全 文 ：第 49 卷 第 6 期
2 0 1 3 年 6 月
林 业 科 学
SCIENTIA SILVAE SINICAE
Vol. 49，No. 6
Jun．，2 0 1 3
doi:10．11707 / j．1001-7488．20130623
收稿日期: 2012 － 09 － 14; 修回日期: 2012 － 11 － 22。
基金项目: 湖北省自然科学基金项目(2011CDB115) ; 湖北省林业科学研究院青年基金水杉项目。
* 杨彦伶为通讯作者。
水杉基因组微卫星分析及标记开发*
张新叶1 张亚东1 彭 婵1 宋丛文2 杨彦伶1
(1．湖北省林业科学研究院 武汉 430075; 2．湖北生态工程职业技术学院 武汉 430200)
关键词: 水杉; 基因组; 微卫星; 标记开发
中图分类号: S718. 46 文献标识码: A 文章编号: 1001 － 7488(2013)06 － 0160 － 07
Analysis of Genomic Microsatellite Sequence and Development of SSR
Markers in Metasequoia glyptostroboides
Zhang Xinye1 Zhang Yadong1 Peng Chan1 Song Congwen2 Yang Yanling1
(1 ． Hubei Forestry Academy Wuhan 430075; 2 ． Hubei Ecology Vocational College Wuhan 430200)
Abstract: In this paper，the partial genome of Metasequoia glyptostroboides，a rare plant，was sequenced by using the
ROCHE-454 GLX high-throughput sequencing platform． Through sequence assembly and microsatellite finding，1 965
microsatellite loci were obtained in the sequence and the repeat unit length was 2 – 5 base pairs，by which 921 pairs of
primer were designed with the Primer 3 Plus software． Analysis of these microsatellite sequences showed that
tetranucleotide microsatellite was the most abundant，accounting for 38. 8% of the total repeat sequences，followed by
dinucleotide (31. 8% )，trinucleotide (22% ) and pentanucleotide (7. 4% ) in the M． glyptostroboides genome． Among
the dinucleotide repeat types，AG type was the most，accounting for 13. 9% of total repeats and 43. 8% of dinucleotide
repeats． In the eight trinucleotide repeat types，AAG type accounted for 8. 3% of total repeats and 37. 7% of trinucleotide
repeats，followed by ATG (23. 1% )，AAC (16. 7% ) and AAT (13. 0% ) ． The analysis of different lengths of the
microsatellite repeat unit showed that the most abundant variants were dinucleotide microsatellite and there were 23
different types of repeat lengths，followed by the tetranucleotide repeat (10 types)，trinucleotide repeat (8 types) and
pentanucleotide repeat (3 types) ． The validation of SSR markers showed that，87 pairs brought about clear products and
46 pairs had polymorphic products，accounting for 62. 14% and 32. 86% out of the 140 primer pairs，respectively．
