全 文 ：林业科学研究摇 圆园员猿袁圆远渊远冤院苑怨缘 苑怨怨云燥则藻泽贼 砸藻泽藻葬则糟澡
摇 摇 文章编号院员园园员鄄员源怨愿渊圆园员猿冤园远鄄园苑怨缘鄄园缘
基于 杂杂砸分子标记的杜仲遗传多样性体系建立
黄海燕员袁 杜红岩员 鄢袁 乌云塔娜圆袁 朱高浦员
渊员郾 中国林业科学研究院经济林研究开发中心袁河南 郑州摇 源缘园园园猿曰 圆郾 国家林业局经济林育种与栽培重点实验室袁湖南 长沙摇 源员园园园源冤
收稿日期院 圆园员圆鄄员员鄄圆缘
基金项目院 国家林业公益性行业科研专项渊圆园员园园源园圆怨冤尧国家十二五科技支撑计划渊圆园员圆月粤阅圆员月园缘园圆冤
作者简介院 黄海燕渊员怨愿远要冤袁女袁河南嵩县人袁硕士研究生遥 研究方向院杜仲育种曰耘鄄皂葬蚤造院澡怎葬灶早澡葬蚤赠葬灶园苑园怨岳 员远猿援 糟燥皂
鄢通讯作者院 研究员袁博士生导师遥 研究方向院杜仲育种栽培与综合利用遥 耘鄄皂葬蚤造院凿澡赠缘员缘岳 员圆远援 糟燥皂
关键词院杜仲曰种质资源曰杂杂砸 原 孕悦砸反应体系曰引物筛选
中图分类号院杂苑员愿援 源远 文献标识码院粤
耘泽贼葬遭造蚤泽澡皂藻灶贼 燥枣 郧藻灶藻贼蚤糟 阅蚤增藻则泽蚤贼赠 杂赠泽贼藻皂 燥枣 耘怎糟燥皂皂蚤葬 怎造皂燥蚤凿藻泽
月葬泽藻凿 燥灶 杂杂砸 酝燥造藻糟怎造葬则 酝葬则噪藻则泽
匀哉粤晕郧 匀葬蚤鄄赠葬灶员袁袁阅哉 匀燥灶早鄄赠葬灶员袁宰哉再哉晕 栽葬灶葬圆袁在匀哉 郧葬燥鄄责怎员
渊员郾 晕燥灶鄄贼蚤皂遭藻则 云燥则藻泽贼则赠 砸藻泽藻葬则糟澡 葬灶凿 阅藻增藻造燥责皂藻灶贼 悦藻灶贼藻则袁 悦澡蚤灶藻泽藻 粤糟葬凿藻皂赠 燥枣 云燥则藻泽贼则赠袁 在澡藻灶早扎澡燥怎摇 源缘园园园猿袁 匀藻爷灶葬灶袁 悦澡蚤灶葬曰
圆郾 运藻赠 蕴葬遭燥则葬贼燥则赠 燥枣 晕燥灶 原 憎燥燥凿 云燥则藻泽贼 孕则燥凿怎糟贼泽 燥枣 杂贼葬贼藻 云燥则藻泽贼则赠 粤凿皂蚤灶蚤泽贼则葬贼蚤燥灶袁 悦澡葬灶早泽澡葬摇 源员园园园源袁 匀怎爷灶葬灶袁 悦澡蚤灶葬冤
粤遭泽贼则葬糟贼院 陨灶 燥则凿藻则 贼燥 泽藻贼 怎责 贼澡藻 早藻灶藻贼蚤糟 凿蚤增藻则泽蚤贼赠 泽赠泽贼藻皂 燥枣 耘怎糟燥皂皂蚤葬 怎造皂燥蚤凿藻泽 韵造蚤增藻则 遭葬泽藻凿 燥灶 杂杂砸 皂燥造藻糟怎造葬则
皂葬则噪藻则泽袁 贼澡藻 藻泽贼葬遭造蚤泽澡皂藻灶贼 燥枣 杂杂砸鄄孕悦砸 则藻葬糟贼蚤燥灶 泽赠泽贼藻皂 葬灶凿 泽糟则藻藻灶蚤灶早 燥怎贼 杂杂砸 皂葬则噪藻则 责则蚤皂藻则 泽澡燥憎蚤灶早 澡蚤早澡 责燥造赠皂燥则鄄
责澡蚤泽皂 憎藻则藻 泽贼怎凿蚤藻凿援 粤 蕴怨渊猿源冤 燥则贼澡燥早燥灶葬造 凿藻泽蚤早灶 憎葬泽 责藻则枣燥则皂藻凿 贼燥 燥责贼蚤皂蚤扎藻 贼澡藻 皂葬蚤灶 枣葬糟贼燥则泽 燥枣 贼澡藻 杂杂砸鄄孕悦砸 则藻葬糟鄄贼蚤燥灶 泽赠泽贼藻皂援 栽澡藻 则藻泽怎造贼泽 蚤灶凿蚤糟葬贼藻凿 贼澡葬贼 贼澡藻 遭藻泽贼 杂杂砸鄄孕悦砸 则藻葬糟贼蚤燥灶 泽赠泽贼藻皂 枣燥则 耘援 怎造皂燥蚤凿藻泽 憎葬泽 阅晕粤 贼藻皂责造葬贼藻 员 滋蕴
渊猿园 远园 灶早窑滋蕴 原员冤袁 圆 伊 栽葬择 孕悦砸 酝葬泽贼藻则 酝蚤曾 员园 滋蕴袁 责则蚤皂藻则 员 滋蕴 憎蚤贼澡 贼澡藻 贼燥贼葬造 增燥造怎皂藻 燥枣 圆缘 滋蕴援 栽澡藻 孕悦砸 则藻鄄
