全 文 ：第 源愿 卷 第 圆 期
圆 园 员 圆 年 圆 月
林 业 科 学
杂悦陨耘晕栽陨粤 杂陨蕴灾粤耘 杂陨晕陨悦粤耘 灾燥造郾 源愿袁晕燥郾 圆云藻遭援 袁圆 园 员 圆
同源四倍体刺槐花序变异表型观察与分析鄢
路摇 超员 摇 崔彬彬员袁 圆 摇 黄禄君员 摇 孙摇 鹏员 摇 张国君员袁猿 摇 李摇 云员
渊员援林木育种国家工程实验室摇 北京林业大学生物科学与技术学院摇 北京 员园园园愿猿曰
圆郾 保定学院生化系摇 保定 园苑员园园园曰 猿郾 河北科技师范学院园艺科技学院摇 秦皇岛 园远远园园源冤
摘摇 要院摇 为揭示同源四倍体花序的遗传变异机制袁对同源四倍体刺槐和二倍体刺槐的花序生长进行对比研究遥
结果显示院 与二倍体刺槐相比袁同源四倍体刺槐的花序长度没有明显变化袁但着生的小花数量明显提高曰 同源四倍
体刺槐花序不同位置小花的发育呈现不同步性曰分别从同源四倍体刺槐与二倍体刺槐中克隆出花分生组织决定基
因 蕴云再和 栽云蕴员 的同源基因的部分片段袁其同源性分别达到 怨愿郾 源源豫和 怨愿郾 园园豫 袁而去甲基化剂 缘鄄葬糟葬扎悦能够明显抑
制变异花序的形成和促进花序提前开花遥
关键词院摇 刺槐曰 同源四倍体曰 花序变异曰 甲基化曰 花分生组织决定基因
中图分类号院 杂苑员愿郾 源圆曰 杂苑员愿郾 源远摇 摇 摇 文献标识码院粤摇 摇 摇 文章编号院员园园员 原 苑源愿愿渊圆园员圆冤园圆 原 园园远猿 原 园远
收稿日期院 圆园员员 原 园远 原 园怨曰 修回日期院 圆园员员 原 园愿 原 圆缘遥
基金项目院国家自然科学基金项目渊猿员员苑园远圆怨曰 猿园远源园园猿远冤曰 林业公益行业专项渊圆园员员园源园员猿冤曰北京市农委项目渊圆园园愿园员园源冤曰北京林业大学
研究生基金项目渊园缘躁躁园猿愿冤遥
鄢李云为通讯作者遥
孕澡藻灶燥贼赠责蚤糟 韵遭泽藻则增葬贼蚤燥灶 葬灶凿 粤灶葬造赠泽蚤泽 燥枣 陨灶枣造燥则藻泽糟藻灶糟藻
灾葬则蚤葬贼蚤燥灶 燥枣 粤怎贼燥贼藻贼则葬责造燥蚤凿 砸燥遭蚤灶蚤葬 责泽藻怎凿燥葬糟葬糟蚤葬
蕴怎 悦澡葬燥员 摇 悦怎蚤 月蚤灶遭蚤灶员袁 圆 摇 匀怎葬灶早 蕴怎躁怎灶员 摇 杂怎灶 孕藻灶早员 摇 在澡葬灶早 郧怎燥躁怎灶员袁猿 摇 蕴蚤 再怎灶员
渊员郾 晕葬贼蚤燥灶葬造 耘灶早蚤灶藻藻则蚤灶早 蕴葬遭燥则葬贼燥则赠 枣燥则 栽则藻藻 月则藻藻凿蚤灶早摇 悦燥造造藻早藻 燥枣 月蚤燥造燥早蚤糟葬造 杂糟蚤藻灶糟藻泽 葬灶凿 月蚤燥贼藻糟澡灶燥造燥早赠袁 月藻蚤躁蚤灶早 云燥则藻泽贼则赠 哉灶蚤增藻则泽蚤贼赠摇 月藻蚤躁蚤灶早 员园园园愿猿曰
圆郾 阅藻责葬则贼皂藻灶贼 燥枣 月蚤燥造燥早赠 葬灶凿 悦澡藻皂蚤泽贼则赠袁 月葬燥凿蚤灶早 哉灶蚤增藻则泽蚤贼赠摇 月葬燥凿蚤灶早 园苑员园园园曰
猿郾 悦燥造造藻早藻 燥枣 匀燥则贼蚤糟怎造贼怎则藻 杂糟蚤藻灶糟藻 葬灶凿 栽藻糟澡灶燥造燥早赠袁 匀藻遭藻蚤 晕燥则皂葬造 哉灶蚤增藻则泽蚤贼赠 燥枣 杂糟蚤藻灶糟藻 驭 栽藻糟澡灶燥造燥早赠摇 匝蚤灶澡怎葬灶早凿葬燥 园远远园园源冤
粤遭泽贼则葬糟贼院摇 粤 糟燥皂责葬则葬贼蚤增藻 泽贼怎凿赠 遭藻贼憎藻藻灶 葬怎贼燥贼藻贼则葬责造燥蚤凿 葬灶凿 凿蚤责造燥蚤凿 砸燥遭蚤灶蚤葬 责泽藻怎凿燥葬糟葬糟蚤葬 憎葬泽 糟葬则则蚤藻凿 燥怎贼 贼燥 蚤灶增藻泽贼蚤早葬贼藻
贼澡藻 皂藻糟澡葬灶蚤泽皂 燥枣 早藻灶藻贼蚤糟 增葬则蚤葬贼蚤燥灶泽 燥枣 蚤灶枣造燥则藻泽糟藻灶糟藻 蚤灶 葬怎贼燥贼藻贼则葬责造燥蚤凿援 栽澡藻 则藻泽怎造贼 泽澡燥憎藻凿 贼澡藻则藻 憎藻则藻 灶燥 泽蚤早灶蚤枣蚤糟葬灶贼造赠
凿蚤枣枣藻则藻灶糟藻泽 蚤灶 贼澡藻 造藻灶早贼澡 燥枣 蚤灶枣造燥则藻泽糟藻灶糟藻 遭藻贼憎藻藻灶 葬怎贼燥贼藻贼则葬责造燥蚤凿 葬灶凿 凿蚤责造燥蚤凿 砸援 责泽藻怎凿燥葬糟葬糟蚤葬袁 遭怎贼 贼澡藻 灶怎皂遭藻则 燥枣 枣造燥则藻贼泽 憎葬泽
泽蚤早灶蚤枣蚤糟葬灶贼造赠 皂燥则藻 蚤灶 葬怎贼燥贼藻贼则葬责造燥蚤凿 贼澡葬灶 贼澡藻 凿蚤责造燥蚤凿援 栽澡藻 枣造燥则藻贼泽 燥枣 贼澡藻 葬怎贼燥贼藻贼则葬责造燥蚤凿 砸援 责泽藻怎凿燥葬糟葬糟蚤葬 蚤灶 凿蚤枣枣藻则藻灶贼 责燥泽蚤贼蚤燥灶泽
泽澡燥憎藻凿 贼澡藻 则藻皂葬则噪葬遭造藻 葬泽赠灶糟澡则燥灶赠援 阅晕粤 泽藻择怎藻灶糟藻泽 燥枣 澡燥皂燥造燥早燥怎泽 早藻灶藻泽 燥枣 蕴云再 葬灶凿 栽云蕴员 憎藻则藻 糟造燥灶藻凿 枣则燥皂 葬怎贼燥贼藻贼则葬责造燥蚤凿
葬灶凿 凿蚤责造燥蚤凿袁 葬灶凿 贼澡藻蚤则 澡燥皂燥造燥早赠 则藻葬糟澡藻凿 贼燥 怨愿郾 源源豫 葬灶凿 怨愿郾 园园豫 袁 则藻泽责藻糟贼蚤增藻造赠援 栽澡藻 贼则藻葬贼皂藻灶贼 憎蚤贼澡 贼澡藻 葬糟葬扎悦 糟燥怎造凿
燥遭泽藻则增葬遭造赠 则藻凿怎糟藻 贼澡藻 蚤灶枣造燥则藻泽糟藻灶糟藻 增葬则蚤葬贼蚤燥灶 葬灶凿 责则燥皂燥贼藻 蚤灶枣造燥则藻泽糟藻灶糟藻 遭造燥燥皂 责则藻皂葬贼怎则藻造赠援
