全 文 ：书二穗短柄草幼胚再生体系及农杆菌
介导转化的初步研究
吴雪莉１，刘金星２，ＫｌａｕｓＫＮｉｅｌｓｅｎ３，杨志民１，高彩霞２，３
（１．南京农业大学园艺学院，江苏 南京２１００９５；２．中国科学院遗传与发育生物学研究所，植物细胞与染色体工程
国家重点实验室，北京１００１０１；３．ＲｅｓｅａｒｃｈＤｉｖｉｓｉｏｎ，ＤＬＦ－ＴＲＩＦＯＬＩＵＭＡ／Ｓ，丹麦４６６０６０）
摘要：以二穗短柄草３个品系ＢＤＲ０１８，ＢＤ２１，ＢＤ２１３的幼胚为外植体，研究了幼胚大小对胚性愈伤组织诱导和再
生的影响。采用携带犵狌狊和犫犪狉基因双元表达载体（ｐＤＭ８０５）的根癌农杆菌菌株 ＡＧＬ１对ＢＤＲ０１８品系的幼胚愈
伤组织进行了遗传转化。本实验探讨了影响幼胚愈伤组织诱导再生及遗传转化的几个因素。结果发现，幼胚大小
介于０．５～１．０ｍｍ之间的愈伤组织诱导率最高。随愈伤组织年龄的增加，ＢＤＲ０１８，ＢＤ２１，ＢＤ２１３愈伤组织的再生
率下降，白化率上升。愈伤组织年龄在５～８周范围内转化效率较高，平均转化效率为３８．５％。真空处理５ｍｉｎ和
０．０１％的ＳｉｌｗｅｔＬ７７处理均可提高转化效率。对转化植株进行ＧＵＳ基因化学组织检测和ＰＣＲ鉴定，初步证明外
源基因已整合再生植株基因组中。
关键词：二穗短柄草；幼胚；愈伤组织；农杆菌；遗传转化
中图分类号：Ｓ５４４．０３２；Ｑ９４３　　文献标识码：Ａ　　文章编号：１００４５７５９（２０１０）０５０００９０８
 　 二穗短柄草（犅狉犪犮犺狔狆狅犱犻狌犿犱犻狊狋犪犮犺狔狅狀）是温带一年生禾本科早熟禾亚科短柄草属植物。原产于非洲北
部、欧洲南部和亚洲中部，包含约１０个亚种［１］，它与大多数的禾草亲缘关系很近，与小麦（犜狉犻狋犻犮狌犿犪犲狊狋犻狏狌犿）、
大麦（犎狅狉犱犲狌犿狏狌犾犵犪狉犲）、燕麦（犃狏犲狀犪狊犪狋犻狏犪）等粮食作物的亲缘关系比水稻更近［２４］。水稻作为禾草最基本的
模式植物［５，６］，其生长周期长，对生长环境要求高，尤其是在高产基因实验方面要求更高，此外，它属于稻亚科，与
早熟禾亚科之间的亲缘关系较远，因而并不是理想的禾草模式植物。而二穗短柄草在很多方面与拟南芥（犃狉犪犫犻
犱狅狆狊犻狊狋犺犪犾犻犪狀犪）有共同特点，拥有模式植物必备的物理特性和生物学特性［７１５］：基因组小、染色体少、ＤＮＡ重复
序列少、植株较矮、生长周期短、自花授粉等。与小麦族植物一样具有二倍体、四倍体和六倍体，且不需要严格的
生长条件和栽培措施，可以作为一种新型的禾草模式植物。目前，人们已经开始对二穗短柄草进行多方面的研
究，从而更全面地确认它作为模式植物的必然性。
遗传转化体系的建立是模式植物作为有效工具的关键，开展关于二穗短柄草遗传转化方面的研究具有重要
意义。近几年来，短柄草越来越引起国内外分子生物学研究者的重视，对其植物学特性、细胞遗传学特性、分子生
物学特性、基因组学发掘、组织培养和遗传转化性能等进行了研究，但目前国内尚未见有关二穗短柄草遗传转化
方面的研究报道。本试验以国际短柄草协会正在构建遗传连锁图的二穗短柄草ＢＤ２１和ＢＤ２１３品系及植株健
壮、生长迅速的ＢＤＲ０１８品系的幼胚为材料，研究了幼胚大小对胚性愈伤组织诱导及再生的影响，并探讨了愈伤
组织年龄及浸染过程中的不同处理对农杆菌介导的ＢＤＲ０１８遗传转化效率的影响，对建立高效稳定的二穗短柄
草离体再生和遗传转化体系具有重要意义。
１　材料与方法
１．１　植物材料
２００８年５月选取国际短柄草协会正在构建遗传连锁图的二穗短柄草ＢＤ２１和ＢＤ２１３品系及植株健壮、生
长迅速的ＢＤＲ０１８品系的幼胚为材料，每个处理设３个重复，取抽穗２周左右的幼嫩籽粒，用１．５％的次氯酸钠
第１９卷　第５期
Ｖｏｌ．１９，Ｎｏ．５
草　业　学　报
ＡＣＴＡＰＲＡＴＡＣＵＬＴＵＲＡＥＳＩＮＩＣＡ 　　
９－１６
２０１０年１０月
 收稿日期：２００９１０１０；改回日期：２００９１２２９
基金项目：欧共体（ＥＵ）第七框架课题Ｒｅｎｅｗａｌ资助。
