采用花粉离体培养法,研究不同的液体培养基组分、温度、pH值对小黑杨花粉萌发的影响。 结果表明: 在单因子试验中,蔗糖、H3BO3和CaCl2在一定的浓度范围内对小黑杨花粉萌发及花粉管生长起促进作用,但超过一定浓度时则起抑制作用, 温度和pH值也是如此。在正交试验中, 蔗糖、H3BO3、CaCl2、温度和pH值对小黑杨花粉萌发均有极显著的影响, 小黑杨花粉萌发最适的培养基为 150 g · L-1蔗糖 + 20 mg ·L-1 H3BO3 + 40 mg ·L-1 CaCl2,在21 ℃和pH6.0条件下,花粉的萌发率可以达到 46.23%,花粉管生长状态良好。细胞学观察结果表明: 小黑杨成熟花粉为2-细胞型,随着培养时间的延长,花粉萌发率逐渐提高,花粉管不断伸长。
The effects of liquid culture medium composition, temperature, pH value on Populus simonii×P.nigra pollen germination were investigated with in vitro culture. The results were as follows: First, sucrose,H3BO3 and CaCl2 could promote pollen germination and tube growth within a certain concentration range in single factorial experiments, but they would inhibit germination beyond the concentration range. Similar responses also held for temperature and pH value. Second, the effects of sucrose, H3BO3, CaCl2, temperature and pH value were extremely remarkable in orthogonal design experiment. The optimal culture medium was 150 g · L-1 sucrose + 20 mg ·L-1 H3BO3 + 40 mg ·L-1 CaCl2, and in the medium the rate of pollen germination was up to 46.23%under the conditions of 21 ℃ and pH 6.0, with healthy pollen tube. Third, cytological observations exhibited P. simonii×P. nigra mature pollen was a bicellular pollen and pollen germination rate gradually increased and tube was growing with culture time.
全 文 ：第 !" 卷 第 # 期
$ % & & 年 # 月
林 业 科 学
’()*+,)- ’)./-* ’)+)(-*
/012!"!+02#
3456!$ % & &
小黑杨花粉离体萌发和细胞学分析!
赵丽娟&! $7李淑娟&7于金海$7王柏臣&7杨传平&
"&2东北林业大学 教育部林木遗传改良和生物技术重点实验室7哈尔滨 &>%%!%#
$2黑龙江省农业科学院作物育种所7哈尔滨 &>%%C#$
摘7要!7采用花粉离体培养法!研究不同的液体培养基组分(温度(Ol值对小黑杨花粉萌发的影响% 结果表明&
在单因子试验中!蔗糖(l8R\8 和 (9(1$ 在一定的浓度范围内对小黑杨花粉萌发及花粉管生长起促进作用!但超过
一定浓度时则起抑制作用! 温度和 Ol值也是如此% 在正交试验中! 蔗糖(l8R\8 ((9(1$ (温度和 Ol值对小黑杨花
粉萌发均有极显著的影响! 小黑杨花粉萌发最适的培养基为 &>% H’.B&蔗糖 f$% AH’.B& l8R\8 f!% AH’.
