全 文 ：第 ww卷 第 t期
u s s {年 t 月
林 业 科 学
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¤±qou s s {
浙江马尾松毛虫不同地理种群间
基因差异的 Œ≥≥• 分析 3
翁宏飚t 牛宝龙t 何丽华t 蒋 平u 孟智启t
kt1浙江省农业科学院蚕桑研究所昆虫分子生物学实验室 杭州 vtssut ~ u1 浙江省林业有害生物防治检疫局 杭州 vtssusl
关键词 } 马尾松毛虫 ~Œ≥≥• ~遗传差异 ~多态性
中图分类号 }≥zt{1z 文献标识码 }„ 文章编号 }tsst p zw{{kuss{lst p styw p sx
收稿日期 }ussz p su p uy ∀
基金项目 }浙江省科技计划重点项目kussw≤uusvzl资助 ∀
3 孟智启为通讯作者 ∀
Γενετιχ ∆ιϖερσιτψ αµονγ τηε ∆ενδρολιµυσ πυνχτατυσ Ποπυλατιονσ
Σαµ πλεδ Φροµ ∆ιφφερεντ Ρεγιον οφ Ζηεϕιανγ Προϖινχε
• ±¨ª ‹²±ª¥¬¤²t ‘¬∏…¤²¯²±ªt ‹¨¬«∏¤t ¬¤±ª°¬±ªu  ±¨ª«¬´¬t
kt1 Λαβορατορψοφ Εντοµο2Μολεχυλαρ Βιολογψo Ζηεϕιανγ Αχαδεµψοφ ΑγριχυλτυραλΣχιενχεσ Ηανγζηου vtssut ~
u1 Φορεστ Πεστ Χοντρολανδ Θυαραντινε Βυρεαυ οφ Ζηεϕιανγ Προϖινχε Ηανγζηου vtssusl
Αβστραχτ} Š¨ ±¨ ·¬¦§¬√¨ µ¶¬·¼ ²© ∆ενδρολιµυσ πυνχτατυσ ²√¨ µ©¬√¨ µ¨ª¬²±¶¬± «¨­¬¤±ª °µ²√¬±¦¨ º¨ µ¨ ¶·∏§¬¨§¥¼ Œ≥≥• p °≤• q
׫¬µ·¨¨ ± ³µ¬°¨ µ¶º¨ µ¨ ¶¦µ¨ ±¨¨ §²±·«¨ ·¨°³¯¤·¨ ²©·²·¤¯ ⁄‘„ ²©·«¨ ¬±¶¨¦·¶¤±§·²·¤¯ zw ¥¤±§¶²©⁄‘„ ©µ¤ª°¨ ±·¶º¨ µ¨ ¤°³¯¬©¬¨§o
²©º«¬¦«·«¨ «¤¯©kvz ¥¤±§¶l º¤¶³²¯¼°²µ³«¬¦q׫¨ ª¨ ±¨ ·¬¦§¬¶·¤±¦¨ ¤°²±ª·«¨ ¶¤°³¯ §¨³²³∏¯¤·¬²±¶µ¤±ª¨§s1ttw w ∗ s1wzx w1
׫¨ §¨±§µ²ªµ¤° º¤¶¦²±¶·µ∏¦·¨§¥¤¶¨§²±·«¨¬µª¨ ±¨·¬¦§¬¶·¤±¦¨ ∏¶¬±ª˜°Š„ °¨ ·«²§q׫¨ µ¨¶∏¯·¶¬±§¬¦¤·¨§·«¤··«¨µ¨ º¤¶¯ ²º
ª¨ ±¨·¬¦§¬√¨ µ¶¬·¼ ¤°²±ª·«¨ ©²∏µ³²³∏¯¤·¬²±¶©µ²° ·«¨ °¤¬± ¤¯±§o º«¬¯¨ ·«¨ ⁄²±ª·²∏³²³∏¯¤·¬²± ¶¤°³¯ §¨©µ²° ⁄²±ª·²∏¬¶¯¤±§
¶«²º¨ §«¬ª«¨µª¨ ±¨·¬¦§¬√¨ µ¶¬·¼q
Κεψ ωορδσ} ∆ενδρολιµυσ πυνχτατυσ~Œ≥≥• ~ª¨ ±¨ ·¬¦§¬√¨ µ¶¬·¼~³²¯¼°²µ³«¬¦
马尾松毛虫k ∆ενδρολιµυσ πυνχτατυσl是浙江省重要的森林害虫 o也是我国南方林区松林主要食叶害虫之
