全 文 ：书鸭茅杂交种的犛犛犚分子标记鉴定
及其遗传变异分析
谢文刚，张新全，陈永霞
（四川农业大学草业科学系，四川 雅安６２５０１４）
摘要：以１４０个鸭茅杂交种单株及其亲本（０１９９６、ＹＡ０２１０３）为材料，用ＳＳＲ分子标记技术研究杂种与其亲本间扩
增谱带的多态性，以甄别真假杂种。ＳＳＲ标记在供试材料中的扩增带型表现为互补型、父本型及其他型。利用３
对特异引物Ａ０１Ｇ２０、Ａ０３Ｎ１６、Ａ０３Ｋ２２可快速准确地鉴定出杂交种１１１份。试验所用的１００对ＳＳＲ引物中有１３
对引物分别在杂种和双亲之间存在扩增多态性。１３对引物在供试材料中共扩增出多态性条带７６条，平均每对引
物扩增出６条，多态性百分率为８４．２４％。供试材料具有丰富的遗传变异，利用ＳＳＲ进行鸭茅杂种鉴定及遗传变
异分析是可行的。
关键词：鸭茅；ＳＳＲ标记；杂种鉴定；遗传变异分析
中图分类号：Ｓ５４３＋．３０３．５；Ｑ９４３．１　　文献标识码：Ａ　　文章编号：１００４５７５９（２０１０）０２０２１２０６
　 鸭茅（犇犪犮狋狔犾犻狊犵犾狅犿犲狉犪狋犪）是世界著名的温带多年生禾本科牧草之一，具有耐荫、叶量丰富、营养价值高、适
应性强等特点，近年来在我国的四川、重庆、贵州、山西、甘肃等地被大量应用于草地畜牧业及生态环境治理，取得
了良好的经济和生态效益。
遗传多样性的研究对于了解物种的起源、遗传分化及资源的合理利用与开发具有重要意义。分子标记技术
因其简单、快捷、受环境影响小和可重复性强等优点，已被广泛应用在牧草遗传研究中［１３］。目前，国内外已采用
ＡＦＬＰ（ａｍｐｌｉｆｉｃａｔｉｏｎｆｒａｇｍｅｎｔｌｅｎｇｔｈｐｏｌｙｍｏｒｐｈｉｓｍ，扩增片段长度多态性）、ＲＡＰＤ （ｒａｎｄｏｍａｍｐｌｉｆｉｅｄｐｏｌｙ
ｍｏｒｐｈｉｃＤＮＡ，随机扩增多态性ＤＮＡ）、ＩＳＳＲ（ｉｎｔｅｒｓｉｍｐｌｅｓｅｑｕｅｎｃｅｒｅｐｅａｔ，简单重复序列间多态性）、ＳＲＡＰ（ｓｅ
ｑｕｅｎｃｅｒｅｌａｔｅｄａｍｐｌｉｆｉｅｄｐｏｌｙｍｏｒｐｈｉｓｍ，相关序列扩增多态性）等分子标记对鸭茅种质进行了遗传多样性研究，
结果显示鸭茅资源存在着丰富的遗传变异，蕴藏着优异的基因资源，开发潜力大［４７］。杂交育种是植物遗传改良
中常用的技术策略，利用性状差异明显的亲本进行杂交育种是选育高产，优良品种的重要途径。国外通过杂交育
种已培育出了多个优良品种，如新西兰培育的 ＧｒａｓｓｌａｎｄＫａｒａ就是利用普通鸭茅亚种犇．犵犾狅犿犲狉犪狋犪ｓｕｂｓｐ．
ｇｌｏｍｅｒａｔａ与犇．犵犾狅犿犲狉犪狋犪ｓｕｂｓｐ．ｌｕｓｉｔａｎｉｃａ杂交培育的［８］。而国内鸭茅杂交育种的研究报道较少，云南钟声［９］
对鸭茅不同倍性杂交及后代发育特性进行了初步研究。鸭茅是异花授粉植物［１０］，在杂交过程中由于隔离不严等
原因，不同来源花粉造成种子生物性混杂时有发生，因此对杂交种的真实性鉴定十分必要。植物杂种的鉴定方法
主要有植株形态、细胞学和同工酶及分子标记等，ＲＡＰＤ、ＳＲＡＰ、ＡＦＬＰ等分子标记在植物杂交育种的后代鉴定
中得到广泛应用［１１１３］。然而这些分子标记都有其不足，如ＲＡＰＤ标记重复性差、ＡＦＬＰ标记操作程序复杂，对
ＤＮＡ纯度要求严格等。ＳＳＲ（ｓｉｍｐｌｅｓｅｑｕｅｎｃｅｒｅｐｅａｔ，简单重复序列）标记因具有数量丰富、多态性高、共显性、扩