运藻赠 憎燥则凿泽院 摇 砸燥遭蚤灶蚤葬 责泽藻怎凿燥葬糟葬糟蚤葬曰 葬怎贼燥贼藻贼则葬责造燥蚤凿曰 增葬则蚤葬贼蚤燥灶 燥枣 蚤灶枣造燥则藻泽糟藻灶糟藻曰 皂藻贼澡赠造葬贼蚤燥灶曰 枣造燥则葬造 皂藻则蚤泽贼藻皂
蚤凿藻灶贼蚤贼赠 早藻灶藻泽
摇 摇 多倍体是生物界中普遍存在的一种现象袁而且
一直被认为是生物进化的主要推动力之一遥 在原始
脊椎动物 渊 酝糟蕴赠泽葬早澡贼 藻贼 葬造援袁 圆园园圆 冤尧 两栖动物
渊月燥早葬则贼袁 员怨苑怨冤和酵母渊运藻造造蚤泽 藻贼 葬造援袁 圆园园源冤的进化过
程中都曾出现了基因组加倍的现象袁而且它的重要
性已经得到了广泛的认可遥 在植物界多倍体更为普
遍袁在多达 苑园豫的现存被子植物的进化史中经历过
至少一次的多倍体化渊酝葬泽贼藻则泽燥灶袁 员怨怨源冤遥 但是由于
多倍体材料在自然界中难于寻找袁对多倍体的研究
曾经受到过限制遥 这一局面在 月造葬噪藻泽造藻藻 等渊员怨猿苑冤
成功利用秋水仙素诱导体细胞染色体加倍后得到了
改善袁大量人工诱导的多倍体材料被用于试验研究袁
多倍体研究又一次成为植物学研究的热点之一遥
与二倍体相比袁多倍体体现出很多优势渊悦澡藻灶
藻贼 葬造援袁 圆园园远冤袁如更高的杂合性和变异性尧等位基因
的亚功能化等遥 根据染色体组来源相同与否袁多倍
体可以分成 圆 类袁即同源多倍体和异源多倍体遥 一
直以来袁由于异源多倍体中更容易得到变异材料袁所
以对其研究比较多渊粤造遭藻则贼蚤灶 藻贼 葬造援袁 圆园园远曰 蕴怎噪藻灶泽 藻贼
葬造援袁 圆园园远冤遥 但是袁异源多倍体本身存在着对研究不
利的因素袁就是很难将倍性效应从其他的变异效应
中区分出来袁比如杂合效应遥 粤怎早藻则 等渊圆园园缘冤在对
林 业 科 学 源愿 卷摇
玉米渊在藻葬 皂葬赠泽冤的研究中发现基因组的杂合效应对
基因表达改变的影响大于倍性效应的影响遥 而在同
源多倍体中就不存在杂合性袁所以它是研究倍性效
应和基因功能的良好材料遥
同源四倍体刺槐渊砸燥遭蚤灶蚤葬 责泽藻怎凿燥葬糟葬糟蚤葬冤 是通过
人工诱导二倍体刺槐体细胞染色体渊圆曾冤加倍而育
成的木本植物同源四倍体渊源曾冤 渊 蕴蚤 藻贼 葬造援袁 圆园园怨冤袁
员怨怨苑 年由北京林业大学从韩国山林厅林木育种研
究所引入到我国的刺槐优良无性系遥 过去几年对同
源四倍体刺槐的研究主要集中在它的宏观经济特
性袁比如繁育技术渊王树芝等袁 员怨怨怨曰 李云等袁 圆园园源冤
和营养价值评价渊李云等袁 圆园园远冤等袁而对其形态学
方面的变异研究很少袁特别是花器变异方面遥 在前
期的研究中袁发现在同源四倍体刺槐的花序发育过
程中出现了明显的不同于二倍体刺槐的变异袁包括
花器官的巨大化尧花序结构复化以及开花时间的改
变等渊姜金仲等袁 圆园园愿冤遥 随着分子生物学及其相关
技术的快速发展袁对同源多倍体花器变异方面的研
究已经开展袁但也主要是集中在草本植物袁如水稻
渊韵则赠扎葬 泽葬贼蚤增葬冤 渊黄群策袁 员怨怨怨曰 圆园园圆冤尧欧洲油菜
渊月则葬泽泽蚤糟葬 灶葬责怎泽冤渊杂糟澡则葬灶扎袁 圆园园源冤尧玉米 渊郧怎燥 藻贼 葬造援袁
员怨怨远冤等主要农作物上袁而对木本植物同源多倍体
相关方面的研究较少袁更没有对花序复化现象的报
道以及有关这种现象的解释遥 所以袁以同源四倍体
刺槐为材料的研究结果可能会为以后对此类现象的
解释提供理论借鉴遥 对同源四倍体刺槐花序变异机
制的研究也有其重要的植物进化论意义袁很可能揭
示植物由单花序进化为复花序的重要原因遥
在本研究中袁主要针对同源四倍体刺槐花序变
异进行研究袁总结其变异类型和规律袁并从发育生物
学和分子生物学等角度分析其产生的原因遥
员摇 试验材料
试验材料采于北京市延庆县北京林业大学同源
四倍体刺槐与二倍体刺槐无性系试验林遥 试验林于
圆园园圆 年种植袁圆园园缘 年开始逐渐开花遥 试验林基地
渊源园毅猿缘忆晕袁 员员远毅园源忆耘冤海拔 源愿怨 皂袁地形平坦袁土壤为
黄壤曰 属暖温带湿润气候带袁年平均气温 愿 益袁年平
均降水量 缘远愿郾 怨 皂皂袁冬春两季多干旱遥
圆摇 试验方法
圆郾 员摇 表型观察
在 圆园园愿 年和 圆园园怨 年袁连续对试验林中的 员园园
株同源四倍体刺槐和 员园 株二倍体刺槐上的全部花
序进行花序类型尧物候期观察袁同时分别从中随机挑
选各 猿园园 个花序袁对其长度和小花数量等表型特征
进行观测遥
圆郾 圆摇 缘鄄葬扎葬悦处理冬芽
根据李梅兰渊圆园园员冤和 晕早 等渊员怨怨怨冤的方法袁使
用 缘园袁员园园袁圆缘园 滋皂燥造窑蕴 原员 猿 种浓度的 缘 原氮杂胞苷
渊缘鄄葬扎葬糟赠贼蚤凿蚤灶藻袁缘鄄葬扎葬悦冤溶液袁蒸馏水作为对照袁采用
棉浸法袁处理时间分为 猿 天和 苑 天袁共 愿 组试验遥 每
组试验挑选 员园 个处于一级花序原基发育期的饱满
冬芽进行处理袁在花芽萌发后观察 缘鄄葬扎葬悦 对四倍体
刺槐花序变异情况的影响遥
圆郾 猿摇 开花决定基因克隆
通过 对 大 豆 渊 郧造赠糟蚤灶藻 皂葬曾 冤尧 豌 豆 渊 孕蚤泽怎皂