Key words: Metasequoia glyptostroboides; genome; microsatellites; marker development
微卫星 ( microsatellite ) 又称简单重复序列
( simple sequence repeat，SSR)，是指以少数几个核苷
酸为单位，多次串联重复的 DNA 序列，其普遍存在
于真核生物及一些原核生物基因组中。基因组序列
中微卫星重复序列变异最快，在群体间和不同个体
间通常表现出很高的序列多态性，且呈共显性遗
传。由于重复单元重复次数的高度可变性及其侧翼
序列的相对保守性，微卫星作为一种分子标记被广
泛应用于物种的指纹鉴定、亲子谱系分析、群体遗传
结构分析、遗传图谱构建、比较基因组及分子标记辅
助育种等诸多研究领域(李淑娴等，2010)。
近年来，随着 EST( expressed sequenced tags)计
划在不同物种间的扩展和研究内容的深入，来源于
不同类型的基因表达序列信息在公共数据库中急剧
上升，使得 EST 序列成为开发不同物种 EST-SSR 标
记的主要来源 (张新叶等，2009)。这些 EST-SSR
标记来自于基因的编码序列，因此可成为控制基因
表达的功能分子标记(Choudhary et al．，2009)。但
相比于基因组 SSR，EST-SSR 的不足在于其更保守，
通常只存在于基因表达丰富区，而基因组 SSR 多态
性更高，且遍布于整个基因组中(Saha et al．，2006)。
而且，最近建立的 GA ( Illumina 公司)、SOLiD (ABI
公司)和 454(Roche 公司)等新一代测序平台在进
行高通量基因组测序的同时，体现出价格低、速度快
第 6 期 张新叶等: 水杉基因组微卫星分析及标记开发
等特点，短期内即可产生千兆碱基的数据量 (Holt
et al．，2008)，完全改变了先前开发基因组 SSR 标
记费时、费力且成本高的缺点。因此，新一代测序
技术将对那些没有足够数据库资源的物种开发大
量分子标记(包括基因组 SSR 标记)的工作发挥重
要作用。
水杉 (Metasequoia glyptostroboides)是世界珍稀
的孑遗植物，也是我国一级保护植物。水杉素有
“活化石”之称，它对于古植物、古气候、古地理和地
质学，以及裸子植物系统发育的研究均有重要意义。
尽管水杉在世界各国、各地区的引种栽培取得了巨
大成功(王希群等，2005)，但水杉的遗传学相关基
础研究较少。在水杉细胞遗传学方面，仅 1948 年
Stebbins 指 出 水 杉 的 染 色 体 2n = 22，后 来
Schlarbaum 等(1983)和 He 等(2004)进行确认; 在
水杉遗传多样性研究中，所有相关研究都是利用
RAPD、AFLP 及等位酶等随机标记 (李春香等，
1999; 李晓东等，2005; 李作洲，2003; Li et al．，
2005)，在开发水杉特异标记方面，仅 Cui 等(2010)
新开发了 11 个可利用的微卫星标记。
针对这一现状，本研究利用 ROCHE-454 GLX
高通量测序平台获得的水杉基因组序列，在序列拼
接的基础上，开展了微卫星序列查找，对水杉基因组
所含微卫星重复序列的特征和组成情况进行了分
析，并根据所发现的 1 965 个微卫星开发出 921 个
SSR 标记位点。本研究结果将对利用分子标记研究
水杉群体的遗传变异提供较丰富的标记资源，同时
对保存遗传学及分子标记辅助育种具有重要价值。
1 材料与方法
1. 1 微卫星序列查找及引物设计 水杉基因组测
序材料为武汉 九峰山附近 的 1 株 水 杉，利 用
ROCHE-454 GLX 测序仪进行序列测定，在序列组装
的基础上利用软件 SSRIT ( simple sequence repeat
identification tool)在线 ( http:∥ www． gramene． org /
de / seaches / ssrtool)对组装的序列进行 SSR 序列查
找。查找标准为: 重复次数分别不小于 5 次、4 次和
3 次的二核苷酸、三核苷酸、四核苷酸及更多核苷酸
重复序列。最后再应用引物设计软件 Primer 3 Plus
(http:∥www． bioinformatics． nl / cgi-bin / primer3plus /
primer3plus． cgi) 对含有 SSR 的水杉基因组序列进
行引物设计。SSR 引物设计原则为: 序列长度大于
100 bp; 引物长度为 18 ～ 25 bp; 退火温度 Tm值
55 ～ 60 ℃ ; GC 含量 40% ～ 60% ; PCR 扩增产物长
度为 100 ～ 300 bp(张新叶等，2009)。
1. 2 水杉基因组微卫星组成及序列长度变异分析
根据微卫星重复的序列特征不同，利用 EXCEL 表统
