全 文 ：书太子参连作障碍蛋白差异表达分析
林茂兹１，２，张志兴１，林争春１，尤垂怀１，曾令杰１，林文雄１
（１．福建农林大学农业生态研究所，福建 福州３５０００２；２．福建师范大学福清分校，福建 福清３５０３００）
摘要：为探明太子参连作障碍分子机理，本研究采用差异蛋白质组学方法研究了不同种植制度下（连作、轮作）太子
参叶片蛋白质的差异表达。结果表明，不同种植制度下太子参叶片中共有２７个差异表达蛋白质点，经生物信息学
查询到２４个蛋白质。差异蛋白质功能分析结果表明，连作导致太子参叶片中与植物衰老或病害相关的５个蛋白
表达量全部上调；与植物抗性相关的５个蛋白（磷脂氢谷胱苷肽过氧化物酶、植物性丝氨酸－苏氨酸蛋白激酶、钙
依赖蛋白激酶、查尔酮合成酶和硫氧还相关蛋白）表达量上调，４个蛋白（细胞壁富含甘氨酸蛋白、ＳＫＰ１同源蛋白、
锌指蛋白和成熟酶Ｋ）表达量下调；与光合作用相关的２个蛋白（Ｒｕｂｉｓｃｏ大亚基和细胞色素ｂ６）表达量下调，２个蛋
白（核酮糖二磷酸碳酸酵素小链ｃ和细胞色素ｂ６／ｆ复合体亚基ＶＩ）表达量上调；与能量代谢相关的蔗糖－ＵＤＰ葡
萄糖基转移酶和与细胞分裂相关的ＮＦＹ５表达量均下调，而蛋白酶１型β亚基、ＡＴＰ合成酶β亚基、细胞分裂素
组氨酸磷光体转移蛋白４和ＮＡＤ依赖３磷酸甘油醛脱氢酶表达量均上调。这说明太子参连作导致叶片致病性或
衰老相关蛋白表达量上调，是太子参连作病害频发和提前退黄的主要原因，同时连作导致抗性相关蛋白以及能量
代谢和细胞分裂相关蛋白紊乱（或降低或上调），是太子参连作障碍的结果在蛋白质水平的表现，连作还导致重要
的光合相关蛋白表达量下调，是连作太子参光合作用能力下降的分子基础。
关键词：太子参；连作障碍；差异蛋白质；分子机理
中图分类号：Ｑ９４５．７；Ｓ５６７．５＋３　　文献标识码：Ａ　　文章编号：１００４５７５９（２０１０）０６０１９７１１
　 太子参（犘狊犲狌犱狅狊狋犲犾犾犪狉犻犪犺犲狋犲狉狅狆犺狔犾犾犪）别名孩儿参、童参，是石竹科草本植物，性平，味甘、微苦，归脾、肺经，
益气健脾，生津润肺，常用于脾虚体倦，食欲不振，病后虚弱，气阴不足，自汗口渴，肺燥干咳。作为补益药物，太子
参是常用大宗中药材，在我国福建、安徽、江苏、贵州、山东等省份人工栽培面积较大。福建柘荣太子参为道地药
材，种植面积和产量均居全国之首。目前有关太子参资源分布［１］、资源特性［２］、化学成分［３６］、药理作用［７］、栽培管
理［８，９］、病害防治［１０］、光合作用特性［１１］等方面的研究已有报道。
太子参有较严重的连作障碍现象。连作障碍属于化感作用研究范畴。化感作用现象包括他感和自毒２个方
面。他感作用，如巨桉（犈狌犮犪犾狔狆狋狌狊犵狉犪狀犱犻狊）对紫花苜蓿（犕犲犱犻犮犪犵狅狊犪狋犻狏犪）的化感作用［１２］，苍耳（犡犪狀狋犺犻狌犿
狊犻犫犻狉犻犮狌犿）对小麦（犜狉犻狋犻犮狌犿犪犲狊狋犻狏狌犿）、高粱（犛狅狉犵犺狌狉狀狏狌犾犵犪狉犲）、黄瓜（犆狌犮狌犿犻狊狊犪狋犻狏狌狊）、油菜（犅狉犪狊狊犻犮犪
犮犪犿狆犲狊狋狉犻狊）和萝卜（犚犪狆犺犪狀狌狊狊犪狋犻狏狌狊）的化感作用［１３］，圆叶决明（犆犺犪犿犪犲犮狉犻狊狋犪狉狅狋狌狀犱犻犳狅犾犻犪ｃｖ．Ｗｙｎｎ）和羽叶
决明（犆．狀犻犮狋犻狋犪狀狊）分别对百喜草（犘犪狊狆犪犾狌犿狀狅狋犪狋狌犿）的化感作用［１４］。太子参连作障碍属于化感作用的另一个
方面———自毒作用。研究结果表明，大田连作导致太子参地上部分病害严重且提前枯黄，最终产量下降为对照试
验（水旱轮作）的１／３以下，而太子参药材品质指标（人参皂苷Ｒｂ１和多糖含量）均比对照试验（水旱轮作）的显著
下降，盆栽模拟试验结果也表明，进入４月后，太子参连作与水旱轮作相比，叶片数量明显减少，叶片面积明显减
小，病害更严重且叶片提前枯黄，在生长旺盛期（４月上旬测定）光合速率、叶绿素含量、相应的荧光动力学参数均
显著下降。太子参连作障碍现象已被试验证明是极严重的，其分子机理尚需深入研究，以期为太子参连作障碍的
克服提供理论依据。
近年来，差异蛋白质组学应用于植物或作物科学相关的分子机制研究日益增多，且从分子水平较好地解释了
植物／作物自身遗传表达或对环境响应的分子机理。如被应用于水稻（犗狉狔狕犪狊犪狋犻狏犪）低温胁迫和金属胁迫响应
第１９卷　第６期
Ｖｏｌ．１９，Ｎｏ．６
草　业　学　报
ＡＣＴＡＰＲＡＴＡＣＵＬＴＵＲＡＥＳＩＮＩＣＡ 　　
１９７－２０７
２０１０年１２月
 收稿日期：２０１００２０４；改回日期：２０１００３１６
基金项目：国家自然科学基金（３０７７２７２９）和福建省自然科学基金（２００８Ｊ００５１）资助。
作者简介：林茂兹（１９７６），男，福建仙游人，讲师，在读博士。Ｅｍａｉｌ：ｄｒａｇｏｎｌｍｚ＠１６３．ｃｏｍ
通讯作者。Ｅｍａｉｌ：ｗｅｎｘｉｏｎｇ１８１＠１６３．ｃｏｍ
的研究［１５１７］，被应用于不同水稻的叶片和谷壳差异蛋白研究［１８］，再如水稻苗期，灌浆期叶片蛋白质的差异表
达［１９２２］，为水稻高产的分子机理提供了充分的试验证据。此外，差异蛋白质组学技术在玉米（犣犲犪犿犪狔狊）［２３］，小
麦［２４］，大豆（犌犾狔犮犻狀犲犿犪狓）［２５］等作物中也都有过较好的应用。
太子参盆栽模拟连作发生的连作障碍现象与大田连作产生的大田连作现象相同，而盆栽试验可控性强，能尽
量减少大田试验中的一些意想不到的外界干扰。本研究对盆栽模拟连作与模拟轮作条件下太子参叶片蛋白质分
别进行提取，用２Ｄ电泳技术进行分离，再用 ＭＤＬＤＩ－ＴＯＦ／ＭＳ对差异蛋白质点进行分析鉴定，试图从分子水
平为太子参连作障碍机理提供理论依据。
１　材料与方法
１．１　供试材料
太子参品种为柘参２号，购自福建省柘荣县太子参ＧＡＰ（ＧｏｏｄＡｇｒｉｃｕｌｔｕｒａｌＰｒａｃｔｉｃｅｓ）基地。
１．２　试验设计
１．２．１　盆栽试验　盆栽试验在福建农林大学农业生态研究所田间网室中进行。盆栽试验设２个处理，每个处理
重复４次。２个处理分别为“水旱”模拟轮作（太子参－水稻轮作）和“旱－旱”模拟连作（太子参－太子参连作），
盆栽种植顺序和相应的时间见表１。所有的种植时节均按照农业生产季节设定。种植土壤的基本理化指标：总