B&
(9(1$ !在 $& c和 Ol#2% 条件下!花粉的萌发率可以达到 !#2$8d!花粉管生长状态良好% 细胞学观察结果表明&
小黑杨成熟花粉为 $ B细胞型!随着培养时间的延长!花粉萌发率逐渐提高!花粉管不断伸长%
关键词!7小黑杨# 花粉# 离体萌发# 液体培养基# 萌发率
中图分类号! ’"&C2!8" ’"&C2!"777文献标识码!-777文章编号!&%%& B"!CC#$%&&$%# B%%8# B%#
收稿日期& $%&% B&& B$># 修回日期& $%&& B%8 B&%%
基金项目& 东北林业大学基础自然科学基金"%&%X#%$%!?$ %
!杨传平为通讯作者%
M)V’0&" P,&#’)%0’")%)5!<0"."-< :)%.<(’("*!%*1$1&&/2%0/g!30/4+( Q".,)
G@90.FP495&! $7.F’@4P495&7n4 3F5@9F$7Z95HR9FN@D5&7n95H(@495OF5H&
"&2/#01&2+*&3+*0+46+*#73C*##[#’#3%-M9E*+,#9#’3&’: N%+3#-"’+.+(0+4\%’%73*0+48:=-&3%+’7D+*3"#&736+*#73*0@’%,#*7%307W&*2%’ &>%%!%#
$25*+EN*##:%’( M’73%3=3#! W#%.+’($%&’( >-&:#90+4>(*%-=.3=*&.;-%#’-#77W&*2%’ &>%%C#$
:1(0&%80&7,@DDLDN<;0L1FV4F: N41<4MDAD:F4AN0AO0;F
B& (9(1$ ! 95: F5 <@D
AD:F4A<@DM9
")F7%9+’%$ 与欧洲黑杨 ")F’%(*&$的杂交组合中
选育出的优良品种!具有抗寒(抗旱(耐盐碱(速生等
优良特性!已成为黑龙江省平原地区普遍栽培的杨
树品种% 研究小黑杨花粉的离体萌发特性!优化其
离体培养基组分!不仅可以揭示营养细胞(生殖细胞
以及花粉管的生长发育过程!而且对于杂交育种及
花粉培养等具有理论和现实意义%
花粉离体萌发因其数据可靠并可完全定量而成
为目前杂交育种中花粉生活力测定的首选方法"左
丹丹等!$%%"$% 蔗糖( l8R\8和 (9
$ f作为花粉离体
培养 的 基 本 组 成 成 分 在 风 信 子 " W0&-%’3"=7
+*%#’3&.%7$ "李 玉萍 等! $%&% $( 唐 菖 蒲 "[.&:%+.=7
(&’:&,#’7%7$ "黄蓓丽等! $%%? $(苦瓜 "\+9+*:%-&
-"&*&’3%&$ "张福平等!$%%?$(核桃 "_=(.&’7*#(%&$
"吴开志等!$%%C $(月季 "B+7& -"%’#’7%7$ "王岚岚
等!$%%C$(水仙"D&*-%77=7$ "罗凤霞等!$%%"$(青杄
")%-#& P%.7+’%$ "田翠婷等!$%%"$等很多植物中均
有应用!但不同植物所需的适宜浓度范围及培养条
件有一定的差异% 前人对杨树花粉离体萌发的主要
影响因素也进行了研究!结果概括为以下几个方面&
温室水培花枝和采集花粉的适宜温度应保持在
7第 # 期 赵丽娟等& 小黑杨花粉离体萌发和细胞学分析
&> j$> c# 开花后第 & 天和第 $ 天采集的花粉质
量最好# B$% jB&C c下花粉贮藏效果比较好!
超低温保存是目前长期保存花粉的最理想方法之
一# 升温解冻时!在 ! c下吸水 $ @ 效果最好 "杨
志敏!&??%# 杜克兵等!$%%"# 张亚利等!$%%## 艾
鹏飞等!$%%!# 朱湘渝等!&?C$ $ % 杨树花粉萌发
培养基配方的研究很少!都是利用固体培养基!有
的培养基中只加了 &%d j$%d的蔗糖!有的培养
基中最佳蔗糖(l8R\8和 (9
$ f浓度分别为 &>d j
$%d!&%% AH’.B&和 8%% AH’.B& !并认为适量的蔗
糖与硼酸明显促进了杨树花粉的萌发!但过量的
蔗糖与硼酸对花粉的萌发均起到抑制作用# 适宜
的 Ol值在 >2> j#2> 之间# 不同杨树花粉萌发对
温度的要求不一样!萌发的适宜温度为 $% j$>
c# 花粉在培养基上的散布密度中等较好"]9P0M9
#3&.6! &?C## 杜克兵等!$%%"# 朱湘渝等!&?C$ $ %
受自身遗传特性的影响!要根据树种对各自适宜
的条件稍做调整%
花粉的萌发和花粉管生长是实现受精作用的关
键% 另外!花粉管的伸长具有典型的极性顶端生长
模式!因此!国内外不少报道均以花粉管作为模式体
系!对细胞运动"*5HD1#3&.6! $%%>$(顶端或极性生
长"(01D#3&.6! $%%## .DD#3&.6! $%%C$(囊泡运输(细
胞骨架变化及信号传导 "RM0U5 #3&.6! $%%%# v9A9P
#3&.6! $%%#$(细胞壁的力学特性"WDF
粉能否正常萌发和花粉管能否正常生长则是进行上
述各项研究的重要前提% 目前!还未见关于小黑杨
花粉萌发液体培养基的相关报道% 本研究首先对蔗
糖(l8R\8((9(1$(温度( Ol值等进行了单因子试
验!确定了液体培养各因素的梯度范围# 然后利用
正交试验设计!探讨小黑杨花粉离体萌发的最适液
体培养基配方!以及适宜的培养温度和 Ol值!优化
了液体培养基的组分!找出小黑杨花粉离体萌发的
最适培养条件# 同时对花粉萌发的动态过程进行了
细胞学的观察% 本研究为小黑杨的杂交育种及花粉
培养等研究提供理论依据%
&7材料与方法
@?@A花粉材料
$%%? 年 ! 月 &! 日采集东北林业大学校园内
小黑杨含苞待放的雄花枝!进行修剪!每个枝条叶
芽保留 $ j8 个!不好的花芽剪掉!然后进行水培!
