全 文 ：林业科学研究摇 圆园员猿渊专刊冤院园源缘 园缘员云燥则藻泽贼 砸藻泽藻葬则糟澡
摇 摇 文章编号院员园园员鄄员源怨愿渊圆园员猿冤专刊鄄园园源缘鄄园苑
中间锦鸡儿生长发育过程中 缘个 皂蚤砸晕粤泽及其
靶基因的表达模式分析
朱建峰员袁 李万峰员袁 杨文华员袁 韩素英圆袁 齐力旺员鄢
渊员援中国林业科学研究院林业研究所袁北京摇 员园园园怨员曰 圆援中国林业科学研究院森林生态环境与保护研究所袁北京摇 员园园园怨员冤
收稿日期院 圆园员猿鄄园愿鄄圆源
基金项目院 国家野怨苑猿冶计划项目渊圆园园怨悦月员员怨员园远冤曰国家野愿远猿冶计划重点项目渊圆园员员粤粤员园园圆园猿袁圆园员猿粤粤员园圆苑园源冤资助
作者简介院 朱建峰渊员怨愿猿要冤袁男袁河北衡水人袁助理研究员袁主要从事林木生物技术研究援
鄢通讯作者援
摘要院利用 择砸栽鄄孕悦砸技术分析了 缘 个 皂蚤砸晕粤泽渊糟蚤灶鄄皂蚤砸员缘苑葬尧糟蚤灶鄄皂蚤砸员缘怨葬尧糟蚤灶鄄皂蚤砸员远缘葬尧糟蚤灶鄄皂蚤砸员苑圆遭 和 糟蚤灶鄄皂蚤砸猿怨远葬冤
及其靶基因在中间锦鸡儿渊悦葬则葬早葬灶葬 蚤灶贼藻则皂藻凿蚤葬冤不同发育阶段不同器官的表达变化遥 结果显示袁缘 个 皂蚤砸晕粤泽 的表
达模式均存在时空特异性袁其中 糟蚤灶鄄皂蚤砸员缘怨葬尧糟蚤灶鄄皂蚤砸员远缘葬尧糟蚤灶鄄皂蚤砸员苑圆遭尧糟蚤灶鄄皂蚤砸猿怨远葬 在成年期营养器官中强烈表
达袁在幼年期和成年期生殖器官中弱表达曰糟蚤灶鄄皂蚤砸员缘苑葬在幼年期和成年期生殖器官中强烈表达袁在成年期营养器官
中弱表达遥 除 糟蚤灶鄄皂蚤砸员缘怨葬的靶基因酝再月和 糟蚤灶鄄皂蚤砸员远缘葬的靶基因 匀阅鄄在蚤责 外袁其它被检测的 皂蚤砸晕粤泽靶基因与相
应的 皂蚤砸晕粤泽的表达呈现出明显的相互消长的表达模式遥 该结果表明中间锦鸡儿 皂蚤砸晕粤 可通过调控其靶基因的
表达袁进而调控发育阶段转变尧器官形态建成尧细胞分化等生物学过程遥 研究结果将为中间锦鸡儿的定向改良工作
提供理论依据和基因资源遥
关键词院中间锦鸡儿曰生长发育曰皂蚤糟则燥砸晕粤曰靶基因曰表达分析
中图分类号院杂苑员愿援 源远 文献标识码院粤
耘曾责则藻泽泽蚤燥灶 粤灶葬造赠泽蚤泽 燥枣 缘 皂蚤砸晕粤泽 葬灶凿 栽澡藻蚤则 栽葬则早藻贼泽 阅怎则蚤灶早
阅蚤枣枣藻则藻灶贼 郧则燥憎贼澡 葬灶凿 阅藻增藻造燥责皂藻灶贼葬造 杂贼葬早藻泽 燥枣 悦葬则葬早葬灶葬 蚤灶贼藻则皂藻凿蚤葬
在匀哉 允蚤葬灶鄄枣藻灶早员袁 蕴陨 宰葬灶鄄枣藻灶早员袁 再粤晕郧 宰藻灶鄄澡怎葬员袁 匀粤晕 杂怎鄄赠蚤灶早圆袁 匝陨 蕴蚤鄄憎葬灶早员
渊员郾 砸藻泽藻葬则糟澡 陨灶泽贼蚤贼怎贼藻 燥枣 云燥则藻泽贼则赠袁 悦澡蚤灶藻泽藻 粤糟葬凿藻皂赠 燥枣 云燥则藻泽贼则赠袁 月藻蚤躁蚤灶早摇 员园园园怨员袁 悦澡蚤灶葬曰
圆郾 砸藻泽藻葬则糟澡 陨灶泽贼蚤贼怎贼藻 燥枣 云燥则藻泽贼 耘糟燥造燥早赠袁 耘灶增蚤则燥灶皂藻灶贼 葬灶凿 孕则燥贼藻糟贼蚤燥灶袁 悦澡蚤灶藻泽藻 粤糟葬凿藻皂赠 燥枣 云燥则藻泽贼则赠袁 月藻蚤躁蚤灶早摇 员园园园怨员袁 悦澡蚤灶葬冤
粤遭泽贼则葬糟贼院 栽澡藻 藻曾责则藻泽泽蚤燥灶 责葬贼贼藻则灶泽 燥枣 缘 皂蚤砸晕粤泽渊糟蚤灶鄄皂蚤砸员缘苑葬袁 糟蚤灶鄄皂蚤砸员缘怨葬袁 糟蚤灶鄄皂蚤砸员远缘葬袁 糟蚤灶鄄皂蚤砸员苑圆遭 葬灶凿 糟蚤灶鄄
皂蚤砸猿怨远葬冤 葬灶凿 贼澡藻蚤则 贼葬则早藻贼泽 凿怎则蚤灶早 凿蚤枣枣藻则藻灶贼 燥则早葬灶泽 蚤灶 凿蚤枣枣藻则藻灶贼 凿藻增藻造燥责皂藻灶贼葬造 泽贼葬早藻泽 憎藻则藻 葬泽泽藻泽泽藻凿 遭赠 择砸栽鄄孕悦砸援
