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A Study on Methods for RNA Isolation from Bamboos

孝顺竹RNA提取方法研究



全 文 :林 业 科学 研究  , ! ∀ #∃ % & ∋ ∃( ) ∋ ∋ 
∗+ , −. / 0− 兜 1 ,2 3
文章编号 & ! ! 一!4 (∀ # %∃一∋ ∃(拱
孝顺竹 0 56 提取方法研究
杨卫东 , 王敬文 , 张金萍 , 费学谦
#中国林业科学研究院亚热带林业研究所 ,浙江 富阳 . ! !4  %
关键词 &孝顺竹 7 0 5 6 7提取 7 改良8 9 8 法
中图分类号 & ∋ ( : ( 文献标识码 & 6
6 8 /; < = + > ? −/3 + < ≅ Α+ , 0 5 6 Β≅+ Χ1 /Δ+ > Α, + Ε Φ 1 Ε Γ + + ≅
Η6 刀‘ 姚 Δ一<+ >Ι , 似5 ϑ ΚΔ >Ι 一侧−> ,  !之刁5 ‘ ΚΔ > 一Δ>Ι , 声省了Λ 砚 一娜1>
#0 − ≅ −1,2 3 Β> ≅ /Δ/; /− + Α 8 ; Γ肋Μ Δ−1Χ ∗+ ,− ≅/Δ’= , Ν6 ∗ , ∗; =1 > Ι . !!4 #Λ% , Ο3勺 Δ1> Ι , Ν3Δ> 1 %
6 Γ ≅/, 1 −/ & ! # ,Χ1/ Δ+ > +Α 3ΔΙ3 Π ; 1 ΧΔ/= 0 56 Α,+ Ε Γ1 Χ>Γ + + ≅ Θ 1 ≅ − + Ε ΜΧΔ− 1 /− < Γ= 3ΔΙ3 Χ− Ρ − Χ≅ + Α Μ+ Χ=Μ3 − > + Χ≅ 1 > < Μ + Χ=≅1 − − 31 ,Δ <− ≅
Θ 3Δ− 3 Γ Δ> < + , − + 一Μ ,− − ΔΜ Δ/1 /− Θ Δ/3 0 56 : Σ ≅Δ> Ι Τ0 ΒΥ + Χ , Ε + < ΔΑΔ − < 朗 1 > Δ< Δ> − Δ≅ + /3Δ+ − = 1 > 1 /− , Ε + <ΔΑΔ − < ΝΤ6 Φ , Ε + < ΔΑΔ − < 3 + /
Γ + ,1 /− < 1 > < Ε + < ΔΑΔ − < 89 8 Ε − /3 + < Θ − ,− Δ> Ρ − ≅/ΔΙ 1 /− < : Η Δ− Χ< 1 > < Π ; 1 ΧΔ/= Θ − ,− Ε + > Δ/+ ,− < Γ= Σ ς 1 Γ ≅+ , Γ1 > − − #6珊Ω 6 Ο二 1 > <
6剐Ω 6二。% 1 > < Γ= > 1/ ΔΡ − 1 Ι1,+ ≅− 罗Χ , Π ; 1Χ Δ/= 1 > < =Δ− Χ< + Α /+ /1Χ 0 56 + Α ΑΔ Ρ − Ε − /3 + < − Ξ /,1 − /− < Θ − ,− − + Ε Μ1, − < : 0 − ≅; Χ/
≅3 + Θ − < /31/ 0 56 − Ξ /,1 − /Δ+ > ; ≅Δ> Ι Ε + < ΔΑΔ − < 89 8 Ε − /3+ < ,− ≅; Χ/− < Δ> 0 5 6 + Α 3ΔΙ 3 Π ; 1Χ Δ/= Α,+ Ε ΑΔ Ρ − Ε − /3+ < ≅ Δ> Ρ − ≅/ΔΙ1/ − < , ,1 Ψ