室温"&" t&$c% > 天后开花!收集盛花期当天的
花粉!室温自然晾干 $! j!C @!贮藏于 B$% c冰箱
备用%
@?>A试验设计及方法
&2$2&7花粉的离体萌发7小黑杨花粉萌发采用液
体培养法!液体培养基主要成分& 蔗糖(l8R\8(
(9(1$ % 试验设计& &$单因素试验& 为摸索花粉萌发
的基本条件!对蔗糖(l8R\8((9(1$(温度及 Ol进行
单因素试验"表 &$# 除了温度因子!其他因子的试
验均在 $% c下进行# 除蔗糖因子外!其他因子试验
在 &%% H’.B&的蔗糖浓度下进行% $$正交试验& 在
单因素试验的基础上!为探讨花粉萌发和花粉管生
长的最佳培养条件!采用 > 因素 ! 水平的正交试验%
共配置 &# 个组合!每个组合 8 个重复%
将贮存于 B$% c冰箱的花粉转移至 > c!将花
粉平摊于小培养皿内!再将小培养皿放入盛适量水
的稍大的培养皿中吸水复苏 $ @!在双孔凹型玻片孔
内滴入 %2%C A.的培养液!用解剖针将复苏后的花
粉点入培养液中! 将玻片放入保湿的培养皿内!暗
培养 " @% 摸索出最佳培养条件后大量培养时!可将
> AH花粉经 8%% 目的不锈钢网均匀地撒在 > A.液
体培养基中% 利用 _^’T$2%% 对试验数据进行方差
分析%
表 @A单因素试验的梯度设计
C%1D@AI,E,.5,(’-)"*(’)-.,*%80"&’%.,F$,&’#,)0(
因素 S9N<0M; 水平 .DTD1;
蔗糖 ’4NM0;De"H’.B& $ % >% &%% &>% $%%
l8R\8 e"AH’.
B& $ % &% $% 8% !%
(9(1$ e"AH’.
B& $ % $% !% #% C%
温度 ,DAODM9<4MDec &> &C $& $! $"
Ol >2% >2> #2% #2> "2%
&2$2$7花粉萌发率的观察和统计7在花粉培养 &!
$!!!#!"!? @ 时分别取样进行观察!统计花粉的萌发
率% 萌发率 h"萌发的花粉数e总的花粉数 $ g
&%%d% 每个组合重复 8 次!每次所统计的花粉粒数
目不少于 8%% 粒%
&2$287花粉细胞的荧光染色及观察7 -^_)为
!b!# B二脒基 B$ B苯基吲哚 " !b! #X:F9AF:F50X$X
O@D5Q1F5:01D$!是一种能够与 +^-强力结合的荧光
染料% 对小黑杨成熟花粉粒进行 -^_)染色& 用离
心机旋下液体培养的花粉细胞!弃上清# 用 -^_)B
甲醇初染"工作浓度 & #H’A.B&$!旋下细胞!弃染色
液# 用 -^_)B甲醇重悬细胞!8" c温育 &> AF5# 旋
下细胞!弃染色液# 加 _R’ 重悬细胞# 制片!在荧光
显微镜"G*)’’ -YF0;‘0O !%$下观察拍照!最大的激
发和发射波长分别为 8>C! !#& 5A!整个过程要注意
避光% 花粉萌发的动态过程在光学显微镜下观察%
"8
林 业 科 学 !" 卷7
$7结果与分析
>?@AY 个单因素对小黑杨花粉萌发的影响
单因素试验结果表明& 蔗糖(l8R\8((9(1$(温
度(Ol值 > 个单因素方差分析均表现差异极显著
")q%2%&$% 如图 & 所示!总体的趋势是随着蔗糖(
l8R\8((9(1$浓度的增加!温度和 Ol值的升高!花
粉的萌发率先增后减% 蔗糖浓度为 % 时!花粉几乎
无萌发# 当蔗糖质量浓度增至 &%% H’.B&时!萌发率
达到最高# &%% H’.B&时显著下降% l8R\8 质量浓
度为 &% j$% AH’.B&时!萌发率显著高于对照# &%
AH’.B&时萌发率最高# !% AH’.B&时萌发率和对照
差异不显著")q%2%>$% (9(1$ 质量浓度为 $% j!%
AH’.B&时!萌发率显著高于对照# $% AH’.B&时萌发
率最高!但与前者差异不显著 ")q%2%>$# 当质量
浓度增至 #% AH’.B&时!萌发率低于对照% 温度为
&> c时!花粉萌发率极低# 当温度提高到 $> c时!