一 o在浙江往往呈周期性发生并猖獗成灾 o造成严重的经济损失和生态环境的破坏 ∀近年来 o随着经济的发
展 o人们生活水平的提高 o广大农民对薪柴的需求量日趋减少 o封山育林技术在浙江全省得到广泛推广和应
用 o很多地区的森林植被已有十多年未砍伐 o森林生长环境明显改善 o加快了森林的自然演替过程 ∀上述情
况主要表现为林分郁闭度增大 o植被种类增加 o阔叶树种得到良好生长 o森林的生态功能日趋复杂多样 o林相
单纯 !遗传单一 !生态功能简单的人工林已逐渐演化为天然林 o林内温湿度条件相对封育前有明显改善 o低温
高湿环境初步形成 o不利于松毛虫生长发育 o森林抗御病虫害能力大大增强 ∀另一方面 o封山育林后 o人为破
坏减轻 o林内天敌的种类和数量明显增加 o对松毛虫的发生起到了抑制作用 o同时各种生物 !物理防治等综合
治理方法的广泛应用 o使得浙江省已连续多年未发生虫灾 ∀
松毛虫生物学特性 !种群动态 !防治和管理等方面已有较为深入的研究k柴希民 ot||x ~陈昌洁 ot||s ~萧
刚柔 ot||u ~«¤±ª ετ αλqoussvl o然而关于松毛虫属某些种类的亲缘关系或分类地位的确定历史上争议颇多 o
前人分别从形态学 !遗传学及化学生态学入手 o研究了我国主要松毛虫中的 u种或几种松毛虫间的亲缘关系
k蔡邦华等 ot|yx ~赵清山等 ot||| ~孔祥波等 ousstl o尽管如此 o到目前仍然没有形成一致的看法 ∀另外 o由于
松毛虫成虫有很强的迁移扩散能力 o一般为飞行距离 x ∗ ts ®° o不同的松毛虫种间可形成天然杂交种 o造成
防治困难k赵清山等 ot|||l ∀同时 o迁飞造成的基因流动使松毛虫地理种群的遗传结构发生变异 o迁飞的发
生还将导致不同生态型的基因交流 o增加迁入地内的遗传变异性 o从而影响种群动态 ∀然而 o对松毛虫各地
理种群基因交流频度 !变异模式以及它们对害虫区域性灾变的影响目前少见报道 ∀
Œ≥≥• k¬±·¨µ2¶¬°³¯¨¶¨´¨ ±¦¨ µ¨³¨ ¤·¶o简单重复序列中间区域l 是 ¬¨¦®©¨ §¯·等kt||vl创建的一种新型微卫星
类分子标记技术 ∀在真核生物的基因组中广泛存在着的以 t ∗ y个碱基为 t个单位呈串联状重复排列的序
列 o称为简单重复序列k¶¬°³¯¨¶¨´¨ ±¦¨ µ¨³¨ ¤·¶o≥≥• l o又称为微卫星k°¬¦µ²¶¤·¨¯ ¬¯·¨l 序列 ∀Œ≥≥• 分子标记技术就
是利用简单重复序列设计引物 o即引物主要由 t ∗ w个碱基组成的重复序列 o通常在引物的 v. 端或 x.端加几
个非重复的锚定碱基以保证引物与基因组 ⁄‘„中的 ≥≥• 的 v. 或 x. 端结合 ∀与其他的分子标记技术相比 o
Œ≥≥• 标记技术具有操作简单 !稳定 !可重复性好及多态性高等优点 k‘¤ª¤µ¤­∏ ετ αλqousstl o在遗传性状相关
标记的选择 !品系鉴定 !遗传多样性分析和遗传育种等领域具有广阔的前景 ∀本研究利 Œ≥≥• 方法对采集于
浙江省 x个地区的马尾松毛虫 o进行了全基因组水平的 ⁄‘„多态性分析 o为研究松毛虫迁飞模型和适应性 o
制定经济 !及时 !行之有效的害虫综合管理措施提供理论依据 ∀
1 材料与方法
t1t 材料 ussw年 x月 o从浙江省永康 !丽水 !杭州 !洞头及苍南等地野外采集马尾松毛虫蛹 o实验室传代饲
