全 文 ：第 wv卷 第 w期
u s s z年 w 月
林 业 科 学
≥≤Œ∞‘׌„ ≥Œ∂ „∞ ≥Œ‘Œ≤„∞
∂²¯1wv o‘²1w
„³µqou s s z
石榴溃疡病害病原学研究 3
刘会香t ou 梁 军u 赵嘉平u 王 媛u 吕 全u 张星耀u
kt1山东农业大学植物保护学院 泰安 uztst{ ~ u1 中国林业科学研究院森林生态环境与保护研究所
国家林业局森林保护学重点实验室 北京 tsss|tl
摘 要 } 对石榴溃疡病害 v菌株所引起的病害症状 !病原菌的形态学特征 !培养学特性 !生理学特性及分子遗传
多样性等方面进行比较研究 ∀结果表明 }石榴疮痂病与石榴果实上增生型症状的病原菌具有更近的亲缘关系 o应
为同一病原菌引起 o推测该病原菌首先侵染石榴侵染枝干 o然后侵染石榴的花萼和果实 ~而石榴干腐病病原菌主要
侵染枝干 o是否侵染果实及引起症状特征需要继续进行研究和鉴定 ∀
关键词 } 石榴 ~疮痂病 ~干腐病 ~果实病原菌 ~菌株
中图分类号 }≥zyv1t 文献标识码 }„ 文章编号 }tsst p zw{{kusszlsw p ssxw p sx
收稿日期 }ussy p sz p uy ∀
基金项目 }国家自然基金项目/树木溃疡病病原真菌类群的遗传多样性与分子系统研究0kvsuzts{wl和山东省科技厅项目/无公害石榴主要
枝干病害系统治理技术研究与开发示范0ksuuststszl的部分研究内容 ∀
3 张星耀为通讯作者 ∀
Στυδψ Ον τηε Ετιολογψ οφ Ποµεγρανατε Χανκερ ∆ισεασεσ
¬∏‹∏¬¬¬¤±ªtou ¬¤±ª∏±u «¤²¬¤³¬±ªu • ¤±ª≠∏¤±u | ±∏¤±u «¤±ª÷¬±ª¼¤²u
kt1 Χολλεγε οφ Πλαντ Προτεχτιον o Σηανδονγ Αγριχυλτυραλ Υνιϖερσιτψ Ταιαν uztst{ ~
u1 Ρεσεαρχη Ινστιτυτε οφ Φορεστ Εχολογψo Ενϖιρονµενταλανδ Προτεχτιον oΧΑΦ Κεψ Οπεν Λαβ q οφ Φορεστ Προτεχτιον οφ Στατε Φορεστρψ Αδµινιστρατιον Βειϕινγ tsss|tl
Αβστραχτ} ׫¨ ¶¼¶·¨°¬¦µ¨ ¤¯·¬²±¶«¬³¤°²±ª·«¨ ·«µ¨¨¶·µ¤¬±¶²©³²°¨ ªµ¤±¤·¨ ¦¤±®¨µ§¬¶¨¤¶¨¶o·«¨ §¬¶¨¤¶¨ ¶¼°³·²°o³¤·«²ª¨±
°²µ³«²¯²ª¼o¦∏¯·∏µ¨ ¤±§³«¼¶¬²¯²ª¬¦¤¯ ¦«¤µ¤¦·¨µ¶¤±§°²¯ ¦¨∏¯¤µ§¬√¨ µ¶¬·¼ º¤¶¶·∏§¬¨§¥¼¦²°³¤µ¬¶²±q׫¨ ³²°¨ ªµ¤±¤·¨¶¦¤¥¤±§
©µ∏¬·¬±ª³¤·«²ª¨± ¤µ¨ ¥¨ ²¯±ª¨§·²¶¤°¨ ³¤·«²ª¨± ¤±§§¨§∏¦¨§·«¨ ³¤·«²ª¨±¬±©¨¦··²³²°¨ ªµ¤±¤·¨¶·¨° ²µ¯¬°¥¤·©¬µ¶·¤±§¬±©¨¦·
¦¤¯¼¦¨¶¤±§©µ∏¬·¶¨¦²±§o·«¨ ³¤·«²ª¨± ²©³²°¨ ªµ¤±¤·¨¶·¨°µ²·°¤¬±¯¼¬±©¨¦·¶·¨° ²µ¯¬°¥oº«¨·«¨µ·«¨ ³¤·«²ª¨±¬±©¨¦·©µ∏¬·¤±§
³µ²§∏¦¨ ¶¼°³·²° ²µ±²·¬¶±¨ §¨¨§·²¦²±·¬±∏¨ ¶·∏§¼¬±ª¤±§¬§¨±·¬©¬¦¤·¬²±q
Κεψ ωορδσ} ³²°¨ ªµ¤±¤·¨~¶¦¤¥~¶·¨°µ²·~©µ∏¬·¬±ª§¬¶¨¤¶¨ ~¶·µ¤¬±¶
石榴k Πυνιχα γραντυµl是山东省枣庄市重要的经济林树种 o是当地农民脱贫致富的经济支柱 ∀近年来石
榴病害严重发生 o制约着当地石榴产业的发展 ∀据文献报道 o影响我国石榴发展的主要病害有石榴疮痂病 !
