全 文 ：第 wu卷 第 |期
u s s y年 | 月
林 业 科 学
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杉木成熟合子胚器官发生和体胚发生 3
席梦利 施季森
k南京林业大学 国家林业局林木遗传和基因工程重点实验室 南京 utssvzl
摘 要 } 以杉木成熟合子胚为起始外植体 o研究基本培养基 !不同种类的细胞分裂素及生长素对杉木器官发生和
体胚发生及不定芽生根的影响 o并用石蜡切片法观察不定芽和体胚的发生和发育过程 ∀结果表明 }⁄≤• n yp…„ t1s
°ª#pt n ×⁄ s1ssu °ª#pt n ‘„„ s1t °ª#pt对成熟合子胚诱导不定芽最有效 ~⁄≤• n yp…„ t1s °ª#pt n ×⁄ s1ssv
°ª#pt n ‘„„ s1t °ª#pt是成熟合子胚诱导体胚的最佳培养基 ~不定芽在 ⁄≤• 基本培养基中可有效伸长 ~tΠw≥
n Œ…„ s1u °ª#pt n ‘„„ s1t °ª#pt对不定芽生根最有效 ∀石蜡切片观察表明 }不定芽有 u种发生方式 o一种是表
皮及表皮下的 v ∗ w层细胞分生组织化发育而成 o另一种是外植体内部的小维管束脱分化发育而成 ∀u种发生方式
均为直接器官发生途径 ∀
关键词 } 杉木 ~成熟合子胚 ~器官发生 ~体胚发生
中图分类号 }≥zuu1vn z ~ ±|wv1t 文献标识码 }„ 文章编号 }tsst p zw{{kussyls| p ssu| p sx
收稿日期 }ussx p sz p uy ∀
基金项目 }国家自然科学基金项目kvstzszwxl和江苏省高校省级重点实验室开放课题kŽ≥svsvxl资助 ∀
3 施季森为通讯作者 ∀
Οργανογενεσισ ανδ Σοµατιχ Ε µ βρψογενεσισφροµ
Ματυρε Ζψγοτιχ Ε µ βρψοσ οφ Χυννινγηαµιαλανχεολατα
÷¬ ±¨ª¯¬ ≥«¬¬¶¨±
k ΚεψΛαβορατορψοφ Φορεστ Τρεε Γενετιχσ ανδ Γενε Ενγινεερινγ o Στατε Φορεστρψ Αδµινιστρατιον Νανϕινγ Φορεστρψ Υνιϖερσιτψ Νανϕινγ utssvzl
Αβστραχτ} ˜¶¬±ª °¤·∏µ¨ ½¼ª²·¬¦ °¨¥µ¼²¶¤¶¬±¬·¬¤¯ ¬¨³¯¤±·¶o·«¨ ©¨©¨¦·©¤¦·²µ¶¬±¦¯∏§¬±ª¥¤¶¤¯ °¨ §¬∏° ¤±§³¯¤±·«²µ°²±¨ ²±
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²µª¤±²ª¨ ±¨ ¶¬¶q
Κεψ ωορδσ} Χυννινγηαµιαλανχεολατα~°¤·∏µ¨ ½¼ª²·¬¦ °¨¥µ¼²¶~²µª¤±²ª¨ ±¨ ¶¬¶~¶²°¤·¬¦ °¨¥µ¼²ª¨ ±¨ ¶¬¶
针叶树的离体培养和植株再生是植物组织培养研究中难度较大的一个领域 ∀随着人类环境保护意识的
增强和对发展无性系育林业的重视 o在过去的 vs ∗ ws年里 o世界各国对针叶树的组织培养工作给予了特别
的关注 o该领域的研究也取得了重要进展 ∀目前 o已有 ws余种针叶树通过直接器官发生产生了不定芽 o国内
外已从冷杉属k Αβιεσl !落叶松属k Λαριξl !云杉属k Πιχεαl !松属k Πινυσl !黄杉属k Πσευδοτσυγαl和红杉属
