全 文 ：林业科学研究摇 圆园员员袁圆源渊圆冤院员苑员 员苑缘云燥则藻泽贼 砸藻泽藻葬则糟澡
摇 摇 文章编号院员园园员鄄员源怨愿渊圆园员员冤园圆鄄园员苑员鄄园缘
基于牡丹 耘杂栽信息的滇牡丹 杂杂砸标记开发
张艳丽员袁 王摇 雁圆袁 李正红员鄢袁 马摇 宏员
渊员援中国林业科学研究院资源昆虫研究所袁国家林业局资源昆虫培育与利用重点实验室袁云南 昆明摇 远缘园圆圆源曰
圆援中国林业科学研究院林业研究所袁北京摇 员园园园怨员冤
摘要院对 晕悦月陨渊美国国立生物技术信息中心冤中牡丹的 耘杂栽泽渊藻曾责则藻泽泽藻凿 泽藻择怎藻灶糟藻 贼葬早泽冤的序列进行分析袁结果表明院在
所分析的 圆 圆园源 条序列中袁仅 猿圆源 条分布有 杂杂砸泽渊泽蚤皂责造藻 泽藻择怎藻灶糟藻 则藻责藻葬贼泽冤袁占全部 耘杂栽泽序列的 员源郾 苑园豫 曰杂杂砸的出现
频率为 员缘郾 圆园豫 袁共计 猿猿缘 个袁其中袁二核苷酸重复比例 愿源郾 员愿豫 袁三核苷酸重复比例为 员缘郾 圆圆豫 袁四和六核苷酸重复
比例为 园郾 猿园豫 遥 在此基础上袁利用软件渊泽藻则葬枣藻则 员郾 猿冤设计了 缘员 对备选 杂杂砸引物袁以 远 个滇牡丹不同花色类群 阅晕粤
为模板对引物进行筛选袁其中袁员园 对引物有扩增产物曰用这些引物进一步在 员园 个类群 缘园 个 阅晕粤模板进行多态性测
试袁结果显示院上述 员园 对 杂杂砸引物均有多态性袁且同一类群内不同模板 阅晕粤间也存在多态性遥 本研究结果证明院基
于牡丹 耘杂栽信息建立 杂杂砸标记是一种有效而可行的方法袁有助于滇牡丹遗传多样性分析及基因组学方面的研究遥
关键词院牡丹曰滇牡丹曰耘杂栽曰杂杂砸曰标记
中图分类号院杂远愿缘郾 员员 文献标识码院粤
收稿日期院 圆园员园鄄员园鄄园怨
基金项目院 国家林业局 怨源愿 项目渊圆园园远鄄源鄄悦园苑冤曰国家 愿远猿 计划渊圆园园远粤粤员园园员园怨冤
作者简介院 张艳丽渊员怨愿源要冤袁女袁在读硕士研究生袁主要从事花卉种质改良方面研究工作援
鄢通讯作者院研究员袁主要从事资源植物的引种驯化研究援
杂杂砸泽 酝葬则噪蚤灶早 燥枣 孕葬藻燥灶蚤葬 凿藻造葬增葬赠蚤 月葬泽藻凿 燥灶 孕藻燥灶赠 耘杂栽 阅葬贼葬
在匀粤晕郧 再葬灶鄄造蚤员袁宰粤晕郧 再葬灶圆袁蕴陨 在澡藻灶早鄄澡燥灶早员袁酝粤 匀燥灶早员
渊员援 砸藻泽藻葬则糟澡 陨灶泽贼蚤贼怎贼藻 燥枣 砸藻泽燥怎则糟藻 陨灶泽藻糟贼泽袁 悦澡蚤灶藻泽藻 粤糟葬凿藻皂赠 燥枣 云燥则藻泽贼则赠袁 运藻赠 蕴葬遭燥则葬贼燥则赠 燥枣 月则藻藻凿蚤灶早 葬灶凿
哉贼蚤造蚤扎葬贼蚤燥灶 燥枣 砸藻泽燥怎则糟藻 陨灶泽藻糟贼泽 燥枣 杂贼葬贼藻 云燥则藻泽贼则赠 粤凿皂蚤灶蚤泽贼则葬贼蚤燥灶袁 运怎灶皂蚤灶早摇 远缘园圆圆源袁 再怎灶灶葬灶袁 悦澡蚤灶葬曰
