全 文 ： * 本文为国家“九五”攻关课题“松材线虫病防治技术研究”内容之一。
1998-10-13收稿。
松材线虫病树早期诊断的研究*
Ⅱ.松树品种、接种量及线虫来源对流胶法的影响
杨宝君1) 刘 伟1) 徐福元2) 张 培2) 曲花荣3)
( 1)中国林业科学研究院森林生态环境与保护研究所, 100091,北京; 2)江苏省林业科学研究所, 211153,南京;
3)山东省烟台市森林病虫害防治站, 264000,山东烟台;第一作者 60岁,女,研究员)
摘要 1997～1998年用不同量的松材线虫接种黑松和马尾松, 用 3 个来源的松材线虫接种马
尾松, 用松材线虫接种 7 种松树,接种后对松树的流胶情况定期进行观察。结果表明,接种量小的,
松树流胶异常出现得晚, 全部供试松树流胶出现异常的时间长; 用南京的松材线虫接种的松树和用
其它来源松材线虫接种的松树相比较, 其流胶异常出现得快, 全部供试松树表现流胶异常的时间
短; 感病松树流胶异常出现后,很快全部供试松树均表现异常并死亡。中度感病松树流胶异常出现
后, 到全部供试松树流胶表现异常的时间长, 部分死亡。抗病松树的全部供试植株表现流胶异常的
时间长, 而且流胶异常的等级低, 无松树死亡。虽然各处理中流胶异常的时间不同, 但 98%以上的
供试松树在感染松材线虫后流胶均出现异常。这进一步证明了流胶法可作为松材线虫病树的早期
诊断方法。冬季为清理病死树的最佳时期。
关键词 松材线虫病; 流胶; 早期诊断
分类号 S763. 101
松材线虫病( Bursaphelenchus xy lophilus ( Steiner and Buhrer) Nickle)受到世界各国的普
遍重视,因为这种病害危害严重、防治困难。清除病死树被用作防治方法之一。但在清除病死
树时,常有已感病但尚无外部症状的松树, 因无法辨认而不能清理干净, 以致防治效果不理想。
因此,简单易行的早期诊断方法对清除侵染源是十分重要的。日本的科学家用简单的观察松树
流胶的方法(简称流胶法)作为松材线虫病树的早期诊断方法[ 1]。但此方法在不同条件下的可
靠性尚待进一步验证。作者已对黑松 ( P inus thunbergii Parl. )和马尾松 ( P . massoniana
Lamb. )进行了试验,证明黑松、马尾松的树龄及感病时间对流胶法的准确性无影响[ 2]。本试验
的目的是探讨不同的松树品种、不同的接种量及不同来源的松材线虫对流胶法的影响,进一步
验证流胶法做为松材线虫病早期诊断方法的可靠性。
1 材料与方法
1. 1 供试松树
供试松树共 7个品种,树龄均为15～20 a,种植于南京江苏省林科所。松树品种为黑松、马
尾松、火炬松( Pinus taeda L. )、刚松( P. r igida Mill . )、湿地松( P . elliott ii Engelm . )、赤松( P .
densif lora Sieb. et Zucc. )和短针松( P . echinata Mill . )。
1. 2 供试线虫
林业科学研究 1999, 12( 3) : 251～255
For est R esear ch
在不同松树品种及不同接种量的试验中,所用松材线虫均来自南京, 寄主为黑松,在多毛
孢( Pestalot ia sp. )的菌丝层上繁殖。在不同来源松材线虫的试验中, 有 3个来源的松材线虫,
即( 1)南京,寄主为黑松,简称 NH; ( 2)加拿大的针叶树木削片,简称 StJ; ( 3)美国密苏里州, 寄
主为欧洲黑松( P. nigra Arnold) , 简称 MO。这 3个来源的线虫分别在多毛孢的菌丝层上繁
殖。
1. 3 接种方法
在供试松树的树干上砍一深及木质部的伤口,然后夹入脱脂棉,将松材线虫悬液滴于脱脂
棉上。在不同松树品种及不同来源线虫的试验中, 接种量为线虫 5 000条·株- 1。在不同接种
量的试验中, 接种量分别为线虫 100、500、5 000条·株- 1。
1. 4 观察方法
在接种后的第 1个月内每 5 d 观察 1次,第 2个月内每 10 d观察 1次, 以后每个月观察 1
次,均观察到年底。观察时用打孔器在树干部打 1个深达木质部的圆孔, 除去皮层, 24 h 后观
察圆孔中的流胶情况。将 3级流胶定为流胶异常开始。流胶分级标准见参考文献[ 2]。
以上每个处理均设 2株未接种的同种松树作对照,也同时进行打孔观察。
2 结果与分析
2. 1 不同接种量对松树流胶的影响
结果表明(见表 1) , 对照松树的流胶未出现异常。接种量小的松树流胶异常出现得晚, 全
部供试松树流胶异常所需时间长。但尽管接种量很小,可流胶异常现象还是普遍发生,这说明
流胶法的准确性不受接种量的影响。在所有供试松树中,仅有 1株马尾松未表现流胶异常,可
能接种量低, 而这一株马尾松表现出抗性较强, 因而未能建立寄生关系。
表 1 不同接种量对松树流胶的影响
树 种 接种量
/条·株- 1 接种株数
接种时间
/月-日
松树流胶始见异常
所需时间/d
50%供试树流胶异常
所需时间/ d
流胶异常的
准确率 % 死亡株数
黑 松
马尾松
100 5 05-11 25 25 100 ( 30) 4
500 5 05-11 15 20 100 ( 30) 5
5000 5 05-11 10 10 100 ( 20) 5
100 5 08-20 20 60 100 ( 100) 2
500 5 08-20 10 15 100 ( 30) 3
5 000 5 08-20 10 15 100 ( 15) 5
100 10 05-11 15 25 100 ( 180) 0
500 10 05-11 10 25 100 ( 200) 1
