全 文 ：第 !" 卷 第 ## 期
$ % # % 年 ## 月
林 业 科 学
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川滇石榴品种遗传多样性及亲缘关系的 ,@-k分析!
赵丽华#!$4李名扬#4王先磊#
"#1西南大学园艺园林学院 重庆市花卉工程技术研究中心4重庆 !%%:#8#
$1西昌学院农业科学学院4西昌 "#8%#5$
关键词’4 石榴# ,@-k# 遗传多样性# 亲缘关系# 四川# 云南
中图分类号! &:#71!"" &:#71!6444文献标识码!,444文章编号!#%%# >:!77#$%#%$## >%#"7 >%"
收稿日期’ $%#% >%8 >#5# 修回日期’ $%#% >%6 >$#&
基金项目’ 四川省教育厅科研基金"%7‘R%#!$ ! 西昌学院课题"B\&,%"#8$ &
!李名扬为通讯作者&
L.).’(-E(A.,/(’: &)@(-+$&)&)<]$))&)GA&%$&’.<8: 7KJ!3&,V.,/
H=G/-D=EG#!$4-D]DIJNGIJ#4LGIJ[DGI0MD#
"#I@$%)6)$&9$(+4"5%+5()/01 ./01*"/2)3("#4+)"+5()!!$5+#Q)*+7048)(*4+,4@#$06D406 ’%$Q)(<0640))(406 F)"#0$%$6,K)*)/("#
@)0+)(4@#$06D406 !%%:#8# $I!"#$$%$&36(4"5%+5(/%!"4)0")*! C4"#/06 @$%)6)4C4"#/06 "#8%#5$
78/’,&-’’4@/VZMTMVM_S0/DTDIJS/;MJVGIGTMVMW/EVRMWDI &DR=EGI GIU BEIIGI! YMGIG0NWMU T=MK*,S/0N;/VS=DW;/X
!$ S/;MJVGIGTMRE0TD2GVWZN,@-k;GVdMVW3*+&B&SR^$3#% W/XTYGVMYGWEWMU T/GIG0N‘MGIU T=MVMWE0TDIUDRGTMU T=GTT=M
JMIMTDRWD;D0GVDTNR/MXDRDMIT" !J$ VGIJMU XV/; %1:#$ : T/%16$8 ! YDT= GI G2MVGJM/X%17#! $# ,I GIG0NWDWYDT=
k/SOMI5$ W/XTYGVMVM2MG0MU T=GT5"$ ZGIUWG;S0DXDMU ZN8 SGDVW/XS/0N;/VS=DR,@-kSVD;MVW=GU $58 S/0N;/VS=DR0/RD!
T=MSMVRMITGJM/XS/0N;/VS=DRZGIUWYGW"81""a3+=MMXMRTD2MIE;ZMV/XG0M0MWSMV0/REW"OM$!*MD(WJMIMUD2MVWDTN
"9$!&=GII/I DIX/V;GTD/I DIUM_">$ YMVMVMWSMRTD2M0N#1$"% :!%1#"% 5!%1$85 #!WEJJMWTDIJT=GTT=MVMYGWVM0GTD2MJVMGT
JMIMTDRUD2MVWDTNG;/IJS/;MJVGIGTMJMV;S0GW;DI &DR=EGI GIU BEIIGI RE0TD2GVW3pkO],;MT=/U YGWEWMU T/R/IWTVERTG
S=N0/JMIMTDRTVMM3+=M!$ RE0TD2GVWYMVMDW/0GTMU R/;S0MTM0NZN8 SGDVW/X,@-kSVD;MVW! YDT= JMIMTDRWD;D0GVDTNR/MXDRDMIT
" !J$ %17$ X/VT=MT=VMW=/0U 2G0EM!GIU T=M!$ S/;MJVGIGTMRE0TD2GVWDI &DR=EGI GIU BEIIGI YMVMUD2DUMU DIT/X/EVTG_G!