石榴干腐病和石榴褐斑病等k谌多仁等 ot|{xl ∀但笔者发现 }发生于枣庄石榴枝干和果实上的溃疡类病害 o
虽然出现了类似于疮痂和干腐的症状 o但病原与以前报道的不同 o为石榴新病害 ∀笔者从 t||y年起对该类
病害的病原进行了研究k刘会香等 ousst¤~usst¥l o发现其病原均为 ∆οτηιορελλα属真菌 o但病害症状差异很
大 ∀为搞清病害病原菌与症状的关系 o深入研究这 v种病原菌的系统关系 o从而为病害的防治提供科学依
据 o笔者就石榴疮痂病 !石榴干腐病及果实上的病原菌进行了系统研究 ∀
t 材料与方法
111 材料来源
t||y ) usss年每年春 !夏 !秋 !冬季分别从枣庄采回石榴疮痂病病枝 !石榴病果 !石榴干腐病病枝并进行
病原菌分离 !培养 ow ε 保存待用 ∀
112 方法
t1u1t v菌株形成病害症状的比较研究 采用定期采样的方法 o详细观察和记载病斑发生的部位 !症状出现
的时间 !病斑的扩展规律 !特点等 ∀
t1u1u v菌株病原菌形态学比较研究 采用室内外相结合的方法 o研究病原菌的子实体特征 o包括分生孢子
器和分生孢子的大小 !颜色形状等分类学特征 ∀
t1u1v v菌株培养性状及生理学特性的比较研究 tl不同温度对 v菌株培养学性状及生长的影响 将已纯
化培养 v ∗ x §的 v菌株接种于 °⁄„培养基上 o分别置于 x !ts !tx !us !ux !vs !vx !ws ε {个梯度的恒温箱中培
养 o每天观察 v菌株菌丝的扩展速度 !菌丝的茂密程度 !菌落的颜色变化等特征 ∀重复 x次 ∀
ul不同 ³‹值对菌丝体生长的影响 用 s1t °²¯#pt ‘¤’‹和 s1t °²¯#pt ‹≤将培养基值分别调节为
v !w !x !y !z !{ !| !ts共 {个 ³‹梯度 o将纯化培养 v ∗ x §的菌株接种其上后 o置于 ux ε 的恒温箱中培养 o每天
观察菌落的生长状况 ∀重复 x次 ∀
vl不同碳 !氮源对菌丝体生长的影响 以利里k¬¯¯¼l和贝奈特k…¤µ±¨·l的半组合培养基做基础培养基 o
分别用麦芽糖 !乳糖 !蔗糖 !§p果糖 !淀粉 x种碳源将半组合培养基中的葡萄糖置换 o制成各种不同碳源培
养基 o然后将已培养于 °⁄„培养基中 v ∗ x §的菌株接种于各种不同碳源培养基上 o置于 ux ε 的恒温箱中培
养 o每天观察菌落的生长状况 ∀不同氮源培养基分别用硝酸铵 !硫酸铵 !硝酸钾 !牛肉膏 !蛋白胨与半组合培
养基中的天门冬素置换 o具体方法同碳源试验 ∀所得数据用 ≥°≥≥ tu1s软件进行处理 ∀
t1u1w v菌株的 • „¶2°≤• 比较研究 tlv菌株的 ⁄‘„提取 将 °≥„液体培养的 v菌株培养 ts §后收集菌
丝 o菌丝经灭菌水冲洗 v次洗净后保存于 p us ε 备用 ∀ ⁄‘„提取方法主要参考 «∏等kt||vl的方法 o并做部
分改进k张星耀等 ot|||l ∀
表 1 Ρ ΑΜσ引物及退火温度
Ταβ .1 Τηε πριµερσ οφ Ρ ΑΜσ ανδ ιτσ αννεαλινγ τεµ περατυρε
引物
°µ¬° µ¨¶