增稳定、引物序列易于交流等优点，已在水稻（犗狉狔狕犪狊犪狋犻狏犪）、玉米（犣犲犪犿犪狔狊）、棉花（犌狅狊狊狔狆犻狌犿犺犲狉犫犪犮犲狌犿）、甜
瓜（犆狌犮狌犿犻狊犿犲犾狅）、西瓜（犆犻狋狉狌犾犾狌狊犾犪狀犪狋狌狊）等作物的杂种鉴定中应用［１４１８］。而在草业上ＳＳＲ分子标记应用不
多，仅见于披碱草（犈犾狔犿狌狊犱犪犺狌狉犻犮狌狊）、柱花草（犛狋狔犾犻犱犻狌犿ｓｐｐ．）、紫花苜蓿（犕犲犱犻犮犪犵狅狊犪狋犻狏犪）、结缕草（犣狅狆狊犻犪
犼犪狆狅狀犻犮犪）等少数草种［１９２２］。
试验对株高这一性状上存在明显差异的２份亲本材料０１９９６和ＹＡ０２１０３进行杂交，得到的杂交种材料利
用ＳＳＲ分子标记技术进行鉴定和遗传变异分析。以期筛选出适合鸭茅杂种鉴定的ＳＳＲ引物，为鸭茅杂种的快
２１２－２１７
２０１０年４月
　　　草　业　学　报　　　
　　　ＡＣＴＡＰＲＡＴＡＣＵＬＴＵＲＡＥＳＩＮＩＣＡ　　　
第１９卷　第２期
Ｖｏｌ．１９，Ｎｏ．２
 收稿日期：２００９０４２１；改回日期：２００９０５３１
基金项目：国家“９７３”基础研究项目（２００７ＣＢ１０８９０７）和国家自然基金项目（３０８７１８２０）资助。
作者简介：谢文刚（１９８２），男，四川资中人，在读博士。Ｅｍａｉｌ：ｘｗｇｏｒｃｈａｒｄｇｒａｓｓ＠ｈｏｔｍａｉｌ．ｃｏｍ
通讯作者。Ｅｍａｉｌ：ｚｈａｎｇｘｑ＠ｓｉｃａｕ．ｅｄｕ．ｃｎ
速鉴定提供依据。
１　材料与方法
１．１　试验材料
供试材料为鸭茅亲本０１９９６和ＹＡ０２１０３及其１４０个鸭茅杂种材料（表１）。所用鸭茅ＳＳＲ引物序列由日本
草地畜产种子协会饲料作物研究所才宏伟教授提供，由上海生工生物技术有限公司合成。ＰＣＲ所用的 Ｍｇ２＋、
Ｔａｑ酶、ｄＮＴＰ、Ｂｕｆｆｅｒ均购自博瑞克生物技术公司。
表１　亲本名称及其来源
犜犪犫犾犲１　犖犪犿犲狊犪狀犱狊狅狌狉犮犲狅犳狆犪狉犲狀狋狊
亲本Ｐａｒｅｎｔｓ 材料来源 Ｍａｔｅｒｉａｌｓｒｅｓｏｕｒｃｅ 特征 Ｔｒａｉｔｓ
０１９９６♂ 中国农业科学院畜牧研究所ＡｎｉｍａｌＨｕｓｂａｎｄｒｙＲｅｓｅａｒｃｈ
ＩｎｓｔｉｔｕｔｅｏｆＣｈｉｎｅｓｅＡｃａｄｅｍｙｏｆＡｇｒｉｃｕｌｔｕｒａｌＳｃｉｅｎｃｅｓ
４月初抽穗，株高９０ｃｍＨｅａｄｉｎｇｉｎｅａｒｌｙＡｐｒｉｌ，ｐｌａｎｔｈｅｉｇｈｔ９０ｃｍ
ＹＡ０２１０３♀ 贵州纳雍 Ｎａｙｏｎｇ，Ｇｕｉｚｈｏｕ ４月下旬抽穗，株高５５ｃｍＨｅａｄｉｎｇｉｎｌａｔｅＡｐｒｉｌ，ｐｌａｎｔｈｅｉｇｈｔ５５ｃｍ
１．２　杂交
鸭茅为异花传粉植物，花序密集，小花细小，人工去雄困难。本研究所选亲本在形态及发育方面存在明显差
异，故采用自然杂交，即将２份材料相间种植，并与其他鸭茅材料严格隔离，收获ＹＡ０２１０３植株中所获得的种
子，选取种子在温室发芽，２周后随机选取１４０个单株进行ＳＳＲ鉴定。
１．３　鸭茅ＤＮＡ的提取
取生长良好的鸭茅杂种及亲本材料幼嫩叶片采用ＣＴＡＢ（ｃｅｔｙｌｔｒｉｍｅｔｈｙｌａｍｍｏｎｉｕｍｂｒｏｍｉｄｅ，十六烷基三甲
基溴化铵）方法提取ＤＮＡ［２３］。用０．８％琼脂糖凝胶电泳和紫外分光光度计分别检测ＤＮＡ的浓度和纯度，合格
的ＤＮＡ样品于４℃冰箱中保存备用。
１．４　ＳＳＲ反应体系的建立与优化
