全 文 :书犇犗犐:10.11686/犮狔狓犫20150421 犺狋狋狆://犮狔狓犫.犾狕狌.犲犱狌.犮狀
孙广正,姚拓,赵桂琴,卢虎,马文彬.荧光假单胞菌防治植物病害研究现状与展望.草业学报,2015,24(4):174190.
SunGZ,YaoT,ZhaoGQ,LuH,MaWB.Researchprogressandprospectsforcontrolingplantdiseasesusing犘狊犲狌犱狅犿狅狀犪狊犳犾狌狅狉犲狊犮犲狀狊.Acta
PrataculturaeSinica,2015,24(4):174190.
荧光假单胞菌防治植物病害研究现状与展望
孙广正,姚拓,赵桂琴,卢虎,马文彬
(甘肃农业大学草业学院,草业生态系统教育部重点实验室,甘肃 兰州730070)
摘要:随着植物病害的日趋严重,生物防治已经成为国内外学者研究的重点,其中,荧光假单胞菌尤为重要。本研
究综述了荧光假单胞菌的培养特征(形态特征、生理生化特性、培养条件和与其他菌的异同);从不同类群的植物分
离到防治病害的荧光假单胞菌;荧光假单胞菌的生防效果(单独使用和与其他菌或物质交互使用的防治效果);荧
光假单胞菌及活性物质防治植物病害的作用方式和作用机理;荧光假单胞菌在医学、农业和环保领域中的危害。
对其风险和在生物防治领域的发展前景做了评价和展望。
关键词:荧光假单胞菌;植物病害;生物防治;作用机制;风险评价
犚犲狊犲犪狉犮犺狆狉狅犵狉犲狊狊犪狀犱狆狉狅狊狆犲犮狋狊犳狅狉犮狅狀狋狉狅犾犻狀犵狆犾犪狀狋犱犻狊犲犪狊犲狊狌狊犻狀犵犘狊犲狌犱狅犿狅狀犪狊
犳犾狌狅狉犲狊犮犲狀狊
SUNGuangZheng,YAOTuo,ZHAOGuiQin,LUHu,MAWenBin
犘狉犪狋犪犮狌犾狋狌狉犪犾犆狅犾犾犲犵犲,犌犪狀狊狌犃犵狉犻犮狌犾狋狌狉犪犾犝狀犻狏犲狉狊犻狋狔,犓犲狔犔犪犫狅狉犪狋狅狉狔狅犳犌狉犪狊狊犾犪狀犱犈犮狅狊狔狊狋犲犿,犕犻狀犻狊狋狉狔狅犳犈犱狌犮犪狋犻狅狀,犔犪狀狕犺狅狌
730070,犆犺犻狀犪
犃犫狊狋狉犪犮狋:Biologicalcontrolagents,especialy犘狊犲狌犱狅犿狅狀犪狊犳犾狌狅狉犲狊犮犲狀狊,havebecomeoneofthemostimpor
tantandusefuloptionsforplantdiseasemanagement.Thisstudyreviewstheculturecharacteristicsof犘.犳犾狌狅
狉犲狊犮犲狀狊,includingthemorphologicalcharacteristics,physiologicalandbiochemicalcharacteristics,culturecon
ditionsandthesimilaritiesordifferenceswithotherbacteriaalsoisolatedfromvariousplantgroupstocontrol
diseases.Thediseasecontrolefficiencyof犘.犳犾狌狅狉犲狊犮犲狀狊whenusedaloneortogetherwithotherbacteriaor
treatmentpreparationsissummarized.Themodesofactionofboth犘.犳犾狌狅狉犲狊犮犲狀狊andbioactivesubstances
usedforcontrolingplantdiseasesareelucidated.Hazardsof犘.犳犾狌狅狉犲狊犮犲狀狊inmedicine,agricultureandenvi
ronmentalprotectionarediscussed.Theoutlookandprospectsforbiologicalcontrolinthefieldarealsoevalua
tedandafieldriskassessmentpresented.
犓犲狔狑狅狉犱狊:犘狊犲狌犱狅犿狅狀犪狊犳犾狌狅狉犲狊犮犲狀狊;plantdiseases;biocontrol;mechanism;riskassessment
植物病害是植物在生物或非生物因子影响下,发生一系列形态、生理和生化上的病理变化,阻碍了植物正常
生长、发育进程,从而影响经济效益的现象[1]。目前,植物病害防治主要依赖化学农药。然而,长期大量施用化学
农药导致农药残留及环境污染,危害人类健康并破坏生态平衡,同时也使病原菌产生了严重的抗药性。因此,探
寻其他环保、环境友好型防治方法已刻不容缓[23]。20世纪70年代初,Kerr[4]利用放射性土壤杆菌K84菌株防
第24卷 第4期
Vol.24,No.4
草 业 学 报
ACTAPRATACULTURAESINICA
2015年4月
April,2015
收稿日期:20140410;改回日期:20140718
基金项目:国家自然基金(31360584)和现代农业产业技术体系项目(No.CARS08C)资助。
作者简介:孙广正 (1988),男,甘肃庆阳人,在读硕士。Email:sunfanfan885@163.com
通讯作者Correspondingauthor.Email:yaotuo@gsau.edu.cn
治桃根癌病取得成功。此后,探索植物病害的生物防治方法成为农业工作者努力的主要方向之一,并取得了较大
的成果[5]。目前,成功应用于植物病害生物防治的微生物涉及真菌、细菌、放线菌等很多生物种群。如假单胞菌
属(犘狊犲狌犱狅犿狅狀犪狊)细菌能在植物根际土壤中大量增殖,许多菌株对植物有抑制病害、促进生长的作用,其中荧光
假单胞菌(犘狊犲狌犱狅犿狅狀犪狊犳犾狌狅狉犲狊犮犲狀狊)成为近几十年来研究报道最多、最具应用价值的一类生防菌[6]。
荧光假单胞菌属薄壁菌门假单胞菌科假单胞菌属[7],属于rRNAⅠ群荧光假单胞菌DNA同源组[8]。荧光假
单胞菌DNA同源群包括荧光假单胞菌、铜绿假单胞菌和恶臭假单胞菌[9]。依据菌落形态、色素、生理生化和营
养的特性等表型特征将荧光假单胞菌分为5个生物型[7]:Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ、G。荧光假单胞菌是一种重要的植物病
害生防菌和根际促生菌(plantgrowthpromotingrhizobacteria,PGPR)[6,10],具有繁殖速度快、适应能力强、易于
人工培养、制剂稳定、施用方便、不污染环境、防治多种植物病害等优点。该菌的生防机制包括:抗生素作用[11]、
噬铁素对铁的营养竞争[12]、有效的根际定殖[13]、次生抗性代谢物[14]和诱导植物系统抗性[15]等。最早对荧光假
单胞菌生防作用的研究是在1978年发现犘.犳犾狌狅狉犲狊犮犲狀狊处理马铃薯(犛狅犾犪狀狌犿狋狌犫犲狉狅狊狌犿)种块能增加产量[16]。
19世纪70年代首次提出荧光假单胞菌产生的噬铁素促进植物生长并抑制植物病害,1986年首次报道克隆得到
菌株犘.犳犾狌狅狉犲狊犮犲狀狊HV37a的抗生素基因[17]。荧光假单胞菌能够产生10多种抗生性次级代谢产物,在生物防
治和生防菌剂的开发及应用方面有巨大的潜力[1819]。近年来,随着分子生物学的广泛渗入,通过对这些作用机制
的遗传性状进行分析,采用遗传工程加以改良,使得荧光假单胞菌具有更诱人的生防效果[10]。但是,随着对荧光
假单胞菌的深入研究,一些学者发现荧光假单胞菌也存在一定的危害[20]。为便于研究和了解该菌,笔者对荧光
假单胞菌的分离筛选及其培养特征、防治植物病害的研究进展和应用现状、防治植物病害的主要作用机制以及荧
光假单胞菌的风险评估等进行了综述,并对荧光假单胞菌在生物防治领域的发展前景进行了展望,旨在为荧光假
单胞菌在防治植物病害中的进一步开发与应用提供基础资料。
1 荧光假单胞菌的培养特征
荧光假单胞菌是典型的革兰氏阴性菌,电镜观察其菌体呈杆状,对数生长期时大小一般为(0.7~0.8)μm×
(2.3~2.8)μm,呈单个或成对排列,具有极生鞭毛,偶见无鞭毛无动力的菌株,运动活泼,不形成芽孢。DNA的