/Δ+ +Α 6 Ο , Ω 6珊 Θ 1 ≅ + Ρ − , ! : ( , 1 > < ,1/ Δ+ + Α 6 ΟΖ Ω 6 .。 Θ 1 ≅ + Ρ − , ! :  , /3Δ≅ Ε − /3 + < Μ ,+ <; − − < 0 56 1 / ∃  卜Ι · Ι 一 ’#∗[ % Θ Δ/3
> + < − Ι,1 < 1 /Δ#%> : ? + < ΔΑΔ − < 89 8 Ε − /3 + < ! 1 > − ΑΔ − Δ− > / 1 > < −Α− − /ΔΡ − Μ ,+ − − < ; ,− Α+ , /3 − − Ξ /,1 − /Δ+ > + Α 3ΔΙ 3 Π ; 1Χ Δ/= 1 > < =Δ− Χ<
0 56 Α, + Ε Γ 1 ΧΧ<〕  :
∴盯 Θ + ,< ≅ & Φ 1 Ε Γ+ 1 Ε ;Χ/Δ]Χ−Ξ 7 0 5 6 & − Ξ /,1 − / 7 Ε + < ΔΑΔ − < 89 8 Ε − /3+ <
提取纯度高 、完整性好 、不含 9 56 或其它杂质
的总 0 56 是进行 5 + ,/ 3 −,> 杂交 、 Ν 9 56 合成 、 2 9 56
文库构建 、 0 Τ 一]Ν0 及 Ε 0 5 6 差异显示等分子生物
学研究的基础 。 目前提取植物 0 5 6 方法有多种 , 这
些方法设计旨在 0 56 提取过程中清除多糖 、多酚等
杂质污染 。 在提取高质量 0 5 6 的过程中 ,植物尤其
木本植物通常含有大量的酚类 、多糖和其他一些水
溶性化合物与 0 56 共沉淀 , 影响了 0 5 6 功能〔’〕。
目前应用较多和较广的有 种方法 , 商业试剂盒
Τ 0Β Υ+ Χ, 以异硫氰酸肌为代表异硫氰酸酸肌法「’, ’豆、
以阳离子去污剂 2Τ6 Φ 代表 2 Τ 6 Φ 法 ⊥’, 4 , ’〕、热硼酸
盐法仁∃ , ’〕 , 和阴离子去污剂 ≅9 ≅ 为代表 ≅9 ≅ 法 ⊥ ∀ 一 川
等。 结合蛋白质 、多糖和多酚去除 , 以及 0 5 6 沉淀
形成的这些方法 , 往往要依据不同植物进行适当改
进 。 竹子是常绿木本植物 ,一般是通过无性繁殖 ,生
长在外界环境中 , 由于生长环境胁迫有着复杂的次
生代谢 , 积累了大量的次生代谢物质 , 如多糖和多酚
等物质〔”一 ‘, _ , 这些物质干扰 0 56 提取和纯化 , 如果
不清除 , 会影响后续实验 。 在 0 5 6 提取过程中 , 不
溶性多聚聚乙烯咯烷酮 #]ς ]]% 可有效防治多酚氧
化 , 增加研磨效率等作用〔’‘〕。 本文以竹类植物为试
材 , 对 种常规提取 0 5 6 方法进行适 当改进 , 目的
是筛选和建立提取竹类植物 0 5 6 有效方法 。
! 材料与方法
! : ! 试验材料和试剂
室外栽培孝顺竹 #Φ 1 Ε Γ+ 1 Ε ; Δ,Δ]Χ−Ξ #肠; , : %
0 1 − ; ≅ − 3−Χ − Ξ 8−3;Χ/ : Α: %叶作为材料 , 于  #% 4 年 ∋ 月
收稿 日期 & #Λ% 一Χ 一!∀
基金项目 & 浙江省自然科学基金资助项目#?. . . ∋4%
作者简介 & 杨卫东#!( ∋∃ 一 % , 男 , 山东菏泽人 , 硕士 , 自  年以来 , 主要从事竹子生理生化研究 :
Τ −Χ & # ∋ ! %∃ . . !  ∋ 4 ⎯ 一 Ε 1Δ Χ &卿 <3 − Υ − α 3+ /Ε 1 ΔΧ: − + Ε
