全 文 ：书几种禾本科牧草内生细菌的分布特性
车建美１，刘波１，张彦１，胡桂萍１，黄勤楼２，陈忠钿２，翁伯琦２
（１．福建省农业科学院农业生物资源研究所，福建 福州３５０００３；２．福建省农业科学院农业生态研究所，福建 福州３５００１３）
摘要：不同禾本科牧草植株内生细菌含量差异显著，杂交狼尾草闽牧六号内生细菌含量最高，达２６．８００×１０４
ＣＦＵ／ｇ。具体到各个部位，禾本科牧草不同部位内生细菌含量差异也显著。通过微生物鉴定系统对内生菌进行鉴
定的结果表明，６４株内生细菌中与 ＭＩＤＩ数据库比较相似性指数大于０．５００，可确定其菌种名称的有５０株，属于１９
个种，隶属于１２个属。以分离到的１９种内生菌为样本，以各菌株在各部位出现与否为指标，用类平均法对数据进
行系统聚类分析，当λ＝８．３５时，可将１９种内生细菌分为４个大类群。从聚类结果显示，内生菌与宿主植株和不同
分离部位都存在相关性，与宿主植株的关系更密切。
关键词：禾本科牧草；内生细菌；脂肪酸检测；分布特性
中图分类号：Ｓ５４３．０１；Ｑ９３９．１ 文献标识码：Ａ 文章编号：１００４５７５９（２０１０）０３０１２４０８
植物内生菌（ｅｎｄｏｐｈｙｔｅ）是指那些在其生活史的一定阶段或全部阶段生活于健康植物的各种组织和器官内
部的真菌或细菌，既可以产生各种化学物质，又可以通过竞争或其他作用来抑制杀死各种致病菌，对植物组织没
有引起明显病害症状的菌，包括那些生活史中某一阶段营表面生的腐生菌，对宿主暂时没有伤害的潜伏性病原菌
（ｌａｔｅｎｔｐａｔｈｏｇｅｎｓ）和菌根菌［１］。
自１８９８年Ｖｏｇｌ［２］从毒麦种子内分离出第１株内生真菌以来，植物内生菌作为一种新的微生物资源受到了
广泛关注［３，４］。有关植物内生细菌的研究据不完全资料统计，已从近３０种植物分离到近６０个属的内生细菌［５］，
涉及的植物主要有小麦（犜狉犻狋犻犮狌犿犪犲狊狋犻狏狌犿）、水稻（犗狉狔狕犪狊犪狋犻狏犪）、棉花（犌狅狊狊狔狆犻狌犿ｓｐｐ．）、花生（犃狉犪犮犺犻狊犺狔
狆狅犵犪犲犪）、马铃薯（犛狅犾犪狀狌犿狋狌犫犲狉狅狊狌犿）、番茄（犔狔犮狅狆犲狉狊犻犮狅狀犲狊犮狌犾犲狀狋狌犿）、烟草（犖犻犮狅狋犻犪狀犪狋犪犫犪犮狌犿）等［６１３］，而且
从植物的根、茎、叶、花、果、胚、种子等几乎所有的组织中，均可分离到内生细菌［１４］。不仅如此，植物的根瘤中也
含有内生细菌［１５］。对于植物内生细菌的鉴定，长期以来采用分离、培养鉴定的方法，近年来，分子生物学的方法
也应用到植物内生细菌的研究中，如利用１６ＳｒＤＮＡ和ＩＴＳ（内转录间隔区，ｉｎｔｅｒｎａｌｔｒａｎｓｃｒｉｂｅｄｓｐａｃｅｒ）对甜菜
（犅犲狋犪狏狌犾犵犪狉犻狊）分离的内生菌进行鉴定［１６］，利用１６ＳｒＤＮＡ－ＰＣＲ－ＤＧＧＥ（变性梯度凝胶电泳，ｄｅｎａｔｕｒｉｎｇｇｒａ
ｄｉｅｎｔｇｅｌｅｌｅｃｔｒｏｐｈｏｒｅｓｉｓ）技术结合传统培养方法检测马铃薯内生细菌种群［１７］，利用ＲＡＰＤ（随机扩增多态性
ＤＮＡ，ｒａｎｄｏｍａｍｐｌｉｆｉｅｄｐｏｌｙｍｏｒｐｈｉｃＤＮＡ）对臂形草（犅狉犪犮犺犻犪狉犻犪）内生菌进行特异性检测等等［１８］。
在自然界的长期进化过程中，植物宿主与内生菌相互选择，互为条件，形成一种共生、互生或者竞争的关系，
并且其相互作用还受到环境因子的影响。环境条件和宿主基因型决定了植物内生菌的遗传多样性［１９］。目前对
植物内生菌的研究应用主要集中在内生菌的分离、鉴定及生物防治、促生因子、抑菌活性物质分析等方面［１４，２０］，
研究表明，植物内生菌的生物学功能包括增强宿主的抗病性［２１２３］、提高植物的生产力［２４，２５］、抗逆抗虫［２６］、具有除
草剂活性［２７］等都是在植物内生菌复杂的群落结构条件实现的，因而，了解植物内生细菌的群落结构多样性及其
分布特性，对于研究内生细菌的作用机制、更加有效地利用内生细菌资源等具有重要意义。本研究采用美国 ＭＩ
ＤＩ微生物鉴定系统对不同品种禾本科牧草植株分离的内生细菌进行鉴定，了解内生细菌在禾本科牧草植株不同
品种和不同部位的分布特性，为内生细菌资源的进一步研究和开发利用奠定基础。
１ 材料与方法
１．１ 供试材料
供试的牧草植株为２００８年８月从福建省农业科学院农业生态研究所牧草种质资源圃采集的５个禾本科牧
１２４－１３１
２０１０年６月
草 业 学 报
ＡＣＴＡＰＲＡＴＡＣＵＬＴＵＲＡＥＳＩＮＩＣＡ
第１９卷 第３期
Ｖｏｌ．１９，Ｎｏ．３
收稿日期：２００９０９０１；改回日期：２００９１０２６
基金项目：“十一五”国家科技支撑计划（２００７ＢＡＤ８９Ｂ１３８）和福建省财政专项－福建省农业科学院科技创新团队建设基金（ＳＴＩＦＹ０３）资助。
作者简介：车建美（１９７７），女，山东乳山人，助理研究员，在读博士。Ｅｍａｉｌ：ｃｈｅｊｍ２００２＠１６３．ｃｏｍ
通讯作者。Ｅｍａｉｌ：ｆｚｌｉｕｂｏ＠１６３．ｃｏｍ，ｂｏｑｉｗｅｎｇ＠ｙａｈｏｏ．ｃｏｍ．ｃｎ
