全 文 ：第 4 卷 第 5 期
1 9 9 1 年10月
林 业 科 学研 究 。 4 , N o 。亏
FO R E S T R E S E A R CH 1 9 9 1
外生菌根真菌菌剂的制备及其
对松苗生长效果的研究 .
周玉芝 刘 忱 齐玉 臣 韩桂云 周崇莲
(中国科学院沈阳应用生态研究所 )
摘典 ‘ 从不同林型下分离获得的外生菌根真菌纯培养菌株中, 选择了劣味乳菇、美味红 菇、赌
丝膜菌、 彩色豆马勃四株菌根菌 , 进行菌荆制备及其对松苗生长效果的试验 。 结果表明 , PD M A 和
PD 培养基 是培养外生菌根真菌较适合的培养基 , 木屑、 数皮 、米稼、 玉米粉、 珍珠岩、 蛙石等是
培养菌根菌菌刘较适宜的基质 。 供试菌对油松、马尾松、 落叶松 、 樟子松、 红松苗都具促进生长作
用 , 效果较明显的是丝膜菌 , 其次是劣味乳菇、 美味红菇 、 彩色豆马勃 , 对促进火炬松苗生长效
果最明显的是劣味乳菇 , 其次是美味红菇、 彩色豆马勃 。 四种菌对湿地松苗生长效果 均 高 于 对
照 。
关. 词 外生菌根真菌 , 菌剂 , 松苗
早在 1 9 5 6年前本所曾对松树(p in u s sPp . )和柞树(Q u e , e u s s p . ) 的 外生菌根真菌进行T
分离 , 并对油松 (尸in u s ta 石u la efo : m is Ca r r . ) 、 樟子 松 (p in u s s夕Iv e stris v a r . m o n g o lfc a
L it v
.
)幼苗进行接种试验 , 促进了松苗的生长和成活 [‘1 。自1 9 7 8年以来 , 又对外生菌根进行了
研究 。 从不同地区 、 不同林型下采集真菌子实体 , 在无菌条件下用切割组织法分离 菌 根 真
菌 , 获得纯培养菌株。 但大部分菌根真菌在人工培养条件下 , 不能繁殖出足够的菌丝体 , 以
满足林业育苗的需要。 目前 , 世界上研究菌根的学者 , 已采用人工纯培养体进行人工接种 ,
加速了松苗菌根的形成 , 促进苗木生长 。 因此 , 研究有效菌根真菌的培养并制成菌剂 , 实现
林木幼苗人工菌根化 , 在造林生产实践上具有重要意义 。
本研究选择了四种对松树幼苗回接效果较好的菌根真菌 , 进行菌剂培养条件的研究。 并
将培养好的菌剂在不同地区对不同树种的松苗进行接种试验。 现将1 9 8 5一 1 9 8 9年的研究结果
予以报道 。
1 材料和方法
1
。
1 菌种
见表 1 。供试菌种子实体种名由本所植物室王云先生鉴定 。
1
.
2 树种
油松 、 马尾松(P 。 m a s so o ia n a L a m b . ) 、 兴安落叶松〔L a r ix g o e lin i (R u p r 。 )R u p r . 〕、
樟子松为盆栽直播苗。 红松(P . k。、ien st’: S le b . et Z u c c . ) 为盆栽一年生幼苗。 火炬松
本文于1 9 9 0年 8 月2 9 日收到 。
* 本研究为国家 自然科学墓金项 目‘菌根真菌与植物共生营养的研究及其 在林业生产上的应用”部分内容 。
弓期 周玉芝等: 外生菌根真菌菌荆的制备及其对松苗生长效果的研究 5 29
表 1 外生菌根弃菌菌种来派
菌 种 采 集 地 点 生 境
劣 味 乳 菇 (L a c ta r i“ 5 fn s“l: ‘s
美 味 红 菇 (尸 u s u la de lie a F r .