葬糟贼蚤燥灶 泽赠泽贼藻皂 澡葬凿 澡蚤早澡 泽贼葬遭蚤造蚤贼赠 葬灶凿 则藻责藻葬贼葬遭蚤造蚤贼赠袁 贼澡藻 责葬蚤则泽 燥枣 杂杂砸 责则蚤皂藻则泽 憎蚤贼澡 澡蚤早澡 责燥造赠皂燥则责澡蚤泽皂 憎藻则藻 早燥贼贼藻灶援 栽澡藻
愿 耘援 怎造皂燥蚤凿藻泽 泽葬皂责造藻泽爷 阅晕粤 泽藻择怎藻灶糟藻 憎葬泽 葬皂责造蚤枣蚤藻凿 憎蚤贼澡 员猿 责葬蚤则泽 燥枣 杂杂砸 责则蚤皂藻则泽 遭赠 杂杂砸鄄孕悦砸 贼藻糟澡灶蚤择怎藻袁 猿源 葬造鄄
造藻造藻泽 憎藻则藻 凿藻贼藻糟贼藻凿袁 圆援 远 葬造造藻造藻泽 憎藻则藻 凿藻贼藻糟贼藻凿 枣则燥皂 责藻则 泽蚤贼藻 燥灶 葬增藻则葬早藻援 耘葬糟澡 葬造造藻造藻爷泽 藻枣枣藻糟贼蚤增藻 灶怎皂遭藻则 憎葬泽 员援 苑缘员
缘袁 葬灶凿 贼澡藻 澡 增葬造怎藻 憎葬泽 园援 猿苑怨 愿袁 贼澡藻 葬增藻则葬早藻 陨 增葬造怎藻 憎葬泽 园援 远源猿 猿援 栽澡蚤泽 泽贼怎凿赠 蚤泽 澡藻造责枣怎造 蚤灶 怎泽蚤灶早 杂杂砸 皂燥造藻糟怎造葬则
皂葬则噪藻则 贼燥 葬灶葬造赠扎藻 早藻灶藻贼蚤糟 凿蚤增藻则泽蚤贼赠 葬灶凿 早藻灶藻贼蚤糟 则藻造葬贼蚤燥灶泽澡蚤责 蚤灶 耘援 怎造皂燥蚤凿藻泽援
运藻赠 憎燥则凿泽院耘怎糟燥皂皂蚤葬 怎造皂燥蚤凿藻泽 韵造蚤增藻则曰早藻则皂责造葬泽皂 则藻泽燥怎则糟藻泽曰燥责贼蚤皂蚤扎葬贼蚤燥灶 燥枣 杂杂砸鄄孕悦砸 泽赠泽贼藻皂曰责则蚤皂藻则 泽糟则藻藻灶蚤灶早
杜仲渊耘怎糟燥皂皂蚤葬 怎造皂燥蚤凿藻泽 韵造蚤增藻则冤属杜仲科渊耘怎鄄
糟燥皂皂蚤葬糟藻葬藻冤袁单科单属单种袁为第四纪冰川侵袭后
残留下的古老树种袁仅存于中国袁属国家二级保护植
物咱员 原 圆暂 遥 杜仲的适应性极强袁分布在我国亚热带至
温带的 圆苑 个省渊市尧区冤袁美国尧法国尧日本尧韩国等都
有引种咱员 原 圆暂 遥 杜仲是我国特有的优质天然橡胶和中
药资源袁杜仲的皮尧叶尧雄花尧果实等具有很高的药用
价值及经济效益袁尤其是杜仲富含天然橡胶要杜仲
胶袁是国家战略性储备资源咱猿 原 源暂 遥 杜仲的变异类型
丰富袁有关研究表明其形态尧结构甚至胚胎类型都表
现出较高的多样性咱缘 原 员园暂 袁因此急需对该物种进行遗
传学的研究遥
近年来袁阅晕粤标记技术已广泛用于植物遗传多
样性研究袁杂杂砸 分子标记在林木的品种和亲缘关系
鉴定等方面得到广泛应用咱员员 原 员圆暂 遥 目前对我国部分
地区杜仲遗传多样性研究尧构建优良杜仲品种指纹
图谱尧雌雄株鉴定尧遗传连锁图谱的构建等研究也仅
局限于 砸粤孕阅尧粤云蕴孕尧陨杂杂砸 等分子标记技术咱员猿 原 员愿暂 遥
林摇 业摇 科摇 学摇 研摇 究 第 圆远 卷
简单重复序列 渊 泽蚤皂责造藻 泽藻择怎藻灶糟藻 则藻责藻葬贼袁杂杂砸冤袁主要
是由 员 远 核苷酸的重复序列袁广泛存在于原核和
真核生物中遥 和其他分子标记相比袁杂杂砸 标记具有
多态性高尧重复性高尧共显性尧易检测尧操作简单尧无
放射尧所用时间较短尧覆盖面广等优点袁在植物遗传
多样性研究中尤其受到青睐咱员圆袁员怨 原 圆园暂 遥
杂杂砸标记尚未在杜仲的研究上应用袁关于杜仲
