全 文 ：第 ww卷 第 x期
u s s {年 x 月
林 业 科 学
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∂²¯1ww o‘²1x
¤¼ou s s {
澳洲坚果 Œ≥≥•2°≤• 反应体系的建立与优化 3
郭凌飞t ou 邹明宏t 曾 辉t 杜丽清t 陆超忠t
kt1 中国热带农业科学院南亚热带作物研究所 湛江 xuws|t ~u1 华南热带农业大学园艺学院 儋州 xztzvzl
关键词 } 澳洲坚果 ~Œ≥≥• ~体系优化
中图分类号 }≥zt{1wy ~ ±|wv1u 文献标识码 }„ 文章编号 }tsst p zw{{kuss{lsx p stys p sx
收稿日期 }ussz p sw p ty ∀
基金项目 }农业科技成果转化资金项目ksw∞ƒ‘uty|ssv{ul o农业结构调整重大技术研究专项ksw p s{ p su„l ∀
3 陆超忠为通讯作者 ∀
Εσταβλισηµεντ ανδ Οπτιµιζατιον οφ ΙΣΣΡ2ΠΧΡ Σψστεµ ιν Μαχαδαµια
Š∏²¬±ª©¨¬tou ²∏ ¬±ª«²±ªt  ±¨ª ‹∏¬t ⁄∏¬´¬±ªt ∏≤«¤²½«²±ªt
kt1 Σουτη Συβτροπιχαλ Χροπσ Ρεσεαρχη Ινστιτυτε oΧηινεσε Αχαδεµψοφ ΤροπιχαλΑγριχυλτυραλΣχιενχεσ Ζηανϕιανγ xuws|t ~
u1 Χολλεγε οφ Ηορτιχυλτυρε oΣουτη Χηινα Υνιϖερσιτψοφ ΤροπιχαλΑγριχυλτυρε ∆ανζηου xztzvzl
Αβστραχτ} „± ²±¨ ©¤¦·²µ·¨¶·º¤¶∏¶¨§·²²³·¬°¬½¨ Œ≥≥•2°≤• ¤°³¯¬©¬¦¤·¬²±¶¼¶·¨° ²± °¤¦¤§¤°¬¤¬±©²∏µ¯ √¨¨ ¶¯²©©¬√¨ ©¤¦·²µ¶
kפ´ ⁄‘„ ³²¯¼°¨ µ¤¶¨ o·¨°³¯¤·¨ ⁄‘„ o§‘×°¶o³µ¬°¨ µ¤±§ ªun oµ¨¶³¨¦·¬√¨ ¼¯l ¬±·«¬¶¶·∏§¼q׫¨ µ¨¶∏¯·¶¶«²º¨ §·«¤··«¨ ux ˏ
µ¨¤¦·¬²±¶¼¶·¨° ¦²±¶¬¶·¨§²©t ≅ °≤• ¥∏©©¨µot ˜ פ´ ⁄‘„ ³²¯¼°¨ µ¤¶¨ ous ±ª·¨°³¯¤·¨ ⁄‘„ os1tx °°²¯#pt §‘×°¶os1ux Λ°²¯
#pt ³µ¬°¨ µ¤±§u1x °°²¯#pt ªun qŒ± ¤§§¬·¬²±o¤§§¬±ªs1w h ©²µ°¤°¬§¨ º¤¶¤¥¯¨·²µ¨§∏¦¨ ·«¨ ¥¤¦®ªµ²∏±§±²¬¶¨ q׫¨
²³·¬°¤¯ °≤• ¤°³¯¬©¬¦¤·¬²±³µ²¦¨¶¶º¤¶¤¶·«¨ ©²¯ ²¯º¬±ª}t ¦¼¦¯¨ ¬±¬·¬¤¯ §¨±¤·∏µ¤¯¬½¤·¬²±¤·|w ε ©²µx °¬±o©²¯ ²¯º¨ §¥¼vx ¦¼¦¯¨ ¶o
º«¬¦«¬±¦¯∏§¨§§¨±¤·∏µ¤¯¬½¤·¬²± ¤·|w ε ©²µvs ¶o¤±±¨ ¤¯¬±ª©²µt °¬±o¤±§ ¬¨·¨±¶¬²± ¤·zu ε ©²µu °¬±o¤±§·«¨ ± ¬¨·¨±¶¬²± ¤·
zu ε ©²µz °¬±o¤±§©¬±¤¯ ¼¯ «²¯§¬±ª·«¨ ¶¤°³¯ ¶¨¤·w ε q
Κεψ ωορδσ} °¤¦¤§¤°¬¤~Œ≥≥• ~¶¼¶·¨° ²³·¬°¬½¤·¬²±
澳洲坚果k Μαχαδαµια ¶³³ql属山龙眼科k°µ²·¨¤¦¨¤¨ l澳洲坚果属k Μαχαδαµιαl常绿乔木 ∀原产于澳大利
亚昆士兰州东南部和新南威尔士州北部 !南纬 uxβ ) vtβ之间的沿海亚热带雨林 ∀其种仁富含不饱和脂肪酸 !