养扩大种群 ∀实验室条件下 o以消毒后的新鲜马尾松松针饲养马尾松毛虫幼虫至化蛹 k何丽华等 oussxl o饲
养温度 uz ε o光周期为 ⁄€ tyΒ{ ∀每个种群各取样 tx头个体用于基因组 ⁄‘„的提取 ∀试验中所用的 פ´
酶 !§‘×°¶购自 פŽ¤•¤公司 ∀
t1u 基因组 ⁄‘„的提取和纯化 每个种群 tx头个体分别提取总 ⁄‘„ ∀解剖大龄松毛虫幼虫的丝腺 o洗净
后在预冷的研钵中加液氮快速研磨成为粉末状 o加抽提缓冲液kts °°²¯ #pt ×µ¬¶2≤¯ ³‹{1s ~s1t °²¯ #pt
∞⁄ׄ ³‹{1s ~s1x h ≥⁄≥l o混匀后转入离心管中 o加蛋白酶 Ž至终浓度 tss Λª#°pt oxy ε 水浴保温 v ∗ x «后
离心 o上清用平衡酚Β氯仿Β异戊醇kuxΒuwΒtl !氯仿各抽提 t次 o上清用 u倍体积冰无水乙醇沉淀 ⁄‘„ o沉淀
用 zs h乙醇洗涤 u次 o加 ×∞溶解 ~加 • ‘„酶 ‹至终浓度 xs Λª#°pt ovz ε 保温 u «以消化 • ‘„ o再用平衡酚
Β氯仿Β异戊醇k体积比为 uxΒuwΒtl氯仿各抽提 t次后 o用 u倍体积冰无水乙醇沉淀 ⁄‘„ o沉淀用 zs h乙醇洗
涤 u次 o加 ×∞溶解 o电泳检查 ⁄‘„质量 o经分光光度计k…¨ ¦®°¤± ⁄˜ywsl检测浓度和纯度 ∀每种群从中挑选
出纯度高的 ts个个体组成基因池 o用于 Œ≥≥• p °≤• 扩增 ∀
t1v Œ≥≥• 扩增反应 参照文献k侯成香等 oussxl o委托上海生工生物工程有限公司合成 t|个 Œ≥≥• 引物 o优
化 Œ≥≥• p °≤• 的反应条件 o筛选扩增条带较多 !信号强 !背景清晰的引物用于 Œ≥≥• p °≤• 反应 ∀
t1w 数据分析 同一标记在不同品种中扩增 o有带存在记为 / t0 o没有同样大小的带则记为 / s0 o用 ‘¨¬
kt|z{l的方法计算出各品种间的遗传距离 o然后用 ˜°Š„ 方法进行聚类分析 ∀采用 °²³ª¨ ±¨ 程序 √¨ µ¶¬²±
t1vt完成数据分析 ∀
2 结果与分析
u1t 引物的筛选反应条件的优化 虽然 Œ≥≥• 引物具有通用性 o一套引物可用于不同的物种 o但是由于物种
间基因组的组成有差异 o不是每个引物都适合于所有物种 o而且不同引物所要求的反应条件也不同 o因此对
引物的筛选和反应条件的优化是非常必要的 ∀一般的原则是所研究的基因组 ⁄‘„越复杂 o重复序列的密度
越高 o对引物的专一性要求就越高 o运行 °≤• 的条件也就越严格 ∀
由于 Œ≥≥• p °≤• 与 • „°⁄p °≤• 很相似 o模板浓度 !引物浓度 !镁离子浓度以及退火温度等可明显地造
成扩增带型的变化 ∀本研究参照文献 k侯成香等 oussxl o委托上海生工生物工程有限公司合成 t|个 Œ≥≥•
引物k表 tl ∀在确定模板浓度 !引物浓度 !镁离子浓度后 o主要对退火温度进行优化 ∀
Œ≥≥• p °≤• 扩增反应在 ∞³³§²µ©公司的梯度 °≤• 仪上进行 o反应体系为 }xs ˏ°≤• 反应液中 o模板约 ws
±ªos1v ˜ פ´ 酶 ox ˏ的 ts ≅ …∏©©¨µkuss °°²¯#pt ×µ¬¶2‹≤¯ otss °°²¯#ptk‘‹wlu≥’w otss °°²¯#pt Ž≤¯ ot h