花粉萌发率达到最高# 8% c时!花粉萌发的速度明
显加快!但萌发率显著降低% 当 Ol为 #2% 时!萌发
率显著高于对照# Ol为 #2> 时!萌发率最高!但与
Ol为 #2% 时差异不显著 ")q%2%&$# 当 Ol增至
"2% 时!萌发率显著下降% 根据单因素试验得出小
黑杨花粉萌发的最适条件为& 蔗糖 &%% H’.B&!
l8R\8 &% AH’.
B&!(9(1$ $% j!% AH’.
B&!温度
$> c!Ol#2% j#2>%
图 &7蔗糖(l8R\8 ((9(1$ (温度和 Ol值
> 个单因素对小黑杨花粉萌发率的影响
SFH6&7,@DDLDN<;0L;F5H1DL9N<0MF91;4NM0;D! l8R\8 ! (9(1$ !
S0M<@DT914D0LD9N@ L9N<0MF91LM0ALFTD1DTD1:D;FH5! MDLDM<0,9K6&6
>?>AY 因子正交试验对小黑杨花粉萌发的影响
在单因子试验基础上! 为寻求蔗糖(l8R\8(
(9(1$(温度和 Ol 值单因子的最佳组合! 进行
.&#"!
>$正交试验 "表 $$% 对表 $ 中数据进行方差
分析!结果表明!> 个因子均对小黑杨花粉萌发具有
极显著的影响& 蔗糖 6h& &>C2C%!)q %2%&#
l8R\8 6h& %&828%! )q%2%&# (9(1$ 6h"!%2$C!
)q%2%&# 温度 6h& $$!28C! ) q %2%&# Ol值
6h"##2&%! )q%2%&% 极差分析得出!> 因素对小
黑杨花粉萌发的影响为& 温度 r蔗糖 rl8R\8 r
777
表 >A小黑杨花粉在正交试验中的萌发情况
C%1D>AP,&#’)%0’")8")5’0’")("*!3&/2%0/Z!30/4+( $".,)’)"&04"-")%.5,(’-),F$,&’#,)0
试验号
+06
蔗糖
’4NM0;De
"H’.B& $
(9(1$ e
"AH’.B& $
l8R\8 e
"AH’.B& $
温度
,DAODM9<4MDe
c
Ol
萌发率
WDMAF59
显著水平
’FH5FLFN95<1DTD1
>d &d
& >% &% &% &C >2% &2>! @ )
$ >% $% $% $& >2> ?2C" N (
8 >% 8% 8% $! #2% !2$8 H W
! >% !% !% $" #2> $2$# @ l)
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&> $%% 8% $% $" >2% !28> H W
&# $%% !% &% $! >2> >2C" L S
C8
7第 # 期 赵丽娟等& 小黑杨花粉离体萌发和细胞学分析
(9(1$ rOl% 正交试验平方和比较分析的结果表
明& 蔗糖各种浓度下的花粉萌发率以 &>% H’.B&最
高!(9(1$ 以 !% AH’.
B&最高!l8R\8 以 $% AH’.
