全 文 ： 收稿日期: 20000730
基金项目: 948 项目 余甘子优良品种和育种材料引进( 96415) 的部分内容
作者简介: 张守项(1968 ) ,女,黑龙江加格达奇人,助理研究员.
文章编号: 10011498( 2002) 01011604
余甘子离体快速繁殖技术的初步研究
张守英, 姚小华, 任华东, 王开良
(中国林业科学研究院亚热带林业研究所,浙江富阳 311400)
关键词: 余甘子;离体繁殖
中图分类号: S7231+ 32 文献标识码: A
余甘子( Phyllanthus emblica L. )为大戟科( Euphorbiaceae) ,叶下珠属( Phyllanthus) ,落叶小乔
木或灌木。在我国主要分布于南亚热带地区[ 1]。余甘子果可生食、渍制或榨取果汁,果具清热
解毒、降血压、防治肝胆病、收敛止泻作用,是重要的中药材和制药原料[ 2] , 同时树皮为重要的
栲胶原料。余甘子在干热河谷、石质山地等生态脆弱区已作为优良的生态经济兼用造林树种。
我国余甘子良种化起步晚,虽然只有少数地区开始采用良种,但发展势头很快。近几年引进的
国外品种已表现出较好的适应性和生长特性。进行品种苗的无性繁殖,是果用品种生产的最
好方法[ 3]。目前,余甘子良种苗木多采用嫁接方法进行无性繁殖,扦插等无性繁殖方法并没有
成功。余甘子离体繁殖的研究国内外甚少,仅限于印度 SehgalCB对余甘子胚乳再生三倍体植
株的研究[ 4]。本文是对余甘子离体快速繁殖进行探索性的研究, 以其为国内外优良品种离体
扩繁打下技术基础, 从而进一步加速优良品种的繁殖和培育, 缩短育种周期, 为今后的遗传改
良和生产良种化服务。
1 材料与方法
11 外植体的处理及培养条件
选取余甘子优良成熟种子放在培养皿中进行水培发芽, 以 15 d左右子叶刚展开的嫩芽为
外植体材料,经 = 75%的酒精漂洗 30 s, 无菌水清洗 3次, 再用 15 g!L- 1的HgCl2 溶液浸泡
10 15 min,无菌水清洗 3 5次,然后用无菌滤纸吸去材料表面水于诱导培养基上进行芽
的分化,置于温度在 25 ∀ 2 # 、每日辅助光照 12 14 h、光照强度为 1 600 2 000 lx 的培养箱
中培养。
12 诱导及增殖培养
基本培养基选用 MS,添加不同质量浓度的细胞分裂素 BA( 01、05、10、20 mg!L- 1)、KT
( 01、05、10 mg!L- 1)、生长素NAA( 01、05、10 mg!L- 1)、IAA( 01、05、10 mg!L- 1)、赤霉素
GA3( 01、05、10 mg!L- 1) ,组合成不同的培养基配方共 20个, pH 值为 57, 蔗糖 30 g!L- 1,琼
脂5 g!L- 1。
林业科学研究 2002, 15( 1) : 116 119
Forest Research
13 生根培养
生根培养基用MS和 1/ 2MS,附加NAA 0 10 mg!L- 1或 IBA 0 10 mg!L- 1组合的不同
培养基配方。
2 结果与分析
图 1 余甘子诱导的丛生芽
21 不定芽诱导及继代增殖
外植体培养于诱导培养基中 15 20 d, 大
部分胚轴子叶处普遍膨大愈伤组织化,出现肉
眼可见的突起, 有的已出现绿色的芽, 逐渐形
成由多数芽组成的丛生芽群。而不含 BA的培
养基中只有高生长, 没有丛生芽的分化。当
BA质量浓度在 10 20 mg!L- 1时,不定芽分
化过多细长并且基部愈伤化严重。在含有
GA3 的培养基中试管苗过细, 有些叶子变黄脱
落,形态不正常,长势衰退。通过试验,确定不
定芽诱导最适培养基为MS+ BA 05 mg!L- 1+
NAA 01 mg!L- 1, 分化率达 90%以上, 30 50
d以后逐渐伸长为 3 5 cm 嫩枝(见图 1)。表
1是 10个外植体在最适培养基中培育 51 d形
成不定芽的情况。
从表 1中可以看出,余甘子不定芽诱导在
表 1 余甘子嫩芽诱导芽增殖数 个
外植体编号 观察日期(月- 日)
0422 0512 0602
1 1 31 44
2 1 15 29
3 1 22 38
4 1 16 30
5 1 15 23