G+C比例范围为59.4~61.3克分子%,生物型Ⅳ有最低值,生物型Ⅱ有最高值[7]。该菌能液化明胶,葡萄糖发
酵、蔗糖发酵、乳糖发酵均为阳性,并且能以多种醇类物质作为碳源,不能利用乙醇、L鼠李糖等。甲基红试验、柠
檬酸盐发酵、接触酶反应均为阳性,水解淀粉、脂酶反应阴性,对青霉素有抗性,不产生绿脓菌素[2122]。具有分解
纤维素、蛋白质和结合Fe3+的能力,但不能分解几丁质[23]。有些菌株(生物型Ⅱ,Ⅲ和Ⅳ)能进行反硝化,生物型
Ⅰ和Ⅲ在卵黄反应中为阳性,生物型Ⅰ一般可分解脂肪,生物型Ⅱ不解脂[7]。营专性好氧生活,可在pH5.7和
7% NaCl的环境中生长,最适生长温度约25~30℃。大多数菌株在4℃或4℃以下生长,在41℃不生长。
荧光假单胞菌在KMB固体培养基上于28℃下培养2d后,生长良好,菌落微隆起,砖红色,边缘呈波浪花纹
向外扩展,表面较湿润稍凸起不透明,易用接种针挑起,与该菌属下其他种类的典型区别在于能产生水溶性的黄
绿色素(青脓素),紫外线(366nm)斜光照射下可见黄绿色荧光[2426]。荧光假单胞菌在普通培养基、麦康凯、沙门
和志贺菌属琼脂培养基平板上均可生长[9]。在PDA培养基上长势极弱或不生长,菌落深红色[27]。
微生物的良好生长需要培养基各组分浓度和比例合适,碳源和氮源对菌体的生长或蛋白的表达影响较大,浓
度太低会造成营养缺乏,限制菌体正常生长,进而影响代谢产物的产量[28]。国内外一些学者对荧光假单胞菌的
最佳生长条件做了研究。汤春梅等[29]对一些促生菌和生防菌的最适培养条件进行了测定和分析,为菌株的最佳
发酵条件和生态适应性评价提供了依据。Farhangi等[30]评估了不同温度条件下碳酸钙对荧光假单胞菌CHA0
RIF的影响,研究表明在15℃,碳酸钙含量最大时,CHA0RIF存活的时间最长。昝继清和林炜铁[31]研究发现菌
株JX18最适培养基初始pH值7.0,培养温度30℃,摇床转速160r/min,最佳碳源和氮源分别为葡萄糖和蛋白
胨。还有学者[32]研究了提高荧光假单胞菌抑菌活性的最佳发酵配方和培养条件为:果糖1.5%、蛋白胨3.0%、
KH2PO40.1%、NaCl0.04%、CaCO30.1%,起始pH为7.2,装瓶量50mL/250mL,28℃,200r/min,种子液接
种量为10%,摇瓶培养4d。
571第4期 孙广正 等:荧光假单胞菌防治植物病害研究现状与展望
2 生防荧光假单胞菌的分离筛选
目前,通常采用平板稀释法分离筛选荧光假单胞菌[24]。分离筛选的指标包括荧光假单胞菌的体外病原体抑
制、生物表面活性剂的生产、磷酸盐的溶解能力和参与抗生素合成的基因等方面,从而得到生防能力较强的菌
株[33]。对分离筛选得到的菌株经过形态、生理生化试验以及16SrRNA基因序列分析,参考《伯杰细菌鉴定手
册》就可鉴定此类生防菌为荧光假单胞菌[7]。近些年,研究者从不同植物根际对荧光假单胞菌进行了分离筛选,
获得了一些有应用潜力的菌株(表1)。
表1 对植物病原菌具有拮抗作用的荧光假单胞菌
犜犪犫犾犲1 犘.犳犾狌狅狉犲狊犮犲狀狊狑犻狋犺犪狀狋犪犵狅狀犻狊狋犻犮犲犳犳犲犮狋狊狅狀狆犾犪狀狋狆犪狋犺狅犵犲狀狊
荧光假单胞菌株犘.犳犾狌狅狉犲狊犮犲狀狊strain
代号No. 来源Sources
植物病原菌
Plantpathogens
文献来源
Referencesources
VUPf5 小麦根际土壤Thesoiladheringtowheatroots 禾顶 囊 壳 小 麦 变 种 犌犪犲狌犿犪狀狀狅犿狔犮犲狊
犵狉犪犿犻狀犻狊var.狋狉犻狋犻犮犻犼
[34]
JT716 生姜 Ginger 黑曲霉犃狊狆犲狉犵犻犾犾狌狊狀犻犵犲狉 [35]
XF174 水稻根际土壤Thesoiladheringtoriceroots 立枯丝核菌犚犺犻狕狅犮狋狅狀犻犪狊狅犾犪狀犻 [24]
TS30 番茄根际土壤Thesoiladheringtotomatoroots 灰葡萄孢犅狅狋狉狔狋犻狊犮犻狀犲狉犲犪 [22]
AbIII7456,AbIII7631 番茄根际土壤Thesoiladheringtotomatoroots 稻梨孢犘狔狉犻犮狌犾犪狉犻犪狅狉狔狕犪犲 [27]
P7210 烟草根际土壤Thesoiladheringtotobaccoroots 烟草疫霉犘犺狔狋狅狆犺狋犺狅狉犪狀犻犮狅狋犻犪狀犪犲 [23]
G209 烟草根际土壤Thesoiladheringtotobaccoroots 烟草炭疽菌犆狅犾犾犲狋狅狉犻犮犺狌犿狀犻犮狅狋犻犪犲 [36]
W25 草莓根际土壤Thesoiladheringtostrawberryroots 尖孢镰刀菌犉狌狊犪狉犻狌犿狅狓狔狊狆狅狉狌犿 [25]
P13 油菜根际土壤Thesoiladheringtooilseedraperoots 核盘菌犛犮犾犲狉狅狋犻狀犻犪狊犮犾犲狉狅狋犻狅狉狌犿 [21]
3 荧光假单胞菌的生防效果
3.1 荧光假单胞菌的拮抗性研究
为了检测荧光假单胞菌对植物病害的生防作用,国内外一些学者(表2)通过平板对峙法测定生防菌的抑菌
活性,并观察病原菌在生长过程中发生的异常以及植株生长的状况。通常将病原菌接种于PDA培养基平板中
央,置于28℃恒温箱内培养3d;将生防菌分离物接入NA培养液中制备成发酵液,在平板上对峙三点放置无菌
滤纸片,吸取10μL发酵液于滤纸片上,置于28℃恒温箱内培养。未接发酵液处理设置为对照,每处理设置重
复,待空白对照病原菌长满平板时,测量抑菌圈直径,计算抑制率。通过抑制率的大小分析其拮抗能力的强
弱[37]。
研究表明,荧光假单胞菌抑制病原菌的菌丝生长、游动孢子囊的产生和游动孢子的萌发,在显微镜下观察发
现生防菌使病原菌菌丝发生畸形。生防菌的抑菌圈直径大,抑菌率高。通过降低病害的发病程度,能够提高植物
种子的发芽率和活力指数,从而保证农作物的正常生长。生防菌能在根部定殖,也能通过叶面喷施来防治病害。
有学者不仅在室内进行了拮抗性研究,还在田间测试了荧光假单胞菌的防治效果,结果发现拮抗效果都非常明
显[39]。
假单胞菌属中除了荧光假单胞菌(表2)以外,其他的一些假单胞菌也有生防促生作用。GonzálezSánchez
等[53]研究发现假单胞菌PCL1606在根际土壤中有较高的持久性,在温室中对鳄梨白根腐病的防治效果较为明
显。Sang等[54]通过假单胞菌的筛选得到生防辣椒疫霉菌的菌株,并且发现有的菌株能够促进辣椒果实的生长。
刘佳莉等[55]研究发现用假单胞菌A4处理燕麦(犃狏犲狀犪狊犪狋犻狏犪)可以明显增加株高、植株鲜重、植株根长和根鲜
重,说明A4处理可有效地促进燕麦的生长并提高燕麦的盐碱抗性。还有学者发现假单胞菌属可以作为微生物
菌肥生产的优良菌属[5659],韩华雯等[60]认为假单胞菌Jm92+Jm170+Lx191+S7与半量磷肥配施可代替全量磷
肥,明显增加了苜蓿的产量。此外,毕江涛等[61]研究发现药用植物柽柳(犜犪犿犪狉犻狓犮犺犻狀犲狀狊犻狊)内生真菌与铜绿假
单胞菌之间没有拮抗作用。
671 草 业 学 报 第24卷
表2 荧光假单胞菌的生防效果
犜犪犫犾犲2 犅犻狅犮狅狀狋狉狅犾犲犳犳犲犮狋狅犳犘.犳犾狌狅狉犲狊犮犲狀狊
荧光假单胞菌株
犘.犳犾狌狅狉犲狊犮犲狀狊strain
代号No. 来源Sources
植物病原菌
Plantpathogens
防治效果
Controleffect
文献来源
Reference
sources
CZ 烟草根际土壤The
soiladheringtoto
baccoroots
烟草花叶病毒
Tobaccomosaic
virus
2010和2011年田间试验表明,利用稀释100倍的CZ抑制TMV的抑制率达到
58.2%和47.6%。Fieldtrialsin2010and2011showedthattheinhibitionrateof
100folddilutionofCZsuppressedTMVinfectioncanbereachat58.2%and47.6%.