序列 ≠
≥¨´ ∏¨ ±¦¨
退火温度 „±±¨ ¤¯¬±ª
·¨°³¨µ¤·∏µ¨Πε
kŠ×l ν xχ≠‹≠kŠ×lxŠ ws
k≤Š„l ν xχ⁄‹…k≤Š„lx ys
k≤≤„l ν xχ⁄⁄…k≤≤„lx ws
kŠ„„l ν xχ‹……kŠ„„lx vx
k≤„„l ν xχ…⁄…k„≤„lx w|
kŠ„l ν xχ…‹…kŠ„lxŠ ws
tv xχŠ„ŠŠŠ×ŠŠ≤ŠŠ××≤× w{
≠任选碱基为 }…kŠ o×或 ≤l o⁄kŠ o„或 ×l o‹k„ o×或 ≤l o≠kŠ o„或
≤l ∀ ׫¨ ©²¯ ²¯º¬±ª§¨¶·¬±¤·¬²± ¤µ¨ ∏¶¨§©²µ§¨ª¨ ±¨ µ¤·¨ ¶¬·¨¶}…kŠ o× ²µ≤l o ⁄
kŠ o„ ²µ×l o ‹k„ o× ²µ≤l o ≠kŠ o „ ²µ≤l q
ul• „¶2°≤• 扩增及产物电泳 选用的通用微
卫星引物序列及其退火温度见表 t ∀引物由北京九
发金贝生物技术有限公司合成 oפ´ 酶购自鼎国生
物技术有限公司 ∀ • „¶2°≤• 反应体系见表 u ∀反
应体系中最后加入 us ˏ矿物油以防止反应液蒸
发 ∀扩增条件为 |w ε 变性 u °¬±o|w ε 变性 vs ¶o退
火 vs ¶o延伸 zu ε wx ¶为 t个循环 o共 vx次循环 o
最后 zu ε 延伸 x °¬±∀扩增反应在 Š¨ ±¨ „°³ °≤•
≥¼¶·¨° |zss °≤• 仪上进行 ∀每一引物重复 v次 o以
不加模板 ⁄‘„为阴性对照 ∀扩增产物在 x h和 { h
的聚丙烯酰胺凝胶及 tus ∂ 电压下进行电泳 o采用
硝酸银染色法显色 ∀
表 2 Ρ ΑΜσ2ΠΧΡ 扩增反应体系(25 ΛΛ)
Ταβ .2 Τηε ρεαχτιϖε σψστεµ οφ Ρ ΑΜσ2ΠΧΡ(25 ΛΛ)
反应成分
• ¤¨¦·¬²± ¦²°³²±¨ ±·
浓度
≤²±¦¨±·µ¤·¬²±¶
体积
∂²¯∏° Шˏ
ts ≅ °≤• …∏©©¨µ t ≅ u1x
≈ ª u n u °°²¯#pt u1x
§‘×°¶ s1u °°²¯#pt s1x
פ´ 酶
פ´ ⁄‘„ ³²¯¼° µ¨¤¶¨ t ˜#kux ˏl
pt s1u
引物 °µ¬° µ¨ s1w Λ°²¯#pt u1s
模板 ⁄‘„
× °¨³¯¤·¨ ⁄‘„ ts ±ª#kux ˏl
pt x1s
水 • ¤·¨µ tu1v
总体积
ײ·¤¯ √²¯∏°¨ ux1s
vl• „¶2°≤• 产物电泳数据的处理 将聚丙烯酰胺凝胶
电泳图谱输入计算机 o利用凝胶分析软件 …¤±§≥¦¤±x1s
kŠ¯ ¼®²o¬±¦qt||{l对电泳条带进行识别 o小于 ts ¥³被认为属
于同一条带 ∀根据某一条带在样品中出现和不出现 o分别赋
值为/ t0和/ s0 o得到试验菌株的扩增谱带二态数据矩阵并根
据 ‘¨¬kt|{zl的方法计算相关菌株的相似系数 Ι oΙ € u ΝιϕΠk Νι
n Νϕl o其中 Νι !Νϕ为两样品的总显示带数 oΝιϕ为两样品共有
的显示带数 o距离 ∆ € t p Ι ∀用 ‘k±¨ ¬ª«¥²µ2­²¬±¬±ªl分别对所