杂杂砸引物公布的也很少咱圆员暂 袁因此需要加快引物开发
速度遥 本研究利用 杂杂砸标记袁建立 杂杂砸鄄孕悦砸反应体
系袁并以 愿 份杜仲为供试材料袁筛选合适的多态性引
物袁为杜仲的遗传多样性分析尧亲缘关系研究等奠定
基础遥
员摇 材料与方法
员援 员摇 实验材料
本研究引物筛选所用的 愿 份杜仲样品于 圆园员圆
年 缘 月取自中国林业科学研究院经济林研究开发中
心杜仲基因库渊表 员冤遥 取其健壮尧无病虫害的当年
生杜仲嫩叶袁液氮速冻后保存于 原 愿园益冰箱中备用遥
表 员摇 杜仲试验材料
名称 代表性类型 取样地 地理位置经度渊耘冤 纬度渊晕冤 海拔 辕 皂
员园源愿圆载 大陆性季风气候区 江苏响水 员员怨毅愿园忆圆圆援 苑义 猿源毅园苑忆缘远援 圆义 苑
员园员猿愿悦 温带季风性气候 北京 员员远毅员愿忆园援 源源义 猿怨毅缘怨忆圆援 苑远义 缘猿
员园缘怨缘悦 暖温带大陆性气候 河南郑州 员员猿毅源员忆猿苑援 怨缘义 猿源毅源远忆圆猿援 愿源义 怨远
员园园园源悦 亚热带区域 湖南江垭 员员园毅苑苑忆圆猿援 缘义 圆怨毅缘员忆员苑援 猿义 员缘怨
员园缘怨怨悦 暖温带大陆性气候 河南郑州 员员猿毅源员忆猿苑援 怨缘义 猿源毅源远忆圆猿援 愿源义 怨远
员园缘愿缘载 暖温带南缘向北亚热带过渡区 河南洛阳 员员圆毅圆缘忆员源援 员远义 猿源毅猿怨忆缘远援 圆缘义 员缘怨
员园园怨员悦 中亚热带季风气候 江西南昌 员员缘毅缘园忆愿援 猿圆义 圆愿毅源缘忆猿猿援 圆圆义 源缘
员圆园园员载鄢 亚热带向温带过渡区 湖北神农架 员员园毅员园忆源远援 苑义 猿员毅圆源忆员苑援 源义 员 员远猿
摇 摇 注院鄢为湖北神农架发现一株树龄 圆园园 多年的杜仲袁疑似为野生植株袁并推测湖北神农架可能为杜仲起源地之一咱圆圆暂 遥
员援 圆摇 主要试剂和仪器
所用试剂 圆 伊 栽葬择 孕悦砸 酝葬泽贼藻则 酝蚤曾尧新型植物基
因组提取试剂盒渊栽陨粤晕郧耘晕冤尧琼脂糖尧丙烯酰胺尧甲
叉双丙烯酰胺尧过硫酸铵尧溴酚蓝尧 阅晕粤 酝葬则噪藻则尧
栽耘酝耘阅渊四甲基乙二胺冤尧无水乙醇尧剥离硅烷遥
主要仪器院琼脂糖凝胶电泳仪尧聚丙烯凝胶电泳
仪尧凝胶成像系统尧 离心机尧研钵尧液氮罐尧移液枪尧
园援 缘 皂蕴和 员援 缘 皂蕴 耘责责藻灶凿燥则枣离心管尧 原圆园益冰箱尧高
压灭菌锅尧烧杯尧玻璃棒等遥
员援 猿摇 实验方法
员援 猿援 员摇 引物选择摇 所选用的引物分为两部分袁第一
部分为从已发表的文献中查找到的 员怨 对引物咱圆员暂 袁
第二部分为本课题组自行开发的引物袁引物由上海
生工生物工程有限公司合成遥
员援 猿援 圆摇 阅晕粤提取与检测摇 阅晕粤 的提取按购自北京
天根生物有限公司的新型植物基因组提取试剂盒
渊离心柱型冤说明书进行遥 取 阅晕粤 样品 猿 滋蕴 与 员
滋蕴 远 伊 蕴燥葬凿蚤灶早 遭怎枣枣藻则 混匀后上样袁员豫的琼脂糖凝胶
电泳检测 阅晕粤 的质量袁源 缘园园 遭责 酝葬则噪藻则 猿 滋蕴 袁员 伊
栽粤耘电泳缓冲液袁员员园 灾 电泳 猿园 皂蚤灶袁电泳结束后用
上海复日 云砸鄄怨愿园粤 生物电泳图像分析系统观察照
相袁 原 圆园益保存备用遥
员援 猿援 猿摇 杂杂砸鄄孕悦砸反应体系及反应条件优化
员援 猿援 猿援 员摇 杂杂砸鄄孕悦砸反应体系的建立