[38]
PF75 烟草根际土壤The
soiladheringtoto
baccoroots
丁香假单胞杆菌角
斑致病变种
犘狊犲狌犱狅犿狅狀犪狊狊狔狉犻狀
犵犪犲pv.狋犪犫犪犮犻
研究表明室内试验中荧光假单胞菌PF75代谢产物对烟草角斑病的抑菌效果
达到71.00%,大田试验中PF75活菌的50倍稀释液田间防治效果达87.34%。
Theresultsshowedthatinhibitoryeffectsof犘狊犲狌犱狅犿狅狀犪狊犳犾狌狅狉犲狊犮犲狀狊PF75
metabolitesreached71.00%on犘狊犲狌犱狅犿狅狀犪狊狊狔狉犻狀犵犪犲pv.狋犪犫犪犮inlaboratory
tests,whilecontroleffectsof犘狊犲狌犱狅犿狅狀犪狊犳犾狌狅狉犲狊犮犲狀狊PF75whichwasdiluted
50timesreached87.34%infieldtrials.
[39]
G209 烟草根际土壤The
soiladheringtoto
baccoroots
链格孢菌犃犾狋犲狉狀犪狉犻犪
犪犾狋犲狉狀犪狋犪
G209菌株的无菌发酵液对烟草赤星病菌丝生长量有较强抑制作用,抑制效果
为82.1%。该菌可以在烟草叶面和根际定殖。Theasepticfermentationfluidof
犘狊犲狌犱狅犿狅狀犪狊犳犾狌狅狉犲狊犮犲狀狊G209strainhadstrongantagonisticefectsonthemyceli
umgrowthamountsof犃犾狋犲狉狀犪狉犻犪犪犾狋犲狉狀犪狋犪,andtheinhibitionratewas82.1%.
G209straincouldcolonizeintherhizosphereandontheleafsurfaceoftobacco.
[40]
RB42,
RB89
烟草根际土壤The
soiladheringtoto
baccoroots
寄生疫霉烟草致病
变 种 犘犺狔狋狅狆犺狋犺狅狉犪
狆犪狉犪狊犻狋犻犮犪var.狀犻犮
狅狋犻犪狀犪犲
荧光假单胞菌的菌体、发酵液抑制烟草黑胫病原的菌丝生长、游动孢子囊的产
生和游动孢子的萌发,在加入细菌菌悬液4h时,RB42发酵液和RB89培养液
的抑制率最高,均为83.6%。Thestrainandfermentationliquidof犘狊犲狌犱狅
犿狅狀犪狊犳犾狌狅狉犲狊犮犲狀狊couldsuppresspathogen mycelialgrowth,zoosporangium
producingandzoosporegerminationof犘犺狔狋狅狆犺狋犺狅狉犪狆犪狉犪狊犻狋犻犮犪var.狀犻犮狅狋犻
犪狀犪犲.Afteraddingbacterialsuspension4h,theinhibitionratesofRB42broth
andRB89culturemediumwerethehighest,andreached83.6%.
[41]
UTPF5 - 爪哇根结线虫
犕犲犾狅犻犱狅犵狔狀犲犼犪狏犪狀
犻犮犪
UTPF5的提取物几乎可以将孵化24h的幼虫100%杀死,并且不同浓度的
UTPF5能够影响线虫幼虫的运动。Bacterialextractionkiledalmost100%of
thelarvaehatchingafter24h,anddifferentconcentrationsofUTPF5couldaf
fectthemovementofnematodelarvae.
[42]
CHA0 - 爪哇根结线虫
犕犲犾狅犻犱狅犵狔狀犲犼犪狏犪狀
犻犮犪
和对照相比,109CFU/mL的荧光假单胞菌能显著减少根结线虫和降低其他参
数。荧光假单胞菌通过增加过氧化物酶和苯丙氨酸解氨酶来破坏根结线虫的卵
块,能显著降低线虫卵孵化水平,接种5d后两种酶的活性最好。109CFU/mL
犘狊犲狌犱狅犿狅狀犪狊犳犾狌狅狉犲狊犮犲狀狊decreasednematodeinfectionandotherparameterssignifi
cantly,comparedtothecontrol.犘.犳犾狌狅狉犲狊犮犲狀狊couldcausedestructionofnematode
eggmass,andsignificantlydecreasedthelevelofnematodeegghatchingwithadding
peroxidaseandphenylalanineammonialyase,thebestactivitiesofperoxidaseand
phenylalanineammonialyasewereobservedafterinoculating5days.
[43]
Pf9 水稻根际土壤The
soiladheringto
riceroots
稻黄 单 胞 菌 犡犪狀
狋犺狅犿狅狀犪狊 狅狉狔狕犪犲
pv.狅狉狔狕犪犲
荧光假单胞菌处理过的种子可以减少水稻白叶枯病,用Pf9处理使种子发芽率
达到91%,活力指数增加到1837。犡犪狀狋犺狅犿狅狀犪狊狅狉狔狕犪犲pv.狅狉狔狕犪犲couldbere
ducedonseeds;seedgerminationratewithtreatmentofPf9couldbeincreasedto
91%andvigorindexto1837underthetreatmentof犘狊犲狌犱狅犿狅狀犪狊犳犾狌狅狉犲狊犮犲狀狊.
[44]
Ps.8 辣椒根际土壤The
soiladheringto
chiliroots
尖孢镰刀菌辣椒专化
型犉狌狊犪狉犻狌犿狅狓狔狊狆狅
狉狌犿f.sp.狏犪狊犻狀犳犲犮狋狌犿
8株假单胞菌中抑菌带宽最大的达到79.77mm,其也能很好的抑制根结线虫。A
mongtheeighttested犘狊犲狌犱狅犿狅狀犪狊strains,themaximumantibacterialbandwidth
reached79.77mm.Italsocouldhaveagoodefectofsuppressiononrootknotnematode.
[45]
771第4期 孙广正 等:荧光假单胞菌防治植物病害研究现状与展望
续表2 Continued
荧光假单胞菌株
犘.犳犾狌狅狉犲狊犮犲狀狊strain
代号No. 来源Sources
植物病原菌
Plantpathogens
防治效果
Controleffect
文献来源
Reference
sources
P60 黄瓜根际土壤
Thesoiladhering
tocucumberroots
齐整小核菌犛犮犾犲
狉狅狋犻狌犿狉狅犾犳狊犻犻
利用P60测定出最适合抑制黄瓜白绢病的有机液体肉汤为蜗牛肉汤。和对照相
比增加黄瓜株高,湿重量,植物干重,根湿重,根和根干重长度,分别为146.83%,
86.62%,112.50%,87.88%,140.00%和159.68%。Thesnailbrothwasthemost
appropriateorganicliquidbrothunderdetectingbyusingP60forsuppressiononcu
cumberstemrot.P60increasedcucumberplantheight,wetweight,dryweightof
plant,wetweight,dryweightofroot,androotlengthrespectivelyat146.83%,
86.62%,112.50%,87.88%,140.00%,and159.68%comparedtocontrol.