草品种，分别为杂交狼尾草闽牧六号、杂交狼尾草（犘犲狀狀犻狊犲狋狌犿犪犿犲狉犻犮犪狀狌犿×犘．狆狌狉狆狌狉犲狌犿）、矮象草（犘．狆狌狉
狆狌狉犲狌犿犮狏．犕犗犜犜）、杂交狼尾草南牧１号、杂交狼尾草辐射品种，每个品种采集３～５棵植株。带回实验室后２４
ｈ内进行微生物的分离。细菌分离与纯化培养均采用ＮＡ（营养琼脂，ｎｕｔｒｉｅｎｔａｇａｒ）培养基。
１．２ 牧草内生细菌的分离
分别称取牧草根部、茎部和叶片样品各５ｇ，冲洗干净后吸去水分，用７５％乙醇浸３０～４０ｓ，再转入１０％次氯
酸钠溶液中浸８ｍｉｎ，无菌水漂洗３次，无菌滤纸吸干。用无菌剪刀剪碎样品于无菌研钵中，加入４５ｍＬ无菌水
后，充分研磨匀浆，用无菌水适量梯度稀释，各取２００μＬ稀释液涂布于ＮＡ培养基上进行内生细菌的分离，试验
重复３次。根据菌落形态、颜色、边缘状态、透明度、表面干湿状态等特征判断分离出的菌落种类并计数。按常规
方法挑取单菌落纯化后保存，供测试鉴定。
１．３ 牧草内生细菌的脂肪酸鉴定
１．３．１ 细菌脂肪酸的提取 １）细菌培养条件：ＴＳＢＡ平板培养基 ［３０ｇ胰蛋白胨大豆肉汤（ＴＳＢ，购于Ｆｉｓｈｅｒ公
司）＋１５ｇ琼脂＋１Ｌ水］，四线划线法，培养温度（２８±１）℃，培养时间（２４±２）ｈ。２）获菌：用接种环挑取３～５环
（湿重约４０ｍｇ）菌落置入干净、干燥有螺旋盖的试管中（最佳获菌区域为第３区）。３）皂化：加入（１．０±０．１）ｍＬ
皂化试剂（４５ｇＮａＯＨ＋１５０ｍＬ甲醇＋１５０ｍＬ水），拧紧盖子，振荡５～１０ｓ，放入９５～１００℃沸水中５ｍｉｎ，室温
冷却，振荡５～１０ｓ，再水浴２５ｍｉｎ，室温冷却。４）甲基化：开盖加入（２．０±０．１）ｍＬ甲基化试剂（３２５ｍＬ６
ｍｏＬ／Ｌ盐酸＋２７５ｍＬ甲醇），拧紧盖子，振荡５～１０ｓ，（８０±１）℃水浴１０ｍｉｎ，移开且快速用流动自来水冷却至
室温。５）萃取：加入（１．２５±０．１）ｍＬ萃取试剂（２００ｍＬ正已烷＋２００ｍＬ甲基叔丁基乙醚），拧紧盖子，温和混合
旋转１０ｍｉｎ，打开管盖，利用干净的移液管取出每个样本的下层水相部分。６）基本洗涤：加入（３．０±０．２）ｍＬ洗
涤试剂（１０．８ｇＮａＯＨ＋９００ｍＬ水），拧紧盖子，温和混合旋转５ｍｉｎ，打开管盖，利用干净的移液管移出约２／３体
积的上层有机相到干净的气相色谱检体小瓶，用于气相检测。上述试剂配制方法由 ＭＩＤＩ公司提供。
１．３．２ 细菌脂肪酸的气相色谱检测 细菌脂肪酸成分检测采用美国Ａｇｉｌｅｎｔ６８９０Ｎ型气相色谱系统，包括全自
动进样装置、石英毛细管柱及氢火焰离子化检测器；通过细菌细胞脂肪酸成分进行细菌鉴定的分析软件采用
ＳｈｅｒｌｏｃｋＭＩＳ４．５（ＭｉｃｒｏｂｉａｌＩｄｅｎｔｉｆｉｃａｔｉｏｎＳｙｓｔｅｍ）和ＬＧＳ４．５（ＬｉｂｒａｒｙＧｅｎｅｒａｔｉｏｎＳｏｆｔｗａｒｅ）（均为美国 ＭＩＤＩ
公司产品）。在下述色谱条件下平行分析脂肪酸甲酯混合物标样和待检样本：二阶程序升高柱温，１７０℃起始，每
ｍｉｎ升温５℃，升至２６０℃，而后再每ｍｉｎ升温４０℃，升至３１０℃，维持９０ｓ；汽化室温度２５０℃、检测器温度３００℃；
载气为氢气（２ｍＬ／ｍｉｎ）、尾吹气为氮气（３０ｍＬ／ｍｉｎ）；柱前压６８．９５ｋＰａ；进样量ｌμＬ，进样分流比１００∶１。
１．３．３ 细菌脂肪酸鉴定 系统根据各组分保留时间计算等链长（ＥＣＬ）值确定目标组分的存在，采用峰面积归一
化法计算各组分的相对含量，再将二者与系统谱库中的标准菌株数值匹配计算相似度（ｓｉｍｉｌａｒｉｔｙｉｎｄｅｘ，ＳＩ），从
而给出一种或几种可能的菌种鉴定结果。一般以最高ＳＩ的菌种名称作为鉴定结果，但当其报告的几个菌种的ＳＩ
比较接近时，则根据色谱图特征及菌落生长特性进行综合判断。以脂肪酸混合标样校正保留时间。
１．４ 内生细菌在禾本科牧草植株内的分布特性
以分离到的内生菌菌株为样本，以各菌株在各部位出现与否为指标，组成“０－１”数据矩阵，将所得数据输入
ＤＰＳ数据处理系统，采用马氏距离为聚类尺度，以类平均法对数据进行系统聚类分析，并自动生成各供试菌株的
聚类图和相异系数表。
２ 结果与分析
２．１ 不同禾本科牧草植株内生菌含量
不同禾本科牧草植株内生细菌含量差异显著，杂交狼尾草闽牧六号内生细菌含量最高，达２６．８００×１０４
ＣＦＵ／ｇ，其次是杂交狼尾草辐射品种，达６．８５０×１０４ＣＦＵ／ｇ，矮象草、杂交狼尾草南牧１号和杂交狼尾草内生细
菌含量差不多，分别为０．５２５×１０４，０．４６２×１０４ 和０．６８１×１０４ＣＦＵ／ｇ（表１）。
不同禾本科牧草不同部位内生细菌含量差异也显著。叶部的内生细菌含菌量规律为杂交狼尾草闽牧六号≌
杂交狼尾草辐射品种＞杂交狼尾草＞杂交狼尾草南牧１号＞矮象草；茎部的内生细菌含菌量规律为杂交狼尾草
