全 文 ：第 ws卷 第 w期
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林 业 科 学
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毛细管气相色谱法测定森林凋落物中的有机酸 3
宋金凤tl 崔晓阳vl
k东北林业大学 哈尔滨 txsswsl
刘 永ul
k中国水产科学研究院黑龙江水产研究所 哈尔滨 txsszsl
关键词 } 毛细管气相色谱法 o凋落物 o有机酸 o甲酯化
中图分类号 }≥zt{1wv 文献标识码 }„ 文章编号 }tsst p zw{{kusswlsw p st{x p sw
收稿日期 }ussv p ts p tw ∀
基金项目 }国家自然科学基金资助项目kvstzszy{l ∀
3 tl !ul !vl为作者排序 ∀崔晓阳为通讯作者 ∀
∆ετερµινατιον οφ Οργανιχ Αχιδσιν Φορεστ Λιττερσ βψ α Χαπιλλαρψ Γασ Χηροµατογραπηψ
≥²±ª¬±©¨ ±ªtl ≤∏¬÷¬¤²¼¤±ªvl
k Νορτηεαστ Φορεστρψ Υνιϖερσιτψ Ηαρβινtxsswsl
¬∏≠²±ªul
k Ηειλονγϕιανγ Φισηερψ Ρεσεαρχη Ινστιτυτε o Χηινεσε Αχαδεµψοφ Φισηερψ Σχιενχεσ Ηαρβινtxsszsl
Αβστραχτ} ’µª¤±¬¦¤¦¬§¶¬±©²µ¨¶·¯¬·¨µ¶³¯¤¼¬°³²µ·¤±·µ²¯¨¬±©²µ¨¶·¶¤±§©²µ¨¶·¶²¬¯¶q…¤¶¨§²±·«¨ ©µ¨¶« ¬¯·¨µ°¤·¨µ¬¤¯¶²©
Φραξινυσ µανδσηυριχα ¤±§ Λαριξ ολγενσισ©²µ¨¶·¬± ±²µ·«¨¤¶·≤«¬±¤o¤¦¤³¬¯¯¤µ¼ ª¤¶¦«µ²°¤·²ªµ¤³«¼ ³µ²¦¨§∏µ¨ º¤¶ ¶¨·¤¥¯¬¶«¨§·²
§¨·¨µ°¬±¨ ²µª¤±¬¦¤¦¬§¶¬±©²µ¨¶·¯¬·¨µ¶q’µª¤±¬¦¤¦¬§¶¬±©²µ¨¶·¯¬·¨µº¨ µ¨ ¬¯¬¬√¬¤·¨§¤±§§¨µ¬√¨ §¬±·²¦²µµ¨¶³²±§¬±ª ¶¨·¨µ¶º¬·«
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µ¨¶∏¯·¨§·«¤·o·«¨ °¨ ·«²§µ¨³²µ·¨§¬±·«¬¶³¤³¨µ·² ¶¨³¤µ¤·¨o¬§¨±·¬©¼ ¤±§ §¨·¨µ°¬±¨ ²µª¤±¬¦¤¦¬§¶¬± ©²µ¨¶·¯¬·¨µ¥¼ Š≤ º¤¶
µ¨ ¬¯¤¥¯¨¤±§ ¤¨¶¼·²²³¨µ¤·¨q׫¨ §¬¶³²¶¤¯ ²©¶¤°³¯¨º¤¶¦²±√¨ ±¬¨±·o¤±§·«¨ ¶¨·¨µ¬©¬¦¤·¬²± º¬·«≤‹v ’‹ ²¦¦∏µµ¨§º«¬¯¨ ¬¨·µ¤¦·¬±ª