kΣεθυοιαl的 ws多种针叶树培养产生了体细胞胚 o该领域的研究主要集中在云杉属和松属k黄健秋等 ot||w ~
t||x¤~t||x¥~t||x¦~唐巍等 ot||y ~t||z¤~t||z¥~杨金玲等 ot||z ~t|||l ∀
杉木k Χυννινγηαµιαλανχεολαταl是我国特有的常绿针叶树种之一 ∀杉木生长快 !木材纹理直 !结构细 !耐
腐力强 o又因其萌芽力强 !成林迅速 o故成为重要的商品用材和造林树种 ∀我国杉木人工林面积约 vs亿
«°u o年产木材占全国商品材的 tΠw o杉木与国计民生关系极为密切 ∀有关杉木组培快繁方面的研究已有文献
报道 o但主要以幼树或成年树的嫩枝为试验材料k阙国宁 ot|{s ~朱鹿鸣等 ot|{sl o杉木成熟合子胚器官发生
和体胚发生的研究国内外未见报道 ∀本文系统地研究了基本培养基 !不同种类的细胞分裂素对器官发生和
体胚发生及不定芽生根的影响 o并用石蜡切片法观察了不定芽和体胚的发生和发育过程 ∀
t 材料与方法
111 试验材料
以福建第 u代遗传改良种子园当年收获的优良种子的成熟合子胚为起始外植体 o种子使用前在 w ε 冰
箱中冷藏保存 ∀
112 试验方法
t1u1t 消毒与接种 成熟种子 o吸水膨胀后剥去外种皮 o在超净工作台上用 zx h酒精浸泡 t °¬± os1t h
‹ª≤¯ u 浸泡 tx °¬± o无菌水冲洗 x ∗ y次 o无菌条件下剥出合子胚接种于诱导培养基上 o每个处理接种 x瓶 o每
瓶接种 ts个胚 ∀
t1u1u 培养基与培养条件 不定芽和体胚的诱导培养基 }选用 ≥k∏µ¤¶«¬ª¨ ¤±§≥®²²ªot|yul !tΠu≥ !⁄≤•
kŠ∏³·¤¤±§⁄∏µ½¤±ot|{xl !Š⁄kŠµ¨¶¶«²©©¤±§⁄²¼ot|zul w种基本培养基 ∀激素浓度范围 }yp…„ s ∗ u1x °ª#pt o
× s ∗ u1x °ª#pt o×⁄ s ∗ s1ssw °ª#pt o‘„„ s1t °ª#pt ∀琼脂 s1yx h o蔗糖 u h o³‹值 x1{ ∀
不定芽的伸长和体胚萌发培养基 }不添加植物激素的 ⁄≤• 基本培养基 o琼脂 s1yx h o蔗糖 u h o³‹ 值
x1{ ∀
不定芽的生根培养基 }选用 ≥ !tΠu≥ !tΠw≥ v种基本培养基 o附加Œ…„ s ∗ s1u °ª#pt o‘„„ s ∗ s1u °ª#
pt ∀蔗糖 u h o琼脂 s1y h o³‹值 x1{ ∀
采用光照培养 o每天光照ku sss ¬¯ltw «o培养温度 uv ∗ ux ε ∀
t1u1v 数据统计方法 不定芽的诱导频率k h l €长出不定芽的外植体数Π接种的外植体数 ≅ tss h ~体胚的
诱导频率k h l €长出体胚的外植体数Π接种的外植体数 ≅ tss h ~诱导的平均不定芽数 €不定芽的总数Π诱导
出不定芽的外植体数 ~不定芽的形成能力k¥∏§©²µ°¬±ª¦¤³¤¦¬·¼o…ƒ≤l €平均不定芽数 ≅ 不定芽的诱导频率
k¤·«∏µετ αλqot|||l ∀
不定根的诱导频率k h l €长出不定根的不定芽数Π接种不定芽数 ≅ tss h ~平均不定根数 €不定根的总
数Π诱导出不定根的不定芽数 ∀不定根的形成能力kµ²²·©²µ°¬±ª¦¤³¤¦¬·¼o• ƒ≤l €平均不定根数 ≅ 不定根的诱
导频率 ∀
每个因子的试验重复 v次 o最终的数据为 v次重复的平均值 ∀
t1u1w 石蜡切片方法 选取带有不定芽原基和不同发育阶段体胚的合子胚 o用锋利的单面刀片切割成 s1u
¦° ≅ s1u ¦° ≅ s1u ¦°的材料块 ∀ ƒ„„kzs h l固定 o正丁醇逐级脱水 o石蜡透入包埋 o常规石蜡切片 o切片厚度