用 圆 伊 栽葬择 孕悦砸 酝葬泽贼藻则 酝蚤曾 渊 栽陨粤晕郧耘晕冤袁将
凿晕栽孕泽尧栽葬择 酶 和 酝早圆 垣 猿 个因素作为整体袁综合评价
其对杜仲 杂杂砸鄄孕悦砸 反应体系的影响遥 采用 蕴怨 渊猿源 冤
正交试验设计对 杂杂砸鄄孕悦砸 反应体系的主要影响因
素 圆 伊 栽葬择 孕悦砸 酝葬泽贼藻则 酝蚤曾 用量尧引物浓度尧模板
阅晕粤浓度进行优化袁共 怨 个处理渊表 圆尧表 猿冤袁每个
处理重复 猿 次袁反应的总体积为 圆缘 滋蕴袁阅晕粤 样品的
浓度为 猿园 远园 灶早窑滋蕴 原员袁引物浓度为 员园 滋皂燥造窑
蕴 原员袁并用 凿凿匀圆韵设一个对照袁用以检测体系是否有
污染袁用引物 耘援 猿缘 对反应体系的优化遥
杂杂孕鄄孕悦砸的扩增程序为院怨源益 预变性 源 皂蚤灶曰
怨源益变性 猿园 泽袁缘愿益退火 猿园 泽袁苑圆益延伸 员 皂蚤灶袁共 猿缘
个循环曰苑圆益总延伸 员园 皂蚤灶 曰源益保存扩增产物遥
表 圆摇 杜仲 杂杂砸鄄孕悦砸反应体系的因素水平
水平 因素模板 阅晕粤 酝葬泽贼藻则 酝蚤曾 引物
员 员援 园 愿 园援 愿
圆 员援 缘 怨 员援 园
猿 圆援 园 员园 员援 缘
远怨苑
第 远 期 黄海燕等院基于 杂杂砸分子标记的杜仲遗传多样性体系建立
表 猿摇 咱蕴怨渊猿源冤暂正交试验设计表
编号 因素模板 阅晕粤 酝葬泽贼藻则 酝蚤曾 引物
员 员援 园 愿 园援 愿
圆 员援 园 怨 员援 园
猿 员援 园 员园 员援 缘
源 员援 缘 员园 园援 愿
缘 员援 缘 愿 员援 园
远 员援 缘 怨 员援 缘
苑 圆援 园 怨 园援 愿
愿 圆援 园 员园 员援 园
怨 圆援 园 愿 员援 缘
员援 猿援 猿援 圆摇 杂杂砸鄄孕悦砸产物检测
扩增出的 孕悦砸产物用 圆豫的琼脂糖凝胶电泳在
员圆园 灾电压下电泳 猿园 皂蚤灶袁使用复日凝胶成像系统照
相尧分析袁对有特异性条带的 孕悦砸产物再用 愿豫的非
变性聚丙烯酰胺凝胶电泳在 圆园园 灾 电压下电泳 圆援 缘
源 澡袁电泳结束后用 源园园 皂蕴 猿 伊 郧藻造则藻凿渊源园 皂蕴晕葬悦造
垣 猿远园 皂蕴 员 伊 栽月耘 垣 员圆园 滋蕴 郧藻造则藻凿冤染液浸泡凝胶袁
染色 员 澡袁再用复日凝胶成像系统照相尧分析遥
员援 猿援 源摇 反应体系的验证和引物筛选 摇 用优化的
杂杂砸鄄孕悦砸反应体系袁利用引物 耘援 员苑 和 阅在远源 对 圆源
个杜仲 阅晕粤 样品为模板进行 杂杂砸鄄孕悦砸 扩增袁检测
反应体系的重复性及稳定性遥 利用优化的反应体系
愿 个样品进行 杂杂砸 引物筛选袁筛选出的引物用于后
期杜仲 杂杂砸分子标记遗传多样性分析遥
员援 猿援 缘 摇 杂杂砸 数据分析摇 各引物对应扩增出的等位
基因依据分子量按从大到小顺序进行编号遥 在相同
迁移率位置上有条带记为 员袁无条带记为 园袁建立 园尧员
矩阵袁构建 杂杂砸 引物扩增结果的数据库袁用 孕韵孕鄄
郧耘晕耘 猿圆 软件对数据进行分析遥
圆摇 结果与分析
圆援 员摇 杂杂砸鄄孕悦砸反应体系的直观分析
琼脂糖凝胶电泳结果显示院怨 个处理 猿 次重复
的 圆苑 个样品均得到目的条带袁从电泳图渊图 员冤可以
看出各个处理之间有一定的差异袁并且同一处理的