蛋白质 !糖等 o营养价值高 o风味十分独特 o有/干果皇后0之称 ~其副产品也有多种用途 o如果壳可合成活性
炭k„«°¤§³²∏µετ αλqot||zl o果皮可混作家畜饲料等 ∀我国自 t|z|年起引入澳洲坚果 o经过近 us年的发展 o
至 ussx年 o全国栽培面积已达 v xty1xv «°u o其中 o仅云南就达 v tw|1ss «°u ∀目前我国澳洲坚果的研究主要
集中于栽培 !生理等方面 o分子生物学方面的研究较少 o而国外在分子水平上的研究主要采用同工酶
k∂¬·«¤±¤ª¨ ετ αλqot||u ~ „µ¤§«¼¤ ετ αλqot||{l !• „°⁄k∂¬·«¤±¤ª¨ ετ αλqot||{l !≥א≥k∂¬·«¤±¤ª¨ ετ αλqot||{l !
„ƒ°k≥·¨¬ª¨µετ αλqoussvl !• „¬ƒ¬k°¨ ¤¦¨ ετ αλqousswl !• „ƒk°¨ ¤¦¨ ετ αλqoussxl等技术 ∀
¬¨·®¬¨º¬¦½等kt||wl提出的简单序列重复区间kŒ±·¨µ≥¬°³¯¨≥¨ ∏´¨ ±¦¨ • ³¨¨ ¤·oŒ≥≥• l⁄‘„标记技术 o结合了
≥≥• 和 • „°⁄的优点 o具有模板需要量少 o多态性丰富 o成本低 o操作简单 o稳定性高等优点 o而较之 „ƒ°又
具技术要求较低的特点 ∀近年来 Œ≥≥• 已广泛应用于品种鉴定k„°°¬µ¤­∏ ετ αλqousstl !种质资源和遗传多样
性研究k¬¤ousstl等领域 ∀本研究采用单因素试验法 o对体系中的各因素进行筛选 o建立并优化澳洲坚果的
Œ≥≥• 反应体系 o为研究澳洲坚果的遗传多样性奠定基础 ∀
1 材料与方法
t1t 材料 tx份供试澳洲坚果k Μαχαδαµια ιντεγριφολιαl品种k表 tl均取自中国热带农业科学院南亚热带作
物研究所澳洲坚果种质资源圃 ∀选取无病虫害的叶片 o采摘洗净后于 p zs ε 保存 ∀反应体系的优化以
‹„∞≥uwy为模板完成 o甲酰胺浓度的优化以 ’ q≤ q和 ‹„∞≥yys为模板完成 ∀
t1u 试剂 所用 ts ≅ °≤• ¥∏©©¨µk含 ªun l !פ´ ⁄‘„聚合酶 !°¤µ®¨µk⁄usssl购于大连宝生物 o核酸荧光染料
Š²¯§∂¬¨º购于北京赛百盛 o§‘×°¶购于上海生工 o引物由上海生工合成 ∀甲酰胺为国产分析纯 ∀
t1v ⁄‘„提取 参照 ⁄²¼¯¨等kt|{zl的方法并加以改良 o所提取的基因组 ⁄‘„用核酸蛋白仪k∞³³¨ ±§²µ©l检
表 1 供试的澳洲坚果品种 ≠
Ταβ .1 Λιστ οφ µαχαδαµια ϖαριετιεσ
编号
‘²q
品种名称
∂¤µ¬¨·¬¨¶
编号
‘²q
品种名称
∂¤µ¬¨·¬¨¶
编号
‘²q
品种名称
∂¤µ¬¨·¬¨¶
t Ž¨¤∏«²∏k‹„∞≥uwyl y 不详 ˜±®±²º± tt ’º± ≤«²¬¦¨k’ q≤ ql