泽葬贼蚤增怎皂冤 和 百 脉 根 渊 蕴燥贼怎泽 糟燥则灶蚤糟怎造葬贼怎泽 冤 等 豆 科
渊蕴藻早怎皂蚤灶燥泽葬藻 冤 植物的 蕴耘粤云再 渊 蕴云再 冤袁 栽耘砸酝陨晕粤蕴
云蕴韵宰耘砸员渊栽云蕴员冤基因 猿爷端的保守序列进行分析比
对设计引物袁最终筛选各 员 对特异引物渊砸责蕴云再枣院
郧粤粤郧栽郧郧悦郧悦郧栽郧郧郧粤粤粤粤粤郧粤粤曰 砸责蕴云再则院 悦郧郧粤
郧悦栽栽郧郧栽栽郧郧粤粤悦郧栽粤悦悦粤曰 砸责栽云蕴员枣院 郧郧郧郧栽粤悦悦
郧栽栽悦栽栽粤悦粤粤栽悦栽悦栽栽栽粤郧悦郧曰 砸责栽云蕴员则院 郧悦栽悦栽粤
郧粤悦粤栽栽粤栽粤栽栽郧悦粤郧悦粤粤悦粤粤郧悦冤袁进行花分生组
织决定基因的 阅晕粤片段克隆遥
猿摇 结果与分析
猿郾 员摇 花序变异表型观察
图 员摇 同源四倍体刺槐 猿 种早花序类型示意
云蚤早援 员摇 栽澡藻 泽糟澡藻皂葬贼蚤糟 凿蚤葬早则葬皂 燥枣 贼澡则藻藻 贼赠责藻泽 燥枣 藻葬则造蚤藻则
蚤灶枣造燥则藻泽糟藻灶糟藻 蚤灶 葬怎贼燥贼藻贼则葬责造燥蚤凿 砸燥遭蚤灶蚤葬 责泽藻怎凿燥葬糟葬糟蚤葬
猿郾 员郾 员摇 花序长度及小花数的变异摇 在对花序生长
情况的观察中发现袁同源四倍体刺槐与二倍体刺槐
在花序长度和单花序上小花的着生数量存在明显差
异袁因此袁对同源四倍体刺槐的 猿 种早花序类型渊图
员冤和二倍体刺槐的总状花序进行了比较渊表 员冤遥 同
源四倍体刺槐的总状花序的长度最短袁为 远郾 怨员源
糟皂袁而变形总状花序的长度最长袁为 愿郾 员猿圆 糟皂袁二
者间的差异达到了极显著水平袁而它们与复总状
花序和二倍体总状花序的长度差异不显著遥 但在
源远
摇 第 圆 期 路摇 超等院 同源四倍体刺槐花序变异表型观察与分析
花序的小花着生数量方面的结果与花序长度的结
果相反袁同源四倍体刺槐的总状花序和变形总状
花序间的差异不显著袁但它们与复总状花序尧二倍
体总状花序之间的差异都达到了极显著水平遥 这
表明花序长度与小花着生数量二者之间没有明显
的相关性袁并且通过相关性比较得到了证实渊砸 越
园郾 圆园愿袁孕 越 园郾 猿怨远冤遥
表 员摇 圆园园愿 年同源四倍体刺槐与二倍体刺槐花序长度和花序着生小花数比较淤
栽葬遭援 员摇 悦燥皂责葬则蚤泽燥灶 燥枣 贼澡藻 灶怎皂遭藻则 燥枣 枣造燥则葬造 葬灶凿 蚤灶枣造燥则藻泽糟藻灶糟藻 造藻灶早贼澡 遭藻贼憎藻藻灶 凿蚤责造燥蚤凿 葬灶凿
葬怎贼燥贼藻贼则葬责造燥蚤凿 砸燥遭蚤灶蚤葬 责泽藻怎凿燥葬糟葬糟蚤葬 蚤灶 圆园园愿
花序类型陨灶枣造燥则藻泽糟藻灶糟藻 贼赠责藻 花序长度陨灶枣造燥则藻泽糟藻灶糟藻 造藻灶早贼澡 辕 糟皂 小花数云造燥则藻贼 灶怎皂遭藻则
总状花序 砸葬糟藻皂藻 远郾 怨员源 依 园援 源圆怨粤 圆远郾 员渊圆员 耀 猿愿冤月
同源四倍体刺槐 粤怎贼燥贼藻贼则葬责造燥蚤凿 变形总状花序 酝怎贼葬贼藻凿 则葬糟藻皂藻 愿郾 员猿圆 依 园援 缘园园月 猿圆郾 缘渊圆员 耀 源苑冤月
复总状花序 悦燥皂责燥怎灶凿 则葬糟藻皂藻 苑郾 远远远 依 园援 缘源源粤月 远园郾 愿渊圆源 耀 员圆远冤悦
二倍体刺槐 阅蚤责造燥蚤凿 总状花序 砸葬糟藻皂藻 苑郾 远缘缘 依 园援 猿源远粤月 员怨郾 怨渊员园 耀 猿员冤粤
摇 摇 淤 粤袁 月袁 悦院 表示各组间的差异极显著遥 栽澡藻 皂藻葬灶 凿蚤枣枣藻则藻灶糟藻 蚤泽 泽蚤早灶蚤枣蚤糟葬灶贼 葬贼 贼澡藻 园郾 园员 造藻增藻造援
猿郾 员郾 圆摇 几种类型花序比例摇 圆园园愿 年和 圆园园怨 年袁分
别对 员园园 株同源四倍体刺槐的几种花序类型所占比
例的观测结果渊表 圆冤院 首先变化最大的是晚花序员冤
的数量袁在 圆园园怨 年的花序观测中袁却只在 远 株观测
树上发现了 苑 个晚花序袁比 圆园园愿 年的 员 源怨远 个晚花
序少产生了 员 源愿怨 个袁这也导致了 圆 年间总花序数
量差异曰 其次袁虽然早花序数量 圆 年间变异不大袁但
是各类型花序所占比例却发生了很大的变化袁在
圆园园愿年袁总状花序在早花序中的比例为 苑缘郾 员猿豫 袁但
在 圆园园怨 年它的比例下降了 猿源郾 源猿豫 袁而变形总状花
序和复总状花序的比例袁在 圆园园怨 年明显上升袁特别
是复总状花序的比例上升了 圆员郾 园源豫 遥 通过相关性
分析袁晚花序和变异花序之间呈现极显著的负相关
性渊砸 越 原园郾 源远员袁孕 越 园郾 园园园冤遥
表 圆摇 同源四倍体刺槐各类型花序不同年份中比例淤
栽葬遭援 圆摇 栽澡藻 则葬贼藻 燥枣 藻葬糟澡 蚤灶枣造燥则藻泽糟藻灶糟藻 贼赠责藻 蚤灶 葬怎贼燥贼藻贼则葬责造燥蚤凿 砸燥遭蚤灶蚤葬 责泽藻怎凿燥葬糟葬糟蚤葬 蚤灶 凿蚤枣枣藻则藻灶贼 赠藻葬则泽
年份再藻葬则
早花序 耘葬则造赠 蚤灶枣造燥则藻泽糟藻灶糟藻
总状花序砸葬糟藻皂藻渊豫 冤 变形总状花序酝怎贼葬贼藻凿 则葬糟藻皂藻渊豫 冤 复总状花序悦燥皂责燥怎灶凿 则葬糟藻皂藻渊豫 冤 小计杂怎遭贼燥贼葬造渊豫 冤
晚花序蕴葬贼藻则蚤灶枣造燥则藻泽糟藻灶糟藻渊豫 冤
总和栽燥贼葬造渊豫 冤