有菌株进行聚类 ∀相似系数的计算和聚类分析均由
‘·¶¼¶u1su分析软件完成 ∀
u 结果与分析
211 病害症状的比较
u1t1t 石榴干腐病 症状出现较早 o一般出现在 v月底至 w月初 o病斑多发生在 t年生或多年生枝干部的
皮孔或伤口处 o初期发病部位松软 o病斑较小 o圆形 o下陷 o颜色较深 o后期病斑沿树体纵向扩展 !下陷 o并与健
康组织间有明显边缘 o小枝常出现枯死 ∀其上后密生小点k图 t¤l ∀
u1t1u 石榴疮痂病 症状出现较晚 o一般在 x !y月份 o病斑多发生在 u年生以上枝干部的皮孔处 o而在 t年
生枝条上比较少见 ∀病斑初为圆形或椭圆形 o隆起 o而后 o病斑逐渐扩大 o形成不规则形 o大小不一 o严重时多
个病斑连在一起 o并使表皮发生龟裂 o粗糙坚硬 o甚至露出韧皮部或木质部 o致使树体生长势衰弱k图 t¥l o但
不出现坏死症状 ∀
xx 第 w期 刘会香等 }石榴溃疡病害病原学研究
u1t1v 石榴果实部位症状 病斑一般在花期的花萼处或其他部位出现黑色的圆形小点 o随后随着果实的增
大 o在果实上出现大的黑色的病斑 o使果皮表面粗糙 o严重时造成果皮龟裂或果实瘦小 o甚至出现坏死 ∀严重
影响果实的品质 !产量和观赏价值k图 t¦l ∀
图 t 石榴病害症状
ƒ¬ªqt ≥¼°³·²° ²©§¬¶¨¤¶¨ ²©³²° ª¨µ¤±¤·¨
212 病原菌的形态特征比较
v菌株的子座均球形或扁球形 o黑色炭质 o大小不一 ~分生孢子器不规则形 o单生 !双生或聚生在子座内 o
黑色 o其大小有差异 o发生于果实部位的病菌的分生孢子器较大 ~分生孢子单孢 !无色梭形 o其长宽比分别为
病果kw1vzl 疮痂病kv1zzl 干腐病ku1|l ∀见表 v !图 u ∀
表 3 3 菌株形态特征比较 ≠
Ταβ .3 Τηε χοµ παρισον οφ µ ορπηολογψ αµ ονγ τηρεε στραινσ
菌株
≥·µ¤¬±¶
特征
≤«¤µ¤¦·¨µ¶
子实体 ƒµ∏¬·¥²§¼ 分生孢子 ≤²±¬§¬¤
大小
≥¬½¨Π°°
形状
≥«¤³¨¶
分生孢子器
的大小
≤²±¬§¬²¶2
³²µ¤±ª¬∏°ΠΛ°
产生时间
°µ²§∏¦¬±ª
·¬°¨
大小
≥¬½¨ΠΛ°
形状
≥«¤³¨¶
颜色
≤²¯²∏µ¶
干腐病病原菌
≥·¨° µ²·³¤·«²ª¨ ±
双腔或多腔
⁄²∏¥¯¨²µ°∏¯·¬2
²¯¦∏¯¤µ
ks1w ∗ t1xl
≅ ks1w ∗ ul
圆球或扁球形
Š¯ ²¥¤¯ ²µ
©¯¤·ª¯²¥¤¯
kxv ∗ vt{l ≅
kxv ∗ wzzl
ts §左右
„¥²∏·ts §
kx ∗ tsl ≅
ktv1zx ∗ vsl
梭形
≥«∏·¯¨
单胞无色
≥¬±ª¯¨¶³²µ¨
«¼¤¯¬±¨
疮痂病病原菌
≥¦¤¥³¤·«²ª¨ ±
多腔 o排列整齐
∏¯·¬2¯ ²¦∏¯¤µo
¬¯±¨ §¬± ª²²§²µ§¨µ
ks1x ∗ vl ≅
ks1x ∗ wl
圆球或扁球形
Š¯ ²¥¤¯ ²µ
©¯¤·ª¯²¥¤¯
kz|1x ∗ uyxl ≅
kz|1x ∗ wxs1xl