计分析 2 ～ 5 核苷酸重复类型所占比例，找出不同类
型微卫星中的优势重复单元，分析其碱基组成及频
率; 并对 2 ～ 5 核苷酸重复类型中不同 SSR 的分布
和长度变异情况进行分析，了解水杉基因组微卫星
长度多态性等相关信息。
1. 3 水杉基因组 SSR 标记初步验证 以武汉九峰
山附近随机采集的水杉叶片为植物材料，利用改进
的 CTAB 法进行基因组总 DNA 提取 ( Doyle et al．，
1987)。PCR 反应体系 15 μL: 10 μmol·L － 1 Tris-
HCl (pH 8. 3)，50 mmol·L － 1 KCl，2. 0 mmol·L － 1
MgCl2，0. 01% gelatin，0. 1 mg BSA，200 μmol·L
－ 1
dNTP ( Promega)，引物 2. 0 μmol·L － 1，Taq 聚合酶
(Takara)0. 5 U，10 ng 基因组 DNA。PCR 反应在仪
器 GenAMP 9700 ( ABI ) 上进行，反应程序采用
Touch-down PCR: 94 ℃ 5 min; 94 ℃ 30 s，59 ℃ 30
s(△ ℃ = － 1. 0 ℃ )，72 ℃ 30 s，9 个循环; 94 ℃
30 s，55 ℃ 30 s，72 ℃ 30 s，21 个循环; 72 ℃ 3
min; 4 ℃ 保存。PCR 产物检测采用琼脂糖凝胶(引
物初筛)和聚丙烯酰胺凝胶(引物复筛)进行。
2 结果与分析
2. 1 水杉基因组序列测定及微卫星序列查找 在
水杉 DNA 文库构建基础上，利用 ROCHE-454 GLX
测序仪进行序列测定，共得到 1 534 336 条序列，测
得水杉基因组 401. 01 Mb 的 DNA 序列，片段平均读
长为 261. 4 bp。利用 GS Assembler 软件对序列进行
了序列组装和拼接，共获得 28 459 个长度大于 100
bp 的 Contigs，最大的 Contig 长度为 49 762 bp，
Contig size 为 4 040 个，Contigs 平均长度为 290. 28
bp，平均 Contig size 为 15. 43 个。
由于微卫星扩增片段一般在 100 ～ 300 bp 之
间，这些 Contigs 适合用于微卫星标记开发。利用
SSRIT 软件要求及查找标准，在 28 459 个 Contigs 序
列中，共获得 2 ～ 5 核苷酸重复序列 1 965 个，没有
发现大于 5 个核苷酸的重复序列，其中二、三、四、五
核苷酸重复序列的数量分别为 625 个、432 个、762
个和 146 个。根据引物设计原则及 Primer 3 Plus 的
要求，共获得水杉基因组 SSR 引物 921 对，表 1 列
出了开发的部分引物的信息。
161
林 业 科 学 49 卷
表 1 本研究开发的部分水杉微卫星引物
Tab． 1 Partial genomic SSR primer information of Metasequoia glyptostroboides
Contig 名称
Contig name
重复单元
Motif
重复次数
Repeat
引物序列
Primer sequence
长度
Length / bp
退火温度
Tm / ℃
GC 含量
GC content
(% )
产物大小
Product
size / bp
contig1-4 ATAAA 4 F: CCATGGATGCTATGGCAAA 19 60. 4 47. 4 250
R: CGATGGGTATACTAGAAAAGAACGA 25 59. 9 40. 0
contig2-6 TTC 5 F: GGGAACAACCAGAATTGGAA 20 59. 8 45. 0 205
R: TCCAATATATCCCGGAACCA 20 60. 0 45. 0
contig3-1 AT 6 F: CTGGGCCACTAGACGATAGG 20 59. 7 60. 0 363
R: GGGCTTGAACCGATGACTTA 20 60. 1 50. 0
contig5-1 AT 6 F: ATACGAGCAATGCCATCTCC 20 60. 1 50. 0 249
R: ACCTGCTCCTAGCCATGAAA 20 59. 8 50. 0
contig8-2 TTTTG 3 F: GCTTTGAGCACCCACTATCA 20 58. 9 50. 0 201
R: ATCTTgGGcACAAAGCACA 19 60. 3 47. 4
contig72 AGA 4 F: AaCgAGGAGAAGATGGAGAAGA 22 59. 5 45. 5 211
R: CCTTGAGATGAAGGCAAAGG 20 59. 8 50. 0
contig80 AGA 7 F: CCAAGGCAATctGTTGGAAT 20 59. 9 45. 0 171
R: TCAACCATGCATTGTCACCT 20 60. 0 45. 0
