全 文 ：书野生马蹄金种质遗传多样性的犛犚犃犘研究
付薇１，２，干友民１，吴佳海２，王小利２，陈伟２，张建波２
（１．四川农业大学草业科学系，四川 雅安６２５０１４；２．贵州省草业研究所，贵州 贵阳５５０００１）
摘要：为评价野生马蹄金种质的遗传多样性，从８０对ＳＲＡＰ引物中筛选出１９对多态性高、稳定性好的引物，用于
研究２１份马蹄金材料，获得如下结果：１）１９对引物共扩增出２１２条带，平均每对引物扩增出１１．１条，其中多态性
条带１５６条，平均每对引物８．２条，多态率为７３．５８％。材料间遗传相似系数变化范围为０．４４４～０．９８０，平均值为
０．７１１２。结果表明，供试马蹄金材料具有较为丰富的遗传多样性。２）对所有材料的聚类分析发现，在 ＧＳ值为
０．７８处所有供试材料可聚为３个类群，大部分来源地相同或生态环境相似的材料聚为一类，表明供试材料的聚类
和生态地理环境具有一定的相关性。
关键词：马蹄金；ＳＲＡＰ；遗传多样性；聚类分析
中图分类号：Ｑ９４３　　文献标识码：Ａ　　文章编号：１００４５７５９（２０１０）０６０１６４０７
　 马蹄金（犇犻犮犺狅狀犱狉犪狉犲狆犲狀狊）是旋花科（Ｃｏｎｖｏｌｖｕｌａｃｅａｅ）马蹄金属（犇犻犮犺狅狀犱狉犪）多年生匍匐型草本植物，马蹄
金属植物在全世界一共有１３个种，中国仅有１个种［１，２］，该种主要分布在中国及东南亚、澳洲的一些国家［３］，我国
是其分布的中心，主要分布于秦岭－淮河以南的热带、亚热带地区，如安徽、江苏、江西、浙江、福建、湖南、湖北、四
川、贵州、云南、广东、广西、海南及台湾等南方省区［４６］。近些年来，由于外来绿化植物和人工草坪耗水过多，加之
外来有害植物入侵，绿化及管理成本提高等原因，因而利用当地土著草坪地被植物进行城市草坪建植已经受到广
泛重视。马蹄金植株低矮，节间能着地生根，成坪后无需修剪，因其独特的马蹄外形，在草坪植物中具有较高的观
赏价值，因而被作为园林绿地植物广泛种植。在国外通常用作优良地被绿化材料或固土护坡植物［７］。
相关序列扩增多态性（ｓｅｑｕｅｎｃｅｒｅｌａｔｅｄａｍｐｌｉｆｉｅｄｐｏｌｙｍｏｒｐｈｉｓｍ，ＳＲＡＰ）是一种基于ＰＣＲ的新型分子标记
技术，由美国加州大学蔬菜作物系Ｌｉ和Ｑｕｉｒｏｓ［８］于２００１年在研究芸薹属（犅狉犪狊狊犻犮犪）作物中开发。它独特的引
物设计使其可检测基因的可阅读框（ｏｐｅｎｒｅａｄｉｎｇｆｒａｍｅｓ，ＯＲＦｓ）区域，方便快速，近年来在植物遗传多样性分
析［９１１］、遗传连锁图谱构建［１２１４］、基因定位［１５］和比较基因组学研究［１６］等方面得到广泛应用。近年来，在牧草与草
坪草种质资源上开始应用ＳＲＡＰ技术进行遗传多样性研究，如结缕草（犣狅狔狊犻犪犼犪狆狅狀犻犮犪）［１７２０］、黑麦草（犔狅犾犻狌犿
狆犲狉犲狀狀犲）［２１］、野牛草（犅狌犮犺犾狅犱犪犮狋狔犾狅犻犱犲狊）［２２２４］、野生狗牙根（犆狔狀狅犱狅狀犱犪犮狋狔犾狅狀）［２５，２６］、鸭茅（犇犪犮狋狔犾犻狊犵犾狅犿犲狉犪
狋犪）［２７］等均有报道。
我国有较为丰富的马蹄金属野生资源，蕴藏着丰富的优良基因，是品种改良及种质创新的基因来源。国内对
马蹄金研究主要集中在生物学特征、栽培管理、生理生化等方面［２８３１］。本试验采用ＳＲＡＰ－ＰＣＲ扩增技术对已
拥有的我国西南区２０份代表性野生马蹄金种质资源及１份国外引进品种进行分析，希望了解不同种质材料在
ＳＲＡＰ分子水平上的遗传多样性，以及与引进品种间的亲缘关系，为野生马蹄金种质资源的鉴定、利用及其育种
实践提供有效的数据信息。
１　材料与方法
１．１　供试材料
本研究共选取西南区野生马蹄金材料２０份，主要采自云南、四川、贵州、重庆西南地区四省（市），并以美国进
口品种普通马蹄金（ｃｏｍｍｏｎ）为参照（表１），进行遗传多样性分析。资源保育于四川农业大学和贵州省草业研究
所基地资源圃内。
１６４－１７０
２０１０年１２月
　　　草　业　学　报　　　
　　　ＡＣＴＡＰＲＡＴＡＣＵＬＴＵＲＡＥＳＩＮＩＣＡ　　　
第１９卷　第６期
Ｖｏｌ．１９，Ｎｏ．６
 收稿日期：２００９１２２１；改回日期：２０１００１１４
基金项目：贵州省“十一五”重大专项（黔科合重大专项字［２００７］６００６号）和四川省科技厅应用基础研究专项基金（０１ＳＹ０５１２７）资助。