利用正交设计Ｌ１６（４４），对 Ｍｇ２＋浓度、ｄＮＴＰ、引物浓度、Ｔａｑ酶浓度进行４因素４水平的正交试验。并在
ＴｈｅｒｍｏＨｙｂａｉｄＰＣＲ仪上进行引物最佳退火温度的筛选。最终获得适合于鸭茅ＳＳＲ分析的优化反应体系，反
应液总体积１５μＬ：模板ＤＮＡ１０ｎｇ／μＬ，ｄＮＴＰ２４０μｍｏｌ／Ｌ，引物浓度０．４μｍｏｌ／Ｌ，Ｔａｑ酶１．０Ｕ，Ｍｇ
２＋ ２．５
ｍｍｏｌ／Ｌ。
１．５　ＳＳＲ分子标记的ＰＣＲ扩增及电泳检测
ＰＣＲ反应程序为：９４℃预变性４ｍｉｎ，９４℃变性３０ｓ，４８～５２℃变性３０ｓ，７２℃延伸１ｍｉｎ，共３５个循环，７２℃
１０ｍｉｎ，４℃保存。扩增产物用６％聚丙烯酰胺凝胶（丙烯酰胺∶甲叉＝１９∶１，７．５ｍｏｌ／Ｌ尿素，１×ＴＢＥ缓冲
液）进行检测。样品点样１０μＬ，以博瑞克公司的Ｄ１５００Ｍａｒｋｅｒ为对照，２００Ｖ电压下预电泳３０ｍｉｎ，然后在４００
Ｖ电压下电泳２ｈ，胶版用０．１％的ＡｇＮＯ３ 进行银染色并在ＮａＯＨ液中显色，凝胶用数码相机照相保存。
１．６　ＳＳＲ引物的筛选
随机选择的２个杂种及其双亲共４份材料的ＤＮＡ对１００对引物进行ＳＳＲ多态性筛选，将扩增条带清晰、带
型稳定、后代表现出双亲互补带型的引物，用于杂种鉴定。选择在双亲和杂交后代具有多态性的引物，用于杂种
的遗传变异分析。
２　结果与分析
２．１　鸭茅杂交种及其亲本的ＳＳＲ多态性分析
从１００对ＳＳＲ引物中，筛选出１３对带型稳定并在杂种及其亲本间具有多态性的引物，分别为 Ａ０１Ｂ１０、
Ａ０１Ｇ２０、Ａ０１Ｌ１２、Ａ０１Ｌ１４、Ａ０１Ｅ１４、Ａ０３Ｃ０８、Ａ０３Ｋ２２、Ａ０３Ｎ１６、Ａ０３Ｈ１１、Ａ０３Ｍ２１、Ｂ０１Ｂ０８、Ｂ０１Ｃ１５ 和
Ｂ０１Ｆ０８，多态性引物占１３％（表２）。这些引物扩增的带型大致可分为３种类型：双亲互补型、父本型和其他型
（图１），其中Ａ０３Ｋ２２、Ａ０１Ｇ２０和Ａ０３Ｎ１６呈双亲互补型图谱，可利用它们对鸭茅杂交种进行快速鉴定。
３１２第１９卷第２期 草业学报２０１０年
表２　１３对犛犛犚引物序列
犜犪犫犾犲２　犇犖犃狊犲狇狌犲狀犮犲狊狅犳１３狆犪犻狉狊狅犳犛犛犚狆狉犻犿犲狉狊
引物编号
Ｐｒｉｍｅｒｃｏｄｅ
引物序列（５′－３′）
Ｐｒｉｍｅｒｓｅｑｕｅｎｃｅ
扩增总条带
Ｔｏｔａｌｎｕｍｂｅｒ
ｏｆｂａｎｄｓ
多态性条带数Ｎｕｍｂｅｒ
ｏｆｐｏｌｙｍｏｒｐｈｉｃ
ｂａｎｄｓ
多态比率Ｐｅｒｃｅｎｔａｇｅ
ｏｆｐｏｌｙｍｏｒｐｈｉｃ
ｂａｎｄｓ（％）
Ａ０１Ｂ１０ ＴＣＴＴＣＣＴＴＧＧＡＡＡＡＣＡＴＣＡＡＡＣＴＴＧＣＴＴＡＣＡＣＧＧＴＡＴＣＡＴＧ ６ ６ １００．００
Ａ０１Ｇ２０ ＣＴＧＴＴＴＡＡＡＧＧＧＡＡＧＧＣＴＧＡＡＣＴＴＣＣＧＡＣＴＡＣＴＣＣＧＧ ７ ５ ７１．４３
Ａ０１Ｌ１２ ＧＧＣＴＣＡＡＴＣＣＴＴＡＧＡＣＡＣＴＧＡＣＧＡＧＡＡＡＴＣＧＴＣＧＴＡＴＴＧＴ ７ ６ ８５．７１
Ａ０１Ｌ１４ ＧＣＡＣＡＡＴＧＡＣＡＣＣＡＡＡＴＡＴＧＡＴＣＡＧＣＡＴＴＧＴＧＡＣＣＡＣＣ ７ ７ １００．００
Ａ０１Ｅ１４ ＡＣＣＣＧＴＴＴＴＣＴＡＴＣＴＣＣＡＧＧＴＴＣＴＡＧＣＧＴＣＧＴＧＡＧＧＧ ６ ５ ８３．３３
Ａ０３Ｃ０８ ＴＣＧＣＡＧＴＴＴＧＡＴＧＴＡＧＧＴＣＡＣＡＣＴＣＡＣＡＣＡＴＡＣＧＣＡＴＡＣＡ ６ ６ １００．００