林 业 科 学 研 究 第 !∀ 卷
采集幼梢嫩叶 , 采集的鲜叶速冻于液氮中 , 用前述
种常规方法提取总 0 56 , 每种提取方法重复 . 次 。
在含有液氮的研钵中研磨时 , 均加人样叶 #鲜 %质量
!Ω ! 的 ]ς ]] ,研磨成细粉末状 , 约  :  ( 于  Ε β 离
心管中进行 0 5 6 提取 。 ]Ρ ]] 为 ≅Δ Ι Ε 1 产品 , 其他
试剂均购 自上海生工生物工程技术 服务有限公司 。
提取过程中所需器具均 用 ! ( · β 一 ’焦碳酸二乙醇
#9 ⎯ ]Ν% 浸泡处理 , 再灭菌 , 所用试剂用 9 ⎯ ]Ν 水配
制 。 提取 0 56 浓度计算 & 0 5 6 浓度 χ 4 林Ι · Ε β 一 ’
Ξ 稀释倍数 Ξ 6 ∃ 。
! : ! : ! Τ 0Β Υ+ Χ 法 Τ 0 ΒΥ+ Χ试剂盒购于上海生工生
物工程技术服务有限公 司 ,  :  ( 竹叶粉末加人 Χ
Ε β Τ 0 ΒΥ +Χ 试剂 , 按说明书进行提取 , 再以体积分数
为 ∋  δ 的乙醇洗涤沉淀  次 , 溶解于 9 ⎯ ]Ν 水 。
! : ! :  改 良异硫氰酸孤法 所用方法参考 ΤΔ > −=
等川 , 略作改动 。  :  ( 孝顺竹叶粉末移人  Ε β 离
心管中 , 加人 ! Ε β 提取液 #4 Ε +Χ · β 一 ‘异硫氰酸肌 、
 :  Ε +Χ · β 一 ’醋酸钠 、 ! ( · β 一 ’十二烷基肌氨酸
钠 ,用前加人 Μ 一琉基乙醇使最终质量浓度为  ( ·
β 一 ’% , 混匀 , 加人 . . . 卜β # ΧΩ . 体积 %. Ε + Υ · β 一 ’醋
酸钠 #Με 值 :  %和等体积异丙醇 , 一  ℃沉淀 Χ 37
4 ℃ , ! : ∋ Ξ  , & · Ε Δ> 一 ’离心  Ε Δ> , 沉淀干燥
Ε Δ> ,用 ∃ 协β 8Τ⎯ 5 缓冲液 #  Ε Ε + Χ · β 一’ Τ , Δ≅ Ψ
ε − Υ #Μ ε 值 ∀ :  % ,  :  Ε + Χ · β 一 ’ 5 1 − Υ , Ε Ε + Χ · β 一 ’
⎯ 9 Τ 6 #Με 值 ∀ :  % , ! ( · β 一 ‘ ≅9 8 %重新溶解沉淀 7
加人等体积 #Υ & ! %饱和酚氯仿 , 4 ℃ , Υ Υ : 4 Ξ Χ+ , , ·Ε Δ> 一 ’离心 巧 Ε Δ> , 收集上清液 , 重复此步 7再用等体
积氯仿抽取一次 , 4 ℃ , 离心 巧 Ε Δ> 7收集上清液 , 加
人上清液 !Ω ,+ 体积 的 . Ε < · β 一 ’醋酸钠 #Μ ε 值
:  %和等体积 异丙醇沉淀过夜 7 4 ℃ , ! : ∋ Ξ Χ+ ,
, · Ε Δ> 一 ’离心  Ε Δ> , ∋  δ 乙醇洗涤沉淀  次 , 干燥
沉淀 ! Ε Δ> , 溶解于  林β 9 ⎯ ΜΝ 水中。
! : ! : . 改 良 2Τ6 Φ 法 依据 6≅ ΔΑ 等人团 方法 , 做适
当修改 。 提取缓冲液为 & ! Ε Ε +Χ · β 一 ’#Με 值 ∀ %
Τ,Δ ≅ 一ε −Χ、  ( · β 一 ! −Τ 6 Φ 、 ! : 4 Ε + Χ · β 一 ! 5 1 − Χ、  
Ε Ε + Χ · β 一 ’#Μ ε 值 :  % ⎯ 9,6 , 使用前加人  ( ·