Y=DR= W=/YMU JMIMTDRVM0GTD/IW=DS G;/IJT=M!$ S/;MJVGIGTMRE0TD2GVWDI &DR=EGI GIU BEIIGI GT;/0MRE0GV0M2M0GIU
Y/E0U ZM=M0SXE0X/VXETEVMVMWMGVR= GIU ETD0D‘GTD/I /XT=MS/;MJVGIGTMJMV;S0GW;3,UUDTD/IG0N! #7 WSMRDXDRZGIUWYMVM
UMTMRTMU!Y=DR= Y/E0U ZMEWMU GWVMXMVMITDG0DUMITDXDRGTD/I TGJWX/VT=MVM0M2GIT#5 S/;MJVGIGTMRE0TD2GVW3
9.: ;",44石榴"?504"/ 6(/0/+5=$为石榴科"kEIDRGRMGM$
石榴属"?504"/$落叶灌木或小乔木!原产伊朗%阿富
汗等中亚一带!从西汉张骞出使西域将涂林安石榴
引入我国!石榴作为水果和观赏树木在我国已有
$ %%%多年的栽培历史& 经长期天然杂交和基因突
变!以及采用实生%分株%嫁接等多种繁殖方法!产生
了复杂而多样的品种和类型!据不完全统计!我国现
有石榴品种资源 $%% 多个!遍及南北各地 $% 多个省
区!形成了山东枣庄%新疆叶城%陕西临潼%安徽怀
远%河南开封%云南蒙自和四川会理等著名的栽培区
"汪小飞!$%%:$& 近年来!随着石榴的营养及药用
价值的发掘!国内外对石榴品种资源的调查和分类
研究也越来越多!除应用形态学%细胞学和生化水平
的品种分类外 "汪小飞!$%%:$!也有学者应用分子
标记对石榴品种资源进行调查和分类研究!如应用
A,kK标记对中国及突尼斯部分石榴品种进行了研
究"杨荣萍等!$%%:# 热娜(卡司木等!$%%7# 卢龙斗
等!$%%:# 巩雪梅!$%%!# ’/4dEI )+/%1! $%%7$!应用
&A,k标记对中国部分石榴品种及印度部分石榴品
种进行了研究 "张四普等! $%%7# AGIGUM)+/%I!
$%%6$!应用 ,@-k标记分别对中国"其中包括 8 个
川滇石榴品种$和突尼斯部分石榴品种进行了研究
"苑兆和等!$%%7# \ZDV)+/%I! $%%7$!为石榴种资资
源的研究提供了分子依据&
,@-k技术以其准确%高效的特点在植物的亲
缘关系%遗传图谱构建%抗病性研究等方面的应用已
4第 ## 期 赵丽华等’ 川滇石榴品种遗传多样性及亲缘关系的 ,@-k分析
十分广泛"乔勇等!$%%6# 闵会等!$%%6# 臧德奎等!
$%%6# 韩远记等!$%%7# 陈良华等!$%%6# 马庆华等!
$%%6$& 石榴在云南引种栽培后!形成 !% 余个地方
品种!在四川引种栽培后!形成 #% 余个地方品种!这
些品种间的亲缘关系和系统演化并不清楚!且目前
尚未有针对川滇石榴品种利用 ,@-k技术进行研究
的报道!为了明确四川%云南石榴品种间的遗传多样
性和亲缘关系!本研究利用 ,@-k标记技术对四川%
云南石榴的遗传多样性与亲缘关系进行分析!以期
为石榴种下分类提供分子依据!为更合理地保护四
川%云南石榴资源及选育新品种提供遗传信息&
#4材料与方法
#3#4材料4供试 !$ 个石榴品种于 $%%7 年 ! 月采
自云南蒙自县石榴研究所石榴品种资源圃%会泽县
果园!四川会理县农业局石榴品种资源圃%攀枝花市
果园"表 #$& 每个品种选 5 98 株健壮%无病虫害石
榴树采 5% 98% 片嫩叶!装于自封口塑料袋中!用冰
壶运回!于 >:% j冰箱保存&
#3$4试验方法4#$K*,提取及检测4采用改良
’+,C法从石榴幼叶中提取基因组 K*,"赵丽华等!