{ ∗ ts Λ°∀番红 p固绿对染 o显微镜下观察照相 ∀
u 结果与分析
211 不定芽和体胚的诱导
u1t1t 基本培养基对不定芽和体胚发生的影响 成熟合子胚接种于添加 yp…„ t1s °ª#pt !‘„„ s1t °ª#pt
的 ≥ !tΠu≥ !⁄≤• !Š⁄培养基上 o接种 y §后 o不同培养基上的胚均膨大 ∀tx §后 o接种于 ≥ !tΠu≥培养基
上的合子胚变红 !开始愈伤化 ovx §后 o形成疏松的红褐色愈伤组织 otΠu≥培养基上的愈伤组织较 ≥上的
生长量大 ∀wx §后红色愈伤组织开始干枯 o没有观察到不定芽和体细胞胚胎发生 ~接种 tx §以后 o⁄≤• !Š⁄
培养基上的合子胚继续膨大 oux §后部分胚的子叶顶端及表面分化出不定芽 ovx §后 o观察到子叶表面有体
细胞胚胎发生 ∀统计分析后发现 o⁄≤• 培养基上体胚诱导频率 !不定芽诱导频率 !平均不定芽数和不定芽形
成能力均明显高于 Š⁄培养基k表 tl o说明 ⁄≤• 基本培养基最适于诱导不定芽和体胚发生 ∀
u1t1u yp…„浓度对不定芽和体胚发生的影响 成熟合子胚接种于附加 yp…„ s1x ∗ u1x °ª#pt !‘„„ s1t °ª
#pt的 ⁄≤• 培养基上 ∀ts §后 o合子胚开始膨大 ∀tx §后 o可观察到合子胚的子叶表面和顶端出现小突起 o
这些小突起为不定芽原基 o不定芽原基进一步发育成形态可辨的不定芽k图版 ´ p tl ∀vx §后 o合子胚上有
不同时期的体细胞胚胎发生 o解剖镜下观察发现 o发育早期的体细胞胚呈球形k图版 ´ p {l o进一步发育成一
圆柱体k图版 ´ p |l o发育后期的体细胞胚胎有 u片典型的子叶 !胚轴和胚根k图版 ´ p tsl ∀统计分析后发
sv 林 业 科 学 wu卷
表 1 基本培养基对成熟合子胚不定芽和体胚发生的影响
Ταβ .1 Εφφεχτ οφ διφφερεντ βασαλ µεδια ον αδϖεντιτιουσ βυδ ανδ σοµατιχ εµ βρψο ινδυχτιον φροµ µ ατυρε ζψγοτιχ εµ βρψοσ
基本培养基
…¤¶¤¯
°¨ §¬∏°
接种数量
‘∏°¥¨µ²©
¬¨³¯¤±·¶
体胚诱导频率
°¨ µ¦¨±·¤ª¨ ²© ¬¨³¯¤±·¶
©²µ°¬±ª¶²°¤·¬¦ °¨¥µ¼²Πh
不定芽诱导频率
°¨ µ¦¨±·¤ª¨ ²© ¬¨³¯¤±·¶
©²µ°¬±ª¥∏§¶Πh
胚上平均再生
的不定芽数
‘∏°¥¨µ²©¥∏§¶³¨µ °¨¥µ¼²
不定芽形成能力
…∏§©²µ°¬±ª
¦¤³¤¦¬·¼
≥ xs s s s s
tΠu≥ xs s s s s
⁄≤• xs w1{ yv1y v1xx u1uy
Š⁄ xs u xy u1wy t1v{
现 oyp…„浓度在 s1x ∗ u1s °ª#pt范围内变动时 o成熟合子胚的体细胞胚胎诱导频率随着 yp…„浓度的升高
而提高k表 ul oyp…„浓度为 u °ª#pt时 o体胚诱导频率最高 o达 z1v h ∀yp…„浓度在 s1x ∗ t1x °ª#pt时 o成
熟合子胚的不定芽诱导频率 !平均不定芽数及不定芽形成能力随着 yp…„ 浓度的升高而提高 oyp…„ 浓度为
t1x °ª#pt时 o不定芽的诱导频率 !平均不定芽数及不定芽形成能力最高 o分别可达 y|1{ h !w1zv和 v1vs ∀yp
…„浓度高于 t1x °ª#pt时 o诱导出的不定芽出现玻璃化现象 o而且 oyp…„浓度越高 o玻璃化现象愈严重 ∀