β 一 ‘Μ 一琉基乙醇 7 :  ( 孝顺竹叶粉末移人含 ! Ε β 预
热提取缓冲液的  Ε β 离心管中 , ∃ ℃温育 Χ 3 , 每隔
巧 Ε Δ> 摇动几下 7冷却到室温 , 加人等体积氯仿 , 4 ℃ ,
!! : 4 Ξ Χ+ , , · Ε Δ> 一 ’离心 ! Ε Δ> &收集水相 , 加人 !
Ε +Χ · β 一 ’βΔ 2Χ 使最终浓度为 . Ε +Χ · β 一 ’, 一  ℃沉
淀过夜 , 4 ℃ , !. : ! Ξ ,+ , , · Ε Δ> 一 ’离心  Ε Δ> 7 收集水
相 ,加人 !Ω . 体积浓度为 . Ε +Χ · β 一 ’醋酸钠#Με 值
: % 和  : ! 体积无水 乙醇 , 冰上沉淀 . Ε Δ> , 4 ℃ ,
! ! : 4 Ξ Χ+ , & · Ε Δ> 一 ’离心  Ε Δ> 7收集上清液 , 加 . Ε + Χ
· β 一 ’醋酸钠 #Μ ε 值 : % 使最终浓度为  : . Ε +Χ ·
β 一 ’ ,加入等体积异丙醇 , 一  ℃ 沉淀 . 3 74 ℃ , !. : !
Ξ ! , & · Ε Δ> 一 ‘离心  Ε Δ> , 收集沉淀 , 用 ∋  δ 乙醇洗
涤沉淀  次 , 干燥沉淀并溶解于  林β 9 ⎯]Ν水中。
! : ! : 4 改 良热硼酸盐法 据 ≅Ε 1,/ 等 7 ∃ Κ和 Θ ; 匡 等
报道 0 5 6 提取方法修改而成 。  :  ( 孝顺竹叶粉末
移人含 ! Ε β 预热到 ∀ ℃提取缓冲液的离心管中 ,
提取缓冲液组成 &  :  Ε < · β 一 ’脱水四硼酸钠#≅+< ΔΨ
; Ε Γ + ,1 /− < − − 13=< ,1 /− % , .  Ε Ε + Χ · β 一 ’ ⎯ ϑ Τ6 , ! ( ·
β 一 ‘89 8 , ! ( · β 一 ’脱氧胆酸钠 , 另有 ! ( · β 一 ‘5 ]Ψ
4  、   ( · β 一 ’]Ρ ] 和 ! Ε Ε + Χ · β 一 ’ >竹 用前加人 ,
加人 ∃  林β 蛋白酶 ∴ # Ε Ι · β 一 ’% , 4  ℃ 提取 ! :
3 7向离心管中加人 .  林β ∴ ΝΒ # Ε + Χ · β 一 ’% ,混匀 ,
4 ℃温育 Χ ) Χ : ≅ 3 , 4 ℃ , ! ! : 4 Ξ Χ+ , , · Ε Δ> 一 ’离心
! Ε Δ> 7收集上清液 , 加人 ΧΩ . 体积的 ∀ Ε + Χ · β 一 ’
βΔ−一# 一   ℃ % , 4 ℃ 放置过夜 7 4 ℃ , ! : ∋ Ξ ! , & ·
Ε Δ> 一 ’离心  Ε Δ> , 弃上清液 7加入  林β 预冷的 
Ε + Χ · β 一’ ; − Χ洗涤沉淀 , 4 ℃ , ! ! : 4 Ξ ! , & · Ε Δ> 一’
离心 ! Ε Δ> 去除上清液 , 重复洗涤  ) . 次 7用 
林β Β+ Ε Ε + Χ · β 一 ’ Τ,Δ ≅ 一ε ΝΒ #Μ ε 值 ∋ : %溶解沉淀 ,
加人 ΧΩ ! 体积  Ε + Χ · β 一 ’醋酸钾 #Με 值 : % , 冰
上沉淀 .  Ε Δ> , 4 ℃ ,  ! : 4 Ξ ! , & · Ε Δ> 一 ’离心 
Ε Δ> 7将上清液转移至新离心管中 , 加入 !Ω!  体积 .