闽牧六号＞杂交狼尾草南牧１号＞杂交狼尾草，矮象草和杂交狼尾草辐射品种的茎部未分离到内生细菌；根部的
５２１第１９卷第３期 草业学报２０１０年
内生细菌含菌量规律为杂交狼尾草闽牧六号＞杂交狼尾草辐射品种＞矮象草＞杂交狼尾草南牧１号＞杂交狼尾
草。
２．２ 不同禾本科牧草内生细菌的鉴定
６４株内生细菌中与 ＭＩＤＩ数据库比较相似性指数大于０．５００，可确定其菌种名称的有５０株，属于１９个种，
隶属于１２个属（表２），分别是沙门氏菌属、假单胞杆菌属、克雷伯氏菌属、芽孢杆菌属、西地西菌属、不动杆菌属、
微球菌属、克吕沃尔氏菌属、短波单胞菌属、沙雷氏菌属、柠檬酸杆菌属和单胞菌属。其中芽孢杆菌属包含６个
种，假单胞杆菌属包含３个种，其余１０个属均包含１个种。
表１ 禾本科牧草植株内生细菌含量及分布
犜犪犫犾犲１ 犜犺犲犮狅狀狋犲狀狋狊犪狀犱犱犻狊狋狉犻犫狌狋犻狅狀狅犳犲狀犱狅狆犺狔狋犻犮犫犪犮狋犲狉犻犪犻狊狅犾犪狋犲犱犳狉狅犿犳狅狉犪犵犲犵狉犪狊狊犲狊 ×１０４ＣＦＵ／ｇ
分离部位
Ｉｓｏｌａｔｅｄｐａｒｔｓ
杂交狼尾草闽牧六号
Ｈｙｂｒｉｄ犘犲狀狀犻狊犲狋狌犿
ｍｉｎｍｕｓｉｘ
矮象草
Ｄｗａｒｆｅｌｅｐｈａｎｔ
ｇｒａｓｓ
杂交狼尾草辐射品种
Ｈｙｂｒｉｄ犘犲狀狀犻狊犲狋狌犿
ｒａｄｉａｔｉｏｎｉｓｏｌａｔｅｓ
杂交狼尾草南牧１号
Ｈｙｂｒｉｄ犘犲狀狀犻狊犲狋狌犿
ｎａｎｍｕｏｎｅ
杂交狼尾草
Ｈｙｂｒｉｄ犘犲狀狀犻狊犲狋狌犿
根部Ｒｏｏｔ １５．５００ ０．５００ １．６５０ ０．４００ ０．１０１
茎部Ｓｔｅｍ ６．０００ ０．０００ ０．０００ ０．００２ ０．００１
叶片Ｌｅａｆ ５．３００ ０．０２５ ５．２００ ０．０６０ ０．５８０
合计Ｔｏｔａｌ ２６．８００ ０．５２５ ６．８５０ ０．４６２ ０．６８１
表２ 禾本科牧草内生细菌
犜犪犫犾犲２ 犈狀犱狅狆犺狔狋犻犮犫犪犮狋犲狉犻犪犻狊狅犾犪狋犲犱犳狉狅犿犳狅狉犪犵犲犵狉犪狊狊犲狊
菌株编号
Ｎｕｍｂｅｒｏｆｓｔｒａｉｎｓ
属
Ｇｅｎｕｓｎａｍｅ
种名
Ｓｐｅｃｉｅｓｎａｍｅ
中文种名
Ｃｈｉｎｅｓｅｎａｍｅ
相似系数
Ｓｉｍｉｌａｒｉｔｙｉｎｄｅｘ
４９４６ 短波单胞菌属犅狉犲狏狌狀犱犻犿狅狀犪狊ｓｐｐ． 犅狉犲狏狌狀犱犻犿狅狀犪狊狏犲狊犻犮狌犾犪狉犻狊 泡囊短波单胞菌 ０．５０７
４９４８ 沙雷氏菌属犛犲狉狉犪狋犻犪ｓｐｐ． 犛犲狉狉犪狋犻犪狅犱狅狉犻犳犲狉犪 气味沙雷氏菌 ０．７４１
４９４９ 柠檬酸杆菌属犆犻狋狉狅犫犪犮狋犲狉ｓｐｐ． 犆犻狋狉狅犫犪犮狋犲狉犳狉犲狌狀犱犻犻 弗氏柠檬酸杆菌 ０．８７７
４９５０ 单胞菌属犛狆犺犻狀犵狅犿狅狀犪狊ｓｐｐ． 犛狆犺犻狀犵狅犿狅狀犪狊狊犪狀犵狌犻狀犻狊 单胞菌属细菌（无中文名称） ０．７９７
４９５１ 假单胞杆菌属犘狊犲狌犱狅犿狅狀犪狊ｓｐｐ． 犘狊犲狌犱狅犿狅狀犪狊犪犲狉狌犵犻狀狅狊犪 铜绿假单胞菌 ０．９４３
４９５４ 克雷伯氏菌属犓犾犲犫狊犻犲犾犾犪ｓｐｐ． 犓犾犲犫狊犻犲犾犾犪狆狀犲狌犿狅狀犻犪犲狅狕犪犲狀犪犲 臭鼻肺炎克雷伯菌 ０．７０１
４９６０ 芽孢杆菌属犅犪犮犻犾犾狌狊ｓｐｐ． 犘犪犲狀犻犫犪犮犻犾犾狌狊犾犪狉狏犪犲狆狌犾狏犻犳犪犮犻犲狀狊 芽孢杆菌属细菌（无中文名称） ０．５３２
４９６４ 西地西菌属犆犲犱犲犮犲犪ｓｐｐ． 犆犲犱犲犮犲犪犱犪狏犻狊犪犲 戴氏西地西菌 ０．６７９
４９６５ 芽孢杆菌属犅犪犮犻犾犾狌狊ｓｐｐ． 犅犪犮犻犾犾狌狊狏犻狊犮狅狊狌狊 粘稠芽孢杆菌 ０．５５５
４９７１ 不动杆菌属犃犮犻狀犲狋狅犫犪犮狋犲狉ｓｐｐ． 犃犮犻狀犲狋狅犫犪犮狋犲狉犮犪犾犮狅犪犮犲狋犻犮狌狊 乙酸钙不动杆菌 ０．７６９
４９７０ 芽孢杆菌属犅犪犮犻犾犾狌狊ｓｐｐ． 犅犪犮犻犾犾狌狊犮犲狉犲狌狊 蜡状芽孢杆菌 ０．８２５
４９７６ 微球菌属犕犻犮狉狅犮狅犮犮狌狊ｓｐｐ． 犕犻犮狉狅犮狅犮犮狌狊犾狌狋犲狌狊 藤黄微球菌 ０．７３０
４９８３ 芽孢杆菌属犅犪犮犻犾犾狌狊ｓｐｐ． 犅犪犮犻犾犾狌狊犿犲犵犪狋犲狉犻狌犿 巨大芽孢杆菌 ０．８７９
４９９９ 芽孢杆菌属犅犪犮犻犾犾狌狊ｓｐｐ． 犘犪犲狀犻犫犪犮犻犾犾狌狊狆狅犾狔犿狔狓犪 多粘芽孢杆菌 ０．８４６
５０００ 假单胞杆菌属犘狊犲狌犱狅犿狅狀犪狊ｓｐｐ． 犘狊犲狌犱狅犿狅狀犪狊犺狌狋狋犻犲狀狊犻狊 假单胞菌属细菌（无中文名称） ０．７５０
５０１４ 克吕沃尔氏菌属犓犾狌狔狏犲狉犪ｓｐｐ． 犓犾狌狔狏犲狉犪犮狉狔狅犮狉犲狊犮犲狀狊 栖冷克吕沃尔菌 ０．８１９
５０１８ 沙门氏菌属犛犪犾犿狅狀犲犾犾犪ｓｐｐ． 犛犪犾犿狅狀犲犾犾犪狋狔狆犺犻犿狌狉犻狌犿 鼠伤寒沙门氏菌 ０．７４０
５０２２ 芽孢杆菌属犅犪犮犻犾犾狌狊ｓｐｐ． 犅犪犮犻犾犾狌狊狊狆犺犪犲狉犻犮狌狊 球形芽孢杆菌 ０．６５０
５０３１ 假单胞杆菌属犘狊犲狌犱狅犿狅狀犪狊ｓｐｐ． 犘狊犲狌犱狅犿狅狀犪狊狆狏．狊狔狉犻狀犵犪犲犵犾狔犮犻狀犲犪 丁香假单胞菌大豆致病变种 ０．６１６
