全 文 ：书早春短命植物绵果荠愈伤组织诱导相关因素研究
曼苏尔·那斯尔，谭敦炎，廖康
（新疆农业大学，新疆 乌鲁木齐８３００５２）
摘要：绵果荠是分布在新疆北部准噶尔荒漠中的十字花科一年生早春短命植物。本研究为探讨绵果荠愈伤组织诱
导条件，以无菌苗子叶为外植体，研究了不同苗龄、培养基种类、蔗糖浓度和培养条件对愈伤组织的诱导及其生长
的影响。结果表明，１）愈伤组织诱导的最佳条件为：苗龄１４ｄ、培养基为 ＭＳ＋１．０ｍｇ／ＬＩＢＡ＋０．１ｍｇ／ＬＢＡＰ、含
糖量３％、温度２５℃和光照为黑暗。２）愈伤组织生长的适宜条件是光照１６ｈ／ｄ和温度２５℃。
关键词：早春短命植物；绵果荠；愈伤组织
中图分类号：Ｑ９４４．６ 文献标识码：Ａ 文章编号：１００４５７５９（２０１２）０２０１１６０７
短命植物是生长在干旱荒漠地带的一类生活周期或年生长期很短的特殊植物类群的总称［１３］，是一类光合效
率高、物质积累快、营养周期短的植物资源，是一类优良的春季牧草、花卉和中药药材［４，５］。绵果荠（犔犪犮犺狀狅犾狅犿犪
犾犲犺犿犪狀狀犻犻）是十字花科绵果荠属，该属为单种属。该物种分布于亚洲中部的干旱、半干旱沙荒地和盐碱地的一年
生早春短命植物，在我国仅分布于新疆北部准噶尔盆地周缘。一般于每年４月上旬开始种子萌发，５月上旬进入
花期，６月上旬进入果实成熟期，生活周期达６０～７０ｄ，植株小，全珠多毛，果皮厚而硬且具绵毛［６］。具有生活周
期短、萌发期早、染色体数少（２狀＝２ｘ＝１４）、较强的抗盐、耐旱及耐高温等特性，是一种潜在的特殊遗传资源，可
作为筛选模式植物的物种。因此，其愈伤组织诱导条件的研究对于细胞水平探讨该物种对准噶尔荒漠环境适应
的机制和演变规律具有重要的理论价值，采用现代生物技术开发特殊遗传资源和种质保存具有十分重要意义。
组织培养是植物生物技术的必要前提和手段。它一方面可为遗传工程提供理想的受体材料，另一方面可为
常规的植物改良程序提供一种新的手段，从而使很多用传统方法难以解决的问题迎刃而解，可更快更好地创造出
各种新品种、新类型，是资源开发利用和种质资源保存的重要手段［７，８］。愈伤组织的诱导是植物离体培养的启动
子，影响愈伤组织诱导及其生长的因素有很多，如植物基因型、外植体、植物生长调节物质、培养基种类、糖浓度、
培养条件等，这些综合因素存在于每一个培养步骤，每一个单因子都可能导致培养的失败［９１４］。到目前为止还没
有关于绵果荠组培的报道，本实验在前期实验基础上，以绵果荠无菌苗子叶为外植体，开展了培养条件、蔗糖浓
度、培养基种类和无菌苗的苗龄对愈伤组织的诱导及其生长的影响研究，为绵果荠植株再生体系的建立提供技术
基础。
１ 材料与方法
１．１ 实验材料