作者简介：吴雪莉（１９８２），女，山东青岛人，在读硕士。Ｅｍａｉｌ：ｘｕｅｌｉ１９８２１２０１＠ｌｉｖｅ．ｃｎ
通讯作者。Ｅｍａｉｌ：ｎａｕｙｚｍ＠ｎｊａｕ．ｅｄｕ．ｃｎ，ｃｘｇａｏ＠ｇｅｎｅｔｉｃｓ．ａｃ．ｃｎ
消毒１５～２０ｍｉｎ，无菌水冲洗５～６次，于超净工作台内剥取幼胚，置于诱导培养基上，２６～２８℃、黑暗条件下诱
导胚性愈伤组织，５ｄ左右拔除幼芽。愈伤组织每２周在相同培养基上继代１次。
１．２　农杆菌菌株和质粒
本研究采用根癌农杆菌菌株ＡＧＬ１，质粒载体ＰＤＭ８０５如图１［内含犫犪狉基因（膦丝菌素乙酰转移酶基因）和
犵狌狊报告基因（β葡萄糖醛酸糖苷酶基因）］由丹麦ＤＬＦ公司提供。
图１　质粒狆犇犕８０５结构示意图
犉犻犵．１　犕犪狆狅犳狆犾犪狊犿犻犱狆犇犕８０５
１．３　幼胚离体培养基
ＭＳ基本培养基：ＭＳ大量元素＋ＭＳ微量元素＋ＭＳ铁盐＋ＭＳ有机成分＋ＭＳ维生素。
诱导培养基（ＭＳ２．５）：ＭＳ基本培养基＋２，４二氯苯氧乙酸（２，４Ｄ）（２．５ｍｇ／Ｌ）＋水解酪蛋白（０．５ｍｇ／Ｌ）
＋ＣｕＳＯ４（０．６ｍｇ／Ｌ）＋蔗糖３０ｇ／Ｌ＋结冷胶（Ｇｅｌｒｉｔｅ）３．７５ｇ／Ｌ。
选择诱导培养基（ＭＳ２．５５ＢＣｅｆｏ２００）：ＭＳ基本培养基＋２，４Ｄ（２．５ｍｇ／Ｌ）＋水解酪蛋白（０．５ｍｇ／Ｌ）＋Ｃｕ
ＳＯ４（０．６ｍｇ／Ｌ）＋蔗糖３０ｇ／Ｌ＋Ｇｅｌｒｉｔｅ３．７５ｇ／Ｌ＋双丙氨磷（Ｂｉａｌａｐｈｏｓ）（５ｍｇ／Ｌ）＋头孢噻肟（Ｃｅｆｏｔａｘｉｍｅ）
（４００ｍｇ／Ｌ）。
再生培养基（Ｍ１Ｇ）：ＭＳ基本培养基＋激动素Ｋｉｎｅｔｉｎ（０．２ｍｇ／Ｌ）＋蔗糖３０ｇ／Ｌ＋Ｇｅｌｒｉｔｅ３．７５ｇ／Ｌ。
选择再生培养基（Ｍ１Ｇ５ＢＣｅｆｏ２００）：ＭＳ基本培养基＋Ｋｉｎｅｔｉｎ（０．２ｍｇ／Ｌ）＋蔗糖３０ｇ／Ｌ＋Ｇｅｌｒｉｔｅ３．７５ｇ／Ｌ
＋Ｂｉａｌａｐｈｏｓ（５ｍｇ／Ｌ）＋Ｃｅｆｏｔａｘｉｍｅ（４００ｍｇ／Ｌ）。
壮苗培养基：１／２ＭＳ基本培养基＋蔗糖３０ｇ／Ｌ＋Ｇｅｌｒｉｔｅ３．７５ｇ／Ｌ。
上述所有培养基均调ｐＨ值至５．８，１２１℃高压蒸汽灭菌２０ｍｉｎ。
１．４　幼胚愈伤组织的遗传转化
从－８０℃冰箱中取出含有质粒ｐＤＭ８０５的农杆菌ＡＧＬ１［９］菌液２００μＬ（保存于１５％甘油中，农杆菌与甘油
１∶１混合），接种于２０～２５ｍＬ含有５０ｍｇ／Ｌ利福平以及２０ｍｇ／Ｌ四环素的ＹＥＰ（酵母菌）液体培养基中，２８℃，
２００ｒ／ｍｉｎ振荡培养１２～１８ｈ。当培养至ＯＤ６００值为０．６～１．０后，将培养物于４３００ｒ／ｍｉｎ离心１０ｍｉｎ，收集菌
体。用 ＭＳ２．５液体培养基［ＭＳ基本培养基＋２，４Ｄ（２．５ｍｇ／Ｌ）＋水解酪蛋白（０．５ｍｇ／Ｌ）＋ＣｕＳＯ４（０．６ｍｇ／Ｌ）
＋蔗糖３０ｇ／Ｌ，ｐＨ 值５．８］洗涤２次后重新悬浮，调至ＯＤ６００值为０．６～１．０。
选择颜色鲜黄，生长旺盛，结构密实的ＢＤＲ０１８胚性愈伤组织（颗粒大小为１～２ｍｍ），于农杆菌菌液中浸染
１５～２０ｍｉｎ，吸去菌液，并用灭菌滤纸吸干愈伤组织表面的菌液，转移到盖有滤纸的诱导培养基上，２６～２８℃，暗
培养４８～７２ｈ后，将共培养的愈伤组织用含有头孢霉素（Ｃｅｆｏｔａｘｉｍｅ，２００ｍｇ／Ｌ）的无菌水漂洗２～３次，每次１
ｍｉｎ左右，将愈伤组织上的水分吸干，置于空培养皿中１２～２４ｈ，ＭＳ２．５液体培养基漂洗１次后转移到选择诱导
培养基上，２６～２８℃，暗培养２～３周。
１．５　转化体的筛选与抗性植株再生
转化２～３周后，将愈伤组织继代到新的选择诱导培养基上，于光照培养箱（２５℃，１６ｈ光照，８ｈ黑暗）培养。
每２周继代１次。２次继代后，将抗性愈伤组织转移到选择再生培养基上培养。待抗性再生绿苗长至３～４ｃｍ
时，转移至壮苗培养基内，待抗性再生苗具有较健壮的根后，转入花盆中，于温室内种植。
１．６　ＧＵＳ基因化学组织检测
将抗性再生植株叶片浸于ＸＧｌｕｃ溶液［含乙二胺四乙酸（ＥＤＴＡ）１０ｍｍｏｌ／Ｌ、磷酸缓冲液１００ｍｍｏｌ／Ｌ、亚