赌 丝 膜 菌 (C o r tf”a r fo s r u ss “s
彩色豆马勃 蕊tseol ‘才hu s tf”e 才o r f“ se t C o u e h )
吉 林长 白山
广州龙眼洞 , 湖 南会 同
沈 旧 东陇
广 东雷州半岛
红松混交林
马尾松混交林
油松混交林
湿地松人工林
))Pr
、
r 一P)F持
(尸 . ta ed a L . )和湿地松(P . oli 。“ 1 E ng el m . )为春播40 天的塑料薄膜袋幼苗 。
1
。
3 培养基
1
.
3
.
1 针面培养基 选用马铃薯葡萄糖麦芽汁琼脂培养基 (PDM A ) , 组成为20 %马铃 薯 汁
5 0 0 m l
, 麦芽汁(波美 3 度 )5 0 0 m l, 葡 萄 糖 2 0 9 , 维 生素 B : 0 . 0 5 9 , 琼 脂 1 5 9 , p H S . 5 。
0
.
7大气压灭菌20 m ina
1
.
3
.
2 液体种子培养基 选用综合马铃薯培养基(PD ) , 组成为20 %马铃薯汁1 0 0 m l, 葡萄
糖2 0 9 , K H : PO‘ 3 9 , M g S0 4 · 7H : 0 0 。 1 5 9 , 维生素 B : 微量 , p H 5 . 5 。
1
.
3
.
3 固体培养基 选用木屑 、鼓皮 、玉米粉 、 稻糠、 蛙石 、珍珠岩 、草灰等为培养菌根 真菌
的固体基质 , 按不同百分比组成固体培养基 (见表 2 )。
1
.
3
.
4 营养液 为补充固体培养基中营养不足 , 加速菌根真菌的生长 , 选用修改的(MMN )
营养液拌料 。 组成 为 Ca C I: o 。 0 5 9 , N a C l o 。 0 2 5 9 , M g SO‘ · 7 H : 0 0 . 1 5 9 , (N H 一) :H PO.
o
。
2 5 9
,
K H : PO ‘ 0
.
5 9
,
FeC 13 (1 % )i一 2 m l, 葡萄糖5 9 , 维 生 素 B ; o 。 0 2 5 9 , 水 1 0 0 。
m l
,
PH S
。
5 ~ 5
。
7
。
1
.
4 菌荆培养方法
采用斜面培养一液体培养一固体培养三级扩大的培养方法 。1 . 4 . 1 针面培养 将供试菌种接种在斜面培养基上 , 置25 ~ 28 ℃恒温培养5~ 7天。
1
.
4
.
2 液体种子培养 取斜面菌种切割成小块 , 接种在无菌的盛有1 0 m l液体培养基的50 0
m l三角瓶内 , 置25 ‘28 ℃摇床上振荡(往复式 )培养7一 10 天。
1
.
4
.
3 固体培养 将固体基质按比例配好拌匀 , 把料装在罐头瓶内压实 , 中心插一孔 , 封好
瓶 口 , 行 1 气压 l h 灭菌备用 。 将种子液15 ~ 20 m l接入固体培养基内 , 置25 ~ 28 ℃培养 。 劣
味乳菇 、 美味红菇和赫丝膜菌培养15 ~ 20 天 , 彩色豆马勃培养50 ~ 60 天 。
1
.
5 菌根真菌对松苗接种试验
1
.
5
.
1 试验用载体 无菌盆栽试验载体为 : 河沙 :森林土 = 3 : 1 , 过磷酸钙和腐熟马粪为重最
的 1 % 。 载体拌匀经1 . 5大气压 l h 灭菌 , 待用。 薄膜袋容器苗载体为 : 深层黄泥 心 土 , 火烧
土 , 过磷酸钙 = 10 : 2 。: 1 。
1
.
5
.
2 接菌试验 油松、马尾松、 落叶松、 樟子松和红松为无菌盆栽试验 。 每盆定苗 5 株 ,
接菌剂15 9 。 每个处理设 5 次重复 。 对照不接菌 。 按一般温室盆栽管理 。火炬松、 湿地松每
薄膜袋一株苗 , 接菌剂6 9 , 每个处理为30 株苗 。
1
.