栽澡藻 则藻泽怎造贼泽 泽澡燥憎藻凿 贼澡葬贼 贼澡藻 藻曾责则藻泽泽蚤燥灶 责葬贼贼藻则灶泽 燥枣 葬造造 贼澡藻 皂蚤砸晕粤泽 葬则藻 燥枣 贼藻皂责燥则葬造 葬灶凿 泽责葬贼蚤葬造 泽责藻糟蚤枣蚤糟蚤贼赠援 源 皂蚤砸晕粤泽
渊糟蚤灶鄄皂蚤砸员缘怨葬袁 糟蚤灶鄄皂蚤砸员远缘葬袁 糟蚤灶鄄皂蚤砸员苑圆遭 葬灶凿 糟蚤灶鄄皂蚤砸猿怨远葬冤 葬则藻 澡蚤早澡造赠 藻曾责则藻泽泽藻凿 蚤灶 增藻早藻贼葬贼蚤增藻 燥则早葬灶泽 燥枣 皂葬贼怎则藻
责藻则蚤燥凿曰 燥灶藻 皂蚤砸晕粤 渊糟蚤灶鄄皂蚤砸员缘苑葬冤 蚤泽 澡蚤早澡造赠 藻曾责则藻泽泽藻凿 蚤灶 躁怎增藻灶蚤造藻 泽贼葬早藻 葬灶凿 则藻责则燥凿怎糟贼蚤燥灶 燥则早葬灶泽 燥枣 皂葬贼怎则藻 责藻则蚤燥凿援
栽澡藻 则藻泽怎造贼泽 葬造泽燥 泽澡燥憎藻凿 贼澡葬贼 贼澡则藻藻 皂蚤砸晕粤泽 渊糟蚤灶鄄皂蚤砸员缘苑葬袁 糟蚤灶鄄皂蚤砸员苑圆遭 葬灶凿 糟蚤灶鄄皂蚤砸猿怨远葬冤 葬灶凿 贼澡藻蚤则 贼葬则早藻贼 早藻灶藻泽
憎藻则藻 则藻造葬贼藻凿 贼燥 贼澡藻 早则燥憎贼澡 葬灶凿 凿藻糟造蚤灶藻 蚤灶 凿蚤枣枣藻则藻灶贼 凿藻增藻造燥责皂藻灶贼葬造 泽贼葬早藻泽 葬灶凿 凿蚤枣枣藻则藻灶贼 燥则早葬灶泽援 匀蚤早澡 藻曾责则藻泽泽蚤燥灶 燥枣
皂蚤砸晕粤 葬灶凿 蚤贼泽 贼葬则早藻贼 早藻灶藻 藻曾责则藻泽泽蚤燥灶 葬则藻 燥枣贼藻灶 造燥憎援 宰澡藻灶 贼澡藻 皂蚤砸晕粤 藻曾责则藻泽泽蚤燥灶 蚤泽 造燥憎袁 蚤贼泽 贼葬则早藻贼 早藻灶藻 藻曾责则藻泽泽蚤燥灶
蚤泽 燥枣贼藻灶 澡蚤早澡援 栽澡蚤泽 则藻泽怎造贼 蚤灶凿蚤糟葬贼藻泽 贼澡葬贼 皂蚤砸晕粤 皂葬赠 责造葬赠 葬灶 蚤皂责燥则贼葬灶贼 则燥造藻 凿怎则蚤灶早 贼澡藻 早则燥憎贼澡 葬灶凿 凿藻增藻造燥责皂藻灶贼 燥枣 悦援
蚤灶贼藻则皂藻凿蚤葬援
运藻赠 憎燥则凿泽院 悦葬则葬早葬灶葬 蚤灶贼藻则皂藻凿蚤葬曰早则燥憎贼澡 葬灶凿 凿藻增藻造燥责皂藻灶贼曰皂蚤糟则燥砸晕粤曰贼葬则早藻贼 早藻灶藻泽曰藻曾责则藻泽泽蚤燥灶 葬灶葬造赠泽蚤泽
林摇 业摇 科摇 学摇 研摇 究 第 圆远 卷
酝蚤糟则燥砸晕粤渊皂蚤砸晕粤冤是一类 员怨 圆缘 灶贼的非编码
砸晕粤袁主要功能是在转录后水平调节真核生物基因
的表达咱员 原 猿暂 遥 员怨怨猿 年袁在秀丽隐杆线虫渊悦葬藻灶燥则澡葬遭鄄
凿蚤贼蚤泽 藻造藻早葬灶泽冤中 皂蚤砸晕粤 被首次发现袁在线虫的发育
进程中起了重要的调控作用咱源暂 遥 至 圆园园员 年袁皂蚤砸晕粤
已被证实广泛存在于动物界咱缘 原 苑暂 袁很快在植物中也
发现了大量的 皂蚤砸晕粤泽咱愿 原 怨暂 遥 皂蚤砸晕粤 是由类似于
砸晕葬泽藻芋的核酸内切酶 阅蚤糟藻则加工而成袁阅蚤糟藻则可特异
性的对具有发夹结构的 苑园 怨园 灶贼 的双链 砸晕粤 前
体渊责则藻皂蚤砸晕粤冤进行切割袁产生出的 皂蚤砸晕粤袁最终进
入 粤郧韵 等蛋白形成 砸陨杂悦 渊 砸晕粤 蚤灶凿怎糟藻凿 泽蚤造藻灶糟蚤灶早
糟燥皂责造藻曾冤复合体袁可与靶基因结合袁通过抑制靶基因
的翻译或切割靶基因袁从而调控基因的表达咱员园 原 员员暂 袁
一个 皂蚤砸晕粤可以靶向调控多个靶基因袁从几个到几
十个不等咱员圆暂 遥 越来越多的研究表明袁皂蚤砸晕粤 在植物
的生长发育过程中发挥着重要的调控作用袁如幼年
期转向成年期袁营养生长转向生殖生长袁花序分化转