Ε +Χ · β 一 ‘醋酸钠#Με 值 : % 和  : 倍无水乙醇 , 于
一   ℃沉淀 Ο 3 7 4 ℃ , ! : ∋ Ξ ! , & · Ε Δ> 一 ’离心 
Ε Δ> , ∋ δ 乙醇洗涤沉淀  次 , 室温 干燥   ) .
Ε Δ> ,用  协β 9 ⎯ ΜΝ 水溶解 > 56 。
! , ! : 改良 89 ≅ 法 根据 βΔ ; 等 ⊥ ∀ 〕报道的方法适
当修改而成 ,  :  ( 孝顺竹叶粉末移人  Ε β 离心管
中 , 加人 ! Ε β 提取缓冲液 # : !  ! · β 一 ’ Τ,Δ ≅ 一ε 2Χ
#Με 值 ∋ : 4 % ,  : Ε + Χ · β 一 ’ 51 ΝΒ ,  Ε Ε + Χ · β 一 ’ ⎯ 9 Ψ
Τ6 #Με 值 ∀ :  % ,   ( · β 一 ‘ ≅9 ≅ &   ( · β 一 ‘ ]Ρ ] 和
 ( · β 一 ’Μ 一琉基乙醇使用前加人 % , 室温下摇动 !
Ε Δ> 7加人 ΧΩ . 体积 Ε + Χ · β 一’醋酸钾#Μ ε 值 ∃ :  % ,
冰上沉淀 .  Ε Δ> , 4 ℃ , ! ! : 4 Ξ !  , & · Ε Δ> 一 ‘离心 !
Ε Δ> 7上清液移到新离心管中 , 等体积酚Ω 氯仿抽取 , 4
℃ , ! ! : 4 Ξ Χ+ , & · Ε Δ> 一 ’离心 ! Ε Δ> , 重复此步 7再用
等体积氯仿抽取水相 , 4 ℃ , > : 4 Ξ ,+ , , · 而 > 一 ’离心
巧 Ε Δ> 7水相转移到新离心管中 , 加人等体积异丙
醇 , 一   ℃沉淀 Ο 3 7 4 ℃ , !  : ∋ Ξ ! , & · Ε Δ> 一 ‘离心
 Ε Δ> , 9 ⎯ ]Ν 水溶解沉淀 7 等体积的酚Ω 氯仿 、氯仿
第 ∃ 期 杨卫东等 &孝顺竹 0 56 提取方法研究
抽取 , 用等体积异丙醇和 !Ω . 体积 . Ε +Α · β 一‘醋酸
钠#Με 值 :  %于 一   ℃沉淀 Ο 3 7 4 ℃ , !  : ∋ Ξ ! , ,
· Ε Δ> 一 ‘离心  Ε Δ> 7收集沉淀 , 用 ∋ δ 乙醇洗涤沉
淀  次 , 沉淀溶解于  林β 9 ⎯ Μ Ν 水 。
! :  0 56 纯度分析
对用不同方法提取的 0 5 6 ,用紫外分光光度计扫
描姗 ) 〕Κ% >Ε 波长 , 并测定 6溯Ω 6, , 6幼 Ω 6翔 。
! : . 0 56 完整性分析
对用不同方法提取的 05 6 , 进行 ,+ Ι · β 一’非变
性琼脂糖凝胶电泳 , 分析其完整性 。
 结果与讨论
 : ! 不同方法提取总 0 5 6 的纯度比较
紫外吸光度比值结果 #表 Χ% 表明 , Τ 0 ΒΟ +Χ 法的
6 Ο。 Ω 6 ∀ 比值极低 , 表明用此方法提取的 0 5 6 有大