铁氰化钾０．５ｍｍｏｌ／Ｌ、高铁氰化钾０．５ｍｍｏｌ／Ｌ、２０％（Ｖ／Ｖ）甲醇和０．１％ＸＧｌｕｃ（Ｗ／Ｖ）］中，３７℃下保温数小
０１ ＡＣＴＡＰＲＡＴＡＣＵＬＴＵＲＡＥＳＩＮＩＣＡ（２０１０） Ｖｏｌ．１９，Ｎｏ．５
时，９６％乙醇脱色，观察蓝色反应。
１．７　转化植株的ＰＣＲ（聚合酶链反应）鉴定
取抗性再生植株和未转化植株叶片，用十六烷基三甲基溴化铵（ＣＴＡＢ）法［１０］微量提取植物ＤＮＡ。本试验扩
增犫犪狉基因片断的引物为 ＭＳ１２６（５′ＧＧＡＴＣＴＡＣＣＡＴＧＡＧＣＣＣＡＧＡ３′）和 ＭＳ１２７（５′ＴＧＣＣＴＣＣＡＧＧＧＡＣＴ
ＴＣＡＧ３′）。ＰＣＲ所用Ｔａｑ酶、ｄＮＴＰ等购于Ａｍｐｌｉｑｏｎ公司，引物由Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ公司合成。ＰＣＲ扩增外源目的
基因的大小约为３５７ｂｐ。
１．８　数据统计
成愈率（％）＝愈伤组织数／接种幼胚数×１００％。再生率（％）＝再生绿苗数／愈伤组织数×１００％。白化率
（％）＝再生白化苗数／愈伤组织数×１００％。
２　结果与分析
２．１　幼胚大小对胚性愈伤组织诱导的影响
图２　幼胚大小和愈伤组织
犉犻犵．２　犛犻狕犲狅犳犻犿犿犪狋狌狉犲犲犿犫狉狔狅犪狀犱犲犿犫狉狔狅狀犻犮犮犪犾狌狊犲狊狅犳
犅．犱犻狊狋犪犮犺狔狅狀犅犇２１３，犅犇２１犪狀犱犅犇犚０１８
根据幼胚（胚轴方向）长度将其分成３类即：Ⅰ类：
幼胚长度小于０．５ｍｍ （图２Ａ）；Ⅱ类：幼胚长度介于
０．５～１．０ｍｍ之间 （图２Ｂ）；Ⅲ类：幼胚长度大于１．０
ｍｍ（图２Ｃ）。２周后，统计幼胚的成愈率（表１）。
Ⅰ类幼胚，透明，胚的形状稍不明显。诱导过程
中，出芽率极低，生长速度慢，胚性愈伤组织颜色鲜黄，
颗粒致密紧实。Ⅱ类幼胚，半透明，胚的形状明显，出
芽率较低，胚性愈伤组织颜色鲜黄，颗粒致密紧实，生
长速度快于Ⅰ类，少量愈伤组织略带水浸状。Ⅲ类幼
胚，不透明，近乳黄色，与成熟胚相似，出芽率高，生长
速度快，但水浸状愈伤组织较多。
　　二穗短柄草３个品系ＢＤ２１，ＢＤＲ２１３，ＢＤＲ０１８
的成愈率与幼胚大小有关（表１）。Ⅰ类幼胚成愈率最
低，Ⅱ类幼胚成愈率最高，Ⅲ类幼胚成愈率介于Ⅰ类幼
胚和Ⅱ类幼胚之间。相同幼胚大小，不同品系的幼胚
成愈率也不同。Ⅰ类幼胚中ＢＤＲ０１８的成愈率最低，
仅１３．８％。Ⅱ类幼胚中 ＢＤ２１的成愈率最高，达
８７．８％，ＢＤＲ２１３和ＢＤＲ０１８的成愈率分别为８５．６％
和７２．９％。Ⅲ类幼胚中ＢＤ２１的成愈率最高，各品系
成愈率均在５０％左右。由此可见，长度介于０．５～１．０
ｍｍ之间的Ⅱ类幼胚，成愈率最高且愈伤组织颗粒致
密，结构紧实，颜色鲜黄，生长速度较快，适合用于农杆
菌转化受体的愈伤组织诱导培养。
２．２　愈伤组织年龄对愈伤组织分化的影响
将诱导出的胚性愈伤组织，按照不同年龄，接种在
再生培养基上（Ｍ１Ｇ）于光照培养箱（２５℃，１６ｈ光照，
８ｈ黑暗）进行分化培养。３周后统计再生率和白化率
（图３）。
表１　幼胚大小对二穗短柄草幼胚成愈率的影响
犜犪犫犾犲１　犈犳犳犲犮狋狅犳犲犿犫狉狔狅狊犻狕犲狅狀犳狉犲狇狌犲狀犮狔狅犳犮犪犾犻犻狀犻狋犻犪狋犻狅狀
犻狀狋犺狉犲犲犅．犱犻狊狋犪犮犺狔狅狀犪犮犮犲狊狊犻狅狀狊
幼胚大小
Ｓｉｚｅｏｆ
ｅｍｂｒｙｏ
品种
Ｖａｒｉｅｔｉｅｓ
接种幼胚数
Ｎｏ．ｏｆｅｍｂｒｙｏｓ
ｉｎｏｃｕｌａｔｅｄ
愈伤组织数
Ｎｏ．ｏｆ
ｃａｌｕｓ
成愈率
Ｆｒｅｑｕｅｎｃｙｏｆｃａｌｕｓ
ｉｎｉｔｉａｔｉｏｎ（％）
Ⅰ类 ＢＤ２１ １３１ ２９ ２２．１
ＢＤ２１３ １１８ ２１ １７．８
ＢＤＲ０１８ ６５ ９ １３．８
Ⅱ类 ＢＤ２１ １２３ １０８ ８７．８
ＢＤ２１３ １６０ １３７ ８５．６
ＢＤＲ０１８ １５５ １１３ ７２．９
Ⅲ类 ＢＤ２１ ７０ ３９ ５５．７
ＢＤ２１３ ６８ ３２ ４７．１
ＢＤＲ０１８ ９７ ５０ ５１．５