u Œ®¤¬®¤k‹„∞≥vvvl z ‹¬±§¨ k‹ul tu ¤®¤¬k‹„∞≥{ssl
v …¨ ¤∏°²±·k‹„∞≥y|xl { °¤«¤¯¤k‹„∞≥z{{l tv 桂热一号 Š∏¬µ¨ tf
w Ž¤∏k‹„∞≥vwwl | 特殊种 ≥³¨¦¬¤¯ tw Ž¤®¨ ¤k‹„∞≥xs{l
x ¤∏®¤k‹„∞≥zwtl ts Ž¨¤¤∏k‹„∞≥yysl tx °∏µ√¬¶k‹„∞≥u|wl
≠ ‘²qt ou ow ∗ tx }Μαχαδαµια ιντεγριφολια~‘²qv }杂种 ‹¼¥µ¬§q
表 2 澳洲坚果 ΙΣΣΡ2ΠΧΡ 反应体系中各因素的试验水平
Ταβ .2 ∆ιφφερεντ χονχεντρατιονσ οφ εαχη χοµ πονεντ φορ ΙΣΣΡ2ΠΧΡ προτοχολ
反应成分
≤²°³²±¨ ±·¶
浓度梯度
⁄¬©©¨µ¨±·¦²±¦¨±·µ¤·¬²±¶²© ¤¨¦«¦²°³²±¨ ±·
פ´ ⁄‘„ 聚合酶 פ´ ⁄‘„ ³²¯¼°¨ µ¤¶¨Π≈˜#kux ˏlpt  s1x t1s t1x u1s
模板 ⁄‘„ × °¨³¯¤·¨ ⁄‘„Π≈±ª#kux ˏlpt  ts us vs ws
§‘×°¶浓度 ≤²±¦¨±·µ¤·¬²± ²©§‘×°¶Πk°°²¯#ptl s1ts s1tx s1us s1ux
引物 °µ¬°¨ µΠkΛ°²¯#ptl s1ux s1xs s1zx t1ss
ªun浓度 ªun ¦²±¦¨±·µ¤·¬²±Πk°°²¯#ptl t1s t1x u1s u1x
测浓度 o稀释到 ts ±ª#ˏpt o
于 p us ε 保存备用 ∀
t1w Œ≥≥• 体系优化及 °≤•
扩增程序 参照 ¬¨·®¬¨º¬¦½
等kt||wl所创立的 Œ≥≥• 原
始扩增程序并略做修改 o采
用加拿大哥伦比亚大学 ˜…≤
公司公布的引物序列 o选用
引物 ˜…≤2{ww≈k≤×l{ • × 对
澳洲坚果 Œ≥≥• 反应体系中
的 פ´ ⁄‘„ 聚合酶 !模板
⁄‘„ !§‘×°¶!引物 !ªun的浓
度以及退火温度和循环次数
逐一做多水平试验 ∀ °≤• 扩
增在梯度 °≤• 仪k∞³³¨ ±§²µ©l
上完成 o扩增产物用 t1y h
琼 脂 糖 凝 胶 k含 t ˏ
Š²¯§∂¬¨ºΠux °l电泳分离 o电泳缓冲液为 s qx ≅ ׅ∞o结束后在 Š¨ ⁄¯²¦∞± 凝胶成像系统k…¬²2•¤§l上拍照观
察 ∀各因素水平见表 u ∀
2 结果与分析
u1t פ´ ⁄‘„聚合酶含量对 Œ≥≥•2°≤• 反应的影响 在 Œ≥≥• 反应中 oפ´ ⁄‘„聚合酶对 Œ≥≥• 扩增结果具有
显著影响 ∀ פ´ ⁄‘„聚合酶的浓度过高会造成浪费 o且易产生非特异性扩增产物的积累 ~过低会降低新链
的合成效率 o从而影响试验结果 ∀如图 t所示 o在 ux ˏ的反应体系中 oפ´ ⁄‘„聚合酶从 s1x ∗ u ˜均有扩