变为花器官生长袁器官极性的建立等曰并已发现很多
植物 皂蚤砸晕粤 的靶基因是编码参与发育调控和细胞
分化的转录因子袁例如 杂孕蕴尧粤孕圆尧悦哉悦员尧悦哉悦圆尧孕匀月尧
孕匀灾等咱员猿 原 员源暂 遥
中间锦鸡儿渊悦葬则葬早葬灶葬 蚤灶贼藻则皂藻凿蚤葬 运怎葬灶早 藻贼 匀援
悦援 云怎冤系豆科锦鸡儿属落叶灌木袁广泛分布于我国
黄河流域以北的干燥地区袁且具有枝叶蛋白含量丰
富尧种子含油量高等特点袁是生态效益和经济效益俱
佳的树种咱员缘 原 圆园暂 袁其生长环境和生长发育过程都具有
一定的特殊性遥 但 皂蚤砸晕粤 在中间锦鸡儿生长发育
过程中起到何种调控作用袁至今尚未见研究报道遥
本研究对 缘 个 皂蚤砸晕粤泽及其靶基因在中间锦鸡儿不
同发育时期的表达情况进行了分析袁旨在揭示中间
锦鸡儿生长发育过程中 皂蚤砸晕粤 的调控机制袁为中间
锦鸡儿的定向改良工作提供理论依据和基因资源遥
员摇 材料与方法
员援 员摇 实验材料
选取定植于林科院苗圃的 源 葬 生中间锦鸡儿
渊已开花结果袁进入成年期冤优良植株为材料袁采集
其根尧茎尧叶尧花和果袁并采集当年该植株所结种子袁
于温室中播种袁待幼苗萌发后 猿 周袁分根尧茎和叶进
行采集渊见表 员冤袁将采集材料用液氮迅速冷冻后袁放
于 原 愿园益超低温冰箱中保存备用遥
表 员摇 中间锦鸡儿不同生长发育阶段材料采集信息表
发育阶段 器官组织时期
幼年期
成年期营养器官
成年期生殖器官
圆员 凿生袁实生苗根
圆员 凿生袁实生苗茎
圆员 凿生袁实生苗叶
源 葬生袁侧根渊粗 员 猿 皂皂冤
源 葬生袁半木质化茎渊灰白色变硬袁粗 圆 猿 皂皂冤
源 葬生袁半成熟叶渊小叶展开袁羽状叶未完全长成袁长
缘援 园 糟皂左右冤
源 葬生袁成熟花蕾袁已长成袁但未开放袁长 圆援 圆 糟皂左右
源 葬生袁幼荚果袁荚果长 圆援 缘 猿 糟皂袁宽 园援 源 糟皂袁种子
长 园援 远 糟皂袁宽 园援 源 糟皂
员援 圆摇 皂蚤砸晕粤序列获得及其靶基因预测
皂蚤砸晕粤序列从前期中间锦鸡儿小 砸晕粤 文库高
通量测序结果中获得遥 序列如下院糟蚤灶鄄皂蚤砸员缘苑葬袁栽栽鄄
郧粤悦粤郧粤粤郧粤栽粤郧粤郧粤郧悦粤悦曰 糟蚤灶鄄皂蚤砸员缘怨葬袁 栽栽栽郧鄄
郧粤栽栽郧粤粤郧郧郧粤郧悦栽悦栽粤曰 糟蚤灶鄄皂蚤砸员远缘葬袁 栽悦郧郧粤悦鄄
悦粤郧郧悦栽栽悦粤栽悦悦悦悦曰 糟蚤灶鄄皂蚤砸员苑圆遭袁 粤郧粤粤栽悦栽栽郧粤栽鄄
郧粤栽郧悦栽郧悦粤郧曰 糟蚤灶鄄皂蚤砸猿怨远葬袁 栽栽悦悦粤悦粤郧悦栽栽栽悦栽栽鄄
郧粤粤悦栽郧遥 应用 责泽砸晕粤栽葬则早藻贼 软件渊澡贼贼责院 辕 辕 责造葬灶贼早则灶援
灶燥遭造藻援 燥则早 辕 责泽砸晕粤栽葬则早藻贼 辕 冤袁在中间锦鸡儿转录组数
据渊未发表冤中搜索 缘 个 皂蚤砸晕粤泽 的互补序列袁并按
如下参数来确定 皂蚤砸晕粤泽的靶基因院渊员冤成熟序列和
它的潜在靶基因之间最多不能超过 源 个错配曰渊圆冤在
第 员 怨 的碱基位置不允许超过 员 个碱基的错配曰
渊猿冤最多不能超过两个连续的错配曰渊源冤在第 员园 和
员员碱基处不允许出现错配咱圆员 原 圆圆暂 遥 初步筛选出来的
皂蚤砸晕粤泽候选靶基因与 晕悦月陨 的非冗余蛋白数据库
进行同源性比对袁从而对其靶基因的功能进行注释遥
员援 猿摇 泽皂葬造造 砸晕粤提取和 糟阅晕粤合成
应用植物 皂蚤糟则燥砸晕粤 提取试剂盒渊月蚤燥栽藻运藻袁月藻蚤鄄
躁蚤灶早冤提取样品的 泽皂葬造造 砸晕粤袁样品 砸晕粤 的浓度和纯