Ａ０３Ｋ２２ ＡＧＡＣＴＣＴＡＧＧＧＴＧＧＣＡＣＡＣＧＴＡＧＣＡＣＧＣＴＡＡＣＧＡＧＡＧＡＴ ６ ５ ８３．３３
Ａ０３Ｎ１６ ＡＡＣＧＣＡＡＣＧＴＣＴＡＴＧＧＴＴＡＴＡＣＡＣＧＣＡＣＣＣＡＣＡＣＡＴＡＣ ６ ３ ５０．００
Ａ０３Ｈ１１ ＴＣＡＣＡＣＡＣＡＴＡＡＣＡＣＧＣＡＧＣＧＣＧＴＧＴＡＴＴＴＡＴＴＡＴＣＴＴＴＣＡ ８ ８ １００．００
Ａ０３Ｍ２１ ＴＴＣＴＡＣＡＧＣＴＴＧＣＡＣＴＧＡＴＧＡＡＧＴＧＧＡＣＡＧＴＴＧＡＣＡＣＴＣＣ ８ ４ ５０．００
Ｂ０１Ｂ０８ ＴＡＡＴＣＡＴＣＡＴＣＴＴＧＡＧＧＡＧＴＧＡＣＡＧＴＣＣＴＧＡＴＧＣＴＧＧＡＡＧ ６ ６ １００．００
Ｂ０１Ｃ１５ ＧＴＣＧＡＴＴＧＡＴＧＧＴＧＴＡＣＧＴＡＴＣＴＡＧＴＧＣＴＡＣＴＴＧＴＡＴＧＣＡＣＣ １０ １０ １．００
Ｂ０１Ｆ０８ ＡＴＴＡＧＴＣＣＧＴＧＴＣＴＣＣＣＡＣＴＴＡＴＣＧＡＧＡＣＣＴＣＣＡＧＧＡＧ ７ ５ ７１．４３
总和Ｔｏｔａｌ ９０ ７６
平均 Ｍｅａｎ ７ ６ ８４．２４
图１　引物的犛犛犚图谱类型
犉犻犵．１　犛犛犚犳犻狀犵犲狉狆狉犻狀狋狆犪狋狋犲狉狀
　Ａ．双亲互补型，Ａ０３Ｋ２２（Ａ１）、Ａ０１Ｇ２０（Ａ２）；Ｂ．父本型，Ａ０１Ｌ１２；Ｃ．其他型，Ａ０３Ｃ０８（Ｃ１）、Ａ０１Ｌ１４（Ｃ２）Ａ．Ｃｏｍｐｌｅｍｅｎｔａｒｙｐａｔｔｅｒｎｏｆｂｏｔｈｐａｒ
ｅｎｔｓ，Ａ０３Ｋ２２（Ａ１），Ａ０１Ｇ２０（Ａ２）；Ｂ．Ｍａｌｅｓｐｅｃｉｆｉｃｐａｔｔｅｒｎ，Ａ０１Ｌ１２；Ｃ．Ｄｉｆｆｅｒｅｎｔｂａｎｄｐａｔｔｅｒｎｗｉｔｈｔｈｅｉｒｐａｒｅｎｔｓ，Ａ０３Ｃ０８（Ｃ１）、Ａ０１Ｌ１４（Ｃ２）
２．２　鸭茅杂交种鉴定
根据杂交组合的亲本及其杂种的电泳谱带特征，对杂交后代进行鉴定。将杂种分为３种类型：１）父本与母本
比较都有特征带，其后代具有双亲的特征带，则后代为真杂种（图１Ａ１，Ａ２）；２）后代除具有双亲特征带外，还具
有１条双亲没有的条带，此类需要结合其他引物进一步分析（图１Ｃ２）；３）父本与母本比较有特征带，后代具有父
本特征带，无母本特征带，且带型与母本带型完全不同（图１Ｃ１），此类也需要用不同引物进一步分析。
利用筛选的３对双亲互补引物对亲本和１４０个杂种进行鉴定，第１次用Ａ０１Ｇ２０对１４０个杂种进行鉴定，亲
本和杂种都能扩增出５条带，扩增片段在１００～２００ｂｐ。其中亲本间共有带３条，父母本特征带各２条（图２）。
对１４０个杂种的扩增图谱进行分析，具有双亲特征带的有８０份，将他们鉴定为真实杂种。其余６０个杂种与父本
带型相同，即其中３条为父母本共有带，２条为父本特征带，无母本特征带，此类不能立即鉴定为真杂种，需要结
４１２ ＡＣＴＡＰＲＡＴＡＣＵＬＴＵＲＡＥＳＩＮＩＣＡ（２０１０） Ｖｏｌ．１９，Ｎｏ．２
合其他引物进一步分析。对Ａ０１Ｇ２０不能确定的６０个杂交后代，用Ａ０３Ｎ１６进行再次鉴定，引物在亲本和杂交
后代中都能扩增出４条带，杂交后代的扩增片段表现出３种类型，一种为带型与父本相同；一种为２条来自父本，
１条来自母本，１条为父母本均不具有的新条带；另一种类型为２条来自父本，２条为父母本均不具有的新条带。
将具有父母本特征带又具有一条新带的鉴定为真杂种，共鉴定出真杂种３１个。对Ａ０１Ｇ２０和Ａ０３Ｎ１６鉴定出的