量蛋白质污染 , 改良异硫氰酸肌法 、改 良 ΝΤ 6 Φ 法 、
改良 89 8 法的 6 , Ω 6 ∀ 值较高 , 其中改良 ΝΤ6 Φ 法
和改良 89 8 法的 6 , Ω 6 ∀+ 值大于 ! : ∀ , 表明改 良
ΝΤ6 Φ 法和改良 89 8 法使蛋白质污染得到有效控
制 。 Τ 0 ΧΥ+ Χ、改良异硫氰酸肌法 、改良 ΝΤ6 Φ 法 、改良
热硼酸盐法 6珊Ω 6 . 比值低于 ! , 改 良 89 8 法 的
6 , Ω 6 . 比值大于 ! :  , 表明改良 89 8 法在除去多糖
和多酚等污染方面优于其他方法 。 另外 ,改良 2Τ6 Φ
法和改 良 89 8 法所提取 0 56 产量较高 , 其中改良
8 9 8 法获得 0 56 产量最高。 商业试剂盒 Τ0 ΒΥ +Χ 法
提取的 6 , Ω 6珊和 6 Ζ Ω 6 . 。比值偏低 , 说明不适宜
竹类植物 0 5 6 提取 。
表 ! 不同方法提取孝顺竹叶总 0 5 6 结果比较
提取方法
Τ0 ΧΥ+ Χ法
改良异硫佩酸皿法
改良 ΝΤ6 Φ 法改良热硼酸盐法
改良 898 法
! : . ∃. 士  :  !.
! : ∃ ∋∃ 士  :   (
! : ∀4 . 士 :   ∋
! : ! 士 :  ∃ 
! : ( #城% 士  : 《洲%!
 :  土  :  .
 : ∀∋ . 士  :  
 : ∀ ! 士  :  4
 : .∋ ∋ 士  :  !
! :  ( 士  :  ∃#%
! !. :  士  : 4
. ! ∋ :  士 ! : ∋
4 ∃4 :  土 : 
!(4 :  士 . :
印 :  土 ! : 4
 :  不同方法提取总 0 5 6 完整性分析
用 ,+ Ι · β 一 ‘琼脂糖非变性凝胶电泳分析 , 结果
显示 , ,0 56 两条带 ∀ 和 !∀ 条带都清晰#图 ! % ,
说明在提取过程中 ,没有发生 0 5 6 降解 。 其中尤以
改良 8 9 8 法的条带更为清晰 ,不但 ∀ 和 ! ∀ 明显 ,
而且还有 , 0 56 的其他条带也很清晰。
图 Χ 不同方法提取竹叶总 0 56 非变性琼脂糖凝胶电泳
林 业 科 学 研 究 第 !∀ 卷
. 小 结
有关植物 0 56 提取结合多糖和多酚等次生代
谢去除以及 0 56 沉淀形成有许多种方法 。 许多公
司开发的试剂盒 Τ 0 ΒΥ+Χ 源于一步法〔‘ 〕 , 该试剂由异
硫氰酸肌和酚等组成的单相溶液 , 已成功提取许多
生物 0 56 , 操作简单 , 耗时少 , 但价格贵 , 现在发现
更适于动物 , 不适宜富含多酚和多糖植物的 0 5 6 提
取 , 尤其是木本植物 。 异硫氰酸肌法也是源 自一步
法 ,  , 目前 应 用 较 多 , 在 酸 模 #0 ;) 12− /+≅ 1; > > : % ⊥‘. 、葡萄 #份站 Χ1 Γ+ − 1 β : 。Ρ : Ν + > − + ,< %和黄