　　随愈伤组织年龄的增加，ＢＤＲ０１８，ＢＤ２１，ＢＤ２１３愈伤组织的再生率下降，白化率上升。愈伤组织年龄为５
周时再生率最高，分别为１００％，１００％和８５．３％（图３）。２１周时再生率最低，分别为１４．７％，３０．３％和１７．６％。
１１第１９卷第５期 草业学报２０１０年
５周时各品系的白化率最低。其中ＢＤＲ０１８和ＢＤ２１的
图３　愈伤年龄对愈伤组织分化的影响
犉犻犵．３　犈犳犳犲犮狋狅犳犱犻犳犳犲狉犲狀狋犪犵犲狅犳犮犪犾狌狊狅狀犱犻犳犳犲狉犲狀狋犻犪狋犻狅狀
犻狀狋犺狉犲犲犅．犱犻狊狋犪犮犺狔狅狀犪犮犮犲狊狊犻狅狀狊
白化苗和非再生愈伤组织从８周开始出现，而ＢＤ２１３
从５周开始已有非再生现象产生。ＢＤＲ０１８和ＢＤ２１
的胚性愈伤组织在５～８周范围内具有高的再生率和
低的白化率，ＢＤＲ０１８的再生率较其他２个品系最高。
ＢＤＲ０１８、ＢＤ２１和ＢＤ２１３的再生率大于６０％的愈伤
组织，年龄分别为１８，１５，１１周。综合上述ＢＤＲ０１８的
胚性愈伤组织的成愈率及分化再生率均较高，且可作
为遗传转化受体材料的愈伤组织年龄范围最宽。以下
遗传转化试验均以ＢＤＲ０１８胚性愈伤作为转化受体。
２．３　愈伤组织年龄对转化的影响
以５，８，１１，１５，１８，２１周的ＢＤＲ０１８胚性愈伤组织
为受体材料，菌体由 ＭＳ２．５液体培养基重新悬浮，菌
液中加入０．０１％的ＳｉｌｗｅｔＬ７７，混合均匀，浸染愈伤
组织１５～２０ｍｉｎ进行遗传转化，统计转化率（转化率
＝抗性再生植株数／愈伤组织数）。结果表明（表２），
愈伤组织年龄为５～８周时转化率较高，平均转化率为
３９．６％和３７．４％。随着愈伤组织年龄的增加，转化率
明显降低。２１周时转化率最低仅２．８％。不同年龄愈
伤组织的平均转化率为２１．４％。
２．４　真空处理和ＳｉｌｗｅｔＬ７７处理对转化的影响
以５周的ＢＤＲ０１８愈伤组织为受体材料进行遗传
转化，比较了不同处理对转化率的影响。Ⅰ处理为对
照，菌体在 ＭＳ２．５液体培养基中重新悬浮后直接浸染
愈伤组织；Ⅱ处理在菌体由 ＭＳ２．５液体培养基重新悬
浮后，在菌液中加入０．０１％的ＳｉｌｗｅｔＬ７７，混合均匀
浸染愈伤组织。Ⅲ处理的菌液与Ⅰ对照处理相同，愈
伤组织于空培养皿中，加入菌液浸染３０ｍｉｎ，其间将
培养皿放入基因枪真空室中进行真空处理，真空室内
压力保持５０ｍｂａｒ，处理时间为５ｍｉｎ。
结果表明（表３），真空处理和０．０１％的ＳｉｌｗｅｔＬ７７处理均可显著提高转化率。真空处理和０．０１％Ｓｉｌｗｅｔ
Ｌ７７处理的平均转化率分别为３９．６％和４１．０％，显著高于对照的平均转化率１４．１％，真空处理和０．０１％的Ｓｉｌ
ｗｅｔＬ７７处理的转化率相近。
２．５　ＧＵＳ检测结果
待抗性植株移至温室后，取植株新鲜叶片进行犵狌狊基因化学组织检测，叶片ＧＵＳ染色结果从无色到深蓝色
表现不一致（图４），无色的叶片说明ＧＵＳ基因未在植物中表达，浅蓝色和深蓝色叶片说明ＧＵＳ基因已经在植物
中得到稳定表达。
２．６　转基因植株的ＰＣＲ检测
随机选取１２株转基因抗性植株和２株非转基因对照植物进行ＰＣＲ检测。结果表明，除了非转基因对照植
物以外，所有的转基因植株均扩增出了３５７ｂｐ的犫犪狉基因ＤＮＡ片断（图５），证明犫犪狉基因已整合进二穗短柄草
基因组中。
２１ ＡＣＴＡＰＲＡＴＡＣＵＬＴＵＲＡＥＳＩＮＩＣＡ（２０１０） Ｖｏｌ．１９，Ｎｏ．５
表２　愈伤组织年龄对转化率的影响
犜犪犫犾犲２　犈犳犳犲犮狋狅犳犱犻犳犳犲狉犲狀狋犪犵犲狅犳犮犪犾犻狅狀狋犺犲犲犳犳犻犮犻犲狀犮狔狅犳狋狉犪狀狊犳狅狉犿犪狋犻狅狀
愈伤组织类型
Ｃａｌｕｓｔｙｐｅ
愈伤组织数
Ｎｏ．ｏｆｃａｌｕｓ
抗性愈伤组织数
Ｎｏ．ｏｆｒｅｓｉｓｔａｎｔ
ｃａｌｕｓ
抗性再生植株数
Ｎｏ．ｏｆｉｎｄｅｐｅｎｄｅｎｔ
ｒｅｇｅｎｅｒａｔｅｄｐｌａｎｔｓ
转化率
Ｒａｔｅｏｆｒａｎｓｆｏｒｍａｔｉｏｎ
（％）
平均转化率
Ａｖｅｒａｇｅｒａｔｅｏｆｒａｎｓｆｏｒｍａｔｉｏｎ