B&最
高!温度各个梯度下的花粉萌发率以 $& c最高!Ol
以 #2% 最高% 由此推论 > 个因子最适培养条件为&
蔗糖 &>% H’ .B& f(9(1$ !% AH’ .
B& fl8R\8 $%
AH’.B&!温度 $& c!Ol值 #2%% 这个组合在正交试
验中已经出现!是第 &$ 个处理组合!用该培养条件
进行培养时!花粉的萌发率达到 !#2$8d!而且花粉
管生长良好! 无异常现象%
>?BA小黑杨花粉及萌发动态的观察分析
通过光学显微镜观察小黑杨成熟花粉的离体萌
发过程% 用正交试验筛选出的第 &$ 组处理来培养
花粉!分别在暗培养了 &!$!!!#!"!? @ 时取样!统计
萌发率% 当培养到 & @ 的时候!花粉粒已经吸水膨
大!进入萌动状态!极个别的花粉已经微微伸出花粉
管!此时的花粉在形态上没有明显的改变!但这时细
胞内可能已经发生了生理生化的改变# 当培养到
$ @的时候!花粉的萌发率达到 &%288d!花粉管的长
度平均达到 8% j>% #A# 随着培养时间的延长!
花粉萌发率逐渐提高!花粉管不断伸长!到 # @ 时花
粉萌发率显著提高# 从 # j? @! 萌发率的增长趋于平
缓!此时花粉管的平均长度 $%% j8%% #A!花粉管的
生长状态良好"图 $$% 通过整个动态过程的观察!可
以获悉& 如果收集花粉管供研究使用!培养到 " @ 左
右就可以了!萌发率好的情况能达到 "%d以上%
图 $7小黑杨花粉萌发过程的细胞学观察
SFH6$7(Q<010HFN910K;DMT9
*6吸水花粉粒# S6萌动的花粉粒# W6萌发的花粉粒# lBm6花粉管生长过程%
-! R! (6_01D5 HDMAF59
熟花粉粒!利用紫外光波长的光线激发!观察到小黑
杨成熟花粉粒呈圆球状!属 $ B细胞型!& 个大的营
养细胞和 & 个小的生殖细胞% 但在试验中也观察到
有 8 B细胞型的花粉粒存在!即含有 & 个营养细胞 $
个精细胞!但所占比例很低!统计 & >%% 多个细胞!
8 B细胞型的花粉大约占 %2%C?d"图 8$%
87结论与讨论
B?@A培养基组分对小黑杨花粉萌发的影响
蔗糖是花粉粒萌发及花粉管壁合成的主要营养
物质!又是参与花粉代谢与跨膜运输的碳源!在培养
?8
林 业 科 学 !" 卷7
图 87小黑杨成熟花粉粒的 -^_)荧光观察
SFH687 -^_)L140MD;ND5<0K;DMT9
-! R分别为普通光和 -^_)荧光下的成熟花粉粒%
-! R9MDKMFH@
性"SDF#3&.6! $%%8$% 在体外萌发过程中!花粉中储
存的营养物质对蔗糖浓度的调控非常重要!所需要
的蔗糖浓度随花粉所储存的营养物质发生变化
"SDM4I95 #3&.6! $%%!$% 蔗糖单因子和在正交试验
中的结果均表明!蔗糖对小黑杨花粉萌发有极显著
的影响")q%2%&$% 在培养基里未加蔗糖时!小黑
杨花粉几乎不萌发!蔗糖质量浓度为 >% H’.B&时!
很多花粉壁破裂!花粉中的内容物被析出# 在 % j
&>% H’.B&的质量浓度范围内!随着蔗糖浓度的增
加!花粉的萌发率也逐渐提高!当质量浓度为 &%% j
&>% H’.B&时!花粉管生长健壮!花粉的内外渗透压
平衡!维持了花粉正常的生活力% 小黑杨花粉萌发
最适的蔗糖质量浓度为 &>% H’ .B&!]FN@DM等
"$%%"$的研究也发现 &>d的蔗糖溶液为最优萌发
条件% 当蔗糖质量浓度为 $%% H’.B&时!有近 "%d
的细胞发生质壁分离% 因而蔗糖浓度过高会抑制花
粉萌发!这与唐菖蒲 "黄蓓丽等!$%%? $(梨 ")0*=7
E0*%4+.%&$"张绍铃等!$%%>$(小麦"C*%3%-=9I%,=9$
"朱展望等!$%%"$花粉萌发的试验结果一致%
l8R\8 能增加糖的吸收(运转和代谢!促进构
成花粉管壁的成分果胶物质的合成 "田翠婷等!