度袁应用 晕阅鄄员园园园 分光光度计渊晕葬灶燥凿则燥责 栽藻糟澡灶燥造燥鄄
早蚤藻泽袁哉杂粤冤进行检测曰砸晕粤 的完整性袁用 圆援 园豫的凝
胶电泳检测遥 样品 砸晕粤 的 韵阅圆远园 辕 圆愿园吸光度比值在员援 怨 圆援 圆袁电泳结果显示带型单一分布在 员园园 遭责左
右且未发生弥散袁才能用于后续的实验遥 所有样品
均取 缘园园 灶早 泽皂葬造造 砸晕粤袁使用 晕悦燥凿藻 灾陨蕴韵 皂蚤砸晕粤
糟阅晕粤 杂赠灶贼澡藻泽蚤泽 运蚤贼渊陨灶增蚤贼则燥早藻灶袁哉杂粤冤合成第一链 糟阅鄄
晕粤袁糟阅晕粤 在使用前均用无核酸酶水进行 圆园 倍
稀释遥
员援 源摇 总 砸晕粤提取和 糟阅晕粤合成
根尧茎和叶应用 栽砸陨扎燥造试剂渊陨灶增蚤贼则燥早藻灶袁哉杂粤冤进
行总 砸晕粤 的提取曰砸晕粤蚤泽燥 孕造怎泽 和 砸晕粤蚤泽燥鄄皂葬贼藻 枣燥则
孕员葬灶贼 栽蚤泽泽怎渊栽葬噪葬砸葬袁允葬责葬灶冤试剂盒搭配使用提取花
远源
专刊 朱建峰等院中间锦鸡儿生长发育过程中 缘 个 皂蚤砸晕粤泽及其靶基因的表达模式分析
和果的总 砸晕粤遥 样品总 砸晕粤 的浓度和纯度袁应用
晕阅鄄员园园园 分光光度计渊晕葬灶燥凿则燥责 栽藻糟澡灶燥造燥早蚤藻泽袁哉杂粤冤
进行检测曰 砸晕粤 的完整性袁用 员援 缘豫的凝胶电泳检
测遥 样品 砸晕粤的 韵阅圆远园 辕 圆愿园吸光度比值在 员援 怨 圆援 圆袁圆愿杂 辕 员愿杂的比值在 员援 缘 圆援 园 且未发生弥散袁才能用
于后续的实验遥 使用无 砸晕粤 酶的 阅晕粤 酶 渊 孕则燥鄄
皂藻早葬袁哉杂粤冤去除样品中残留的 阅晕粤曰所有样品均取
员 滋早 总 砸晕粤袁利用 砸藻增藻则贼粤蚤凿栽酝 云蚤则泽贼 杂贼则葬灶凿 糟阅晕粤
杂赠灶贼澡藻泽蚤泽试剂盒渊云藻则皂藻灶贼葬泽袁郧藻则皂葬灶赠冤进行反转录袁
糟阅晕粤在使用前均用无核酸酶水进行 猿园 倍稀释遥
员援 缘摇 皂蚤砸晕粤及其靶基因 择砸栽鄄孕悦砸引物设计
应用 孕则蚤皂藻则 孕则藻皂蚤藻则 缘援 园 软件渊澡贼贼责院 辕 辕 憎憎憎援 孕则藻鄄
皂蚤藻则月蚤燥泽燥枣贼援 糟燥皂 辕 责则蚤皂藻则凿藻泽蚤早灶 辕 责则蚤皂藻则凿藻泽蚤早灶援 澡贼皂造冤 进
行引物设计袁根据 皂蚤砸晕粤 序列设计 皂蚤砸晕粤 的正向
引物渊表 圆冤袁反向引物为 晕悦燥凿藻 灾陨蕴韵 皂蚤砸晕粤 糟阅晕粤
杂赠灶贼澡藻泽蚤泽 运蚤贼渊陨灶增蚤贼则燥早藻灶袁哉杂粤冤试剂盒提供的通用引
物曰皂蚤砸晕粤靶基因引物设计具体参数要求为院熔解
温度为 缘愿 远圆益袁引物长度为 圆园 圆源 遭责袁郧悦 含量
为 源缘豫 缘缘豫 袁且扩增产物长度为 缘园 圆源园 遭责渊表
圆冤遥
表 圆摇 中间锦鸡儿 皂蚤砸晕粤及其靶基因 择砸栽鄄孕悦砸引物
皂蚤砸晕粤及其靶基因 郧藻灶藻遭葬灶噪收录号 正向引物渊缘忆寅猿忆冤 反向引物渊缘忆寅猿忆冤
糟蚤灶鄄皂蚤砸员缘苑葬 郧悦栽栽郧粤悦粤郧粤粤郧粤栽粤郧粤郧粤郧悦粤悦粤粤
糟蚤灶鄄皂蚤砸员缘苑葬靶基因渊杂孕蕴冤 运悦圆缘远怨远苑 郧粤栽悦粤栽悦郧悦悦郧粤悦栽栽栽栽郧栽粤栽 栽郧悦栽栽栽粤郧郧郧悦悦粤栽栽栽栽悦栽栽郧
糟蚤灶鄄皂蚤砸员缘怨葬 郧郧栽栽栽郧郧粤栽栽郧粤粤郧郧郧粤郧悦栽悦栽粤
糟蚤灶鄄皂蚤砸员缘怨葬靶基因渊酝再月冤 运悦圆缘远怨苑源 栽郧郧悦粤郧栽粤栽郧悦栽郧粤粤栽郧郧栽栽栽栽 栽栽郧粤郧悦栽郧栽郧栽郧粤郧栽粤郧郧郧粤悦悦
糟蚤灶鄄皂蚤砸员远缘葬 郧郧粤悦悦粤郧郧悦栽栽悦粤栽悦悦悦悦粤粤