氮２．４７ｇ／ｋｇ，碱性氮２８．１ｍｇ／ｋｇ，全磷１．２２ｇ／ｋｇ，有效磷１１９．７ｍｇ／ｋｇ，全钾１．０８ｇ／ｋｇ，有效钾３７２．４ｍｇ／ｋｇ，
ｐＨ值５．７。土壤充分混匀后，分装于陶瓷盆中（直径４５ｃｍ，高４０ｃｍ），每盆土壤３５ｋｇ。将柘参２号种苗植于盆
内，每盆１０株（图１），共８盆。太子参种植期间，定期定量浇水，并人工去除盆中杂草。太子参成熟收获后，用于
种植的８盆土壤混匀后平均分为２组，其中，第１组土壤平均分装于８个塑料桶中，每桶均匀地播５株水稻，定期
定量浇水，待水稻成熟收获后，将土壤再次混匀并装回原来的４个花盆内，用于种植太子参，作为太子参的“水－
旱”模拟轮作；第２组土壤平均分装于原来的４个花盆内，待“水－旱”模拟轮作处理的水稻收获后，同期再次种植
太子参，作为太子参的“旱－旱”模拟连作。第２次种植太子参前每盆土壤中加入１０ｇＮＨ４ＮＯ３ 和１０ｇＫ２ＨＰＯ４
·３Ｈ２Ｏ，并将盆中上层土壤（约１０ｃｍ深）反复搅拌均匀，作为底肥，以减少土壤经过不同的耕作方式产生的养分
差异。模拟“水－旱”轮作记录为Ｔｒ１，模拟“旱－旱”连作记录为Ｔｒ２。
表１　太子参盆栽试验种植顺序
犜犪犫犾犲１　犆狉狅狆狆犻狀犵狊犲狇狌犲狀犮犲犻狀狆狅狋犲狓狆犲狉犻犿犲狀狋狅犳犘．犺犲狋犲狉狅狆犺狔犾犾犪
处理
Ｔｒｅａｔｍｅｎｔ
日期Ｄａｔｅ（年．月．日Ｙｅａｒ．ｍｏｎｔｈ．ｄａｙ）
２００７．１１．２２－２００８．７．１ ２００８．７．１８－２００８．１０．３０ ２００８．１１．３０－２００９．７．１
“旱－旱”模拟连作Ｒｅｐｌａｎｔｉｎｇ 种植太子参犘．犺犲狋犲狉狅狆犺狔犾犾犪ｐｌａｎｔｉｎｇ 土壤休闲Ｆａｌｏｗ 种植太子参 Ｔｒ２犘．犺犲狋犲狉狅狆犺狔犾犾犪ｒｅｐｌａｎｔｉｎｇＴｒ２
“水－旱”模拟轮作Ｒｏｔａｔｉｏｎ 种植太子参犘．犺犲狋犲狉狅狆犺狔犾犾犪ｐｌａｎｔｉｎｇ 土壤种植水稻Ｒｉｃｅｐｌａｎｔｉｎｇ 种植太子参 Ｔｒ１犘．犺犲狋犲狉狅狆犺狔犾犾犪ｐｌａｎｔｉｎｇＴｒ１
１．２．２　取样　２００９年４月１７日，在盆栽种植太子参
图１　太子参种植模式图
犉犻犵．１　犆狉狅狆狆犻狀犵狆犪狋狋犲狉狀狅犳犘．犺犲狋犲狉狅狆犺狔犾犾犪
的生长旺盛期，分别从Ｔｒ１和Ｔｒ２中剪取３片新鲜的
太子参倒二叶片（共约２ｇ），液氮速冻，用于叶片蛋白
质提取分析，３次重复。
１．２．３　叶片蛋白质样品提取与制备　取样后，太子参
叶片立即放入预冷并加入０．５ｇ聚乙烯吡咯烷酮的研
钵中研磨成均匀粉末，研磨过程中不断加入液氮以保
持样品中蛋白稳定性，研磨后样品加入预冷的１０％三
氯乙酸／丙酮溶液（含０．０７％β巯基乙醇），混匀，放置于－２０℃过夜后，在４℃、１５０００ｒ／ｍｉｎ下离心３０ｍｉｎ，去上
清液，沉淀用预冷的８０％丙酮（含０．０７％β巯基乙醇）重悬，在４℃、１５０００ｒ／ｍｉｎ下离心３０ｍｉｎ，重复３次，至上
清液呈无色。沉淀真空干燥后制成蛋白干粉。得到的干粉加入适量蛋白质裂解液｛８ｍｏｌ／Ｌ尿素，４％３［３（胆
８９１ ＡＣＴＡＰＲＡＴＡＣＵＬＴＵＲＡＥＳＩＮＩＣＡ（２０１０） Ｖｏｌ．１９，Ｎｏ．６
酰胺丙基）］二甲氨基丙磺酸内盐（ＣＨＡＰＳ），４０ｍｍｏｌ／ＬＴｒｉｓ，６５ｍｍｏｌ／Ｌ二硫苏糖醇｝，用超声清洗器于２５℃以
下水浴超声３０ｍｉｎ，２５℃、１５０００ｒ／ｍｉｎ离心１５ｍｉｎ，弃沉淀，上清为蛋白质样品溶液，用牛血清蛋白作标准曲线，
以考马斯亮蓝法测定样品浓度后，用作电泳样品。
１．２．４　双向电泳与凝胶成像　电泳采用优化的方法［２１，２２，２６］，第一向采用人工制备的胶条，蛋白样品上样量为
１６０μｇ，聚焦条件：２００，３００，４００，５００，６００Ｖ各３０ｍｉｎ；８００Ｖ１６．５ｈ；１０００Ｖ４ｈ。第二向用十二烷基磺酸钠－
聚丙烯酰胺凝胶电泳（ＳＤＳ－ＰＡＧＥ）：胶条置于平衡缓冲液（６０ｍｍｏｌ／ＬＴｒｉｓＨＣｌ，ｐＨ６．８，２％ＳＤＳ，５％β巯基
乙醇，１０％甘油，０．０５％溴酚蓝）平衡５ｍｉｎ，平衡后的胶条放置于制好的第二向ＳＤＳ胶上，并轻压使胶条与ＳＤＳ
胶面充分结合，用加有少量溴酚蓝１％琼脂糖封顶，进行二向电泳，二向电泳参数为：１０ｍＡ／板，约８ｈ。
电泳结束后，ＳＤＳ－ＰＡＧＥ胶在固定液（甲醇５０％、冰醋酸５％）中固定３０ｍｉｎ，双蒸水冲洗３次放置过夜以
降低背景颜色，于增敏液（乙醇３０％、硫代硫酸钠０．２％、醋酸钠６．８％）中反应３０ｍｉｎ，双蒸水冲洗３次，每次５
ｍｉｎ，用硝酸银染色液（硝酸银２．５％、甲醛０．４％）室温反应２０ｍｉｎ，双蒸水冲洗２次，每次１ｍｉｎ，加显色液（碳酸
钠２．５％、甲醛０．２％）显色，用５％冰醋酸终止显色，双蒸水冲洗３次，每次５ｍｉｎ，用保鲜膜密封４℃保存。
银染后的凝胶用ＩｍａｇｅＳｃａｎｎｅｒ扫描仪扫描，利用Ｉｍａｇｅｍａｓｔｅｒ５．０凝胶图像分析软件对其进行分析。
１．２．５　ＭＡＬＤＩ－ＴＯＦ／ＭＳ分析　从２Ｄ电泳的凝胶上分别切下差异蛋白质点，送中山大学蛋白质组学研究中
心进行 ＭＡＬＤＩ－ＴＯＦ／ＭＳ分析。质谱结果用 ＭＡＳＣＯＴ软件检索，对表观等电点（ＰＩ）及分子量未做要求；设置
肽片段分子量最大容许误差为１．２Ｄａ，种属分类选择绿色植物［Ｖｉｒｉｄｉｐｌａｎｔａｅ（ｇｒｅｅｎｐｌａｎｔｓ）］，不完全裂解位点为
１个，碘乙酰胺处理，分别交换 ＭＳＤＢ、ＳｗｉｓｓＰｒｏｔ和ＮＣＢＩｎｒ数据库链进行查询。
２　结果与分析
２．１　盆栽模拟轮作与连作太子参叶片蛋白质图谱的构建与差异比较
模拟水旱轮作和连作太子参叶片蛋白质，分别经过双向电泳分离，凝胶扫描后，得到２张图谱。通过Ｉｍ
ａｇｅＭａｓｔｅｒ５．０软件分析，在ＰＩ从３．５～１０．０和分子量为１４～１１６ｋＤ的范围中，手工除去杂点后，当差异达到
１．５倍时即认为具有显著性，据此检测出２７个蛋白点在水旱轮作和连作条件下，表达量有显著差异，分别标记为
１～２７（图２），从凝胶上分别挖取差异蛋白质点，进行 ＭＡＬＤＩ－ＴＯＦ／ＭＳ鉴定分析。
图２　模拟水旱轮作与连作太子参叶片蛋白质双向凝胶电泳图谱
犉犻犵．２　犜犺犲２犇犻犿犪犵犲狅犳犾犲犪犳狆狉狅狋犲犻狀狊犻狀犘．犺犲狋犲狉狅狆犺狔犾犾犪狌狀犱犲狉狋犺犲犮犻狉犮狌犿狊狋犪狀犮犲狊狅犳犘．犺犲狋犲狉狅狆犺狔犾犾犪－