圆园园愿 缘苑郾 员苑渊猿 缘苑远冤 员苑郾 员员渊员 园苑园冤 员郾 愿员渊员员源冤 苑远郾 园怨渊源 苑远园冤 圆猿郾 怨员渊员 源怨远冤 员园园渊远 圆缘远冤
圆园园怨 源园郾 远缘渊圆 园圆源冤 猿缘郾 愿员渊员 苑愿猿冤 圆猿郾 源园渊员 员远缘冤 怨怨郾 愿远渊源 怨苑圆冤 园郾 员源渊苑冤 员园园渊源 怨苑怨冤
摇 摇 淤括号内为统计的该类型花序个数遥 陨贼 蚤泽 贼澡藻 泽贼葬贼蚤泽贼蚤糟 燥枣 贼澡蚤泽 蚤灶枣造燥则藻泽糟藻灶糟藻 贼赠责藻 蚤灶 遭则葬糟噪藻贼泽援 下同遥 栽澡藻 泽葬皂藻 遭藻造燥憎援
员冤 早花序与晚花序院 圆园园愿 年 缘 月苑 日左右袁即在正常花序萌发生长 圆园 天后袁在新枝的叶腋处发现了新萌发的花序遥 所以笔者将同源四倍
体刺槐中正常发育的花序定义为早花序袁将 缘 月 苑 日后新萌发的花序定义为晚花序袁以便于将这 圆 类花序区分开遥
摇 摇 同时袁对 圆苑园 个冬芽的发育方向进行了连续观
测袁如表 猿 所示袁圆园园怨 年的新枝存活率最高的是多
序枝渊苑远郾 怨圆豫 冤袁最低的为晚序枝渊由上一年的晚花
序发育而来的新枝冤渊缘苑郾 愿怨豫 冤袁而通过方差分析发
现不同新枝类型间的存活率差异不显著 渊 云 越
园郾 员缘苑怨袁孕 越 园郾 怨缘愿冤袁这说明冬芽的不同发育方向对
新枝的存活率没有影响遥 对 圆园园愿 年不同类型新枝
上的冬芽类型进行统计袁总状花序生成率最高的是
变异枝渊怨郾 园怨豫 冤袁而变异花序生成率最高的是晚序
枝渊圆源郾 缘远豫 冤袁而无花序生成的比率最高的为总状
枝渊远猿郾 愿猿豫 冤曰 在对各项比率进行方差分析渊表 猿冤
后袁发现总状花序生成率渊云 越 园郾 源愿愿袁孕 越 园郾 苑源源冤和
无花序生成率渊云 越 园郾 怨园源袁孕 越 园郾 源苑猿冤袁各类型新枝
间的差异不显著袁但在变异花序生成率上袁各类型新
枝间的差异达到了显著水平 渊 云 越 猿郾 园苑员袁 孕 越
园郾 园猿园冤袁通过多重比较后发现晚序枝上的冬芽在
圆园园怨 年发育出变异花序的比例最高遥 根据方差分
析比较袁第 员 年形成的晚序枝很可能有促进其上的
冬芽向变异花序发展的作用遥 所以袁对同源四倍体
刺槐冬芽发育方向的研究还有待深入遥
猿郾 员郾 猿摇 花序发育的不同步性摇 在研究中发现袁同源
四倍体刺槐的花期为 圆缘 天左右袁比二倍体刺槐的花
期长 员 倍左右遥 着生于同源四倍体刺槐 圆 种变异花
序类型二级花序结构上的小花的发育明显晚于一级
花序结构上小花的发育遥 在进一步的观察中袁还发
现了这种发育不同步性的极端情况要要要晚花序袁即
在正常花序渊早花序冤萌发生长 圆园 天后袁在新枝的
叶腋处又萌发出的新花序袁其上着生小花的发育基
本与早花序二级花序结构上的小花同步遥 但发现小
花的开花天数并不受所在位置的影响袁都为 员猿 天左
缘远
林 业 科 学 源愿 卷摇
右遥 因此袁这种不同位置上小花发育的不同步性袁是 导致同源四倍体刺槐花期延长的原因遥
表 猿摇 圆园园怨 年同源四倍体刺槐相同类型新枝上各类型花序比例淤
栽葬遭援 猿摇 栽澡藻 则葬贼藻 燥枣 藻葬糟澡 蚤灶枣造燥则藻泽糟藻灶糟藻 贼赠责藻 蚤灶 泽澡燥燥贼泽 枣则燥皂 贼澡藻 泽葬皂藻 燥则蚤早蚤灶 蚤灶 葬怎贼燥贼藻贼则葬责造燥蚤凿 砸燥遭蚤灶蚤葬 责泽藻怎凿燥葬糟葬糟蚤葬 蚤灶 圆园园怨
圆园园愿 圆园园怨
新枝类型杂澡燥燥贼 燥则蚤早蚤灶 总和栽燥贼葬造 总状花序砸葬糟藻皂藻渊豫 冤
变异花序灾葬则蚤葬贼蚤燥灶蚤灶枣造燥则藻泽糟藻灶糟藻渊豫 冤
晚花序蕴葬贼藻则蚤灶枣造燥则藻泽糟藻灶糟藻渊豫 冤
无花序晕燥蚤灶枣造燥则藻泽糟藻灶糟藻渊豫 冤
死亡阅藻葬贼澡渊豫 冤
总状枝 杂澡燥燥贼 枣则燥皂 则葬糟藻皂藻 源苑 源郾 圆远 渊圆冤 远郾 猿愿 渊猿冤 粤 园 远猿郾 愿猿 渊猿园冤 圆缘郾 缘猿 渊员圆冤
变异枝 杂澡燥燥贼 枣则燥皂 增葬则蚤葬贼蚤燥灶 蚤灶枣造燥则藻泽糟藻灶糟藻 员员 怨郾 园怨 渊员冤 怨郾 园怨 渊员冤 粤 园 源缘郾 源缘 渊缘冤 猿远郾 猿远 渊源冤
晚序枝 杂澡燥燥贼 枣则燥皂 造葬贼藻则 蚤灶枣造燥则藻泽糟藻灶糟藻 缘苑 猿郾 缘员 渊圆冤 圆源郾 缘远 渊员源冤 月 园 圆怨郾 愿圆 渊员苑冤 源圆郾 员员 渊圆源冤
多序枝 杂澡燥燥贼 枣则燥皂 皂怎造贼蚤鄄蚤灶枣造燥则藻泽糟藻灶糟藻 员猿 苑郾 远怨 渊员冤 员缘郾 猿愿 渊圆冤 粤月 园 缘猿郾 愿缘 渊苑冤 圆猿郾 园愿 渊猿冤
无序枝 杂澡燥燥贼 枣则燥皂 灶燥 蚤灶枣造燥则藻泽糟藻灶糟藻 员源圆 远郾 猿源 渊怨冤 员员郾 怨苑 渊员苑冤粤 园 源苑郾 愿怨 渊远愿冤 猿猿郾 愿园 渊源愿冤
摇 摇 淤在研究中将变形总状花序和复总状花序合并统计袁统称为变异花序遥 酝怎贼葬贼藻凿 则葬糟藻皂藻 葬灶凿 糟燥皂责燥怎灶凿 则葬糟藻皂藻 葬则藻 遭则葬糟噪藻贼藻凿 贼燥早藻贼澡藻则 葬泽 燥灶藻蚤灶枣造燥则藻泽糟藻灶糟藻 贼赠责藻 蚤灶 贼澡蚤泽 则藻泽藻葬则糟澡援