圆援 砸藻泽藻葬则糟澡 陨灶泽贼蚤贼怎贼藻 燥枣 云燥则藻泽贼则赠袁 悦澡蚤灶藻泽藻 粤糟葬凿藻皂赠 燥枣 云燥则藻泽贼则赠 袁 月藻蚤躁蚤灶早摇 员园园园怨员袁 悦澡蚤灶葬冤
粤遭泽贼则葬糟贼院 栽澡则燥怎早澡 泽藻择怎藻灶糟藻泽 葬灶葬造赠泽蚤泽 燥枣 孕葬藻燥灶蚤葬 泽怎枣枣则怎贼蚤糟燥泽葬 耘杂栽泽 渊藻曾责则藻泽泽藻凿 泽藻择怎藻灶糟藻 贼葬早泽冤 凿藻责燥泽蚤贼藻凿 蚤灶 晕悦月陨袁
燥灶造赠 猿猿缘 杂杂砸泽 渊泽蚤皂责造藻 泽藻择怎藻灶糟藻 则藻责藻葬贼泽冤 憎藻则藻 枣燥怎灶凿援 栽澡藻泽藻 杂杂砸泽 葬则藻 凿蚤泽贼则蚤遭怎贼藻凿 蚤灶 猿圆源 耘杂栽泽 燥怎贼 燥枣 贼澡藻 圆 圆园源 耘杂鄄
栽泽 藻曾葬皂蚤灶藻凿袁 葬糟糟燥怎灶贼蚤灶早 枣燥则 员源郾 苑园豫 燥枣 贼澡藻 贼燥贼葬造援 栽澡藻 枣则藻择怎藻灶糟赠 燥枣 杂杂砸 憎葬泽 员缘郾 圆园豫 袁 蚤灶 憎澡蚤糟澡袁 贼澡藻 则藻责藻贼蚤贼蚤增藻 责则燥鄄
责燥则贼蚤燥灶泽 燥枣 凿蚤灶怎糟造藻燥贼蚤凿藻袁 贼则蚤灶怎糟造藻燥贼蚤凿藻袁 贼藻贼则葬灶怎糟造藻燥贼蚤凿藻 葬灶凿 澡藻曾葬灶怎糟造藻燥贼蚤凿藻 憎藻则藻 愿源郾 员源豫 袁 员缘郾 圆圆豫 袁 园郾 猿园豫 葬灶凿
园郾 猿园豫 袁 则藻泽责藻糟贼蚤增藻造赠援 缘员 糟葬灶凿蚤凿葬贼藻 杂杂砸 责则蚤皂藻则泽 憎藻则藻 凿藻泽蚤早灶藻凿 葬糟糟燥则凿蚤灶早 贼燥 贼澡藻 耘杂栽泽 泽藻择怎藻灶糟藻泽 贼澡葬贼 糟燥灶贼葬蚤灶蚤灶早
杂杂砸泽袁 遭赠 怎泽蚤灶早 泽藻则葬枣藻则 员援 猿 泽燥枣贼憎葬则藻援 栽澡藻 缘员 糟葬灶凿蚤凿葬贼藻 杂杂砸 责则蚤皂藻则泽 憎藻则藻 泽糟则藻藻灶藻凿 葬早葬蚤灶泽贼 早藻灶燥皂蚤糟 阅晕粤 燥枣 远 凿蚤枣枣藻则鄄
藻灶贼 枣造燥憎藻则 糟燥造燥则 早则燥怎责泽 蚤灶 孕援 凿藻造葬增葬赠蚤袁 燥枣 憎澡蚤糟澡袁 员园 责则蚤皂藻则 责葬蚤则泽 葬皂责造蚤枣蚤藻凿 增蚤泽蚤遭造藻 遭葬灶凿泽 憎蚤贼澡 责燥造赠皂燥则责澡蚤泽皂 葬皂燥灶早
缘园 早藻灶燥皂蚤糟 阅晕粤泽 枣则燥皂 员园 糟燥造燥则 早则燥怎责泽 蚤灶 孕援 凿藻造葬增葬赠蚤援 栽澡藻 则藻泽怎造贼泽 责则燥增藻凿 贼澡葬贼 贼澡藻 凿藻增藻造燥责皂藻灶贼 燥枣 耘杂栽鄄杂杂砸 皂葬则噪藻则泽
遭葬泽藻凿 燥灶 耘杂栽泽 蚤灶 孕援 泽怎枣枣则怎贼蚤糟燥泽葬 蚤泽 葬灶 藻枣枣藻糟贼蚤增藻 葬灶凿 枣藻葬泽蚤遭造藻 葬责责则燥葬糟澡袁 憎澡蚤糟澡 憎蚤造造 糟燥灶凿怎糟藻 贼燥 泽贼怎凿赠 燥灶 早藻灶藻贼蚤糟 凿蚤增藻则鄄