ts §左右
„¥²∏·ts §
kv1| ∗ z1{l ≅
kt{1u ∗ uyl
梭形
≥«∏·¯¨
单胞无色
≥¬±ª¯¨¶³²µ¨
«¼¤¯¬±¨
果实病原菌
°¤·«²ª¨ ± ²©
²¦¦∏µµ¬±ª·²·«¨ ©µ∏¬·
单腔或多腔
²±²²µ
°∏¯·¬2¯ ²¦∏¯¤µ
ks1x ∗ vl ≅
ks1x ∗ vl
圆球或扁球形
Š¯ ²¥¤¯ ²µ
©¯¤·ª¯²¥¤¯
ky{1| ∗ wuwl ≅
kz|1x ∗ ztx1xl
ts §左右
„¥²∏·ts §
kv1| ∗ y1xl ≅
ktv ∗ vu1xl
梭形
≥«∏·¯¨
单胞无色
≥¬±ª¯¨¶³²µ¨
«¼¤¯¬±¨
≠ 各菌都聚生在一大子座内 ∀ „¯ ¯ ²©·«¨ ° ª¤·«¨µ¨§¬± ¤¥¬ª¶·µ²°¤·¤q
图 u 病原菌分生孢子形态图
ƒ¬ªqu ≤²±¬§¬²¶³²µ¤±ª¬∏° ¦«¤µ¤¦·¨µ²©³¤·«²ª¨ ±
213 3菌株的生理学特性比较研究
u1v1t 不同温度对 v菌株培养学性状及生长的影响 v菌株菌丝在 °⁄„培养基上生长 o初期均出现无色呈
放射状向四周扩展 o菌落近圆形 o边缘整齐 o菌丝茂密 o气生菌丝很发达 ov §后 o菌丝颜色逐渐变深 o最后变为
灰色或黑色 ∀| §后逐渐产生子座 o半埋于培养基中 o黑色或深灰色 o在湿度比较大时 o有乳白色分生孢子角
yx 林 业 科 学 wv卷
表 4 不同温度对 3 菌株生长的相关性分析
Ταβ .4 Τηε ρελατιϖιτψ οφ διφφερεντ τεµ περατυρεσ ανδ µψχελια γροωτη
οφ τηε τηρεε στραινσ
不同因素
⁄¬©©¨µ¨±·©¤¦·²µ¶
变异源
∂¤µ¬¤·¬²±¤¯ ¶²∏µ¦¨
平方和
≥≥
自由度
⁄ƒ
均方
≥ Φ ≥¬ªq
第 t天 t¶·§¤¼ tt1tss z t1x{y ty|1yyw s1sss
温度 × °¨³¨µ¤·∏µ¨ 第 u天 u±§§¤¼ vx1sxv z x1ss{ zs1tyt s1sss
第 v天 vµ§§¤¼ wu1|{z z x1uzz t{u1yxs s1sss
第 t天 t¶·§¤¼ s1ss{ u s1ssw s1wt| s1yyy
菌株 ≥·µ¤¬±¶ 第 u天 u±§§¤¼ s1u|{ u s1tw| u1s{w s1tyt
第 v天 vµ§§¤¼ s1t{| u s1s|x v1uzx s1sy{
表 5 不同 πΗ对 3 菌株生长的相关性分析
Ταβ .5 Τηε ρελατιϖιτψ οφ διφφερεντ πΗ ανδ µψχελια γροωτη οφ τηε τηρεε στραινσ
不同因素
⁄¬©©¨µ¨±·©¤¦·²µ¶
变异源
∂¤µ¬¤·¬²±¤¯ ¶²∏µ¦¨
平方和
≥≥
自由度
⁄ƒ
均方
≥ Φ ≥¬ªq
第 t天 t¶·§¤¼ v1usy z s1wx{ uw {tz1zzw s1sss
³‹ 第 u天 u±§§¤¼ v{1|uv z x1xys tvu1uwu s1sss
第 v天 vµ§§¤¼ z|1zv| z tt1v|t ww|1yxv s1sss