[46]
犘.犳犾狌狅
狉犲狊犮犲狀狊
中国农业微生物
菌种保藏中心
AgriculturalCulture
ColectionofChina
板栗疫病菌犆狉狔
狆犺狅狀犲犮狋狉犻犪 狆犪狉犪
狊犻狋犻犮犪
荧光假单胞菌对栗疫菌和扩展青霉的抑制圈直径超过10mm,抑菌圈长分别为
13.70,18.36mm。Theinhibitioncirclediameterof犘狊犲狌犱狅犿狅狀犪狊犳犾狌狅狉犲狊犮犲狀狊
whichsuppressed犆狉狔狆犺狅狀犲犮狋狉犻犪狆犪狉犪狊犻狋犻犮犪and犘犲狀犻犮犻犾犾犻狌犿犲狓狆犪狀狊狌犿exceeded
10mm,andthetwolengthofinhibitionzonewere13.70and18.36mm.
[47]
M15 马铃薯根际土壤
Thesoiladhering
topotatoroots
致病疫霉 犘犺狔狋狅
狆犺狋犺狅狉犪犻狀犳犲狊狋犪狀狊
活体、菌液和发酵液的抑菌率分别为86.39%,88.23%和65.88%,其菌液在马
铃薯块茎切片上对晚疫病的预防效果为65.06%,显微观察发现该菌株菌液使
致病疫霉菌丝体畸形。Theinhibitionratesofitslivingstrains,bacterialfluid
andfermentationliquidsuppressionwere86.39%,88.23%and65.88%,re
spectively.Preventioneffectofbacterialfluidonpotatotuberslicesagainstlate
blightwas65.06%.MicroexaminationshowedthatbacterialfluidofM15strain
couldcausedeformationof犘.犻狀犳犲狊狋犪狀狊mycelium.
[48]
Bak150 马铃薯根际土壤
Thesoiladhering
topotatoroots
致病疫霉 犘犺狔狋狅
狆犺狋犺狅狉犪犻狀犳犲狊狋犪狀狊
Bak150对致病疫霉菌丝生长的抑制率可达到88%,在叶片喷施菌悬液可有效
防治马铃薯晚疫病。TheinhibitionrateofBak150onmycelialgrowthreached
88%,and犘犺狔狋狅狆犺狋犺狅狉犪犻狀犳犲狊狋犪狀狊couldbeeffectivelycontroledbyspraying
bacterialsuspensionontheleaves.
[49]
P13 油菜根际土壤The
soiladheringtooil
seedraperoots
核盘菌犛犮犾犲狉狅狋犻狀
犻犪狊犮犾犲狉狅狋犻狅狉狌犿
P13对油菜菌核病的菌丝生长抑制达到84.4%,对菌核形成的抑制达到
95.0%~100.0%。P13significantlylessenedthemycelialgrowthof犛.狊犮犾犲狉狅
狋犻狅狉狌犿by84.4%andsuppressedsclerotialformationby95.0%-100.0%.
[50]
11006 苹果根部“Maling
9”applerootstock
扩展青霉Penicil
liumexpansium
由生防菌产生的无细胞代谢产物对青霉菌株的繁殖减少17.3%至78.5%。
Celfreemetabolitesthatwereproducedbybacterialantagonistsreducedthe
colonyareaof犘犲狀犻犮犻犾犾犻狌犿犲狓狆犪狀狊犻狌犿isolatesby17.3%to78.5%.
[51]
P25 小麦根际土壤
Thesoiladhering
towheatroots
禾顶囊壳小麦变种
犌犪犲狌犿犪狀狀狅犿狔犮犲狊
犵狉犪犿犻狀犻狊var.
狋狉犻狋犻犮犻犼.
拮抗机理是致使病菌菌丝畸形,抑制效果和防治效果分别为67%和59%。The
antifungalmechanismwasthatthecelsofthehyphaweredeformed,theinhib
itoryactionandefficacywere67%and59%.
[52]
注:表中“-”表示菌株由其他研究者馈赠,用于学术交流。下同。
Note:“-”indicatesthosestrainsthatweregiftedbyotherresearchersforacademiccommunication.Thesamebelow.
3.2 荧光假单胞菌与其他菌(或物质)的交互作用
荧光假单胞菌对病原菌的拮抗作用通常表现为单独作用,但 Hol等[62]认为荧光假单胞菌能与植物的其他共
生体之间协同作用,相互作用会明显提高植物生长和病害防御的有效性。国内外的一些学者发现荧光假单胞菌
在另外一些微生物或物质的协同下(表3),拮抗病原菌的能力提高,单独使用时效果相对较差。
871 草 业 学 报 第24卷
表3 荧光假单胞菌与其他菌(或物质)的交互作用
犜犪犫犾犲3 犐狀狋犲狉犪犮狋犻狅狀狊狅犳犘.犳犾狌狅狉犲狊犮犲狀狊狑犻狋犺狅狋犺犲狉犫犪犮狋犲狉犻犪(狅狉狊狌犫狊狋犪狀犮犲狊)
荧光假单胞菌株
犘.犳犾狌狅狉犲狊犮犲狀狊strain
代号
No.
来源
Sources
植物病原菌
Plant
pathogens
协同微生物或物质
Colaborative
microorganisms
orsubstances
交互拮抗效果
Antagonisticinteraction
effect
文献来源
Reference
sources
YZS
Ph02
- 甘薯长喙壳
犆犲狉犪狋狅犮狔狊狋犻狊
犳犻犿犫狉犻犪狋犪
枯草芽孢杆菌
犅犪犮犻犾犾狌狊狊狌犫狋犻犾犻狊
组合对石榴枯萎病有很好的防治效果,单用 YZSPh02的防
治效果较差。当它们的CFU为1×103 时对甘薯长喙壳抑制
率就可达96%以上。Thecombinationof犅犪犮犻犾犾狌狊狊狌犫狋犻犾犻狊
YZSB15and犘狊犲狌犱狅犿狅狀犪狊犳犾狌狅狉犲狊犮犲狀狊YZSPh02couldcon
trol犆犲狉犪狋狅犮狔狊狋犻狊犳犻犿犫狉犻犪狋犪,butthecontroleffectwaslow
withthesinglestrainYZSPh02.Theinhibitoryratiosofthe
combination(1×103CFU)whichsuppressed犆.犳犻犿犫狉犻犪狋犪
wereover96%.
[63]
YZS
Ph02
- 茄类镰孢菌
犉狌狊犪狉犻狌犿
狊狅犾犪狀犻
枯草芽孢杆菌
犅犪犮犻犾犾狌狊狊狌犫狋犻犾犻狊
组合菌的菌量在0.625×108CFU时,对茄孢镰刀菌的抑菌效
果较好,抑菌率在88%以上。不论菌量多少当组合菌中枯草
芽孢杆菌和荧光假单胞菌的比例在1∶9时,抑菌率普遍较
高。Thecomplexityhadastrongerantagonismto犉狌狊犪狉犻狌犿
狊狅犾犪狀犻whenitwas0.625×108CFU,andbacteriostaticrate
wasabove88%.Theproportionof犅犪犮犻犾犾狌狊狊狌犫狋犻犾犻狊and
犘狊犲狌犱狅犿狅狀犪狊犳犾狌狅狉犲狊犮犲狀狊was1∶9,nomatterhowmuchthe
amountofbacteria,theinhibitionratewasgeneralyhigherthan
thatofthesinglebioagent.