$%%6$!并稍加改进’ ’+,C裂解液加入硼砂终浓度为
%1%#8 ;/0(->#!"8 j水浴 # =& %17a"Qi8$的琼脂糖
凝胶电泳检测 K*,纯度!ZD/WSMR^;DIDK*,iA*,i
SV/TMDI 核酸蛋白分析仪测定 K*,含量!最后稀释为
#%% IJ(-->#工作液!放入 >$% j冰箱里备用&
$$,@-k分析4酶切’H*)#%<"$A#内切酶购
自 *)C公司& $% --酶切体系为’ K*,模板 5 --
"#%% IJ(--># $! H*)#及 <"$A#各 8 p!C&,"#%%
-J(;-># $%1$ --!*)CEXMV$ 为 $ --!加 UUF$o至
$% --混匀后! 5: j 恒温酶切 " =! "8 j 灭活
$% ;DI&
表 =>石榴品种的编号%名称%原产地
2&8?=>N"?& )&F.& &)<",(6()"0#"F.6,&)&’.#*$/&0" 5)"/"-$.$ -$%’(A&,/
编号
*/3
名称
*G;M
原产地
oVDJDI
编号
*/3
名称
*G;M
原产地
oVDJDI
# ,红皮白籽- ,F/IJSDZGD‘D- 云南禄丰 -EXMIJ!BEIIGI $$ ,莹皮- ,BDIJSD- 云南会泽 FED‘M!BEIIGI
$ ,红皮红籽- ,F/IJSD=/IJ‘D- 云南禄丰 -EXMIJ!BEIIGI $5 ,绿皮酸- ,-2SDWEGI- 云南会泽 FED‘M!BEIIGI
5 ,大铁壳红- ,KGTDMdM=/IJ- 云南禄丰 -EXMIJ!BEIIGI $! ,红袍- ,F/IJSG/- 云南会泽 FED‘M!BEIIGI
! ,铁壳白籽- ,+DMdMZGD‘D- 云南禄丰 -EXMIJ!BEIIGI $8 ,糯石榴- ,*E/W=D0DE- 云南会泽 FED‘M!BEIIGI
8 ,青皮白籽- ,?DIJSDZGD‘D- 云南禄丰 -EXMIJ!BEIIGI $" ,铜壳石榴- ,+/IJdMW=D0DE- 云南巧家 ?DG/PDG!BEIIGI
" ,汤碗石榴- ,+GIJYGIW=D0DE- 云南开远 lGDNEGI!BEIIGI $: ,红壳石榴- ,F/IJdMW=D0DE- 云南巧家 ?DG/PDG!BEIIGI
:
,永丰早白石榴-
,B/IJXMIJ‘G/ZGDW=D0DE-
云南开远 lGDNEGI!BEIIGI $7 ,青壳石榴- ,?DIJdMW=D0DE- 云南巧家 ?DG/PDG!BEIIGI
7 ,青皮石榴- ,?DIJSDW=D0DE- 云南蒙自 ]MIJ‘D!BEIIGI $6 ,大籽酸石榴- ,KG‘DWEGIW=D0DE- 云南建水 \DGIW=ED!BEIIGI
6 ,厚皮甜砂籽- ,F/ESDTDGIW=G‘D- 云南蒙自 ]MIJ‘D!BEIIGI 5% ,细籽酸石榴- ,[D‘DWEGIW=D0DE- 云南建水 \DGIW=ED!BEIIGI
#% ,甜绿籽- ,+DGI02‘D- 云南蒙自 ]MIJ‘D!BEIIGI 5# ,酸甜石榴- , &EGITDGIW=D0DE- 云南建水 \DGIW=ED!BEIIGI
## ,白花甜石榴- ,CGD=EGTDGIW=D0DE- 云南蒙自 ]MIJ‘D!BEIIGI 5$ ,黑皮石榴- ,FMDSDW=D0DE- 云南建水 \DGIW=ED!BEIIGI
#$ ,甜光颜- ,+DGIJEGIJNGI- 云南蒙自 ]MIJ‘D!BEIIGI 55 ,姜驿石榴- ,\DGIJNDW=D0DE- 云南元谋 BEGI;/E!BEIIGI
#5 ,酸绿籽- , &EGI02‘D- 云南蒙自 ]MIJ‘D!BEIIGI 5! ,黄皮甜- ,FEGIJSDTDGI- 四川会理 FED0D!&DR=EGI
#! ,乍甸酸石榴- ,H=GUDGIWEGIW=D0DE- 云南蒙自 ]MIJ‘D!BEIIGI 58 ,黄皮酸- ,FEGIJSDWEGI- 四川会理 FED0D!&DR=EGI