作者简介：付薇（１９８５），女，四川广汉人，在读硕士。Ｅｍａｉｌ：ｆｕｗｅｉｗｅｉ４９＠１６３．ｃｏｍ
通讯作者。Ｅｍａｉｌ：ｇａｎｙｏｕｍｉｎ１９５４＠１６３．ｃｏｍ
表１　试验马蹄金材料及其采集地
犜犪犫犾犲１　犛狅狌狉犮犲狊狅犳犱犻犳犳犲狉犲狀狋犿犪狋犲狉犻犪犾狊狅犳犇．狉犲狆犲狀狊
序号Ｎｏ． 材料编号Ａｃｃｅｓｓｉｏｎ 采集地Ｏｒｉｇｉｎｓ 生境 Ｈａｂｉｔａｔ 海拔Ｌａｔｉｔｕｄｅ（ｍ）
１ Ｙ１ 云南小哨Ｘｉａｏｓｈａｏ，Ｙｕｎｎａｎ 小路边Ａｌｏｎｇｓｉｄｅｗａｙ １９７０
２ Ｙ２ 云南石林Ｓｈｉｌｉｎ，Ｙｕｎｎａｎ 小路边Ａｌｏｎｇｓｉｄｅｗａｙ １８００
３ Ｙ３ 云南晋宁Ｊｉｎｎｉｎｇ，Ｙｕｎｎａｎ 水稻田边Ａｌｏｎｇｐａｄｄｙｆｉｅｌｄ １８９０
４ Ｙ４ 云南宜良Ｙｉｌｉａｎｇ，Ｙｕｎｎａｎ 水稻田边Ａｌｏｎｇｐａｄｄｙｆｉｅｌｄ １５４３
５ Ｓ１ 四川温江 Ｗｅｎｊｉａｎｇ，Ｓｉｃｈｕａｎ 田坎Ｆｉｅｌｄｐｉｔ ５００
６ Ｓ２ 四川温江 Ｗｅｎｊｉａｎｇ，Ｓｉｃｈｕａｎ 田坎Ｆｉｅｌｄｐｉｔ ４０４
７ Ｓ３ 四川成都Ｃｈｅｎｇｄｕ，Ｓｉｃｈｕａｎ 树荫下Ｕｍｂｒａｇｅ ５００
８ Ｓ４ 四川新津Ｘｉｎｊｉｎ，Ｓｉｃｈｕａｎ 菜园Ｇａｒｄｅｎ ５００
９ Ｓ５ 四川眉山 Ｍｅｉｓｈａｎ，Ｓｉｃｈｕａｎ 田间道边Ｉｎｔｅｒｆｉｅｌｄ ５５０
１０ Ｓ６ 四川仁寿Ｒｅｎｓｈｏｕ，Ｓｉｃｈｕａｎ 山坡 Ｈｉｌｓｉｄｅ ３００
１１ Ｓ７ 四川兰田Ｌａｎｔｉａｎ，Ｓｉｃｈｕａｎ 田间道边Ｉｎｔｅｒｆｉｅｌｄ ３５０
１２ Ｓ８ 四川隆昌Ｌｏｎｇｃｈａｎｇ，Ｓｉｃｈｕａｎ 稻田边Ｐａｄｄｙｆｉｅｌｄ ３７４
１３ Ｓ９ 四川大邑Ｄａｙｉ，Ｓｉｃｈｕａｎ 田间道边Ｉｎｔｅｒｆｉｅｌｄ ３１０
１４ Ｓ１０ 四川中江Ｚｈｏｎｇｊｉａｎｇ，Ｓｉｃｈｕａｎ 田坎Ｆｉｅｌｄｐｉｔ ６００
１５ Ｓ１１ 四川纳溪Ｎａｘｉ，Ｓｉｃｈｕａｎ 渔塘边Ｎｅａｒｐｏｕｎｄ ４０４
１６ Ｓ１２ 四川名山 Ｍｉｎｇｓｈａｎ，Ｓｉｃｈｕａｎ 稻田边Ｐａｄｄｙｆｉｅｌｄ ５５０
１７ Ｓ１３ 重庆壁山Ｂｉｓｈａｎ，Ｃｈｏｎｇｑｉｎｇ 竹林Ｂｅｓｉｄｅｂａｍｂｏｏｆｏｒｅｓｔ ３５０
１８ Ｇ１ 贵州独山Ｄｕｓｈａｎ，Ｇｕｉｚｈｏｕ 稻田边Ｐａｄｄｙｆｉｅｌｄ １０１０
１９ Ｇ２ 贵州三都Ｓａｎｄｕ，Ｇｕｉｚｈｏｕ 路边Ａｌｏｎｇｒｏａｄｓｉｄｅ ６００
２０ Ｇ３ 贵州平塘Ｐｉｎｇｔａｎｇ，Ｇｕｉｚｈｏｕ 山坡 Ｈｉｌｓｉｄｅ ８４８
２１ ＣＫ 北京绿冠公司ＴｏｐＧｒｅｅｎ 美国栽培品种Ａｍｅｒｉｃａｎｃｕｌｔｉｖａｒ
１．２　基因组ＤＮＡ的提取及浓度检测
试验于贵州省草业研究所进行。每份种质取０．２ｇ嫩叶，采用广州市达晖生物技术公司的植物基因组ＤＮＡ
提取试剂盒提取马蹄金叶片ＤＮＡ，用无水乙醇沉淀后溶于ＤＮＡ缓冲液，用０．８％的琼脂糖凝胶电泳检测ＤＮＡ
纯度和浓度，将ＤＮＡ样品置于－２０℃冰箱保存。试验开始时，将各个ＤＮＡ样品取出部分稀释至１０ｎｇ／μＬ备
用。
１．３　ＳＲＡＰ反应体系的建立及优化
参照陈万胜等［３２］的研究，经正交优化试验，最终得到ＳＲＡＰ－ＰＣＲ最佳反应体系为：Ｍｇ２＋ １．５ｍｍｏｌ／Ｌ、
ｄＮＴＰ３００μｍｏｌ／Ｌ、引物０．４μｍｏｌ／Ｌ、ＴａｑＤＮＡ聚合酶１．５Ｕ，模板ＤＮＡ浓度６０ｎｇ／μＬ，总体积为２０μＬ。扩增
反应在美国ＢｉｏｒａｄＰＣＲ扩增仪上进行，扩增程序如下：９４℃预变性５ｍｉｎ；９４℃变性１ｍｉｎ，３７℃退火１ｍｉｎ，７２℃
延伸，５个循环；９４℃变性１ｍｉｎ，５２℃１ｍｉｎ，７２℃延伸１ｍｉｎ，３６个循环；７２℃延伸１０ｍｉｎ，４℃保存。
１．４　马蹄金ＳＲＡＰ－ＰＣＲ扩增产物的检测
扩增结束后，在扩增产物中加入４μＬ６×ｌｏａｄｉｎｇｂｕｆｆｅｒ缓冲液混匀，上样于６％的变性聚丙烯酰胺凝胶进行
分离，电泳２ｈ，结束后快速银染检测。
１．５　多态性ＳＲＡＰ引物组合的筛选
参照Ｌｉ和Ｑｕｉｒｏｓ［８］发表的引物，选取８条正向引物，１０条反向引物，自由组合为８０对引物，引物由上海捷
瑞生工合成（表２）。以３份电泳检测质量较高，生境和外观性状差异较大的马蹄金ＤＮＡ进行引物筛选。筛选出