泽蚤贼赠 葬灶凿 早藻灶燥皂蚤糟泽 蚤灶 孕援 凿藻造葬增葬赠蚤援
运藻赠 憎燥则凿泽院 孕葬藻燥灶蚤葬 泽怎枣枣则怎贼蚤糟燥泽葬曰 孕葬藻燥灶蚤葬 凿藻造葬增葬赠蚤曰 耘杂栽曰 杂杂砸曰 皂葬则噪藻则
随着分子生物学技术的发展袁出现了许多基于
孕悦砸方法的 阅晕粤 标记技术袁大大提高了科研人员
对植物进行遗传分析研究的能力袁其中的 杂杂砸
渊泽蚤皂责造藻 泽藻择怎藻灶糟藻 则藻责藻葬贼泽冤标记袁因其广泛存在于真
林摇 业摇 科摇 学摇 研摇 究 第 圆源 卷
核生物基因组中袁并具有数量丰富袁多态性高尧多
等位性尧共显性等特点咱员 原 圆暂 袁是目前遗传学研究中
最令人信赖的分子标记之一曰但 杂杂砸 引物的开发
需要的周期较长袁且费用高袁效率较低咱猿暂 遥 近年来
耘杂栽 渊藻曾责则藻泽泽藻凿 泽藻择怎藻灶糟藻 贼葬早泽冤 发展十分迅速袁以每
周 员园 园园园 个的速度从大量 糟阅晕粤 文库中被开发出
来咱源暂 袁因而 耘杂栽鄄杂杂砸 标记的开发相对快速尧简便遥
耘杂栽鄄杂杂砸不仅具有 杂杂砸 标记的多态性高尧共显性尧
重复性好等特点袁而且在种属间具良好的通用
性咱缘 原 远暂 袁目前已被广泛应用于遗传连锁图谱的构
建尧遗 传 多 样 性 分 析 以 及 比 较 基 因 组 学 等
研究咱苑 原 怨暂 遥
滇牡丹渊孕葬藻燥灶蚤葬 凿藻造葬增葬赠蚤 云则葬灶糟澡援 冤 咱员园暂是芍药属
分布最南的一个牡丹类群袁是中国西南地区特有种袁
在芍药属植物的起源尧演化和地理分布研究上有着
重要的学术价值咱员员暂 遥 出于其地理分布区狭小及其
研究和应用价值的考虑袁滇牡丹已被认为是渐危种
而列为国家三级保护植物咱员圆暂 遥 目前袁有关滇牡丹
耘杂栽鄄杂杂砸分子标记研究尚未见报道遥 本文从 晕悦月陨
渊美国国立生物技术信息中心冤数据库中搜索到牡
丹渊 孕葬藻燥灶蚤葬 泽怎枣枣则怎贼蚤糟燥泽葬 粤灶凿则藻憎援 冤 耘杂栽泽 序列 圆 圆园源
条袁并进行了 杂杂砸泽 的查找和分析遥 在此基础上袁设
计扩增 杂杂砸位点的特异引物袁通过对合成引物的多
态性检测袁开发滇牡丹 耘杂栽鄄杂杂砸 分子标记遥 本研究
旨在为滇牡丹 耘杂栽资源的进一步开发利用尧遗传图
谱绘制以及目标性状标记的辅助选择提供一种实
用尧高效的研究工具遥
员摇 材料和方法
员援 员摇 材料
本实验材料为采自云南的 员园 种具不同花色类
型的滇牡丹袁每类群 缘 株遥 具体材料信息见表 员遥
表 员摇 滇牡丹花色类群及来源
类群编号 花色类群 采集地名 海拔 辕 皂 经度渊耘冤 纬度渊晕冤
阅酝员 绿色变态 德钦明永冰川 圆 缘圆园 圆 远怨员 怨愿毅源远 怨愿毅源苑忆 圆愿毅圆苑忆 圆愿毅猿圆忆