犗．狊犪狋犻狏犪－犘．犺犲狋犲狉狅狆犺狔犾犾犪犮狉狅狆狉狅狋犪狋犻狅狀狅狉犘．犺犲狋犲狉狅狆犺狔犾犾犪犮狅狀狋犻狀狌狅狌狊犮狉狅狆狆犻狀犵
左为水旱轮作，右为连作Ｔｈｅｌｅｆｔｓｈｏｗｓｔｈｅｒｏｔａｔｉｏｎ，ｔｈｅｒｉｇｈｔｓｈｏｗｓｔｈｅｃｏｎｔｉｎｕｏｕｓｃｒｏｐｐｉｎｇ
９９１第１９卷第６期 草业学报２０１０年
２．２　模拟连作与水旱轮作太子参叶片蛋白质差异表达分析
２７个差异表达的蛋白质点 ＭＡＬＤＩ－ＴＯＦ／ＭＳ分析后，得到的质谱信息通过 ＭａｔｒｉｘＳｃｉｅｎｃｅ（Ｌｏｎｄｏｎ，ＵＫ）
网站（ｈｔｔｐ：／／ｗｗｗ．ｍａｔｒｉｘｓｃｉｅｎｃｅ．ｃｏｍ／）提供的 ＭＡＳＣＯＴ软件进行生物信息学查询分析。这２７个差异表达的
蛋白质点有３个（２，６，７号）查询分析结果为假想蛋白，其余的２４个差异表达蛋白质点查询结果按照蛋白质功能
可以分为４类（表２）。可见太子参连作与轮作相比，与植物衰老或病害相关的蛋白质表达量全部上调。这与生
产实践中发现的太子参连作导致其病害严重、提前退黄等现象相一致。但是植物光合作用相关蛋白、植物抗性相
关蛋白以及与细胞能量、代谢相关的３类蛋白质中，各类蛋白质表达量上调或下调的趋势并不一致。作物生长发
育与其产量形成是一个复杂的生物学过程，除了与作物自身遗传因素有关外，和外界环境因素也有关。太子参生
长过程中可能释放自毒物质到土壤中，导致下茬太子参生长的土壤微环境发生变化，这反过来引起太子参植株体
内的蛋白质表达与非连作条件下的差异产生。
表２　太子参连作与轮作叶片差异蛋白质表达变化
犜犪犫犾犲２　犞犪狉犻犲狊狅犳犱犻犳犳犲狉犲狀狋犻犪犾犲狓狆狉犲狊狊犲犱狆狉狅狋犲犻狀狊犻狀犘．犺犲狋犲狉狅狆犺狔犾犾犪犾犲犪狏犲狊狌狀犱犲狉狋犺犲犮犻狉犮狌犿狊狋犪狀犮犲狊狅犳
犘．犺犲狋犲狉狅狆犺狔犾犾犪犮狅狀狋犻狀狌狅狌狊犮狉狅狆狆犻狀犵狅狉犘．犺犲狋犲狉狅狆犺狔犾犾犪－犗．狊犪狋犻狏犪－犘．犺犲狋犲狉狅狆犺狔犾犾犪犮狉狅狆狉狅狋犪狋犻狅狀
序号
Ｎｏ．
登录号
Ａｃｃｅｓｓｉｏｎ
ｎｕｍｂｅｒ
蛋白质名称
Ｐｒｏｔｅｉｎｎａｍｅ
理论等电点／
分子量
Ｔｈｅｏｒｅｔｉｃａｌ
ＰＩ／ＭＷ （ｋＤ）
试验等电点／
分子量
Ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌ
ＰＩ／ＭＷ （ｋＤ）
物种来源
Ｏｒｉｇｉｎ
覆盖率
Ｓｅｑｕｅｎｃｅ
ｃｏｖｅｒａｇｅ
（％）
得分
Ｓｃｏｒｅ
连作表达结果
Ｐｒｏｔｅｉｎｅｘｐｒｅｓｓ
ｒｅｓｕｌｔｓｕｎｄｅｒ
ｒｅｐｌａｎｔｉｎｇ
１ ｇｉ｜１４９３９１５５３ 磷脂氢谷胱苷肽过氧化物酶
Ｐｈｏｓｐｈｏｌｉｐｉｄｈｙｄｒｏｐｅｒｏｘｉｄｅｇｌｕ
ｔａｔｈｉｏｎｅｐｅｒｏｘｉｄａｓｅ
９．７０／５．７６８ ４．０／１５ 水稻犗．狊犪狋犻狏犪 ６７ ４４ 上调
Ｕｐｒｅｇｕｌａｔｉｏｎ
３ ｇｉ｜１１８５６２４９２ 细胞壁 富 含 甘 氨 酸 蛋 白 Ｃｅｌ
ｗａｌｇｌｙｃｉｎｅｒｉｃｈｐｒｏｔｅｉｎ
８．９３／１２．５０９ ４．５／１４．４ 黄瓜犆．狊犪狋犻狏狌狊 １４ ５８ 下调
Ｄｏｗｎｒｅｇｕｌａｔｉｏｎ
４ ｇｉ｜１７３７１６９ ＳＫＰ１（Ｓ期相关蛋白激酶１）同
源蛋白 ＨｏｍｏｌｏｇｕｅｔｏＳＫＰ１
４．４２／１４．７１８ ４．８／１４．４ 拟南芥
犃狉犪犫犻犱狅狆狊犻狊狋犺犪犾犻犪狀犪
５６ ６１ 下调
Ｄｏｗｎｒｅｇｕｌａｔｉｏｎ
５ ｇｉ｜２２９６１３４０２ 细胞色素ｂ６Ｃｙｔｏｃｈｒｏｍｅｂ６ １０．９９／１．７１１ ５．０／１４．４ 茜草
犅犲犾狅狀狅狆犺狅狉犪ｓｐ．
１００ ４０ 下调
Ｄｏｗｎｒｅｇｕｌａｔｉｏｎ
８ ｇｉ｜１４９３９２３６１ 核酮糖二磷酸碳酸酵素小链ｃ
Ｒｉｂｕｌｏｓｅｂｉｓｐｈｏｓｐｈａｔｅｃａｒｂｏｘｙｌ
ａｓｅｓｍａｌｃｈａｉｎｃ
６．４０／８．４６３ ９．０／１４．４ 水稻犗．狊犪狋犻狏犪 ６１ ６５ 上调
Ｕｐｒｅｇｕｌａｔｉｏｎ
９ ｇｉ｜２５５５７１４１５ 推测 的 锌 指 蛋 白 Ｚｉｎｃｆｉｎｇｅｒ
ｐｒｏｔｅｉｎ，ｐｕｔａｔｉｖｅ
８．９２／１３．９９７ ５．３／２１ 蓖麻
犚犻犮犻狀狌狊犮狅犿犿狌狀犻狊
６４ ６０ 下调
Ｄｏｗｎｒｅｇｕｌａｔｉｏｎ
１０ ｇｉ｜２０４６６４９２ 蔗糖二磷酸尿核苷葡萄糖基转
移酶 ＳｕｃｒｏｓｅＵＤＰ ｇｌｕｃｏｓｙｌ
ｔｒａｎｓｆｅｒａｓｅ
１１．５５／１０．２６７ ４．３／１７ 拟南芥
犃．狋犺犪犾犻犪狀犪
１１ ２７ 下调
Ｄｏｗｎｒｅｇｕｌａｔｉｏｎ
１１ ｇｉ｜２５５５５４９０７ 推测的植物性丝氨酸－苏氨酸
蛋白激酶Ｓｅｒｉｎｅｔｈｒｅｏｎｉｎｅｐｒｏ
ｔｅｉｎｋｉｎａｓｅ，ｐｌａｎｔｔｙｐｅ，ｐｕｔａｔｉｖｅ
５．８３／１６．３７１ ３．９／２５ 蓖麻
犚．犮狅犿犿狌狀犻狊
１６ ２２ 上调
Ｕｐｒｅｇｕｌａｔｉｏｎ
１２ ｇｉ｜５１９６８４５４ 类似衰老相关蛋白 Ｓｉｍｉｌａｒｔｏ
ｓｅｎｅｓｃｅｎｃｅａｓｓｏｃｉａｔｅｄｐｒｏｔｅｉｎ
８．８６／３１．５３６ ４．５／２８ 拟南芥
犃．狋犺犪犾犻犪狀犪
８ ４２ 上调
Ｕｐｒｅｇｕｌａｔｉｏｎ
１３ ｇｉ｜１９５６１１９２８ 蛋白酶１型β亚基 Ｐｒｏｔｅａｓｏｍｅ
ｓｕｂｕｎｉｔｂｅｔａｔｙｐｅ１
６．７３／２４．５６０ ４．７／２８ 玉米犣．犿犪狔狊 ４ １７ 上调
Ｕｐｒｅｇｕｌａｔｉｏｎ
１４ ｇｉ｜６２３１８９９９ 钙依 赖 蛋 白 激 酶 Ｃａｌｃｉｕｍｄｅ
ｐｅｎｄｅｎｔｐｒｏｔｅｉｎｋｉｎａｓｅ
４．４６／１１．２６９ ５．０／３２ 拟南芥
犃．狋犺犪犾犻犪狀犪
１１ ３０ 上调
Ｕｐｒｅｇｕｌａｔｉｏｎ
００２ ＡＣＴＡＰＲＡＴＡＣＵＬＴＵＲＡＥＳＩＮＩＣＡ（２０１０） Ｖｏｌ．１９，Ｎｏ．６
　续表２　Ｃｏｎｔｉｎｕｅｄ
序号
Ｎｏ．
登录号
Ａｃｃｅｓｓｉｏｎ
ｎｕｍｂｅｒ
蛋白质名称
Ｐｒｏｔｅｉｎｎａｍｅ
理论等电点／
分子量
Ｔｈｅｏｒｅｔｉｃａｌ
ＰＩ／ＭＷ （ｋＤ）
试验等电点／
分子量
Ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌ
ＰＩ／ＭＷ （ｋＤ）
物种来源
Ｏｒｉｇｉｎ
覆盖率
Ｓｅｑｕｅｎｃｅ
ｃｏｖｅｒａｇｅ
（％）
得分
Ｓｃｏｒｅ
连作表达结果
Ｐｒｏｔｅｉｎｅｘｐｒｅｓｓ
ｒｅｓｕｌｔｓｕｎｄｅｒ
ｒｅｐｌａｎｔｉｎｇ
１５ ｇｉ｜６６８８９０３ ＡＴＰ合成酶β亚基 ＡＴＰｓｙｎ
ｔｈａｓｅｂｅｔａｓｕｂｕｎｉｔ
５．１２／４１．９７２ ３．７／４５ 夹竹桃
犖犲狉犻狌犿狅犾犲犪狀犱犲狉
６ ４５ 上调
Ｕｐｒｅｇｕｌａｔｉｏｎ
１６ ｇｉ｜４２５６５５３１ Ｒａｓ 癌 相 关 蛋 白 Ｒａｓｒｅｌａｔｅｄ
ｐｒｏｔｅｉｎ
５．３５／１０．７４６ ３．６／４５ 风信子
犎狔犪犮犻狀狋犺狌狊狅狉犻犲狀狋犪犾犻狊
３６ ２４ 上调
Ｕｐｒｅｇｕｌａｔｉｏｎ
１７ ｇｉ｜１３５１８４５６ 细胞 色 素 ｂ６／ｆ复 合 体 Ｃｙｔｏ
ｃｈｒｏｍｅｂ６／ｆｃｏｍｐｌｅｘｓｕｂｕｎｉｔＶＩ
１０．９９／３．４８４ ３．５／４４ 莲花
犔狅狋狌狊犼犪狆狅狀犻犮狌狊
１６ ３７ 上调
Ｕｐｒｅｇｕｌａｔｉｏｎ
１８ ｇｉ｜１２９２８２３４５ 查尔酮合成酶 Ｃｈａｌｃｏｎｅ ｓｙｎ
ｔｈａｓｅ
７．８２／７．８１３ ４．４／４６ 圆锥小麦
犜．狋狌狉犵犻犱狌犿ｓｕｂ
ｓｐ．ｄｉｃｏｃｃｏｉｄｅｓ
３８ ２６ 上调
Ｕｐｒｅｇｕｌａｔｉｏｎ
１９ ｇｉ｜１９０８９８１９０ 硫氧还蛋白相关蛋白 Ｔｈｉｏｒｅ
ｄｏｘｉｎｒｅｌａｔｅｄｐｒｏｔｅｉｎ
６．６２／２９．５３２ ４．５／４５ 杨树
犘狅狆狌犾狌狊狋狉犲犿狌犾犪
１３ １３ 上调
Ｕｐｒｅｇｕｌａｔｉｏｎ
２０ ｇｉ｜１５７６１３７４４ 成熟酶ＫＭａｔｕｒａｓｅＫ ６．７１／７．４３２ ５．５／４２ 野桐
犕犪犾犾狅狋狌狊犵犾狅犿犲狉狌犾犪狋狌狊
３０ ３６ 下调
Ｄｏｗｎｒｅｇｕｌａｔｉｏｎ
２１ ｇｉ｜２２６３７４３２５ 核酮糖１，５二磷酸大亚基Ｒｉｂｕ
ｌｏｓｅ１，５ｂｉｓｐｈｏｓｐｈａｔｅｃａｒｂｏｘｙｌ
ａｓｅ／ｏｘｙｇｅｎａｓｅｌａｒｇｅｓｕｂｕｎｉｔ
７．９６／２．５ ５．７／４２ 仙人掌
犗狆狌狀狋犻犪犱犻犾犾犲狀犻犻
２１ ２０ 下调
Ｄｏｗｎｒｅｇｕｌａｔｉｏｎ
２２ ｇｉ｜１５２２７１３４ 细胞核因子Ｙ亚基５ＮＦＹＢ５ ６．４４／１８．２８２ ６．１／４２ 拟南芥
犃．狋犺犪犾犻犪狀犪
１５ ５２ 下调
Ｄｏｗｎｒｅｇｕｌａｔｉｏｎ
２３ ｇｉ｜６２１７７３６１ 类似枯萎相关受体激酶Ｓｅｎｅｓ
ｃｅｎｃｅｒｅｌａｔｅｄｒｅｃｅｐｔｏｒｌｉｋｅｋｉｎａｓｅ
９．６２／１．３７４ ７．４／４１ 大豆
犌．犿犪狓
８３ １２ 上调
Ｕｐｒｅｇｕｌａｔｉｏｎ
２４ ｇｉ｜１１８３４１２８３ 致病性相关蛋白ＰＲｐｒｏｔｅｉｎ ４．６６／４．１５６ ７．９／４１ 青椒
犆犪狆狊犻犮狌犿犪狀狀狌狌犿
３５ １２ 上调
Ｕｐｒｅｇｕｌａｔｉｏｎ
２５ ｇｉ｜２２６８７５１８５ 细胞分裂素组氨酸磷光体转移
蛋白４Ｃｙｔｏｋｉｎｉｎｈｉｓｔｉｄｉｎｅｐｈｏｓ
ｐｈｏｔｒａｎｓｆｅｒｐｒｏｔｅｉｎ４
１０．９１／４．０６３ ６．５／４６ 葡萄
犞犻狋犻狊狏犻狀犻犳犲狉犪
５４ １３ 上调
Ｕｐｒｅｇｕｌａｔｉｏｎ
２６ ｇｉ｜２２９３６５６７４ ＮＡＤ（尼克酰胺腺嘌呤二核苷
酸）依赖３磷酸甘油醛脱氢酶
ＮＡＤｄｅｐｅｎｄｅｎｔｇｌｙｃｅｒａｌｄｅｈｙｄｅ
３ｐｈｏｓｐｈａｔｅｄｅｈｙｄｒｏｇｅｎａｓｅ
５．０９／５．５３５ ７．４／４６ 松
犘犻狀狌狊犮犪狀犪狉犻犲狀狊犻狊
２８ ３１ 上调
Ｕｐｒｅｇｕｌａｔｉｏｎ
２７ ｇｉ｜１９４７０４４５８ Ｒａｓ相关蛋白 ＲＨＮ１Ｒａｓｒｅｌａｔ
ｅｄｐｒｏｔｅｉｎＲＨＮ１
７．７１／１３．７０５ ４．６５／１７ 玉米犣．犿犪狔狊 １２ １９ 上调
Ｕｐｒｅｇｕｌａｔｉｏｎ
　ＭＷ：Ｍｏｌｅｃｕｌａｒｗｅｉｇｈｔ．
３　讨论
３．１　太子参连作障碍与光合作用相关蛋白
核酮糖１，５二磷酸羧化酶／加氧酶（ｒｉｂｕｌｏｓｅ１，５ｂｉｐｈｏｓｐｈａｔｅｃａｒｂｏｘｙｌａｓｅ／ｏｘｙｇｅｎａｓｅ），简称为Ｒｕｂｉｓｃｏ［２７］，
它是植物光合同化二氧化碳的关键酶，催化核酮糖１，５二磷酸与二氧化碳反应，经过产生不稳定的六碳中间物，
再裂解成２个分子的３磷酸甘油酸。该酶既能催化二氧化碳与核酮糖１，５二磷酸加成，也能催化核酮糖１，５二
磷酸与氧气反应，因此也称为加氧酶。该酶由８个大亚基和８个小亚基组成，是一个复杂的多聚体，其中大亚基
１０２第１９卷第６期 草业学报２０１０年
是酶的催化单位，能结合底物（二氧化碳和核酮糖１，５二磷酸）和 Ｍｇ２＋，小亚基是调节酶活性的单位。该酶以３
种形式存在，其中有活性的为ＥＣＭ 型，另２种为无活性的Ｅ型，或经氨甲酰化的ＥＣ型。由于无活性的Ｅ型
Ｒｕｂｉｓｃｏ与底物核酮糖１，５二磷酸更容易结合，所以核酮糖１，５二磷酸既是该酶催化反应的底物，也是该酶活性
的强抑制剂。Ｒｕｂｉｓｃｏ的激活酶可以与无活性的Ｅ型Ｒｕｂｉｓｃｏ结合，并且在消耗ＡＴＰ的反应中将核酮糖１，５二
磷酸从活性部位释放。本研究结果表明，太子参连作导致Ｒｕｂｉｓｃｏ大亚基表达量下调，将引起太子参光合速率下
降，这能从分子机理上解释连作导致太子参光合速率下降的研究结果。本研究结果还表明太子参连作叶片中核
酮糖二磷酸碳酸酵素小链ｃ的表达量上调。这可能与它参与Ｒｕｂｉｓｃｏ酶活性的调节有关。
细胞色素ｂ６ｆ复合物在电子传递中将光系统Ⅰ和光系统Ⅱ联结在一起。由光系统Ⅱ进行光反应产生的还原
型氢醌（ＰＱＢＨ２）是一种可移动的脂溶性分子，从Ｄ１蛋白上解离下来后，电子从ＰＱＢＨ２ 经过细胞色素ｂ６ｆ复合物
传递到质体蓝素，最终到达光系统Ⅰ的Ｐ７００＋，从而将其还原。细胞色素ｂ６ｆ复合物含有一个细胞色素ｂ６、一个
Ｆｅ－Ｓ和一个细胞色素ｆ（ｃ型细胞色素），它们都是电子载体［２８］。本研究结果表明太子参连作与轮作相比，细胞
色素ｂ６ 表达量下调，但是细胞色素ｂ６ｆ的亚基（细胞色素ｆ）表达量上调。这说明太子参连作导致光合系统受到