真实杂种进行再次确定，用Ａ０３Ｋ２２对所有１１１个杂种进行扩增，所有后代都表现为双亲互补的类型，但扩增出
的条带数不完全相同，最多为６条，即２条来自父本，４条来自母本；最少为３条，２条来自父本，１条来自母本。
这１１１个杂种因在不同引物中都具有父母本的特征带被确定为真实杂种（图３）。
２．３　鸭茅杂种群体ＳＳＲ扩增产物多态性
用１３对引物对１１１份鸭茅杂种基因组ＤＮＡ进行ＳＳＲ扩增，共得到９０条清晰可辨条带，其中多态性条带
７６条，多态性位点百分率为８４．２４％（图４）。平均每对引物扩增出７条带，其中６条具有多态性，扩增的ＤＮＡ
片段大约集中在１００～２００ｂｐ（表２）。表明ＳＳＲ能检测出较多的遗传位点，获得多态性较好的ＰＣＲ结果，鸭茅杂
种间具有丰富的遗传变异。
图２　引物犃０１犌２０对鸭茅杂交种的犛犛犚检测图谱
犉犻犵．２　犛犛犚犳犻狀犵犲狉狆狉犻狀狋犪犿狆犾犻犳犻犲犱狑犻狋犺狆狉犻犿犲狉狆犪犻狉犖狅．犃０１犌２０犻狀狅狉犮犺犪狉犱犵狉犪狊狊犺狔犫狉犻犱狊
图３　引物犃０３犓２２对鸭茅杂交种的犛犛犚检测图谱
犉犻犵．３　犛犛犚犳犻狀犵犲狉狆狉犻狀狋犪犿狆犾犻犳犻犲犱狑犻狋犺狆狉犻犿犲狉狆犪犻狉犖狅．犃０３犓２２犻狀狅狉犮犺犪狉犱犵狉犪狊狊犺狔犫狉犻犱狊
图４　引物犃０３犆０８对鸭茅杂交种的犛犛犚检测图谱
犉犻犵．４　犛犛犚犳犻狀犵犲狉狆狉犻狀狋犪犿狆犾犻犳犻犲犱狑犻狋犺狆狉犻犿犲狉狆犪犻狉犖狅．犃０３犆０８犻狀狅狉犮犺犪狉犱犵狉犪狊狊犺狔犫狉犻犱狊
５１２第１９卷第２期 草业学报２０１０年
３　讨论
３．１　鸭茅杂种的鉴定，多采用一些形态标记，如花序、株高、叶长等，钟声［８］的研究表明通过选择在形态及发育方
面具有父本性状的植株可作为杂交成功后代的依据，但数量性状易受环境条件的影响，使单纯依靠表型差异进行
真实性鉴定有一定的困难。ＳＳＲ标记由于其具有共显性、遗传方式简单、多态性好、操作简便、重复性好、稳定可
靠等优点，广泛应用于种质鉴定和分子标记辅助育种等研究领域。如辛业芸等［１４］从１４４对ＳＳＲ引物中筛选出
４７对能够在５个超级杂交稻组合中显示稳定多态性的引物，利用ＲＭ３３７和ＲＭ１５４将５个杂交稻组合与其亲
本区分开。Ｔｏｍｍａｓｉｎｉ等［２４］利用３组ＳＳＲ引物组合能够有效地把１０个油菜（犅狉犪狊狊犻犮犪狀犪狆狌狊）品种区分开。艾
呈祥等［１８］筛选出８对特异引物能很好地对２个甜瓜品种及其亲本进行鉴定，检测结果与田间试验结果吻合。而
ＳＳＲ标记技术用于鸭茅杂种鉴定的研究未见报道。本试验通过对１００对鸭茅ＳＳＲ引物的筛选，得到了１３对具
有多态性的引物，用于鸭茅杂种的遗传变异分析，并用其中的３对特异引物对鸭茅杂种进行了鉴定。由于所选引
物的限制，多数引物的扩增产物不能使ＳＳＲ谱带呈现双亲互补带型。同时杂交后代即使被判定为真杂种，其扩
增谱带也不一定是双亲条带之和，而会出现谱带的消失，或出现新的谱带。这可能是由于在配子体形成过程中，
染色体减数分裂时同源染色体发生配对与交换，染色体复制过程中存在碱基发生突变等，均有可能产生“多带”或
谱带消失，这也证明通过杂交可使鸭茅后代发生丰富的变异。本试验在利用单对ＳＳＲ特异引物对杂交种鉴定的
基础上，又利用其他ＳＳＲ特异引物对第１次不能鉴定为真杂种的材料进行２次鉴定，最后再用１对呈双亲互补