增产物 ∀当 פ´ ⁄‘„聚合酶的含量为 s1x ˜时 o扩增谱带较弱 ∀而在 t ∗ u ˜时 o所得谱带较为相似 o清晰程
度也近似 ∀综合经济角度和实际观测结果 o确定 t ˜为本试验中 פ´ ⁄‘„聚合酶的最佳用量 ∀
u1u 模板 ⁄‘„浓度对 Œ≥≥• 扩增的影响 模板 ⁄‘„浓度对 Œ≥≥•2°≤• 扩增的结果有一定的影响 ∀浓度过
低 o扩增产物不稳定或无扩增产物 ~浓度过高可能增加非特异性产物 ∀由图 t可见 o澳洲坚果的Œ≥≥• 反应体
系对模板 ⁄‘„浓度的变化不敏感 o在所选浓度范围内均可扩增出谱带 o但在 ts ±ª时扩增出的谱带略为模
糊 o而含量为 us ∗ ws ±ª时扩增的谱带稳定 o清晰可辨 ∀考虑到结果的稳定性以及样品使用量 o在澳洲坚果
Œ≥≥•2°≤• 反应体系中选用 us ±ª作为适宜浓度 ∀
u1v §‘×°¶浓度对 Œ≥≥•2°≤• 反应的影响 §‘×°¶是 Œ≥≥• 反应的原料 o浓度过高会导致 °≤• 错配 o使扩增出
现非特异性扩增 ~过低将影响合成效率 o甚至会因过早的消耗而使产物单链化 o影响扩增效果k卢圣栋 o
t|||l ∀本试验针对 §‘×°¶设计了 w个浓度梯度 o结果k图 tl表明 }浓度为 s1t ∗ s1u °°²¯#pt时 o扩增出的谱
带较为一致 o但在 s1tx °°²¯#pt时条带较之 s1t °°²¯#pt时清晰 o而在 s1u °°²¯#pt时谱带趋于弱化 ∀当
§‘×°¶的浓度达到 s1ux °°²¯#pt时 o扩增谱带显著减少 ∀因此可以确定 o在该体系中 §‘×°¶的最佳用量为
s1tx °°²¯#pt ∀
u1w 引物浓度对 Œ≥≥•2°≤• 反应的影响 引物浓度对 °≤• 的带型可产生显著影响 ∀浓度过低不能扩增 o太
高易产生新的位点k邹喻萍等 ousstl ∀在本研究中 o发现不同浓度引物对扩增出的谱带数量和强弱影响较为
显著 ∀如图 t所示 o当引物浓度增至 s1x Λ°²¯#pt时 o扩增不完全 o条带数量少 o亮度低 ~当浓度升至 s1zx ∗
t Λ°²¯#pt时 o出现非特异性谱带 ∀这是由于引物浓度过高会促进引物错误引导非特异性产物的合成 ∀而
在 s1ux Λ°²¯#pt时 o扩增效率最高 o所得谱带清晰易辨 ∀
u1x ªun浓度对 Œ≥≥•2°≤• 反应的影响 通常认为 ªun的适宜浓度范围在 t1x ∗ u1x °°²¯#pt之间 ∀ פ´
⁄‘„聚合酶是 ªun依赖性酶 o对 ªun的浓度非常敏感 ∀选择合适的 ªun浓度 o对 °≤• 反应至关重要 ∀引
物与模板的双链杂交体的解链与退火温度受二价阳离子的影响 o特别是 ªun浓度能影响反应的特异性和扩
tyt 第 x期 郭凌飞等 }澳洲坚果 Œ≥≥•2°≤• 反应体系的建立与优化
图 t פ´ ⁄‘„聚合酶 !模板 ⁄‘„ !§‘×°¶浓度 !引物 !ªun浓度对 Œ≥≥•2°≤• 的影响