contig194 ATTT 10 F: TTGTtGCTTGCCCATCTTAAT 21 59. 6 38. 1 458
R: CATGtCCCCAAAACATGACA 20 60. 2 45. 0
contig204 CCA 4 F: GCcAGTtGAGGAGCCAGtAG 20 60. 0 60. 0 225
R: GcagAATccGATGGCTAAaA 20 60. 2 45. 0
contig250-1 TCT 5 F: TTtCCCtcGAGTCCCTTTCT 20 60. 2 50. 0 241
R: CAGGTGAAtgCAAAcATTGG 20 60. 0 45. 0
2. 2 水杉基因组微卫星组成和相关特征分析 按
照微卫星重复序列结构的不同，可以分为精确型
SSR、非精确型以及复合型 SSR。精确型 SSR 是由 1
种串联重复序列以不间断的重复方式组成的单一重
复类型的微卫星(Weber，1990)。本研究仅对水杉
基因组中由 2 ～ 5 核苷酸重复构成的精确型 SSR 进
行分析，建立相关水杉基因组 SSR 数据库。
参考有关学者对重复序列单元分类的标准
(Jurka et al．，1995)，对本研究建立的水杉基因组
SSR 数据库中的重复序列进行分析。结果(表 2)发
现，以四核苷酸为重复单元的 SSR 含量最多，占总数
的 38. 8%，之后依次为二核苷酸(31. 8% )、三核苷酸
(22% )和五核苷酸(7. 4% )。其中，该数据库中的二
核苷酸重复微卫星只有 3 种类型，缺少 GC-CG 类型;
三核苷酸重复微卫星有 8 种，缺少 GGC-CGC 和 ACG-
TCG 类型; 但在四核苷酸和五核苷酸重复序列中，各
种不同重复单元类型丰富，四核苷酸中包含了 116
种，五核苷酸中包含了 88 种重复序列微卫星。
在二核苷酸重复类型中，AG 重复序列的数量
最多，总发现频率为 274 次，占所有发现重复序列总
数的 13. 9%，占二核苷酸重复类型的 43. 8%。在 8
种三核苷酸重复类型中，AAG 重复序列数量最多，
占总重复序列数的 8. 3%，占三核苷酸重复类型的
37. 7%，其次为 ATG ( 23. 1% )、AAC ( 16. 7% ) 和
AAT(13. 0% )，其他类型相对较少。四核苷酸和五
核苷酸重复类型较多，但不同类型所占比例相对较
小。图 1 显示了不同长度重复单元微卫星中各重复
单元的含量比例。
表 2 基因组 SSR 重复序列类型及相关统计信息
Tab． 2 Distribution of the genomic SSR based on the motif sequence
重复类型
SSR class
重复单元种类
Number of
repeat types
总发现频率
Total number of
observed repeats
百分比
Percentage
(% )
平均重复次数
Mean number
of repeats
最大重复次数
Max． number
of repeats
二核苷酸 Dinucleotide 3 625 31. 8 6. 53 86
三核苷酸 Trinucleotide 8 432 22. 0 4. 63 176
四核苷酸 Tetranucleotide 116 762 38. 8 3. 19 16
五核苷酸 Pentanucleotide 88 146 7. 4 3. 12 6
总计 Total 215 1 965 100
261
第 6 期 张新叶等: 水杉基因组微卫星分析及标记开发
图 1 不同长度重复单元微卫星中各重复单元含量比例
Fig． 1 Percentage of repeats in different types of microsatellites
图中每一个扇区分别对应不同的重复单元; 若对应单元频率≤0. 02，则合并在同一扇区内。Different repeats of microsatellites
are demonstrated in separate slices． If the corresponding percentage ≤0. 02，slices were combined for percentages．
进一步对含不同长度重复单元的水杉微卫星的
出现频率进行统计，结果表明(表 3)，二核苷酸重复
微卫星长度变异类型最丰富，有 23 种不同长度的重
复类型，其次是四核苷酸重复(10 种)、三核苷酸重
复(8 种)，变异类型最少的是五核苷酸重复，只出现
3 种不同长度的重复类型; 同时还表明，在 2 ～ 5 核
苷酸重复微卫星类型中，每种类型都有其占绝对优
势的不同长度的 SSR，在 2 ～ 5 核苷酸重复中，出现
频率最高的 SSR 分别占各自类型总频率的 60. 2%、
86. 6%、91. 1% 和 89. 0%，尤其在四核苷酸重复类
型中，重复 3 次的 SSR 出现频率高达 694 次，而重复