#8 ,酸光颜- , &EGIJEGIJNGI- 云南蒙自 ]MIJ‘D!BEIIGI 5" ,软核酸石榴- ,AEGI=MWEGIW=D0DE- 四川会理 FED0D!&DR=EGI
#" ,火石榴- ,FE/W=D0DE- 云南蒙自 ]MIJ‘D!BEIIGI 5: ,白皮石榴- ,CGDSDW=D0DE- 四川会理 FED0D!&DR=EGI
#: ,绿皮甜- ,-2SDTDGI- 云南会泽 FED‘M!BEIIGI 57 ,会理红皮- ,FED0D=/IJSD- 四川会理 FED0D!&DR=EGI
#7 ,花红皮- ,FEG=/IJSD- 云南会泽 FED‘M!BEIIGI 56 ,青皮软籽- ,?DIJSDVEGI‘D- 四川会理 FED0D!&DR=EGI
#6 ,火炮石榴- ,FE/SG/W=D0DE- 云南会泽 FED‘M!BEIIGI !% ,大绿籽- ,KG02‘D- 四川攀枝花 kGI‘=D=EG!&DR=EGI
$% ,红皮酸- ,F/IJSDWEGI- 云南会泽 FED‘M!BEIIGI !# ,水晶石榴- , &=EDPDIJW=D0DE- 四川攀枝花 kGI‘=D=EG!&DR=EGI
$# ,白花石榴- ,CGD=EGW=D0DE- 云南会泽 FED‘M!BEIIGI !$ ,青皮石榴- ,?DIJSDW=D0DE- 四川攀枝花 kGI‘=D=EG!&DR=EGI
44连接’ +! K*,连接酶购自 *)C公司!H*)#接
头%<"$A#接头%预扩和选扩引物序列参照周延清
"$%%8$报道!由上海英骏生物技术有限公司合成&
$% --连接体系’ H*)#和 <"$A#接头 "$% ;;/0(
->#$各 %18 --!+! K*,连接酶 $ p!+! K*,连接
酶缓冲液 $ --!酶切过的 K*,样品 #8 --!加
UUF$o至 $% --! #" j恒温 5 = 以上&
预扩增’ F/DK*,聚合酶购自宝生物工程有限
公司& $8 --预扩增反应体系’ 连接产物作预扩模
板取 $ --! ]J$ q "$8 ;;/0(-># $ #18 --! U*+kW
"$18 ;;/0(-># $ #18 --! H*)# ’^和 <"$A# ,^预
扩引物 "#% ;;/0(-># $各 # --!F/DK*,聚合酶 #
p!#% mk’ACEXMV$18 --!加 UUF$o至 $8 --混
匀& 预扩程序’ 6! j $ ;DI# 6! j 5% W!8" j 5% W!
6"#
林 业 科 学 !" 卷4
:$ j 7% W!5% 个循环# :$ j " ;DI!! j保存& 预扩
增产物在 #a琼脂糖凝胶上电泳检测&
选择性扩增’ 预扩增产物稀释 #% 倍作选择性
扩增的模板!取 $ --! ]J$ q"$8 ;;/0(->#$#18 --!
U*+kW"$18 ;;/0(-># $#18 --! H*)#和 <"$A#选
扩引物"#% ;;/0(->#$# --"表 $$!F/DK*,聚合酶
# p!#% mk’ACEXMV为 $18 --!加 UUF$o至 $8 --!
混匀& 选扩程序为 6! j $ ;DI# 6! j 5% W!"8 j 5%
W!:$ j 7% W!共 #$ 个循环!退火温度每循环下降
%1: j# 6! j 5% W!88 j 5% W!:$ j 7% W!共 $5 个
循环# :$ j " ;DI!最后 ! j保存& 选扩产物在 #a
琼脂糖凝胶上电泳检测& 每对引物重复 # 次&
电泳及银染’选扩增产物加 8 --上样缓冲液
"67a甲酰胺! #% ;;/0(-># )K+,!SF71%!%1$8a
二甲苯氰!%1$8a溴酚蓝$!经 68 j变性 #% ;DI 后!
置于冰上备用& 制备 "a的变性聚丙烯酰胺凝胶!