ƒ¬ªqt ׫¨ ©¨©¨¦·²©§¬©©¨µ¨±·¦²±¦¨±·µ¤·¬²±¶²©©¬√¨©¤¦·²µ¶²± Œ≥≥•2°≤•
t ∗ w1פ´ ⁄‘„聚合酶浓度 פ´ ⁄‘„ ³²¯¼° µ¨¤¶¨ }s1x ot ot1x ou ˜ ~x ∗ {1 模板 ⁄‘„ × °¨³¯¤·¨ ⁄‘„ }ts ous ovs o
ws ±ª#kux ˏlpt ~| ∗ tu1§‘×°¶浓度 ≤²±¦¨±·µ¤·¬²± ²©§‘×°¶}s1t os1tx os1u os1ux °°²¯#pt ~tv ∗ ty q引物浓度
≤²±¦¨±·µ¤·¬²± ²©³µ¬° µ¨}s1ux os1x os1zx ot Λ°²¯#pt ~tz ∗ us q ªun浓度 ªun ¦²±¦¨±·µ¤·¬²±}t ot1x ou ou1x °°²¯#pt q
增片段的产率k卢圣栋 ot|||l ∀当反应体系中 ªun 的浓度过高时会增强背景干扰 o过低将降低扩增产率 ∀
由图 t可见 o在澳洲坚果的 Œ≥≥• 反应体系中 o随着 ªun 浓度的增大 o扩增谱带的数量及亮度呈上升趋势 ∀
当 ªun浓度为 u1s ∗ u1x °°²¯#pt时 o电泳条带一致 o但以 u1x °°²¯#pt时的带型最佳 o亮度最好 ∀而浓度为
t1s °°²¯#pt时 o带型模糊且不稳定 ∀因此选用 u1x °°²¯#pt作为澳洲坚果 Œ≥≥• 反应体系中 ªun的最佳
浓度 ∀
u1y 退火温度对 Œ≥≥• 反应的影响 在同一 °≤• 体系中 o退火温度不同 o产生错配的程度也不同 ∀一般较低
的退火温度能保证引物与模板结合的稳定性 o而在允许的范围内选择较高的退火温度则可减少引物与模板
⁄‘„之间的非特异性结合k冯富娟等 ousswl ∀因此 o有必要对各个引物的最佳退火温度进行优化筛选 ∀
根据上述 x个因子的影响程度确定澳洲坚果最佳的 Œ≥≥• 反应体系 oux ˏ的反应体系包括 }פ´ ⁄‘„聚
合酶 t ˜ ~模板 ⁄‘„ us ±ª~§‘×°¶s1tx °°²¯#pt ~引物 s1ux Λ°²¯#pt ~ ªun u1x °°²¯#pt ∀在此基础上进
行退火温度的优化 ∀根据退火温度理论值计算公式 Τ° € wkŠ n ≤l n uk„ n ×l计算出引物 ˜…≤2{ww的理论退
火温度为 xu ε ∀但在本试验中 o当退火温度为 xz1| ε 时 o引物 ˜…≤2{ww扩增出的谱带最清晰 o在理论值
xu ε 左右得到的扩增谱带较为模糊 o并有部分条带缺失 ∀图 u„的结果表明 o退火温度低于 xy1x ε 和高于
xz1| ε 时扩增出的谱带较弱 o并有部分谱带扩增不出 ∀虽然在 xy1x ε 时也扩增出了与 xz1| ε 相似的谱带 o
但所得带型不如 xz1| ε 时获得的清晰 ∀
u1z 循环次数的优化 °≤• 的循环次数决定了产量 o循环次数太少 o产物少或者根本没有产物 ∀次数太多