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{w1yy h ·²|z1wx h º¬·«µ¨ ¤¯·¬√¨ ¶·¤±§¤µ§§¨√¬¤·¬²±©µ²°t1xv h ·²{1xw h o¤±§ ²¯º¨ ¶·§¨·¨¦·¬²± ¬¯°¬·²©§¬©©¨µ¨±·²µª¤±¬¦¤¦¬§¶
º¤¶¬±µ¤±ª¨ ²©s1v|·²y1wy ±ªq׫¨ °¨ ·«²§¦²∏¯§¥¨ ∏¶¨§·² §¨·¨µ°¬±¨ ²µª¤±¬¦¤¦¬§¶¬±©²µ¨¶·¯¬·¨µ¶º¬·«¶¤·¬¶©¤¦·²µ¼ µ¨¶∏¯·¶q
Κεψ ωορδσ} ≤¤³¬¯¯¤µ¼ ª¤¶¦«µ²°¤·²ªµ¤³«¼oƒ²µ¨¶·¯¬·¨µo’µª¤±¬¦¤¦¬§¶o∞¶·¨µ¬©¬¦¤·¬²±
有机酸在土壤养分活化 !释放中的作用日益受到关注 o已成为国内外植物营养和土壤学研究的热点kƒ²¬
ετ αλqot||s¥~t||u ~胡红青等 ot||z ~陆文龙等 ot||{ ~¦≤²¯¯ ετ αλqot||| ~≥²¯ ¬¯±¶ ·¨¤¯ qot|||l ∀土壤中的有机
酸可来自有机质分解 !微生物代谢或植物根分泌作用等不同途径k莫淑勋 ot|{y ~沈阿林等 ot||zl ∀对于森林
土壤来说 o森林凋落物的分解和淋溶过程无疑是有机酸的最主要来源 ∀目前 o已有越来越多的研究者注意到
森林凋落物分解 !淋溶过程中释放的有机酸并对此进行研究k°²«¯°¤± ετ αλqot|{{ ~ƒ²¬ ετ αλqot||s¤~王晓水
等 ot||z ~吴俊民等 ousssl o这就要求有准确 !快速 !简便的分析检测方法 ∀
森林凋落物中有机酸的分析尚无统一方法 o研究者采用的主要有高效液相色谱法和气相色谱法 u大类 ∀
用高效液相色谱法k紫外检测器l测定有机酸时 o检测波长一般在羧基的最大吸收峰 usx ±°左右 o易受夹杂
成分的干扰 o引起较大误差 o且需要较为复杂的前处理kƒ²¬ ετ αλqot||s¤l ~另外在测定小分子有机酸时需要
较低的 ³‹值 o易引起色谱柱的流失 o而高级脂肪酸又以结合态k甘油三酯l存在 o且存在形式不唯一 o无法直
接测定 o使其游离而不破坏脂肪酸的特性需要复杂的处理过程 ∀应用传统的气相色谱法测定有机酸时 o前处
理大多选用不同溶剂浸提 o然后进行浓缩 !酯化 o这就不可避免地产生易挥发性有机酸在浓缩和酯化过程中
的损失以及高温引起的不饱和脂肪酸的氧化 o且由于处理方法的不同 o通常仅能分析大分子有机酸 o而对低
分子有机酸的选择性较差k王晓水等 ot||z ~吴俊民等 ousssl ∀对于同一种凋落物而言 o要想测定出其所含有
的低分子量有机酸及高级脂肪酸 o往往需用 u种不同方法进行测定 o从而导致 u种不同方法之间可比性差 o
容易造成误差 ∀因此 o进行树种凋落物中各种有机酸的综合 !一次性测定研究就显得尤为重要 ∀