5
.
3 试验地点 樟子松在本所内蒙昭乌达盟 、 乌兰傲都试验站 ; 火炬松和湿地松在 广 东省
阳江林场罗琴分场进行人工纯培养接种试验 ; 其余树种在本所温室进行无菌盆栽接种试验 。
经勿 林 业 料 学 研 究 4 卷
2 结果和讨论
通过对几种外生菌根真菌扩大培养的研究 [z] , 选 出制备四种菌根真菌菌剂的培养基和培
养条件 , 见表 2 。
裹 2 四种 , 棍弃 . 生长的培养谷和培养条件
培 养 基 培 养 条 件
种 一 -— 一— 一—斜 面 种子液 固 体 营养液 固液比 p H 温度(℃ ) 时间( d )劣味乳菇美味红菇 PD M APD M A PDP D 木屑70 % , 狱皮30 %漱 皮6 0 % , 相稼 2 0 % ,玉米粉20 %狱皮 70 % , 稻稼 30 % ,木屑了。% 或铁皮30 %蛙 石70 % , 玉米粉 2。% ,草炭10 % 或珍珠岩 70 % ,草炭3 0 % MM N 或水M M N 1 : 21 : 1 5 . 5 ~ 6 . 5 2 8 ~ 3 0 1 5 e 205 . 0 ~ 5 . 5 2 5 ~ 2 8 1 5 ~ 20储丝膜菌 PD MA PD MM N 或水 1 : 1 . 5 5 . 5 ~ 6 . 5 2 5~ 2 8 1 0 ~ 1 5彩色豆马勃 PD M 八 PD M M N I : 0 . 5 ~ 1 4 . 0 ~ 5 . 0 艺8 ~ 3 0 5 0 ~ 602 . 1 , 根真菌的适合培并甚菌根真菌对培养基有着特殊的营养要求。在添加维生素 B : 之类物质的天然培养基上生长
好 , 菌丝初期生长快 , 后期旺盛 , 不易衰老 。 在以无机盐为主的培养基上菌丝生长缓慢 , 个
别菌种几乎不生长 。
彩色豆马勃在以蛙石 70 % 、 草炭 10 % 、 玉米粉 20 % 的培养基上能较好地生长。
菌根真菌在生长过程中一般要求较高营养条件 , 木屑、 鼓皮 、 玉米粉、 稻糠等是培养菌
根菌较适合的天然培养基 , 是菌丝体生长的重要碳 、 氮和维生素的主要来源 。 但不同菌根真
菌产生纤维素酶和半纤维素酶的活性不同 , 因此对基质有着不同要求。彩色豆马勃对基质有着
特殊营养要求 , 在天然培养基上普遍生长不好 , 而在添加草炭的珍珠岩或蛙石的培养基上菌
丝能不断持续生长 。 在以草炭为主的培养基上供试菌均生长不好 。
2
.
2 , 根弃, 菌荆的培并条件
培养基 :菌根真菌生长缓慢 , 为了加速其生长 , 补充固体基质中营养不足 , 选用了修改的
MMN 营养液拌料。这四株供试菌在这种培养基上菌丝初期生长快 , 后期不易衰老。 而在用水
拌料的培养基上菌丝虽然能生长 , 但生长后期菌丝易衰老。
水分 : 固体培养基的含水量过高 , 通气不 良, 影响菌丝生长 , 含水量过低 , 菌丝生长不
旺盛 , 且易衰老 。 一般固液比以1 : l~ 1 . 5为宜(即含水星以75 %一 80 % 为宜 )。
温度 . 培养劣味乳钻 、 彩色豆马勃适宜温度为28 ~ 30 ℃ , 储丝膜菌、 美 味 红菇为 25 ~
28 ℃ . 但不 同菌种对温度的适应性不同。 赫丝膜菌 、 劣味乳菇对温度适应范围较广泛 , 在 10
一 30 ℃可正常生长。 彩色豆马勃在37 ℃时仍能正常生长 , 是一 株较耐高温的菌种。
p H
: 劣味乳菇 、 储丝膜菌生长最适 p H 为5 . 5 ~ 6 。 5 , 美味红菇为5 . 。~ 5 。 5 , 彩色豆马勃
为4 . 。~ 5 . 。。 但劣味乳菇 、 褚丝膜菌在 p H 7 . 5 时菌丝仍能生长旺盛 , 是两株适合北方 盐碱
地造林生产的优良菌种 . 彩色豆马勃在 pH 4 . 。时生长旺盛 , 是一株适合南方酸性土壤 造林
的优良菌株。
在固体培养基上菌丝的生长时间为 : 褚丝膜菌和劣味乳菇 3 ~ 5 天开始生长 , 15 天左右
5 期 周玉芝等 : 外生菌根真菌菌剂的制备及其对松苗生长效果的研究
生长繁殖最旺盛 , 美味红菇 5 一 7 天才开始生长 , 15 ~ 20 天生长繁殖丰满 ; 彩色豆马勃则生
长缓慢 , 10 ~ 15 天才开始生长 , 需培养60 天左右。
2
.