产物也不会有所增加 o反而会引发非特异性条带的产生 ∀在本试验中 o分别设计了 ux !vs !vx !v{ !ws个循环
数以探究其对 Œ≥≥• 反应的影响 ∀结果k图 u…l表明 }循环数为 ux时 o几乎无法扩增出可辨谱带 ∀而在 vs个
循环时 o产物不够稳定 o部分带型较弱 ∀vx ∗ ws个循环时 o扩增结果一致 o由此可见 o在本试验中 vx个循环已
达到要求 ∀
u1{ 甲酰胺浓度的选择 一般认为在反应体系中加入 u h的甲酰胺能有效地使背景颜色减弱 o谱带清晰
k²¶«¬ετ αλqousssl ∀如图 u≤所示 o加入甲酰胺可在一定程度上起到降噪的作用 ∀当体系中甲酰胺的浓度为
s1w h ∗ s1{ h时 o扩增谱带的数量差异不大 o但背景干扰相对不加甲酰胺的对照较弱 ∀而高于 s1{ h时 o一些
弱带已无法扩增出 ∀在实际应用中 o由于甲酰胺的使用可导致弱带的消失 o因此是否使用应加以斟酌 ∀
u1| Œ≥≥• 反应体系稳定性检测 随机选择引物 ˜…≤2{vx !˜…≤2{xx对部分澳洲坚果种质进行扩增 o以检测所
确立的 Œ≥≥• 反应体系的稳定性 ∀结果k图 vl表明 o所选引物可在 tx份澳洲坚果种质上扩增出清晰 !重复性
好的谱带 o证明本试验所建立的体系稳定可靠 ∀
uyt 林 业 科 学 ww卷
图 u ˜…≤2{ww不同退火温度 !循环数及不同甲酰胺浓度对澳洲坚果 Œ≥≥• 扩增的影响
ƒ¬ªqu ׫¨ ©¨©¨¦·²©§¬©©¨µ¨±·¤±±¨ ¤¯¬±ª·¨°³¨µ¤·∏µ¨¶o¦¼¦¯ ¶¨¤±§¦²±¦¨±·µ¤·¬²±¶²©©²µ°¤°¬§¨ ²© ˜…≤2{ww ²± Œ≥≥• ¤°³¯¬©¬¦¤·¬²± ²© °¤¦¤§¤°¬¤
„1t ∗ tu1 退火温度 „±±¨ ¤¯¬±ª·¨°³¨µ¤·∏µ¨ }xt1t oxt1v oxt1{ oxu1z oxv1{ oxx1t oxy1x oxz1| ox|1u oys1v oyt1t oyt1x ε ~
…1t ∗ x1 循环数 ≤¼¦¯ ¶¨}ux ovs ovx ov{ ows ~≤1t ∗ u ov ∗ w ox ∗ y oz ∗ { o| ∗ ts ott ∗ tu1甲酰胺浓度
≤²±¦¨±·µ¤·¬²± ²©©²µ°¤°¬§¨ }s h os1w h os1{ h ot1u h ot1y h ou1s h q
图 v 引物 ˜…≤2{vx和 ˜…≤2{xx对 tx份种质的扩增结果
ƒ¬ªqv ׫¨ µ¨¶∏¯·²©¤°³¯¬©¬¦¤·¬²± ²©³µ¬° µ¨˜…≤2{vx ¤±§˜…≤2{xx ²± tx √¤µ¬¨·¬¨¶²© °¤¦¤§¤°¬¤
„1˜…≤2{vx k退火温度 „±±¨ ¤¯¬±ª·¨°³¨µ¤·∏µ¨ }xs1y ε l ~…1˜…≤2{xx k退火温度 „±±¨ ¤¯¬±ª·¨°³¨µ¤·∏µ¨ }xs1w ε l
3 讨论