×µ¬·²± ÷2tss ous °°²¯#pt ª≤¯ ul ow种 §‘×°各 s1ux °°²¯#pt oy ³°²¯ 的引物 ∀扩增程序为 }|w ε 预变性 x
°¬±o|w ε 变性 t °¬±o复性 t °¬±ozu ε 延伸 t1x °¬±o共 vx个循环 o循环结束后 zu ε 延伸 x °¬±∀
xyt 第 t期 翁宏飚等 }浙江马尾松毛虫不同地理种群间基因差异的 Œ≥≥• 分析
表 1 ΙΣΣΡ 引物序列及多态性 ≠
Ταβ .1 Πριµερσ ανδ πολψµ ορπηισµ οφ ΙΣΣΡ µαρκερ
引物序号
°µ¬°¨ µ‘²q
引物序列kxχ ) vχl
≥¨ ∏´¨ ±¦¨ kxχ ) vχl
复性温度 Τ°Πε
• ¤¯ ¤¯¦¨ . ¶
Τ°
’¯ ¬ª²
≤¤¯¦∏¯¤·²µΤ°
≥¤±ª²±. ¶
Τ°
平均 Τ°
„√ µ¨¤ª¨ Τ°
扩增条带数
‘∏°¥¨µ²©
¤°³¯¬©¬¨§
¥¤±§¶
多态性条带数
‘∏°¥¨µ²©
³²¯¼°²µ³«¬¦
¥¤±§¶
多态性条带比例
°¨ µ¦¨±·¤ª¨ ²©
³²¯¼°²µ³«¬¦
¥¤±§¶Πh
Œ≥≥• st kŠ„≤„lw w{ wv xt1xx wz1x x t us
Œ≥≥• su k≤„ly „≤ wu vz wz wu y u vv1v
Œ≥≥• sw kŠ×ly ≤≤ ww ws xs ww1y z v wu1|
Œ≥≥• sx k≤„ly Š× wu vz wz wu y x {v1v
Œ≥≥• sy k≤„≤lw Š≤ w{ wy xx w|1y z u u{1x
Œ≥≥• sz k≤„ly „Š wu vz wz wu y w yy1z
Œ≥≥• s{ kŠ„Šlw Š≤ w{ wy xx1{ w|1| z x zt1w
Œ≥≥• s| k≤„ly ŠŠ ww ws xs ww1y y w yy1z
Œ≥≥• ts k≤×≤lw Š≤ w{ wy xx w|1y w u xs
Œ≥≥• tw kŠ„ly ŠŠ ww ws xs ww1y x u ws
Œ≥≥• tx k׊l{ Š× xw w{ xx xu1v x t us
Œ≥≥• tz k„Šl{×≤ xw w{ xx xu1v x v ys
Œ≥≥• t{ k≤×l{ „≤ xw w{ xx xu1v x v ys
≠ • ¤¯ ¤¯¦¨ . ¶Τ° }Τ° € w ≅ kŠ n ≤l n u ≅ k„ n ×l ~ ’¯¬ª²在线 Τ°预测值 ’¯ ¬ª² Τ° ²±¯¬±¨ }«·³}ΠΠººº q³¬·q¨§∏Π~≥¤±ª²±. ¶ Τ° }生工生物技术公司
引物合成报告单的 Τ° 预测值 Τ° ©µ²° ≥¤±ª²±. ¶…¬²·¨¦« ≤²°³¤±¼ q下同 ∀ ׫¨ ¶¤°¨¥¨ ²¯º q
图 t 不同复性条件下引物 Œ≥≥• ts在 x个松毛虫种群基因组中的扩增结果
ƒ¬ªqt °≤• ³µ²©¬¯¨ ¶²©³µ¬° µ¨Œ≥≥• ts º¬·«x ∆ q πυνχτατυσ
³²³∏¯¤·¬²±¶∏±§¨µ·«¨ §¬©©¨µ¨±·¤±±¨ ¤¯¬±ª¦²±§¬·¬²±
 }⁄usss °¤µ®¨µ~„ } ’¯¬ª² ≤¤¯¦∏¯¤·²µΤ° ~…} • ¤¯ ¤¯¦¨ . ¶ Τ° ~≤ }≥¤±ª²±. ¶ Τ° ~⁄}/ ײ∏¦«§²º±0
º¬·«¤√¨ µ¤ª¨ Τ° q谱带 t ∗ x ¤±¨ t ∗ xk左至右 ¨©··²µ¬ª«·l }永康 ≠²±ª®¤±ªo丽水 ¬¶«∏¬o苍南 ≤«¤±ª±¤±o富阳 ƒ∏¼¤±ªo洞头 ⁄²±ª·²∏q