种子采集地：２００８年６月，在新疆阜康彩南的自然种群（４４°２２′２４．７″Ｎ，８８°０８′３０．１″Ｅ，海拔４５９ｍ）采集成
熟的绵果荠果实，在室温下贮藏备用。
采集地基本概况：阜康彩南位于新疆准噶尔盆地东部沙漠覆盖区，进入古尔班通古特沙漠腹地，受西风带及
北冰洋水汽的影响，是内陆冷荒漠，为典型的温带荒漠气候。年平均气温是６．４℃，最高温是４０．９℃，最低温是
－４０．３℃，年降水量是１３４．３ｍｍ，年潜在蒸发量为１９６５ｍｍ，无霜期为１７５ｄ［１５］。
无菌苗的获得：先用流水冲洗种子１～２ｍｉｎ后，在无菌条件下用无菌水清洗４次，然后再用７０％酒精浸泡１
ｍｉｎ和０．１％ ＨｇＣｌ２ 消毒１．５ｍｉｎ，最后用无菌水清洗４次，接种于不添加任何生长调节剂的 ＭＳ基本培养基上，
１１６－１２２
２０１２年４月
草 业 学 报
ＡＣＴＡＰＲＡＴＡＣＵＬＴＵＲＡＥＳＩＮＩＣＡ
第２１卷 第２期
Ｖｏｌ．２１，Ｎｏ．２
收稿日期：２０１１０１１３；改回日期：２０１１０４１９
基金项目：新疆维吾尔自治区高技术研究与发展计划项目（２００８１０１０２）资助。
作者简介：曼苏尔·那斯尔（１９８３），男，维吾尔族，新疆阿克苏人，在读硕士。Ｅｍａｉｌ：ｍａｎｓｕｒ８１３＠１６３．ｃｏｍ
通讯作者。Ｅｍａｉｌ：ｌｉａｏｋａｎｇ０１＠１６３．ｃｏｍ
温度为１５℃白天／５℃晚上、光照为１６ｈ／ｄ、湿度为７０％～８０％的培养箱中培养４～５ｄ，种子萌发后再转移到温度
为（２５±１）℃的培养室内培养。
１．２ 方法
１．２．１ 愈伤组织诱导苗龄的筛选 将不同苗龄（６，８，１０，１２，１４，１６，１８，２０及２２ｄ）的无菌苗子叶分别切成０．５
ｃｍ×０．３ｃｍ小块，接种在附加１．０ｍｇ／ＬＩＢＡ（吲哚丁酸）＋０．１ｍｇ／ＬＢＡＰ（６苄基腺嘌呤）的 ＭＳ培养基上，培
养２５ｄ。培养基中含有３％蔗糖和０．６％琼脂粉，ｐＨ值为６．０，在灭菌器中，１．２×１０４ｋｇ／ｍ２ 下灭菌２０ｍｉｎ［１０］。
培养条件为：温度为（２３±１）℃、湿度为７０％～８０％的黑暗条件下培养［１６１８］（培养条件下同）。２５ｄ后分别统计愈
伤组织诱导率，并进行质量分析。实验中同一处理为５瓶，每瓶１０块，全部实验重复做３次（下同）。
１．２．２ 愈伤组织诱导培养基的筛选 将无菌苗的子叶分别切成０．５ｃｍ×０．３ｃｍ小块，并分别接种于附加１．０
ｍｇ／ＬＩＢＡ＋０．１ｍｇ／ＬＢＡＰ＋３％蔗糖＋０．６％琼脂粉的Ｂ５［１９］、Ｈ［２０］、ＭＳ［２１］、Ｎ６［２２］和 Ｗｈｉｔｅ［２３］５种固体培养基
上，培养２５ｄ后分别统计愈伤诱导率，并进行质量分析。
１．２．３ 蔗糖浓度对愈伤组织诱导的影响 将无菌苗的子叶分别切成０．５ｃｍ×０．３ｃｍ小块，并分别接种到附加
２％，３％，４％，５％和６％蔗糖的１．０ｍｇ／ＬＩＢＡ＋０．１ｍｇ／ＬＢＡＰ的 ＭＳ培养基上。培养２５ｄ后统计愈伤组织诱