（％）
５周愈伤组织 １３９ ５７ ５６ ４０．３ ３９．６
５ｗｅｅｋｃａｌｉ １０３ ４１ ４１ ３９．８
９８ ３８ ３８ ３８．７
８周愈伤组织 ６６ ２４ ２３ ３４．８ ３７．４
８ｗｅｅｋｃａｌｉ １１６ ４６ ４６ ３９．７
５３ ２１ ２０ ３７．７
１１周愈伤组织 ５１ １６ １５ ２９．４ ２５．２
１１ｗｅｅｋｃａｌｉ ７３ １７ １４ １９．２
７８ ２３ ２１ ２７．０
１５周愈伤组织 ９２ １８ １５ １６．３ １８．６
１５ｗｅｅｋｃａｌｉ １２３ ２２ ２２ １７．９
１０６ ２７ ２３ ２１．７
１８周愈伤组织 ７３ ７ ５ ６．８ ４．９
１８ｗｅｅｋｃａｌｉ ６８ ６ ３ ４．４
５９ ６ ２ ３．４
２１周愈伤组织 ５７ ７ ２ ３．５ ２．８
２１ｗｅｅｋｃａｌｉ ７８ ８ ３ ３．９
９０ ５ １ １．１
表３　真空处理和０．０１％犛犻犾狑犲狋犔７７处理对转化率的影响
犜犪犫犾犲３　犈犳犳犲犮狋狅犳狏犪犮狌狌犿犻狀犳犻犾狋狉犪狋犻狅狀狅狉０．０１％犛犻犾狑犲狋犔７７狅狀狋犺犲犲犳犳犻犮犻犲狀犮狔狅犳狋狉犪狀狊犳狅狉犿犪狋犻狅狀
试验编号
ＥｘｐｅｒｉｍｅｎｔＮｏ．
愈伤组织数
Ｎｏ．ｏｆｃａｌｕｓ
抗性再生植株数
Ｎｏ．ｏｆｉｎｄｅｐｅｎｄｅｎｔ
ｒｅｇｅｎｅｒａｔｅｄｐｌａｎｔｓ
转化率
Ｔｒａｎｓｆｏｒｍａｔｉｏｎｅｆｆｉｃｉｅｎｃｙ
（％）
平均转化率
Ａｖｅｒａｇｅｔｒａｎｓｆｏｒｍａｔｉｏｎ
ｅｆｆｉｃｉｅｎｃｙ（％）
Ⅰ对照处理 ７８ １０ １２．８ １４．１
Ｃｏｎｔｒａｓｔｔｒｅａｔｍｅｎｔ ９３ １５ １６．１
１０４ １４ １３．５
ⅡＳｉｌｗｅｔＬ７７处理 １３９ ５６ ４０．３ ３９．６
ＳｉｌｗｅｔＬ７７ｔｒｅａｔｍｅｎｔ １０３ ４１ ３９．８
９８ ３８ ３８．７
Ⅲ真空处理 １６７ ７２ ４３．１ ４１．０
Ｖａｃｕｕｍｔｒｅａｔｍｅｎｔ １１０ ４５ ４０．９
１５１ ５９ ３９．１
３　讨论
高频的离体再生系统及稳定的外植体来源是转化受体系统必备的条件，也是影响遗传转化效率提高的重要
因素。在禾谷类转基因研究中，虽然成熟胚取材和操作方便，生理状态一致，是组织培养和遗传转化理想的外植
体，但幼胚再生能力较高，在成熟胚高频率再生体系尚未建立的情况下，幼胚培养具有重要作用。研究表明幼胚
３１第１９卷第５期 草业学报２０１０年
图４　犌犝犛染色
犉犻犵．４　犌犝犛狊狋犪犻狀犻狀犵
图５　犘犆犚检测犫犪狉基因在转基因植株中的表达
犉犻犵．５　犈狓狆狉犲狊狊犻狅狀狅犳犫犪狉犻狀狋狉犪狀狊犵犲狀犻犮狆犾犪狀狋狊
Ｂ４５ｘｘ：转基因抗性植株；ＣＫ１、ＣＫ２：非转基因对照植株；ｐＤＭ８０５：质粒，阳性对照Ｂ４５ｘｘ：Ｂｉａｌａｐｈｏｓｒｅｓｉｓｔａｎｔ
ｐａｌｎｔｓ；ＣＫ１、ＣＫ２：Ｎｏｎｔｒａｎｓｇｅｎｉｃｐｌａｎｔｓ；ｐＤＭ８０５：Ｐｏｓｉｔｉｖｅｃｏｎｔｒｏｌ
大小介于０．５～１．０ｍｍ之间时，胚性愈伤组织的诱导率最高。大于１．０ｍｍ的幼胚愈伤组织诱导率均在５０％左
右，且出芽率较高，水浸状愈伤组织较多，这可能是由于较大的幼胚接近于成熟胚，具有较高的分化程度，而脱分
化和再生能力下降。这与Ｄｒａｐｅｒ等［２］对幼胚大小的研究具有相似结论，取二穗短柄草二倍体基因型ＡＢＲ１不同
大小的未成熟胚分别接种在ＬＳ和Ｎ６附加２．５ｍｇ／Ｌ２，４Ｄ培养基上诱导愈伤组织，长度０．３～０．７ｍｍ的未成
熟胚诱导愈伤组织的潜力最大，在ＬＳ２．５培养基上胚性愈伤组织诱导率为４５％，胚性愈伤组织白苗分化率仅为
７％，而在Ｎ６２．５培养基产生的胚性愈伤组织白苗分化率高达４５％。但Ｄｒａｐｅｒ等［２］是以二穗短柄草二倍体基
因型ＡＢＲ１为材料，而相同幼胚大小，不同基因型的诱导率之间仍存在显著差异。ＢＤ２１诱导率最高达８７．８％，
ＢＤ２１３和ＢＤＲ０１８诱导率分别为８５．６％，７２．９％。ＢＤ２１和ＢＤＲ０１８的诱导率均高于他人报道的６８％和４６％，