６２１ ＡＣＴＡＰＲＡＴＡＣＵＬＴＵＲＡＥＳＩＮＩＣＡ（２０１０） Ｖｏｌ．１９，Ｎｏ．３
２．３ 内生细菌在禾本科牧草植株内的分布特性
以分离到的１９种内生菌为样本，以各菌株在各部位出现与否为指标，用类平均法对数据进行系统聚类分析，
当λ＝８．３５时，可将１９种内生细菌分为４个大类群（表３和图１）。
表３ 禾本科牧草植株不同部位内生细菌的种类和分布
犜犪犫犾犲３ 犜犺犲犲狀犱狅狆犺狔狋犻犮犫犪犮狋犲狉犻犪犻狊狅犾犪狋犲犱犳狉狅犿犱犻犳犳犲狉犲狀狋狋犻狊狊狌犲狊狅犳犳狅狉犪犵犲犵狉犪狊狊犲狊
编号
Ｎｕｍｂｅｒ
杂交狼尾草闽牧六号
Ｈｙｂｒｉｄ犘犲狀狀犻狊犲狋狌犿
ｍｉｎｍｕｓｉｘ
根Ｒｏｏｔ 茎Ｓｔｅｍ 叶Ｌｅａｆ
矮象草
Ｄｗａｒｆｅｌｅｐｈａｎｔ
ｇｒａｓｓ
根Ｒｏｏｔ 茎Ｓｔｅｍ 叶Ｌｅａｆ
杂交狼尾草辐射品种
Ｈｙｂｒｉｄ犘犲狀狀犻狊犲狋狌犿
ｒａｄｉａｔｉｏｎｉｓｏｌａｔｅｓ
根Ｒｏｏｔ 茎Ｓｔｅｍ 叶Ｌｅａｆ
杂交狼尾草南牧１号
Ｈｙｂｒｉｄ犘犲狀狀犻狊犲狋狌犿
ｎａｎｍｕｏｎｅ
根Ｒｏｏｔ 茎Ｓｔｅｍ 叶Ｌｅａｆ
杂交狼尾草
Ｈｙｂｒｉｄ
犘犲狀狀犻狊犲狋狌犿
根Ｒｏｏｔ 茎Ｓｔｅｍ叶Ｌｅａｆ
４９４６ ０ １ ０ ０ ０ ０ ０ ０ ０ ０ ０ ０ ０ ０ ０
４９４８ ０ １ ０ ０ ０ ０ ０ ０ ０ ０ ０ ０ ０ ０ ０
４９４９ ０ １ ０ ０ ０ ０ ０ ０ ０ ０ ０ ０ ０ ０ ０
４９５０ ０ ０ １ ０ ０ ０ ０ ０ ０ ０ ０ ０ ０ ０ ０
４９５１ ０ ０ １ ０ ０ ０ ０ ０ ０ ０ ０ ０ ０ ０ ０
４９５４ １ ０ ０ ０ ０ ０ ０ ０ ０ ０ ０ ０ ０ ０ ０
４９６０ １ ０ ０ ０ ０ ０ ０ ０ ０ ０ ０ ０ ０ ０ ０
４９６４ ０ ０ ０ １ ０ ０ ０ ０ ０ ０ ０ ０ ０ ０ ０
４９６５ ０ ０ ０ １ ０ ０ ０ ０ ０ ０ ０ ０ ０ ０ ０
４９７１ ０ ０ ０ ０ ０ １ ０ ０ ０ ０ ０ ０ ０ ０ ０
４９７０ １ ０ ０ １ ０ ０ １ ０ ０ １ １ １ １ ０ ０
４９７６ ０ ０ ０ ０ ０ ０ ０ ０ １ ０ ０ ０ ０ ０ ０
４９８３ １ ０ ０ １ ０ ０ １ ０ ０ １ ０ ０ １ ０ １
４９９９ ０ ０ ０ ０ ０ ０ ０ ０ ０ ０ ０ ０ ０ ０ １
５０００ ０ １ １ ０ ０ ０ ０ ０ ０ ０ ０ ０ ０ ０ １
５０１４ ０ ０ ０ ０ ０ ０ ０ ０ ０ ０ ０ ０ １ ０ ０
５０１８ ０ ０ ０ ０ ０ ０ ０ ０ ０ ０ ０ ０ ０ １ ０
５０２２ ０ ０ ０ ０ ０ ０ ０ ０ ０ １ ０ ０ ０ ０ ０
５０３１ ０ ０ ０ ０ ０ ０ ０ ０ ０ ０ ０ １ ０ ０ ０
类群Ⅰ包括７个菌种，分别是４９４６（泡囊短波单胞菌）、４９４８（气味沙雷氏菌）、４９４９（弗氏柠檬酸杆菌）、４９５０
（犛．狊犪狀犵狌犻狀犻狊）、４９５１（铜绿假单胞菌）、４９５４（臭鼻肺炎克雷伯菌）和４９６０（犘．犾犪狉狏犪犲狆狌犾狏犻犳犪犮犻犲狀狊），它们的共同
特征是均分离自杂交狼尾草闽牧六号。
类群Ⅱ包括５个菌种，分别是４９６４（戴氏西地西菌）、４９６５（粘稠芽孢杆菌）、４９７１（乙酸钙不动杆菌）、４９７０（蜡
状芽孢杆菌）和４９７６（藤黄微球菌），存在于矮象草和杂交狼尾草辐射品种。
类群Ⅲ包括３个菌种，分别是４９８３（巨大芽孢杆菌）、４９９９（多粘芽孢杆菌）和５０００（犘．犺狌狋狋犻犲狀狊犻狊），其共同特
征是在杂交狼尾草叶片内均有存在。
类群Ⅳ包括４个菌种，分别是５０１４（栖冷克吕沃尔菌）、５０１８（鼠伤寒沙门氏菌）、５０２２（球形芽孢杆菌）和５０３１
（丁香假单胞菌大豆致病变种），共同特征是均存在于杂交狼尾草南牧１号和杂交狼尾草植株中。
在每个大类群中又可以分为不同的亚类群。如在类群Ⅰ中可以分为３个亚类群，第１个亚类群为菌株４９４６
（泡囊短波单胞菌）、４９４８（气味沙雷氏菌）和４９４９（弗氏柠檬酸杆菌），其共同特征为存在于杂交狼尾草闽牧六号
茎部，第２个亚类群为４９５０（犛．狊犪狀犵狌犻狀犻狊）和４９５１（铜绿假单胞菌），共同存在于杂交狼尾草闽牧六号叶片中，第
３个亚类群为４９５４（臭鼻肺炎克雷伯菌）和４９６０（犘．犾犪狉狏犪犲狆狌犾狏犻犳犪犮犻犲狀狊），共同存在于杂交狼尾草闽牧六号根
７２１第１９卷第３期 草业学报２０１０年
图１ 内生细菌聚类分析
犉犻犵．１ 犆犾狌狊狋犲狉犪狀犪犾狔狊犻狊犳狅狉犲狀犱狅狆犺狔狋犻犮犫犪犮狋犲狉犻犪犻狊狅犾犪狋犲犱犳狉狅犿犳狅狉犪犵犲犵狉犪狊狊犲狊
部。说明牧草内生菌在不同牧草植株内的分布与宿主植株和不同部位密切相关，尤其与宿主植株相关。
３ 讨论
细菌的鉴定方法有很多种，常规鉴定的内容有形态特征和理化特性。形态特征包括显微形态和培养特征；理