6 1 29 42
7 1 17 24
8 1 14 30
9 1 16 26
10 1 27 61
相同培养基中没有明显差异,每培养 20 d左右
可增殖 2 3倍。随着继代增殖代数的增加,
大多数不定芽生长正常,枝长大于 2 cm 以上,
叶嫩绿。但有些芽的叶子变黄脱落或愈伤化,
这可能是由于外源激素在植物体中的积累造成
的。试验采取两种培养基交替培养的办法, 先
在MS+ BA 05 mg!L- 1+ NAA 01 mg!L- 1培养
20 d,再转入MS+ BA 01 mg!L- 1+ NAA 01 mg
!L- 1生长 20 d 为一个周期, 情况有所好转, 嫩
枝伸长达 3 cm 以上。鉴于各外植体之间遗传
与生理上存在着差异, 试验选取长势好增殖倍
数多的材料进行继代增殖。按理论推算一年可
增殖 8代,一个外植体以每代 2 3倍的速度增殖,经一年培养后可获得 500 6 000个嫩枝。
22 根的诱导与移植
剪取粗壮( 3 cm以上)的嫩枝培养于生根培养基中,以 1/ 2MS、MS为基本培养基,选用NAA
( 0、025、05、10 mg!L- 1)和 IBA( 0、025、05、10 mg!L- 1)两种生长素作生根试验(见表 2) , 20
d左右形成愈伤组织,再经过 30 d左右从愈伤组织分化形成根,根较粗壮, 主根上附有须根(见
117第 1 期 张守英等:余甘子离体快速繁殖技术的初步研究
图2)。
从表2 中可以看出, 低无机盐含量的培养基有利于余甘子的生根, 植物激素 NAA
025 mg!L- 1和 IBA 025 mg!L- 1对组培苗的生根有良好的促进作用,余甘子生根的最适培养
基为 1/ 2MS+ NAA 025 mg!L- 1+ IBA 025 mg!L- 1, 生根率也只有 30%左右,并且有一部分根
容易脱落。从试验观察看,根是从愈伤组织团再分化形成的,还没有观察到直接从嫩枝的形成
层长出的根。从解剖结构的剖面观察, 根茎维管系统相通的植株的根不易脱落,反之容易脱
落。试验采取在培养基中加入 2 g!L- 1活性炭方法,可以减少愈伤组织的过多形成。余甘子根
的分化比较困难,这一点在扦插繁殖上也表现出来。当根长到 10 15 cm 时,将试管苗置于
自然光下炼苗 3 5 d, 然后取出小苗清洗附在根上的培养基,移至以珍珠岩为基质的沙盆中,
成活率只有13%左右。
图 2 余甘子诱导的根系
表 2 余甘子根系的诱导试验
基本
培养基
植物激素种类及质量浓度
NAA/ ( mg!L- 1) IBA/ ( mg!L- 1)
嫩枝数
/个
生根数
/个
生根率
/ %
0 025 10 2 20
025 0 10 2 20
1/2MS 0. 25 0. 25 10 3 30
0. 50 0. 50 10 1 10
1. 00 1. 00 10 0 0
0 0. 25 10 0 0
0. 25 0 10 0 0
MS 0. 25 0. 25 10 0 0
0. 50 0. 50 10 0 0
1. 00 1. 00 10 0 0
3 小结与讨论
( 1)余甘子的嫩芽外植体在含 BA 的培养基上, 附加一定
质量浓度范围的 KT 或 NAA 或 GA3 或 IAA, 均能诱导出不定
芽,对不定芽的分化无明显的影响。而在不含 BA 的培养基
中,嫩苗外植体只朝正常方向发展, 没有不定芽的分化, 说明细胞分裂素 BA对芽的分化起关
键作用。但随着 BA质量浓度的升高, 抑制作用加强。因此, 对于大多数树种来说, 细胞分裂
素是离体器官发生必须的外源激素,细胞分裂素与生长素的适当配比通常决定器官发生的类
型。
( 2)余甘子的生根率和移植成活率都不高, 需进一步深入研究生根外植体的条件、影响生
根的多方面因素及移植的各种条件。
( 3)通过离体繁殖研究,一方面生产无根试管苗,可以为建立微枝繁殖体系提供大量材料,
另一方面进一步解决生根问题,培育试管植株。
参考文献:
[ 1] 姚小华,叶金好,盛能荣,等. 余甘子优良类型选择[ J] 林业科学研究, 1993, 6( 3) : 299 305
[ 2] 崔永忠,陈玉德,郑德蓉. 余甘子繁殖试验初报[ J] 林业科学研究, 1997, 10( 1) : 93 95