重复间差异较小袁悦运为对照袁说明反应体系无污染遥
怨 个处理组合中 圆尧缘尧苑 号处理效果较好袁员尧源尧远 次
之袁第 猿尧愿尧怨 号处理的扩增效果较差遥
聚丙烯酰胺凝胶电泳的结果更为精确将 怨 个处
理的扩增条带区分开渊图 圆冤袁其结果与琼脂糖凝胶
电泳结果较为一致袁对比琼脂糖凝胶电泳袁本实验选
择 圆 号处理组合为最优组合袁即 圆缘 滋蕴的反应体系院
酝葬泽贼藻则 酝蚤曾 员园 滋蕴袁引物各 员 滋蕴渊浓度 园援 源 滋皂燥造窑
蕴 原员冤袁模板 阅晕粤 员 滋蕴渊猿园 远园 灶早窑滋蕴 原员冤遥
图 员摇 琼脂糖凝胶电泳检测 孕悦砸扩增效果
图 圆摇 聚丙烯酰胺凝胶电泳检测 孕悦砸扩增效果
圆援 圆摇 杂杂砸鄄孕悦砸优化体系的扩增检测
根据上述优化的 杂杂砸鄄孕悦砸 反应体系袁随机选用
引物 耘援 员苑 和 阅在远源 对 圆源 份杜仲样品进行聚丙烯酰
粤为 耘援 员苑袁月为 阅在远源
图 猿摇 引物 耘援 员苑 和 阅在远源 对 圆源 个不同杜仲样品的
聚丙烯酰胺凝胶电泳图
胺凝胶电泳检测渊图 猿冤袁所有引物均扩增出清晰尧多
态性高的条带袁每个品种均扩增出清晰的条带袁有效
地反应出杜仲无性系间的多态性袁建立的 杂杂砸鄄孕悦砸
苑怨苑
林摇 业摇 科摇 学摇 研摇 究 第 圆远 卷
反应体系能够有效地用于杜仲遗传多样性分析尧亲
缘关系研究遥
圆援 猿摇 引物筛选
利用 愿 份杜仲样品渊表 员冤进行引物筛选袁从 缘园
对引物中筛选出 员猿 对扩增稳定尧重复性好尧多态性
高的引物袁占引物数量的 圆远豫 袁用于下一步利用 杂杂砸
分子标记研究杜仲的遗传多样性袁引物信息见表 源袁
部分引物扩增的 孕粤郧耘效果图见图 源遥
圆援 源摇 引物多态性分析
筛选出的 员猿 对 杂杂砸 引物在 愿 份杜仲样品中检
测到 猿源 个等位基因袁平均每对 杂杂砸 引物检测到 圆郾 远
个等位基因遥 不同 杂杂砸引物检测到的等位基因数不
等袁其中 耘哉猿猿引物检测到的等位基因数最多为 远个袁
粤为 耘援 员苑袁月为 耘哉远怨
图 源摇 引物扩增 孕粤郧耘效果图
而大部分引物检测到的等位基因数为 圆 个遥 产生片
段差异最大的引物为 耘哉员圆袁孕悦砸产物片段长度从 员远苑
遭责到 圆园员 遭责袁产生片段差异最小的引物为 耘哉圆怨袁孕悦砸
产物片段长度从 员圆圆 遭责到 员圆愿 遭责渊表 源冤遥
表 源摇 杜仲 杂杂砸标记引物信息
引物名称 正向引物序列渊缘爷鄄猿爷冤 反向引物序列渊缘爷鄄猿爷冤 栽皂值 辕 益 重复单元 产物大小 辕 遭责
耘援 员苑 郧粤郧粤悦郧悦悦粤悦粤悦粤粤郧栽粤粤粤栽 栽郧栽悦悦粤粤悦粤粤悦悦栽郧栽粤栽栽郧粤 缘缘 渊悦粤郧冤怨 员苑苑 员愿苑
耘援 员怨 郧粤郧栽栽粤郧悦粤粤粤粤郧悦悦粤栽郧粤栽 悦粤郧粤悦栽悦栽栽栽悦郧悦栽栽栽郧粤栽栽 缘缘 渊栽悦冤苑 员怨愿 圆员园
耘援 圆怨 郧郧栽郧郧粤粤粤栽郧粤栽悦栽粤粤粤栽郧悦 栽郧悦栽郧粤栽粤悦悦悦粤栽栽郧栽栽悦粤栽 缘远 渊郧郧粤冤源 员愿缘 员怨愿
耘援 猿缘 悦悦粤栽粤悦悦粤栽粤栽郧郧粤粤粤粤栽悦悦 栽郧粤郧郧悦栽粤悦栽悦栽悦悦栽悦悦粤悦 缘缘 渊悦悦栽冤苑 圆猿源 圆远员