表 2 6−ΒΑ !Τ∆Ζ和 ΖΤ浓度对成熟合子胚不定芽和体胚发生的影响
Ταβ .2 Εφφεχτ οφ χονχεντρατιονσ οφ 6−ΒΑ ,Τ∆Ζ ανδ ΖΤ ον αδϖεντιτιουσ βυδ ανδ σοµατιχ εµ βρψο ινδυχτιον
φροµ µατυρε ζψγοτιχ εµ βρψοσ
浓度
≤²±¦¨±·µ¤·¬²±Πk°ª#ptl
接种数量
‘∏°¥¨µ²©
¬¨³¯¤±·¶
体胚诱导频率
°¨ µ¦¨±·¤ª¨ ²© ¬¨³¯¤±·¶
©²µ°¬±ª¶²°¤·¬¦ °¨¥µ¼²Πh
不定芽诱导频率
°¨ µ¦¨±·¤ª¨ ²© ¬¨³¯¤±·¶
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胚上平均再生
的不定芽数
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不定芽形成能力
…∏§©²µ°¬±ª
¦¤³¤¦¬·¼
s1x xs u1{ xw1w u1|u t1x|
t1s xs v1x yv1{ v1xx u1uy
yp…„ t1x xs w1{ y|1{ w1zv v1vs
u1s xs z1v yz1v v1{{ u1yt
u1x xs x1u yt1{ v1{t u1vx
s1sss x xs v1z zs1t v1tu u1t|
s1sst xs x1u zx1y w1uv v1us
×⁄ s1ssu xs tt1v {x1{ x1wx w1y{
s1ssv xs tv1x zv1y w1z{ v1xu
s1ssw xs z1z yt1x w1tv u1xw
s1x xs v1t yt1v v1tu t1|t
t1s xs v1w yw1u v1xx u1u{
× t1x xs v1u zs1t v1vv u1vv
u1s xs v1{ yz1z v1wx u1vw
u1x xs v1y zs1t v1wu u1ws
u1t1v ×⁄浓度对不定芽和体胚发生的影响 成熟合子胚接种于附加 yp…„ t1s °ª#pt !×⁄ s1sss x ∗
s1ssw °ª#pt !‘„„ s1t °ª#pt的 ⁄≤• 培养基上 ∀w §后 o外植体开始膨大 otu §可观察到不定芽原基 ovs §
可观察到体胚发生 ∀观察发现 o成熟合子胚多从子叶上长出不定芽 ∀分析发现 o×⁄对成熟合子胚的不定
芽和体胚发生 o均产生了明显影响 ∀成熟合子胚在附加 yp…„ u1s °ª#pt时 o体胚的诱导频率最高 o为 z1v h ∀
培养基中添加 ×⁄后 o体胚发生频率显著提高 o×⁄为 s1ssv °ª#pt时 o体胚的诱导频率最高 o可达 tv1x h ∀
成熟合子胚的不定芽诱导频率 !平均不定芽数及不定芽的形成能力也有明显提高k表 ul o×⁄为 s1ssu °ª#
pt时 ov项指标均达到最佳 o分别为 {x1{ h !x1wx !w1y{ ∀
u1t1w ×浓度对不定芽和体胚发生的影响 成熟合子胚接种于附加 yp…„ t1s °ª#pt !× s1x ∗ u1x °ª#
pt !‘„„ s1t °ª#pt的 ⁄≤• 培养基上 o外植体的变化与不加 ×时相似 ∀统计分析结果发现 o× 浓度在 s1x
∗ u1x °ª#pt变动时 o成熟合子胚的体胚发生频率 !不定芽诱导频率 !平均不定芽数及不定芽的形成能力与
不添加 ×时相比 o均未发生明显变化k表 ul ∀该试验证明 o×虽然是一种高活性的细胞分裂素 o但是 o对杉