导率和分析质量。
１．２．４ 温度对愈伤组织诱导的影响 将无菌苗的子叶分别切成０．５ｃｍ×０．３ｃｍ小块，接种到１．０ｍｇ／ＬＩＢＡ＋
０．１ｍｇ／ＬＢＡＰ的 ＭＳ培养基，并分别置于１５，２０，２５和３０℃的光照培养箱内，培养２５ｄ后统计愈伤组织诱导率
和分析质量。
１．２．５ 光照对愈伤组织诱导的影响 将无菌苗的子叶分别切成０．５ｃｍ×０．３ｃｍ小块，接种到附加１．０ｍｇ／Ｌ
ＩＢＡ＋０．１ｍｇ／ＬＢＡＰ的 ＭＳ培养基，并分别置于全黑暗和周期性光照的培养箱内，培养２５ｄ后统计愈伤组织诱
导率和分析质量。
１．２．６ 温度对愈伤组织生长的影响 将愈伤组织块切成０．５ｃｍ×０．５ｃｍ小块，接种到附加１．０ｍｇ／ＬＩＢＡ＋
０．１ｍｇ／ＬＢＡＰ的 ＭＳ培养基，并分别置于１５，２０，２５和３０℃的光照培养箱内进行培养。每隔５ｄ测定１次愈伤
组织的鲜重，并观察其生长状况，直至第２５天后进行统计比较。
１．２．７ 光照对愈伤组织生长的影响 将愈伤组织块切成０．５ｃｍ×０．５ｃｍ小块，接种到附加１．０ｍｇ／ＬＩＢＡ＋
０．１ｍｇ／ＬＢＡＰ的ＭＳ培养基，并分别置于全黑暗和周期性光照的培养箱内进行培养。每隔５ｄ测定１次愈伤组
织的鲜重，并观察其生长状况，直至第２５天后进行统计比较。
１．３ 数据分析
数据采用ＳＰＳＳ１６．０软件进行分析和绘图。图表
图１ 绵果荠无菌苗的苗龄对其子叶出愈率的影响
犉犻犵．１ 犈犳犳犲犮狋狅犳狊犲犲犱犾犻狀犵犪犵犲狅狀狋犺犲犻狉犮狅狋狔犾犲犱狅狀
犮犪犾狌狊犻狀犱狌犮狋犻狅狀狅犳犔．犾犲犺犿犪狀狀犻
中的数值均为平均值±标准误，同列内不同的小写字
母表示在犘＜０．０５水平下差异显著，不同的大写字母
表示犘＜０．０１差异极显著。
２ 结果与分析
２．１ 苗龄对愈伤组织诱导的影响
无菌苗培养１１～１３ｄ后真叶开始出现，随着真叶
的出现子叶开始逐渐变黄。不同苗龄的无菌苗子叶出
愈率有极显著的差异（犘＜０．０１）（图１）。随着苗龄的
增大子叶出愈率呈先上升后下降趋势。苗龄以１２～
１４ｄ为宜，苗龄１４ｄ的出愈率最高（１００．０％），愈伤组
织的质地松脆、绿色、产生量大、产愈时间早（６～９ｄ）；
其次为苗龄１２ｄ，其愈伤组织诱导率为（９０．０±
３．２）％。而苗龄１０ｄ以下和１６ｄ以上的出愈率均低，
苗龄２２ｄ后的出愈率均为０％。
７１１第２１卷第２期 草业学报２０１２年
２．２ 培养基对愈伤组织诱导的影响
在添加ＩＢＡ１．０ｍｇ／Ｌ＋ＢＡＰ０．１ｍｇ／Ｌ的条件下，５种培养基对子叶愈伤组织的诱导效应各不相同，存在极
显著差异（犘＜０．０１）（表１）。其中，ＭＳ培养基的诱导效率最高（１００．０％），质量最好（产量高、松脆、绿色），出愈