糟蚤灶鄄皂蚤砸员远缘葬靶基因渊匀阅鄄在蚤责陨陨陨冤 运悦圆缘远怨苑愿 郧悦栽粤栽栽栽悦粤悦粤粤粤郧栽郧郧悦粤粤悦郧 栽栽悦栽粤粤粤悦栽粤粤悦粤粤郧粤悦悦郧悦粤郧郧
糟蚤灶鄄皂蚤砸员苑圆遭 郧郧粤郧粤粤栽悦栽栽郧粤栽郧粤栽郧悦栽郧悦粤郧
糟蚤灶鄄皂蚤砸员苑圆遭靶基因渊粤孕圆冤 运悦圆缘远怨愿猿 粤粤郧郧粤粤粤郧粤郧悦粤粤栽粤郧粤郧粤粤郧粤郧郧 郧粤粤粤粤栽郧粤郧郧郧栽郧粤粤郧郧粤粤郧郧
糟蚤灶鄄皂蚤砸猿怨远葬 郧郧栽栽悦悦粤悦粤郧悦栽栽栽悦栽栽郧粤粤悦栽郧
糟蚤灶鄄皂蚤砸猿怨远葬靶基因渊郧砸云冤 运悦圆缘远怨愿愿 栽悦郧栽悦栽郧郧郧栽栽栽栽郧粤栽栽粤栽郧郧郧 栽郧粤郧郧粤栽栽悦栽郧悦郧栽栽栽郧郧郧郧栽栽
缘援 愿泽裕 粤月圆远圆缘猿源 郧栽悦栽郧悦悦栽郧郧郧悦郧栽悦粤悦粤栽粤
杂粤晕阅裕 允载圆苑圆远源猿 粤栽粤悦栽悦郧栽悦粤粤悦粤郧悦粤郧粤粤粤 郧栽悦粤悦悦悦粤粤悦粤栽粤粤粤粤郧粤粤悦
哉晕运圆裕 允载圆苑圆远源远 悦粤粤粤郧粤栽粤郧栽郧悦栽郧悦栽郧粤栽栽郧悦 栽悦悦栽郧郧栽郧栽栽栽郧栽郧悦栽郧粤栽粤郧粤
摇 摇 注院裕表示为内参基因
员援 远摇 实时定量 孕悦砸
择砸栽鄄孕悦砸反应在 粤月陨苑缘园园 定量仪渊粤责责造蚤藻凿 月蚤燥鄄
泽赠泽贼藻皂泽袁哉杂粤冤上进行袁使用 杂再月砸襆 孕则藻皂蚤曾 耘曾 栽葬择栽酝
渊栽葬噪葬砸葬袁允葬责葬灶冤试剂袁建立 圆园 滋蕴反应体系袁反应条
件为院怨缘益袁猿园 泽曰源园 个循环院怨缘益袁员缘 泽曰远园益袁猿源 泽曰
通过加热扩增产物 远园益至 怨缘益袁获得熔解曲线袁用
于检测 择砸栽鄄孕悦砸产物的特异性遥
员援 苑摇 数据处理与统计分析
实验原始数据采用 耘曾糟藻造 圆园园苑 进行整理袁以
缘援 愿 泽尧杂粤晕阅 和 哉晕运圆 作为内参基因袁分别对 皂蚤砸鄄
晕粤泽及其靶基因的表达水平进行均一化处理袁各样
品基因的表达水平采用 圆 原 驻驻悦栽法进行相对定量分析
计算遥 其它的分析应用 杂孕杂杂 员苑援 园 统计分析学软件
完成遥
圆摇 结果与分析
圆援 员摇 皂蚤砸晕粤靶基因的预测
为了更好的理解中间锦鸡儿 缘 个 皂蚤砸晕粤泽渊糟蚤灶鄄
皂蚤砸员缘苑葬袁 糟蚤灶鄄皂蚤砸员缘怨葬袁 糟蚤灶鄄皂蚤砸员远缘葬袁 糟蚤灶鄄皂蚤砸员苑圆遭袁
糟蚤灶鄄皂蚤砸猿怨远葬冤的功能袁进行了 皂蚤砸晕粤 靶基因的生
物信息学预测遥 缘 个 皂蚤砸晕粤泽 预测到 愿 个靶基因
渊表 猿冤遥 其中 糟蚤灶鄄皂蚤砸员缘苑葬 的靶基因是 杂孕蕴渊 泽择怎葬鄄
皂燥泽葬 责则燥皂燥贼藻则鄄遭蚤灶凿蚤灶早鄄造蚤噪藻冤袁在植物幼年期向成年
期的阶段转变和侧生器官发生等过程中发挥重要
作用曰糟蚤灶鄄皂蚤砸员缘怨葬的靶基因是 酝再月袁在调节细胞形
态尧应对激素反应尧细胞循环和增殖等过程中起作
用曰糟蚤灶鄄皂蚤砸员远缘葬的靶基因是 匀阅鄄在蚤责陨陨陨渊悦造葬泽泽 陨陨陨 澡燥鄄
皂藻燥凿燥皂葬蚤灶 造藻怎糟蚤灶藻 扎蚤责责藻则冤袁主要在生长素极性运
输尧极性建成和组织分化中起作用曰糟蚤灶鄄皂蚤砸员苑圆遭 的
靶基因是 粤孕圆渊粤孕耘栽粤蕴粤圆冤袁参与花分生组织的建
立袁花器官的识别曰糟蚤灶鄄皂蚤砸猿怨远葬 的靶基因是 郧砸云
渊郧则燥憎贼澡鄄则藻早怎造葬贼蚤灶早 枣葬糟贼燥则冤袁主要功能是调控细胞的
增殖遥 这些基因均在植物生长发育过程中起着重
要作用遥
苑源
林摇 业摇 科摇 学摇 研摇 究 第 圆远 卷
表 猿摇 中间锦鸡儿 皂蚤砸晕粤靶基因预测
皂蚤砸晕粤 靶基因 靶基因注释 得分 辕期望值