[64]
犘.犳犾狌狅
狉犲狊犮犲狀狊
籽棉根际土壤
Thesoiladhering
toseedcotton
roots
立枯丝核菌
犚犺犻狕狅犮狋狅狀犻犪
狊狅犾犪狀犻
固氮螺菌和NPK
犃狕狅狊狆犻狉犻犾犾狌犿and
NPK
在2007和2008年,当使用50%NPK以及固氮螺菌时,由于
无机肥和两种微生物之间的协同效应,可以增加棉花的产量,
同时使荧光假单胞菌根际定殖最高分别达到1.40和2.32,棉
花根腐病的发病率最低达到3.36%。In2007and2008,be
causeofsynergiesofinorganicfertilizersandtwomicrobes,u
sing50% NPKand犃狕狅狊狆犻狉犻犾犾狌犿couldincreasecottonpro
duction.犘狊犲狌犱狅犿狅狀犪狊犳犾狌狅狉犲狊犮犲狀狊 rhizospherecolonization
wasthehighest,reached1.40,2.32.Androotrotincidence
ofcottonwasthelowest,andreached3.36%.
[65]
BICC602 豇豆和番茄根际
土壤 Thesoilad
heringtocowpea
andtomatoroots
南方根结线虫
犕犲犾狅犻犱狅犵狔狀犲
犻狀犮狅犵狀犻狋犪
水杨酸Salicylic
acid(SA)
水杨酸是一些细菌产生的能够激活生防的内源性信号,本文
研究了荧光假单胞菌依赖SA拮抗根结线虫。Salicylicacid
(SA)wasabletoactivateendogenoussignalofbiocontrolin
somebacteria,and 犘狊犲狌犱狅犿狅狀犪狊犳犾狌狅狉犲狊犮犲狀狊 antagonized
rootknotnematodedependingonSA.
[66]
WCS417r,
279
康乃馨根部和小
麦根际土壤 The
carnationrootsand
thesoiladheringto
wheatroots
茄拉尔氏菌
犚犪犾狊狋狅狀犻犪狊狅
犾犪狀犪犮犲犪狉狌犿
水杨酸Salicylic
acid(SA)
用水杨酸和生防菌共同处理(SA+279,SA+WCS417r)后的
发病率比对照分别低54.3%,51.5%。水杨酸的诱导抗病性
与具有拮抗活性的生防菌结合,能显著提高防治桉树青枯病
的效果。Comparedwiththecontrol,thecombinationofSA
+279orSA+WCS417rsignificantlyreduceddiseaseinci
denceby54.3%and51.5%.Thecombinationoftwodiffer
entsuppressivemechanisms,suchasinducedresistanceofSA
andantibiosis,couldstronglyenhancethecontroleffectsa
gainst犚犪犾狊狋狅狀犻犪狊狅犾犪狀犪犮犲犪狉狌犿.
[67]
971第4期 孙广正 等:荧光假单胞菌防治植物病害研究现状与展望
续表3 Continued
荧光假单胞菌株
犘.犳犾狌狅狉犲狊犮犲狀狊strain
代号
No.
来源
Sources
植物病原菌
Plant
pathogens
协同微生物或物质
Colaborative
microorganisms
orsubstances
交互拮抗效果
Antagonisticinteraction
effect
文献来源
Reference
sources
P32 - 棉花黄萎病
菌犞犲狉狋犻犮犻犾犾犻
狌犿犱犪犺犾犻犪犲
多菌灵Carbenda
zim
用多菌灵和P32的混剂进行种子处理的防治效果为72.7%,
P32的防治效果为50.6%,多菌灵的防治效果为42.3%。多
菌灵对P32防治棉花黄萎病的效果有明显的增效作用,其增效
机制可能是多菌灵抑制了土壤中与P32有竞争作用的微生物
的活力,使 P32的群体数量增加。Theseedtreatmentwith
carbendazimP32complexreducedthediseaserateby72.7%,
singleP32reduceddiseaserateby50.6%,andcarbendazimre
ducedthatby42.3%.Thecarbendazimimprovedthecontrol
efficacyofP32against犞犲狉狋犻犮犻犾犾犻狌犿 wiltofcottonsignificantly,
possiblybyweakeningoreliminatingsomeofmicroorganisms
competitivetoP32,andP32thusestablishesalargeandactive
populationwhichistheprerequisiteinbiologicalcontrol.
[68]
P13 - 核盘菌犛犮犾犲
狉狅狋犻狀犻犪 狊犮犾犲
狉狅狋犻狅狉狌犿
金属离子 Metal
ions
金属离子在0.002mol/L的浓度下,Ag+、Cr3+、Ni+能强烈抑
制该菌的生长;Ca2+、Ti3+、Fe3+有微弱的促生作用;Al3+能强
烈抑制P13抗生素的合成,Ca2+和Fe3+则明显促进抗生素的
合成。0.003mol/L的Ca2+与0.001mol/LFe3+共同使用时
P13的效价增加到291%,说明Ca2+和Fe3+对P13抗真菌素
合成有协同作用。Attheconcentrationof0.002mol/L,con
trastingtothecomparison,Ag+,Cr3+,Ni+canrestraincel
growthintensively;Ca2+,Ti3+,Fe3+ canboostcelgrowth
faintly;Al3+ canreducetheproductionofantibioticsorely;
Ca2+andFe3+canaddtheproductionofantibioticdistinctly.
Ca2+(0.003mol/L)andFe3+(0.001mol/L)mixedalpro
motetheproductionofantibioticofP13.ItconcludedthatCa2+
andFe3+cooperatedtoaddtheproductionofantibioticinP13.
[69]
研究表明,荧光假单胞菌与一些细菌(如枯草芽孢杆菌、固氮螺菌)交互使用拮抗病原菌,效果明显好于单
独防治的效果。荧光假单胞菌还可以和一些化学物质(如水杨酸、多菌灵)结合防治病原菌,结果表明结合使用比
单独使用生防效果好,由于这些化学物质提高了荧光假单胞菌在植物根际和土壤的定殖存活量。张伟琼等[69]发
现金属离子在生防过程中也起到重要的作用。
荧光假单胞菌与其他细菌(或化学物质、金属离子)的交互作用可以提高其拮抗作用,但也有报道指出混配制
剂并未导致生物防治效果的提高,其中一个重要的原因是拮抗菌间的不亲和性,因为生防制剂可以相互抑制。所
以,成功的菌剂混配的一个重要前提是共同混配的拮抗菌间的亲和性[70]。
4 荧光假单胞菌防治植物病害的主要作用机制
荧光假单胞菌对植物病原菌的作用机制可以以一种为主,也可以同时依赖多种机制,对于不同病原菌的作用
机制又表现不同。国内外一些学者通过荧光假单胞菌分离出的拮抗物质,研究了这些物质抑制病原菌的作用机
理(表4)。
4.1 抗生素介导的抑制
荧光假单胞菌可通过产生多种抗生素对植物病害的病原物产生抑制。Haas和Keel[71]证实产生抗生素是生
081 草 业 学 报 第24卷
表4 荧光假单胞菌生物防治的机理研究
犜犪犫犾犲4 犕犲犮犺犪狀犻狊犿狅犳犘.犳犾狌狅狉犲狊犮犲狀狊狅狀犫犻狅犮狅狀狋狉狅犾
荧光假单胞菌株
犘.犳犾狌狅狉犲狊犮犲狀狊strain
代号
No.
来源
Sources
植物病原菌
Plant
pathogens
代谢物质
Metabolites
防治方法
Control
methods
拮抗机理
Antagonistic
mechanism
文献来源
Reference
sources
犘.犳犾狌狅
狉犲狊犮犲狀狊
花生根际土壤
Thesoiladhering
togroundnut
roots
串珠镰孢菌
犉狌狊犪狉犻狌犿
犿狅狀犻犾犻犳狅狉犿犲
环二肽
Cyclic
dipeptide
次生抗性代谢
物Secondary
resistant
metabolites
环二肽的特征在于频谱分析和旋光性,其粗提物可以显
著对抗谷物霉菌。Cyclicdipeptidewerecharacterizedby
spectralanalysisandopticalrotation,anditscrudewere
provedtobesignificantlyeffectiveagainstgrainmoldfungi.