阅酝圆 绿色 德钦明永冰川 圆 缘圆园 圆 远怨员 怨愿毅源远忆 怨愿毅源苑忆 圆愿毅圆苑忆 圆愿毅猿圆忆
阅杂员 纯黄色 德钦升平一中后山 猿 员苑缘 猿 员怨园 怨愿毅缘缘忆 怨愿毅源愿忆 圆愿毅圆愿忆 圆愿毅缘员忆
阅杂圆 黄色基部红斑 德钦升平一中后山 猿 员苑缘 猿 员怨园 怨愿毅缘缘忆 怨愿毅源愿忆 圆愿毅圆愿忆 圆愿毅缘员忆
阅再 淡黄色基部红斑 德钦云岭红坡 圆 远愿员 圆 远怨员 怨愿毅缘源忆 圆愿毅员怨忆
在匀员 紫红色中部黄斑 中甸滑雪场 猿 猿员愿 猿 猿猿猿 怨怨毅猿园忆 怨怨毅源缘忆 圆苑毅源圆忆 圆苑毅缘苑忆
在匀圆 橙黄色 中甸滑雪场 猿 猿员愿 猿 猿猿猿 怨怨毅猿园忆 怨怨毅源缘忆 圆苑毅源圆忆 圆苑毅缘苑忆
在匀猿 紫红色 中甸滑雪场 猿 猿员愿 猿 猿猿猿 怨怨毅猿园忆 怨怨毅源缘忆 圆苑毅源圆忆 圆苑毅缘苑忆
蕴栽 黄绿色基部紫红斑 丽江太安乡 猿 员猿愿 猿 员源源 员园园毅园圆忆 圆远毅源猿忆
蕴再 暗红色 丽江玉龙牦牛坪 猿 圆园圆 猿 缘圆猿 员园园毅员源忆 员园园毅员远忆 圆苑毅园源忆 圆苑毅员园忆
员援 圆摇 方法
员援 圆援 员摇 基因组 阅晕粤提取摇 采用 悦栽粤月咱员猿暂法提取供
试材料基因组 阅晕粤遥
员援 圆援 圆 摇 牡丹 耘杂栽鄄杂杂砸 序列查找 摇 从 郧藻灶月葬灶噪 辕
凿遭耘杂栽 渊澡贼贼责院 辕 辕 憎憎憎援 灶糟遭蚤援 灶造皂援 灶蚤澡援 郧燥增 辕 凿遭耘杂栽 辕
蚤灶凿藻曾援 匀贼皂造冤下载牡丹 耘杂栽序列袁共获得 圆 圆园源 条牡
丹 耘杂栽泽序列袁均为花芽 糟阅晕粤文库测序产物遥
应用 杂杂砸陨栽渊泽蚤皂责造藻 泽藻择怎藻灶糟藻 则藻责藻葬贼 蚤凿藻灶贼蚤枣蚤糟葬贼蚤燥灶
贼燥燥造冤 软件 渊 澡贼贼责院 辕 辕 憎憎憎援 早则葬皂藻灶藻援 韵则早 辕 凿遭 辕 泽藻葬则鄄
糟澡藻泽 辕 泽泽则贼燥燥造冤在线搜索 耘杂栽鄄杂杂砸遥 搜索标准为院二核
苷酸尧三核苷酸尧四核苷酸尧五核苷酸尧六核苷酸重复
序列次数大于或等于 缘遥
员援 圆援 猿 摇 耘杂栽鄄杂杂砸 引物设计开发 摇 应用 杂藻则葬枣藻则 员援 猿
软件设计 耘杂栽鄄杂杂砸 引物袁设计引物时设置的主要参
数为院郧悦 含量 圆园豫 愿园豫 袁退火温度渊 贼皂冤缘苑 远猿益袁上下游引物复性温度相差不大于 缘 益袁引物长约
圆园 遭责袁预期扩增产物长度 员圆园 缘园园 遭责遥 本实验从
中挑选 缘员 对引物由上海生工生物技术公司合成以
用于扩增遥
员援 圆援 源摇 孕悦砸 扩增和聚丙烯酰胺凝胶电泳摇 孕悦砸 反
应 圆园 滋蕴 体系中院员园 伊 遭怎枣枣藻则 圆郾 园 滋蕴曰员 哉窑滋蕴 原员的