糟蚤灶鄄皂蚤砸员缘苑葬 运悦圆缘远怨远苑 载孕赃园园猿缘缘猿怨源源袁 泽择怎葬皂燥泽葬 责则燥皂燥贼藻则鄄遭蚤灶凿蚤灶早鄄造蚤噪藻 责则燥贼藻蚤灶 员远鄄造蚤噪藻咱郧造赠糟蚤灶藻 皂葬曾暂援 源愿远 辕 远耘鄄员远苑
糟蚤灶鄄皂蚤砸员缘怨葬 运悦圆缘远怨苑源 载孕赃园园猿缘源员缘远猿袁 贼则葬灶泽糟则蚤责贼蚤燥灶 枣葬糟贼燥则 郧粤酝再月鄄造蚤噪藻 咱郧造赠糟蚤灶藻 皂葬曾暂 援 源园缘 辕 圆耘鄄员猿缘
糟蚤灶鄄皂蚤砸员远缘葬 运悦圆缘远怨苑苑 载孕赃园园猿缘猿怨苑远缘袁 澡燥皂藻燥遭燥曾 原 造藻怎糟蚤灶藻 扎蚤责责藻则 责则燥贼藻蚤灶 砸耘灾韵蕴哉栽粤鄄造蚤噪藻 蚤泽燥枣燥则皂 圆咱郧造赠糟蚤灶藻 皂葬曾暂 援 猿缘远 辕 猿耘鄄员员圆
运悦圆缘远怨苑愿 粤悦陨员猿远愿源袁责怎贼葬贼蚤增藻 砸耘灾 匀阅鄄在蚤责陨陨陨咱酝葬造怎泽 曾 凿燥皂藻泽贼蚤糟葬暂援 员怨远 辕 圆耘鄄缘远
糟蚤灶鄄皂蚤砸员苑圆遭 运悦圆缘远怨愿猿 载孕赃园园圆猿圆圆愿源怨袁 粤孕圆 凿燥皂葬蚤灶鄄糟燥灶贼葬蚤灶蚤灶早 贼则葬灶泽糟则蚤责贼蚤燥灶 枣葬糟贼燥则咱孕燥责怎造怎泽 贼则蚤糟澡燥糟葬则责葬暂 怨员援 猿 辕 猿耘鄄员怨
运悦圆缘远怨愿源 载孕赃园园猿缘源园苑缘猿袁 藻贼澡赠造藻灶藻鄄则藻泽责燥灶泽蚤增藻 贼则葬灶泽糟则蚤责贼蚤燥灶 枣葬糟贼燥则 砸粤孕圆鄄苑鄄造蚤噪藻咱郧造赠糟蚤灶藻 皂葬曾暂援 员苑怨 辕 愿耘鄄缘园
糟蚤灶鄄皂蚤砸猿怨远葬 运悦圆缘远怨愿苑 载孕赃园园猿远圆苑圆苑园袁 郧砸蕴圆咱酝藻凿蚤糟葬早燥 贼则怎灶糟葬贼怎造葬暂援 员猿苑 辕 员耘鄄猿苑
运悦圆缘远怨愿愿 载孕赃园园猿远圆苑远愿员袁 郧则燥憎贼澡鄄则藻早怎造葬贼蚤灶早 枣葬糟贼燥则咱酝藻凿蚤糟葬早燥 贼则怎灶糟葬贼怎造葬暂 援 圆远园 辕 苑耘鄄愿员
圆援 圆摇 缘 个 皂蚤砸晕粤泽 在中间锦鸡儿不同发育时期的
表达变化
摇 摇 为了鉴别 缘 个 皂蚤砸晕粤泽 在中间锦鸡儿幼年期和
成年期整个生长发育时期不同器官或组织中的作
用袁利用 择砸栽鄄孕悦砸 技术分析了其在幼年期的根尧茎
和叶袁成年期的根尧茎尧叶尧花和果等 缘 种器官中的表
达情况遥 结果表明 缘 个 皂蚤砸晕粤泽 在不同发育时期的
器官或组织中均可以检测到其表达袁且表达模式和
拟南芥等模式植物一样存在时空特异性遥
缘 个 皂蚤砸晕粤泽 的表达模式可分为 圆 类渊图 员冤院
糟蚤灶鄄皂蚤砸员缘怨葬尧糟蚤灶鄄皂蚤砸员远缘葬尧糟蚤灶鄄皂蚤砸员苑圆遭尧糟蚤灶鄄皂蚤砸猿怨远葬
表达模式相似袁均在成年期营养器官强烈表达袁而在
幼年期和成年期生殖器官中低表达袁但有所不同的
是袁糟蚤灶鄄皂蚤砸员缘怨葬和 糟蚤灶鄄皂蚤砸员苑圆遭在成年期根尧茎和叶
中均高表达袁且茎中表达水平最高曰糟蚤灶鄄皂蚤砸员远缘葬 在
成年期茎和叶中高表达袁且叶中表达量为最高曰糟蚤灶鄄
皂蚤砸猿怨远葬 在成年期根和茎中高表达袁且茎中表达量
为最高曰糟蚤灶鄄皂蚤砸员缘苑葬与其它 皂蚤砸晕粤泽 的表达模式均
不相同袁其在幼年期和成年期生殖器官表达量很高袁
而在成年期营养器官低表达遥
注院再砸院幼年期根曰再杂院幼年期茎曰再蕴院幼年期叶曰粤砸院成年期根曰粤杂院成年期茎曰粤蕴院成年期叶曰云造院花 云则院果
图 员摇 中间锦鸡儿 皂蚤砸晕粤泽在不同发育阶段的表达分析
愿源
专刊 朱建峰等院中间锦鸡儿生长发育过程中 缘 个 皂蚤砸晕粤泽及其靶基因的表达模式分析
圆援 猿摇 皂蚤砸晕粤靶基因在中间锦鸡儿不同发育时期的
表达变化
摇 摇 为了进一步研究 缘 个 皂蚤砸晕粤泽 与其相应靶基因