[77]
犘.犳犾狌狅
狉犲狊犮犲狀狊
花生根际土壤
Thesoiladhering
togroundnut
roots
棉色二孢
犇犻狆犾狅犱犻犪
犵狅狊狊狔狆犻狀犪
2,4DAPG 抗生素介导的
抑 制 Antibiot
icsmediatedin
hibition
分离到的5株荧光假单胞菌用特异性引物证实产生2,4
DAPG呈阳性,8株细菌能很好地生防花生茎腐病(抑菌
率高达75%)。5strainsweretestedpositivefor2,4DAPG
producingwithspecificprimers.The8isolatesefectivelyin
hibitedagainst犛.狉狅犾犳狊犻 (upto75%ofinhibitionrate).
[82]
Pf1 彩叶草根际土
壤Thesoil
adheringto
coleusroots
菜豆壳球孢
犕犪犮狉狅狆犺狅
犿犻狀犪狆犺犪狊犲狅
犾犻狀犪
HCN 次生抗性代谢
物Secondary
resistant
metabolites
Pf1对彩叶草根腐病有最大的菌丝抑制率。利用HCN在
室温下测试了对彩叶草根腐病的防治效果,结果显著降
低根腐病发病率,并增加根茎长。Pf1strainshadthe
maximuminhibitionrateofmycelialgrowthforcontroling
犕犪犮狉狅狆犺狅犿犻狀犪狆犺犪狊犲狅犾犻狀犪.UsingHCNtotestcontroling
efectfor犕犪犮狉狅狆犺狅犿犻狀犪狆犺犪狊犲狅犾犻狀犪atroomtemperature,
theresultsshowedthatitsignificantlyreducedtheincidence
rateofrootrotandincreasedrootlength.
[75]
HC107 小麦叶面The
phylosphereof
wheat
禾顶囊壳小
麦变种 犌犪犲
狌犿犪狀狀狅犿狔犮犲狊
犵狉犪犿犻狀犻狊var.
狋狉犻狋犻犮犻犼.
CLP 次生抗性代谢
物Secondary
resistant
metabolites
通过提取CLP体外抑制小麦全蚀病和水稻纹枯病,发
现抑制生长。通过诱变CLP产生两个突变体,然后体
外抑制病原体,抑制作用下降。CLPextractcouldin
hibit犌犪犲狌犿犪狀狀狀狅犿狔犮犲狊犵狉犪犿犻狀犻狊var.狋狉犻狋犻犮犻and犚犺犻
狕狅犮狋狅狀犻犪狊狅犾犪狀犻invitro.CLPgeneratedtwomutantsby
mutagenesis,andinhibitedpathogeninvitro,thenthe
inhibitiondecreased.
[78]
犘.犳犾狌狅
狉犲狊犮犲狀狊
小麦根际土壤
Thesoiladhering
towheatroots
禾顶囊壳小
麦变种 犌犪犲
狌犿犪狀狀狅犿狔犮犲狊
犵狉犪犿犻狀犻狊var.
狋狉犻狋犻犮犻犼.
生 物 表 面
活性剂Bi
osurfacta
nts
次生抗性代谢
物Secondary
resistant
metabolites
降低了病原菌孢子的表面张力,在细胞膜内外膨压的作
用下,使孢子细胞破裂而死亡。Whenthesurfaceten
sionofpathogensporeswasreducedundertheturgor
pressureontheinsideandoutsideofcel membrane,
sporecelbecameruptureanddeath.
[79]
SS101 小麦根际土壤
Thesoiladhering
towheatroots
致病疫霉
犘犺狔狋狅狆犺狋犺狅
狉犪犻狀犳犲狊狋犪狀狊
环脂肽
Cyclic
lipopeptide
次生抗性代谢
物Secondary
resistant
metabolites
不产生环脂肽的突变株无防病功能,纯化后的环脂肽通
过诱导局部和系统抗病性而发挥防病作用。Themutants
withoutcycliclipopeptidehadnoprophylacticfunction,but
thepurifiedcycliclipopeptideplayedaroleindiseasepreven
tionbyinducinglocalandsystemicdiseaseresistance.
[80]
LBUM
223
马铃薯根际土壤
Thesoiladhering
topotatoroots
马铃薯疮痂
链霉菌
犛狋狉犲狆狋狅犿狔
犮犲狊狊犮犪犫犻犲狊
PCA 抗生素介导的抑
制Antibiotics
mediated
inhibition
和突变型相比,只有野生型的LBUM223产生的PCA
能够促使txtA基因在疮痂病上表达。Significantrepres
sionoftxtAexpressionin犛.狊犮犪犫犻犲狊wasonlyobservedin
thepresenceofPCAproducingLBUM223,notitsmutant.
[83]
181第4期 孙广正 等:荧光假单胞菌防治植物病害研究现状与展望
续表4 Continued
荧光假单胞菌株
犘.犳犾狌狅狉犲狊犮犲狀狊strain
代号
No.
来源
Sources
植物病原菌
Plant
pathogens
代谢物质
Metabolites
防治方法
Control
methods
拮抗机理
Antagonistic
mechanism
文献来源
Reference
sources
WCS374r 马铃薯根际土壤
Thesoiladhering
topotatoroots
灰葡萄孢
犅狅狋狉狔狋犻狊犮犻狀犲狉犲犪
噬铁素
Siderophore
噬铁素介导的
抑制Siderophore
mediatedinhibi
tion
铁载体是抑制桉树灰霉病菌的重要决定因素。Sid
erophorewasimportantbacterialdeterminantinsuppression
ofeucalyptgreymould.
[84]
F113 甜菜植物根毛
Theroothairsof
asugarbeet
plant
尖孢镰刀菌
古巴专化型
犉狌狊犪狉犻狌犿狅狓
狔狊狆狅狉狌犿
f.sp.犮狌犫犲狀狊犲
噬铁素
Siderophore
根部定殖Colo
nization
改变控制生防菌运动途径的基因与野生型相比,发现增
加根部定殖明显的改善生防能力。Changingthegenethat
controlthemovingpathwayofbiocontrolbacteriacom
paredwiththewildtypestrain,itindicatedthatanincrease
incompetitivecolonizationabilityresultedinimprovedbio
control.
[13]
P13 油菜根际土壤
Thesoiladhering
tooilseedrape
roots
核盘菌犛犮犾犲
狉狅狋犻狀犻犪狊犮犾犲狉狅
狋犻狅狉狌犿
噬铁素
Siderophore
噬铁素介导的
抑制Siderophore
mediatedinhibi
tion
P13通过大量分泌铁载体抑制油菜菌核病菌。随着铁离
子浓度的提高,P13分泌铁载体减少,对油菜菌核病菌的
抑制作用相应减弱。P13inhibited犛犮犾犲狉狅狋犻狀犻犪狊犮犾犲狉狅狋犻狅狉狌犿
bysecretingsiderophore.Withincreasingofironioncon
centration,P13decreasedsecretingsiderophores,sothat
theinhibitionof犛犮犾犲狉狅狋犻狀犻犪狊犮犾犲狉狅狋犻狅狉狌犿 correspondingly
weakened.
[12]
CHA0 大豆根际土壤
Thesoiladhering
tobeanroots
立枯丝核菌
犚犺犻狕狅犮狋狅狀犻犪
狊狅犾犪狀犻
HCN 次生抗性代谢
物Secondaryre
sistant metabo
lites
CHA0产生的 HCN刺激hcnAlacZ和phlAlacZ两种基
因的表达,从而对病害起到抑制作用。CHA0generated
thestimulatedexpressionofhcnAlacZandphlAlacZby
HCN,thusitplayedaninhibitoryeffectonthedisease.
[76]
PfMDU 水稻根际土壤
Thesoiladhering
toriceroots
立枯丝核菌
犚犺犻狕狅犮狋狅狀犻犪
狊狅犾犪狀犻
乙二酸
Aceticacid
次生抗性代谢
物Secondary
resistant
metabolites
PfMDU 产生的乙二酸对植物病原菌产生的草酸具有解
毒作用,从而抑制水稻纹枯病。Aceticacidproducedby
PfMDU candetoxifyoxalicacid produced by plant
pathogens,thusinhibiting犚犺犻狕狅犮狋狅狀犻犪狊狅犾犪狀犻犪.