虽然 Œ≥≥• 标记技术结合了 ≥≥• !• „°⁄等技术的优点 o但它同样是一种基于 °≤• 的分子标记技术 o必然
会受到 פ´ ⁄‘„聚合酶含量 !模板 ⁄‘„浓度与纯度 !引物 !§‘×°¶和 ªun浓度以及引物退火温度等因素的影
响k邹喻萍等 ousstl ∀本试验也印证了这一点 ∀因此有必要在进行 Œ≥≥• 分析之前对反应体系进行优化 ∀虽
然一般认为 Œ≥≥• 技术对模板 ⁄‘„的质量要求较低 o但杨传平等kussxl研究发现未经纯化的模板 ⁄‘„可扩
增出的谱带数量明显少于纯度高的模板 ⁄‘„ o因此笔者认为高质量的基因组 ⁄‘„是获得 Œ≥≥• 反应稳定结
果的前提 ∀引物由于碱基序列的长短不同而具有不同的退火温度 o同种引物在不同植物样品中的退火温度
也不相同 ∀穆立蔷等kussyl在优化紫椴k Τιλια αµυρενσισl种质的Œ≥≥• 体系中发现引物 ˜…≤2{ww和 ˜…≤2{vx的
最佳退火温度分别为 xs1u ε 和 xt1w ε ∀而在本研究中 o经优化确定 ˜…≤2{ww的最佳退火温度为 xz1| ε o
˜…≤2{vx为 xs1y ε o差距较大 ∀可能是物种不同造成模板 ⁄‘„的特性差异 ~另一方面则可能是设备差异所
造成 ∀此外 oפ´ ⁄‘„聚合酶直接关系到扩增反应的成功与否 ∀由于不同厂家之间的产品质量存在很大差
异 o甚至是同一厂家不同批次的产品都可能存在差异 o为确保试验的准确性 o应尽可能选择同一厂家同一批
次的产品 ∀
相比正交试验而言 o单因素试验设计可直观快速地表现出各因子对反应体系的影响 o但不具正交试验能
体现各因素间互作效应的特性 ∀因此 o可考虑将正交试验与单因素设计相结合 o同时体现二者的优势 ∀
参 考 文 献
冯富娟 o王凤友 o刘 彤 qussw q红松 Œ≥≥•2°≤• 实验系统影响因素 q植物学通报 outkvl }vuy p vvt q
vyt 第 x期 郭凌飞等 }澳洲坚果 Œ≥≥•2°≤• 反应体系的建立与优化
卢圣栋 qt||| q现代分子生物学技术 qu版 q北京 }中国协和医科大学出版社 owx{ p wyv q
穆立蔷 o刘赢男 o冯富娟 o等 qussy q紫椴 Œ≥≥•2°≤• 反应体系的建立与优化 q林业科学 owukyl }uy p vt q
杨传平 o潘 华 o魏志刚 o等 qussx q白桦 Œ≥≥•2°≤• 反应体系的优化 q东北林业大学学报 ovvkyl }t p v q
邹喻萍 o葛 颂 o王晓东 qusst q系统进化植物学中的分子标记 q北京 }科学出版社 ovy p |z q
„«°¤§³²∏µ„ o⁄² ⁄ ⁄qt||z q׫¨ ³µ¨³¤µ¤·¬²± ²©¤¦·¬√¤·¨§¦¤µ¥²±©µ²° °¤¦¤§¤°¬¤±∏·¶«¨¯¯ ¥¼ ¦«¨ °¬¦¤¯ ¤¦·¬√¤·¬²±q≤¤µ¥²±ovxktul }tzuv p tzvu q