4 次的骤降为 47 次。表明水杉基因组微卫星序列
具有明显的物种特异性。
2. 3 水杉基因组 SSR 标记验证 在设计好的 921
对水杉基因组 SSR 引物中，随机选取 140 对引物进
行 PCR 扩增，其中分别含有二核苷酸、三核苷酸、四
核苷酸及五核苷酸重复单元。首先采用 1 个 DNA
样品对这 140 对引物进行初筛(图 2)，结果显示有
15 对引物没有扩增产物，占总比例的 10. 71%，有
38 对引物的 PCR 产物不清晰，其余 87 对引物有清
晰谱带，占合成引物总数的 62. 14%。然后利用 5
个不同的水杉 DNA 样品对初筛出的 87 对引物进行
多态性检验，结果显示(图 3)，有 46 对引物检测出
多态性，占初筛引物总数的 32. 86%，占复筛引物总
数的 52. 87%。
3 结论与讨论
由于水杉基因组信息资源的匮乏使其分子标记
开发受到严重制约，目前可查阅利用的水杉微卫星
标记仅有 11 对(Cui et al．，2010)，因此，通过快速高
效测序方法获得足够长度能覆盖基因组的序列信息
对全面开发 SSR 分子标记具有重要意义。本研究
完成了水杉基因组 400 Mb 以上的序列测定，获得了
150 余万条序列，而且经组装和拼接，获得近 3 万个
有效 Contigs，这些数据为水杉基因组微卫星序列查
找提供了可靠且丰富的来源，同时也保障了所开发
水杉基因组 SSR 标记的准确性，这一点在本研究结
果中得到了充分体现; 如本研究共在 28 459 个
361
林 业 科 学 49 卷
表 3 水杉基因组不同长度重复单元微卫星的变异
Tab． 3 Length diversification of the microsatellites in part
sequences of Metasequoia glyptostroboides genome
类型
SSR
class
长度
Length /
bp
重复次数
Number of
repeats
出现频率
Observed
frequency
百分比
Percentage
二核苷酸
Dinucleotide
10 5 376 60． 2%
12 6 108 17． 3%
14 7 42 6． 7%
16 8 29 4． 6%
18 9 14 2． 2%
20 10 14 2． 2%
22 11 6 1． 0%
24 12 9 1． 4%
26 13 2 0． 3%
28 14 4 0． 6%
30 15 4 0． 6%
32 16 2 0． 3%
36 18 2 0． 3%
38 19 2 0． 3%
40 20 2 0． 3%
42 21 2 0． 3%
44 22 1 0． 2%
46 23 1 0． 2%
50 25 1 0． 2%
58 29 1 0． 2%
60 30 1 0． 2%
104 52 1 0． 2%
172 86 1 0． 2%
三核苷酸
Trinucleotide
12 4 374 86． 6%
15 5 38 8． 8%
18 6 13 3． 0%
21 7 3 0． 7%
27 9 1 0． 2%
36 12 1 0． 2%
48 16 1 0． 2%
528 176 1 0． 2%
四核苷酸
Tetranucleotide
12 3 694 91． 1%
16 4 47 6． 2%
20 5 6 0． 8%
24 6 5 0． 7%
28 7 1 0． 1%
32 8 3 0． 4%
36 9 3 0． 4%
48 12 1 0． 1%
52 13 1 0． 1%
64 16 1 0． 1%
五核苷酸
Pentanucleotide
15 3 130 89． 0%
20 4 15 10． 3%
30 6 1 0． 7%
Contigs 序列中获得 2 ～ 5 核苷酸重复序列 1 965 个，
获得高质量的 SSR 引物 921 对，引物验证结果也充
分表明所开发 SSR 标记的高效性，在 140 对引物
中，约 90%的引物可以得到有效扩增。由于本试验
在验证标记时，为方便试验，统一设置了 PCR 条件，
没有针对每个引物的退火温度进行调整，因此，能得
到 62. 14%的高标准初筛结果和 32. 86% 多态性标
记比例，表明本研究标记开发的可行性和可靠性。
由于微卫星序列与基因组中的其他序列相比变
异频率较高，所以微卫星被认为是在基因组进化过
程中导致并维持数量性状变异的重要因素之一
(Tautz et al．，1986; Kashi et al．，1997)，因此，研究
基因组中的微卫星特征对于了解所研究物种的基因
组进化具有重要意义。越来越多的研究表明，基因
组中的微卫星具有重要的功能，包括基因调控、发展
和进化等各个方面。Gábor 等(2000)对 9 大类真核
生物基因组中微卫星的分布进行了分析，显示微卫
星主要分布在内含子区和基因间隔区，只有少部分
分布在外显子区。在原核生物和酵母的基因组中，
处于优势的重复序列类型是三碱基，而比它们更高