[14]
犘.犳犾狌狅
狉犲狊犮犲狀狊
- 芜菁花叶病
毒Turnip
mosaicvirus
过氧化氢
酶Catalase
诱导植物系统
抗性Induced
systemicresist
anceofplants
在植株上接种荧光假单胞菌之后,过氧化氢酶的活性升
高,对 芜 菁 花 叶 病 毒 的 防 御 明 显 提 高。Afterthe
犘狊犲狌犱狅犿狅狀犪狊犳犾狌狅狉犲狊犮犲狀狊wereinoculatedontheplant,
catalaseactivityincreasedsothatthedefensehassignifi
cantlyimprovedtoTurnipmosaicvirus.
[15]
AbIII
7456
- 稻梨孢
犘狔狉犻犮狌犾犪狉犻犪
狅狉狔狕犪犲
苯胺基甲
基乙酸
Phenamino
methylace
ticacid
次生抗性代谢
物Secondary
resistant
metabolites
苯胺基甲基乙酸是首次发现的拮抗病原菌的活性物质,
拮抗效果较好,具体机理有待进一步研究。Phenaminom
ethylaceticacidwasthefirstdiscoveredactivesubstance
whichcancontrolpathogen,itsantagonisticefectwas
good,butspecificmechanismneedsfurtherstudy.
[81]
2P24 - 茄科劳尔菌
犚犪犾狊狋狅狀犻犪狊狅
犾犪狀犪犮犲犪狉狌犿
2,4DAPG 抗生素介导的抑
制Antibiotics
mediated
inhibition
2,4DAPG突变体的防效低且下降快,而恢复突变体的
生防能力与野生菌相当,且效果稳定。2,4DAPG是菌
株2P24防治番茄青枯病的主要因子,在防效上起关键
作用。Theeffectof2,4DAPGmutantwaslowforcon
trolingtomatobacterialwilt,moreover,theefficacyof
therestoringmutantwasrecoveredtothelevelofthe
wildtype.The2,4DAPGwasoneofthekeybiocon
trolfactorsin犘.犳犾狌狅狉犲狊犮犲狀狊2P24andplayedanimpor
tantroleincontrolingtomatobacterialwilt.
[85]
281 草 业 学 报 第24卷
防菌抵抗病原菌的重要机制。Fischer等[72]也发现细菌通过系统抗性的诱导或者通过抗微生物化合物的合成保
护植物。荧光假单胞菌产生的抗生素有1羧基吩嗪(phenazine1carboxylicacid,PCA)、2,4二乙酰藤黄酚(2,
4diacetylphloroglucinol,DAPG)、藤黄绿脓菌素(pyoluteorin,Plt)、吡咯菌素(pyrrolnitrin,Prn)、绿脓菌素(pyo
cyanin)、卵菌素A(OomycinA)等。PCA为吩嗪类物质,在细胞内作为电子载体传递电子到靶细胞,增加胞内超
氧化物自由基,使靶细胞中毒死亡;DAPG和Plt为聚酮类抗生素,具有广谱抗菌活性;Prn属于氨基糖甘类抗生
素,在低浓度时破坏氧化磷酸化的偶联机制,而在高浓度时阻止参与呼吸作用的黄素蛋白和细胞色素C的电子
运输。许多学者认为荧光假单胞菌产生的DAPG是拮抗根部病害的关键因素,DAPG充当诱导其本身的生物合
成基因的表达信号的化合物[7374]。这些抗生素通常在很低浓度下就可阻碍病原微生物的生长。
4.2 噬铁素介导的抑制
荧光噬铁素是由荧光假单胞菌产生的胞外水溶性黄绿色素,是其特有的铁载体,可以螯合环境中微量的铁元
素。其作用机制是通过配合基的螯合反应,形成铁噬铁素螯合物,从而增加土壤中的生物有效性,并通过特异的
转动系统将铁转移到体内,不仅可以满足自身的生长需要,还可以使环境中的铁浓度进一步降低,抑制病原微生
物的生长繁殖,进而达到控制植物病害的目的[12]。
4.3 根部定殖
荧光假单胞菌只有成功地在根际定殖后,其抑制机制才能真正起作用。荧光假单胞菌能在幼根表面形成一
层均匀的保护层;而没有防病作用的菌株不产生保护层,说明荧光假单胞菌在根部定殖时保护了病原菌的侵染位
点,降低侵染机会,是防病的关键因素之一[13]。不同的荧光假单胞菌在不同的根际有不同的定殖能力。定殖能
力的强弱也与土壤类型相关的间接因素如湿度、温度、pH值等有关。
4.4 次生抗性代谢物
荧光假单胞菌产生许多具有抗性的次生代谢物,对植物病原菌具有拮抗作用。如一些荧光假单胞菌产生的
HCN能影响植物的病原菌[7576]。荧光假单胞菌还能产生几丁质酶、溶菌酶、木聚糖酶和胞外壳聚糖酶等对物质
进行降解,在给植物提供营养的同时还可减少植物病害的发生[14,7781]。
4.5 诱导植物系统抗性
某些植物如烟草(犖犻犮狅狋犻犪狀犪狋犪犫犪犮狌犿)、黄瓜(犆狌犮狌犿犻狊狊犪狋犻狏狌狊)、拟南芥(犃狉犪犫犻犱狅狆狊犻狊狋犺犪犾犻犪狀犪)等对病毒、细
菌和真菌叶部病原的诱导抗性(inducedsystemicresistance,ISR)可能是由于一些荧光假单胞菌在根部的定殖而
产生。其可能的作用机制是产生抗微生物的低分子量化学物质,如植物保护素、双萜、多聚物、木质素和糖蛋白,
诱导一些水解酶和氧化酶类。水杨酸、脂多糖、噬铁素是重要的诱导物质[15]。
植物种类、植物病害以及植物生长环境的不同,荧光假单胞菌抑制病原菌的机理有所不同。魏海雷等[85]研
究表明,荧光假单胞菌产生的抗生素可以改变病原菌细胞的通透性,降低细胞的表面张力,从而使细胞破裂死亡。
王平等[12]和冉隆贤等[84]研究表明,荧光假单胞菌产生的噬铁素螯合了铁元素,降低了环境中的铁元素的浓度,
从而让病原菌不能很好地生长,达到抑制病害的目的。
目前,国内外学者通过基因手段检测次生代谢产物对植物病害防治的研究较多。许多学者通过基因手段,将
合成次生代谢产物的基因突变,发现不产生次生代谢产物的缺失突变株无防病功能或防病能力明显下降,纯化后
的次生代谢产物通过诱导局部和系统抗病性而发挥防病作用[78,83]。Lagzian等[86]研究了如何利用GacA/GacS
系统检测遗传稳定性好的优良菌株VUPf5产生次生代谢产物防止小麦(犜狉犻狋犻犮狌犿犪犲狊狋犻狏狌犿)上的病害。通过对
VUPf5的GacA基因和GacS基因进行突变,然后与具野生型基因的菌株对比,发现生产次生代谢产物的效率显
著降低。Kidarsa等[87]研究了在GzcA和RpoS的基因控制下Pf5对植物病害的防治。通过对Pf5的GzcA和
RpoS基因的突变,量化在培养的种子上产生的次级代谢产物,结果发现生产大致对应生物合成基因的表达谱。
刘九成等[88]研究发现菌株2P24中 RetS是2,4DAPG及未知红色素合成的负调控因子,并且 RetS对2,4
DAPG及未知红色素合成的调控依赖于Gac/Rsm信号传递路径。Bottiglieri和Keel[89]研究发现荧光假单胞菌
CHA0通过DAPG上合成的phlG基因来防治植物根部的病害。然而,phlG基因的活性会受到藤黄绿菌素的影
响而减少。
381第4期 孙广正 等:荧光假单胞菌防治植物病害研究现状与展望
除了荧光假单胞菌,其他假单胞菌属也可以通过产生抗生素防治病害的生长。Lugtenberg和Girard[90]研究