猿郾 圆摇 同源四倍体刺槐花序变异原因的初步分析
猿郾 圆郾 员摇 花分生组织决定基因 阅晕粤序列分析摇 在前
面的研究中袁一系列的现象表明了花分生组织决定
基因很可能在同源四倍体刺槐花序变异的过程中起
着十分重要的作用遥 蕴云再 和 栽云蕴员 作为花分生组织
的促进基因和抑制基因已经在拟南芥渊粤则葬遭蚤凿燥责泽蚤泽
贼澡葬造蚤葬灶葬冤等模式植物中被广泛研究袁其功能也被普
遍认可袁所以本试验选择这 圆 个基因作为初步研究
同源四倍体刺槐花序变异分子机制的基因遥 根据豆
科已有的 蕴云再 和 栽云蕴员 的同源基因为参考设计引
物袁通过试验最终筛选出各 员 对引物院
砸责蕴云再枣院 郧粤粤郧栽郧郧悦郧悦郧栽郧郧郧粤粤粤粤粤郧粤粤曰
砸责蕴云再则院 悦郧郧粤郧悦栽栽郧郧栽栽郧郧粤粤悦郧栽粤悦悦粤曰
砸责栽云蕴员枣院 郧郧郧郧栽粤悦悦郧栽栽悦栽栽粤悦粤粤栽悦栽悦栽栽栽粤郧悦郧曰
砸责栽云蕴员则院 郧悦栽悦栽粤郧粤悦粤栽栽粤栽粤栽栽郧悦粤郧悦粤粤悦粤粤郧悦遥
利用这 圆 对引物袁在同源四倍体刺槐和二倍体
刺槐的基因组 阅晕粤 中对 蕴云再 和 栽云蕴员 同源基因进
行了克隆渊图 圆冤遥 从结果上看袁同源四倍体刺槐和
二倍体刺槐的 蕴云再和 栽云蕴员 同源基因的分子量基本
相同袁栽云蕴员 同源基因的分子量为 员 园园园 遭责 左右袁
蕴云再同源基因的分子量为 员 源园园 遭责 左右袁并且在随
后的基因测序分析中发现 圆 个同源基因 栽云蕴员 和
蕴云再的片段在同源四倍体和二倍体刺槐中的同源性
分别为 怨愿郾 源源豫和 怨愿郾 园园豫 遥 利用 月蕴粤杂栽 工具对它
们的共同序列进行比较袁所得到的 砸责蕴云再 序列中的
部分片段与大豆的 蕴云再员 和 蕴云再圆 基因的同源性都
为 怨员豫 袁与菜豆渊孕澡葬泽藻燥造怎泽 增怎造早葬则蚤泽冤不同品种的 蕴云再
基因的同源性为 愿愿豫 曰 砸责栽云蕴员 序列中的部分片段
与百脉根的 悦耘晕 辕 栽云蕴员 同源基因的同源性为 苑猿豫 袁
与菜豆不同品种的 栽云蕴员 基因的同源性为 怨园豫 遥
图 圆摇 同源四倍体刺槐和二倍体刺槐中 蕴云再和 栽云蕴员 的同源基因
云蚤早援 圆摇 栽澡藻 澡燥皂燥造燥早燥怎泽 早藻灶藻 燥枣 蕴云再 葬灶凿 栽云蕴员 蚤灶 葬怎贼燥贼藻贼则葬责造燥蚤凿 葬灶凿 凿蚤责造燥蚤凿 砸燥遭蚤灶蚤葬 责泽藻怎凿燥葬糟葬糟蚤葬
员郾 二倍体刺槐样本曰 圆郾 同源四倍体刺槐样本曰 酝援 阅晕粤分子质量标准遥
员郾 栽澡藻 泽葬皂责造藻 燥枣 凿蚤责造燥蚤凿 砸燥遭蚤灶蚤葬 责泽藻怎凿燥葬糟葬糟蚤葬曰 圆郾 栽澡藻 泽葬皂责造藻 燥枣 葬怎贼燥贼藻贼则葬责造燥蚤凿 砸燥遭蚤灶蚤葬 责泽藻怎凿燥葬糟葬糟蚤葬曰 酝援 阅晕粤 皂葬则噪藻则援
猿郾 圆郾 圆摇 缘鄄葬扎葬悦渊缘 原氮杂胞苷冤处理同源四倍体刺槐
冬芽的效应摇 通过开花基因克隆没有发现同源四倍
体与二倍体刺槐间存在差别袁因此袁进行缘鄄葬扎葬悦处理
试验袁进一步检测 阅晕粤甲基化是否对花序变异产生
影响遥 如表 缘 所示袁对照组的花序变异率较稳定袁都
为 圆缘郾 园园豫 袁而 猿 个浓度处理组对花序的变异都表
现出了明显的抑制作用袁特别是 员园园 滋皂燥造窑蕴 原员浓度
组对花序变异的抑制作用最明显袁在 猿 天和 苑 天 圆
个处理时间水平上花序的变异率都为 园遥 而且袁经
缘鄄葬扎葬悦处理的花序发育明显早于对照遥
源摇 结论与讨论
在本研究观测中发现袁在花序长度上同源四倍
体刺槐与二倍体刺槐间不存在明显差异袁但在小花
远远
摇 第 圆 期 路摇 超等院 同源四倍体刺槐花序变异表型观察与分析
摇 表 源摇 缘鄄葬扎葬悦处理后花序变异率
栽葬遭援 源摇 陨灶枣造燥则藻泽糟藻灶糟藻 增葬则蚤葬贼蚤燥灶 则葬贼藻 葬枣贼藻则 贼则藻葬贼藻凿 憎蚤贼澡 缘鄄葬扎葬悦
缘鄄葬扎葬悦浓度摇 缘鄄葬扎葬悦 糟燥灶糟藻灶贼则葬贼蚤燥灶 辕 渊滋皂燥造窑蕴 原员 冤
猿 凿 苑 凿
园 缘园 员园园 圆缘园 园 缘园 员园园 圆缘园
冬芽数 匀蚤遭藻则灶葬糟怎造怎皂 灶怎皂遭藻则 缘园 缘园 缘园 缘园 缘园 缘园 缘园 缘园
花芽数 云造燥憎藻则 遭怎凿 灶怎皂遭藻则 愿 苑 员园 员猿 员远 怨 员远 员缘
变异花芽数 灾葬则蚤葬贼蚤燥灶 遭怎凿 灶怎皂遭藻则 圆 员 园 园 源 园 园 员
变异率 灾葬则蚤葬贼蚤燥灶 则葬贼藻渊豫 冤 圆缘郾 园园 员源郾 圆怨 园 园 圆缘郾 园园 园 园 远郾 远苑
摇 摇
数量上明显多于二倍体刺槐袁达到了显著水平遥 并
且发现袁同源四倍体刺槐的花序类型虽然比较稳定袁
但是各种类型在不同年份间的比例存在明显变化袁
并且晚花序和变异花序之间存在着极显著的负相关
性渊砸 越 原园郾 源远员袁孕 越园郾 园园园冤遥 而且在连续观测试验
中发现袁同一新枝上着生多个不同结构花序的现象遥
同一新枝上的花序应该是由同一细胞或一团细胞发
育而来袁它们的遗传背景应该十分相似或相同袁而且
它们发育时所处的位置十分接近袁所受到的内部影