5 000 10 05-11 5 10 100 ( 180) 0
100 10 08-20 20 60 90 ( 130) 2
500 10 08-20 15 25 100 ( 130) 4
5 000 10 08-20 5 5 100 ( 50) 4
为流胶异常松树占接种松树的百分数;括号内数字为达到准确率时的天数。表 2、3同。
2. 2 不同来源松材线虫接种马尾松对松树流胶的影响
结果表明(见表 2) , 对照松树的流胶未出现异常。用不同来源的松材线虫接种马尾松后,
松树出现流胶异常的时间有差别。用当地的松材线虫接种,松树很快出现流胶异常, 50%或全
252 林 业 科 学 研 究 第 12卷
表 2 不同来源松材线虫接种马尾松对松树流胶的影响
线虫株系 接种株数 流胶始见异常所需时间/ d
50%供试树流胶异常
所需时间/ d
流胶异常的准确率
%
死亡株数
N H 10 5 5 100 ( 50) 4
S tJ 10 15 40 100 ( 130) 0
MO 10 15 30 100 ( 130) 0
注:接种时间: 1997-08-20。
部供试松树出现流胶异常的时间短, 松树的死亡率高。而用异地的松材线虫接种,松树出现流
胶异常所需的时间长, 50%或全部供试松树出现流胶异常的时间也长,无松树死亡。关于不同
来源松材线虫对同一种松树的致病力差异已有报道 [ 3]。这可能是由于长期以来松材线虫在原
产地,在当地的环境条件下,和当地松树寄主形成了寄生关系。而在异地条件下,最初不能适应
异地的环境条件及不同于原产地的松树品种,包括松树体内的真菌种类。但异地松材线虫引起
松树流胶异常的现象还是普遍存在的。说明流胶法作为松材线虫病的早期诊断方法,在此试验
中是准确的, 在 3种来源松材线虫接种的情况下,其准确率均达到 100%。
2. 3 不同种松树感染松材线虫后的流胶情况
结果表明(见表 3) , 对照松树均未出现流胶异常现象。不同种松树感染松材线虫后,开始
出现流胶异常现象的时间差异不大, 50%的供试植株及全部供试植株出现流胶异常所需的时
表 3 不同种松树感染松材线虫后的流胶情况
松树品种 供试株数 接种时间
/月-日
流胶始见异常所需
时间/ d
50%供试树流胶异常
所需时间/ d
流胶异常的准确率
%
死亡株数
黑 松
赤 松
湿地松
火炬松
马尾松
短针松
刚 松
5 05-11 10 10 100 ( 20) 5
5 08-20 5 15 100 ( 15) 5
5 05-11 10 10 100 ( 30) 4
4 08-20 5 10 100 ( 20) 4
10 05-11 5 230 90 ( 230) 0
10 08-20 15 130 80 ( 130) 0
10 05-11 5 230 100 ( 230) 0
10 08-20 15 130 90 ( 130) 0
10 05-11 5 10 100 ( 180) 0
10 08-20 5 5 100 ( 50) 4
5 05-11 15 30 100 ( 230) 0
5 08-20 5 20 100 ( 60) 0
5 05-11 5 5 100 ( 180) 0
5 08-20 5 15 100 ( 60) 1
间相差却很大。供试松树的感病情况可分为 3种,即无供试树萎蔫死亡的松树种, 包括火炬松、
湿地松和短针松;部分供试松树死亡的松树种, 包括马尾松和刚松; 80%以上的供试松树死亡
的松树种,包括黑松和赤松。这一结果也代表了供试松树种的抗病性。抗病性强的松树(火炬
松、湿地松、短针松) ,虽然感病后流胶异常出现得也很快,但 50%及全部供试树流胶异常所需
时间长。流胶异常出现后, 又恢复正常,然后又表现异常,要经过几个反复;最后流胶异常的等
级低(图 1、2)。高度感病的松树(黑松、赤松)感染松材线虫后, 继个别植株流胶异常后,很快
50%和全部供试植株流胶出现异常, 最后流胶停止。中度感病的松树种(马尾松、刚松)感病后
253第 3 期 杨宝君等: 松材线虫病树早期诊断的研究
流胶异常出现的时间和其它松树近似, 50%供试树流胶异常的时间和感病松树种近似,但全部
供试松树流胶异常所需时间介于感病和抗病的松种之间。这一结果表明,松树感病后流胶异常
的情况和其抗病性是密切相关的。
图 1 7种松树感病后的流胶变化曲线( 05-11接种)
图 2 7种松树感病后的流胶变化曲线( 08-20接种)
3 讨 论
在本试验中,供试树有 7个抗性不同的松种,接种的松材线虫有 3个不同来源, 同时也试
用了不同接种量。结果 98%的供试松树在感病后均表现出流胶异常。这表明流胶法作为松材
线虫病树的早期诊断方法简单易行, 相当准确。应用此法识别病树后加以清理,比仅清理死树
彻底得多。首次清理病死树后, 对出现的少数病树, 仍应及时清理,松材线虫病才能得以控制。
从 7种松树感病后的流胶情况看,一开始均出现异常, 但抗病树种有反复。到冬季,所有的
病松树均有流胶异常现象。可能是由于在冬季松树本身的代谢弱,再有松材线虫的影响,流胶
异常现象就比较严重。而在自然界, 松树的感病期难以掌握, 所以可在秋冬季节清理死树的同
时对周围其它松树用流胶法进行诊断。对感病和中度感病的松树,可在秋季进行清理。而对抗
病的松树,冬季清理较为适宜。
254 林 业 科 学 研 究 第 12卷
关于湿地松对松材线虫病的抗性,本试验的结果和以前的工作有些差别 [ 4]。对有些松树种
的抗病性,不同研究者也有过不同的结果[ 4～7]。这可能是由于试验环境、时间, 供试树树龄、种
源,供试树生长状况等因素的差异造成的。这说明松材线虫病的病程是一个复杂的过程,可能
有多种因素在其中起作用。
参 考 文 献
1 清原友也,德重阳山. 生立木 对 线虫 Bur sap helenchus sp . 接种试验.日林言志, 1971, 53( 7) : 210～218.