了破坏。类似于“限速酶”理论或“限制性因子”理论，细胞色素ｂ６ 表达量下调，必然导致太子参光合速率下调。
这也从分子机理上解释连作导致太子参光合速率下降的研究结果。
３．２　太子参连作障碍与抗性相关蛋白
谷胱甘肽磷脂氢过氧化物酶（ＰＨＧＰｘ）是生物体内一种重要的抗氧化酶。它是一种硒依赖性蛋白，在谷胱甘
肽（ＧＳＨ）的参与下能特异性地还原磷脂氢过氧化物（ＰＬＯＯＨ）和胆固醇氢过氧化物（ＣｈＯＯＨ），从而保护生物膜
免受过氧化损伤。它还是核酸等生物大分子的重要保护剂，并且在细胞凋亡调控中发挥作用［２９］。丝氨酸／苏氨
酸蛋白激酶抗病性基因的克隆与序列分析已见报道［３０］，丝氨酸／苏氨酸蛋白激酶是植物抗病相关的蛋白。钙依
赖蛋白激酶在调节植物生长和发育，特别是抗逆过程中起着重要的作用［３１］。查尔酮合成酶基因是苯丙氨酸代谢
途径中的关键基因，在类黄酮类物质合成中扮演着重要的角色，调控着色素合成、防御反应、植物育性等生理生化
过程，对植物的生长发育起至关重要的作用［３２］。硫氧还蛋白（ｔｈｉｏｒｅｄｏｘｉｎ，Ｔｒｘ）是一类广泛存在于生物体内的多
功能酸性蛋白，分子量约１２ｋＤａ，参与细胞的一系列生化反应，包括酶活性的调节，转录因子的调控等，是重要的
酶活力调节蛋白，其功能绝大多数是依赖于硫氧还蛋白还原靶蛋白中的二硫键，所以硫氧还蛋白是一种植物抗性
蛋白［３３］。本研究结果表明，太子参连作与轮作相比，叶片中谷胱甘肽磷脂氢过氧化物酶、丝氨酸／苏氨酸蛋白激
酶、钙依赖蛋白、查尔酮合成酶、硫氧还相关蛋白的表达量都上调。连作太子参叶片里这些抗性蛋白表达上调，将
有利于抵抗连作自毒效应，也是抵抗逆境胁迫的一种分子基础，即这些抗性相关蛋白在太子参连作后表达量上
调，是太子参抵抗连作自毒的应答结果。
富含甘氨酸蛋白（ＧＲＰ）基因的表达可受到多种物理、化学和生物因素的影响［３４］。Ｓ期激酶相关蛋白１（Ｓ
ｐｈａｓｅｋｉｎａｓｅａｓｓｏｃｉａｔｅｄｐｒｏｔｅｉｎ１，ＳＫＰ１）是真核生物中普遍存在的一类蛋白，能形成ＳＣＦ复合体而参与泛素蛋
白降解，与细胞周期调控，生物节律，生物抗逆以及雄性不育等重要过程有关，已有文献报道该蛋白与西红柿
（犔狔犮狅狆犲狉狊犻犮狅狀犲狊犮狌犾犲狀狋狌犿）、烟草（犖犻犮狅狋犻犪狀犪狋狅犫犪犮狌犿）、大豆等抗病有关［３５］。锌指蛋白的特异性结合域能特异性
结合某些外源ＤＮＡ，进一步影响外源基因的表达［３６］，从而使机体得以受保护，而起到抗性作用。成熟酶Ｋ催化
切除前体ＲＮＡ中的内含子，直接在翻译水平影响基因的表达［３７］。有研究表明成熟酶 Ｋ在烟草打顶后表达增
加，说明打顶处理能通过成熟酶Ｋ对ＲＮＡ内含子的剪切影响氨甲酰磷酸转移酶、精胺／亚精胺合成酶、６磷酸山
梨醇脱氢酶等调控碳氮代谢的酶基因及其他影响烟碱合成的基因表达水平，进而影响烟碱合成的相关生理过
程［３８］，可见，蛋白酶Ｋ可参与植物体受损伤的抗性反应。本研究结果表明，太子参连作与轮作相比，其叶片细胞
壁富含甘氨酸蛋白、Ｓ期激酶相关蛋白１的同源蛋白、锌指蛋白、成熟酶Ｋ等的表达量均下调。当太子参连作发
生严重连作障碍现象时，可能反过来导致某些抗性相关蛋白的表达受影响，这可能是本研究结果显示的有些抗性
相关蛋白表达量下调的原因。这些抗性相关蛋白表达量下调，导致太子参抗性下降，又将导致更为严重的连作障
碍。所以有些抗性相关蛋白表达量下调与连作障碍互为因果关系。
２０２ ＡＣＴＡＰＲＡＴＡＣＵＬＴＵＲＡＥＳＩＮＩＣＡ（２０１０） Ｖｏｌ．１９，Ｎｏ．６
图３　太子参连作障碍分子机理图
犉犻犵．３　犕狅犾犲犮狌犾犪狉犿犲犮犺犪狀犻狊犿狅犳犮狅狀狋犻狀狌狅狌狊犮狉狅狆狆犻狀犵狅犫狊狋犪犮犾犲犻狀犘．犺犲狋犲狉狅狆犺狔犾犾犪
３０２第１９卷第６期 草业学报２０１０年
３．３　太子参连作障碍与植物病害或衰老相关蛋白
植物的衰老是受细胞特定基因控制的主动的细胞程序性死亡（ｐｒｏｇｒａｍｍｅｄｃｅｌｄｅａｔｈ，ＰＣＤ）的过程。人们
已分离出许多与衰老有关的基因（ｓｅｎｅｓｃｅｎｃｅａｓｓｏｃｉａｔｅｄｇｅｎｅｓ，ＳＡＧｓ），如编码 ＲＮａｓｅ、蛋白酶、脂酶的基因
等［３９］。植物衰老蛋白或植物衰老相关蛋白得到广大学者的重视。Ｒａｓ是大鼠肉瘤（ｒａｔｓａｒｃｏｍａ，Ｒａｓ）的英文缩
写。Ｒａｓ蛋白是原癌基因犮狉犪狊的表达产物，相对分子质量为２１ｋＤａ，属单体３磷酸鸟苷（ＧＴＰ）结合蛋白，具有
弱的ＧＴＰ酶活性。Ｒａｓ蛋白的活性状态对细胞的生长、分化、细胞骨架、蛋白质运输和分泌等都具有影响，其活
性则是通过与ＧＴＰ或２磷酸鸟苷（ＧＤＰ）的结合进行调节。该蛋白与人和动物的癌症有关，医学界多有报道，但
是在植物中，Ｒａｓ蛋白及狉犪狊基因目前鲜见报道。植物受到微生物侵染时体内会积累病程相关蛋白，已经报道过
的相关植物有烟草、水稻、小麦、玉米、番茄、大豆、菜豆（犘犺犪狊犲狅犾狌狊狏狌犾犵犪狉犻狊）等几十种植物［４０］。本研究结果表明，
太子参连作与轮作相比，类似衰老相关蛋白、Ｒａｓ癌相关蛋白、类似枯萎相关受体激酶、致病性相关蛋白、Ｒａｓ相
关蛋白ＲＨＮ１的表达量全部上调。连作导致太子参地上部分叶片发黄，产生严重的病害，提早退黄等。应用差
异蛋白质组学方法的研究结果从蛋白质水平解释了太子参连作导致这些相关现象的分子机理。但是，如上所述，
Ｒａｓ蛋白及其相关蛋白在植物中鲜见报道，本研究的差异蛋白质查询结果显示有２种Ｒａｓ相关蛋白，这方面可更
进一步深入研究。
３．４　太子参连作障碍与植物能量、细胞分裂等代谢相关蛋白
植物次生代谢中产生的小分子糖甙类化合物多是由尿苷二磷酸糖基转移酶类（ＵＤＰｇｌｙｃｏｓｙｌｔｒａｎｓｆｅｒａｓｅ，
ＵＤＰＧＴ，ＵＧＴｓ）催化完成的［４１］。糖基转移酶是生物体中广泛存在的一大类酶，决定了糖甙键的形成，亦是自然
界中最具多样性的酶类之一，参与糖脂、糖蛋白、多糖和大量具有生物活性的次生代谢产物的生物合成［４２，４３］。另
一方面，糖基化作用在抑制和排除生物体一系列内生和外生有毒化合物的过程中非常重要。本研究结果表明，蔗
糖ＵＤＰ葡萄糖基转移酶在连作太子参叶片中的表达量下调，这可以从分子水平解释太子参连作导致太子参品