3 菌根弃菌对松苗生长的影晌
菌剂对五种国内松接种后 18 0天 , 两种国外松接种 270 天 , 对苗木进行生长量测定 。 结果
表明, 菌根真菌具有不同程度的促进苗木生长作用 , 但不同树种的苗木速生效果, 因不同菌
种有明显差异。 同一树种接种不同菌种又具各异。 储丝膜菌是促进油松 、 落叶松苗生长最佳
的菌种, 彩色豆马勃促进马尾松 、 湿地松苗生长最佳, 劣味乳菇促进樟子松 、 红松、 火炬松
苗生长最佳(见后页表 3 )。
供试菌株均具有较强的共生性, 与苗木根系形成菌根后扩大根系面积 , 增加根系的吸收
能力 , 加速苗木生长 。 其中赫丝膜菌、 劣味乳菇表现最明显 , 而且对生长温度 、 p H 的适应
范围广泛 , 是很有应用前景的优良菌株。 五种国内松苗以樟子松对供试菌根真菌的接菌效果
最明显 , 这为东北地区沙地营造樟子松 , 实行人工菌根化措施提供了优良菌种 。
本研究为菌根真菌作为一种生物技术应用于造林生产 , 提供了优良菌种和菌剂的制备 ,
这对绿化荒山 , 提高我国森林覆盖率, 具有重要的意义 。
参 考 文 献
1 9 6 4
, 菌根化和施用胡敏酸肥料对樟子松幼苗成活及菌根形成的研究初报 , 林业科学 , 9 (l) : 61 ~ 64 。
1 9 84
, 几种外生菌根真菌扩大培养的研究 。 第 四届全国菌根会议报告 。灵舞九;公,a思气泵雹赞今淤豁瓮妒麦气氛濡呱cto 、
张宪武等 ,
周玉芝等 ,
孙红珠译 ,
My ee liu m
,
M梦e o lo 夕ia , 61 :
1 9 5 ~ 1 98
.
郭秀珍等 , 1 9 89 , 林木菌根及应用技术 , 中国林业 出版社 。
,J, .1飞14J,占八石品舀‘ql匕rrJLLtesJ尸L
I n o c u la P r e Pa r a tfo o o f E
c t o 。夕e o r rhiz a l F u n g i a n d
T he ir E ff
e e ts o n the G r o 二 th o f P in e S e e d lin g s
Zh o u Y u z h i L i u Ch e n
Q i Y u e h e n H a n G u iy un Z h o u Cho n g liau
( S he 。, a o g I o s t i t o t e o f A p 夕l‘e d E c o lo g 夕, A e a de , ‘a S fo fc a )
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t h e s tr o吧 e s t a d a p t ib i lity t o th e inf e e t io n o f th e s e m y e o r rh iz a l fun g i ,
K e y w o r ds e c t o娜c o r r h iz a l fu ng i ; ino e u la ; Pin e s e e d li鳍场
亏3 2 林 业 科 学 研 究 4 卷
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