而ＢＤ２１３的诱导率低于Ｐｈｉｌｉｐｐｅ等［１１］的研究结果９４％，这可能与基因型对诱导培养基的选择有关［１２］。
愈伤组织年龄对不同基因型的愈伤组织的分化再生具有显著影响。研究表明，在５～８周内胚性愈伤组织具
有较高再生率，为转化提供了良好的受体系统。这一结果与Ｃｈｒｉｓｔｉａｎｓｅｎ等［１３］对二倍体基因型和四倍体基因型
幼胚培养的研究相同。ＢＤＲ０１７、ＢＤＲ０３０、ＢＤＲ００１和ＢＤＲ０１８愈伤组织愈龄３～６周时的再生率为９０％～
１００％，８周时的再生率低于８０％，培养时间越长再生率越低，如ＢＤＲ０１７、ＢＤＲ０３０愈伤组织培养１６周时的再生
率分别为３０％和５５％。
农杆菌介导二穗短柄草的遗传转化研究，主要集中于对ＢＤ２１的转化研究，而对ＢＤＲ０１８的研究目前仅有少
数，国内尚未见关于ＢＤＲ０１８遗传转化的研究报道。Ｖｏｇｅｌ和Ｌｅｏｎｇ等［１４］利用幼胚和成熟胚来源的胚性愈伤组
织及ＡＧＬ１菌系和ｐＯＬ００１载体首次开展了农杆菌介导转化短柄草的研究，１４个基因型中有１０个获得了转基
因植株，转化率０．４％～１５．０％。Ｃｈｒｉｓｔｉａｎｓｅｎ等［１３］用基因枪转化法对ＢＤＲ０１８幼胚的胚性愈伤组织进行转化平
４１ ＡＣＴＡＰＲＡＴＡＣＵＬＴＵＲＡＥＳＩＮＩＣＡ（２０１０） Ｖｏｌ．１９，Ｎｏ．５
均转化率５．３％，Ｖａｉｎ等［１５］用农杆菌转化法对ＢＤＲ０１８幼胚愈伤组织进行转化，ＢＤＲ０１８农杆菌转化的效率高达
５５％，高于本实验中愈龄为５周的ＢＤＲ０１８胚性愈伤组织的最高转化效率４０．３％和真空处理５ｍｉｎ的最高转化
效率４３．１％。原因可能是由于实验中转化的愈伤组织年龄为５周高于前两者作为受体材料的愈伤组织年龄，但
是由于培养５周的愈伤组织可以获得更多的转化受体材料，因此虽然转化效率稍低，但仍具有重要的意义。浸染
过程中，真空处理５ｍｉｎ和菌液中加入０．０１％的ＳｉｌｗｅｔＬ７７，均可提高转化效率。真空处理可提高转化率可能
是由于真空使浸染环境产生负压，使菌液充满微孔从而提高转化效率。苜蓿（犕犲犱犻犮犪犵狅狊犪狋犻狏犪）［１６］、结缕草（犣狅狔
狊犻犪犼犪狆狅狀犻犮犪）［１７］、花生（犃狉犪犮犺犻狊犺狔狆狅犵犪犲犪）［１８］等的遗传转化中利用负压处理，转化效率也得到不同程度的提高。
参考文献：
［１］　ＴａｔｅｏｋａＴ．ＰｒｏｐｏｓｉｔｉｏｎｏｆａｎｅｗｐｈｙｌｏｇｅｎｉｃｓｙｓｔｅｍｏｆＰｏａｃｅａｅ［Ｊ］．ＪａｐａｎＢｏｔ，１９５７，３２：２７５２８７．
［２］　ＤｒａｐｅｒＪ，ＭｕｒＬＡＪ，ＪｅｎｋｉｎｓＧ，犲狋犪犾．犅狉犪犮犺狔狆狅犱犻狌犿犱犻狊狋犪犮犺狔狅狀：Ａｎｅｗｍｏｄｅｌｓｙｓｔｅｍｆｏｒｆｕｎｃｔｉｏｎａｌｇｅｎｏｍｉｃｓｉｎｇｒａｓｓｅｓ［Ｊ］．
ＰｌａｎｔＰｈｙｓｉｏｌｏｇｙ，２００１，１２７：１５３９１５５５．
［３］　ＫｅｌｏｇｇＥＡ．Ｅｖｏｌｕｔｉｏｎａｒｙｈｉｓｔｏｒｙｏｆｔｈｅｇｒａｓｓｅｓ［Ｊ］．ＰｌａｎｔＰｈｙｓｉｏｌｏｇｙ，２００１，１２５：１１９８１２０５．
［４］　ＧａｕｔＢＳ．Ｅｖｏｌｕｔｉｏｎａｒｙｄｙｎａｍｉｃｓｏｆｇｒａｓｓｇｅｎｏｍｅｓ［Ｊ］．ＮｅｗＰｈｙｔｏｌｏｇｉｓｔ，２００２，１５４：１５２８．
［５］　ＨａｖｕｋｋａｌａＩＪ．Ｃｅｒｅａｌｇｅｎｏｍｅａｎａｌｙｓｉｓｕｓｉｎｇｒｉｃｅａｓａｍｏｄｅｌ［Ｊ］．ＣｕｒｒｅｎｔＯｐｉｎｉｏｎｉｎＧｅｎｅｔｉｃｓ＆Ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ，１９９６，６：７１１
７１４．
［６］　ＴｙａｇｉＡｋ，ＭｏｈａｎｔｙＡ．Ｒｉｃｅｔｒａｎｓｆｏｒｍａｔｉｏｎｆｏｒｃｒｏｐｉｍｐｒｏｖｅｍｅｎｔａｎｄｆｕｎｃｔｉｏｎａｌｇｅｎｏｍｉｃｓ［Ｊ］．ＰｌａｎｔＳｃｉｅｎｃｅ，１５８：１１８．
［７］　ＳｈｉＹ，ＤｒａｐｅｒＪ，ＳｔａｃｅＣ．ＲｉｂｏｓｏｍａｌＤＮＡｖａｒｉａｔｉｏｎａｎｄｉｔｓｐｈｙｌｏｇｅｎｅｔｉｃｉｍｐｌｉｃａｔｉｏｎｉｎｔｈｅｇｅｎｕｓ犅狉犪犮犺狔狆狅犱犻狌犿 （Ｐｏａｃｅａｅ）