豆树 #6ΧΓ碗 夕功印Ε Φ− > /3 %⊥ ’φ等植物中获得高质量
0 56 。 2Τ6 Φ 法也已经成功从木本植物香蕉果 #?; Ψ
≅1 1 − ; ΕΔ > 以1 − + ; 1 % ⊥’口、细毛樟#2Δ > > 1 >Υ+ Ε ; Ε ,− > ; Δ]ΔΨ
Χ; Ε ∴+ ≅/ − ,Ε %⊥ 4 〕和一些果树〔’〕中分离出高质量的
0 56 。 热硼酸盐法被认为是提取难分离组织的有效
方法〔‘, ’Κ , 在棉 花 #肠 ”Δ; Ε 3 Δ,≅ ;/;Ε β : % 、 烟草
#5纪诫1 >1 脚;21 ϑ , 1 > 1 Ε %总 0 5 6 提取中已成功应
用 , 但是所用试剂昂贵 , 提取步骤多 , 所用成本较高。
以上 4 种方法在提取竹类植物叶总 0 56 效果不佳 。
≅> ≅法已从香蕉果 ! 〕、仙人掌 #你; > ‘Δ1 , Μ : % ⊥ ( φ 、欧洲
赤松#]Δ > ;≅ .少Χ, −≅ /,Δ≅ ΧΔ > : %和海岸松 # ]Δ > ;≅ ]Δ刚−,6Δ/ : % ⊥‘。Κ 、梨 #乃: ‘ 2+ Ε ; > Δ≅ β : % 〔川等植物中提取高质量具有功能的 0 56 。
本实验用改 良 89 8 法获得高质量竹类植物总
0 5 6 , 并成功进行 9 9 0不]Ν 0 , 改良 89 8 法无论从纯
度 、完整性还是产量 , 都是较好的 , 所用试剂都是常
用试剂 , 方法简单 , 便于操作 。 在研磨过程 中加人
]Ρ即 , 增加了研磨效率 , 在去除多酚和多糖等次生
代谢物质时 , 采用高浓度的醋酸钾溶液 , 并且适当延
长在冰上的沉淀时间 , 在提取过程反复用几次高浓
度醋酸钾沉淀多糖和多酚 , 明显提高 6姗Ω 6 .+ 比值 7
ε ; 等人 Β’〕报道的 ! ( · β 一 ‘ −以Φ Ω  : 4 Ε + Χ · β 一’
51 ΝΒ , 可 以除去部分多糖 , 作者在第二次 0 56 沉淀
重新溶解时 , 加人等体积 ΝΤ6 ΦΩ 51 ΝΒ , 再结合饱和
酚Ω 氯仿抽取 , 也能明显提高 6‘ Ω 6 . 比值 。 81ΧΟ Ψ
Ε 1Χ 〔’〕认为 ; 2Χ 多级沉淀可 以有效除去吸收峰在
 .  > Ε 污染的物质 , 作者试图用高浓度 Σ ΝΒ 来改善
0 5 6 质量 , 但是没有得到改进 , 反而降低了 05 6 产
量 。 综上所述 ,改良 89 8 法是适宜竹类植物 0 5 6 提
取 ,并获得高质量和高产量快速简单和高效的方法 。
参考文献 &
川 ΤΔ> > −= ϑ Θ , 而Β2 31Υ< 8 Ν , 仪洲园韶 0 , −/ 1Χ : ⎯ΣΕ 加1 /Δ +> +Α +Ξ Ψ
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