化特性包括营养类型、碳氮源利用能力、各种代谢反应、酶反应和血清学反应等。ＢＩＯＬＯＧ鉴定系统以微生物对
不同碳源的利用情况为基础，检测微生物的特征指纹图谱，建立与微生物种类相对应的数据库。通过软件将待测
微生物与数据库参比，得出鉴定结果。微生物自动鉴定系统采用Ｓｈｅｒｌｏｃｋ全自动细菌鉴定系统，通过对不同菌
株的脂肪酸图谱进行分析，并与标准数据库进行比对，来鉴定细菌及酵母。该技术是细菌或酵母种水平鉴定的有
效手段之一［２８］。另外还有分子生物学鉴定、功能基因鉴定等。
脂肪酸是生物体内不可缺少的能量和营养物质，是生物体的基本结构成分之一，脂肪酸和细菌的遗传变异、
毒力、耐药性等关系密切［２９，３０］。细菌细胞结构中普遍含有的脂肪酸成分与细菌ＤＮＡ具有高度的同源性，各种细
菌均具有特征性的细胞脂肪酸指纹图谱［２８］。国内外已有把脂肪酸用于细菌鉴定的报道［３１３３］。ＭＩＤＩ软件方法与
传统鉴定方法相比，最大的优势就是鉴定速度快捷，准确、成本低，可进行菌株追踪和自建数据库等优点，从而避
免了传统鉴定方法中繁琐、人为因素影响很大的缺陷。这套鉴定方法可广泛应用在疾病控制、医疗卫生、食品安
全、军事安全、环保以及进出口检验检疫等多个领域［２８］。微生物自动鉴定系统对细菌的鉴定判别依赖于相似性
指数，当相似性指数大于０．５００，说明匹配性很高，为典型种；大于０．３００小于０．５００，说明匹配性较低，为非典型
种；小于０．３００，说明数据库没有此菌种的数据，给出的是最接近的种。本研究采用相似性指数高于０．５００的细
菌鉴定的结果，能可靠地反映细菌鉴定的种类。
根据植物与内生细菌的关系可将内生细菌分为兼性内生细菌和专性内生细菌。目前假单胞杆菌属、肠杆菌
属（犈狀狋犲狉狅犫犪犮狋犲狉）、沙雷氏菌属、产碱菌属（犃犾犮犪犾犻犵犲狀犲狊）、志贺氏菌属（犛犺犻犵犲犾犾犪）和柠檬酸杆菌属及革兰氏阳性细
菌一些属的内生细菌都属于兼性内生，它们不仅存在于植物的根、茎、叶，还常见于土壤［３４，３５］。朱育菁等［３６］从茶
叶（犆犪犿犲犾犾犻犪狊犻狀犲狀狊犻狊）中分离出微杆菌属、根瘤菌属等内生菌，从龙眼（犇犻犿狅犮犪狉狆狌狊犾狅狀犵犪狀）果实中检测到分属于
８２１ ＡＣＴＡＰＲＡＴＡＣＵＬＴＵＲＡＥＳＩＮＩＣＡ（２０１０） Ｖｏｌ．１９，Ｎｏ．３
肠杆菌属、果胶杆菌属（犘犲犮狋狅犫犪犮狋犲狉犻狌犿）、克吕沃尔氏菌属和沙门氏杆菌属的内生细菌［３７］。本研究也分离到假单
胞杆菌属、沙雷氏菌属和柠檬细菌属、克吕沃尔氏菌属等内生细菌，同时获得的其他属的细菌均有相应的研究文
献，且有些已经进行较为详细深入地研究［３８４１］。
在植物体内不同的内生菌相互作用，并建立一种生态平衡，其中一些是分离频率高、数量大的优势种群。而
另一些属于稀有种［４２］。本研究对禾本科牧草内生菌进行的脂肪酸鉴定结果表明芽孢杆菌和假单胞菌是禾本科
牧草的优势内生菌群，这与史应武等［１６］的研究结果一致，其在对新疆昌吉和石河子两地种植的甜菜内生菌进行
了分离、鉴定和分析的结果表明，甜菜内生菌多属于细菌，其中假单胞杆菌属和芽孢杆菌属的分离频率分别在
３３．２％～５９．２％和１２．７％～２８．１％，是甜菜植株中的优势内生菌群。
植物内生菌的分布与群落结构不仅与植物的种类、基因型有关，还与植物的生长阶段、环境条件有关，存在复
杂的多样性［４３］。本研究结果表明，不同品种禾本科牧草内生菌的多样性有所不同，杂交狼尾草闽牧六号内生菌
的多样性要高于其他品种，这与朱育菁等［３６］的研究结果相同，在其研究中发现，茶叶内生菌的种类与分布因茶树
品种和叶片龄期而存在差异。李倍金等［２５］的研究结果也表明，测定的１３个禾草品种的根、叶组织中均有内生细
菌分布，并且不同禾草品种的内生细菌菌群密度有较大差异。史应武等［１６］在对天山北坡甜菜内生菌的分离研究
中也发现，甜菜根中内生菌的多样性高于茎、叶。另外，在不同的禾草品种的不同组织中，根中分离的内生菌菌群
密度最大［２５］。本研究结果与之相同，不同禾本科牧草内生菌在根部的多样性要高于茎部和叶片。对不同品种禾
本科牧草植株分离的内生细菌的鉴定及其分布的研究，可以有助于了解内生细菌在禾本科牧草植株不同品种和
不同部位的分布特性，为充分的对内生细菌资源进行进一步研究和开发利用奠定了基础。
致谢：感谢浙江大学谢关林教授和徐幼平老师在内生菌脂肪酸鉴定过程中提供的无私帮助和给予的支持；感谢浙
江农业大学农业生物与环境科技创新平台提供的仪器帮助。
参考文献：
［１］ 刘蕴哲，何劲，张杰，等．植物内生真菌及其活性代谢产物研究进展［Ｊ］．菌物研究，２００５，３（４）：３０３６．
［２］ ＶｏｇｌＡＥ．ＭｅｈｌｕｎｄｄｉｅａｎｄｅｒｅｎＭｅｈｌｐｒｏｄｕｋｔｅｄｅｒＣｅｒｅａｌｉｅｎｕｎｄＬｅｇｕｍｉｎｏｓｅｎ．Ｚ．［Ｊ］．ＮａｈｒｕｎｇｓｍｉｔｔｅｌＵｎｔｅｒｓｕｃｈｕｎｇ，Ｈｙｇ．