本文采用甲醇浸提的同时进行甲酯化处理 o用毛细管气相色谱法进行检测 o建立了一种准确且同时测定
森林凋落物中低分子量有机酸和高级脂肪酸的毛细管气相色谱法 ∀该方法操作简便 o不需要额外的样品浓
缩处理过程 o能同时分析多种低分子量有机酸及高级脂肪酸 ∀
1 试验材料
选择东北林区主要造林树种水曲柳k Φραξινυσ µανδσηυριχαl和落叶松 kΛαριξ ολγενσισl的新鲜凋落物为供试
材料 ∀于 ts月上旬在东北林业大学帽儿山实验林场kwxβtuχ ∗ wxβvsχ ‘otuzβvsχ ∗ tuzβw{χ ∞l收集当年新鲜凋
落物k层l ∀样品在实验室内通风阴干 o粉碎 o装瓶待测 ∀
2 样品处理(浸提与甲酯化)
准确称取凋落物样品 s1xss s ª放入干净的 xs °反应瓶中 o加入体积之比为 zΒtss的 ‹u≥’wΒ≤‹v ’‹溶
液 ts °k刘百战等 ot|||l o密闭摇匀 o置于 ys ε 水浴锅中加热 uw «浸提并直接进行甲酯化 o然后用布氏漏斗
将甲酯化后的样品抽滤 o用甲醇冲洗反应瓶 v次 o抽滤后合并滤液 o转移到盛有 us °高纯水的分液漏斗中 ∀
用三氯甲烷萃取kx °o分 v次l o分层后下层萃取液经无水硫酸钠玻璃小柱k玻璃小柱中加入约 x °°厚无水
硫酸钠 o下端用玻璃纤维固定 ~无水硫酸钠及玻璃纤维在 uxs ε 下烘干 w «l干燥 o用带刻度试管接取 o直接取
t ˏ进样分析 ∀
3 仪器设备与色谱条件
美国 „ª¬¯¨ ±·2y{|s‘气相色谱仪 o氢火焰离子化检测器kƒŒ⁄l ∀色谱分析条件如下 }色谱柱 }vs ° ≅ s1ux
°° ≅ s1xv Λ° ƒƒ„°弹性石英毛细管柱 ~柱流速 }u1x °#°¬±pt ~进样口温度 }uvs ε ~载气 }氮气k‘ul o纯度 ∴
||1||| h ~程序升温 }tus ε k保持 u °¬±l ts ε #°¬±
pt
tys ε us ε #°¬±
pt
uss ε k保持 us °¬±l ~进样量 }t ˏ ~分流
比 }usΒt ~检测器温度 }uxs ε ~尾吹 }xs °#°¬±pt ~ ‹uΒ空气为 ws °#°¬±ptΒwxs °#°¬±pt ∀
4 定性分析
分别取一定浓度的草酸 !丙二酸 !丁二酸 !反丁烯二酸 !顺丁烯二酸 !苹果酸 !柠檬酸 !棕榈酸 !硬脂酸 !油
酸 !亚油酸 !亚麻酸和花生酸k均为色谱纯 o≥¬ª°¤产品l标样 o在上述最佳色谱条件下 o按样品处理方法进行甲
酯化 o得到标样色谱图 o以确定各有机酸峰的位置及不同有机酸所对应的保留时间 ∀在相同色谱条件下 o将
样品色谱图与有机酸标准样品色谱图进行对照 o根据保留时间确定样品中各有机酸的色谱峰 o进行定性分
析 ~同时还在样品中加入有机酸标样 o以进一步确定 ∀图 t和图 u分别为水曲柳和落叶松凋落物样品的典型
气相色谱图 ∀
从图 t和图 u可以看出 o水曲柳和落叶松凋落物样品含有多种有机酸 o包括草酸 !丙二酸 !反丁烯二酸 !