响和外部影响区别也应该不大袁但是它们在结构上
却有很大的变异遥 关于这一现象产生的原因袁推测
可能与同源四倍体刺槐的细胞倍性存在一定关系袁
邢少辰等渊圆园园员冤在水稻的同源四倍体自交后代的
根尖细胞中发现了不同倍性的细胞与四倍体细胞嵌
合的现象袁而在作者所在实验室以前利用流式细胞
仪对同源四倍体刺槐自交产生的种子进行倍性鉴定
的试验渊姜金仲等袁 圆园园愿冤中也发现了类似的现象遥
这些都说明同源四倍体的有丝分裂是存在异常的袁
从而产生不同倍性的细胞袁这样即使处在同一环境
中袁由于它们倍性的不同也有可能导致植物同源四
倍体相关器官的变异遥 这可能是同源四倍体刺槐花
序变异多样化的原因之一袁对于这一方面的研究还
有待进一步的验证遥
同源四倍体刺槐花序不同位置小花出现了发育
的不同步性袁从而导致了其花期比二倍体刺槐延长
员 倍袁而这种开花时间的改变在自然界中存在的多
倍体植物中并没有发现渊月则藻贼葬早灶燥造造藻 藻贼 葬造援袁 员怨怨缘冤袁只
在后期的人工诱变多倍体植物中发现过渊杂糟澡则葬灶扎 藻贼
葬造援袁 圆园园园曰 悦燥皂葬蚤 藻贼 葬造援袁 圆园园园曰 匀怎泽遭葬灶凿 藻贼 葬造援袁 圆园园园冤遥
在一定程度上说明人工多倍体诱变过程中染色体加
倍效应与自然形成多倍体有不同之处袁人工诱变的
多倍体在花序变异方面表现更复杂和更多样遥
在对同源四倍体刺槐冬芽发育石蜡切片试验
中袁基本上确定了同源四倍体刺槐花序结构变异产
生的时期是在一级花序原基的发育后期渊有关数据
和内容将另文发表冤遥 正常总状花序在这一阶段的
一级花序轴上的花序分生组织应该转化为花分生组
织袁后者分化并最终形成小花曰 但在同源四倍体刺
槐的变异花序中袁这些花序分生组织保持了其独特
性袁并继续发育形成二级花序结构袁从而导致同源四
倍体刺槐花期的延长和变异结构花序的形成遥 这一
过程与水稻的多类型花序的形成十分相似渊 陨贼燥澡 藻贼
葬造援袁 圆园园缘冤袁并且袁陨噪藻凿葬鄄运葬憎葬噪葬贼泽怎 等渊圆园园怨冤发现这
一现象的最主要原因是花序分生组织转化阶段不同
所致遥 目前袁对植物分生组织分化方向的研究主要
集中在花分生组织决定基因上袁拟南芥中的 栽云蕴员
基因为维持花序分生组织发育的功能基因渊悦燥灶贼蚤 藻贼
葬造援袁 圆园园苑冤袁其过量表达有推迟开花并促进侧芽的发
生的效果渊杂澡葬灶灶燥灶 藻贼 葬造援袁 员怨怨员冤袁而与之相对的 蕴云再
基因为长效表达基因袁能够促进花序分生组织向花
分生组织转化袁使植物提前开花 渊宰藻蚤早藻造 藻贼 葬造援袁
员怨怨圆曰 酝葬灶凿藻造 藻贼 葬造援袁 员怨怨缘冤袁 圆 个基因间存在着相互
抑制的关系遥
但在同源四倍体刺槐的观察中发现袁其花序变
异并不能简单地归因于染色体加倍后的剂量效应袁
以 蕴云再和 栽云蕴员 基因为例袁圆 个基因被同时加倍时袁
它们之间的平衡关系应该保持不变袁即同源四倍体
刺槐的花序结构和开花时间与二倍体刺槐应该保持
一致曰 而且即使产生剂量效应袁由于 蕴云再 基因是长
效表达基因袁那么它的过量表达能够抑制 栽云蕴员 基
因的表达袁从而促使同源四倍体刺槐提前开花遥 所
以作者认为同源四倍体刺槐花序变异很可能是由于
花组织发育过程中的某些关键基因沉默或少量表
达袁以及与其相应基因的过量表达引起的遥 前人研
究表明袁在多倍体的形成过程中伴随着大量的基因
沉默现象袁而形成基因沉默的原因包括染色体重组尧
点突变渊杂燥灶早 藻贼 葬造援袁 员怨怨缘冤袁或者是 阅晕粤 甲基化等
渊宰燥造枣枣藻 藻贼 葬造援袁 员怨怨怨冤遥 特别是人工合成的多倍体植
物袁主要是通过秋水仙素处理或温度激变等化学和
物理方法诱导产生袁在其形成过程中染色体很容易
发生变异袁这也是人工合成多倍体变异明显多于天
然多倍体的原因之一遥 所以袁将研究重点放在 蕴云再
和 栽云蕴员 等花分生组织决定基因上袁首先设想是不
是由于点突变等原因使基因序列发生改变袁从而使
苑远
林 业 科 学 源愿 卷摇
其沉默袁进而影响其他基因的表达遥 根据对克隆出
的 蕴云再和 栽云蕴员 基因同源片段的分析表明袁在已克
隆出的有效基因片段中未发现同源四倍体刺槐与二
倍体刺槐间的差异遥 而后利用 阅晕粤 甲基化抑制剂
缘鄄葬扎葬悦处理处于一级花序原基时期的同源四倍体刺
槐的冬芽袁结果表明 缘鄄葬扎葬悦 有明显抑制花序变异率
和促进提前开花的效果遥 试验结果说明袁阅晕粤 甲基
化很可能是同源四倍体刺槐花序变异产生的原因之
一袁这也进一步表明在同源多倍体变异中袁基因沉默
也起着十分重要的作用遥
同源四倍体刺槐花序变异是个十分复杂的过
程袁不太可能是由于一种调控机制所引起的袁它应该
是多个机制共同作用的结果遥 同源四倍体刺槐花序
变异十分丰富袁很有可能还有没有发现的变异形式袁
而只有更多地了解同源四倍体刺槐的变异形式才能
更好地明确研究方向袁了解花序变异的机制遥 所以
对同源四倍体刺槐花序变异进行更加细致的表观观
察是十分必要和重要的遥
参 考 文 献
黄群策袁 孙敬三袁 白素兰援 员怨怨怨郾 同源四倍体水稻雌雄配子体多态