Ｗａｒｅｎｋｕｎｄｅ，１８９８，１２：２５２９．
［３］ 何劲，刘蕴哲，康冀川．植物内生菌及其在农业和医学上的用途［Ｊ］．贵州农业科学，２００６，３４（３）：１１３１１５．
［４］ 姜怡，杨颖，陈华红，等．植物内生菌资源［Ｊ］．微生物学通报，２００５，３２（６）：１４６１４７．
［５］ ＫｏｂａｙａｓｈｉＤＹ，ＰａｌｕｍｂｏＪＤ．Ｂａｃｔｅｒｉａｌｅｎｄｏｐｈｙｔｅｓａｎｄｔｈｅｉｒｅｆｆｅｃｔｓｏｎｐｌａｎｔｓａｎｄｕｓｅｓｉｎａｇｒｉｃｕｌｔｕｒｅ［Ａ］．Ｉｎ：ＢａｃｏｎＣＷ，
ＷｈｉｔｅＪＦ．ＭｉｃｒｏｂｉａｌＥｎｄｏｐｈｙｔｅｓ［Ｍ］．ＮｅｗＹｏｒｋ：Ｊｒ．ＭａｒｃｅｌＤｅｋｋｅｒ，Ｉｎｃ．，２０００：１９９２３７
［６］ 王刚，李志强．小麦内生细菌的分离及其对小麦纹枯病的拮抗作用［Ｊ］．微生物通报，２００５，３２（２）：２０２４．
［７］ 罗明，芦云，张祥林．棉花内生细菌的分离及生防益菌的筛选［Ｊ］．新疆农业科学，２００４，４１（５）：２７７２８２．
［８］ 宋子红，丁立孝，马伯军，等．花生内生菌的种群及动态分析［Ｊ］．植物保护学报，１９９９，２６（４）：３０９３１４．
［９］ 周婧，高增贵，何秀玲，等．甜瓜枯萎病拮抗内生细菌筛选研究［Ｊ］．北方园艺，２００８，（２）：２２５２２７．
［１０］ ＦｅｒｎａｎｄｏＥＶ，ＭｏｎｉｃａＰＲ，ＦｒａｎｃｉｓｃｏＰ，犲狋犪犾．Ｅｎｄｏｐｈｙｔｉｃｂａｔｅｒｉａｉｎ犆狅犳犳犲犪犪狉犪犫犻犮犪Ｌ．［Ｊ］．ＪｏｕｒｎａｌｏｆＢａｓｉｃＭｉｃｒｏｂｉｏｌｏｇｙ，
２００５，４５（５）：３７１３８０．
［１１］ 付业勤，蔡吉苗，刘先宝，等．香蕉内生细菌分离、活性评价及数量分布［Ｊ］．热带作物学报，２００７，２８（４）：７８８３．
［１２］ ＡｎｇｅｌａＳ，ＢｉｒｇｉｔＲ，ＧａｂｒｉｅｌｅＢ．Ｅｎｄｏｐｈｙｔｉｃｂａｃｔｅｒｉａｌｃｏｍｍｕｎｉｔｉｅｓｏｆｆｉｅｌｄｇｒｏｗｎｐｏｔａｔｏｐｌａｎｔｓａｎｄｔｈｅｉｒｐｌａｎｔｇｒｏｗｔｈｐｒｏｍｏ
ｔｉｎｇａｎｄａｎｔａｇｏｎｉｓｔｉｃａｂｉｌｉｔｉｅｓ［Ｊ］．Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌｏｇｙ，２００４，５０：２３９２４９．
［１３］ 彭细桥，周国生，邓正平，等．烟草青枯病内生拮抗菌的筛选、鉴定及其防效测定［Ｊ］．植物病理学报，２００７，３７（６）：６７０
６７４．
［１４］ 孔庆科，丁爱云．内生细菌作为生防因子的研究进展［Ｊ］．山东农业大学学报（自然科学版），２００１，３２（２）：２５６２６０．
［１５］ 李志真．杨梅根瘤内生菌的生物学特性［Ｊ］．林业科学，２００９，４５（１）：８１８７．
［１６］ 史应武，娄恺，李春．天山北坡甜菜内生菌分离鉴定及其动态变化［Ｊ］．生态学报，２００９，２９（５）：２３７５２３８２．
９２１第１９卷第３期 草业学报２０１０年
［１７］ ＢｅｒｇＧ，ＫｒｅｃｈｅｌＡ，ＤｉｔｚＭ，犲狋犪犾．Ｅｎｄｏｐｈｙｔｉｃａｎｄｅｃｔｏｐｈｙｔｉｃｐｏｔａｔｏａｓｓｏｃｉａｔｅｄｂａｃｔｅｒｉａｌｃｏｍｍｕｎｉｔｉｅｓｄｉｆｆｅｒｉｎｓｔｒｕｃｔｕｒｅａｎｄ
ａｎｔａｇｏｎｉｓｔｉｃｆｕｎｃｔｉｏｎａｇａｉｎｓｔｐｌａｎｔｐａｔｈｏｇｅｎｉｃｆｕｎｇｉ［Ｊ］．ＦＥＭＳＭｉｃｒｏｂｉｏｌｏｇｙＥｃｏｌｏｇｙ，２００５，５１（２）：２１５２２９．
［１８］ 黄贵修，ＹｕｋａＴ，ＳｅｇｅｎｅｔＫ．臂形草内生菌特异ＤＮＡ片段的克隆及其分子鉴定［Ｊ］．热带作物学报，２００２，２３（４）：５８６１．
［１９］ ＡｈｌｈｏｌｍＪＵ，ＨｅｌａｎｄｅｒＭ，ＨｅｎｒｉｋｓｓｏｎＪ，犲狋犪犾．Ｅｎｖｉｒｏｎｍｅｎｔａｌｃｏｎｄｉｔｉｏｎｓａｎｄｈｏｓｔｇｅｎｏｔｙｐｅｄｉｒｅｃｔｇｅｎｅｔｉｃｄｉｖｅｒｓｉｔｙｏｆｖｅｎ
ｔｕｒｉａｄｉｔｒｉｃｈａ，ａｆｕｎｇａｌｅｎｄｏｐｈｙｔｅｏｆｂｉｒｃｈｔｒｅｅｓ［Ｊ］．Ｅｖｏｌｕｔｉｏｎ，２００２，５６（８）：１５６６１５７３．
［２０］ 谢永芳，梁亦龙，王会会，等．大蒜内生菌抑菌蛋白提取研究［Ｊ］．江苏农业科学，２００９，（１）：１２２１２３．
［２１］ ＳｔｕｒｚＡＶ，ＣｈｒｉｓｔｉｅＢＲ，ＮｏｗａｋＪ．Ｂａｔｅｒｉａｌｅｎｄｏｐｈｙｔｅｓ：Ｐｏｔｅｎｔｉａｌｒｏｌｅｉｎｄｅｖｅｌｏｐｉｎｇｓｕｓｔａｉｎａｂｌｅｓｙｓｔｅｍｓｏｆｃｒｏｐｐｒｏｄｕｃｔｉｏｎ［Ｊ］．
ＣｒｉｔｉｃａｌＲｅｖｉｅｗｓｉｎＰｌａｎｔＳｃｉｅｎｃｅｓ，２０００，１９（１）：１３０．
［２２］ 黄东益，黄小龙，ＳｅｇｅｎｅｔＫ．旗草内生真菌与旗草抗病性研究［Ｊ］．草业学报，２００９，１８（２）：３９４５．
［２３］ 黄东益，黄小龙．禾本科牧草内生真菌的研究与应用［Ｊ］．草业学报，２００８，１７（３）：１２８１３６．