耘援 猿苑 郧郧郧粤郧悦粤郧栽栽悦粤悦粤栽栽栽栽栽粤 悦栽栽悦栽悦栽栽栽栽栽悦郧悦栽悦悦栽栽悦 缘愿 渊悦粤冤员园 圆员员 圆圆圆
耘哉员圆 郧郧粤悦粤粤粤栽郧悦粤悦悦粤悦悦粤粤郧粤 悦粤栽郧悦栽粤悦粤粤郧栽悦粤悦悦粤粤粤郧栽粤粤郧郧 远园 渊悦粤冤员员 员远苑 圆园员
耘哉圆怨 粤悦悦悦粤栽悦粤郧悦悦粤栽悦悦粤栽栽悦悦 栽栽悦郧栽粤郧栽悦悦悦郧栽郧粤粤郧悦粤郧 远园 渊粤郧粤冤苑 员圆圆 员圆愿
耘哉猿猿 栽郧郧粤悦粤悦郧郧粤粤粤悦悦粤粤栽粤粤悦粤 栽悦粤栽悦栽悦悦栽悦悦粤郧悦悦栽栽郧粤粤栽粤 缘怨 渊粤郧冤员圆 员园源 员圆猿
耘哉远怨 悦悦栽栽粤悦粤悦悦粤粤悦悦郧栽栽悦栽悦粤栽粤悦 郧郧郧粤悦粤悦栽悦郧悦粤悦悦栽栽郧粤悦 远园 渊栽悦栽冤苑 员员源 员圆猿
耘哉怨员 悦悦粤栽悦郧悦栽悦粤粤栽粤粤栽栽悦粤栽悦粤郧郧 悦悦粤悦栽郧悦悦栽悦悦粤悦悦粤粤悦郧 远园 渊粤郧冤怨 怨缘 员园苑
耘哉怨远 粤郧粤栽栽粤栽郧郧栽栽栽郧悦栽郧悦栽悦栽郧栽郧 粤栽栽郧郧栽郧栽悦粤栽栽郧悦栽悦悦栽栽栽悦栽 远园 渊郧栽栽冤愿 圆园远 圆圆圆
耘哉员园愿 郧栽栽栽郧悦栽郧悦栽悦栽郧栽郧悦粤栽郧栽栽郧 悦粤栽栽郧郧栽郧栽悦粤栽栽郧悦栽悦悦栽栽栽悦栽 远园 渊郧栽栽冤愿 员怨远 圆圆员
阅在远源鄢 栽栽悦悦悦栽粤郧粤郧粤粤粤栽郧悦粤粤悦悦粤 悦悦郧郧粤粤郧粤粤栽郧粤粤粤栽粤悦粤悦栽悦粤 缘远 渊栽郧冤怨 员猿怨 员缘远
摇 摇 注院鄢引物 阅在远源 是根据已发表的文献咱圆员暂中查找得到袁其他引物都为本课题组开发的引物遥
圆援 缘摇 杂杂砸位点分析
利用 员猿 对引物对 愿 份杜仲样品进行 杂杂砸 检测
表明院各位点平均等位基因有效数分布在 员援 员猿圆 苑
圆援 愿源源 源 之间袁平均每个位点的等位基因有效数目为
员援 苑缘员 缘袁 晕藻蚤 指数 渊 澡冤的分布范围在 园援 员员苑 圆
园援 远源愿 源之间袁平均每个位点的 澡 值为 园援 猿苑怨 愿遥 陨 越
员 原移孕蚤圆袁孕蚤 为产物条带的表型袁平均每个位点的 陨
值为 园援 远源猿 猿袁陨值最高的为 耘哉猿猿 为 员援 猿远猿 源袁陨值最
低的为 耘哉圆怨 为 园援 圆猿猿 愿渊表 缘冤遥
猿摇 讨论
在杜仲的遗传多样性分析中先后有学者分别利
用 砸粤孕阅尧粤云蕴孕尧陨杂杂砸等分子标记方法对我国部分
地区的杜仲进行遗传多样性分析咱员源袁员苑袁圆猿暂 袁而用 杂杂砸
分子标记方法对我国的杜仲资源进行遗传多样性
的研究还未见报道袁已公布的杜仲 杂杂砸标记的引物
表 缘摇 各位点基因的多样性分析
位点
名称 位点数
有效等位基
因数渊灶藻冤
晕藻蚤爷泽基因多
样性指数渊澡冤
杂澡葬灶灶燥灶信息
指数渊 陨冤
耘援 员苑 猿 圆援 园猿员 苑 园援 缘园苑 愿 园援 愿猿园 缘
耘援 员怨 圆 员援 圆愿园 园 园援 圆员愿 愿 园援 猿苑远 愿
耘援 圆怨 圆 员援 圆愿园 园 园援 圆员愿 愿 园援 猿苑远 愿
耘援 猿缘 圆 员援 源猿愿 圆 园援 猿园源 苑 园援 源愿圆 远
耘援 猿苑 猿 圆援 圆源缘 远 园援 缘缘源 苑 园援 愿愿员 缘
耘哉员圆 猿 员援 远远圆 猿 园援 猿怨愿 源 园援 苑园圆 怨
耘哉圆怨 圆 员援 员猿圆 苑 园援 员员苑 圆 园援 圆猿猿 愿