栽葬择 阅晕粤聚合酶 圆 滋蕴曰圆缘 皂皂燥造窑蕴 原员的酝早悦造圆 圆 滋蕴曰
员园 滋皂燥造窑蕴 原员的引物各 员 滋蕴曰约 猿园 灶早窑滋蕴 原员的模板
阅晕粤 员郾 缘 滋蕴曰员园 皂皂燥造窑蕴 原员的 凿晕栽孕泽 园郾 缘 滋蕴曰凿凿匀圆韵员员 滋蕴遥 扩增程序如下院怨缘 益预变性 苑 皂蚤灶袁进入第
一阶段循环袁怨缘 益变性 员缘 泽袁远圆援 缘 远苑 益退火 猿园 泽袁
苑圆 益延伸 远园 泽袁共 员愿 个循环袁每循环退火温度下降
园郾 远 益曰第二阶段袁怨缘 益变性 员缘 泽袁缘员郾 缘 缘苑 益复性
猿园 泽袁苑圆 益延伸 远园 泽袁共 猿园 个循环袁最后 苑圆 益保持
延伸 苑 皂蚤灶遥 孕悦砸 产物在 愿豫非变性聚丙烯酰胺凝
胶中电泳袁银染后对多态性进行检测遥
圆苑员
第 圆 期 张艳丽等院基于牡丹 耘杂栽信息的滇牡丹 杂杂砸标记开发
圆摇 结果与分析
圆援 员摇 牡丹 耘杂栽鄄杂杂砸分布尧频率及特点
在搜索的 圆 圆园源 个 耘杂栽泽 中袁共发现了分布于
猿圆源 条 耘杂栽泽 中的 猿猿缘 个 杂杂砸泽袁其中袁含有 杂杂砸 的
耘杂栽 占全部 耘杂栽 的 员源郾 苑园豫 袁 杂杂砸 出现的频率是
员缘郾 圆园豫 袁这表明牡丹 耘杂栽 中的 杂杂砸 数量很丰富遥
在 猿圆源 条含有 杂杂砸 的 耘杂栽 中袁只有 员 个 杂杂砸 的 耘杂栽
有 猿员源 条袁含有 圆 个 杂杂砸的有 员员 条遥
分析结果渊表 圆冤表明院牡丹的 耘杂栽鄄杂杂砸主要有 源
种类型袁即二核苷酸重复尧三核苷酸重复尧四核苷酸重
复和六核苷酸重复袁但出现频率各不相同渊表 圆冤曰其
中袁二核苷酸重复最为常见袁共有 圆愿圆 个袁在全部 耘杂栽
中出现的频率为 员圆郾 苑怨豫袁占 杂杂砸比例达 愿源郾 员愿豫曰其
次为三核苷酸重复袁出现频率为 圆郾 猿员豫袁占 杂杂砸比例
为 员缘郾 圆圆豫曰四和六核苷酸重复出现频率均为 园郾 园缘豫袁
占 杂杂砸比例均为 园郾 猿园豫遥 由此可见袁在牡丹 耘杂栽鄄杂杂砸
中袁二核苷酸重复占主导地位遥
表 圆摇 牡丹 耘杂栽中 杂杂砸的出现频率
重复类型 重复基元种数 杂杂砸数量 占全部 杂杂砸比例 辕 豫 在 耘杂栽中出现频率 辕 豫
二核苷酸 员员 圆愿圆 愿源援 员愿 员圆援 苑怨
三核苷酸 圆圆 缘员 员缘援 圆圆 圆援 猿员
四核甘酸 员 员 园援 猿园 园援 园缘
六核苷酸 员 员 园援 猿园 园援 园缘
总计摇 摇 猿缘 猿猿缘 员园园 员缘援 圆园
在搜索出的牡丹 耘杂栽 原 杂杂砸 中袁共观察到 猿缘 种
核苷酸重复渊表 猿冤袁其中袁二核苷酸重复中袁葬早尧贼早尧