时间早（６～９ｄ），其次是Ｂ５和Ｎ６，而 Ｗｈｉｔｅ诱导率最低，质量最差，出愈时间晚。
表１ 培养基种类对绵果荠愈伤组织诱导的影响
犜犪犫犾犲１ 犈犳犳犲犮狋狅犳犱犻犳犳犲狉犲狀狋犮狌犾狋狌狉犲犿犲犱犻犪狅狀犮犪犾狌狊犻狀犱狌犮狋犻狅狀狅犳犔．犾犲犺犿犪狀狀犻
培养基
Ｍｅｄｉａ
愈伤起始时间
Ｄａｙｓｔｏｃａｌｕｓｉｎｉｔｉａｔｉｏｎ（ｄ）
出愈率
Ｐｅｒｃｅｎｔａｇｅｏｆｃａｌｕｓｉｎｇ（％）
生长势
Ｄｅｇｒｅｅｏｆｃａｌｕｓｉｎｇ
颜色
Ｃｏｌｏｕｒ
质地
Ｔｅｘｔｕｒｅ
Ｂ５ ６～９ ９８．０±２．０Ａａ !! 绿色 Ｇｒｅｅｎ 松脆Ｆｒｉａｂｌｅ
Ｈ １２～１６ ７６．０±５．１ＢＣｂ !! 黄绿色 Ｙｅｌｏｗｉｓｈｇｒｅｅｎ 松脆Ｆｒｉａｂｌｅ
ＭＳ ６～９ １００．０±０．０Ａａ !!! 绿色 Ｇｒｅｅｎ 松脆Ｆｒｉａｂｌｅ
Ｎ６ １０～１４ ９２．０±３．７ＡＢａ !! 绿色 Ｇｒｅｅｎ 松脆Ｆｒｉａｂｌｅ
Ｗｈｉｔｅ １２～２５ ６２．０±８．６Ｃｂ ! 奶油色Ｃｒｅａｍｙ 软Ｓｐｏｎｇｙ
＋：少量愈伤、＋＋：中等愈伤、＋＋＋：大量愈伤，下同。
＋：Ｓｌｉｇｈｔｃａｌｕｓ，＋＋：Ｍｏｄｅｒａｔｅｃａｌｕｓ，＋＋＋：Ｍａｓｓｉｖｅｃａｌｕｓ，ｔｈｅｓａｍｅｂｅｌｏｗ．
２．３ 蔗糖浓度对愈伤组织诱导的影响
培养基中附加蔗糖２％～６％都可诱导愈伤组织，但不同浓度处理之间存在极显著差异（犘＜０．０１）（表２）。
愈伤组织诱导率随着蔗糖浓度的升高而下降，愈伤出现时间推迟，持续时间延长，质地变得柔软。培养基含浓度
２％～４％的蔗糖时诱导率显著高于５％和６％的蔗糖量。最佳含糖量为３％，且蔗糖含量以不超过４％为宜，超过
４％时诱导率急剧下降。
表２ 蔗糖浓度对绵果荠愈伤组织诱导的影响
犜犪犫犾犲２ 犈犳犳犲犮狋狅犳犮狅狀犮犲狀狋狉犪狋犻狅狀狅犳狊狌犮狉狅狊犲狅狀狋犺犲犮犪犾狌狊犻狀犱狌犮狋犻狅狀狅犳犔．犾犲犺犿犪狀狀犻
蔗糖浓度
Ｓｕｃｒｏｓｅｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎ（％）
愈伤起始时间
Ｄａｙｓｔｏｃａｌｕｓｉｎｉｔｉａｔｉｏｎ（ｄ）
出愈率
Ｐｅｒｃｅｎｔａｇｅｏｆｃａｌｕｓｉｎｇ（％）
生长势
Ｄｅｇｒｅｅｏｆｃａｌｕｓｉｎｇ
颜色
Ｃｏｌｏｕｒ
质地
Ｔｅｘｔｕｒｅ
２ ６～９ １００．０±０．０Ａａ !! 绿色 Ｇｒｅｅｎ 坚硬Ｃｏｍｐａｃｔ
３ ６～９ １００．０±０．０Ａａ !!! 绿色 Ｇｒｅｅｎ 松脆Ｆｒｉａｂｌｅ
４ ８～１６ ９４．０±４．０Ａａ !! 绿黄色 Ｇｒｅｅｎｉｓｈｙｅｌｏｗ 松脆Ｆｒｉａｂｌｅ
５ １０～１７ ６２．０±３．７Ｂｂ ! 褐色Ｂｒｏｗｎ 软Ｓｐｏｎｇｙ