木成熟合子胚的体胚发生和不定芽发生却没有明显的促进作用 ∀
212 不定芽的伸长和体细胞胚的萌发
u1u1t 不定芽的伸长 经过不定芽诱导培养的合子胚 o转接入不添加植物激素的 ⁄≤• 培养基 ots §后 o可
观察到不定芽明显伸长 ovx §后 o大量不定芽可伸长到 t1x ∗ u1s ¦°k图版 ´ p tl o长 t1x ¦°以上的不定芽可
用于生根培养 ∀
tv 第 |期 席梦利等 }杉木成熟合子胚器官发生和体胚发生
u1u1u 体细胞胚的萌发 将发育成熟的健壮子叶胚转接于未添加任何植物激素的 ⁄≤• 培养基上 ots §后
观察到 u片子叶中央开始发育真叶 ot{ §左右 o真叶长 t ∗ u ¦°ous §后少数体胚根端明显发育 oux §后发育
成一完整植株 ∀ ⁄≤• 培养基中添加少量活性炭ks1x ∗ t ª#ptl o可促进体细胞胚根端发育 ∀
213 不定芽的生根
长 t1x ∗ u1s ¦°的不定芽接入生根培养基k表 vl o{ §后 otΠw≥附加 Œ…„和 ‘„„的生根培养基上开始有
不定根长出 otz §后不定根伸长到 t ∗ t1x ¦°∀在 tΠu≥ !tΠw≥单独附加 Œ…„的生根培养基上 ott §后才观
察到有不定根被诱导出 ous §后不定根伸长到 t ∗ t1x ¦°k图版 ´ p ul ∀这说明 ‘„„和 Œ…„配合使用 o可明
显缩短生根时间 o观察还发现 otΠw≥培养基上的试管苗呈淡绿色 o开始表现出营养不良的症状 ∀接种 uz §
统计分析后发现 o随着 ≥基本培养基中大量元素的降低 o生根率 !平均根数和不定根形成能力迅速提高 o由
此可见 o生根培养基中大量元素的含量是影响杉木不定芽生根的重要因素 ∀
tΠw≥附加 Œ…„和 ‘„„的 w种生根培养基上 o‘„„浓度为 s1t °ª#pt时 o试管苗根茎相连处稍有膨大 o
没有愈伤组织生长 oŒ…„浓度从 s1t °ª#pt升高到 s1u °ª#pt o试管苗的生根率从 {w h提高到 tss h ~‘„„浓
度为 s1u °ª#pt时 o试管苗根茎相连处明显膨大 o有少量愈伤组织生长 oŒ…„浓度从 s1t °ª#pt升高到 s1u
°ª#pt o试管苗的生根率从 {{ h降低到 zy h ∀综合考虑试管苗的生根质量 !生根率 !平均根数和不定根形成
能力 o认为 tΠw≥ n Œ…„ s1u °ª#pt n ‘„„ s1t °ª#pt为杉木不定芽生根的最佳培养基 o此时 o生根率 !平均
根数和不定根形成能力分别可达 tss h !v1{|和 v1{| ∀
表 3 培养基对不定芽生根的影响
Ταβ .3 Εφφεχτ οφ διφφερεντ µεδια ον ινδυχτιον ροοτσφροµ σηοοτσ
培养基
 §¨¬∏°
接种外植体数
‘∏°¥¨µ²©
¬¨³¯¤±·¶
生根率
•²²·¬±ª
©µ¨ ∏´¨ ±¦¼Πh
平均根数k条l
‘∏°¥¨µ²©µ²²·¶
³¨µ¶«²²·
不定根形成能力
• ²²·©²µ°¬±ª
¦¤³¤¦¬·¼
≥ n Œ…„ s1t °ª#pt ux s s s
≥ n Œ…„ s1u °ª#pt ux s s s
tΠu≥ n Œ…„ s1t °ª#pt ux vt u1v s1zt
tΠu≥ n Œ…„ s1u °ª#pt ux xy u1y t1wy
tΠw≥ n Œ…„ s1t °ª#pt ux yv v t1{|
tΠw≥ n Œ…„ s1u °ª#pt ux y| v1t u1tw
tΠw≥ n Œ…„ s1t °ª#pt n ‘„„ s1t °ª#pt ux {w v1w u1{y
