0.63a 40.65±0.72c 36.41±0.21ab 37.90±2.15bc 0.94 0.015
注:同行不同小写字母表示差异显著(犘<0.05)。
Note:Valuesinthesamerowwithdifferentsmallettersmeansignificantdifference(犘<0.05).
图4 不同化学处理稻草体外发酵犖犎3犖和 犕犆犘浓度变化
犉犻犵.4 犆狅狀犮犲狀狋狉犪狋犻狅狀狊狅犳犖犎3犖犪狀犱犕犆犘狅犳狉犻犮犲狊狋狉犪狑狑犻狋犺犱犻犳犳犲狉犲狀狋犮犺犲犿犻犮犪犾狋狉犲犪狋犿犲狀狋犻狀狏犻狋狉狅
3 讨论
3.1 化学处理对稻草营养成分及发酵特性的影响
本研究中复合碱化、氨化以及尿素化处理均提高了稻草粗蛋白含量,降低了NDF和ADF含量,这可能是因
为化学处理不但增加了秸秆非蛋白氮含量,还破坏了木质素与纤维素、半纤维素间的酯键,使结构性多糖更易被
353第23卷第3期 草业学报2014年
降解。张浩[11]研究不同处理对稻草营养成分的影响时发现,经氨化处理后稻草粗蛋白含量提高了4.17%,增加
了近1倍。邱向峰等[12]对饲用稻草预处理的研究表明,稀碱处理能大量溶出稻草中的半纤维素和木质素,从而
提高稻草纤维素的糖化率。
本研究中碱化组累计产气量和干物质消失率最高,其次是尿素组和氨化组。这与已有报道一致。Liu等[13]
研究显示,碱化稻草体外发酵产气量显著高于氨化稻草。庞云芝等[14]研究也显示,尿素、氨和NaOH处理均能
提高稻草体外发酵产气量,但NaOH效果最好。艾丽霞等[15]对不同纤维底物体外发酵特性的研究表明,粗纤维
含量较低,粗蛋白和无氮浸出物含量较高的底物体外发酵产气量较高。本研究中复合碱处理提高了稻草可发酵
纤维比例及粗蛋白含量,从而提高了稻草干物质消失率和总产气量。
本研究中复合碱化处理显著提高了发酵液中VFA浓度,氨化处理显著提高了发酵液中NH3N及 MCP浓
度。陈伟健等[16]在研究氨化处理稻草的体外发酵特性时发现,氨化处理能显著增加反刍动物瘤胃内主要纤维降
解菌产琥珀酸丝状杆菌和黄色瘤胃球菌的数量,从而产生大量纤维素酶和半纤维素酶来加速底物水解增加还原
糖生成量,最终大幅提高VFA产量[17]。氨化通过破坏木质素与多糖间的酯键,并与多糖形成铵盐,成为瘤胃内
微生物合成菌体蛋白的氮源。同时,氨化处理通过添加外源氮的方式提高了稻草的含氮量,导致微生物发酵产生
较高的NH3N,同时改善了 MCP的合成效率。
3.2 稻草发酵特性的动态变化
从稻草体外发酵动态变化看,瘤胃微生物在降解可消化养分的同时,伴随着产气量的增加、底物消失率的上
升及VFA浓度的升高。由于发酵产生的VFA不能被及时消耗而累积造成pH持续下降。统计结果还显示,各
处理组96h累计产气量与其对应的DMD和VFA浓度呈显著正相关,相关系数分别为0.911和0.972;与pH
呈显著负相关,相关系数为0.856。
瘤胃液中NH3N和 MCP浓度反映出日粮蛋白质降解与微生物蛋白合成间的动态平衡。本研究中,各处理
组NH3N变化趋势为升高-降低-升高,而MCP则呈先升高后降低的趋势,二者同时在发酵48h时达到最高。
饲料蛋白质中的易降解组分在培养初期能够迅速发酵,所以在发酵前48hNH3N和 MCP浓度均有所升高;随
着发酵时间延长,由于 VFA等产物积累引起pH 下降,从而影响微生物生长和对底物的降解,因此发酵后期
NH3N和 MCP浓度有所降低。发酵液中NH3N浓度在发酵后期呈先下降后升高的趋势,可能是细菌溶菌、纤
毛虫自溶或纤毛虫的吞噬作用释放出氨所致。
4 结论
化学处理提高了稻草体外发酵累计产气量、干物质消失率以及挥发性脂肪酸浓度,其中碱化处理效果最好。
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犈犳犳犲犮狋狊狅犳犱犻犳犳犲狉犲狀狋犮犺犲犿犻犮犪犾狋狉犲犪狋犿犲狀狋狊狅狀犳犲狉犿犲狀狋犪狋犻狅狀犮犺犪狉犪犮狋犲狉犻狊狋犻犮狊狅犳狉犻犮犲狊狋狉犪狑犻狀狏犻狋狉狅
MAYanyan,LIYuanfei,CHENGYanfen,ZHU Weiyun
(LaboratoryofGastrointestinalMicrobiology,NanjingAgriculturalUniversity,Nanjing210095,China)
犃犫狊狋狉犪犮狋:Theeffectsofdifferentchemicaltreatmentsonfermentationcharacteristicsofricestraw (RS)犻狀
狏犻狋狉狅wereinvestigated.Therumenfluidwascolectedfrom3holsteindairycowswithpermanentrumenfistu
la.Thericestrawwastreatedwithcompositesodiumhydroxide(SH),ammoniumbicarbonate(AB)andurea
(UR).Thebottlescontaining10mLrumenfluidand90mLmediawith1gRSassubstratewereincubatedat
39℃,andthesampleswerecolectedat24,48,72and96hafterincubationfortheanalysisofgasproduction
(GP),volatilefattyacids(VFA),ammonianitrogen(NH3N)andmicrobialproteinproduction(MCP).The
chemicaltreatmentssignificantlyimprovedtheGP,concentrationsofVFA,NH3NandMCPcomparedwith
untreatedRS.Thecumulativegasproduction,drymatterdigestibilityandVFAofSHRSweresignificantly
higherthantheothersandtheyweresignificantlylowerintheuntreatedRS.However,pHandtheconcentra
tionsofNH3NandMCPofURRSweresignificantlyhigherthanthoseofABRS,SHRSandUTRS.In
conclusion,chemicaltreatmentsimprovedthe犻狀狏犻狋狉狅digestibilityofRS,inwhichcompositesodiumhydrox
idetreatmentwasrecommended.
犓犲狔狑狅狉犱狊:ricestraw;chemicaltreatment;犻狀狏犻狋狉狅fermentation;digestibility
553第23卷第3期 草业学报2014年