第 t天 t¶·§¤¼ s1sss u s1sss s1uuy s1{st
菌株 ≥·µ¤¬±¶ 第 u天 u±§§¤¼ s1sx| u s1su| s1y|| s1xtw
第 v天 vµ§§¤¼ s1sv{ u s1st| s1zwt s1w|x
表 6 不同碳 !氮源与 3 菌株生长的相关性分析
Ταβ .6 Τηε ρελατιϖιτψ οφ διφφερεντ Χ , Ν σουρχε ανδ µψχελια γροωτη
οφ τηε τηρεε στραινσ
不同因素
⁄¬©©¨µ¨±·©¤¦·²µ¶
变异源
∂¤µ¬¤·¬²±¤¯ ¶²∏µ¦¨
平方和
≥≥
自由度
⁄ƒ
均方
≥ Φ ≥¬ªq
第 t天 t¶·§¤¼ s1xsy { s1syv ty1|t| s1sss
第 u天 u±§§¤¼ v1xtv { s1wv| {1s{y s1sss
≤Π‘源 第 v天 vµ§§¤¼ tt1txu { t1v|w vs1tvs s1sss
≤Π‘¶²∏µ¦¨ 第 w天 w·« §¤¼ z1z{{ { s1|zw t|1|vu s1sss
第 x天 x·« §¤¼ ts1ut| { t1uzz wv1|uy s1sss
第 y天 y·« §¤¼ tz1{t| { u1uuz t{1xw{ s1sss
第 t天 t¶·§¤¼ s1sts u s1ssx t1vtu s1u|z
第 u天 u±§§¤¼ s1txz u s1sz{ t1www s1uyx
第 v天 vµ§§¤¼ s1tyt u s1s{t t1zwv s1usz菌株 ≥·µ¤¬±¶ 第 w天 w·« §¤¼ s1s|x u s1swz s1|y| s1wst
第 x天 x·« §¤¼ s1stw u s1ssz s1uv{ s1z|t
第 y天 y·« §¤¼ s1uw| u s1tuw t1svy s1vzz
溢出 ∀其生长特性见表 w ∀从表 w可
以看出 }v菌株的生长对不同温度很
敏感 o通过 ⁄∏±¦¤±检验k未列出l ov菌
株均在 us ∗ vx ε 生长良好 o其他温度
生长较缓慢 o在相同的温度下 v菌株
的生长无明显差异 ∀
u1v1u 不同 ³‹值对菌丝体生长的影
响 结果见表 x ∀表 x表明 }不同 ³‹
对 v菌株的生长影响很大 o呈显著差
异 o而不同菌株间的生长差异不大 ∀
通过 ⁄∏±¦¤±检验k未列出l ov菌株均
在 ³‹ x ∗ z范围内生长迅速 ∀
u1v1v 不同碳 !氮源对菌丝体生长的
影响 结果见表 y ∀表 y表明 }不同
≤Π‘源对 v 菌株的生长影响很大 o
⁄∏±¦¤±检验表明k未列出l }v菌株前 v
§在牛肉膏 ‘源培养基上生长最好 o
其次是蛋白胨培养基 o在碳源培养基
上生长不好 ow §后 v菌株在蔗糖培养
基上生长良好 o而在牛肉膏等氮源培
养基生长渐慢 o说明 v菌株在生长的
早期 o对氮源的需求量较多 o而在后期
对碳源的需求量较多 ∀v菌株在相同
培养条件下的生长没有明显的差异 ∀
214 3菌株的 ΡΑΜσ2ΠΧΡ 电泳分析
应用 Š× !≤Š„ !≤≤„ !Š„„ !≤„„ !