预电泳"电压 # 7%% .$至胶板温度为 !% j以上!上
样选扩产物 7 --继续电泳!$18 = 后停止电泳& 凝
胶采用银染方法显带!银染法按宋国立等"#666$的
方法进行!干燥后!拍照保存&
#154数据处理4采用 ’V/WW’=MRdMV^$16# 版软件对
$ 次重复试验中稳定出现的条带进行统计!在相同
迁移位置上有带记录为 #!无带记录为 %!统计各对
引物的扩增位点!建立 *%!# +二元数据矩阵& 用
k/SOMI5$ 软件计算等位基因数 "OG$%有效等位基
因数"OM$%*MD(W基因多样性"9$%&=GII/I 信息指数
">$%多态位点百分率"?$& 用 *+&B&SR^$1#% 版软
件计算 !$ 个石榴品种间遗传相似系数 " !J$!用
pkO],法构建亲缘关系聚类树状图&
$4结果及分析
$1#4K*,检测4由琼脂糖凝胶电泳检测所提
K*,!结果显示’ 点样孔干净!K*,主带清晰!无弥
散现象# 由核酸蛋白仪检测结果显示’ oK$"% ioK$7%
值在 #17%8 9#177! 之间!oK$"% ioK$5%值大于 $1%&
结果表明!所提石榴基因组 K*,符合 ,@-k标记的
要求&
$1$4,@-k扩增产物多态性4从 "! 对 <"$A#i
H*)#引物中筛选出多态性好的 8 对引物"表 $$对
!$ 个石榴品种进行 ,@-k扩增!由琼脂糖凝胶电泳
可见预扩增及选择性扩增产物"图 #$呈弥散状!片
段集中于 8% 9:8% ZS& "a变性聚丙烯酰胺凝胶电
泳分离 8 对选扩引物产物!共统计到 5"$ 条 K*,条
带! 平均每对引物扩增条带数为 :$1! 条!其中多态
性条带为 $58 条!平均每对引物扩增多态性条带为
!: 条!多态性条带比率为 "81""a&
利用 k/SOMI5$ 软件对石榴选择性扩增的 K*,
条带进行分析"表 $$!8 对引物扩增产物多态性百
分率 在 8818"a 9:8165a 之 间& 其 中 引 物 对
)^,,Oi]^’,,扩增条带数最少!为 8! 条!但多态性
条带比率最高 " :8165a$# 引物对 )^,’,i]’^+’
扩增条带数最多!为 6! 条!但多态性比率较低
""%1"!a$& 结果表明!采用不同的引物对进行石
榴选择性扩增!扩增出的谱带数差异较大!但多态性
谱带的比例差异不大& 每个位点的等位基因数
"OG$ 为 #1888 " 9#1:86 5! 平均 #1"8" "# 有效
等 位 基 因 数 " OM$ 为 #1$## # 9#15#% 7! 平 均
#1$"% :# *MD|W基 因 多 样 性 " 9$ 为 %1#5$ % 9
4444表 B>四川%云南石榴遗传多样性的 7KJ!分析!
2&8?B>7KJ!6.).’(-<(A.,/(’: "0#"F.6,&)&’.()@(-+$&)&)<]$))&)!,"A()-.
引物
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平均 ]MGI :$1! !: "81"" 51" #1"8" " #1$"% : %1#"% 5 %1$85 #
44.O’ 扩增条带数 +/TG0IE;ZMV/XZGIUW# 3S ’ 多态性带数 *E;ZMV/XS/0N;/VS=DRZGIUW# ?’ 多态性位点百分率 kMVRMITGJM/XS/0N;/VS=DR
0/RD# OW’ 特异性条带数 *E;ZMV/XWSMRDXDRZGIUW# OG’ 等位基因数 oZWMV2MU IE;ZMV/XG0M0MW# OM’ 有效等位基因数 )XMRTD2MIE;ZMV/XG0M0MW#
9’ *MD-W遗传多样性 *MD-WJMIMUD2MVWDTN# >’ &=GII/I 信息指数 &=GII/I|WDIX/V;GTD/I DIUM_3括号内数值为标准差 +=M2G0EMWDI T=MZVGRdMTWGVM
WTGIUGVU UM2DGTD/IW3
%:#
4第 ## 期 赵丽华等’ 川滇石榴品种遗传多样性及亲缘关系的 ,@-k分析
图 #4预扩增及选择性扩增产物电泳图
@DJ3#4)0MRTV/S=/VMWDW/XSVM^M_SGIUMU GIU WM0MRTD2MG;S0DXDRGTD/I SV/UERT
,’ 预扩产物电泳图 )0MRTV/S=/VMWDW/XSVM^G;S0DXDRGTD/I SV/UERT# C’ 选扩产物电泳图
)0MRTV/S=/VMWDW/XWM0MRTD2MG;S0DXDRGTD/I SV/UERT3’l’ 阴性对照 *MJGTD2MR/ITV/0# ]’ K-$%%%3
图 $4引物对 )^,,Oi] ’^+O的 ,@-k扩增结果