发现绿针假单胞菌PCL1391可以通过产生1羧基吩嗪来防治马铃薯根腐病。Perneel等[91]筛选出了能够生防
芋艿根腐病的假单胞菌,并且发现其能产生吩嗪和生物表面活性剂。姚拓等[9297]对高寒地区燕麦根际的联合固
氮菌溶磷性和分泌植物生长素特性进行了测定,研究发现一些假单胞菌分泌植物生长素的能力较强。还利用同
位素稀释法研究了接种固氮菌株对燕麦生长的影响及固氮量,研究发现假单胞菌也有较高的固氮量,能够很好的
促进农作物的生长。Dubuis等[98]研究发现植物根部形成的假单胞菌的菌落的有益性状的表达是通过自身诱导
机制来调节的,产生的次级代谢产物是依赖细胞群体在转录和转录后产生的。假单胞菌通过发出各种化学信号
可以使其他微生物或根系分泌物增强或减弱。
5 荧光假单胞菌的风险评估
荧光假单胞菌除了可以防治植物的病害之外,本身还是一种环境污染菌。在日常生活中,荧光假单胞菌是奶
类、蛋类在低温保存条件下导致腐败变质的主要细菌之一。荧光假单胞菌对于人类是一种罕见的机会致病菌。
在临床上最多见的是血液及血制品被荧光假单胞菌污染,当病人输入了被荧光假单胞菌污染的血液及血制品后,
可出现败血症、感染性休克和血管内凝血等严重后果(表5)。由于现有的许多抗生素对荧光假单胞菌都不敏感,
所以一旦感染此菌,病死率很高。荧光假单胞菌还可以使一些动物体发生病变,产生相应的症状。在植物体中,
荧光假单胞菌可以协同一些病虫害加重对植物体的危害,如池树友等[99]研究发现,松材线虫在结合有毒的荧光
假单胞菌时,能够促进黑松的致病率。
荧光假单胞菌对动植物的危害受到外部环境的影响,越有利于荧光假单胞菌生长的环境就对动植物的危害
越大。王蕊[100]发现随着接种冰核细菌的浓度增加,烟株的冻害程度逐渐加剧。假单胞菌属中除了荧光假单胞
菌之外,其他的假单胞菌也能造成环境的污染。陈丽萍等[104]研究发现宁波沿海陆源排污口中存在较多的假单
胞菌属,假单胞菌属的含量与排污口的主要污染物有关,氨氮含量较高的排污口假单胞菌属的含量更高。还推测
与季节性温度变化有关。
表5 荧光假单胞菌对生物的危害研究
犜犪犫犾犲5 犎犪狕犪狉犱狊狅犳犘.犳犾狌狅狉犲狊犮犲狀狊狅狀犫犻狅犾狅犵狔
荧光假单胞菌株犘.犳犾狌狅狉犲狊犮犲狀狊strain
代号No. 来源Sources
危害
Hazards
文献来源
Referencesources
ZB1 当归 Angelica “水烂病”造成田间早期大量死苗。“Waterrot”causedalargenum
berofseedlingsdiedinearlyfieldperiod.
[20]
4 烟草Tobacco 显著加重烟草冻害的程度。4significantlyincreasedthedegreeof
tobaccofrostdamage.
[100]
犘.犳犾狌狅狉犲狊犮犲狀狊 罗非鱼和大黄鱼Tilapiaand
largeyelowcroaker
引起罗非鱼和大黄鱼患病。犘狊犲狌犱狅犿狅狀犪狊犳犾狌狅狉犲狊犮犲狀狊causedilness
ontilapiaandlargeyelowcroaker.
[101]
S100814 大鲵Giantsalamander 引起大鲵患病。S100814causedilnessongiantsalamander. [102]
GXPF1 罗非鱼Tilapia 引起罗非鱼发病死亡。GXPF1causeddeathincidenceontilapia. [103]
PFD 松材线虫犅狌狉狊犪狆犺犲犾犲狀犮犺狌狊
狓狔犾狅狆犺犻犾狌狊
协同松材线虫对黑松致病。PFDcauseddiseasesonblackpinecol
laboratingwith犅狌狉狊犪狆犺犲犾犲狀犮犺狌狊狓狔犾狅狆犺犻犾狌狊.
[99]
6 展望
尽管目前化学农药在防治植物病害中仍占主导地位,但荧光假单胞菌菌剂对多种植物病原菌有很强的拮抗
作用,具有繁殖速度快、适应能力强、易于人工培养、制剂稳定、施用方便等优点,更符合现代社会对农业生产及有
害生物综合防治的需求。荧光假单胞菌不但可以单独使用,也可与其他拮抗菌或物质混合使用,实现多种抗生菌
481 草 业 学 报 第24卷
功能互补、兼防多种病害、作用持久的协同防治效果。目前利用荧光假单胞菌已成功地防治了多种植物病害,但
仍有许多问题有待解决,比较突出的有:
1)缺乏高效菌株。近年来,对荧光假单胞菌的筛选工作非常活跃,也筛选出了一批具有拮抗性的生防菌,但
还缺乏高效价的菌株,对其发酵工艺的研究也还十分欠缺,这就使部分有前途的菌株不能尽快转化为商品为农业
生产服务。筛选出的多种荧光假单胞菌大多为直接使用菌株或菌剂来防治病害,因此它们的保质期及效果稳定
性就难以保证。而且大多停留在拮抗活性的研究和田间防效上,真正分离到活性物质并应用于实际的菌种还很
少。因此,通过提取和纯化其抗菌物质(包括抗生素与抗菌蛋白),将荧光假单胞菌变成真正的、标准的生物农药,
从而更好地用于农业生产。
2)防效不稳定。由于生态环境中的各种因素都有可能影响微生物农药的防治效果,导致荧光假单胞菌生防
菌的定殖较困难。因此,寻找能在植株内及周围根际土壤长期定殖的拮抗菌就成为科研工作者面临的重要问题。
要想获得稳定的突变株,常规育种还很难达到这一点,这就需要通过基因工程手段对荧光假单胞菌进行改造或者
对荧光假单胞菌产生的抗菌物质进行改良,以拓宽新型高效生防菌的来源,提高生防菌产生拮抗物质的能力和生
防能力。通过遗传工程技术,构建高效、多抗转基因工程菌或将荧光假单胞菌的抗菌基因转入植物以培育转基因
抗病品种,将是植物病害生物防治研究的重点。另外,通过将生物杀菌剂与一些低毒的化学农药或者增效因子混
配使用以增强作用效果,也能提高杀菌剂的稳定性。
3)应用领域窄。目前国内外对荧光假单胞菌研究较多的是在生防和促生方面,应该拓宽在其他领域的应用。
荧光假单胞菌生防主要机制是依靠生产的次生代谢产物对病原菌的抑制,应该将荧光假单胞菌产生的高效次生
代谢产物分离鉴定,用于工业化的生产。随着微生物有机体对多种抗生素的耐药性,研制更多新型的抗菌剂刻不
容缓。国外已有学者利用荧光假单胞菌的上清液和还原性的Ag+合成银纳米粒子,用来增加其与微生物的渗透
能力。
4)普及面较窄。虽然报道和研究的生防菌种类繁多,但是都是在试验过程中筛选出的拮抗效果好的菌种。
这些菌种往往在田间定殖能力弱,不能形成足够的生物群落而降低防治效果。其次微生物农药的应用推广目前
还比较困难,除了缺少高效价的菌种之外,一个重要的原因是绝大部分农民还没有综合防治、保护环境和农业持
续发展的意识和要求,对微生物农药的优点和可持续控制作用缺乏感性认识。所以一方面需要尽早筛选出大田
定殖能力强的菌种,另一方面需要专门培训人员给农民做技术指导,让他们认识生物菌剂对农作物的好处,充分
落实科学发展观。
5)菌株的有害性。由于荧光假单胞菌存在对人体致病的风险,因此我国应加强对该菌的全面研究。对医院
引起污染的荧光假单胞菌和引起人体致病的荧光假单胞菌应做详细研究,分析其基因型及致病程度;对医院和农
业环境中荧光假单胞菌的致病性及毒力进行比较研究,尤其是来源于植物根围的具有生防作用的荧光假单胞菌
与医院致病菌的基因型鉴定及致病性相关程度。
犚犲犳犲狉犲狀犮犲狊:
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