贼糟尧早葬 出现的次数较多袁分别占二核苷酸重复的
缘园郾 猿缘豫 尧员圆郾 园远豫 尧员园郾 圆愿豫 尧员园郾 圆愿豫 曰在三核苷酸基
元中袁葬早葬尧葬糟糟尧早葬贼出现的次数较多袁分别占三核苷酸
重复的 猿员郾 猿苑豫 尧苑郾 愿源豫 尧苑郾 愿源豫 曰四核苷酸重复为
葬贼早贼曰六核苷酸重复为 葬早葬早早早遥
表 猿摇 牡丹 耘杂栽鄄杂杂砸中不同重复基元
重复类型 重复基元 数量 所占比例 辕 豫 重复基元 数量 所占比例 辕 豫
二核苷酸 贼早 猿源 员圆援 园远 糟贼 圆圆 苑援 愿园
葬早 员源圆 缘园援 猿缘 葬贼 猿 员援 园远
贼糟 圆怨 员园援 圆愿 糟葬 圆 园援 苑员
贼葬 员圆 源援 圆远 葬糟 圆 园援 苑员
早葬 圆怨 员园援 圆愿 早糟 员 园援 猿缘
早贼 远 圆援 员猿
三核苷酸 早葬葬 圆 猿援 怨圆 贼贼早 员 员援 怨远
早糟葬 员 员援 怨远 葬早糟 员 员援 怨远
糟葬早 圆 猿援 怨圆 贼葬贼 员 员援 怨远
贼早贼 员 员援 怨远 早早贼 员 员援 怨远
贼贼葬 员 员援 怨远 糟葬葬 员 员援 怨远
贼早糟 圆 猿援 怨圆 早糟贼 员 员援 怨远
葬早早 员 员援 怨远 早早糟 圆 猿援 怨圆
葬糟早 猿 缘援 愿愿 糟糟葬 员 员援 怨远
葬贼早 猿 缘援 愿愿 葬糟糟 源 苑援 愿源
早葬糟 员 员援 怨远 葬早葬 员远 猿员援 猿苑
贼糟贼 员 员援 怨远 早葬贼 源 苑援 愿源
四核甘酸 葬贼早贼 员 员园园
六核苷酸 葬早葬早早早 员 员园园摇 摇
圆援 圆摇 耘杂栽鄄杂杂砸引物的筛选
用 阅酝圆尧阅杂员尧阅再尧在匀圆尧蕴栽尧蕴再类群共 远 个 阅晕粤
模板对 缘员 对 耘杂栽鄄杂杂砸引物进行筛选遥 有 员园 对引物
产生了扩增产物袁占合成引物的 员怨郾 远员豫 遥
圆援 猿摇 滇牡丹 耘杂栽鄄杂杂砸的多态性分析
利用筛选出的 员猿 对引物对 员园 个不同类群的滇
猿苑员
林摇 业摇 科摇 学摇 研摇 究 第 圆源 卷
牡丹进行多态性实验遥 结果有 员园 对引物稳定且具
多态性袁占可扩增出产物引物的 员园园豫 袁且在同一类
群不同 阅晕粤模板间存在多态性袁整体呈现出较高的
多态性遥
图 员 为引物 孕源尧孕怨 多态性扩增情况袁结果显示袁
利用 耘杂栽建立滇牡丹多态性 杂杂砸标记是可行的遥
表 源摇 员园 对 耘杂栽鄄杂杂砸引物信息
引物名称 重复基元 引物序列 退火温度 辕 益 预期产物片段大小 辕 遭责
孕员 渊悦栽悦冤源 云院 栽郧郧悦郧悦栽悦悦粤悦粤悦郧郧栽粤栽悦栽栽砸院 粤栽悦郧栽郧栽栽悦郧郧栽栽悦郧悦悦郧郧栽
缘愿援 圆源
缘怨援 园愿 圆圆愿