６ １３～２５ ２４．０±６．８Ｃｃ ! 褐色Ｂｒｏｗｎ 软Ｓｐｏｎｇｙ
２．４ 温度对愈伤组织诱导的影响
子叶愈伤组织的诱导率随温度梯度的升高呈先升高后下降趋势，不同处理之间存在极显著差异（犘＜０．０１）
（图２）。在２５℃条件下出愈率达到了１００．０％，愈伤组织的起始时间较早（６～９ｄ）、质量好（产量高、绿色、易碎）；
其次为２０℃，愈伤组织的起始时间为９～１５ｄ、出愈率为（８８．０±３．７）％；在３０℃的条件下产生愈伤量少，且从６ｄ
起愈伤组织和外植体开始出现褐变死亡的现象。
２．５ 光照度对愈伤组织诱导的影响
子叶愈伤组织诱导起始时间在黑暗或光照条件下均为６～９ｄ，愈伤组织的质量也没有明显的差异（图３），但
黑暗条件下的子叶出愈率达到１００．０％，而光照条件下为（８８．０±４．１）％，两者之间差异极显著（犘＜０．０１）。
２．６ 温度对愈伤组织生长的影响
愈伤组织的生长对不同温度的响应有极显著的差异（犘＜０．０１）。愈伤组织在２５℃的条件下生长最快，生物
８１１ ＡＣＴＡＰＲＡＴＡＣＵＬＴＵＲＡＥＳＩＮＩＣＡ（２０１２） Ｖｏｌ．２１，Ｎｏ．２
量积累最多，２５ｄ的鲜重为（１．００±０．０３）ｇ，在１０ｄ时进入对数生长期（图４）；其次为２０℃，２５ｄ的鲜重为（０．９５
±０．０４）ｇ；而１５℃最慢。同时观察发现，在３０℃培养条件下，刚开始的阶段生长较快，但从１０ｄ起愈伤组织开始
出现褐变死亡的现象。
２．７ 光照对愈伤组织生长的影响
光照对愈伤组织生物量积累没有明显的影响（图５），黑暗或光照条件下愈伤组织生长呈“Ｓ”曲线，在１０ｄ时
进入对数生长期，２５ｄ后黑暗和光照条件下的愈伤组织鲜重分别为（０．９９±０．０３）ｇ和（０．９７±０．０３）ｇ，之间没有
显著差异；但它们产生的愈伤组织的质量有些差异，即黑暗条件下生长的愈伤组织的手感很松散、颜色为浅绿色
或绿色及基本上没有胚性愈伤；而在光照条件下的手感较硬而易碎、颜色为深绿或绿色及产生大量的胚性愈伤，
适合分化使用。
图２ 温度对绵果荠愈伤组织诱导的影响
犉犻犵．２ 犈犳犳犲犮狋狅犳狋犲犿狆犲狉犪狋狌狉犲狅狀犮犪犾狌狊犻狀犱狌犮狋犻狅狀狅犳犔．犾犲犺犿犪狀狀犻
图３ 光照对绵果荠愈伤组织诱导的影响
犉犻犵．３ 犈犳犳犲犮狋狅犳犾犻犵犺狋狅狀犮犪犾狌狊犻狀犱狌犮狋犻狅狀狅犳犔．犾犲犺犿犪狀狀犻
图４ 温度对绵果荠愈伤组织生长的影响
犉犻犵．４ 犈犳犳犲犮狋狅犳狋犲犿狆犲狉犪狋狌狉犲狅狀犮犪犾狌狊犵狉狅狑狋犺狅犳犔．犾犲犺犿犪狀狀犻
图５ 光照对绵果荠愈伤组织生长的影响
犉犻犵．５ 犈犳犳犲犮狋狅犳犾犻犵犺狋狅狀犮犪犾狌狊犵狉狅狑狋犺狅犳犔．犾犲犺犿犪狀狀犻
３ 讨论
周俊等［２４］对非洲菊（犌犲狉犫犲狉犪犼犪犿犲狊狅狀犻犻）４种外植体进行了愈伤组织诱导实验，结果表明，叶片已伸展的幼叶