丁二酸 !顺丁烯二酸 !苹果酸 !棕榈酸 !柠檬酸 !硬脂酸 !油酸 !亚油酸 !亚麻酸 !花生酸等 o其中大部分峰都能得
到较好的分离 ∀另外还有部分含量较高的物质未能确认 ∀
图 t 水曲柳凋落物中有机酸k甲酯l的典型气相色谱图
ƒ¬ªqt „ ·¼³¬¦¤¯ ¦«µ²°¤·²ªµ¤° ²©²µª¤±¬¦¤¦¬§¶¬± Φq µανδσηυριχα©²µ¨¶·¯¬·¨µ
t1 草酸 ’¬¤¯¬¦~u1 丙二酸 ¤¯²±¬¦~v1 反丁烯二酸 ƒ∏°¤µ¬¦~w1 丁二酸 ≥∏¦¦¬±¬¦~x1顺丁烯二酸 ¤¯ ¬¨¦~y1苹果酸 ¤¯¬¦~z1棕榈酸
≤tyΒs ~{1 柠檬酸 ≤¬·µ¬¦~|1硬脂酸 ≤t{Βs ~ts1 油酸 ≤t{Βt ~tt1亚油酸 ≤t{Βu ~tu1 亚麻酸 ≤t{Βv ~tv1 花生酸 ≤usΒs1 下同 ∀ ׫¨ ¶¤°¨¥¨ ²¯º q
y{t 林 业 科 学 ws卷
图 u 落叶松凋落物中有机酸k甲酯l的典型气相色谱图
ƒ¬ªqu „ ·¼³¬¦¤¯ ¦«µ²°¤·²ªµ¤° ²©²µª¤±¬¦¤¦¬§¶¬± Λq ολγενσισ©²µ¨¶·¯¬·¨µ
5 定量分析
应用外标法进行定量分析 o用峰面积计算出样品中各有机酸的含量 ∀为测定该方法的精密度 o同一凋落
物样品重复称样 y次 o分别进行甲酯化处理和色谱分析 o计算各有机酸含量的平均值和相对标准偏差 ∀另
外 o采用标准加入法进行有机酸的回收率试验 o并取一定浓度的有机酸标样进行最小检出限测定k ΣΠΝ € vl ∀
水曲柳凋落物中 tv种有机酸的定量测定结果及方法的相对标准偏差 !回收率 !最小检出限等参数列于表 t ∀
表 1 水曲柳凋落物中各种有机酸的测定结果及其相对标准偏差 !回收率和最小检出限 ≠
Ταβ . 1 Ρεσυλτσφορ τηε δετερµινατιον οφ οργανιχ αχιδσιν Φ . µανδσηυριχα φορεστ λιττερ
ανδ ρελατιϖε στανδαρδ δεϖιατιον ,ρεχοϖερψ ανδ λοωεστ δετεχτιον λιµιτ οφ τηε αναλψτιχαλ µετηοδ
有机酸 ’µª¤±¬¦¤¦¬§ 平均值 „√ µ¨¤ª¨Πk°ª#ªptl 相对标准偏差 • ≥⁄Πh 回收率 • ¦¨²√¨ µ¼Πh 最小检出限 ²º ¶¨·§¨·¨¦·¬²± ¬¯°¬·Π±ª
草酸 ’¬¤¯¬¦ x{1y| u1uu |s1|u w1v|
丙二酸 ¤¯²±¬¦ v1v{ w1|u {w1{u u1t{
反丁烯二酸 ƒ∏°¤µ¬¦ s1ux w1su {w1yy t1vw
丁二酸 ≥∏¦¦¬±¬¦ s1yy v1xx {y1z{ t1wt
顺丁烯二酸 ¤¯ ¬¨¦ s1sw {1xw {|1sw t1v{
苹果酸 ¤¯¬¦ v1{| u1{s |v1su v1zs
柠檬酸 ≤¬·µ¬¦ y1wz u1tx {{1|v y1wy
棕榈酸 ≤tyΒs tt1ut u1vt |x1ys s1v|
硬脂酸 ≤t{Βs w1|w w1st |s1|x s1zw
油 酸 ≤t{Βt yy1uz u1wu |w1zv s1z|
亚油酸 ≤t{Βu tt{1|u t1xv |z1wx s1|y
亚麻酸 ≤t{Βv tt1uy v1wy |v1xt t1tv
花生酸 ≤usΒs v1yz w1|s |s1{u t1wt
≠ • ≥⁄} • ¨¯¤·¬√¨ ¶·¤±§¤µ§§¨√¬¤·¬²±q
由表 t可以看出 o所检测的 tv种有机酸中有 tu种相对标准偏差在 t1xv h ∗ x1vs h o只有顺丁烯二酸因
为含量少 o相对标准偏差达到 {1xw h o但也满足分析测定的要求 ~tv种有机酸的加标回收率在 {w1yy h ∗