孕圆 渊郧悦粤冤源 云院 栽悦郧粤栽郧悦悦郧郧悦粤郧郧郧栽栽栽悦栽砸院 粤悦粤郧郧栽悦栽栽郧栽悦悦郧郧悦悦栽栽郧栽
缘愿援 源圆
缘愿援 园员 猿愿员
孕猿 渊粤粤郧冤源 云院 栽悦悦悦粤粤粤粤郧粤郧郧郧悦郧郧栽郧悦栽砸院 栽悦悦悦悦栽悦悦郧粤粤粤悦郧郧悦粤栽郧栽
缘愿援 圆缘
缘愿援 园缘 猿园远
孕源 渊栽栽粤粤冤猿 云院 粤栽郧郧悦郧粤郧粤栽栽郧悦悦悦悦郧栽悦栽砸院 栽郧悦粤郧栽悦粤悦悦粤悦悦粤栽悦悦郧栽悦粤
缘愿援 圆园
缘愿援 员园 圆圆愿
孕缘 渊栽悦栽悦郧悦冤猿 云院 悦郧栽悦粤栽悦栽郧粤粤悦郧悦悦郧悦悦郧粤砸院 栽悦粤悦郧栽栽郧郧粤栽郧栽栽悦粤悦栽郧悦悦悦粤
缘怨援 愿缘
缘愿援 苑远 圆园愿
孕远 渊粤郧粤冤缘 云院 悦郧郧悦郧栽郧悦悦栽栽栽郧粤郧粤悦郧栽郧砸院 栽郧悦悦栽悦郧粤粤粤粤粤悦栽悦郧悦悦栽栽悦栽悦悦
缘愿援 怨员
缘怨援 源愿 员缘苑
孕苑 渊悦粤栽栽栽冤猿 云院 粤郧悦郧栽郧粤粤郧悦粤粤悦粤粤郧悦悦郧栽郧砸院 粤悦栽郧悦郧栽栽栽悦粤悦郧郧悦郧粤郧郧粤
缘愿援 愿圆
缘怨援 园员 员远苑
孕愿 渊粤悦栽郧粤冤猿 云院 粤郧悦粤郧粤郧粤粤郧郧栽粤郧郧悦郧郧悦郧砸院 粤郧悦郧悦栽郧粤粤郧郧悦悦粤郧栽悦粤栽郧郧
缘愿援 缘怨
缘怨援 源缘 员苑员
孕怨 渊悦粤悦冤源 云院 郧郧郧郧粤悦栽悦粤粤粤栽悦悦栽栽郧悦郧粤粤粤粤悦悦粤砸院 粤郧郧悦悦栽粤郧栽栽栽栽郧郧栽悦栽郧郧郧悦郧
缘怨援 远愿
缘愿援 愿猿 员愿怨
孕员园 渊郧郧栽冤源 云院 悦粤郧悦栽郧郧悦栽栽悦悦悦粤悦郧悦粤郧栽砸院 栽粤郧悦悦粤栽郧悦悦郧悦悦栽悦悦粤悦悦栽
缘怨援 远猿
缘怨援 怨苑 员苑苑
图 员摇 引物 孕源渊粤冤尧孕怨渊月冤在不同滇牡丹花色类群间多态性
其它不同引物的扩增及其显示多态性情况见表 缘遥
表 缘摇 员园对引物在 员园个滇牡丹花色类群的扩增情况和多态性
引物编号 扩增产物 多态性 引物编号 扩增产物 多态性
孕员 粤月 孕 孕远 粤月 孕
孕圆 粤月 孕 孕苑 粤月 孕
孕猿 粤 孕 孕愿 月 孕
孕源 粤月 孕 孕怨 月 孕
孕缘 粤月 孕 孕员园 月 孕
摇 摇 注院粤院预期大小片段曰月院非预期大小片段曰粤月院同时出现预期大
小片段和非预期大小片段曰孕院有多态性遥
猿摇 讨论
本实验在 圆 圆园源 条 耘杂栽序列中搜索 杂杂砸出现的
频率为 员缘郾 圆园豫 曰而现有文献报道的 杂杂砸 出现频率
各不相同袁如甘蔗为 圆郾 怨豫 咱员源暂 尧水稻为 源郾 苑豫 咱员缘暂 袁油
菜为 员缘郾 缘愿豫 咱员远暂 袁 百合为 缘郾 怨愿豫 咱员苑暂 袁 橡胶树为
员员郾 源圆豫 咱员愿暂 遥 经前人研究表明袁若 耘杂栽 数足够大且