tΠw≥ n Œ…„ s1t °ª#pt n ‘„„ s1u °ª#pt ux {{ w1uv v1zu
tΠw≥ n Œ…„ s1u °ª#pt n ‘„„ s1t °ª#pt ux tss v1{| v1{|
tΠw≥ n Œ…„ s1u °ª#pt n ‘„„ s1u °ª#pt ux zy w1t v1tu
214 不定芽和体胚发生的组织学观察
u1w1t 不定芽发生的组织学观察 石蜡切片观察到杉木成熟合子胚上不定芽有 u种发生方式 }一种是表面
发生 o另一种是内部发生 ∀u种发生方式均未经过愈伤组织阶段 o直接从外植体表面或内部发生不定芽 o不
定芽和母体常保持维管连系 o因此 o杉木成熟合子胚的不定芽发生为直接器官发生途径 ∀
在激素诱导下 o外植体表皮及表皮下的 v ∗ w层细胞快速分裂而分生组织化 o细胞体积小 o核大 o细胞质
浓厚 o核质比明显大于未分生组织化的表皮及表皮下细胞k图版 ´ p vl ~随着分生组织细胞的分裂 o在外植体
表面开始出现分生组织突起k图版 ´ p wl ~分生组织突起两侧的细胞加速分裂而发育出叶原基 o分生组织突
起和叶原基共同组成不定芽原基k图版 ´ p xl ~不定芽原基进一步发育形成肉眼可辨不定芽 ∀这种不定芽起
源于外植体的表面几层细胞 o所以认为是表面发生方式 o该方式是杉木成熟合子胚不定芽发生的主要途径 ∀
在激素的刺激下 o外植体内部的小维管束脱分化 o形成一团分生组织k图版 ´ p yl o分生组织进一步发育
成具有叶原基的不定芽原基k图版 ´ p zl o不定芽原基在发育过程中增大 o最终冲出表层组织发育成肉眼可
辨的不定芽 ∀这种不定芽起源于外植体内部的小维管束 o所以是内部发生方式 ∀
u1w1u 体胚发生的组织学观察 石蜡切片观察到外植体表面有突起的球形胚k图版 ´ p ttl o球形胚由核
大 !细胞质浓厚的小细胞组成 ~球形胚的细胞分裂 o细胞数目增多 o而发育成柱状胚k图版 ´ p tul ~柱状胚的
顶端两侧细胞加速分裂 o形成子叶 o进一步发育成子叶胚 ∀子叶胚的纵切片上可观察到明显的茎端分生组
织 !根端分生组织和 ∂ 字形的维管组织k图版 ´ p tvl ∀体胚从发生到发育成熟的整个过程中 o始终与母体
组织没有维管连系 ∀
uv 林 业 科 学 wu卷
v 讨论
311 基本培养基与不定芽和体胚发生
研究表明 o基本培养基中 ‘’v p 和 ‘‹w n 的含量是影响针叶树体细胞胚胎发生和不定芽分化的重要因
素 ∀一般情况下 o只有明显降低 ‘’v p和 ‘‹w n的含量时 o才能促进体细胞胚胎的发育和诱导产生更多的分
化芽k黄健秋等 ot||wl ∀本试验共选用了 ≥ !tΠu≥ !⁄≤• !Š⁄w种基本培养基 o这 w种基本培养基中 ‘’v p和
‘‹w n的总含量从高到低依次为 }≥为 x|1{ °°²¯#pt oŠ⁄为 vz1| °°²¯#pt otΠu≥为 u|1| °°²¯#pt o⁄≤•
为 t{1u °°²¯#pt ∀杉木成熟合子胚在 ⁄≤• 培养基上不定芽和体胚发生频率均最高 o这是因为 ⁄≤• 培养基
中 ‘’v p和 ‘‹w n的总含量最低 ∀
312 基因型与体胚发生频率
外植体的基因型是影响体胚发生频率的内在因素 ∀大量研究表明 o基因型不同 o诱导体胚发生的难易不
同 ∀唐巍等kt||{l在研究火炬松k Πινυσταεδαl时发现 o{种不同基因型的火炬松成熟合子胚诱导胚性愈伤组
织时 o不同基因型的诱导频率明显不同 o‹… !„和 ≤ v种基因型的诱导频率最高 o分别可达 { h ∗ |1u h !