条带丰富，清晰，多态性高的引物组合用于全部材料的ＳＲＡＰ遗传多样性分析。
５６１第１９卷第６期 草业学报２０１０年
表２　犛犚犃犘引物序列
犜犪犫犾犲２　犘狉犻犿犲狉狊犲狇狌犲狀犮犲狊狌狊犲犱犳狅狉犛犚犃犘犪狀犪犾狔狊犻狊
编号Ｃｏｄｅ 正向引物Ｆｏｒｗａｒｄｐｒｉｍｅｒｓ 编号Ｃｏｄｅ 反向引物 Ｒｅｓｅｒｓｅｐｒｉｍｅｒｓ
Ｍｅ１ ５′ＴＧＡＧＴＣＣＡＡＡＣＣＧＧＡＴＡ３′ Ｅｍ１ ５′ＧＡＣＴＧＣＧＴＡＣＧＡＡＴＴＡＡＴ３′
Ｍｅ２ ５′ＴＧＡＧＴＣＣＡＡＡＣＣＧＧＡＧＣ３′ Ｅｍ２ ５′ＧＡＣＴＧＣＧＴＡＣＧＡＡＴＴＴＧＣ３′
Ｍｅ３ ５′ＴＧＡＧＴＣＣＡＡＡＣＣＧＧＡＡＴ３′ Ｅｍ３ ５′ＧＡＣＴＧＣＧＴＡＣＧＡＡＴＴＧＡＣ３′
Ｍｅ４ ５′ＴＧＡＧＴＣＣＡＡＡＣＣＧＧＡＣＣ３′ Ｅｍ４ ５′ＧＡＣＴＧＣＧＴＡＣＧＡＡＴＴＴＧＡ３′
Ｍｅ５ ５′ＴＧＡＧＴＣＣＡＡＡＣＣＧＧＡＡＧ３′ Ｅｍ５ ５′ＧＡＣＴＧＣＧＴＡＣＧＡＡＴＴＡＡＣ３′
Ｍｅ６ ５′ＴＧＡＧＴＣＣＡＡＡＣＯＧＧＴＡＡ３′ Ｅｍ６ ５′ＧＡＣＴＧＣＧＴＡＣＧＡＡＴＴＧＣＡ３′
Ｍｅ７ ５′ＴＧＡＧＴＣＣＡＡＡＣＣＧＧＴＣＣ３′ Ｅｍ７ ５′ＧＡＣＴＧＣＧＴＡＣＧＡＡＴＴＣＡＡ３′
Ｍｅ８ ５′ＴＧＡＧＴＣＣＡＡＡＣＣＧＧＴＧＣ３′ Ｅｍ８ ５′ＧＡＣＴＧＣＧＴＡＣＧＡＡＴＴＣＴＧ３′
Ｅｍ９ ５′ＧＡＣＴＧＣＧＴＡＣＧＡＡＴＴＣＧＡ３′
Ｅｍ１０ ５′ＧＡＣＴＧＣＧＴＡＣＧＡＡＴＴＣＡＧ３′
１．６　数据统计与分析
将ＳＲＡＰ扩增产物每个条带视为１个位点，统计
位点总数和多态性位点数。按条带有或无分别赋值，
有带记为１，无带记为０，建立二元矩阵。具有相同迁
移率的条带视为同一条带。用 ＮＴＳＹＳｐｃ２．０２ｃ软
件［３３］计算材料间遗传相似系数（ｇｅｎｅｔｉｃｓｉｍｉｌａｒｉｔｙ，
ＧＳ），非加权成组配对算术平均法（ＵＰＧＭＡ）进行聚
类分析。
２　结果与分析
２．１　马蹄金ＳＲＡＰ多态性分析
１９个ＳＲＡＰ随机引物在供试材料中共扩增出
２１２条带，其中１５６条带具有多态性，多态性条带比率
（ｐｅｒｃｅｎｔａｇｅｏｆｐｏｌｙｍｏｒｐｈｉｓｍｂａｎｄｓ，ＰＰＢ）为７３．５８％，平
均每个引物扩增出１１．１条带（表３）。扩增位点最多
的是 Ｍｅ２＋Ｅｍ６，位点数为１７；扩增位点最少的是
Ｍｅ６＋Ｅｍ６、Ｍｅ６＋Ｅｍ７和 Ｍｅ８＋Ｅｍ２，位点数为７。
进一步比较各个引物的ＰＰＢ值，多态性最高的引物是
Ｍｅ６＋Ｅｍ３，达到９０．９１％；多态性最低的引物是 Ｍｅ８
＋Ｅｍ９，为５８．３３％，不同随机引物扩增差异较明显。
Ｍｅ８＋Ｅｍ４引物组合的ＳＲＡＰ扩增带谱如图１。
２．２　马蹄金ＳＲＡＰ遗传相似系数分析
将扩增所得到的２１２条条带在 ＮＴＳＹＳｐｃ下计
算材料间的遗传相似系数（表４），ＧＳ值的变化范围为
０．４４４～０．９８０，平均值为０．７１１２，遗传距离在０．０２０
～０．５５６，平均遗传距离为０．２８９。遗传相似系数最大
值出现在材料Ｙ３与Ｙ４之间，为０．９８４；材料Ｙ２与
Ｓ１２遗传相似系数最小，为０．４４４。ＧＳ值越大，说明
表３　１９个犛犚犃犘引物对２１份马蹄金材料扩增结果
犜犪犫犾犲３　犃犿狆犾犻犳犻犮犪狋犻狅狀狉犲狊狌犾狋狊狅犳狋犺犲２１犿犪狋犲狉犻犪犾狊狅犳
犇．狉犲狆犲狀狊狑犻狋犺狋犺犲１９犛犚犃犘狆狉犻犿犲狉狊
引物
Ｐｒｉｍｅｒ
扩增条带数
Ａｍｐｌｉｆｉｅｄ
ｂａｎｄｓ
多态条带数
Ｐｏｌｙｍｏｒｐｈｉｃ
ｂａｎｄｓ
多态百分比
Ｐｅｒｃｅｎｔａｇｅｏｆｐｏｌｙｍｏｒｐｈｉｃ
ｂａｎｄｓ（％）
Ｍｅ１＋Ｅｍ３ １０ ７ ７０．００
Ｍｅ２＋Ｅｍ４ １３ ９ ６９．２３
Ｍｅ２＋Ｅｍ６ １７ １４ ８２．３５
Ｍｅ２＋Ｅｍ７ １１ ８ ７２．７３
Ｍｅ２＋Ｅｍ１０ １１ ８ ７２．７３
Ｍｅ３＋Ｅｍ２ １２ １０ ８３．３３
Ｍｅ５＋Ｅｍ２ １０ ６ ６０．００
Ｍｅ５＋Ｅｍ４ １４ １０ ７１．４３
Ｍｅ５＋Ｅｍ９ １０ ９ ９０．００
Ｍｅ５＋Ｅｍ１０ １２ ９ ７５．００
Ｍｅ６＋Ｅｍ３ １１ １０ ９０．９１
Ｍｅ６＋Ｅｍ６ ７ ６ ８５．７１
Ｍｅ６＋Ｅｍ７ ７ ６ ８５．７１
Ｍｅ７＋Ｅｍ２ １０ ６ ６０．００
Ｍｅ７＋Ｅｍ４ ９ ７ ７７．７８