的表达关系袁采用 择砸栽鄄孕悦砸分析检测了 缘 个 皂蚤砸晕粤
靶基因在幼年期根尧茎和叶袁成年期的根尧茎尧叶尧花
和果等 缘 种器官中的表达特点渊图 圆冤遥 结果表明中
间锦鸡儿中所有 皂蚤砸晕粤泽 靶基因都存在不同发育时
期或不同器官特异性表达遥
杂孕蕴 渊 运悦圆缘远怨远苑 冤 是 糟蚤灶鄄皂蚤砸员缘苑葬 的靶基因袁
择砸栽鄄孕悦砸 分析结果表明 杂孕蕴 在不同发育时期的各
个器官或组织中均有表达袁但表达量不同袁其在幼年
期表达量极低袁而在成年期强烈表达袁尤其是在成年
期营养器官中表达量最高遥 杂孕蕴 在不同发育时期和
不同器官均可表达袁说明该基因编码的蛋白是一种
普遍的转录因子袁而在不同发育时期表达差异明显袁
表明其可能在中间锦鸡儿的生长阶段的转变尧叶的
发育尧花器官形成尧果实发育等整个生长发育过程中
起着重要的作用遥 酝再月渊运悦圆缘远怨苑源冤是 糟蚤灶鄄皂蚤砸员缘怨葬
的靶基因袁择砸栽鄄孕悦砸分析结果表明 酝再月 在成年期花
中不表达袁在成年期根和茎中高表达袁在幼年期叶及
成年期叶和果中弱表达遥 匀阅鄄在蚤责 渊运悦圆缘远怨苑愿冤是
糟蚤灶鄄皂蚤砸员远缘葬的靶基因袁择砸栽鄄孕悦砸 分析结果表明 匀阅鄄
在蚤责 在成年期根尧花和果中高表达袁而在其它发育
时期或器官表达水平较低遥 粤孕圆 是 糟蚤灶鄄皂蚤砸员苑圆遭 的
靶基因袁其在幼年期茎和成年期花中强烈表达袁而在
成年期营养器官中弱表达袁表明 粤孕圆 可能在中间锦
鸡儿幼年期向成年期转变尧营养生长向生殖生长以
及花和果的发育中起着重要的作用遥 郧砸云 是 糟蚤灶鄄
皂蚤砸猿怨远葬的靶基因袁择砸栽鄄孕悦砸 分析结果表明 郧砸云 在
幼年期叶中强烈表达袁在其它时期或器官中弱表达袁
甚至在花中未检测到其表达遥
注院再砸院幼年期根曰再杂院幼年期茎曰再蕴院幼年期叶曰粤砸院成年期根曰粤杂院成年期茎曰粤蕴院成年期叶曰云造院花 云则院果
图 圆摇 中间锦鸡儿 皂蚤砸晕粤泽靶基因在不同发育阶段的表达分析
圆援 源摇 皂蚤砸晕粤与其靶基因的表达调控关系
由图 员 和图 圆 可以看出袁除 糟蚤灶鄄皂蚤砸员缘怨葬的靶基
因 酝再月和 糟蚤灶鄄皂蚤砸员远缘葬的靶基因 匀阅鄄在蚤责 外袁其它
被检测的 皂蚤砸晕粤泽 靶基因与相应的 皂蚤砸晕粤泽 的表达
呈现出明显的相互消长的表达模式遥 例如 糟蚤灶鄄
皂蚤砸员缘苑葬 在幼年期和成年期生殖器官中强烈表达袁
怨源
林摇 业摇 科摇 学摇 研摇 究 第 圆远 卷
在成年期营养器官中弱表达袁而其靶基因 杂孕蕴 在成
年期营养器官中强烈表达袁在幼年期和成年期生殖
器官中弱表达曰糟蚤灶鄄皂蚤砸员苑圆遭尧糟蚤灶鄄皂蚤砸猿怨远葬 在成年期
营养器官中强烈表达袁在幼年期和成年期生殖器官
中弱表达袁而其靶基因 粤孕圆 和 郧砸云 在幼年期和成年
期生殖器官或幼年期中强烈表达袁在成年期营养器
官中弱表达遥
猿摇 结论与讨论
猿援 员摇 皂蚤砸晕粤在植物发育阶段转变过程中的作用
植物的生长发育过程具有阶段性袁开花植物具
有明显的幼年期和成年期阶段之分遥 例如袁整个拟
南芥的生命周期可分为两个阶段院营养生长渊增藻早藻贼葬鄄
贼蚤增藻 责澡葬泽藻冤和生殖生长渊则藻责则燥凿怎糟贼蚤增藻 责澡葬泽藻冤袁其中营
养生长又可分为幼年期渊 躁怎增藻灶蚤造藻 责澡葬泽藻冤和成年期
渊葬凿怎造贼 责澡葬泽藻冤遥 在模式植物拟南芥中有很多 皂蚤砸鄄
晕粤泽在幼年期向成年期转变的过程中发挥作用咱圆猿暂 袁
其中 皂蚤砸员缘远 辕 员缘苑 和 皂蚤砸员苑圆 是两种最重要的调控阶