型的引物对前２对引物所鉴定的杂种进行再次确认，最终从１４０个杂交后代中鉴定出真杂种１１１个。本研究中
没有１对引物能将杂种和亲本完全分开，可见利用ＳＳＲ引物组合进行鸭茅杂种鉴定十分必要，该方法能结合多
对引物相互补充，全面有效地对杂种进行检测，可提高检测的准确度。
３．２　遗传多样性指数是反映材料多样性的重要指标。遗传多样性丰富，说明种质类型多样遗传差异较大，在
品种选育及改良中有更多可选择和利用的基因。鉴于鸭茅是异花授粉植物，同一种质内普遍存在遗传基因杂合
的状态，即品种内个体间的遗传基因不同，鸭茅种质遗传变异的分析对于了解物种的起源、遗传分化及资源的
合理利用与开发具有重要意义。本试验中利用１３对ＳＳＲ引物对１１１个鸭茅杂种进行扩增，得到多态性条带７６
条，多态性百分率为８４．２４％。该结果与Ｋｏｌｉｋｅｒ等［６］用ＲＡＰＤ方法研究发现的鸭茅种质内具有较高的遗传变
异（８５．１％）的结论吻合。同时本研究所得到的鸭茅种质内的遗变异模式与那些多年生且具有异交繁育系统的植
物具有相似的遗传变异模式［２５］。这也说明通过杂交可获得丰富的遗传变异，可为鸭茅新品种的选育提供优良的
遗传育种中间材料。
参考文献：
［１］　贺欣，刘国道，刘迪秋，等．利用ＡＣＧＭ和ＥＳＴ－ＳＳＲ标记对云贵高原野生山蚂蝗属种质的遗传多样性分析［Ｊ］．草业学
报，２００８，１７（６）：１０２１１１．
［２］　刘欣，慕平，赵桂琴．基于ＡＦＬＰ的燕麦遗传多样性研究［Ｊ］．草业学报，２００８，１７（６）：１２１１２７．
［３］　隋晓青，王．克氏针茅ＩＳＳＲＰＣＲ反应体系的建立与优化［Ｊ］．草业学报，２００８，１７（３）：７１７８．
［４］　ＰｅｎｇＹ，ＺｈａｎｇＸＱ，ＤｅｎｇＹＬ，犲狋犪犾．Ｅｖａｌｕａｔｉｏｎｏｆｇｅｎｅｔｉｃｄｉｖｅｒｓｉｔｙｉｎｗｉｌｄｏｒｃｈａｒｄｇｒａｓｓ（犇犪犮狋狔犾犻狊犵犾狅犿犲狉犪狋犪Ｌ．）ｂａｓｅｄｏｎ
ＡＦＬＰｍａｒｋｅｒｓ［Ｊ］．Ｈｅｒｅｄｉｔａｓ，２００８，１４５：１７４１８１．
［５］　曾兵，张新全，范彦，等．鸭茅种质资源遗传多样性的ＩＳＳＲ研究［Ｊ］．遗传，２００６，２８（９）：１０９３１１００．
［６］　ＫｏｌｉｋｅｒＲ，ＳｔａｄｅｌｍａｎｎＦＪ，ＲｅｉｄｙＢ，犲狋犪犾．Ｇｅｎｅｔｉｃｖａｒｉａｂｉｌｉｔｙｏｆｆｏｒａｇｅｇｒａｓｓｃｕｌｔｉｖａｒｓ：Ａｃｏｍｐａｒｉｓｏｎｏｆ犉犲狋狌犮犪狆狉犪犲狀狊犻狊
Ｈｕｄｓ．，犔狅犾犻狌犿狆犲狉犲狀狀犲Ｌ．，ａｎｄ犇犪犮狋狔犾犻狊犵犾狅犿犲狉犪狋犪Ｌ．［Ｊ］．Ｅｕｐｈｙｔｉｃａ，１９９９，１０６：２６１２７０．
［７］　ＺｅｎｇＢ，ＺｈａｎｇＸＱ，ＬａｎＹ，犲狋犪犾．Ｅｖａｌｕａｔｉｏｎｏｆｇｅｎｅｔｉｃｄｉｖｅｒｓｉｔｙａｎｄｒｅｌａｔｉｏｎｓｈｉｐｓｉｎｏｒｃｈａｒｄｇｒａｓｓ（犇犪犮狋狔犾犻狊犵犾狅犿犲狉犪狋犪Ｌ．）
ｇｅｒｍｐｌａｓｍｂａｓｅｄｏｎＳＲＡＰｍａｒｋｅｒｓ［Ｊ］．ＣａｎａｄｉａｎＪｏｕｒｎａｌｏｆＰｌａｎｔＳｃｉｅｎｃｅ，２００８，８８：５３６０．
［８］　钟声．鸭茅不同倍性杂交及后代发育特性的初步研究［Ｊ］．西南农业学报，２００６，１９（６）：１０３４１０３８．