Ｍｅ８＋Ｅｍ２ ７ ６ ８５．７１
Ｍｅ８＋Ｅｍ３ １４ ９ ６４．２９
Ｍｅ８＋Ｅｍ４ １５ ９ ６０．００
Ｍｅ８＋Ｅｍ９ １２ ７ ５８．３３
总计Ｔｏｔａｌ ２１２ １５６
平均Ａｖｅｒａｇｅ １１．１ ８．２ ７３．５８
６６１ ＡＣＴＡＰＲＡＴＡＣＵＬＴＵＲＡＥＳＩＮＩＣＡ（２０１０） Ｖｏｌ．１９，Ｎｏ．６
材料间亲缘关系越近；ＧＳ值越小，材料间的亲缘关系越远，由此可见，材料Ｙ３与Ｙ４亲缘关系最近，材料Ｙ２与
Ｓ１２之间亲缘关系最远。
２．３　马蹄金聚类分析
基于遗传相似系数，利用ＵＰＧＭＡ法对供试２１份材料进行聚类分析。在犔＝０．７８处可将所有２１份马蹄金
材料分为３个类群（图２）。第Ⅰ类群由云南材料Ｙ１、Ｙ２、四川材料Ｓ１、Ｓ２、Ｓ４、Ｓ５、Ｓ６共７份材料组成，该类群种
图１　犕犲８＋犈犿４引物组合的犛犚犃犘扩增谱带
犉犻犵．１　犘狉狅犳犻犾犲狅犳犛犚犃犘犪犿狆犾犻犳犻犮犪狋犻狅狀狌狊犻狀犵犕犲８＋犈犿４狆狉犻犿犲狉犮狅犿犫犻狀犪狋犻狅狀
１～２１：见表１Ｓｅｅｔａｂｌｅ１；Ｍ：标准ＤＬ２０００ＤＮＡｍａｒｋｅｒ
表４　２１份马蹄金材料基于犛犚犃犘标记的遗传相似系数
犜犪犫犾犲４　犌犲狀犲狋犻犮狊犻犿犻犾犪狉犻狋狔狅犳２１犇．狉犲狆犲狀狊犫犪狊犲犱狅狀犛犚犃犘犪狀犪犾狔狊犻狊
项目
Ｉｔｅｍ
Ｙ１ Ｙ２ Ｙ３ Ｙ４ Ｓ１ Ｓ２ Ｓ３ Ｓ４ Ｓ５ Ｓ６ Ｓ７ Ｓ８ Ｓ９ Ｓ１０ Ｓ１１ Ｓ１２ Ｓ１３ Ｇ１ Ｇ２ Ｇ３ ＣＫ
Ｙ１ １．０００
Ｙ２ ０．８３４１．０００
Ｙ３ ０．４８８０．４５９１．０００
Ｙ４ ０．５０７０．４７８０．９８０１．０００
Ｓ１ ０．８２４０．８１５０．４８８０．５０７１．０００
Ｓ２ ０．８０００．８４９０．４８３０．５０２０．８９８１．０００
Ｓ３ ０．５５１０．５３２０．８７８０．８７８０．４７３０．５１７１．０００
Ｓ４ ０．７５６０．７４６０．５７６０．５９５０．９０２０．８６８０．５２２１．０００
Ｓ５ ０．７６１０．７７１０．５３２０．５５１０．８１００．８４４０．５６６０．８３９１．０００
Ｓ６ ０．７６６０．７７６０．５２７０．５４６０．８０５０．８４９０．５７１０．８２４０．８９８１．０００
Ｓ７ ０．５２２０．５１２０．７９００．７８００．４７３０．５４６０．７８５０．５５１０．５９５０．６２０１．０００
Ｓ８ ０．４９８０．４６８０．８４４０．８２４０．５１７０．５２２０．７７１０．５９５０．５４１０．５５６０．８８８１．０００
Ｓ９ ０．５０７０．４７８０．８３４０．８２４０．５３７０．５４１０．７７１０．６０５０．５６１０．５６６０．８６８０．９１２１．０００
Ｓ１０ ０．４９８０．４７８０．８７３０．８７３０．５２７０．５３２０．８２９０．５９５０．５５１０．５５６０．８２００．８７３０．８８３１．０００
Ｓ１１ ０．４９８０．４６８０．８４４０．８２４０．５３７０．５２２０．７６１０．５９５０．５４１０．５５６０．８６８０．９３２０．９１２０．９０２１．０００
Ｓ１２ ０．５１２０．４４４０．８２９０．８１００．５３２０．５２７０．７４６０．５９００．５４６０．５６１０．８６３０．９４６０．８９８０．８８８０．９５６１．０００
Ｓ１３ ０．５２７０．４６８０．８０５０．７８５０．５４６０．５４１０．７４１０．５９５０．５５１０．５７６０．８３９０．９３２０．８７３０．８６３０．９５１０．９５６１．０００
Ｇ１ ０．５１７０．４７８０．８２４０．８０５０．５５６０．５５１０．７７１０．６２４０．５７１０．５８５０．８３９０．９１２０．８９３０．８６３０．８９３０．９２７０．９０２１．０００
Ｇ２ ０．５２２０．４９３０．８１００．８０００．５６１０．５５６０．７５６０．６３９０．５７６０．５８００．８１５０．８９８０．８９８０．８４９０．８９８０．８８３０．８９８０．９１７１．０００
Ｇ３ ０．７５６０．７６６０．４７８０．４９８０．７４６０．８３９０．５１２０．７５６０．７８００．７５６０．５８００．５４６０．５４６０．５４６０．５３７０．５５１０．５６６０．５６６０．５７１１．０００