由于引物退火温度的计算有多种方法 o得出的 Τ° 值也不尽相同k表 tl ∀在预试验中 o分别以不同公式
计算的 Τ° 值为复性温度 o调查 °≤• 扩增产物的专一性和分辨率 ∀从图 t可知 o在低 Τ° 温度k’¯¬ª² ≤¤¯¦∏¯¤·²µ
Τ°l下复性 o°≤• 扩增条带较多 o但影子条带增多 o重复性 !分辨率较差k图 t„l o在高 Τ°k≥¤±ª²± Τ°l温度下复
性 o则可能使部分条带缺失k图 t≤l o• ¤¯ ¤¯¦¨ 公式计算的 Τ° 预测值介于两者之间 o扩增条带清晰k图 t…l o而
/ ײ∏¦«§²º±0方法可在获得较好分辨率的基础上 o具有更好的重复性k图 t⁄l ∀本研究确定以 v种方法预测
的引物 Τ° 值的平均值为基础 o采用/·²∏¦«§²º±0策略 o即退火温度采取递减的方式进行 °≤• 共运行 vx个循
环第 t个循环退火温度为 Τ° n tu ε o第 u个循环为 Τ° n { ε o第 v个循环为 Τ° n w ε o第 w ∗ vv个循环在正
常的 Τ° 下运行 o进行 Œ≥≥•2°≤• o°≤• 产物在 t1u h琼脂糖凝胶上电泳 o染色后拍照 ∀
u1u 基因组 ⁄‘„扩增结果及多样性分析 所合成的 t|个引物 o其中引物 Œ≥≥• sx和 Œ≥≥• ty不能得到稳定
的扩增带 o其余的 tz个引物均能在供试的 x个种群松毛虫 ⁄‘„扩增出稳定的特异带 o扩增片段的长度在约
uxs ∗ u sss ¥³o从中选出 tv组扩增条带较多 !信号强 !背景清晰的Œ≥≥• p °≤• 反应用于数据分析k表 tl ∀表 t
结果表明 otv个引物共扩增出 zw条 ⁄‘„条带 o其中 o多态性 ⁄‘„条带 vz条 o占总带数的 xs h ∀每个引物扩
增的 ⁄‘„带的数量在 w ∗ z条 o平均 x1z条 o多态性条带平均 u1{条 ∀
u1v 种群间遗传关系的聚类结果 采用有带记为 t o无带记为 s的原则 o根据 ‘¨¬kt|z{l的方法计算出 x
yyt 林 业 科 学 ww卷
个种群间的遗传距离k表 ul ∀各种群间的遗传距离在 s1ttw w ∗ s1wzx w之间 ∀根据统计分析结果 o用 ˜°Š„
法构建了 x个马尾松毛虫的分子系统树k图 ul ∀由图 u可见 o丽水和永康种群的遗传距离最近 o为 s1ttw w o
富阳与洞头种群的遗传距离最远 o为 s1wzx w ∀
表 2 基于 Νει方法(1978)计算的浙江马尾松毛虫的遗传差异
Ταβ .2 Γενετιχ διστανχεσ αµ ονγ ∆ . πυνχτατυσ ποπυλατιονσ βασεδ ον Νει. σ (1978) µετηοδ
地理种群
°²³qŒ⁄
洞头
⁄²±ª·²∏
富阳
ƒ∏¼¤±ª
苍南
≤«¤±ª±¤±
丽水
¬¶«∏¬
永康
≠²±ª®¤±ª
洞头 ⁄²±ª·²∏ 3 3 3 3 s1yut y s1zty u s1zty u s1zwv u
富阳 ƒ∏¼¤±ª s1wzxw 3 3 3 3 s1zzs v s1z|z v s1zzs v
苍南 ≤«¤±ª±¤± s1vvv { s1uyt s 3 3 3 3 s1{vz { s1{yw |
丽水 ¬¶«∏¬ s1vvv { s1uuy x s1tzy | 3 3 3 3 s1{|t |