［９］　钟声．野生鸭茅杂交后代农艺性状的初步研究［Ｊ］．草业学报，２００７，１６（１）：６９７４．
［１０］　ＬｏｔｉｃａｔｏＳ，ＲｕｍｂａｌＷ．Ｐａｓｔａｎｄｐｒｅｓｅｎｔｉｍｐｒｏｖｅｍｅｎｔｏｆｃｏｃｋｓｆｏｏｔ（犇犪犮狋狔犾犻狊犵犾狅犿犲狉犪狋犪Ｌ．）ｉｎＡｕｓｔｒａｌｉａａｎｄＮｅｗＺｅａｌａｎｄ［Ｊ］．Ｎｅｗ
ＺｅａｌａｎｄＪｏｕｒｎａｌｏｆＡｇｒｉｃｕｌｔｕｒａｌＲｅｓｅａｒｃｈ，１９９４，３７：３７９３９０．
６１２ ＡＣＴＡＰＲＡＴＡＣＵＬＴＵＲＡＥＳＩＮＩＣＡ（２０１０） Ｖｏｌ．１９，Ｎｏ．２
［１１］　李涵，殷云龙，徐朗莱，等．落羽杉属树种及其杂交后代亲缘关系的ＲＡＰＤ分析［Ｊ］．林业科学，２００７，４３（２）：４８５１．
［１２］　薛丹丹，郭海林，郑轶琦，等．结缕草属植物杂交后代杂种真实性鉴定－ＳＲＡＰ分子标记［Ｊ］．草业学报，２００９，１８（１）：
７２７９．
［１３］　江莹芬，田恩堂，陈伦林，等．埃塞俄比亚芥和白菜型油菜远缘杂种Ｆ１ 的鉴定［Ｊ］．中国油料作物学报，２００７，２９（２）：
１０３１０６．
［１４］　辛业芸，张展，熊易平，等．应用ＳＳＲ分子标记鉴定超级杂交水稻组合及其纯度［Ｊ］．中国水稻科学，２００５，１９（２）：９５１００．
［１５］　李汝玉，李群，谭振馨，等．利用ＳＳＲ标记技术检测玉米杂交种纯度［Ｊ］．玉米科学，２００５，１３（１）：１５１８．
［１６］　吴玉香，高燕会，祝水金．４个栽培棉种间四元杂种的ＳＳＲ标记鉴定［Ｊ］．浙江大学学报（农业与生命科学版），２００７，
３３（１）：５６６０．
［１７］　李菊芬，许玲，马国斌．应用ＳＳＲ分子标记鉴定甜瓜杂交种纯度［Ｊ］．农业生物技术学报，２００８，１６（３）：４９４５００．
［１８］　艾呈祥，陆璐，马国斌，等．ＳＳＲ标记技术在甜瓜杂交种纯度检验中的应用［Ｊ］．园艺学报，２００５，３２（５）：９０２９０４．
［１９］　蒋昌顺，马欣荣，邹冬梅，等．应用微卫星标记分析柱花草的遗传多样性［Ｊ］．高技术通讯，２００４，１４（４）：２５３０．
［２０］　李永祥，李斯深，李立会，等．披碱草属１２个物种遗传多样性的ＩＳＳＲ和ＳＳＲ比较分析［Ｊ］．中国农业科学，２００５，３８（８）：
１５２２１５２７．
［２１］　张阿英，胡宝忠，姜述君，等．影响紫花苜蓿ＳＳＲ分析因素的研究［Ｊ］．黑龙江农业科学，２００２，（１）：１５１７．
［２２］　郭海林，刘建秀，高鹤，等．结缕草属优良品系ＳＳＲ指纹图谱的构建［Ｊ］．草业学报，２００７，１６（２）：５３５９．
［２３］　ＳａｇｈａｉＭａｒｏｏｆＭ Ａ，ＳｏｌｉｍａｎＫ Ｍ，ＪｏｒｇｅｎｓｅｎＲＡ．ＲｉｂｏｓｏｍａｌＤＮＡｓｐａｃｅｒｌｅｎｇｔｈｐｏｌｙｍｏｒｐｈｉｓｍｓｉｎｂａｒｅｌｙ：Ｒｉｂｏｓｏｍａｌ
ｉｎｈｅｒｉｔａｎｃｅ，ｃｈｒｏｍｏｓｏｍａｌｌｏｃａｔｉｏｎ，ａｎｄｐｏｐｕｌａｔｉｏｎｄｙｎａｍｉｃｓ［Ｊ］．ＰｒｏｃｅｅｄｉｎｇＮａｔｉｏｎａｌＡｃａｄｅｍｙＯｆＳｃｉｅｎｃｅｓＵｓａ，１９８４，
８１：８０１．
［２４］　ＴｏｍｍａｓｉｎｉＬ，ＢａｔｌｅｙＪ，ＡｒｎｏｌｄＧＭ，犲狋犪犾．Ｔｈｅｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔｏｆｍｕｌｔｉｐｌｅｘｓｉｍｐｌｅｓｅｑｕｅｎｃｅｒｅｐｅａｔ（ＳＳＲ）ｍａｒｋｅｒｓｔｏｃｏｍｐｌｅ