2 刘伟,杨宝君,徐福元,等.松材线虫病树早期诊断的研究 Ⅰ.马尾松、黑松松材线虫病树的早期诊断. 林业科学研
究, 1998, 9( 5) : 455～460.
3 胡凯基,王秋丽,杨宝君.松材线虫和拟松材线虫不同株系致病性的研究.林业科学研究, 1994, 7( 4) : 381～385.
4 杨宝君,胡凯基,王秋丽,等.松树对松材线虫抗性的研究.林业科学研究, 1993, 6( 3) : 249～255.
5 Mamiya Y. Pathology of pine wil t dis ease caused b y B ursap hel enchus xylop hilu s. Ann. Rev. Phytopath. , 1983, 21:
201～220.
6 周国梁, 程瑚瑞.马尾松( Pinus massoniana) 感染松材线虫 ( Bu rsap hel enchus xylop hi lus )的研究. 植物病理学报,
1993, 23( 1) : 81～84.
7 汪企明,吴礼才,杨宝君,等.马尾松抗松材线虫的再验证及黑松感病进程.森林病虫通讯, 1992( 4) : 4～6.
Study on Early Diagnosis for Pine Wilt Disease Caused by
Bursaphelenchus xylophilus
Ⅱ. The Eff ect of Pine Species , Dose and Nematode Origin on Oleoresin Exudation Method
Yang Baoj un
1) L iu W ei 1) Xu Fuyuan2) Zhang P ei 2) Qu H uar ong 3)
( 1) T he Resear ch In st itute of Forest Ecology, Environment and Protect ion, CAF, 100091, Beijing ,C hina;
2 )Forest ry Research Inst itute of J ian gsu Province, 211153, Nanjing, C hina; 3) Fores t Pest C on tr ol Stat ion
of Yantai City, Shangdong Province, 264000,Yantai , S hangdong, Ch ina)
Abstract In 1997～ 1998, different doses of PWN were used to inoculate Pinus
thunber gii and P . massoniana, 3 origins of PWN were used to inoculate P. massoniana, 7 pine
species were inoculated with PWN, and the o leo resin exudat ion of pines w ere observ ed at
regular inter vals. T he r esults show that w hen the inoculum dose in less, the abno rmal
oleoresin exudation of pines appears later and abnormal oleoresin exudat ion o f all the tested
pines needs longer t ime; the abnormal o leo resin exudation of pines inoculated w ith PWN fr om
Nanjing appears faster and abnormal oleoresin exudat ion of all the tested pines needs shorter
t ime; the unusual oleoresin y ields of all the tested pines for susceptible pine species manifest
the fastest and almost all of the pines die, the unusual o leo resin yields of pines in m iddle
suscept ible display faster and part of pines die, the unusual oleoresin yields of resistant pines
manifest the slow est and the abnormal oleoresin exudat ion class is low . In this test the
abnormal oleoresin exudat ions of 98% pines inoculated w ith PWN occur. T he results fully
pr ove that oleoresin exudat ion method can be used as early diagno sis for pine w ilt disease.
Winter is the ideal season for felling infested pines.
Key words PWN disease; oleoresin exudation; early diagnosis
255第 3 期 杨宝君等: 松材线虫病树早期诊断的研究