无偏倚性袁 即 源 种不同的碱基随机组合将产生单核
苷酸 圆 种尧二核苷酸 源 种尧三核苷酸 员园 种尧四核苷酸
猿猿 种尧五核苷酸 员园圆 种和六核苷酸 猿缘园 种基本重复
类型咱员怨暂 曰而从目前报道来看袁大多数植物的 耘杂栽鄄
源苑员
第 圆 期 张艳丽等院基于牡丹 耘杂栽信息的滇牡丹 杂杂砸标记开发
杂杂砸主要属于二尧三核苷酸重复类型袁不同物种间主
导重复基元的类型有所差异遥 牡丹 耘杂栽鄄杂杂砸分析结
果中二核苷酸重复为主导类型袁所占比例高达
愿源郾 员愿豫 袁大多数二核苷酸重复均有出现袁而其它核
苷酸重复多数未出现袁表现出明显的偏倚性遥 在二
核苷酸重复中袁 葬早 占主导地位袁 出现比例达
缘园郾 猿缘豫 袁这一现象与多数植物中报道的情况相
同咱圆园暂 曰三核苷酸重复则以 葬早葬 重复为主遥 牡丹 杂杂砸
分布及核苷酸出现频率表现出来的这些差异是其自
身特点的真实反应袁还是因 耘杂栽数量较少而造成袁还
有待进一步研究遥
上述引物虽以严格的标准设计完成袁但能扩增
出产物的引物比例并不高袁可能原因有院淤所利用的
设计软件本身特点导致或反应体系仍需进一步优化
等曰于圆 个引物或引物之一的序列跨越在两个外显
子上袁或两引物间有一相当长的内含子序列咱圆暂 遥 根
据 耘杂栽序列设计的引物对基因组 阅晕粤进行 孕悦砸 扩
增时袁扩增产物部分会比目标 耘杂栽片段长袁这在以往
的报道中也是存在的袁主要是由于内含子的存在而
导致袁且在前人的研究中也出现了引物扩增出多于
圆 条条带的现象咱圆员 原 圆圆暂 遥
目前袁大规模 耘杂栽 的产生和 耘杂栽 数据库的建
立袁为新开发的 杂杂砸 标记的发展提供了宝贵资源遥
本实验表明袁从牡丹 耘杂栽 序列中开发 杂杂砸 标记是可
行的袁这对于加速牡丹目标性状分子标记筛选尧基因
定位尧遗传连锁图谱构建袁实现特定性状的辅助选择
和进行比较基因组学研究袁都具有重要意义遥
参考文献院
咱员暂 孕燥憎藻造造 宰袁 酝葬糟澡则葬赠 郧 悦袁 孕则燥增葬灶 允援 孕燥造赠皂燥则责澡蚤泽皂 则藻增藻葬造藻凿 遭赠 泽蚤皂鄄
责造藻 泽藻择怎藻灶糟藻 则藻责藻葬贼泽 咱允暂 援 栽则藻灶凿泽 蚤灶 孕造葬灶贼 杂糟蚤藻灶糟藻袁 员怨怨远袁员院 圆员缘 原
圆圆圆
咱圆暂 灾葬则泽澡灶藻赠 砸 运袁 郧则葬灶藻则 粤袁 杂燥则则藻造造泽 酝 耘援 郧藻灶蚤糟 皂蚤糟则燥泽葬贼藻造造蚤贼藻 皂葬则噪鄄
藻则泽 蚤灶 责造葬灶贼院枣藻葬贼怎则藻泽 葬灶凿 葬责责造蚤糟葬贼蚤燥灶泽 咱允暂 援 栽则藻灶凿泽 蚤灶 月蚤燥贼藻糟澡灶燥造燥早赠袁
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