耘哉猿猿 远 圆援 苑愿圆 远 园援 远源园 远 员援 猿远猿 源
耘哉远怨 圆 员援 圆愿园 园 园援 圆员愿 愿 园援 猿苑远 愿
耘哉怨员 圆 员援 苑缘猿 源 园援 源圆怨 苑 园援 远圆员 员
耘哉怨远 圆 员援 远园园 园 园援 猿苑缘 园 园援 缘远圆 猿
耘哉员园愿 圆 员援 源猿愿 圆 园援 猿园源 苑 园援 源愿圆 远
阅在远源 猿 圆援 愿源源 源 园援 远源愿 源 员援 园苑员 苑
平均 圆援 远 员援 苑缘员 缘 园援 猿苑怨 愿 园援 远源猿 猿
仅有 员怨 对袁这远远不能满足研究的需要遥 同时由于
砸粤孕阅 的重复性差尧粤云蕴孕 的操作复杂尧陨杂杂砸 多为显
性袁而 杂杂砸以共显性尧重复性高尧操作简单等优点在
愿怨苑
第 远 期 黄海燕等院基于 杂杂砸分子标记的杜仲遗传多样性体系建立
植物的遗传多样性研究中广泛应用遥
在本研究中袁根据杜仲的花尧果尧叶色等表型性
状尧树龄及地理位置差异等选择实验材料袁由此样本
筛选出的 杂杂砸引物对杜仲遗传多样性分析及群体遗
传学研究具有指导性意义遥
孕悦砸反应体系的优化方法有很多种袁常采用简
单梯度试验的方法对每个因素的最佳水平进行摸
索袁其过程繁杂袁且不能兼顾各因素之间的交互作
用咱圆源 原 圆缘暂 遥 本文采用的正交试验设计的方法具有综
合可比尧均衡分散尧效应明显尧伸缩性强的特点咱圆远暂 遥
通过琼脂糖凝胶电泳和聚丙烯酰胺凝胶电泳直观分
析袁得出杜仲 杂杂砸鄄孕悦砸 反应体系的最佳处理为 圆 号
处理遥 本文利用 酝葬泽贼藻则 酝蚤曾 可以将 栽葬择 酶尧酝早圆 垣 尧
凿晕栽孕泽 猿 个因素作为整体袁综合评价对 杂杂砸 原 孕悦砸反
应的影响袁这样既增加了结果的精确性袁同时又减少
了工作量咱圆苑暂 遥
利用此反应体系对 缘园对杜仲 杂杂砸分子标记引物
进行筛选袁筛选出 员猿 对引物在 愿 个样品中均扩增出
特异条带袁并且引物的多态性高尧稳定性好袁等位基因
数在 圆 远个之间袁平均每对引物检测到 圆郾 远 个等位
基因袁所筛选出的引物能够满足下步研究的需要遥
本研究建立了适合杜仲 杂杂砸鄄孕悦砸 的反应体系袁
筛选出 员猿 对具有多态性的引物袁为杜仲的遗传多样
性尧群体遗传学尧亲缘关系等研究奠定了基础遥
参考文献院
咱员暂 杜红岩援 杜仲优质高产栽培咱酝暂援 北京院中国林业出版社袁员怨怨远院
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咱圆暂 李芳东袁杜红岩援 杜仲咱酝暂援 北京院中国中医药出版社袁 圆园园员院
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咱猿暂 杜红岩援 我国的杜仲胶资源极其开发潜力与产业发展思路咱 允暂 援
经济林研究袁 圆园员园袁圆愿渊猿冤院员 原 远
咱源暂 杜红岩袁 李 钦袁李福海援 杜仲种仁桃叶珊瑚苷含量的测定及积
累规律咱允暂 援 林业科学研究袁 圆园园怨袁圆圆渊缘冤院苑源源 原 苑源远
咱缘暂 周志翔袁 王鹏程袁 徐永荣袁 等援 湖北省杜仲种质资源收集与繁殖
保存研究咱允暂援 华中农业大学学报袁 员怨怨愿袁员苑渊缘冤院缘园苑 原 缘员员
咱远暂 沈作奎袁 彭摇 诚援 杜仲不同地区不同种质间生长差异分析咱 允暂 援