118 林 业 科 学 研 究 第 15卷
[ 3] 姚小华,盛能荣. 我国余甘子良种现状和选育重点探讨[ J] 经济林研究, 1999, 17( 1) : 9 12
[ 4] SehgalCB, SuniliaKhurana, SyedAbbasN, et al. In vitro regeneration of t riploid plantlet s from the endosperm of Emboica off icinalis
Gaertn[ J] Advances in Agricultural Research in India, 1994, 2: 1 19
[ 5] 陈振光 果树组织培养[M ] 上海:上海科学技术出版社, 1987
A Preliminary Study on Rapid Propagation in vitro of Emblic
ZHANG Shouying, YAO Xiaohua, REN Huadong , WANGKailiang
(Research Inst itute of Subtropical Forestry, CAF, Fuyang 311400, Zhejiang, China)
Abstract:Adventitious buds were induced by using tender buds emblic ( Phyllanthus emblica L . ) as ex
plants with MS medium contained different concentration of BA andKT, GA3,NAA or IAA, of whichMS
medium combined with 0. 5 mg!L- 1 of BA and 0. 1 mg!L- 1 of NAA is suitable for adventitious buds in
ducement, the rate of differentiation reached more than 90%. MS medium with 0. 1 mg!L- 1 of BA and
0. 1mg!L- 1 of NAA is suitable for the growth of shoots, and 2 3 advent itious buds were regenerated in
base. But rooting rate reached only about 30% by using 1/ 2MS with 0. 25mg!L- 1 of NAA or with 0. 25
mg!L- 1 of NAA and 0. 25 mg!L- 1 of IBA.
Key words: emblic; propagation in vitro
∃林业研究%(英文版)征稿启事
∃林业研究% (英文版) ( Journal of Forestry Research)是由东北林业大学主办,吉林省林科院、辽宁省林科院和
黑龙江省林科所协办,国家教育部主管的英文林业学术期刊, 创办于 1990 年, 季刊。主要刊登: 森林经营、林
木育种、造林、森林生态、森林土壤、森林保护、野生动物生态与管理、野生动物保护与利用、生物科学、木材科
学、木材加工工艺、森林采运技术等方面的原始论文。同时, 也刊登研究综述、研究简报、会议消息、书评方面
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∃林业研究% (英文版)创刊以来,一直受到广大作者及读者的关心与厚爱。经过不懈的努力, 本刊逐渐发
展成为一种在国内外具有一定影响的英文林业学术期刊,在宣传报道我国林业研究成果和促进国际学术交
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I T I)、中国科学引文数据库、中国学术期刊文摘、中国生物学文摘、中国林业文摘、中国林业文摘(英文版 )、全
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