ＣＫ ０．７６１０．７６１０．４７３０．４９３０．７４１０．８０５０．５１７０．７２２０．７９５０．７７１０．５７６０．５２２０．５１２０．５３２０．５０２０．５３７０．５５１０．５５１０．５２７０．９０７１．０００
７６１第１９卷第６期 草业学报２０１０年
图２　２１份马蹄金材料基于犖犲犻－犔犻相似系数的犝犘犌犕犃聚类图
犉犻犵．２　犝犘犌犕犃犱犲狀犱狉狅犵狉犪犿犳狅狉犇．狉犲狆犲狀狊犫犪狊犲犱狅狀犖犲犻－犔犻’狊犌犛犮狅犲犳犳犻犮犻犲狀狋
质叶片普遍较大，叶色深绿，主茎长度总体比第Ⅱ类群稍短，除Ｓ２外，其他８份材料分枝能力较弱。７份材料又
可细分为２组。第１组包括Ｙ１、Ｙ２两份材料，同源于云南，这２份材料叶片大，叶色绿，叶皱褶少且浅，草层较
高；第２组全部由四川材料组成，包括Ｓ１、Ｓ２、Ｓ４、Ｓ５、Ｓ６五份材料，其中Ｓ１、Ｓ２主茎长，且叶片大小仅次于ＣＫ，除
Ｓ６外，其余材料叶色深绿，草层高，皱褶较少且较浅。第Ⅱ类群仅由贵州材料Ｇ３和美国品种ＣＫ组成，但根据形
态学特征观测，二者形态差异明显。第Ⅲ类群由云南材料Ｙ３、Ｙ４、四川材料Ｓ３、Ｓ７、Ｓ８、Ｓ９、Ｓ１０、Ｓ１１、Ｓ１２、Ｓ１３和
贵州材料Ｇ１、Ｇ２共１２份材料组成，这一类群种质叶片较第Ⅰ类小，叶色绿，主茎节总体长于第Ⅰ类群，分枝能力
强。进一步对该大类分析，可细分为２组。第１组由云南材料Ｙ３、Ｙ４和四川Ｓ３组成，这３份材料叶小，叶色绿，
草层较低矮，叶皱褶少，Ｙ３和Ｓ３分枝能力相对较弱；第２组包括四川材料Ｓ７、Ｓ８、Ｓ９、Ｓ１０、Ｓ１１、Ｓ１２、Ｓ１３和贵州
材料Ｇ１、Ｇ２，其中Ｓ７、Ｓ１１和Ｇ１、Ｇ２种质叶皱褶少且浅，是所有２１份材料中，分枝能力最强的一组，Ｓ７、Ｓ１１叶片
相对偏大，草层较高，主茎短，Ｇ１、Ｇ２叶小，株丛低矮，分枝能力最强，Ｓ８、Ｓ９、Ｓ１０、Ｓ１２、Ｓ１３这５份材料主茎较长，
分枝能力强，Ｓ８、Ｓ９叶小，浅绿，草层矮，Ｓ１２、Ｓ１３叶大，叶绿，草层相对较高。
３　讨论
３．１　野生马蹄金种质资源间存在着丰富的遗传多样性
我国是马蹄金属植物的原产地之一，秦岭－淮河以南的热带、亚热带地区野生马蹄金广泛分布，前人已通过
形态学标记对我国马蹄金属植物的遗传多样性进行了研究［３２，３３］。结果表明，我国野生马蹄金在形态上存在着丰
富的遗传变异，本研究通过ＳＲＡＰ分子标记技术对西南地区野生马蹄金植物的遗传多样性进行研究，结果１９对
引物扩增出１５６条多态性条带，多态性比率为７３．５８％，不同种质资源间的遗传相似性变异范围很大，为０．４４４～
０．９８０，从分子标记的角度进一步说明了我国西南区野生马蹄金种质资源间存在丰富的遗传变异。野生马蹄金植
物间丰富的遗传变异为我国马蹄金优良品系选育、开发和利用提供了空间，避免了因遗传基础狭窄而给育种工作
造成的限制。因此，对野生马蹄金进行深入研究，选育优良的马蹄金新品种，既具有资源优势，又具有开发潜力。
３．２　西南区野生马蹄金聚类结果与马蹄金起源及分布范围有关
西南区野生马蹄金聚类结果表现出一定的地域性规律，即来源相同或生态坏境相似的材料大致聚在一起，该
结果同王昆蕾［３４，３５］研究结论相似。ＩＳＳＲ分子标记对如来自云南的材料Ｙ１、Ｙ２、Ｙ３、Ｙ４，虽然没有聚在同一大
类，但它们也在各大类中单独聚在一起。第Ⅰ类群中，来自四川的５份材料Ｓ１、Ｓ２、Ｓ４、Ｓ５、Ｓ６遗传相似系数变异
范围０．８１０～０．９０２，遗传距离较近，首先聚在一起，可认为是与它们的起源和分布区域相似性有关，来自云南的２
８６１ ＡＣＴＡＰＲＡＴＡＣＵＬＴＵＲＡＥＳＩＮＩＣＡ（２０１０） Ｖｏｌ．１９，Ｎｏ．６
份材料Ｙ１和Ｙ２遗传相似系数０．８３４，生态环境相似，也能相互聚在一起。第Ⅲ类群中，来自四川的材料Ｓ８、
Ｓ１１、Ｓ１２、Ｓ１３，相似系数变异范围０．８７３～０．９５６，遗传距离近，其地理分布范围也十分接近。从叶色，草层高度，
分枝能力观察发现，来自云南的另外２份材料Ｙ３、Ｙ４极为相似，相似系数在供试材料中最高，达０．９８０，二者生
态环境较接近，很有可能两者是同一居群，但是在本研究中Ｙ３和Ｙ４均只有１份材料，所以本研究结果只能说明
这２份材料间的相似性，关于两者是否属同一材料还有待于进一步研究。
３．３　野生马蹄金不同材料的交叉聚类现象
所有材料并不是完全按照地理来源划分进行聚类的，而出现了交叉聚类现象。来自四川的１３份材料并不能