质下降的现象，即连作与轮作的太子参药材品质相比，多糖和人参皂苷含量都显著降低。细胞核因子Ｙ亚基５
（ＮＦＹＢ５）是转录因子，参与细胞循环以及分裂。太子参连作导致其表达量下调，说明连作将导致细胞转录水平
的损害，最终导致其连作障碍。
在高等植物中，细胞分裂素通过对细胞分裂与分化的调节而广泛参与了对植物生长发育的调控［４４］。细胞分
裂素是一类重要的植物激素，它可在一定程度延缓植物的衰老［４５］。本研究结果表明，细胞分裂素组氨酸磷光体
转移蛋白４在连作太子参中表达量上调，这可能是对太子参连作提前退黄衰老的抵抗性应答反应，也可能是连作
障碍导致代谢紊乱后的蛋白表达结果。
在植物中，３磷酸甘油醛脱氢酶在厌氧、热激、伤害以及能量供应中可能发挥着重要作用［４６］。ＡＴＰ合成酶广
泛存在于线粒体内膜或叶绿体内囊体上，参与氧化磷酸化或光合磷酸化，ＡＴＰ合成酶的β亚基上有核苷酸结合
位点，结合位点具有催化ＡＴＰ合成或水解的活性。本研究结果表明，ＡＴＰ合成酶β亚基和ＮＡＤ依赖３磷酸甘
油醛脱氢酶在连作太子参中表达量均上调，前者可能对ＡＴＰ合成酶的合成或水解产生影响，从而影响太子参细
胞内的能量代谢，后者也可能与能量代谢有关。在连作障碍中发生的时候，可能需要通过能量补偿来帮植物渡过
难关。
蛋白酶１型β亚基具有依赖ＡＴＰ的蛋白水解活性，对精氨酸、亮氨酸、苯丙氨酸、酪氨酸、谷氨酸等氨基酸端
的肽段具有断裂能力，参与泛素的代谢。泛素是一种存在于大多数真核细胞中的小蛋白，其主要功能是标记需要
分解掉的蛋白质，使其被水解。本研究结果表明，蛋白酶１型β亚基在连作太子参中表达量上调，这可能是太子
参连作产生自毒作用，需要解毒而产生的应答反应。
综上所述，提出太子参连作障碍的分子机理如图３。可见太子参连作导致叶片致病性或衰老相关蛋白表达
量上调，是太子参连作病害频发和提前退黄的分子机理，连作还导致抗性相关蛋白以及能量代谢和细胞分裂相关
蛋白表达紊乱，重要的光合相关蛋白表达量也下调。
４０２ ＡＣＴＡＰＲＡＴＡＣＵＬＴＵＲＡＥＳＩＮＩＣＡ（２０１０） Ｖｏｌ．１９，Ｎｏ．６
参考文献：
［１］　林光美．太子参研究进展［Ｊ］．中国野生植物资源，２００４，２３（６）：１５１７．
［２］　林光美，张建宝，侯长红，等．太子参品种资源特性的研究［Ｊ］．中国中药杂志，２００５，３０（６）：４２２４２６．
［３］　刘训红，阐毓铭．太子参研究概述［Ｊ］．时珍国医国药，２０００，１１（１２）：１１３１１１３２．
［４］　余国奠，刘学平，张洁，等．野生孩儿参块根及地上部分氨基酸含量的比较［Ｊ］．中国野生植物资源，１９９９，１８（４）：７９．
［５］　余国奠，刘学平，潘红娟，等．５个太子参品系的微量元素分析研究［Ｊ］．中国野生植物资源，１９９８，１７（４）：２０２２．
［６］　ＣｈｅｎＹＹ，ＤｉｎｇＹ，ＷａｎｇＷ，犲狋犪犾．Ｄｅｔｅｒｍｉｎａｔｉｏｎｏｆｐｏｌｙｓａｃｃｈａｒｉｄｅｉｎｒａｄｉｘｐｓｅｕｄｏｓｔｅｌａｒｉａｅｅｘｔｒａｃｔｂｙｓｉｚｅｅｘｃｌｕｓｉｏｎｈｉｇｈ
ｐｅｒｆｏｒｍａｎｃｅｌｉｑｕｉｄｃｈｒｏｍａｔｏｇｒａｐｈｙ［Ｊ］．ＴｓｉｎｇｈｕａＳｃｉｅｎｃｅＴｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，２００７，１２（４）：３８９３９３．
［７］　龚祝南，戴岳，马辉，等．８个不同产地太子参对脾虚及免疫功能的影响［Ｊ］．中药材，２００１，２４（４）：２８１２８２．
［８］　林光美，侯长红．太子参生产质量管理规范（ＧＡＰ）的初步探讨［Ｊ］．福建农林大学学报（自然科学版），２００３，６（２）：５１５４．
［９］　林光美，侯长红，王树贵，等．行株距对太子参产量的影响［Ｊ］．特产研究，２００５，（４）：９１３．
［１０］　朱艳，周小华，秦民坚．太子参病毒病及其脱病毒研究进展［Ｊ］．中国野生植物资源，２００５，２４（２）：３１３２，３８．
［１１］　林茂兹，曹智，王阮平，等．太子参光合速率变化特征初探［Ｊ］．草业科学，２００９，２６（７）：３６３９．
［１２］　钟宇，张健，杨万勤，等．不同土壤水分条件下生长的巨桉对紫花苜蓿的化感作用［Ｊ］．草业学报，２００９，１８（４）：８１８６．
［１３］　高兴祥，李美，高宗军，等．苍耳对不同植物幼苗的化感作用研究［Ｊ］．草业学报，２００９，１８（２）：９５１０１．
［１４］　高承芳，翁伯琦，王义祥，等．铝、镁离子胁迫下决明对百喜草的化感作用［Ｊ］．草业学报，２００９，１８（５）：４０４５．
［１５］　ＣｕｉＳＸ，ＨｕａｎｇＦ，ＷａｎｇＪ，犲狋犪犾．Ａｐｒｏｔｅｏｍｉｃｓａｎａｌｙｓｉｓｏｆｃｏｌｄｓｔｒｅｓｓｒｅｓｐｏｎｓｅｓｉｎｒｉｃｅｓｅｅｄｌｉｎｇｓ［Ｊ］．Ｐｒｏｔｅｏｍｉｃｓ，２００５，５：
３１６２３１７２．
［１６］　ＨａｊｄｕｃｈＭ，ＲａｋｗａｌＲ，ＡｇａｒａｗａｌＧＫ，犲狋犪犾．Ｈｉｇｈｒｅｓｏｌｕｔｉｏｎｔｗｏｄｉｍｅｎｓｉｏｎａｌｅｌｅｃｔｒｏｐｈｏｒｅｓｉｓｓｅｐａｒａｔｉｏｎｏｆｐｒｏｔｅｉｎｓｆｒｏｍ
ｍｅｔａｌｓｔｒｅｓｓｅｄｒｉｃｅ（犗狉狔狕犪狊犪狋犻狏犪Ｌ）ｌｅａｖｅｓ：Ｄｒａｓｔｉｃｒｅｄｕｃｔｉｏｎｓ／ｆｒａｇｍｅｎｔａｔｉｏｎｏｆｒｉｂｕｌｏｓｅ１，５ｂｉｓｐｈｏｓｐｈａｔｅｃａｒｂｏｘｙｌａｓｅ／ｏｘｙｇｅ
ｎａｓｅａｎｄｉｎｄｕｃｔｉｏｎｏｆｓｔｒｅｓｓｒｅｌａｔｅｄｐｒｏｔｅｉｎｓ［Ｊ］．Ｅｌｅｃｔｒｏｐｈｏｒｅｓｉｓ，２００１，２２（１３）：２８２４２８３ｌ．
［１７］　ＺｈａｎｇＹＰ，ＪｉｎＦ，ＣｈａｉＸＱ，犲狋犪犾．２ＤＥｍｅｔｈｏｄａｎｄｐｒｏｔｅｏｍｉｃｍａｐｎａｎｌｙｓｉｓｉｎｒｉｃｅｌｅａｖｅｓｕｎｄｅｒｉｒｏｎｄｅｆｉｃｉｅｎｔｓｔｒｅｓｓ［Ｊ］．
ＣｈｉｎａＪｏｕｒｎａｌｏｆＢｉｏｉｎｆｏｒｍａｔｉｃｓ，２００４，２（３）：６１０．
［１８］　ＴｒｉｓｉｒｉｒｏｊＡ，ＪｅｙａｃｈｏｋＮ，ＣｈｅｎＳＴ．Ｐｒｏｔｅｏｍｉｃｓｃｈａｒａｃｔｅｒｉｚａｔｉｏｎｏｆｄｉｆｆｅｒｅｎｔｂｒａｎｐｒｏｔｅｉｎｓｂｅｔｗｅｅｎａｒｏｍａｔｉｃａｎｄｎｏｎａｒｏｍａｔｉｃ