［Ｊ］．ＰｌａｎｔＳｙｓｔＥｖｏｌ，１９９３，１８８：１２５１３８．
［８］　ＶｏｇｅｌＪ，ＧａｒｖｉｎＤ，ＬｅｏｎｇＯ，犲狋犪犾．犃犵狉狅犫犪犮狋犲狉犻狌犿 ｍｅｄｉａｔｅｄｔｒａｎｓｆｏｒｍａｔｉｏｎａｎｄｉｎｂｒｅｄｌｉｎｅｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔｉｎｔｈｅｍｏｄｅｌｇｒａｓｓ
犅狉犪犮犺狔狆狅犱犻狌犿犱犻狊狋犪犮犺狔狅狀［Ｊ］．ＰｌａｎｔＣｅｌ，ＴｉｓｓｕｅａｎｄＯｒｇａｎＣｕｌｔｕｒｅ，２００６，８５：１９９２１１．
［９］　ＴｉｎｇａｙＳ，ＭｃＥｌｒｏｙＤ，ＫａｌａＲ，犲狋犪犾．犃犵狉狅犫犪犮狋犲狉犻狌犿ｔｕｍｅｆａｃｉｅｎｓｍｅｄｉａｔｅｄｂａｒｌｅｙｔｒａｎｓｆｏｒｍａｔｉｏｎ［Ｊ］．ＰｌａｎｔＪｏｕｒｎａｌ，１９９７，
１１：１３６９１３７６．
［１０］　杨成丽，刘树楠，周吉源，等．高效烟草遗传转化体系的建立及甜蛋白基因的导入［Ｊ］．生物技术，２００４，１４：９１１．
［１１］　ＰｈｉｌｉｐｐｅＶ，ＢａｒｂａｒｅＷ，ＶｅｒａＴ，犲狋犪犾．犃犵狉狅犫犪犮狋犲狉犻狌犿－Ｍｗｎｄｉａｔｅｄｔｒａｎｓｆｏｒｍａｔｉｏｎｏｆｔｈｅｔｅｍｐｅｒａｔｅｇｒａｓｓ犅狉犪犮犺狔狆狅犱犻狌犿
犱犻狊狋犪犮犺狔狅狀（ｇｅｎｏｔｙｐｅＢＤ２１）ｆｏｒＴＤＮＡｉｎｓｅｒｔｉｏｎａｌｍｕｔａｇｅｎｅｓｉｓ［Ｊ］．ＰｌａｎｔＢｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，２００８，６（３）：２３６２４５．
［１２］　ＣｈｅｎｇＭｉｎｇ．Ｉｎｖｉｔｅｄｒｅｖｉｅｗ：Ｆａｃｔｏｒｓｉｎｆｌｕｅｎｃｉｎｇ犃犵狉狅犫犪犮狋犲狉犻狌犿－ｍｅｄｉａｔｅｄｔｒａｎｓｆｏｒｍａｔｉｏｎｏｆｍｏｎｏｃｏｔｙｌｅｄｏｎｏｕｓｓｐｅｃｉｅｓ，Ｉｎ
ＶｉｔｒｏＣｅｌ．Ｄｅｖ［Ｊ］．ＢｉｏｌｏｇｙｏｆＰｌａｎｔ，２００４，４０：３１４５．
［１３］　ＣｈｒｉｓｔｉａｎｓｅｎＰ，ＤｉｄｉｏｎＴ，ＡｎｄｅｒｓｅｎＣＨ，犲狋犪犾．Ａｒａｐｉｄａｎｄｅｆｆｉｃｉｅｎｔｔｒａｎｓｆｏｒｍａｔｉｏｎｐｒｏｔｏｃｏｌｆｏｒｔｈｅｇｒａｓｓ犅狉犪犮犺狔狆狅犱犻狌犿
犱犻狊狋犪犮犺狔狅狀［Ｊ］．ＰｌａｎｔＣｅｌＲｅｐｏｒｔｓ，２００５，２３：７５１７５８
［１４］　ＶｏｇｅｌＪＰ，ＬｅｏｎｇＯ Ｍ．犃犵狉狅犫犪犮狋犲狉犻狌犿－ｍｅｄｉａｔｅｄｔｒａｎｓｆｏｒｍａｔｉｏｎｏｆｔｈｅｍｏｄｅｌｇｒａｓｓ犅狉犪犮犺狔狆狅犱犻狌犿犱犻狊狋犪犮犺狔狅狀 （ａｂｓｔｒａｃｔ）［Ｊ］．
ＩｎＶｉｔｒｏＣｅｌｕｌａｒａｎｄＤｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔａｌＢｉｏｌｏｇｙ，２００４，４０：２９．
［１５］　ＶａｉｎＰ，ＷｏｒｌａｎｄＢ，犲狋犪犾．犃犵狉狅犫犪犮狋犲狉犻狌犿－ｍｅｄｉａｔｅｄｔｒａｎｓｆｏｒｍａｔｉｏｎｏｆｔｈｅｔｅｍｐｅｒａｔｅｇｒａｓｓ犅狉犪犮犺狔狆狅犱犻狌犿犱犻狊狋犪犮犺狔狅狀（ｇｅｎ
ｏｔｙｐｅＢｄ２１）ｆｏｒＴＤＮＡｉｎｓｅｒｔｉｏｎａｌｍｕｔａｇｅｎｅｓｉｓ［Ｊ］．ＰｌａｎｔＢｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，２００８，６：２３６２４５．
［１６］　黎茵，黄霞，黄学林．根癌农杆菌介导的苜蓿体胚转化［Ｊ］．植物生理与分子生物学学报，２００３，２９（２）：１０９１１３．
［１７］　张磊，吴殿星，胡繁荣，等．结缕草组织培养及农杆菌介导转化的主要因子优化［Ｊ］．草业学报，２００４，１３（４）：１００１０５．
［１８］　邹湘辉，庄东红，胡忠，等．负压和超声波处理对农杆菌介导的花生遗传转化效率的影响［Ｊ］．中国油料作物学报，２００４，
２６（１）：１２１６．