@DJ3$4,@-kG;S0DXDRGTD/I VMWE0TZNSVD;MVW)^,,Oi]’^+O
# >!$ 编号同表 #!箭头所指为独特或缺失条带& # >!$ R/UMWVMXMVT/T=MWG;S0MW
0DWTMU DI +GZ3#! GIU GVV/YWT/EIDQEM/VGZWMITZGIUW3]’ K-$%%%3
%1#6! #!平均 %1#"% 5# &=GII/I 信息指数 ">$ 为
%1$#% $ 9%15%5 7!平均%1$85 ## 多态性条带比率
为 "81""a& 结果表明!四川%云南石榴品种资源间
存在较丰富的遗传多样性&
$354K*,指纹图谱4相同的 ,@-k引物对于不同
石榴品种扩增出带数及带型都不同! !$ 个四川%云
南石榴品种检测到 #7 条品种特异性条带 "表 $$’
)^,OOi]’^,,引物对于会泽,花红皮- $%% ZS 左右
有 # 条独特 K*,条带!巧家,红壳石榴-#%% ZS 左
右有 # 条独特 K*,条带# )^,,Oi]^’,,引物对于
开远,汤碗石榴-5%% ZS 及 $8% ZS 左右各有 # 条独
特 K*,条带!蒙自,厚皮甜砂籽-$7% ZS 左右缺失 #
条 K*,条带# )^,’,i]^’+’引物对于会泽 ,白花
石榴-:%% ZS 左右有 # 条独特 K*,条带!会理 ,软
核酸石榴-"%% ZS 左右有 # 条独特 K*,条带!会理
,青皮软籽 - $8% ZS 左右缺失 # 条 K*,条带#
)^,OOi]^’+O引物对于会泽,白花石榴-:%% ZS 左
右有 # 条独特 K*,条带!元谋 ,姜驿石榴- "8% ZS
左右有 # 条独特 K*,条带!会泽 ,花红皮- 8%% ZS
左右有 # 条独特 K*,条带!蒙自,青皮石榴-#8% ZS
左右有 # 条独特 K*,条带# )^,,Oi]’^+O引物
"图 $$对于蒙自,甜光颜-:8% ZS 及 "5% ZS 左右各
有 # 条独特 K*,条带!禄丰,红皮白籽-57% ZS 左
右有 # 条独特 K*,条带!蒙自,白花甜石榴-#!% ZS
左右 有 # 条 独 特 K*, 条 带! 会 泽 ,绿 皮 酸 -
"!% ZS 左右缺失 $ 条 K*,条带& 此 #! 条独特及 !
条缺失特异性 K*,条带可作为石榴品种的特征带!
用于鉴定供试石榴品种中这 #5 个石榴品种的分子
依据&
#:#
林 业 科 学 !" 卷4
$1!4聚类分析4!$ 个石榴品种的遗传相似系数
"!J$为%1:#$ : 9%16$8 !!平均为%17#! $# 其中会
泽,莹皮-和建水,酸甜石榴-与开远,汤碗石榴-遗
传相似系数最小!为%1:#$ :!表明前二者与后者间
亲缘关系最远# 攀枝花 ,大绿籽-为会理 ,青皮软
籽-芽变品种"先开泽!#666$!遗传相似系数最大!
为%16$8 !!表明二者亲缘关系最近&
利用 pkO],法!根据 !J构建 !$ 个石榴品种遗
传关系聚类图"图 5$& 从图 5 可以看出!8 对引物
能将 !$ 个石榴品种完全区分开!以 !J%17$% %为阀
值!供试的 !$ 个石榴品种可分为 ! 类’ ,红皮白
籽-%,大铁壳红-%,红皮酸-% ,大籽酸石榴-% ,莹
皮-%,酸甜石榴-%,汤碗石榴-%,白皮石榴-%,铜壳
石榴-%,黑皮石榴-% ,厚皮甜砂籽-% ,花红皮 -%
,红壳石榴-%,会理红皮-%,青壳石榴-%,白花石
榴-%,糯石榴-%,永丰早白石榴-聚为第#类# ,红
皮红籽-% ,甜绿籽-% ,黄皮甜-% ,青皮石榴- "蒙
自$%,青皮白籽-%,火炮石榴-%,软核酸石榴-%,青
皮软籽-%,大绿籽-%,甜光颜-%,酸绿籽-%,火石
榴-%,绿皮酸-聚为第!类# ,铁壳白籽-%,青皮石
榴-"攀枝花$%,黄皮酸-聚为第 (((类# ,白花甜石
榴-%,酸光颜-%,红袍-%,姜驿石榴-%,水晶石榴-%
,细籽酸石榴-%,乍甸酸石榴-%,绿皮甜酸-聚为第
%类& 蒙自,青皮石榴-与攀枝花,青皮石榴-遗传
相似系数为 %1:68 8!且分别居于第!类与$类!应
为同名异物&
图 54!$ 个石榴品种遗传相似系数 pkO],聚类图
@DJ354pkO],UMIUV/JVG;/X!$ S/;MJVGIGTMRE0TD2GVWZGWMU /I JMIMTDRWD;D0GVDTNR/MXDRDMITW
# >!$ 编号同表 #& # >!$ R/UMWVMXMVT/T=MWG;S0MW0DWTMU DI +GZ3#3
54讨论
多态带百分率"?$%有效等位基因数"OM$%*MD|W
基因多样性"9$与 &=GII/I 信息指数">$是度量遗
传多样性常用指标"]GVTDIW)+/%1!$%%6# 张青林等!