叶柄，愈伤组织诱导能力最强，舒展，深绿的老叶最弱。本实验结果发现，随着无菌苗苗龄的延长子叶出愈率呈先
升高后下降的趋势，苗龄１４ｄ的出愈率最高（１００．０％），而苗龄２２ｄ的为０％，说明绵果荠子叶愈伤组织诱导还
受幼苗年龄性变化的内源激素的影响。
在离体培养条件下，不同种植物的组织对营养有不同的要求，只有满足了它们各自的特殊要求，它们的生长
９１１第２１卷第２期 草业学报２０１２年
才能尽如人意［２５］。本实验中，以绵果荠无菌苗子叶为外植体，研究 ＭＳ、Ｂ５、Ｎ６、Ｈ和 Ｗｈｉｔｅ等５种固体培养基对
其愈伤组织诱导率的影响，结果发现，高盐的 ＭＳ培养基子叶愈伤组织诱导率最高且诱导出愈伤组织质量好，其
次为高硝酸钾的Ｂ５，而中等无机盐含量的Ｈ培养基和低无机盐含量的 Ｗｈｉｔｅ的子叶出愈率及其质量最差，这个
结论在细胞水平再次证明绵果荠是一类耐盐性植物。这个结果与Ｓｕｍｍａｒｔ等［１２］的研究结果一致。
糖是碳源，提供营造新细胞、新的化合物的碳骨架，也为组织呼吸代谢提供底物及能源，还能维持培养物所需
渗透压，是培养物渗透压环境的主要调节者。因此，培养基含有的糖源浓度直接影响培养效果［２６，２７］。本实验结
果发现，培养基含蔗糖２％和３％时的诱导率均为１００％，但产生的愈伤组织质量蔗糖３％的明显优于蔗糖２％；蔗
糖含量超过４％时愈伤组织诱导率随着蔗糖浓度的升高而急剧下降，愈伤起始时间推迟，持续时间延长，质地变
得柔软。因此，蔗糖浓度过高，培养基的渗透压升高，致使培养物含水量减少，渗透压降低，培养的组织对离子的
吸收受到阻碍。反而含量过低，因培养基含有的能源和碳源不够，从而引起培养效果不佳。这个结果与前
人［２８，２９］的有关研究结果基本上一致。
温度、光照和湿度是构成植物离体培养环境的三大因素，对组织培养有调控作用。在植物组织培养中，一般
采取最适温度，并保持恒温培养，通常采用（２５±２）℃的温度，对大多数植物是合适的，低于１５℃培养的组织生长
停滞，而高于３５℃对生长不利［３０］，但也因植物的种类不同，要求温度不同，差异较大。如烟草愈伤芽的形成以
１０℃为最好［３１］，而台湾青枣（犣犻狕犻狆犺狌狊犿犪狌狉犻狋犻犪狀犪）愈伤组织生长的最适温度为３１℃［３２］。本实验结果发现，绵果
荠的愈伤组织诱导及其生长在２５℃下最好，而较高（３０℃）和较低（１５℃）的温度下均较差。
由于植物材料是培养在含糖的培养基上，因此光照作用主要是在形态建成的诱导方面，它涉及到植物细胞分
化的若干重要过程［３０］。Ｋｉｏｎｇ等［１８］的研究结果发现，黑暗条件下的愈伤组织诱导比光照好；但唐建军等［３３］对杜
仲（犈狌犮狅犿犿犻犪狌犾犿狅犻犱犲狊）研究表明，在持续黑暗的条件下，以茎段、叶片为外植体，均不能获得愈伤组织，而周期