特产研究袁 员怨怨怨渊源冤院怨 原 员员
咱苑暂 唐锡华援 杜仲孢子囊与配子体的发育形态咱允暂 援 植物学报袁员怨远圆袁
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咱愿暂 田兰馨援 杜仲胚胎学的研究咱允暂援 西北植物学报袁 员怨怨猿袁员猿 渊员冤院
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咱怨暂 张摇 檀袁 张康健袁 杨吉安袁 等援 杜仲酯酶同工酶地理递变及生长
预测的研究咱允暂 援 西北林学院学报袁 员怨怨猿袁愿渊源冤院圆园 原 圆猿
咱员园暂 李林初袁 徐炳声援 我国八种特有植物的染色体观察咱 允暂 援 植物
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咱员源暂 王瑷琦袁 黄璐琦袁 邵爱娟袁 等援 孑遗植物杜仲的遗传多样性
砸粤孕阅 分析和保护策略研究 咱 允暂援 中国中药杂志袁 圆园园远袁猿员
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咱员缘暂 王摇 宏援 杜仲优良品种渊无性系冤阅晕粤 指纹图谱的构建咱阅暂援
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咱员远暂 王大玮援 杜仲遗传连锁图谱构建及中药性状的分子标记咱阅暂援
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咱员怨暂 罗摇 冉袁 吴委林袁 张摇 旸袁 等援 杂杂砸 分子标记在作物遗传育种
中的应用咱允暂 援 基因组学与应用生物学袁 圆园员园袁圆怨渊员冤院员猿苑 原 员源猿
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咱圆圆暂 邓建云袁 李建强袁 黄宏文援 一株具有特异 粤云蕴孕 指纹图谱的杜
仲古树咱允暂援 武汉植物学研究袁 圆园园远袁圆源渊远冤院缘园怨 原 缘员猿
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咱圆源暂 张龙进袁 白成科援 正交优化北重楼 陨杂杂砸 原 孕悦砸 体系咱 允暂援 植物
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咱圆缘暂 罗摇 成袁 熊玉婷袁 顾摇 蔚袁 等援 华中五味子 陨杂杂砸 原 孕悦砸 反应体
系优化及引物筛选咱允暂 援 植物研究袁 圆园员园袁猿园渊缘冤院缘愿愿 原 缘怨猿
咱圆远暂 盖钧镒援 试验统计方法咱酝暂援 北京院中国农业出版社袁 圆园园园院圆愿远
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咱圆苑暂 梁玉琴袁 李芳东袁 傅建敏袁 等援 正交设计优化柿属植物 杂杂砸 原
孕悦砸反应体系咱允暂 援 经济林研究袁 圆园员员袁圆怨渊源冤院员苑 原 圆圆
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