［２４］ ＳｉｃｉｌｉａｎｏＳＤ，ＧｅｒｍｉｄａＪＪ．Ｔａｘｏｎｏｍｉｃｄｉｖｅｒｓｉｔｙｏｆｂａｃｔｅｒｉａａｓｓｏｃｉａｔｅｄｗｉｔｈｔｈｅｒｏｏｔｓｏｆｆｉｅｌｄｇｒｏｗｎｔｒａｎｓｇｅｎｉｃ犅狉犪狊狊犻犮犪狀犪狆狌狊
ｃｖ．Ｑｕｅｓｔ，ｃｏｍｐａｒｅｄｔｏｔｈｅｎｏｎｔｒａｎｓｇｅｎｉｃ犅．狀犪狆狌狊ｃｖ．Ｅｘｃｅｌａｎｄ犅．狉犪狆狌狊ｃｖ．Ｐａｒｋｌａｎｄ［Ｊ］．ＦＥＭＳＭｉｃｒｏｂｉｏｌｏｇｙＥｃｏｌｏｇｙ，
１９９９，２９（３）：２６３２７２．
［２５］ 李倍金，罗明，周俊，等．几种禾草内生固氮菌的分离及固氮活性测定［Ｊ］．草业学报，２００８，１７（５）：３７４２．
［２６］ ＣｌａｙＫ，ＨｏｌａｈＪ．Ｆｕｎｇａｌｅｎｄｏｐｈｙｔｅｓｙｍｂｉｏｓｉｓａｎｄｐｌａｎｔｄｉｖｅｒｓｉｔｙｉｎｓｕｃｃｅｓｓｉｏｎａｌｆｉｅｌｄｓ［Ｊ］．Ｓｃｉｅｎｃｅ，１９９９，２８５：１７４２１７４５．
［２７］ ＰｅｔｅｒｓＳ，ＤｒａｅｇｅｒＳ，ＡｕｓｔＨＪ，犲狋犪犾．Ｉｎｔｅｒａｃｔｉｏｎｓｉｎｄｕａｌｃｕｌｔｕｒｅｓｏｆｅｎｄｏｐｈｙｔｉｃｆｕｎｇｉｗｉｔｈｈｏｓｔａｎｄｎｏｎｈｏｓｔｐｌａｎｔｃａｌｉ［Ｊ］．
Ｍｙｃｏｌｏｇｉａ，１９９８，９０：３６０３６７．
［２８］ 刘志辉，蔡杏姗，竺澎波，等．应用气相色谱技术分析全细胞脂肪酸快速鉴定分枝杆菌［Ｊ］．中华结核和呼吸杂志，２００５，
２８（６）：４０３４０６．
［２９］ 张国赏，吴文娟，潘仁瑞．气相色谱－质谱法检测细胞脂肪酸及其在细菌鉴定上的应用［Ｊ］．合肥联合大学学报，２０００，
１０（４）：９２９６．
［３０］ ＲｉｌｅｙＭＳ，ＣｏｏｐｅｒＶＳ，ＬｅｎｓｋｉＲＥ，犲狋犪犾．Ｒａｐｉｄｐｈｅｎｏｔｙｐｉｃｃｈａｎｇｅａｎｄｄｉｖｅｒｓｉｆｉｃａｔｉｏｎｏｆａｓｏｉｌｂａｃｔｅｒｉｕｍｄｕｒｉｎｇ１０００ｇｅｎｅｒ
ａｔｉｏｎｓｏｆｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌｅｖｏｌｕｔｉｏｎ［Ｊ］．Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌｏｇｙ，２００１，１４７：９９５１００６．
［３１］ ＯｚｂｅｋＡ，ＡｋｔａｓＯ．ＩｄｅｎｔｉｆｉｃａｔｉｏｎｏｆｔｈｒｅｅｓｔｒａｉｎｓｏｆＭｙｃｏｂａｃｔｅｒｉｕｍｓｐｅｃｉｅｓｉｓｏｌａｔｅｄｆｒｏｍｃｌｉｎｉｃａｌｓａｍｐｌｅｓｕｓｉｎｇｆａｔｔｙａｃｉｄ
ｍｅｔｈｙｌｅｓｔｅｒｐｒｏｆｉｌｉｎｇ［Ｊ］．ＴｈｅＪｏｕｒｎａｌｏｆＩｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌＭｅｄｉｃａｌＲｅｓｅａｒｃｈ，２００３，３１（２）：１３３１４０．
［３２］ ＭｕｌｅｒＫ，ＳｃｈｍｉｄＥＮ，ＫｒｏｐｐｅｎｓｔｅｄｔＲＭ．Ｉｍｐｒｏｖｅｄｉｄｅｎｔｉｆｉｃａｔｉｏｎｏｆｍｙｃｏｂａｃｔｅｒｉａｂｙｕｓｉｎｇｔｈｅｍｉｃｒｏｂｉａｌｉｄｅｎｔｉｆｉｃａｔｉｏｎｓｙｓ
ｔｅｍｉｎｃｏｍｂｉｎａｔｉｏｎｗｉｔｈａｄｄｉｔｉｏｎａｌｔｒｉｍｅｔｈｙｌｓｕｌｆｏｎｉｕｍｈｙｄｒｏｘｉｄｅｐｙｒｏｌｙｓｉｓ［Ｊ］．ＪｏｕｒｎａｌｏｆＣｌｉｎｉｃＭｉｃｒｏｂｉｏｌｏｇｙ，１９９８，３６（９）：
２４７７２４８０．
［３３］ ＢａｓｉｌｅＦ，ＶｏｏｒｈｃｅｓＫＪ，ＨａｄｔｌｅｌｄＴＬ．Ｍｉｃｒｏｏｒｇａｎｉｓｍｇｒａｍｔｙｐｅｄｉｆｆｅｒｅｎｔｉａｔｉｏｎｂａｓｅｄｏｎｐｙｒｏｌｙｓｉｓｍａｓｓｓｐｅｃｔｒｏｍｅｔｒｙｏｆｂａｃ
ｔｅｒｉａｌｆａｔｔｙａｃｉｄｍｅｔｈｙｌｅｓｔｅｒｅｘｔｒａｃｔｓ［Ｊ］．ＡｐｐｌｉｅｄａｎｄＥｎｖｉｒｏｎｍｅｎｔａｌＭｉｃｒｏｂｉｏｌｏｇｙ，１９９５，６１（４）：１５３４１５３９．
［３４］ 王瑶瑶，韩烈保，曾会明．禾本科植物内生菌研究进展［Ｊ］．生物技术通报，２００８，（３）：３３３８．
［３５］ 韦红群，邓建珍，曹建华，等．柱花草根系与根际微生物类群的研究［Ｊ］．草业科学，２００９，２６（１）：６９７３．
［３６］ 朱育菁，陈璐，蓝江林，等．茶叶内生菌的分离鉴定及其生防功能初探［Ｊ］．福建农林大学学报（自然科学版），２００９，３８（２）：
１２９１３４．
［３７］ 朱育菁，王秋红，陈璐，等．龙眼内生菌的分离与脂肪酸鉴定［Ｊ］．亚热带植物科学，２００８，３７（４）：２２２５．
［３８］ ＣａｂｒａｌＣＭ，ＣｈｅｒｑｕｉＡ，ＰｅｒｅｉｒａＡ，犲狋犪犾．Ｐｕｒｉｆｉｃａｔｉｏｎａｎｄｃｈａｒａｃｔｅｒｉｚａｔｉｏｎｏｆｔｗｏｄｉｓｔｉｎｃｔｍｅｔａｌｏｐｒｏｔｅａｓｅｓｓｅｃｒｅｔｅｄｂｙｔｈｅ
ｅｎｔｏｍｏｐａｔｈｏｇｅｎｉｃｂａｃｔｅｒｉｕｍｐｈｏｔｏｒｈａｂｄｕｓｓｐ．ｓｔｒａｉｎＡｚ２９［Ｊ］．ＡｐｐｌｉｅｄａｎｄＥｎｖｉｒｏｎｍｅｎｔａｌＭｉｃｒｏｂｉｏｌｏｇｙ，２００４，７０：３８３１