完全聚在一起，同样的，来自贵州的３份材料Ｇ１、Ｇ２、Ｇ３也被划分到不同类群，Ｇ１、Ｇ２遗传距离较近，首先聚在
一起后，再与其他四川、云南、重庆材料聚为第Ⅱ类，而Ｇ３材料却与美国品种ＣＫ聚在一起，ＣＫ是所有２１份材
料中叶片最大，草层最高，叶色最深的材料，尽管两者相似系数达０．９０７，但外观形态和繁殖能力上差异较大。综
上所述，造成聚类划分交叉的现象可能有以下几方面原因：１）所有材料来自地域广阔、生境复杂多样的四川盆地
和云贵高原地区，是在大尺度地理条件下的研究，各地理类群海拔、经纬度、温度、土壤类型和环境等都有差别，由
于生境不同阻碍了基因漂移而造成较大的遗传差异。２）可能发生了基因突变，物种在进化过程中，有个别的基因
发生了变异，且该突变体能较好地适应当地的环境，这个变异基因就能得到保存［２６］。３）可能是自然因素和人类
活动造成的，江河冲刷、风力输送、鸟类和人类交通工具的携带等都可能使其转入异地扩展繁殖。
３．４　ＳＲＡＰ用于马蹄金种质分析可行性
与其他分子标记技术相比，ＳＲＡＰ标记在基因组中含量丰富且分布均匀，能够提供更加丰富的多态信息。由
于在不同物种和不同个体间具有一定的多态性，ＳＲＡＰ技术也成功用于草种质鉴定和分析评价中。薛丹丹等［１９］
用ＳＲＡＰ进行结缕草杂交后代鉴定，３７个杂交后代中有３２个后代具有父本特征带，杂种扩增谱带清晰、稳定且
后代出现了丰富的变异。采用相同标记手段，野生狗牙根种质ＰＰＢ＝７９．８％［２６］，垂穗披碱草（犈犾狔犿狌狊狀狌狋犪狀狊）
ＰＰＢ＝８５．３９％［３６］，鸭茅种质ＰＰＢ＝８２．０８％［２７］。本研究采用ＳＲＡＰ标记技术对２１份马蹄金种质进行聚类分析，
多态性比率７３．５８％，之所以有这样的差别，可能是研究的物种不同。我国野生马蹄金材料间存在着较为丰富的
遗传变异，同时也表明ＳＲＡＰ技术可以作为研究马蹄金遗传多样性简单、有效的手段。此外，美国品种ＣＫ在叶
色、叶片大小、草层高度上与所有供试材料存在较大差异，尽管在聚类分析中ＣＫ没有单独聚为一类，但该材料与
其他１９份材料（除Ｇ３外）间的变异系数范围为０．４７３～０．８０５，ＧＳ均值０．６１３，遗传距离较远，同Ｇ３材料单独聚
为第Ⅱ类，明显与其他野生马蹄金划分开来，因此，在今后的研究中可尝试采用ＳＲＡＰ分子标记对我国野生马蹄
金材料进行分类学鉴定。
参考文献：
［１］　中国科学院植物研究所．中国高等植物图鉴（第三册）［Ｍ］．北京：科学出版社，１９８３．
［２］　中国科学院中国植物志编辑委员会．中国植物志（第６４卷，第１分册）［Ｍ］．北京：科学出版社，１９７９．
［３］　ＰｅｒｅｉｒａＪＡ，ＱｕｉｎｔａｎａＲＤ，ＭｏｎｇｅＳ．Ｄｉｅｔｓｏｆｐｌａｉｎｓｖｉｚｃａｃｈａ，ｇｒｅａｔｅｒｒｈｅａａｎｄｃａｔｔｌｅｉｎＡｒｇｅｎｔｉｎａ［Ｊ］．ＪｏｕｒｎａｌｏｆＲａｎｇｅＭａｎ
ａｇｅｍｅｎｔ，２００３，５６：１，１３２０．
［４］　刘光明，彭友林，宋泽运．马蹄金的形态组织鉴定［Ｊ］．常德师范学院学报（自然科学版），２００１，１３（１）：７３，７６７７．
［５］　谢彩云，尚以顺．优良草坪植物马蹄金的生物学特性及栽培管理技术［Ｊ］．贵州农业科学，２００１，２９（１）：５１５２．
［６］　黄必志．马蹄金草坪的建植与养护技术［Ｊ］．草原与草坪，２０００，３（１）：４１４２．
［７］　ＢｒｅｄｅＡＤ，ＳｕｎＳ．ＤｉｖｅｒｉｓｔｙｏｆｔｕｒｆｇｒａｓｓｇｅｒｍｐｌａｓｉｎｔｈｅＡｓｉａｎＰａｃｉｆｉｃｒｉｍｃｏｕｎｔｒｉｅｓａｎｄｐｏｔｅｎｔｉａｌｆｏｒｒｅｄｕｃｉｎｇｇｅｎｅｔｉｃｖｕｌｎｅｒ
ａｂｉｌｉｔｙ［Ｊ］．ＣｒｏｐＳｃｉｅｎｃｅ，１９９５，３５：３１７３２１．
［８］　ＬｉＧ，ＱｕｉｒｏｓＣＦ．Ｓｅｑｕｅｎｃｅｒｅｌａｔｅｄａｍｐｌｉｆｉｅｄｐｏｌｙｍｏｒｐｈｉｓｍ（ＳＲＡＰ），ａｎｅｗｍａｒｋｅｒｓｙｓｔｅｍｂａｓｅｄｏｎａｓｉｍｐｌｅＰＣＲｒｅａｃｔｉｏｎ：
Ｉｔｓａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎｔｏｍａｐｐｉｎｇａｎｄｇｅｎｅｔａｇｇｉｎｇｉｎ犅狉犪狊狊犻犮犪［Ｊ］．ＴｈｅｏｒｅｔｉｃａｌａｎｄＡｐｐｌｉｅｄＧｅｎｅｔｉｃｓ，２００１，１０３：４５５４６１．