tz h ∗ u{1t h和 y1z h ∗ { h ~v种基因型的体细胞胚转化成再生植株的频率也不同 o„最高 o为 t{1w h o‹…
为 ts1x h o≤ 为 y1t h ∀塞尔维亚云杉k Πιχεα οµορικαlx个品种在外植体大小和培养条件完全相同的情况
下 o体细胞胚的诱导频率明显不同 o体胚诱导频率最高的可达 t{1z h o最低只有 t1v h k¤¬± ετ αλqot||xl ∀本
研究是以福建第二代种子园当年收获的优良杉木种子为试验材料 o虽然种子来源一致 o但由于杉木为异花授
粉 o加之种子不是采自同一株母株 o所以每个种子代表一个基因型 ∀在同一种培养基上 o大部分种子的合子
胚发生不定芽 o少数发生体胚 o很少观察到同一外植体上既有不定芽又有体胚发生的现象 o说明只要培养条
件基本合适 o杉木有大约 u h的种子很容易诱导体胚发生 o这也是由这部分种子的基因型所决定的 ∀
313 Τ∆Ζ的效应
×⁄是新合成的一种杂环芳香脲 o它是一种高活性的类细胞激动素 o对不定芽分化表现出很强的调控能
力 ∀据不完全统计 o已有近 tss种组织培养困难的木本植物 o使用 ×⁄后获得了再生植株k王关林等 ot||zl ∀
¤·«∏µ等kt|||l在研究北美乔松k Πινυσ ωαλλιχηιαναl成熟合子胚器官发生与植株再生时发现 o×⁄与 yp…„配
合使用 o可以提高北美乔松成熟合子胚不定芽的形成能力 ∀本研究也发现 o×⁄与 yp…„配合使用 o可显著
提高杉木成熟合子胚的体胚发生频率 !不定芽诱导频率 !平均不定芽数及不定芽形成能力 ∀这可能是由于
yp…„和 ×⁄的作用机理不同 o它们在植物细胞内可能有不同的识别位点和代谢途径 o从而产生不同的生物
学效应 ∀低浓度的 ×⁄与 yp…„配合使用 o可以实现其生物学效应的互补 o产生更好的分化效果 ∀
参 考 文 献
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黄健秋 o卫志明 qt||w1 松属树种的组织培养和原生质体培养 q植物学通报 ottktl }vw p wu
阙国宁 qt|{s1 杉木组织培养的初步研究 q林业科学 otyk增刊l }tvz p tws
唐 巍 o杨映根 o桂耀林 o等 qt||y1 松柏类植物体细胞胚胎发生的研究与应用 q植物学通报 otvktl }ux p vt
唐 巍 o欧阳藩 o郭仲琛 qt||z¤q针叶树体细胞无性系研究和应用进展 q生物工程进展 otzkwl }u p |
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王关林 o方宏筠 o那 杰 qt||z1 高活性细胞激动素 ×⁄在植物组织培养中的应用 q植物学通报 otwkvl }wz p xv
杨金玲 o桂耀林 o郭仲琛 qt|||1 云杉属树种的体细胞胚胎发生 q植物学通报 otyktl }x| p yy
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朱鹿鸣 o金韵琴 o栾永华 qt|{s1 用组织培养法繁殖杉木优树 q江苏林业科技 okwl }wz p w|
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k责任编辑 徐 红l
vv 第 |期 席梦利等 }杉木成熟合子胚器官发生和体胚发生