$%%"$% 一般在自然条件下!花粉自身硼的含量是
不足的!往往需要由柱头和花柱内的硼来补偿%
Z95H等"$%%8$认为硼离子浓度不足会降低花粉的
萌发和阻碍花粉管生长!而且会使花粉管的形态异
常% l8R\8 单因子和正交试验的结果均表明!
l8R\8 对小黑杨花粉萌发具有极显著的影响% 硼
是小黑杨花粉萌发必需的一种营养物质!对花粉的
萌发有显著的促进作用!小黑杨花粉萌发适宜的
l8R\8 质量浓度为 $% AH’.
B&% 不同植物种类的花
粉萌发和生长所需的最适 l8R\8 浓度不同!如核桃
的最适 l8R\8 质量浓度为 &% AH’.
B& "吴开志等!
$%%C$!风信子适宜的 l8R\8 质量浓度为 $% j8%
AH’.B&"李玉萍等!$%&%$%
离体培养时花粉萌发需要适当的外源钙!缺钙
或钙浓度过高都会导致花粉萌发和花粉管生长受阻
"龚明等!&??># ’45 #3&.6! $%%&$% 姚成义等"$%%!$
认为外源 (9$ f可能通过花粉管上的钙通道调节花
粉管内的动态来影响花粉管的生长!尤其在花粉管
的极性(顶端和定向生长过程中! (9$ f过高时!由于
牵拉型的 (9$ f通道受到伤害!致使花粉管生长受到
抑制% 在本研究中!(9(1$ 单因子和正交试验的结
果均表明!(9(1$ 对小黑杨花粉萌发具极显著的影
响% 小黑杨花粉萌发适宜的 (9(1$ 质量浓度为 !%
AH’.B&!当 (9(1$ 质量浓度达到 #% AH’.
B&时!花粉
的萌发率低于对照% 由此看来!小黑杨花粉细胞内
游离钙较少!补充一定的外源钙!可促进花粉萌发和
花粉管生长# 但过高浓度必定抑制花粉的萌发和花
粉管的生长% 培养基中的硼和钙是相互作用的!在
缺硼培养过程中!花粉管胞质 (9$ f的浓度发生变
化!并破坏花粉管顶端的 (9$ f梯度!最终抑制了花
粉管的伸长"田翠婷等!$%%"$%
B?>A温度和 $[值对小黑杨花粉萌发的影响
Ol值和培养温度对花粉萌发和花粉管生长都
有显著的影响% 不同植物最适的 Ol值和培养温度
存在差异% 凯特杏")*=’=7&*9#’%&-& .m9萌发的最适 Ol #2%!最适温度 $% c "黄家兴等!
$%%C$# 梨花粉萌发的适宜 Ol #2> "张绍铃等!
$%%>$# 陆地棉"[+770E%=9 "%*7=3=9$花粉萌发的适
宜温度 8$ c "m9‘95F#3&.6! $%%> $!果梅 ")*=’=7
9=9#$花粉培养的适宜温度 $> c "杜玉虎等!
$%%#$% 单因素和正交试验结果表明!Ol值及培养
温度都对小黑杨花粉的萌发有极显著的影响% 小黑
杨花粉萌发的最适 Ol#2%!当 Ol"2% 时!花粉的萌
发率急剧下降% 小黑杨花粉萌发最适宜温度为
$& c!此温度与小黑杨授粉期的外界温度接近!这
与前人对杨树花粉离体萌发培养温度的研究结果相
近"朱湘渝等!&?C$# 杨志敏等!&??%$% 过高或过低
的 Ol值和温度都不利于小黑杨花粉的萌发和
生长%
B?BA小黑杨成熟花粉粒的观察结果分析
利用 -^_)对小黑杨成熟花粉的核进行染色!
观察结果显示小黑杨的成熟花粉是 $ B细胞型花
粉!含有 & 个大的营养细胞和 & 个小的生殖细胞!这
是由于小孢子有丝分裂过程中纺锤体不对称而形成
%!