$%%!$& 本研究结果显示!!$ 个四川%云南石榴品种
间遗传相似系数" !J$变异范围在%1:#$ : 9%16$8 !
之间!变幅较大! ?!等位基因数"OG$!OM!9!>分别
为 "81""a!#1"8" "!#1$"% :!%1#"% 5!%1$85 #!表
明四川%云南石榴品种在遗传进化过程中基因组
K*,发生了较大变异!构成较丰富的遗传多样性&
本试验的结果高于 BEGI 等"$%%:$用 ,@-k对四川%
云南石榴群体的分析结果 "?! OG!OM!9!>分别为
$!15#a!#1$!5 #!#1#56 :!%1%7$ #!%1#$5 6$!这可
能是由于其在研究中仅选取四川%云南 8 个主栽品
种进行分析!不能完全代表四川%云南石榴品种间的
遗传多样性!致使多样性分析结果偏低& 本研究中
四川%云南的 !$ 个品种多态带百分率为 "81""a!
低于 BEGI 等"$%%:$用 ,@-k对中国石榴品种分析
所得多态位点百分率 ":$1:%a$!及 \ZDV等 "$%%7$
$:#
4第 ## 期 赵丽华等’ 川滇石榴品种遗传多样性及亲缘关系的 ,@-k分析
用 ,@-k对突尼斯栽培石榴品种分析所得多态带百
分率"6!1:a$& 表明石榴在四川%云南经多年的实
生繁殖%人工选育及基因突变的积累!虽然产生了较
大的遗传变异!构成了较丰富的石榴资源基因库!对
石榴优良品种的选育是极为有利的!但其遗传多样
性低于突尼斯及全国石榴的遗传多样性!为了进一
步丰富四川%云南的石榴资源基因库!可从我国其他
地区或国外引种石榴品种&
目前!我国对石榴品种资源的分类还没有统一
的方法!生产上多以用途%花色%风味%果型大小%果
皮色泽%籽粒口感%成熟期等进行分类"汪小飞等!
$%%:$& 从本研究利用 ,@-k标记技术对 !$ 个四
川%云南石榴品种聚类的结果"图 5$看!与传统分类
的结果相差较远& 从风味看!! 类都有甜味和酸味
石榴# 从果皮颜色看!果皮为青色的巧家 ,青壳石
榴-聚于第#类!禄丰 ,青皮白籽-%蒙自 ,青皮石
榴-%会泽,绿皮酸-%会理 ,青皮软籽-%攀枝花 ,大
绿籽-聚于第!类!攀枝花,青皮石榴-聚于第$类!
会泽,绿皮甜-聚于第%类# 而且这些石榴品种也没
有按照地域分布分类& 本文结果与卢龙斗等
"$%%:$%’/4dEI 等 "$%%7 $%\ZDV等 "$%%7 $%廖毅等
"$%%6$利用分子标记聚类分析结果一致!即 ,@-k
分类与形态和地理起源分类不一致& 这可能是基因
突变的重演性!在不同地区同种生物的不同个体中
发生相同的基因突变 "朱军!$%%$$!导致石榴品种
间表现相同某一性状!并稳定遗传!而这些品种间遗
传相似系数却较低!不能聚为一类# 由于四川%云南
各石榴栽培区域地理位置接近!彼此频繁引种!不同
生态类型%地域间基因交流广泛!及环境对数量性状
的巨大影响!有些品种分子标记结果遗传相似系数
较高!聚为一类!但形态特征%地理来源却差异较大&
传统的分类法仅依据可见差异进行分类!对一些不
可见的差异无法进行检测分析!分析不全面!因此!