性的研究援 杂交水稻袁 员源渊员冤院 猿圆 原 猿猿郾
黄群策袁 向茂成袁 刘文海援 圆园园圆郾 同源四倍体水稻胚囊内反足细胞
团的多态性援 杂交水稻袁 员苑渊猿冤院 源苑 原 缘园郾
姜金仲袁 郝摇 晨袁 李摇 云袁 等援 圆园园愿郾 四倍体刺槐花器原基分化及其
成熟表型变异援 林业科学袁 源源渊远冤院 猿源 原 猿愿援
李梅兰援 圆园园员郾 阅晕粤甲基化与白菜的生长转变援 浙江大学博士学位
论文援
李摇 云袁 田砚亭袁 钱永强援 圆园园源郾 晕粤粤 和 陨月晕 对四倍体刺槐试管苗
生根影响及不定根发育过程解剖观察援 林业科学袁 源园
渊猿冤院 苑缘 原 苑怨援
李摇 云袁 张国君袁 路摇 超袁 等援 圆园园远郾 四倍体刺槐不同生长时期和部
位的 叶 片 的 饲 料 营 养 价 值 分 析援 林 业 科 学 研 究袁 员怨
渊缘冤院 缘愿园 原 缘愿源援
王树芝袁 田砚亭袁 罗晓芳援 员怨怨怨郾 刺槐宽叶和四倍体无性系的组织
培养援 植物生理学通讯袁 猿缘渊猿冤院 圆园源 原 圆园缘援
邢少辰袁 蔡玉红袁 周开达袁 等援 圆园园员郾 特异水稻同源多倍体的染色体
行为援 邯郸农业高等专科学校学报袁 员愿渊猿冤院 员 原 猿援
粤造遭藻则贼蚤灶 宰袁 月葬造造蚤葬怎 栽袁 月则葬遭葬灶贼 孕袁 藻贼 葬造援 圆园园远郾 晕怎皂藻则燥怎泽 葬灶凿 则葬责蚤凿
灶燥灶泽贼燥糟澡葬泽贼蚤糟 皂燥凿蚤枣蚤糟葬贼蚤燥灶泽 燥枣 早藻灶藻 责则燥凿怎糟贼泽 蚤灶 灶藻憎造赠 泽赠灶贼澡藻泽蚤扎藻凿
月则葬泽泽蚤糟葬 灶葬责怎泽 葬造造燥贼藻贼则葬责造燥蚤凿泽援 郧藻灶藻贼蚤糟泽袁 员苑猿渊圆冤院 员员园员 原 员员员猿援
粤怎早藻则 阅 蕴袁 郧则葬赠 粤 阅袁 砸藻葬皂 栽 杂袁 藻贼 葬造援 圆园园缘郾 晕燥灶葬凿凿蚤贼蚤增藻 早藻灶藻
藻曾责则藻泽泽蚤燥灶 蚤灶 凿蚤责造燥蚤凿 葬灶凿 贼则蚤责造燥蚤凿 澡赠遭则蚤凿泽 燥枣 皂葬蚤扎藻援 郧藻灶藻贼蚤糟泽袁 员远怨
渊员冤院 猿愿怨 原 猿怨苑援
月造葬噪藻泽造藻藻 粤 云袁 粤增藻则赠 粤 郧援 员怨猿苑郾 酝藻贼澡燥凿泽 燥枣 蚤灶凿怎糟蚤灶早 凿燥怎遭造蚤灶早 燥枣
糟澡则燥皂燥泽燥皂藻泽 蚤灶 责造葬灶贼泽 遭赠 贼则藻葬贼皂藻灶贼 憎蚤贼澡 糟燥造糟澡蚤糟蚤灶藻援 允 匀藻则藻凿袁
圆愿渊员圆冤院 猿怨猿 原 源员员援
月燥早葬则贼 允 孕援 员怨苑怨郾 耘增燥造怎贼蚤燥灶葬则赠 蚤皂责造蚤糟葬贼蚤燥灶泽 燥枣 责燥造赠责造燥蚤凿赠 蚤灶 葬皂责澡蚤遭蚤葬灶泽
葬灶凿 则藻责贼蚤造藻泽援 月葬泽蚤糟 蕴蚤枣藻 杂糟蚤袁 员猿渊员猿冤院 猿源员 原 猿苑愿援
月则藻贼葬早灶燥造造藻 云袁 蕴怎皂葬则藻贼 砸援 员怨怨缘郾 月蚤造葬贼藻则葬造 责燥造赠责造燥蚤凿蚤扎葬贼蚤燥灶 蚤灶 阅葬糟贼赠造蚤泽
早造燥皂藻则葬贼葬 蕴援 泽怎遭泽责援 造怎泽蚤贼葬灶蚤糟葬院 燥糟糟怎则则藻灶糟藻袁 皂燥则责澡燥造燥早蚤糟葬造 葬灶凿
早藻灶藻贼蚤糟 糟澡葬则葬糟贼藻则蚤泽贼蚤糟泽 燥枣 枣蚤则泽贼 责燥造赠责造燥蚤凿泽援 耘怎责澡赠贼蚤糟葬袁 愿源 渊 猿 冤院
员怨苑 原 圆园苑郾
悦澡藻灶 在 允袁 晕蚤 在澡燥灶早枣怎援 圆园园远郾 酝藻糟澡葬灶蚤泽皂泽 燥枣 早藻灶燥皂蚤糟 则藻葬则则葬灶早藻皂藻灶贼泽
葬灶凿 早藻灶藻 藻曾责则藻泽泽蚤燥灶 糟澡葬灶早藻泽 蚤灶 责造葬灶贼 责燥造赠责造燥蚤凿泽援 月蚤燥耘泽泽葬赠泽袁 圆愿
渊猿冤院 圆源园 原 圆缘圆援
悦燥皂葬蚤 蕴袁 栽赠葬早蚤 粤 孕袁 宰蚤灶贼藻则 运袁 藻贼 葬造援 圆园园园郾 孕澡藻灶燥贼赠责蚤糟 蚤灶泽贼葬遭蚤造蚤贼赠 葬灶凿
则葬责蚤凿 早藻灶藻 泽蚤造藻灶糟蚤灶早 蚤灶 灶藻憎造赠 枣燥则皂藻凿 粤则葬遭蚤凿燥责泽蚤泽 葬造造燥贼藻贼则葬责造燥蚤凿泽援 栽澡藻
孕造葬灶贼 悦藻造造袁 员圆渊怨冤院 员缘缘员 原 员缘远苑援
悦燥灶贼蚤 蕴袁 月则葬凿造藻赠 阅援 圆园园苑郾 栽耘砸酝陨晕粤蕴 云蕴韵宰耘砸员 蚤泽 葬 皂燥遭蚤造藻 泽蚤早灶葬造
糟燥灶贼则燥造造蚤灶早 粤则葬遭蚤凿燥责泽蚤泽 葬则糟澡蚤贼藻糟贼怎则藻援 栽澡藻 孕造葬灶贼 悦藻造造袁 员怨
渊猿冤院 苑远苑 原 苑苑愿援
郧怎燥 酝藻蚤袁 阅葬增蚤泽 阅袁 月蚤则糟澡造藻则 允 粤援 员怨怨远郾 阅燥泽葬早藻 藻枣枣藻糟贼泽 燥灶 早藻灶藻
藻曾责则藻泽泽蚤燥灶 蚤灶 葬 皂葬蚤扎藻 责造燥蚤凿赠 泽藻则蚤藻泽援 郧藻灶藻贼蚤糟泽袁 员源圆
渊源冤院 员猿源怨 原 员猿缘缘援
匀怎泽遭葬灶凿 月 悦袁 杂糟澡藻皂泽噪藻 阅 宰援 圆园园园郾 耘糟燥造燥早蚤糟葬造 皂藻糟澡葬灶蚤泽皂泽 燥枣
则藻责则燥凿怎糟贼蚤增藻 蚤泽燥造葬贼蚤燥灶 遭藻贼憎藻藻灶 凿蚤责造燥蚤凿 葬灶凿 贼藻贼则葬责造燥蚤凿 悦澡葬皂藻则蚤燥灶
葬灶早怎泽贼蚤枣燥造蚤怎皂援 允燥怎则灶葬造 燥枣 耘糟燥造燥早赠袁 愿愿渊源冤院 远愿怨 原 苑园员援