段转变 皂蚤砸晕粤泽袁皂蚤砸员缘远 辕 员缘苑 是植物生长发育周期
转变渊责澡葬泽藻 贼则葬灶泽蚤贼蚤燥灶冤的主要调控基因袁其不仅调控
从营养生长期到生殖生长期的阶段转变渊开花过
程冤袁还调控幼年期到成年期的转变过程咱圆源 原 圆缘暂 遥 最
新的研究结果表明袁皂蚤砸员缘远 辕 员缘苑 通过调控靶基因
杂孕蕴袁从而控制幼年期到成年期的阶段转变咱圆缘暂 曰
宰葬灶早等研究结果表明 皂蚤砸员缘远 辕 员缘苑 的靶基因 杂孕蕴怨
是通过调控一类 酝粤阅杂遭燥曾基因的表达袁控制了营养
生长到生殖生长的转变咱圆源暂 遥
猿援 圆摇 中间锦鸡儿 皂蚤砸晕粤 通过调控其靶基因发挥
作用
摇 摇 本研究中 糟蚤灶鄄皂蚤砸员缘苑葬在幼年期高表达袁在向成
年期的阶段转变中表达量逐渐降低袁尤其是在成年
期营养器官中袁表达量保持在较低的水平曰而 糟蚤灶鄄
皂蚤砸员苑圆遭则相反袁在幼年期的时候表达量很低袁随着
向成年期的转变袁其表达量逐渐升高袁进入成年期
后袁其表达量保持在较高的水平袁因此在 糟蚤灶鄄
皂蚤砸员缘苑葬和 糟蚤灶鄄皂蚤砸员苑圆遭 之间存在一种相反的调控
关系袁这与前人研究结果相一致咱圆远暂 袁其靶基因 杂孕蕴
和 粤孕圆 恰好与其相对应的 皂蚤砸晕粤泽 呈现出此消彼长
的表达模式遥 说明在中间锦鸡儿中 糟蚤灶鄄皂蚤砸员缘苑葬 和
糟蚤灶鄄皂蚤砸员苑圆遭通过负调控其靶基因袁进而调控中间锦
鸡儿发育阶段的转变遥
研究中还发现检测的 缘 个 皂蚤砸晕粤泽 中袁有 源 个
皂蚤砸晕粤泽 渊 糟蚤灶鄄皂蚤砸员缘怨葬尧 糟蚤灶鄄皂蚤砸员远缘葬尧 糟蚤灶鄄皂蚤砸员苑圆遭尧
糟蚤灶鄄皂蚤砸猿怨远葬冤在成年期营养器官中有很高的表达水
平袁而在幼年期和成年期生殖器官中表达水平较低遥
推测可能在成年期营养器官中袁各器官的发育基本
已经完成袁上调表达的 皂蚤砸晕粤泽 将残留的 皂砸晕粤泽 快
速清除袁保证营养器官功能的发挥袁抑制其再次分
化曰在幼年期和生殖器官中袁下调表达的 皂蚤砸晕粤泽 可
能直接或间接保护 皂砸晕粤 不被降解袁从而保证器官
的分化尧发育和形成遥 例如袁郧砸云是 皂蚤砸猿怨远葬的靶基
因袁其主要功能是调控植物细胞分裂咱圆苑暂 袁本研究结
果表明袁糟蚤灶鄄皂蚤砸猿怨远葬 在成年期营养器官中高表达袁
而在其它时期和器官中表达量极低袁相反的 郧砸云 在
幼年期具有较高的表达量袁在其它时期或器官低表
达甚至不表达袁表明在中间锦鸡儿中 糟蚤灶鄄皂蚤砸猿怨远葬通
过负调控其靶基因 郧砸云袁保证在幼年期和生殖器官
中细胞分裂的进行袁而在成年期营养器官中则抑制
成熟细胞再次分裂遥
猿援 猿摇 皂蚤砸晕粤 研究在中间锦鸡儿遗传育种中的重要
作用
摇 摇 皂蚤砸晕粤作为一种新型的调控小 砸晕粤袁在植物生
长发育的调控中发挥着及其重要的生物学作用遥 在
林木育种和生产实践中袁促进或延迟发育阶段转变
及调控其它发育阶段的进程均具有重要的价值和意
义袁因此在育种工作中通过过表达或反义表达这些
与生长发育密切相关的 皂蚤砸晕粤泽 或其靶基因袁可对
中间锦鸡儿生长发育进行人为的控制袁为中间锦鸡
儿的定向改良工作提供理论基础和新的基因资源遥
参考文献院
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咱员苑暂 牛西午援 柠条研究咱酝暂援 北京院科学出版社袁 圆园园猿院 员 原 圆
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