单纯依据植物的形态和地理起源分类!已经不能真
实反映石榴品种间的遗传背景和遗传差异# 而
,@-k标记技术能从 K*,水平上揭示遗传变异!反
映遗传背景差异& 对石榴种质资源进行深入研究
时!应在形态学基础上!应用分子标记技术进行分
析!才能更好地为石榴种质资源保存%利用及品种改
良等提供科学依据&
参 考 文 献
陈良华!胡庭兴!张4帆3$%%63四川干旱干热河谷核桃资源遗传多样
性分析3果树学报!$""#$ ’ !7 >8!3
巩雪梅3$%%!3石榴品种资源遗传变异分子标记研究3安徽农业大学
硕士学位论文3
韩远记!董美芳!袁王俊!等3$%%73部分桂花栽培品种的 ,@-k分析3
园艺学报!58"0$ ’ #5: >#!$3
廖4毅!孙保娟!黎振兴!等3$%%63茄子及其近缘野生种遗传多样性
及亲缘关系的 ,@-k分析3热带作物学报!5%""$ ’ :7# >:7:3
卢龙斗!刘素霞!邓传良!等3$%%:3A,kK技术在石榴品种分类上的
应用3果树学报!$!"8$ ’ "5! >"563
马庆华!续九如!王贵禧! 等3$%%63河北和山东冬枣果实品质评价及
,@-k分子标记的研究3林业科学研究!$$"#$ ’ !7 >8!3
闵4会!程诗明!康志雄!等3$%%63香榧天然群体遗传多样性的 ,@-k
分析3林业科学研究!$$"5$ ’ 5": >5:$3
乔4勇!赵4锦!杨海旭!等3$%%63$# 个枣品种"系$的 ,@-k指纹分
析3植物遗传资源学报!#%"$$ ’ $%8 >$#%3
热娜(卡司木! 帕丽达(阿不力孜! 朱4焱3$%%73新疆石榴品种的
A,kK分析3西北植物学报!$7"#$$ ’ $!!: >$!8%3
宋国立!张春庆!贾继曾!等3#6663棉花 ,@-k银染技术及品种指纹
图谱应用初报3棉花学报!##""$ ’ $7# >$753
汪小飞3$%%:3石榴品种分类研究3南京林业大学博士学位论文3
汪小飞!向其柏!尤传楷!等3$%%:3石榴品种分类研究进展3果树学
报!$!"#$ ’ 6! >6:3
先开泽3#6663青皮软籽石榴芽变)))大绿子选种初报3中国南方果
树!$7""$ ’ !#3
杨荣萍!龙雯虹!张4宏!等3$%%:3云南 $8 份石榴资源的 A,kK分
析3果树学报!$!"$$ ’ $$" >$$63
苑兆和!尹燕雷!朱丽琴!等3$%%73山东石榴品种遗传多样性与亲缘
关系的荧光 ,@-k分析3园艺学报!58"0$ ’ #%: >##$3
臧德奎!陈4红!郑4林!等3$%%63木瓜属优良品种亲缘关系的 ,@-k
分析3林业科学!!8"7$ ’ 56 >!53
张青林!罗正荣3$%%!3(&&A及其在果树上的应用3果树学报!$#"#$ ’
8! >873
张四普!汪良驹!曹尚银!等3$%%73$5 个石榴基因型遗传多样性的
&A,k分析3果树学报!$8"8$ ’ "# >""3
赵丽华!王先磊3$%%63成熟石榴叶片 K*,提取方法研究3安徽农业
科学!5:"5#$ ’ #8#!# >#8#!83
周延清3$%%83K*,分子标记技术在植物研究中的应用3北京’ 化学
工业出版社!#"" >#"73
朱4军3$%%$3遗传学3北京’ 中国农业出版社!$!6 >$8!3
’/4dEI K!]EWTGXG!‘=GI €! )+/%I$%%73]/0MRE0GVGIU S/;/0/JDRG0
UD2MVWDTNG;/IJS/;MJVGIGTM"?504"/ 6(/0/+5= -3$ RE0TD2GVWDI
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S/;MJVGIGTM " ?504"/ 6(/0/+5= -3$ RE0TD2GVW EWDIJ G;S0DXDMU
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AGIGUM& ,! AGIG+&!*GV‘GVNK3$%%63&k,A SV/XD0MWGIU JMIMTDR
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k=NWD/0]/0CD/0k0GITW!#8"#$ ’ "# >:%3
BEGI H=G/=M! BDI BGI0MD! ?E \DGI0E! )+/%3$%%:3k/SE0GTD/I JMIMTDR
UD2MVWDTNDI ’=DIMWMS/;MJVGIGTM"?504"/ 6(/0/+5=-3$ RE0TD2GVW
VM2MG0MU ZNX0E/VMWRMIT^,@-k;GVdMVW3\/EVIG0/XOMIMTDRWGIU
OMI/;DRW!5! "#$$ ’ #%"# >#%:#3
!责任编辑4徐4红"
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