ｍｅｎｔｄｉｓｔｉｎｃｔｎｅｓｓ，ｕｎｉｆｏｒｍｉｔｙａｎｄｓｔａｂｉｌｉｔｙｔｅｓｔｉｎｇｏｆｒａｐｅ（犅狉犪狊狊犻犮犪狀犪狆狌狊Ｌ．）ｖａｒｉｅｔｉｅｓ［Ｊ］．ＴｈｅｏｒｅｔｉｃａｌａｎｄＡｐｐｌｉｅｄＧｅｎｅｔ
ｉｃｓ，２００３，１０６：１０９１１１０１．
［２５］　ＮｙｂｏｍＨ．ＣｏｍｐａｒｉｓｏｎｏｆｄｉｆｆｅｒｅｎｔｎｕｃｌｅａｒＤＮＡｍａｒｋｅｒｓｆｏｒｅｓｔｉｍａｔｉｎｇｉｎｔｒａｓｐｅｃｉｆｉｃｇｅｎｅｔｉｃｄｉｖｅｒｓｉｔｙｉｎｐｌａｎｔｓ［Ｊ］．Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ
Ｅｃｏｌｏｇｙ，２００４，１３：１１４３１１５５．
犐犱犲狀狋犻犳犻犮犪狋犻狅狀犪狀犱犵犲狀犲狋犻犮狏犪狉犻犪狋犻狅狀犪狀犪犾狔狊犻狊狅犳狅狉犮犺犪狉犱犵狉犪狊狊犺狔犫狉犻犱狊
（犇犪犮狋狔犾犻狊犵犾狅犿犲狉犪狋犪）犫狔犛犛犚犿狅犾犲犮狌犾犪狉犿犪狉犽犲狉狊
ＸＩＥＷｅｎｇａｎｇ，ＺＨＡＮＧＸｉｎｑｕａｎ，ＣＨＥＮＧＹｏｎｇｘｉａ
（ＤｅｐａｒｔｍｅｎｔｏｆＧｒａｓｓｌａｎｄＳｃｉｅｎｃｅ，ＳｉｃｈｕａｎＡｇｒｉｃｕｌｔｕｒａｌＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，Ｙａ’ａｎ６２５０１４，Ｃｈｉｎａ）
犃犫狊狋狉犪犮狋：Ｈｙｂｒｉｄｓ（１４０）ｏｆｏｒｃｈａｒｄｇｒａｓｓ（犇犪犮狋狔犾犻狊犵犾狅犿犲狉犪狋犪）ａｎｄｔｈｅｉｒｐａｒｅｎｔａｌｌｉｎｅｓ（０１９９６，ＹＡ０２１０３）
ｗｅｒｅｔｅｓｔｅｄｂｙｓｉｍｐｌｅｓｅｑｕｅｎｃｅｒｅｐｅａｔｓ（ＳＳＲ）ｍａｒｋｅｒｓ．Ｔｈｅａｍｐｌｉｆｉｃａｔｉｏｎｂａｎｄｓｏｆｈｙｂｒｉｄｓｓｈｏｗｅｄｃｏｍｐｌｅｍｅｎ
ｔａｒｙｐａｔｔｅｒｎｓｏｆｂｏｔｈｐａｒｅｎｔｓ，ｔｈｅｍａｌｅｐａｔｔｅｒｎａｎｄｏｔｈｅｒｐａｔｔｅｒｎｓ．Ｔｈｒｅｅｃｏｍｐｌｅｍｅｎｔａｒｙｐａｔｔｅｒｎｐｒｉｍｅｒｓ：
Ａ０１Ｇ２０，Ａ０３Ｎ１６，Ａ０３Ｋ２２ｃｏｕｌｄｅｆｆｅｃｔｉｖｅｌｙａｎｄｒｅｌｉａｂｌｙｄｅｔｅｃｔ１１１ｈｙｂｒｉｄｓ．Ａｔｏｔａｌｏｆ７６ｐｏｌｙｍｏｒｐｈｉｃｂａｎｄｓ
ｗｅｒｅｄｅｔｅｃｔｅｄｂｙ１３ｐｒｉｍｅｒｐａｉｒｓ，ｗｉｔｈａｎａｖｅｒａｇｅｏｆ６ｂａｎｄｓｐｅｒｐｒｉｍｅｒＴｈｅｐｅｒｃｅｎｔａｇｅｏｆｐｏｌｙｍｏｒｐｈｉｃｂａｎｄｓ
ｗａｓ８４．２４％．Ｔｈｅｓｅｒｅｓｕｌｔｓｓｕｇｇｅｓｔｅｄｔｈａｔｔｈｅｒｅｗａｓｒｉｃｈｇｅｎｅｔｉｃｖａｒｉａｔｉｏｎａｍｏｎｇａｌｏｒｃｈａｒｄｇｒａｓｓｈｙｂｒｉｄｓｔｅｓｔ
ｅｄａｎｄｔｈａｔｔｈｅＳＳＲｔｅｃｈｎｉｑｕｅｈａｓｗｉｄｅｐｒｏｓｐｅｃｔｉｖｅｕｓｅｉｎｈｙｂｒｉｄｉｄｅｎｔｉｆｉｃａｔｉｏｎａｎｄｇｅｎｅｔｉｃａｎａｌｙｓｉｓｏｆｏｒ
ｃｈａｒｄｇｒａｓｓ．
犓犲狔狑狅狉犱狊：ｏｒｃｈａｒｄｇｒａｓｓ（犇犪犮狋狔犾犻狊犵犾狅犿犲狉犪狋犪）；ＳＳＲｍａｒｋｅｒｓ；ｈｙｂｒｉｄｉｄｅｎｔｉｆｉｃａｔｉｏｎ；ｇｅｎｅｔｉｃｖａｒｉａｔｉｏｎａｎａｌｙｓｉｓ
７１２第１９卷第２期 草业学报２０１０年