永康 ≠²±ª®¤±ª s1u|y z s1uyt s s1twx u s1ttw w 3 3 3 3
图 u 马尾松毛虫 x个种群的 Œ≥≥• 聚类分析图
ƒ¬ªqu ⁄¨ ±§µ²ªµ¤° ¬¯¯∏¶·µ¤·¬±ª·«¨ πηψλογενετιχ
µ¨ ¤¯·¬²±¶«¬³¤°²±ªx ∆ q πυνχτατυσ ³²³∏¯¤·¬²±¶
¥¤¶¨§ ‘¨¬. ¶kt|z{l ª¨ ±¨ ·¬¦§¬¶·¤±¦¨
3 结论与讨论
松毛虫是我国最重要的森林害虫 o关于松毛虫的防治
和研究在我国开展已相当普遍 o但关于种属间关系及遗传
特性等方面的基础研究甚少 ∀本研究利用 Œ≥≥• 分子标记
研究浙江省 x个不同地区马尾松毛虫地理种群间的分子遗
传差异 o结果显示 }所研究的 x个地理种群中 o除洞头种群
外 o其余 w个种群间遗传差异较小 ∀
张爱兵等kusswl用 • „°⁄指纹谱的方法首次对松毛虫
属 {种主要松毛虫的亲缘关系进行了初步探讨 o为阐明松
毛虫属中 {种主要松毛虫的亲缘关系提供了分子生物学证
据 ∀与 • „°⁄相比 oŒ≥≥• 由于使用的引物较长 o退火温度较
高 o从而增强了试验的可重复性 ∀但 °≤• 扩增产物在检测
过程中常出现影子带现象 o给等位基因的判读带来困难 o研
究易出现偏差 ∀要消除影子带现象 o可从 u个方面优化 °≤• 反应体系 ∀一是由于简单重复的寡核苷酸引物
在基因组上滑动 o使 °≤• 扩增后得到大小相差很小的 °≤• 产物 o造成检测时出现影子带 ∀要防止 Œ≥≥• 引物
的滑动 o在引物设计中可采用锚定方法 k¬¨·®¬¨º¬¦½ ετ αλqot||wl ∀本研究所用的 tv个引物 o除 Œ≥≥• st引物
外 o均采用 u碱基锚定引物 ∀另一种减少影子带的方法是选择合适的退火温度 ∀但确定退火温度比较复杂 o
除了根据计算 Τ° 值的经验公式推算外 o还要凭借自己的经验 ∀在本试验中 o采用 v种不同的引物 Τ° 值经
验公式预测 Œ≥≥• 引物的 Τ° 值 o不同公式的预测值并不相同 o最大相差达 ts ε o为了得到好的扩增式样 o本
试验在平均 Τ° 值的基础上 o采用/ ײ∏¦«§²º±0策略 k≥«¤µ°¤ ετ αλqot||xl o获得了较好的研究结果 ∀
Œ≥≥• 标记的等位基因遵循孟德尔遗传规律 o呈共显性遗传 ∀利用 Œ≥≥• 标记可进行多种群间的聚类分
析 o据此分析种群的遗传变异程度 !生存稳定性 o初步评估物种的遗传多样性及种群间的亲缘关系与分化关
系等 ∀本研究所获得的 Œ≥≥• 片段中 o共同片段较多 o与报道的 Œ≥≥• 标记在其他物种比较而言 o多态性比例
并不是很高 o各种群间遗传差异较小 o可能是由于样本采集均来自浙江省 o地域及环境条件相差不大 o种群间
遗传交流比较容易 o因此各种群间遗传距离较近 ∀而洞头属海岛 o与大陆分离 o使得洞头种群与大陆种群的
遗传交流受到一定限制 o表现出与大陆种群较大的遗传距离 ∀
参 考 文 献
蔡邦华 o侯陶谦 o宋士美 qt|yx1 松毛虫的种间杂交及杂种生物学的初步观察 q昆虫学报 otwkwl }vwz p vx| q
柴希民 qt||x1 马尾松毛虫种群动态研究 q浙江林业科技 otxktl }t p uv q
陈昌洁 ot||s1 松毛虫综合管理 q北京 }中国林业出版社 ox p ux q
何丽华 o牛宝龙 o翁宏飚 o等 qussx1 马尾松毛虫的人工饲养 q中国森林病虫 ouwkyl }vt p vw q