„°°¬µ¤­∏≥ ≥ o⁄«²¯¤®¬± … …o≥¤±·µ¤ ⁄ Žoετ αλqusst qŒ§¨±·¬©¬¦¤·¬²± ²©¬±·¨µ¶¬°³¯¨¶¨ ∏´¨ ±¦¨ µ¨³¨ ¤·kŒ≥≥• l°¤µ®¨µ¶¤¶¶²¦¬¤·¨§º¬·«¶¨ §¨¶¬½¨ ¬± º«¨ ¤·q׫¨ ²µ
„³³¯ Š¨ ±¨ ·otsu }zuy p zvu q
„µ¤§«¼¤  Žo≠¨¨ Žo¨¨ ƒ × oετ αλqt||{ q Š¨ ±¨ ·¬¦√¤µ¬¤¥¬¯¬·¼¬± °¤¦¤§¤°¬¤q Š¨ ±¨ ·¬¦• ¶¨²∏µ¦¨¶¤±§≤µ²³ ∞√²¯∏·¬²±oww }t| p vu q
⁄²¼¯¨o⁄¬¦®¶²± ∞ ∞qt|{z q°µ¨¶¨µ√¤·¬²± ²©³¯¤±·¶¤°³¯ ¶¨©²µ⁄‘„ µ¨¶·µ¬¦·¬²± ±¨§²±∏¦¯ ¤¨¶¨ ¤±¤¯¼¶¬¶qפ¬²±ovy }ztx p zuu q
²¶«¬≥ ° oŠ∏³·¤ ∂ ≥ o„ªª¤µº¤¯ • Žoετ αλq usss q Š¨ ±¨ ·¬¦§¬√¨ µ¶¬·¼ ¤±§ ³«¼¯²ª¨ ±¨ ·¬¦µ¨ ¤¯·¬²±¶«¬³ ¤¶µ¨√ ¤¨¯ §¨ ¥¼ ¬±·¨µ¶¬°³¯¨ ¶¨ ∏´¨ ±¦¨ µ¨³¨ ¤·kŒ≥≥• l
³²¯¼°²µ³«¬¶°¬±·«¨ ª¨ ±∏¶ Ορψζα q׫¨ ²µ„³³¯ Š¨ ±¨ ·otss }tvtt p tvus q
¬¤ Š ≥ qusst q Š¨ ±¨ ·¬¦√¤µ¬¤·¬²± ¤±§¦²¯²±¤¯ §¬√¨ µ¶¬·¼ ²© Πσαµ µοχηλοα ϖιλλοσα k°²¤¦¨¤¨ l §¨·¨¦·¨§¥¼ Œ≥≥• °¤µ®¨µ¶q„±± …²·o{z }x{x p x|s q
°¨ ¤¦¨ ≤ ° o„¯ ¤¯± ° o∂¬·«¤±¤ª¨ ∂ oετ αλqussx q Š¨ ±¨ ·¬¦µ¨ ¤¯·¬²±¶«¬³¶¤°²±ª¶·°¤¦¤§¤°¬¤√¤µ¬¨·¬¨¶ªµ²º±¬± ≥²∏·« „©µ¬¦¤¤¶¤¶¶¨¶¶¨§¥¼ • „ƒ °¤µ®¨µ¶q≥ „©µ
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k责任编辑 徐 红l
编辑部更正
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湘林 ÷tw 良种编号 }国 ≥ p ≥≤ p ≤’ p stv p ussy ~国 ≥ p ≥≤ p ≤’ p stw p ussy ~≥ p ≥≤ p ≤’ p ssx p ussy ~国
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位简介 ∀文中/新品种特征特性0应为/良种特性0 ∀
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