ｒｉｃｅ（犗狉狔狕犪狊犪狋犻狏犪Ｌ．ｓｓｐ．ｉｎｄｉｃａ）［Ｊ］．Ｐｒｏｔｅｏｍｉｃｓ，２００４，４：２０４７２０５７．
［１９］　邵彩虹，林文雄．水稻生育后期蛋白质组差异表达的图谱分析［Ｊ］．中国农学通报，２００７，２３（９）：１３９１４３．
［２０］　邵彩虹，王经源，林文雄．苗期水稻叶片发育进程的差异蛋白质组学分析［Ｊ］．中国农业科学，２００８，４１（１１）：３８３１３８３７．
［２１］　李兆伟，熊君，齐晓辉，等．水稻灌浆期叶片蛋白质差异表达及其作用机理分析［Ｊ］．作物学报，２００９，３５（１）：１３２１３９．
［２２］　李兆伟，熊君，李振方，等．水稻灌浆期叶鞘蛋白质差异表达分析［Ｊ］．作物学报，２００８，３４（４）：６１９６２６．
［２３］　许珂，曹墨菊，朱英国，等．玉米Ｃ型细胞质雄性不育系Ｃ４８２及其保持系线粒体差异蛋白分析［Ｊ］．作物学报，２００８，
３４（２）：２３２２３７．
［２４］　王晓楠，付连双，李卓夫，等．低温下东农冬麦１号地下茎处差异蛋白的分析［Ｊ］．麦类作物学报，２００９，２９（３）：４８４４９０．
［２５］　徐晓燕，郑蕊，李春梅，等．大豆种子萌发过程中的差异蛋白质组研究［Ｊ］．生物化学与生物物理进展，２００６，３３（１１）：
１１０６１１１２．
［２６］　王经源，陈舒奕，梁义元，等．ＩＳＯＤＡＬＴ双向电泳方法的优化与改进［Ｊ］．福建农林大学学报，２００６，３５（２）：１８７１９０．
［２７］　ＰｅｎｇＸＸ，ＰｅｎｇＳＢ．Ｄｅｇｒａｄａｔｉｏｎｏｆｒｉｂｕｌｏｓｅ１，５ｂｉｓｐｈｏｓｐｈａｔｅｃａｒｂｏｘｙｌａｓｅ／ｏｘｙｇｅｎａｓｅｉｎｎａｔｕｒａｌｙｓｅｎｅｓｃｉｎｇｒｉｃｅｌｅａｖｅｓ［Ｊ］．
ＡｃｔａＰｈｙｔｏｐｈｙｓｉｏｌｏｇｉｃａＳｉｎｉｃａ，２０００，２６（１）：４６５２．
［２８］　翟中和，王喜忠，丁明孝．细胞生物学第三版［Ｍ］．北京：高等教育出版社，２００７：１５１．
［２９］　雷明光，张舒，张冰，等．谷胱甘肽磷脂氢过氧化物酶研究进展［Ｊ］．生物学通报，２００５，４０（５）：１３．
［３０］　杨明挚，陈小兰，尹梅，等．黑子南瓜中ＳＴＫ类抗病基因同源序列的克隆及序列分析［Ｊ］．云南大学学报（自然科学版），
２００５，２７（２）：１７６１７０．
［３１］　陈硕，陈珈．植物中钙依赖蛋白激酶（ＣＤＰＫｓ）的结构与功能［Ｊ］．植物学通报，２００１，１８（２）：１４３１４８．
［３２］　ＣａｍｐｏｓＡＤ，ＦｅｒｒｅｉｒａＡＧ，ＨａｍｐｅＭ ＭＶ，犲狋犪犾．Ｉｎｄｕｃｔｉｏｎｏｆｃｈａｌｃｏｎｅｓｙｎｔｈａｓｅａｎｄｐｈｅｎｙｌａｌａｎｉｎｅａｍｍｏｎｉａｌｙａｓｅｂｙｓａｌｉ
ｃｙｌｉｃａｃｉｄａｎｄ犆狅犾犾犲狋狅狋狉犻犮犺狌犿犾犻狀犱犲犿狌狋犺犻犪狀狌犿ｉｎｃｏｍｍｏｎｂｅａｎ［Ｊ］．ＢｒａｚｉｌｉａｎＪｏｕｒｎａｌｏｆＰｌａｎｔＰｈｙｓｉｏｌｏｇｙ，２００３，１５（３）：１２９
１３４．
５０２第１９卷第６期 草业学报２０１０年
［３３］　卫丽，黄晓书，里鹏坤，等．植物硫氧还蛋白研究进展［Ｊ］．贵州农业科学，２００６，３４（６）：１２９１３１，１２３．
［３４］　陈万利，刘宗旨，李文华．植物富含甘氨酸蛋白质（ＧＲＰ）及其基因研究进展［Ｊ］．东北农业大学学报，２００５，３６（４）：５１２
５１９．
［３５］　张付云，赵小明，白雪芳，等．烟草ＳＫＰ１基因的原核表达［Ｊ］．西北植物学报，２００９，２９（８）：１５４４１５４９．
［３６］　普燕，李琦涵．ＫＲＡＢ锌指蛋白的研究进展［Ｊ］．生命的化学，２００４，２４（４）：１４４１４７．
［３７］　ＶｏｇｅｌＪ，ＨｕｂｓｅｈｍａｎＴ，ＢｏｒｎｅｒＴ，犲狋犪犾．ＳｐｌｉｃｉｎｇａｎｄｉｎｔｒｏｎｉｎｔｅｒｎａｌＲＮＡｅｄｉｔｉｎｇｏｆｔｒｎＫｍａｔＫｔｒａｎｓｃｒｉｐｔｓｉｎｂａｒｌｅｙｐｌａｓ
ｔｉｄｓ：ＳｕｐｐｏｒｔｆｏｒＭａｔＫａｓａｎｅｓｓｅｎｔｉａｌｓｐｌｉｃｅｆａｃｔｏｒ［Ｊ］．ＪｏｕｒｎａｌｏｆＭｏｌｅｃｕｌａｒＢｉｏｌｏｇｙ，１９９７，２７０（２）：１７９１８７．
［３８］　刘卫群，李浩，郭红祥，等．烤烟打顶前后差异表达蛋白分析［Ｊ］．烟草农业科学，２００８，４（１）：３０３５．
［３９］　赵永娟，王傲雪，贾琪，等．番茄衰老相关蛋白ＳＥＮＵ３在大肠杆菌中的表达及其抗体制备［Ｊ］．植物生理学通讯，２００５，
４１（２）：２０８２１０．
［４０］　史娟，邱艳，王红玲，等．黄瓜几丁酶活性与其对枯萎病抗性的关系［Ｊ］．宁夏农学院学报，２００１，２２（４）：４５．
［４１］　史玲玲，王莉，张艳霞，等．红景天甙的生物合成及其关键代谢酶研究［Ｊ］．生命科学，２００８，２０（２）：２８７２９０．
［４２］　ＨｏｎｇＺＬ，ＺｈａｎｇＺＭ，ＯｌｓｏｎＪＭ，犲狋犪犾．ＡｎｏｖｅｌＵＤＰｇｌｕｃｏｓｅｔｒａｎｓｆｅｒａｓｅｉｓｐａｒｔｏｆｔｈｅｃａｌｏｓｅｓｙｎｔｈａｓｅｃｏｍｐｌｅｘａｎｄｉｎｔｅｒ
ａｃｔｓｗｉｔｈｐｈｒａｇｍｏｐｌａｓｔｉｎａｔｔｈｅｆｏｒｍｉｎｇｃｅｌｐｌａｔｅ［Ｊ］．ＰｌａｎｔＣｅｌ，２００１，１３：７６９７８０．
［４３］　ＭａｃｋｅｎｚｉｅＰＩ，ＯｗｅｎｓＩＳ，ＢｕｒｃｈｅｌＢ，犲狋犪犾．ＴｈｅＵＤＰｇｌｙｃｏｓｙｌｔｒａｎｓｆｅｒａｓｅｇｅｎｅｓｕｐｅｒｆａｍｉｌｙ：Ｒｅｃｏｍｍｅｎｄｅｄｎｏｍｅｎｃｌａｔｕｒｅ
ｕｐｄａｔｅｂａｓｅｄｏｎｅｖｏｌｕｔｉｏｎａｒｙｄｉｖｅｒｇｅｎｃｅ［Ｊ］．Ｐｈａｒｍａｃｏｇｅｎｅｔｉｃｓ，１９９７，７（４）：２５５２６９．
［４４］　邓岩，王兴春，杨淑华，等．细胞分裂素：代谢、信号转导、交叉反应与农艺性状改良［Ｊ］．植物学通报，２００６，２３（５）：４７８
４９８．
［４５］　杨晓红，陈晓阳，刘克锋．细胞分裂素对植物衰老的延缓作用［Ｊ］．热带亚热带植物学报，２００６，１４（３）：２５６２６２．
［４６］　王幼宁，刘孟雨，李霞．植物３磷酸甘油醛脱氢酶的多维本质［Ｊ］．西北植物学报，２００５，２５（３）：５７６１．
６０２ ＡＣＴＡＰＲＡＴＡＣＵＬＴＵＲＡＥＳＩＮＩＣＡ（２０１０） Ｖｏｌ．１９，Ｎｏ．６
犃狀犪犾狔狊犻狊狅犳犱犻犳犳犲狉犲狀狋犻犪犾犲狓狆狉犲狊狊犻狅狀狅犳狆狉狅狋犲犻狀狊犻狀狉犲狆犾犪狀狋犻狀犵犱犻狊犲犪狊犲狅犳犘狊犲狌犱狅狊狋犲犾犾犪狉犻犪犺犲狋犲狉狅狆犺狔犾犾犪
