全 文 ：第 v|卷 第 v期
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林 业 科 学
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挪威云杉及杂种落叶松稳定胚性细胞系及
体胚再生系统的建立
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k德国联邦林业及林产品研究中心 o林木遗传育种研究所l
胡建军
k中国林业科学研究院林业研究所 北京 tsss|tl
摘 要 } 本文报道了挪威云杉k Πιχεα αβιεσl和杂种落叶松kΛαριξ δεχιδυασ≅ Λq καεµπφεριl人工授粉种子诱导胚
性细胞系及植株的再生 ∀挪威云杉在德国 ≥¤¬²± ’µ¨ 山区被选为对空气污染有抗性的树种并种植在位于
• ¤¯§¶¬¨√ µ¨¶§²µ©的林木遗传育种研究所的种植园中 ∀对挪威云杉测试了几个不同亲本组合的种子形成胚性细
胞系的能力 ∀这些云杉种子于 t||u2st采收 o含有干燥的成熟合子胚 ∀作为对照 o相同的亲本组合云杉种子于
t||v2s{和 t||{2s{采收 o合子胚处于成熟中 ∀杂种落叶松则只有一个人工授粉组合 o大田试验证实幼苗生长
良好 ∀分别于 t||x和 t||y年采收含有未成熟合子胚的未成熟种子 ∀诱导愈伤形成用附加细胞分裂素k激动
素和Π或 …„°l和生长素k‘„„ ou ow2⁄l及有机氮源k水解酪蛋白和谷氨酰胺l的标准培养基k≥°∞和 ≥Šl o于黑
暗下培养 ∀尽管在建立培养体系后 x ∗ tu周产生了大量胚性愈伤组织 o诱导率超过 ux h o但 t ¤后只有超过
t h的胚性愈伤组织稳定生长 ∀挪威云杉稳定胚性细胞系的数量与成熟合子胚的采收季节及建立细胞系的时
间k{月或 t月l无关 o但在 {月收获的合子胚在挪威云杉 x ∗ tu周后胚性愈伤组织诱导率要高些 o然而能在悬
浮培养中生长及随后成熟体胚能顺利再生植株的稳定胚性细胞系的数量有限 ∀挪威云杉体胚未充分发育的
根影响其移栽到土壤中的成活率 ∀在建立的 tu个细胞系中只有一个在干燥保存后能从体胚再生正常植株 ∀
同时考察了影响挪威云杉形成成熟体胚的因素 o如用 °∞Šw ssskz1x h l及 „…„≈{°ª#ptkvs1uyΛ°²¯lp t 处理及
„…„灭菌方式k高温高压灭菌或过滤灭菌l对成熟体胚形成的影响 ∀总体来说 o过滤灭菌的 „…„增加了成熟
体胚的数量 ∀营养培养基中用淀粉部分取代蔗糖只导致 u个细胞系中的一个增加了成熟体胚的数量 ∀t||x
和 t||y年对人工授粉杂种落叶松合子胚发育与自然授粉k不套授粉袋l的相比较 o发现人工授粉袋的使用延
迟了合子胚的发育 ∀我们的实验中成熟合子胚没有形成胚性细胞系 o只有未成熟合子胚形成了胚性细胞系 ∀
t||x年用落叶松未成熟合子胚建立的胚性细胞系没有形成体胚 o而 t||y年建立的 w个胚性细胞系得到了可
以移栽到温室中的再生植株 ∀t1x ¤的连续继代培养以后 o大多数的杂种落叶松和挪威云杉的胚性细胞系的
再生能力都下降 ∀导致这种现象可能有多种原因包括培养物的老化以及出现难以检测到的内生细菌 ∀尽管
一组实验从最初培养即用了抗生素 o但没有收效 ∀因此目前只得到少量的稳定胚性细胞系k  x h l o长期继代
后丧失再生能力及无法成功移栽到土壤都是植株再生的重要的限制因素 o有待进一步研究克服这些困难 ∀
关键词 } 挪威云杉 o杂种落叶松 o体细胞胚胎发生 o诱导 o再生
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ΣΟΜΑΤΙΧ ΕΜΒΡΨΟ ΡΕΓΕΝΕΡΑΤΙΟΝ ΙΝ ΝΟΡ ΩΑΨ ΣΠΡΥΧΕ
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1 Ιντροδυχτιον
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2 Ματεριαλ ανδ Μετηοδσ
211 Πλαντ µατεριαλ
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212 Χυλτυρε χονδιτιονσ
wx 林 业 科 学 v|卷