侯成香 o李木旺 o苗雪霞 o等 qussx1 Œ≥≥• 方法在蓖麻蚕品种遗传多样性研究中的应用 q蚕业科学 ovtkvl }vx{ p vyt q
zyt 第 t期 翁宏飚等 }浙江马尾松毛虫不同地理种群间基因差异的 Œ≥≥• 分析
孔祥波 o赵成华 o高 伟 qusst1w种松毛虫性信息素成分及在近缘种生殖隔离中的作用 q科学通报 owyktzl }twvx p twv| q
萧刚柔 ot||u1 中国森林昆虫 qu版 q北京 }中国林业出版社 o|ww p |yy q
张爱兵 o孔祥波 o李典谟 o等 qussw1 中国松毛虫属八个种和亚种亲缘关系的 ⁄‘„指纹证据 q昆虫学报 owzkul }uvy p uwu q
赵清山 o邬文波 o吕国平 o等 qt|||1 松毛虫的种间杂交及其遗传规律的研究 q林业科学 ovxkwl }wx p xs q
¬¨¦®©¨ §¯·∞o  ¼¨¨ µ• o…²µ±¨ µ× qt||v1 •¤³¬§¬§¨±·¬©¬¦¤·¬²±¤±§§¬©©¨µ¨±·¬¤·¬²±²©¼¨ ¤¶·¶¥¼ ⁄‘„ ¤±§°≤• ©¬±ª¨µ³µ¬±·¬±ªq…¤¶¬¦¬¦µ²¥¬²¯ ovvkyl }wtv p wux q
‘¤ª¤µ¤­∏o • §¨§¼ Ž⁄o‘¤ª¤µ¤­¤ Š  o ετ αλqusst1 ≤²°³¤µ¬¶²± ²© °∏¯·¬2¯ ²¦∏¶ • ƒ°¶¤±§°≤• ¥¤¶¨§ °¤µ®¨µ¶¼¶·¨°¶©²µª¨ ±¨ ·¬¦¤±¤¯¼¶¬¶²©·«¨ ¶¬¯®º²µ° o
Βοµβψξ µορι q ‹ µ¨¨§¬·¼o{y }x{{ p x|z q
‘¨¬ qt|z{1 ∞¶·¬°¤·¬²± ²©¤√ µ¨¤ª¨ «¨·¨µ²½¼ª²¶¬·¼ ¤±§ª¨ ±¨ ·¬¦§¬¶·¤±¦¨ ©µ²° ¤¶°¤¯¯ ±∏°¥¨µ²©¬±§¬√¬§∏¤¯¶q Š¨ ±¨ ·¬¦¶o{| }x{v p x|s q
≥«¤µ°¤° ≤ o ‹∏·¨¯ …o •¬±·¨µ° o ετ αλqt||x1 ׫¨ ³²·¨±·¬¤¯ ²© °¬¦µ²¶¤·¨¯ ¬¯·¨¶©²µ«¼¥µ¬§¬½¤·¬²± ¤±§³²¯¼°¨ µ¤¶¨ ¦«¤¬± µ¨¤¦·¬²±2¥¤¶¨§ ⁄‘„ ©¬±ª¨µ³µ¬±·¬±ª²©
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¬¨·®¬¨º¬¦½ ∞o •¤©¤¯¶®¬ „ o ¤¥∏§¤ ⁄q t||w1 Š¨ ±²°¨ ©¬±ª¨µ³µ¬±·¬±ª ¥¼ ¶¬°³¯¨ ¶¨ ∏´¨ ±¦¨ µ¨³¨ ¤·k≥≥• l2¤±¦«²µ¨§ ³²¯¼° µ¨¤¶¨ ¦«¤¬± µ¨¤¦·¬²± ¤°³¯¬©¬¦¤·¬²±q
Š¨ ±²°¬¦¶ous }tzy p t{v q
«¤±ª „ …o • ¤±ª oפ± ≥ o ετ αλqussv1 ²±¬·²µ¬±ª ∆ενδρολιµυσ πυνχτατυσ k • ¤¯®¨µl k¨³¬§²³·¨µ¤ }¤¶¬²¦¤°¬§¤¨ l º¬·«¶¼±·«¨·¬¦¶¨¬ ³«¨µ²°²±¨ ¬±
±¬¤±¶«¤± ≤²∏±·¼q≤«¬±¤ „³³¯ ∞±·²°²¯ ²²¯ ov{ kul }tzy p t{y q
k责任编辑 朱乾坤l
{yt 林 业 科 学 ww卷