ＬＩＮＭａｏｚｉ１，２，ＺＨＡＮＧＺｈｉｘｉｎｇ１，ＬＩＮＺｈｅｎｇｃｈｕｎ１，ＹＯＵＣｈｕｉｈｕａｉ１，
ＺＥＮＧＬｉｎｇｊｉｅ１，ＬＩＮ Ｗｅｎｘｉｏｎｇ１
（１．ＩｎｓｔｉｔｕｔｅｏｆＡｇｒｏｅｃｏｌｏｇｙ，ＦｕｊｉａｎＡｇｒｉｃｕｌｔｕｒｅａｎｄＦｏｒｅｓｔｒｙＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，Ｆｕｚｈｏｕ３５０００２，Ｃｈｉｎａ；
２．ＦｕｑｉｎｇＢｒａｎｃｈｏｆＦｕｊｉａｎＮｏｒｍａｌＵｎｉｖｅｒｉｓｙ，Ｆｕｑｉｎｇ３５０３００，Ｃｈｉｎａ）
犃犫狊狋狉犪犮狋：Ｔｈｅｄｉｆｆｅｒｅｎｔｉａｌｐｒｏｔｅｏｍｉｃｓｍｅｔｈｏｄｗａｓｕｓｅｄｔｏａｎａｌｙｚｅｔｈｅｄｉｆｆｅｒｅｎｔｉａｌｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎｏｆｐｒｏｔｅｉｎｓｉｎ
犘狊犲狌犱狅狊狋犲犾犾犪狉犻犪犺犲狋犲狉狅狆犺狔犾犾犪ｌｅａｖｅｓｔｏｒｅｖｅａｌｔｈｅｍｏｌｅｃｕｌａｒｍｅｃｈａｎｉｓｍｏｆ犘．犺犲狋犲狉狅狆犺狔犾犾犪ｒｅｐｌａｎｔｉｎｇｄｉｓｅａｓｅｉｎ
ａ犘．犺犲狋犲狉狅狆犺狔犾犾犪－犗狉狔狕犪狊犪狋犻狏犪－犘．犺犲狋犲狉狅狆犺狔犾犾犪ｃｒｏｐｒｏｔａｔｉｏｎｏｒｉｎ犘．犺犲狋犲狉狅狆犺狔犾犾犪ｃｏｎｔｉｎｕｏｕｓｃｒｏｐｐｉｎｇ．
Ｔｈｅｒｅｗｅｒｅ２７ｄｉｆｆｅｒｅｎｔｉａｌｐｒｏｔｅｉｎｓｐｏｔｓｉｎｔｈｅ２Ｄｇｅｌａｔｉｎｆｒｏｍｔｈｅ犘．犺犲狋犲狉狅狆犺狔犾犾犪ｌｅａｖｅｓｉｎｂｏｔｈｔｈｅｃｒｏｐ
ｒｏｔａｔｉｏｎａｎｄｔｈｅｃｏｎｔｉｎｕｏｕｓｃｒｏｐｐｉｎｇｓｙｓｔｅｍｓ．Ｂｉｏｉｎｆｏｒｍａｔｉｃｓｓｅａｒｃｈｅｓｓｕｃｃｅｓｓｆｕｌｙｉｄｅｎｔｉｆｉｅｄ２４ｏｆｔｈｅ２７ｐｒｏ
ｔｅｉｎｓｐｏｔｓ．Ｓｅｎｅｓｃｅｎｃｅａｓｓｏｃｉａｔｅｄｓｉｍｉｌａｒｐｒｏｔｅｉｎｓ，ｔｈｅＲａｓｒｅｌａｔｅｄｐｒｏｔｅｉｎ，ｔｈｅｓｅｎｅｓｃｅｎｃｅｒｅｌａｔｅｄｒｅｃｅｐｔｏｒｌｉｋｅ
ｋｉｎａｓｅｓ，ｔｈｅＰＲｐｒｏｔｅｉｎｓａｎｄｔｈｅＲａｓｒｅｌａｔｅｄｐｒｏｔｅｉｎＲＨＮ１ｗｅｒｅａｌｕｐｒｅｇｕｌａｔｅｄ．Ａｌｏｆｔｈｅｓｅｐｒｏｔｅｉｎｓａｒｅ
ｒｅｌａｔｅｄｔｏｐｌａｎｔｓｅｎｅｓｃｅｎｃｅｏｒｄｉｓｅａｓｅ．Ｔｈｅｐｈｏｓｐｈｏｌｉｐｉｄｈｙｄｒｏｐｅｒｏｘｉｄｅｇｌｕｔａｔｈｉｏｎｅｐｅｒｏｘｉｄａｓｅ，ｐｌａｎｔｔｙｐｅｓｅｒ
ｉｎｅｔｈｒｅｏｎｉｎｅｐｒｏｔｅｉｎｋｉｎａｓｅ，ｃａｌｃｉｕｍｄｅｐｅｎｄｅｎｔｐｒｏｔｅｉｎｋｉｎａｓｅ，ｃｈａｌｃｏｎｅｓｙｎｔｈａｓｅ，ａｎｄｔｈｉｏｒｅｄｏｘｉｎｒｅｌａｔｅｄｐｒｏ
ｔｅｉｎｓｗｅｒｅａｌｕｐｒｅｇｕｌａｔｅｄ，ｗｈｉｌｅｔｈｅｃｅｌ ｗａｌｇｌｙｃｉｎｅｒｉｃｈｐｒｏｔｅｉｎ，ｔｈｅｈｏｍｏｌｏｇｕｅｔｏＳＫＰ１，ｔｈｅｚｉｎｃｆｉｎｇｅｒ
ｐｒｏｔｅｉｎ，ａｎｄｔｈｅｍａｔｕｒａｓｅＫｗｅｒｅａｌｄｏｗｎｒｅｇｕｌａｔｅｄ．Ｔｈｅｓｅｐｒｏｔｅｉｎｓａｒｅｒｅｌａｔｅｄｔｏｐｌａｎｔｒｅｓｉｓｔａｎｃｅ．Ｂｏｔｈｔｈｅ
ｒｉｂｕｌｏｓｅ１，５ｂｉｓｐｈｏｓｐｈａｔｅｃａｒｂｏｘｙｌａｓｅ／ｏｘｙｇｅｎａｓｅｌａｒｇｅｓｕｂｕｎｉｔａｎｄｔｈｅｃｙｔｏｃｈｒｏｍｅｂ６ ｗｅｒｅｄｏｗｎｒｅｇｕｌａｔｅｄ，
ａｎｄｔｈｅｒｉｂｕｌｏｓｅｂｉｓｐｈｏｓｐｈａｔｅｃａｒｂｏｘｙｌａｓｅｓｍａｌｃｈａｉｎｃａｎｄｔｈｅｃｙｔｏｃｈｒｏｍｅｂ６／ｆｃｏｍｐｌｅｘｓｕｂｕｎｉｔＶＩｗｅｒｅ
ｕｐｒｅｇｕｌａｔｅｄ．Ｔｈｅｓｅｐｒｏｔｅｉｎｓａｒｅｒｅｌａｔｅｄｔｏｐｈｏｔｏｓｙｎｔｈｅｓｉｓ．ＴｈｅｓｕｃｒｏｓｅＵＤＰｇｌｕｃｏｓｙｌｔｒａｎｓｆｅｒａｓｅａｎｄｔｈｅＮＦ－
ＹＢ５ｗｅｒｅｄｏｗｎｒｅｇｕｌａｔｅｄ，ａｎｄｔｈｅｐｒｏｔｅａｓｏｍｅｓｕｂｕｎｉｔｂｅｔａｔｙｐｅ１，ｔｈｅｓｙｎｔｈａｓｅｂｅｔａｓｕｂｕｎｉｔ，ｔｈｅｃｙｔｏｋｉｎｉｎ
ｈｉｓｔｉｄｉｎｅｐｈｏｓｐｈｏｔｒａｎｓｆｅｒｐｒｏｔｅｉｎ４ａｎｄｔｈｅＮＡＤｄｅｐｅｎｄｅｎｔｇｌｙｃｅｒａｌｄｅｈｙｄｅ３ｐｈｏｓｐｈａｔｅｄｅｈｙｄｒｏｇｅｎａｓｅｗｅｒｅａｌ
ｕｐｒｅｇｕｌａｔｅｄ．Ｔｈｅｓｅｐｒｏｔｅｉｎｓａｒｅｒｅｌａｔｅｄｔｏｐｌａｎｔｍｅｔａｂｏｌｉｓｍｏｆｅｎｅｒｇｙｏｒｃｅｌｄｉｖｉｓｉｏｎ．Ｉｔｓｕｇｇｅｓｔｅｄｔｈａｔｉｎ犘．
犺犲狋犲狉狅狆犺狔犾犾犪ｒｅｐｌａｎｔｉｎｇｄｉｓｅａｓｅ，ｕｐｒｅｇｕｌａｔｅｄｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎｏｆｐｒｏｔｅｉｎｓａｓｓｏｃｉａｔｅｄｗｉｔｈｓｅｎｅｓｃｅｎｃｅｏｒｄｉｓｅａｓｅｒｅ
ｓｕｌｔｓｉｎｄｉｓｔｕｒｂｅｄｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎｓｏｆｐｒｏｔｅｉｎｓｒｅｌａｔｅｄｔｏｐｌａｎｔｒｅｓｉｓｔａｎｃｅｏｒｔｏｅｎｅｒｇｙｍｅｔａｂｏｌｉｓｍｏｒｃｅｌｄｉｖｉｓｉｏｎ．
Ｔｈｅｃｏｎｔｉｎｕｏｕｓｐｌａｎｔｉｎｇｏｆ犘．犺犲狋犲狉狅狆犺狔犾犾犪ｒｅｓｕｌｔｅｄｉｎｄｏｗｎｒｅｇｕｌａｔｅｄｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎｏｆｔｈｅｉｍｐｏｒｔａｎｔｐｈｏｔｏｓｙｎ
ｔｈｅｓｉｓｒｅｌａｔｅｄｐｒｏｔｅｉｎｓ，ｅｘｐｌａｉｎｉｎｇｔｈｅｍｏｌｅｃｕｌａｒｂａｓｉｓｆｏｒｔｈｅｄｅｃｌｉｎｉｎｇｐｈｏｔｏｓｙｎｔｈｅｓｉｓｒａｔｅｉｎｒｅｐｌａｎｔｅｄ犘．犺犲狋
犲狉狅狆犺狔犾犾犪．
犓犲狔狑狅狉犱狊：犘狊犲狌犱狅狊狋犲犾犾犪狉犻犪犺犲狋犲狉狅狆犺狔犾犾犪；ｒｅｐｌａｎｔｉｎｇｄｉｓｅａｓｅ；ｄｉｆｆｅｒｅｎｔｉａｌｐｒｏｔｅｏｍｉｃｓ；ｍｏｌｅｃｕｌａｒｍｅｃｈａｎｉｓｍ
７０２第１９卷第６期 草业学报２０１０年