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3 Ρεσυλτσ ανδ ∆ισχυσσιον
311 Νορωαψ Σπρυχε
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yx 林 业 科 学 v|卷
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{x 林 业 科 学 v|卷
²©¦²±·¬±∏²∏¶¶∏¥¦∏¯·∏µ¨¶·«¨ µ¨ª¨ ±¨ µ¤·¬²± ¦¤³¤¦¬·¼ ²©·«¨ ¬¯±¨ ¶§¨¦¯¬±¨ §q ƒ²∏µµi ετ αλqkt||zl ²¥¶¨µ√¨ §¤ «¬ª«
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Ταβ . 1 Εφφιχιενχψιν τηε φορµατιον οφ εµ βρψογενιχ λινεσ ανδ ρεγενερατιον οφ σοµατιχ εµ βρψοσιν Νορωαψ Σπρυχε
ανδ ηψβριδ Λαρχη ιν διφφερεντ ψεαρσ
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Ταβ . 2 Ινδυχτιον φρεθυενχψ οφ εµ βρψογενιχ λινεσ οφ Νορωαψ Σπρυχε φροµ σεεδσ ηαρϖεστεδ ιν Αυγυστ 1998 ,
δεπενδινγ ον τιµε αφτερ εσταβλισηινγ ανδ τηεινφλυενχε οφ αν αντιβιοτιχ
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ŒŒŒw ≅ ŒŒ|u p vvy vt |1u tt v1v w t1u
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312 Ηψβριδ Λαρχη
v1u1t ƒ²µ°¤·¬²± ²© °¨¥µ¼²ª¨±¬¦¬¯±¨ ¶ {w| °¨¥µ¼²¶º¨ µ¨ ²¥·¤¬±¨ §©µ²°·«¨ °¤·¨µ¬¤¯ «¤µ√¨ ¶·¨§¬± t||x q∞°¥µ¼²¶
©µ²° ¦²±·µ²¯¯¨ §³²¯ ¬¯±¤·¬²± º¬·«¥¤ª¶º µ¨¨ uy| ²∏·²©y| ¦²±¨ ¶oº«¨µ¨¤¶x{s °¨¥µ¼²¶²∏·²©u{u ¦²±¨ ¶§¨µ¬√¨ §©µ²°
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Ταβ . 3 Ινφλυενχε οφ τηε χαρβον σουρχε (ΧΣ) δυρινγ µ αιν χυλτυρε περιοδ , τηε πρεσενχε
ορ αβσενχε οφ ΠΕΓ ανδ τψπε οφ ΑΒΑ2στεριλισατιον ον τηε φορµατιον οφ σοµατιχ εµ βρψοσ≠
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Ταβ .4 ∆ιστριβυτιον οφ δεϖελοπ µενταλσταγεσ οφ ζψγοτιχ εµ βρψοσ οφ Λαρχη ιν 1995 δεπενδινγ ον τηε κινδ οφ πολλινατιον ≠
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sy 林 业 科 学 v|卷
Ταβ . 5 Ρελατιον βετωεεν νυτριεντ µεδια υσεδ ανδ τηε δεϖελοπ µεντ οφ διφφερεντ χαλλυστψπεσφροµ
Λαρχη ζψγοτιχ εµ βρψοσ 8 ωεεκσ αφτερ ινδυχτιον ≠
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4 Γενεραλ χονχλυσιονσ
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