性光照下则可以获得愈伤组织。本实验结果发现，绵果荠愈伤组织的诱导在黑暗条件下比光照好，而它的生长在
光照比黑暗好，即光照条件下能产生胚性愈伤组织，说明绵果荠愈伤组织的生长需要一定强度的光照。从这个结
果可知，不同基因型植物的离体培养对光照的响应有明显差异。
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１２１第２１卷第２期 草业学报２０１２年
犜犺犲狉犲犾犲狏犪狀狋犳犪犮狋狅狉狊狅犳犮犪犾狌狊犻狀犱狌犮狋犻狅狀狅犳犲犪狉犾狔狊狆狉犻狀犵犲狆犺犲犿犲狉犪犾犔犪犮犺狀狅犾狅犿犪犾犲犺犿犪狀狀犻 （犅狉犪狊狊犻犮犪犮犲犪犲）
ＭＡＮＳＵＲＮａｓｉｒ，ＴＡＮＤｕｎｙａｎ，ＬＩＡＯＫａｎｇ
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犃犫狊狋狉犪犮狋：犔犪犮犺狀狅犾狅犿犪犾犲犺犿犪狀狀犻犻ｉｓａｎａｎｎｕａｌｅａｒｌｙｓｐｒｉｎｇｅｐｈｅｍｅｒａｌＢｒａｓｓｉｃａｃｅａｅｓｐｅｃｉｅｓｉｎｔｈｅＪｕｎｇｇａｒＤｅｓｅｒｔ
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犾犲犺犿犪狀狀犻犻．Ｕｓｉｎｇｔｈｅａｓｐｅｃｔｓｅｅｄｌｉｎｇｃｏｔｙｌｅｄｏｎａｓｅｘｐｌａｎｔｓ，ｔｈｅｅｆｆｅｃｔｏｆｓｅｅｄｌｉｎｇａｇｅ，ｍｅｄｉａ，ｓｕｃｒｏｓｅｃｏｎｃｅｎ
ｔｒａｔｉｏｎａｎｄｔｈｅｃｕｌｔｕｒｅｃｏｎｄｉｔｉｏｎｏｎｃａｌｕｓｉｎｄｕｃｔｉｏｎａｎｄｔｈｅｉｒｇｒｏｗｔｈｗａｓｉｎｖｅｓｔｉｇａｔｅｄ．Ｔｈｅｍｏｓｔｓｕｉｔａｂｌｅｃｏｎ
ｄｉｔｉｏｎｆｏｒｃａｌｕｓｉｎｄｕｃｔｉｏｎｗａｓｓｅｅｄｌｉｎｇｓｏｆｏｐｔｉｍａｌａｇｅ（１４ｄａｙｓ）ｏｎａｎＭＳｃｕｌｔｕｒｅｍｅｄｉｕｍｃｏｎｔａｉｎｉｎｇ１．０
ｍｇ／ＬＩＢＡ＋０．１ｍｇ／ＬＢＡＰ，ｗｉｔｈａｓｕｉｔａｂｌｅｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎｏｆｓｕｃｒｏｓｅ（３％），ａｔａｔｅｍｐｅｒａｔｕｒｅｏｆ２５℃ｉｎｔｈｅ
ｄａｒｋ．Ｔｈｅｂｅｓｔｃｏｎｄｉｔｉｏｎｆｏｒｃａｌｕｓｇｒｏｗｔｈｗａｓａｔｅｍｐｅｒａｔｕｒｅｏｆ２５℃ｉｎｔｈｅｌｉｇｈｔｗｉｔｈａｐｈｏｔｏｐｅｒｉｏｄｏｆ１６
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犓犲狔狑狅狉犱狊：ｅａｒｌｙｓｐｒｉｎｇｅｐｈｅｍｅｒａｌ；犔犪犮犺狀狅犾狅犿犪犾犲犺犿犪狀狀犻犻；ｃａｌｕｓ
２２１ ＡＣＴＡＰＲＡＴＡＣＵＬＴＵＲＡＥＳＩＮＩＣＡ（２０１２） Ｖｏｌ．２１，Ｎｏ．２