7第 # 期 赵丽娟等& 小黑杨花粉离体萌发和细胞学分析
不均等分裂的结果% 营养细胞内含大量淀粉(脂肪
等物质!营养细胞以后与花粉管的生成和生长有关#
而生殖细胞的作用是产生 $ 个精子细胞!直接参与
生殖% 在双细胞的花粉内形成了营养核包围生殖细
胞结构形式的雄性生殖单位 ",UD1#3&.6! $%%# $%
很明显!与营养核相比较!生殖核的染色质更加压
缩!精核仍旧保持着这种染色质压缩的本性% 在进
行观察的时候也看到了这种情况!绝大多数花粉的
$ 个核挨得很近!或是重叠在一起!但是生殖核的荧
光信号比营养核强!所以!也能分辨出是 $ 个核% 试
验中还观察到了较低比例的 8 B细胞型花粉粒! 可
能是环境因素影响造成的"如水培花枝时的温度为
&" c左右!温度稍低!正好赶上阴雨天!光线不足$!
真正的原因还需要进一步的分析研究%
参 考 文 献
艾鹏飞!罗正荣6$%%!2柿品种)禅寺丸花粉超低温保存研究6华中
农业大学学报! $8">$ & >#8 B>#>6
杜克兵!沈宝仙!许7林!等6$%%"2不同贮藏条件下杨树花粉活力变
化及隔年杂交授粉应用的可行性研究6华中农业大学学报! $#
"8$ & 8C> B8C?6
杜玉虎!张绍铃!姜雪婷!等6$%%#2果梅花粉离体萌发及花粉管生长
特性研究6西北植物学报!$#"?$ & &C!# B&C>$6
龚7明!曹宗巽6&??>2钙和钙调素对花粉萌发和花粉管生长的调
控6植物生理学通讯!8&">$ & 8$& B8$C6
黄蓓丽!耿兴敏!胡凤荣!等6$%%?2唐菖蒲花粉离体萌发的液体培养
基研究6安徽农业大学学报! 8#"!$ & >?8 B>?"6
黄家兴!吴7杰!安建东!等6$%%C2凯特杏花粉的离体培养及影响因
子分析6西北植物学报!$C"&$ & >$ B>C6
李玉萍!王春彦!汤庚国!等6$%&%2培养基组分和培养温度对风信子
花粉萌发的影响6江苏农业科学!"&$ & ## B#C6
罗凤霞!周7威!杨春起!等6$%%"2水仙花粉离体萌发温度和培养液
研究6辽宁林业科技!">$ & &8 B&!!$>!>"6
田翠婷!吕洪飞!王7锋!等6$%%"2培养基组分对青杄离体花粉萌发
和花粉管生长的影响6北京林业大学学报!$?"&$ & !" B>$6
王岚岚!游7捷!俞红强!等6$%%C2月季花粉离体萌发液体培养基组
分的优化6河北农业大学学报!8&"8$ & !$ B!>6
吴开志!肖千文!廖运洪!等6$%%C2核桃花粉离体萌发的培养基研
究6果树学报! $>"#$ & ?!& B?!>6
杨志敏6&??%2环境条件对杨树花粉生活力的影响6林业科学研究!8
"!$ & 8CC B8?$6
姚成义!赵7洁6$%%!2钙和硼对蓝猪耳花粉萌发及花粉管生长的影
响6武汉植物学研究! $$ "&$ & & B"6
张福平!王绿敏6$%%?2不同矿质营养对苦瓜花粉萌发和花粉管生长
的影响6广东农业科学!"C$ & "$ B"!6
张绍铃!陈迪新!康7琅!等6$%%>2培养基组分及 Ol值对梨花粉萌
发和花粉管生长的影响6西北植物学报! $>"$$ & $$> B$8%6
张亚利!尚晓倩!刘7燕6$%%#2花粉超低温保存研究进展6北京林业
大学学报! $C"!$ & &8? B&!"6
朱湘渝!王瑞玲6&?C$2杨树花粉生活力测定和贮藏试验6林业实用
技术!"8$ & & B!6
朱展望!张改生!牛7娜!等6$%%"2小麦花粉的离体萌发研究6麦类
作物学报! $""&$ & &$ B&>6
左丹丹! 明7军! 刘7春!等6$%%"2植物花粉生活力检测技术进展6
安徽农业科学! 8>"&#$ & !"!$ B!"!>6
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