Š„和 tv等 z种引物进行了 v菌株
的 • „≥2°≤• 扩增 o其电泳结果和相
似矩阵见图 v 和表 z ∀从 • „¶2°≤•
电泳图谱和相似矩阵可以看到 v菌株
的亲缘关系很近 ∀但三者进一步比
较 o发现石榴疮痂病病原菌与石榴果
实上的病原菌具有更近的相似性 o说明它们的亲缘关系更近一些 ~而石榴干腐病病原菌与其他两者病原菌
相似性较小一些 o说明它们的亲缘关系较远一些 ∀
v 结论与讨论
发生于山东枣庄石榴枝干部位的疮痂病和干腐病是近年来石榴上的重大生物灾害 o已造成严重的经济
损失 o特别是石榴干腐病危害更大 o常常造成整个毁园 ∀笔者在研究中发现尽管两者的病原形态学鉴定为
∆οτηιορελλαk刘会香等 ousst¤~usst¥l 属真菌 o但发病时间和症状特点差异很大 o另外果实上的症状由石榴疮
痂病还是由石榴干腐病病原引起 o一直没有明确的答案 ∀本研究通过对 v菌株所表现的病害症状及其出现
时间 !形态学特征 !培养学特征 !生理学特性及 • „¶2°≤• 扩增等方面 o系统研究了三者之间的关系 ∀
从病害发生的症状特征来看 o发生于石榴枝干上的疮痂病和果实上的症状均出现增生型的症状 o而发生
于石榴枝干部的干腐病属于坏死型的症状 ~说明它们症状形成的机理是不同的 ~从病害症状出现的时间相
比 o石榴干腐病发病时间较早 o一般在比较寒冷的时期就出现 o而石榴疮痂病和果实部位的病害症状均出现
较晚 o一般在石榴开花的时期开始出现 o说明病原菌对温度的需求是不同的 o石榴干腐病菌能够忍耐低温 o但
zx 第 w期 刘会香等 }石榴溃疡病害病原学研究
图 v 不同引物对 v菌株的扩增电泳结果
ƒ¬ªqv ׫¨ • „¶2°≤• ¨¯ ¦¨·µ²³«²µ¨¶¬¶µ¨¶∏¯·²©∏¶¬±ª§¬©©¨µ¨±·³µ¬° µ¨¶
自左向右依次为kŠ×l ν ok≤Š„l ν ok≤≤„l ν okŠ„„l ν ok≤„„l ν okŠ„l ν otv等 z种引物 ∀
ƒµ²° ¯¨©··²µ¬ª«·¬¶¶¨√¨ ± ³µ¬°¨ µ¶²©kŠ×l ν ok≤Š„l ν ok≤≤„l ν okŠ„„l ν ok≤„„l ν okŠ„l ν otv q
表 7 3 菌株的 Ρ ΑΜσ2ΠΧΡ 扩增的相似距阵
Ταβ .7 Σιµιλιτυδε οφ τηρεε στραινσ
Ρ ΑΜσ2ΠΧΡ αµ πλιφιχατιον
u t v
u t1sss sss s
t s1yws zzy z t1sss sss s
v s1{wy txv { s1zsz |yw y t1sss sss s
研究表明 }三者在不同温度下的生长趋势一致k刘会香等 o
ussxl o这说明石榴干腐病的病原菌可能具有比较复杂的温度适
应机理 ∀
从 v菌株的培养学特性 !形态学特性和生理学特性比较可
以看出 }三者没有显著的差异 o说明他们之间的亲缘关系比较
近 o通过应用 z种不同的引物进行 • „¶2°≤• 扩增 o发现石榴疮
痂病与石榴果实部位的病原亲缘关系更近 ∀
石榴疮痂病与石榴果实上的增生型症状的病原菌具有更近的亲缘关系 o应为同一病原引起 o推测该病原
首先侵染石榴侵染枝干 o然后侵染石榴的花萼和果实 ~而石榴干腐病病原菌主要侵染枝干 o是否也侵染果实
及引起的症状需要继续进行研究和鉴定 o以便为病害防治策略的提出提供重要的依据 ∀
参 考 文 献
谌多仁 o殷恭毅 qt|{x q石榴与苹果两种痂圆孢菌新记录 q南京农业大学学报 ot }vw p v|
刘会香 o费鲜云 o靳 勇 o等 qussx q石榴疮痂病病原菌生理学特性研究 q中国森林病虫 ouwktl }t p w
刘会香 o刘振宇 o杜明芸 o等 qusst¤q石榴干腐病的病原初报 Μ山东植物病理学会 q山东植病研究 q北京 }中国农业出版社 ots{ p ttt
刘会香 o刘振宇 o王先炜 o等 qusst¥q石榴疮痂病病原的初步研究 q山东农业大学报 ovukwl }xu| p xvt
张星耀 o赵仕光 o朴春根 o等 qt||| q树木溃疡病病原真菌类群分子遗传多样性研究 ´ ) ) ) 小穴壳菌属 !疡壳孢属 !壳囊孢属 !盾壳霉属分类地位
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k责任编辑 朱乾坤l
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