３８３８．
［３９］ ＭａｒｉёｔＪＶＤＷ，ＨｅｎｋＪＳ，ＪａｎＡＭＢ．ＲｈｏｄｏｃｏｃｃｕｓｅｒｙｔｈｒｏｐｏｌｉｓＤＣＬ１４ｃｏｎｔａｉｎｓａｎｏｖｅｌｄｅｇｒａｄａｔｉｏｎｐａｔｈｗａｙｆｏｒｌｉｍｏｎｅｎｅ［Ｊ］．
ＡｐｐｌｉｅｄａｎｄＥｎｖｉｒｏｎｍｅｎｔａｌＭｉｃｒｏｂｉｏｌｏｇｙ，１９９９，６５（５）：２０９２２１０２．
［４０］ ＢｅｒｎａｒｄｏＶＲ，ＪａｃｑｕｉｅＭ Ｍ，ＲｏｂｅｒｔＡＣ，犲狋犪犾．Ｓｕｓｃｅｐｔｉｂｉｌｉｔｙｏｆｃａｌｖｅｓｔｏｃｈａｌｅｎｇｅｗｉｔｈ犛犪犾犿狅狀犲犾犾犪狋狔狆犺犻犿狌狉犻狌犿４／７４ａｎｄ
ｄｅｒｉｖａｔｉｖｅｓｈａｒｂｏｕｒｉｎｇｍｕｔａｔｉｏｎｓｉｎｈｔｒＡｏｒｐｕｒＥ［Ｊ］．Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌｏｇｙ，２０００，１４６（１１）：２７７５２７８３．
［４１］ ＷｏｌｆＡ，ＦｒｉｔｚｅＡ，ＨａｇｅｍａｎｎＭ，犲狋犪犾．Ｓｔｅｎｏｔｒｏｐｈｏｍｏｎａｓｒｈｉｚｏｐｈｉｌａｓｐ．ｎｏｖ．，ａｎｏｖｅｌｐｌａｎｔａｓｓｏｃｉａｔｅｄｂａｃｔｅｒｉｕｍｗｉｔｈａｎｔｉ
ｆｕｎｇａｌｐｒｏｐｅｒｔｉｅｓ［Ｊ］．ＩｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌＪｏｕｒｎａｌｏｆＳｙｓｔｅｍａｔｉｃａｎｄＥｖｏｌｕｔｉｏｎａｒｙＭｉｃｒｏｂｉｏｌｏｇｙ，２００２，５２：１９３７１９４４．
［４２］ ＦｉｓｈｅｒＰＪ，ＰｅｔｒｉｎｉＯ，ＳｃｏｔｔＨＭ．Ｔｈｅｄｉｓｔｒｉｂｕｔｉｏｎｏｆｓｏｍｅｆｕｎｇａｌａｎｄｂａｃｔｅｒｉａｌｅｎｄｏｐｈｙｔｅｓｉｎｍａｉｚｅ（犣犲犪犿犪狔狊Ｌ．）［Ｊ］．Ｎｅｗ
０３１ ＡＣＴＡＰＲＡＴＡＣＵＬＴＵＲＡＥＳＩＮＩＣＡ（２０１０） Ｖｏｌ．１９，Ｎｏ．３
Ｐｈｙｔｏ１ｏｇｉｓｔ，１９９２，１２２：２９９３０５．
［４３］ 马同锁，田苗珍，袁红楼，等．不同生长环境对２种蔬菜内生菌分布的影响［Ｊ］．安徽农业科学，２００９，３７（１７）：７８１２７８１３，
７８１５．
犇犻狊狋狉犻犫狌狋犻狅狀犮犺犪狉犪犮狋犲狉犻狊狋犻犮狊狅犳犲狀犱狅狆犺狔狋犻犮犫犪犮狋犲狉犻犪犻狊狅犾犪狋犲犱犳狉狅犿犳狅狉犪犵犲犵狉犪狊狊犲狊
ＣＨＥＪｉａｎｍｅｉ１，ＬＩＵＢｏ１，ＺＨＡＮＧＹａｎ１，ＨＵＧｕｉｐｉｎｇ１，ＨＵＡＮＧＱｉｎｌｏｕ２，
ＣＨＥＮＺｈｏｎｇｄｉａｎ２，ＷＥＮＧＢｏｑｉ２
（１．ＡｇｒｉｃｕｌｔｕｒａｌＢｉｏｒｅｓｏｕｒｃｅＲｅｓｅａｒｃｈＩｎｓｔｉｔｕｔｅ，ＦｕｊｉａｎＡｃａｄｅｍｙｏｆＡｇｒｉｃｕｌｔｕｒａｌＳｃｉｅｎｃｅｓ，
Ｆｕｚｈｏｕ３５０００３，Ｃｈｉｎａ；２．ＲｅｓｅａｒｃｈＣｅｎｔｅｒｏｆＥｃｏｌｏｇｉｃａｌＡｇｒｉｃｕｌｔｕｒｅ，Ｆｕｊｉａｎ
ＡｃａｄｅｍｙｏｆＡｇｒｉｃｕｌｔｕｒａｌＳｃｉｅｎｃｅｓ，Ｆｕｚｈｏｕ３５００１３，Ｃｈｉｎａ）
犃犫狊狋狉犪犮狋：Ｔｈｅｅｎｄｏｐｈｙｔｉｃｂａｃｔｅｒｉａｗｅｒｅｉｓｏｌａｔｅｄｆｒｏｍｄｉｆｆｅｒｅｎｔｆｏｒａｇｅｇｒａｓｓｅｓａｃｃｏｒｄｉｎｇｔｏｃｕｌｔｕｒｅｍｅｔｈｏｄａｎｄ
ｉｄｅｎｔｉｆｉｅｄｂｙｕｓｉｎｇｆａｔｔｙａｃｉｄｉｄｅｎｔｉｆｉｃａｔｉｏｎｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ．Ｔｈｅｒｅｓｕｌｔｓｓｈｏｗｅｄｔｈａｔｔｈｅｃｏｎｔｅｎｔｓｏｆｅｎｄｏｐｈｙｔｉｃｂａｃ
ｔｅｒｉａｏｆｈｙｂｒｉｄｐｅｎｎｉｓｅｔｕｍ“Ｍｉｎｍｕｓｉｘ”，ｗｈｉｃｈｗａｓ２６．８００×１０４ＣＦＵ／ｇ，ｗａｓｈｉｇｈｅｒｔｈａｎｏｔｈｅｒｆｏｒａｇｅｇｒａｓ
ｓｅｓ．Ｔｈｅｅｎｄｏｐｈｙｔｉｃｂａｃｔｅｒｉａｉｓｏｌａｔｅｄｆｒｏｍｄｉｆｆｅｒｅｎｔｆｏｒａｇｅｇｒａｓｓｅｓｗｅｒｅｆｒｏｍ１９ｓｐｅｃｉｅｓｂｅｌｏｎｇｉｎｇｔｏ１２ｇｅｎｅｒａ．
Ｔｈｅｃｌｕｓｔｅｒａｎａｌｙｓｉｓｒｅｓｕｌｔｓｓｈｏｗｅｄｔｈａｔｔｈｅ１９ｓｔｒａｉｎｓｃｏｕｌｄｂｅｓｅｐａｒａｔｅｄｉｎｔｏ４ｇｒｏｕｐｓ．Ｉｔｗａｓｃｏｎｃｌｕｄｅｄｔｈａｔ
ｔｈｅｄｉｓｔｒｉｂｕｔｉｏｎｃｈａｒａｃｔｅｒｉｃｓｏｆｅｎｄｏｐｈｙｔｉｃｂａｃｅｒｉａｗｅｒｅｒｅｌａｔｅｄｔｏｄｉｆｆｅｒｅｎｔｆｏｒａｇｅｇｒａｓｓｅｓａｎｄｄｉｆｆｅｒｅｎｔｉｓｏｌａｔｅｄ
ｐａｒｔｓ，ｅｓｐｅｃｉａｌｙｔｏｔｈｅｄｉｆｆｅｒｅｎｔｆｏｒａｇｅｇｒａｓｓｅｓ．
犓犲狔狑狅狉犱狊：ｆｏｒａｇｅｇｒａｓｓｅｓ；ｅｎｄｏｐｈｙｔｉｃｂａｃｔｅｒｉａ；ｆａｔｔｙａｃｉｄｄｅｔｅｃｔｉｏｎ；ｄｉｓｔｒｉｂｕｔｉｏｎｃｈａｒａｃｔｅｒｉｓｔｉｃｓ
１３１第１９卷第３期 草业学报２０１０年