［９］　李慧芝，尹燕萍，张春庆，等．ＳＲＡＰ在葱栽培品种遗传多样性研究中的适用性分析［Ｊ］．园艺学报，２００７，３４（４）：９２９９３４．
［１０］　昝逢刚，吴转娣，曾淇，等．荔枝种质遗传多样性的ＳＲＡＰ分析［Ｊ］．分子植物育种，２００９，７（３）：５６２５６８．
［１１］　张西西，徐进，王涛，等．万寿菊杂交一代遗传多态性的ＳＲＡＰ标记分析［Ｊ］．园艺学报，２００８，３５（８）：１２２１１２２６．
［１２］　ＬｉＧ，ＧａｏＭ，ＹａｎｇＢ，犲狋犪犾．Ｇｅｎｅｆｏｒａｌｉｇｎｍｅｎｔｂｅｔｗｅｅｎｔｈｅ犅狉犪狊狊犻犮犪ａｎｄ犃狉狅犫犻犱狅狆狊犻狊ｇｅｎｏｍｅｓｂｙｄｉｒｅｃｔｔｒａｎｓｃｒｉｐｔｏｍｅ
９６１第１９卷第６期 草业学报２０１０年
ｍａｐｐｉｎｇ［Ｊ］．ＴｈｅｏｒｅｔｉｃａｌａｎｄＡｐｐｌｉｅｄＧｅｎｅｔｉｃｓ，２００３，１０７：１６８１８０．
［１３］　缪体云，薄天岳，陈锦秀．甘蓝种质资源遗传多样性的ＳＲＡＰ分析［Ｊ］．分子植物育种，２０１０，８（１）：９４９８．
［１４］　郑轶琦，刘建秀．草坪草分子遗传图谱的构建与应用研究进展［Ｊ］．草业学报，２００９，１８（１）：１５５１６２．
［１５］　海燕，何宁，康明辉，等．新型分子标记ＳＲＡＰ及其应用［Ｊ］．河南农业科学，２００６，（９）：９１２．
［１６］　ＦｅｒｒｉｏｌＭ，ＰｉｃｏＢ，ＮｕｅｚＦ．Ｇｅｎｅｔｉｃｄｉｖｅｒｓｉｔｙｏｆａｇｅｒｍｐｌａｓｍｃｏｌｅｃｔｉｏｎｏｆ犆狌犮狌狉犫犻狋犪狆犲狆狅ｕｓｉｎｇＳＲＡＰａｎｄＡＦＬＰｍａｒｋｅｒｓ［Ｊ］．Ｔｈｅｏ
ｒｅｔｉｃａｌａｎｄＡｐｐｌｉｅｄＧｅｎｅｔｉｃｓ，２００３，１０７：２７１２８３．
［１７］　郭海林，刘建秀，高鹤，等．结缕草属优良品系ＳＳＲ指纹图谱的构建［Ｊ］．草业学报，２００７，１６（２）：５３５９．
［１８］　郭海林，郑轶琦，陈宣，等．结缕草属植物种间关系和遗传多样的ＳＲＡＰ标记分析［Ｊ］．草业学报，２００９，１８（５）：２０１２１０．
［１９］　薛丹丹，郭海林，郑轶琦，等．结缕草属植物杂交后代杂种真实性鉴定———ＳＲＡＰ分子标记［Ｊ］．草业学报，２００９，１８（１）：
７２７９．
［２０］　陈宣，郭海林，薛丹丹，等．结缕草属植物耐盐性ＳＲＡＰ分子标记研究［Ｊ］．草业学报，２００９，１８（２）：６６７５．
［２１］　季杨，张新全，马啸，等．多花黑麦草品种（系）间杂交及其杂种后代ＳＲＡＰ遗传分析［Ｊ］．草业学报，２００９，１８（４）：２６０２６５．
［２２］　ＢｕｄａｋＨ，ＳｈｅａｒｒｍａｎＲＣ，ＰａｒｍａｋｓｉｚＩ，犲狋犪犾．ＭｏｌｅｃｕｌａｒｃｈａｒａｃｔｅｒｉｚａｔｉｏｎｏｆＢｕｆｆａｌｏｇｒａｓｓｇｅｒｍｐｌａｓｍｕｓｉｎｇｓｅｑｕｅｎｃｅｒｅｌａｔｅｄ
ａｍｐｌｉｆｉｅｄｐｏｌｙｍｏｒｐｈｉｓｍｍａｋｅｒｓ［Ｊ］．ＴｈｅｏｒｅｔｉｃａｌａｎｄＡｐｐｌｉｅｄＧｅｎｅｔｉｃｓ，２００４，１０８：３２８３３４．
［２３］　ＢｕｄａｋＨ，ＳｈｅａｒｍａｎＲＣ，ＧａｕｓｓｏｉｎＲＥ，犲狋犪犾．Ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎｏｆｓｅｑｕｅｎｃｅｒｅｌａｔｅｄａｍｐｌｉｆｉｅｄｐｏｌｙｍｏｒｐｈｉｓｍｍａｋｅｒｓｆｏｒｃｈａｒａｃ
ｔｅｒ２ｉｚａｔｉｏｎｏｆｔｕｒｆｇｒａｓｓｓｐｅｃｉｅｓ［Ｊ］．Ｈｏｒｔｓｃｉｅｎｃｅ，２００４，３９（５）：９５５９５８．
［２４］　ＢｕｄａｋＨ，ＳｈｅａｒｍａｎＲＣ，ＰａｒｍａｋｓｉｚＩ，犲狋犪犾．Ｃｏｍｐａｒａｔｉｖｅａｎａｌｙｓｉｓｏｆｓｅｅｄｅｄａｎｄｖｅｇｅｔａｔｉｖｅｂｉｏｔｙｐｅｂｕｆｆａｌｏｇｒａｓｓｅｓｂａｓｅｄｏｎ
ｐｈｙｔｏｇｅｎｅｔｉｃｒｅｌａｔｉｏｎｓｈｉｐｕｓｉｎｇＩＳＳＲｓ，ＳＳＲｓ，ＲＡＰＤｓａｎｄＳＲＡＰ［Ｊ］．ＴｈｅｏｒｅｔｉｃａｌａｎｄＡｐｐｌｉｅｄＧｅｎｅｔｉｃｓ，２００４，１０９：２８０２８８．
［２５］　王志勇，袁学军，刘建秀，等．狗牙根ＳＲＡＰ－ＰＣＲ反应体系优化及引物筛选［Ｊ］．草业学报，２００８，１７（３）：７９８５．
［２６］　易杨杰，张新全，黄琳凯，等．野生狗牙根种质遗传多样性的ＳＲＡＰ研究［Ｊ］．遗传，２００８，３０（１）：９４１００．
［２７］　曾兵．鸭茅种质资源遗传多样性的分子标记及优异种质评价［Ｄ］．雅安：四川农业大学，２００７．