|z1wx h之间 ~各有机酸的最小检出限为 s1{| ∗ y1wy ±ª∀
6 结论与讨论
本研究将密封样品的反应瓶置于 ys ε 水浴锅中 o采用甲醇浸提有机酸并直接甲酯化 uw «o建立了一种
准确测定森林凋落物中有机酸的毛细管气相色谱法 ∀该方法不需要特殊设备及样品浓缩处理 o不但能有效
避免传统测定方法浓缩和酯化过程中易挥发有机酸的损失 o以及高温引起的不饱和脂肪酸的氧化 o而且酯化
完全 o样品转移简便 o易于操作 ~用毛细管气相色谱法进行检测 o选择性好 o能一次性准确测定低分子量有机
酸及高级脂肪酸 ∀实验表明 o该方法分离度好 !精密度高 !重现性好k保留时间变化在 ? t1x h以内l !回收率
及最小检出限均满足要求 o是一种对凋落物样品中有机酸进行定性 !定量分析的可靠方法 ∀
z{t 第 w期 宋金凤等 }毛细管气相色谱法测定森林凋落物中的有机酸
将本文分析结果与王晓水等kt||zl !吴俊民等kusssl所做的结果进行对比 o发现亚油酸所占比例较大这
一点是一致的 o但其二人均未涉及低分子量有机酸 o如草酸 !丙二酸 !反丁烯二酸 !丁二酸 !顺丁烯二酸 !苹果
酸等 ∀°²«¯°¤±等kt|{{l发现北美翠柏k Χαλοχεδρυσ δεχυρρενσl !美国黄松k Πινυσ πονδεροσαl未分解凋落物亚层中
草酸含量最大 o在这点上本研究也与此结果相符 ∀同时还发现 °²«¯°¤±等kt|{{l !ƒ²¬等kt||s¤l所检测的有
机酸数量远低于本文结果 o原因很可能在于他们测定有机酸时采用稀 ‘¤’‹Π‹‘’v 溶液或调节到一定 ³‹值
的去离子水进行凋落物淋洗处理 o接收淋洗液进行分析 o所测得的主要是游离低分子有机酸k高级脂肪酸以
水相溶剂是无法提取的l ~而本文则是在 ys ε 密闭条件下 o采用甲醇浸提有机酸并直接进行甲酯化 o游离有
机酸可直接浸提酯化 o结合态有机酸亦可在酸的作用下完成酯交换 o使游离及结合态有机酸得以同时测定 ∀
此外 o凋落物中有机酸的专门定性分析采用了气相色谱 p质谱kŠ≤2≥l联用法 o将另文论述 ∀
参 考 文 献
胡红青 o贺纪正 o李学垣等 q有机酸对酸性土壤吸附磷的影响 q华中农业大学学报 ot||z otyktl }vz p wu
刘百战 o徐 亮 o詹建波等 q云南烤烟中非挥发性有机酸及某些高级脂肪酸的分析 q中国烟草科学 ot||| okul }u{ p vt
陆文龙 o王敬国 o曹一平等 q低分子量有机酸对土壤磷释放动力学的影响 q土壤学报 ot||{ ovxkwl }w|v p w||
莫淑勋 q土壤中有机酸的产生 !转化及对土壤肥力的某些影响 q土壤学进展 ot|{y otwkwl }t p ts
沈阿林 o李学垣 o吴受容 q土壤中低分子量有机酸在物质循环中的作用 q植物营养与肥料学报 ot||z ovkwl }vyv p vzs
王晓水 o刘广平 o吴保国 q落叶松水曲柳混交林树体淋洗物和枯枝落叶分解产物的作用 q见 }沈国舫 o翟明普主编 q混交林研究 q北京 }中国林业
出版社 ot||z }tyw p tyz
吴俊民 o王会滨 o唐利疆等 q混交林落叶松枯枝落叶对水曲柳生长的影响 q东北林业大学学报 ousss ou{kul }t p v
ƒ²¬ × • o≤²° µ¨©²µ§‘…q²º2°²¯ ¦¨∏¯¤µ2º ¬¨ª«·²µª¤±¬¦¤¦¬§¶¬± ¶¨¯¨ ¦·¨§©²µ¨¶·¶²¬¯¶²©·«¨ ¶²∏·«¨¤¶·¨µ± ˜≥„ q≥²¬¯ ≥¦¬≥²¦„° ot||s¤oxw }ttv| p ttww
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