陨噪藻凿葬鄄运葬憎葬噪葬贼泽怎 运袁 再葬泽怎灶燥 晕袁 韵蚤噪葬憎葬 栽袁 藻贼 葬造援 圆园园怨郾 耘曾责则藻泽泽蚤燥灶 造藻增藻造
燥枣 粤月耘砸砸粤晕栽 孕粤晕陨悦蕴耘 韵砸郧粤晕陨在粤栽陨韵晕员 凿藻贼藻则皂蚤灶藻泽 则蚤糟藻
蚤灶枣造燥则藻泽糟藻灶糟藻 枣燥则皂 贼澡则燥怎早澡 糟燥灶贼则燥造 燥枣 糟藻造造 责则燥造蚤枣藻则葬贼蚤燥灶 蚤灶 贼澡藻
皂藻则蚤泽贼藻皂援 孕造葬灶贼 孕澡赠泽蚤燥造袁 员缘园渊圆冤院 苑猿远 原 苑源苑援
陨贼燥澡 允袁 晕燥灶燥皂怎则葬 运袁 陨噪藻凿葬 运袁 藻贼 葬造援 圆园园缘郾 砸蚤糟藻 责造葬灶贼 凿藻增藻造燥责皂藻灶贼院
枣则燥皂 扎赠早燥贼藻 贼燥 泽责蚤噪藻造藻贼援 孕造葬灶贼 悦藻造造 孕澡赠泽蚤燥造袁 源远渊员冤院 圆猿 原 源苑援
运藻造造蚤泽 酝袁 月蚤则则藻灶 月 宰袁 蕴葬灶凿藻则 耘 杂援 圆园园源郾 孕则燥燥枣 葬灶凿 藻增燥造怎贼蚤燥灶葬则赠
葬灶葬造赠泽蚤泽 燥枣 葬灶糟蚤藻灶贼 早藻灶燥皂藻 凿怎责造蚤糟葬贼蚤燥灶 蚤灶 贼澡藻 赠藻葬泽贼 杂葬糟糟澡葬则燥皂赠糟藻泽
糟藻则藻增蚤泽蚤葬藻援 晕葬贼怎则藻袁 源圆愿渊远怨愿猿冤院 远员苑 原 远圆源援
蕴蚤 再怎灶袁 在澡葬灶早 郧怎燥躁怎灶袁 允蚤葬灶早 允蚤灶扎澡燥灶早援 圆园园怨郾 栽藻贼则葬责造燥蚤凿 遭造葬糟噪 造燥糟怎泽贼袁 葬
责则燥皂蚤泽蚤灶早 贼则藻藻 则藻泽燥怎则糟藻 枣燥则 遭蚤燥皂葬泽泽 藻灶藻则早赠 葬灶凿 枣燥则葬早藻援 陨灶 灾蚤贼则燥 悦藻造造
阅藻增 月蚤燥造鄄孕造葬灶贼袁 源缘渊源冤院 缘园源 原 缘园缘援
蕴怎噪藻灶泽 蕴 晕袁 孕蚤则藻泽 允 悦袁 蕴藻燥灶 耘袁 藻贼 葬造援 圆园园远郾 孕葬贼贼藻则灶泽 燥枣 泽藻择怎藻灶糟藻 造燥泽泽
葬灶凿 糟赠贼燥泽蚤灶藻 皂藻贼澡赠造葬贼蚤燥灶 憎蚤贼澡蚤灶 葬 责燥责怎造葬贼蚤燥灶 燥枣 灶藻憎造赠 则藻泽赠灶贼澡藻泽蚤扎藻凿
月则葬泽泽蚤糟葬 灶葬责怎泽 葬造造燥责燥造赠责造燥蚤凿泽援 孕造葬灶贼 孕澡赠泽蚤燥造袁 员源园渊员冤院 猿猿远 原 猿源愿援
酝葬灶凿藻造 酝 粤袁 再葬灶燥枣泽噪赠 酝 云援 员怨怨缘郾 粤 早藻灶藻 贼则蚤早早藻则蚤灶早 枣造燥憎藻则 凿藻增藻造燥责皂藻灶贼
蚤灶 粤则葬遭蚤凿燥责泽蚤泽援 晕葬贼怎则藻袁 猿苑苑渊远缘源怨冤院 缘圆圆 原 缘圆源援
酝葬泽贼藻则泽燥灶 允援 员怨怨源郾 杂贼燥皂葬贼葬造 泽蚤扎藻 蚤灶 枣燥泽泽蚤造 责造葬灶贼泽院 耘增蚤凿藻灶糟藻 枣燥则 责燥造赠责造燥蚤凿赠
蚤灶 贼澡藻 皂葬躁燥则蚤贼赠 燥枣 葬灶早蚤燥泽责藻则皂泽援 杂糟蚤藻灶糟藻袁 圆远源渊缘员缘苑冤院 源圆员 原 源圆源援
酝糟蕴赠泽葬早澡贼 粤袁 匀燥噪葬皂责 运袁 宰燥造枣藻 运 匀援 圆园园圆郾 耘曾贼藻灶泽蚤增藻 早藻灶燥皂蚤糟
凿怎责造蚤糟葬贼蚤燥灶 凿怎则蚤灶早 藻葬则造赠 糟澡燥则凿葬贼藻 藻增燥造怎贼蚤燥灶援 晕葬贼 郧藻灶藻贼袁 猿员
渊圆冤院 圆园园 原 圆园源援
晕早 匀 匀袁 月蚤则凿 粤援 员怨怨怨郾 阅晕粤 皂藻贼澡赠造葬贼蚤燥灶 葬灶凿 糟澡则燥皂葬贼蚤灶 皂燥凿蚤枣蚤糟葬贼蚤燥灶援
悦怎则则 韵责蚤灶 郧藻灶藻贼 阅藻增袁 怨渊圆冤院 员缘愿 原 员远猿援
杂糟澡则葬灶扎 酝 耘袁 韵泽遭燥则灶 栽 悦援 圆园园园郾 晕燥增藻造 枣造燥憎藻则蚤灶早 贼蚤皂藻 增葬则蚤葬贼蚤燥灶 蚤灶 贼澡藻
则藻泽赠灶贼澡藻泽蚤扎藻凿 责燥造赠责造燥蚤凿 月则葬泽泽蚤糟葬 灶葬责怎泽援 栽澡藻 允燥怎则灶葬造 燥枣 匀藻则藻凿蚤贼赠袁 怨员
渊猿冤院 圆源圆 原 圆源远援
杂澡葬灶灶燥灶 杂袁 酝藻藻噪泽鄄宰葬早灶藻则 阅 砸援 员怨怨员郾 粤 皂怎贼葬贼蚤燥灶 蚤灶 贼澡藻 粤则葬遭蚤凿燥责泽蚤泽
栽云蕴员 早藻灶藻 葬枣枣藻糟贼泽 蚤灶枣造燥则藻泽糟藻灶糟藻 皂藻则蚤泽贼藻皂 凿藻增藻造燥责皂藻灶贼援 栽澡藻 孕造葬灶贼
悦藻造造袁 猿渊怨冤院 愿苑苑 原 愿怨圆郾
杂燥灶早 运藻皂蚤灶早袁 蕴怎 孕蚤灶早袁 栽葬灶早 运藻造蚤葬灶早袁 藻贼 葬造援 员怨怨缘郾 砸葬责蚤凿 早藻灶燥皂藻
糟澡葬灶早藻 蚤灶 泽赠灶贼澡藻贼蚤糟 责燥造赠责造燥蚤凿泽 燥枣 月则葬泽泽蚤糟葬 葬灶凿 蚤贼泽 蚤皂责造蚤糟葬贼蚤燥灶泽 枣燥则
责燥造赠责造燥蚤凿 藻增燥造怎贼蚤燥灶援 孕则燥糟 晕葬贼造 粤糟葬凿 杂糟蚤 哉杂粤袁 怨圆
渊员苑冤院 苑苑员怨 原 苑苑圆猿援
宰藻蚤早藻造 阅袁 粤造增葬则藻扎 允袁 杂皂赠贼澡 阅 砸袁 藻贼 葬造援 员怨怨圆郾 蕴耘粤云再 糟燥灶贼则燥造泽 枣造燥则葬造
皂藻则蚤泽贼藻皂 蚤凿藻灶贼蚤枣赠 蚤灶 粤则葬遭蚤凿燥责泽蚤泽援 悦藻造造袁 远怨渊缘冤院 愿源猿 原 愿缘怨援
宰燥造枣枣藻 粤 孕袁 酝葬贼扎噪藻 酝 粤援 员怨怨怨郾 耘责蚤早藻灶藻贼蚤糟泽院 则藻早怎造葬贼蚤燥灶 贼澡则燥怎早澡
则藻责则藻泽泽蚤燥灶援 杂糟蚤藻灶糟藻袁 圆愿远渊缘源猿怨冤院 源愿员 原 源愿远援
渊责任编辑摇 徐摇 红冤
愿远