５１第１９卷第５期 草业学报２０１０年
犃犵狉狅犫犪犮狋犲狉犻狌犿犿犲犱犻犪狋犲犱狋狉犪狀狊犳狅狉犿犪狋犻狅狀狅犳犅狉犪犮犺狔狆狅犱犻狌犿犱犻狊狋犪犮犺狔狅狀狋犺狉狅狌犵犺
犲犿犫狉狔狅犵犲狀犻犮犮犪犾犻犱犲狉犻狏犲犱犳狉狅犿犻犿犿犪狋狌狉犲犲犿犫狉狔狅狊
ＷＵＸｕｅｌｉ１，ＬＩＵＪｉｎｘｉｎｇ２，ＫｌａｕｓＫＮｉｅｌｓｅｎ３，ＹＡＮＧＺｈｉｍｉｎ１，ＧＡＯＣａｉｘｉａ２，３
（１．ＣｏｌｅｇｅｏｆＨｏｒｔｉｃｕｌｔｕｒｅ，ＮａｎｊｉｎｇＡｇｒｉｃｕｌｔｕｒａｌＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，Ｎａｎｊｉｎｇ２１００９５，Ｃｈｉｎａ；２．Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅｏｆ
ＧｅｎｅｔｉｃｓａｎｄＤｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔａｌＢｉｏｌｏｇｙＣｈｉｎｅｓｅＡｃａｄｅｍｙｏｆＳｃｉｅｎｃｅｓ，ＳｔａｔｅＫｅｙＬａｂｏｒａｔｏｒｙｏｆ
ＰｌａｎｔＣｅｌａｎｄＣｈｒｏｍｏｓｏｍｅＥｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ，Ｂｅｉｊｉｎｇ１００１０１，Ｃｈｉｎａ；３．ＲｅｓｅａｒｃｈＤｉｖｉｓｉｏｎ，
ＤＬＦＴＲＩＦＯＬＩＵＭＡ／Ｓ４６６０６０，Ｄｅｎｍａｒｋ）
犃犫狊狋狉犪犮狋：Ａｖｅｒｙｅｆｆｉｃｉｅｎｔｔｒａｎｓｆｏｒｍａｔｉｏｎｓｙｓｔｅｍ，ｕｓｉｎｇ犃犵狉狅犫犪犮狋犲狉犻狌犿ｍｅｄｉａｔｅｄｔｒａｎｓｆｏｒｍａｔｉｏｎ，ｈａｓｂｅｅｎｄｅ
ｖｅｌｏｐｅｄｆｏｒｔｈｅｐｒｏｄｕｃｔｉｏｎｏｆｔｒａｎｓｇｅｎｉｃｐｌａｎｔｓｏｆ犅狉犪犮犺狔狆狅犱犻狌犿犱犻狊狋犪犮犺狔狅狀．Ｅｍｂｒｙｏｇｅｎｉｃｃａｌｉｉｎｉｔｉａｔｅｄｆｒｏｍ
ｉｍｍａｔｕｒｅｅｍｂｒｙｏｓｗｅｒｅｔｒａｎｓｆｏｒｍｅｄｗｉｔｈ犃犵狉狅犫犪犮狋犲狉犻狌犿狋狌犿犲犳犪犮犻犲狀狊ｓｔｒａｉｎＡＧＬ１ｃａｒｒｙｉｎｇｔｈｅｂｉｎａｒｙｖｅｃｔｏｒ
ｐＤＭ８０５，ｃｏｄｉｎｇｆｏｒｔｈｅｐｈｏｓｐｈｉｎｏｔｈｒｉｃｉｎａｃｅｔｙｌｔｒａｎｓｆｅｒａｓｅ（犫犪狉）ａｎｄβｇｌｕｃｕｒｏｎｉｄａｓｅ（狌犻犱犃）ｇｅｎｅｓ．Ｂｉａｌａｐｈｏｓ
ｗａｓｕｓｅｄａｓｔｈｅｓｅｌｅｃｔｉｖｅａｇｅｎｔｔｈｒｏｕｇｈｏｕｔａｌｐｈａｓｅｓｏｆｔｉｓｓｕｅｃｕｌｔｕｒｅ．Ｔｒａｎｓｆｏｒｍａｔｉｏｎｅｆｆｉｃｉｅｎｃｙｗａｓｓｔｒｏｎｇｌｙ
ｉｎｆｌｕｅｎｃｅｄｂｙｇｅｎｏｔｙｐｅ，ｓｉｚｅｏｆｉｍｍａｔｕｒｅｅｍｂｒｙｏｓａｎｄａｇｅｏｆｅｍｂｒｙｏｇｅｎｉｃｃａｌｕｓ．Ａｎａｖｅｒａｇｅｔｒａｎｓｆｏｒｍａｔｉｏｎ
ｅｆｆｉｃｉｅｎｃｙｏｆ３８．５％ ｗａｓｏｂｔａｉｎｅｄｕｓｉｎｇ５ｔｏ８ｗｅｅｋｏｌｄｅｍｂｒｙｏｇｅｎｉｃｃａｌｕｓａｓｔｒａｎｓｆｏｒｍａｔｉｏｎｔａｒｇｅｔｓａｎｄｔｈｅ
ｈｉｇｈｅｓｔｔｒａｎｓｆｏｒｍａｔｉｏｎｅｆｆｉｃｉｅｎｃｙａｃｈｉｅｖｅｄｗａｓ４３．１％．Ｔｈｅｅｘｉｓｔｅｎｃｅａｎｄｉｎｔｅｇｒａｔｉｏｎｏｆｔｈｅ犫犪狉ｇｅｎｅｉｎｔｒａｎｓ
ｇｅｎｉｃｐｌａｎｔｓｗａｓｃｏｎｆｉｒｍｅｄｂｙＰＣＲ（ｐｏｌｙｍｅｒａｓｅｃｈａｉｎｒｅａｃｔｉｏｎ）．
犓犲狔狑狅狉犱狊：犅狉犪犮犺狔狆狅犱犻狌犿犱犻狊狋犪犮犺狔狅狀；ｉｍｍａｔｕｒｅｅｍｂｒｙｏ；ｃａｌｕｓ；犃犵狉狅犫犪犮狋犲狉犻狌犿；ｇ
檵檵檵檵檵檵檵檵檵檵檵檵檵檵檵檵檵檵檵檵檵檵檵檵檵檵檵檵檵檵檵檵檵檵檵檵檵檵檵檵檵檵檵檵檵檵檵檵檵檵檵
ｅｎｅｔｉｃｔｒａｎｓｆｏｒｍａｔｉｏｎ
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６１ ＡＣＴＡＰＲＡＴＡＣＵＬＴＵＲＡＥＳＩＮＩＣＡ（２０１０） Ｖｏｌ．１９，Ｎｏ．５