等的生物基因组中，则倾向于两碱基和单碱基重复
序 列 类 型。 在 Lawson 等 ( 2006 ) 对 拟 南 芥
(Arabidopsis thaliana)和水稻(Oryza sativa) 的基因
组微卫星分析中，发现两者都是三碱基重复序列最
丰富，其次是二碱基和四碱基重复序列。在杨树
(Populus) 基因组 ( Tuskan et al．，2004 ) 和火炬松
(Pinus taeda)基因组(Echt et al．，2011)中，微卫星
最丰富的是二碱基重复序列，然后是三碱基和四碱
基。而对本研究构建的水杉微卫星数据库的分析发
现，水杉基因组中的优势重复序列类型是四碱基重
复单元(38. 8% )，其次是二碱基(31. 8% )、三碱基
(22% )和五碱基 ( 7. 4% )。而且发现在火炬松
(Echt et al．，2011)和杨树(Tuskan et al．，2004)这 2
个木本植物基因组中，两者有相同的组成规律，最丰
富的二核苷酸类型都是 AT，其次是 AG，最丰富的三
核苷酸类型都是 AAT 和 AAG，最丰富的四核苷酸类
型是 AAAT，即处于优势数目的重复拷贝类型富含
A /T。但在本研究中，最丰富的二核苷酸类型是
AG，占二核苷酸重复类型的 43. 8%，其次是 AT
(37. 8% )和 AC(18. 4% )，且只有这 3 种类型，缺少
GC-CG 类型。在出现的 8 种三核苷酸重复类型中，
AAG 重复序列数量最多，占三核苷酸重复类型的
37. 7%，其次为 ATG ( 23. 1% )、AAC ( 16. 7% ) 和
AAT(13. 0% )。最丰富的四核苷酸类型是 TTAA，
占四核苷酸重复类型的 8. 8%。这些重复序列组成
特征明显不同于火炬松和杨树基因组相关组成。这
些差异充分表明不同物种基因组中，其微卫星序列
的组成特征不同，也同时表明水杉作为一种“活化
石”植物，有着其独特的基因组组成，与目前广泛研
究的模式植物拟南芥、水稻和杨树等的基因组存在
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第 6 期 张新叶等: 水杉基因组微卫星分析及标记开发
图 2 引物初筛电泳结果
Fig． 2 Primer screening by agarose gel electrophoresis using 1 DNA sample
1 － 24: 引物 The primer; M: The DNA marker．
图 3 引物多态性检测电泳结果
Fig． 3 Polymorphism detection of SSR primer by PAGE electrophoresis using 5 DNA samples
较大差异。
微卫星序列长度的分化情况反映了微卫星序列
获得(或失去)重复单元的速率，这一特征与微卫星
位点的多态性直接相关 (李淑娴等，2010)。根据
Temnykh 等(2001)对微卫星的分类: 长度 L≥20 bp
的 SSR 为第 1 类，12 bp ＜ L ＜ 20 bp 的为第 2 类，且
两类 SSR 相比，L≥20 bp 的 SSR 具有更高的多态
性。这一规律是 Weber(1990)最早于人类的微卫星
实验数据中发现，并已在很多生物体中得到证实。
第 2 类 SSR 由于片段长度较短，在滑链错配时可产
生的错配位点就会相对较少，故多态性不如第 1 类。
片段长度小于 12 bp 的 SSR 的突变率与其他序列没
有差别，呈随机变异趋势(阎毛毛等，2011)。本研
究对发现的 1 965 个微卫星长度进行分析发现，水
杉基因组序列所含微卫星在长度上存在极显著的变
异，发现微卫星长度从 10 ～ 528 bp 不等，微卫星平
均长度为 13. 32 bp。其中长度 L≥20 bp 的微卫星
仅占 5. 1%。这一结果显示水杉基因组序列中的微
卫星在进化过程中可能受趋同选择的影响，从而使
这些微卫星在较短长度的区间内大量富集。通过对
含不同长度重复单元的微卫星的长度变异情况看，
这些微卫星的长度变异与所含重复单元的长度大致
成反比，微卫星的长度变异程度随着重复单元长度
的增加而降低，该结果与油茶基因组微卫星特征分
析的结果相似(史洁等，2012)。总体而言，在本研
究构建的水杉微卫星数据库中，五核苷酸重复微卫
星理论多态性最低，而二核苷酸重复微卫星理论多
态性最高。
水杉基因组大小目前还没有确定，本研究完成
的 400 Mb 的水杉基因组序列信息将成为水杉基因
组研究的重要基石，基于这些序列开发的高质量微
卫星标记将使水杉基因组研究更加深入，并将为水
杉及相关物种的分子研究提供有效的遗传工具，在
更多领域更深层次的研究中得到更广泛的应用。
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(责任编辑 徐 红)
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