［２８］　萧运峰，高洁．草坪植物———马蹄金的研究［Ｊ］．四川草原，１９９７，２（４）：４３４５．
［２９］　陈燕，刘忠义，干友民，等．野生马蹄金无性系构件种群组成及生物量结构变异性［Ｊ］．江西农业学报，２００８，２０（２）：２３２５．
［３０］　古长标，郭成宝，唐泉，等．南京地区马蹄金草坪草的引种与利用［Ｊ］．江苏农业科学，２０００，２：５８５９．
［３１］　田志宏，严寒，许本波，等．马蹄金下胚轴离培养与植株再生［Ｊ］．湖北农学院学报，２００２，２２（６）：４９７５００．
［３２］　陈万胜，王元英，罗成刚，等．利用正交设计优化烟草ＳＲＡＰ反应体系［Ｊ］．分子植物育种，２００８，６（１）：１７７１８２．
［３３］　ＲｏｈｌｆＦＪ．ＮＴＳＹＳｐｃ，ＮｕｍｅｒｉｃａｌＴａｘｏｎｏｍｙａｎｄＭｕｌｔｉｖａｒｉａｔｅＡｎａｌｙｓｉｓＳｙｓｔｅｍ（Ｖｅｒｓｉｏｎ２．１）［Ｍ］．ＮｅｗＹｏｒｋ：ＥｘｅｔｅｒＳｏｆｔ
ｗａｒｅ，２００１．
［３４］　王昆蕾，干友民，费凌，等．西南区野生马蹄金居群生态特性及形态变异［Ｊ］．湖北农业科学，２００６，４５（６）：７９８７９８．
［３５］　王昆蕾．西南区野生马蹄金遗传多样性研究［Ｄ］．雅安：四川农业大学，２００７．
［３６］　陈智华，苗佳敏，钟金城，等．野生垂穗披碱草种质遗传多样性的ＳＲＡＰ研究［Ｊ］．草业学报，２００９，１８（５）：１９２２００．
犌犲狀犲狋犻犮犱犻狏犲狉狊犻狋狔狅犳犇犻犮犺狅狀犱狉犪狉犲狆犲狀狊犵犲狉犿狆犾犪狊犿犻狀狊狅狌狋犺狑犲狊狋犆犺犻狀犪犫狔犛犚犃犘
ＦＵ Ｗｅｉ１，２，ＧＡＮＹｏｕｍｉｎ１，ＷＵＪｉａｈａｉ２，ＷＡＮＧＸｉａｏｌｉ２，ＣＨＥＮＷｅｉ２，ＺＨＡＮＧＪｉａｎｂｏ２
（１．ＳｉｃｈｕａｎＡｇｒｉｃｕｌｔｕｒａｌＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，Ｙａ’ａｎ６２５０１４，Ｃｈｉｎａ；２．ＧｕｉｚｈｏｕＰｒａｔａｃｕｌｔｕｒａｌ
Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ，Ｇｕｉｙａｎｇ５５０００１，Ｃｈｉｎａ）
犃犫狊狋狉犪犮狋：Ｔｈｅｇｅｎｅｔｉｃｄｉｖｅｒｓｉｔｙｏｆ２１犇犻犮犺狅狀犱狉犪狉犲狆犲狀狊，ｗｅｒｅａｎａｌｙｚｅｄｕｓｉｎｇ１９ｈｉｇｈｌｙｐｏｌｙｍｏｒｐｈｉｃａｎｄｓｔａｂｌｅ
ｐｒｉｍｅｒｐａｉｒｓｓｅｌｅｃｔｅｄｆｒｏｍ８０ｐａｉｒｓｏｆＳＲＡＰｐｒｉｍｅｒｓａｎｄｔｈｅ１９ｐｒｉｍｅｒｐａｉｒｓｐｒｏｄｕｃｅｄ２１２ｂａｎｄｓ，ｉｎｃｌｕｄｉｎｇ１５６
ｐｏｌｙｍｏｒｐｈｉｃｂａｎｄｓ（８．２ｂａｎｄｓｐｅｒｐｒｉｍｅｒｐａｉｒ）．Ｔｈｅａｖｅｒａｇｅｐｅｒｃｅｎｔａｇｅｏｆｐｏｌｙｍｏｒｐｈｉｃｂａｎｄｓｗａｓ７３．５８％．
Ｇｅｎｅｔｉｃｓｉｍｉｌａｒｉｔｙｏｆ犇．狉犲狆犲狀狊ｗａｓｃａｌｃｕｌａｔｅｄｂｙＮｅｉ’ｓｍｅｔｈｏｄａｎｄｓｈｏｗｅｄｔｈａｔｔｈｅｇｅｎｅｔｉｃｓｉｍｉｌａｒｉｔｙｒａｎｇｅｄ
ｆｒｏｍ０．４４４－０．９８０，ａｎｄｔｈｅａｖｅｒａｇｅＮｅｉ’ｓｃｏｅｆｆｉｃｉｅｎｔｗａｓ０．７６．Ｉｔｓｕｇｇｅｓｔｅｄｔｈａｔｔｈｅｒｅｗａｓａｒｉｃｈｇｅｎｅｔｉｃ
ｄｉｖｅｒｓｉｔｙａｍｏｎｇｔｈｅｒｅｓｏｕｒｃｅｓｏｆ犇．狉犲狆犲狀狊ｔｅｓｔｅｄ．ＴｈｅｓｈａｐｅｏｆｔｈｅＳＲＡＰｄｅｎｄｒｏｇｒａｍｓｈｏｗｅｄｔｈａｔｔｈｅ２１
ｍａｔｅｒｉａｌｓｃｏｕｌｄｂｅｄｉｖｉｄｅｄｉｎｔｏｔｈｒｅｅｇｒｏｕｐｓｗｉｔｈ０．７８ｔｈｒｅｓｈｏｌｄｓ，ａｎｄｍａｔｅｒｉａｌｓｆｒｏｍｔｈｅｓａｍｅｏｒｉｇｉｎｆｒｅｑｕｅｎｔ
ｌｙｃｌｕｓｔｅｒｅｄｉｎｔｏｔｈｅｓａｍｅｇｒｏｕｐ．Ｔｈｅｒｅｓｅａｒｃｈｉｎｄｉｃａｔｅｄａｃｏｒｒｅｌａｔｉｏｎａｍｏｎｇｔｈｅｗｉｌｄｒｅｓｏｕｒｃｅｓａｎｄｔｈｅｉｒｇｅｏ
ｇｒａｐｈｉｃａｌａｎｄｅｃｏｌｏｇｉｃａｌｅｎｖｉｒｏｎｍｅｎｔｓ．
犓犲狔狑狅狉犱狊：犇犻犮犺狅狀犱狉犪狉犲狆犲狀狊；ＳＲＡＰ；ｇｅｎｅｔｉｃｄｉｖｅｒｓｉｔｙ；ｃｌｕｓｔｅｒａｎａｌｙｓ
０７１ ＡＣＴＡＰＲＡＴＡＣＵＬＴＵＲＡＥＳＩＮＩＣＡ（２０１０） Ｖｏｌ．１９，Ｎｏ．６