全 文 ：第 v|卷 第 t期
u s s v年 t 月
林 业 科 学
≥≤Œ∞‘׌„ ≥Œ∂ „∞ ≥Œ‘Œ≤„∞
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¤±qou s s v
巨桉芽器官离体培养与快繁体系建立的研究 3
石大兴tl 王米力vl
k四川农业大学林学园艺学院 雅安 yuxstwl
石轶松ul
k重庆大学资源与环境学院 重庆 wssswwl
曾平安wl
k四川省林木种苗站 成都 ytss{tl
刘碧英xl
k四川省乐山市林业局 乐山 ytwsssl
摘 要 } 研究了以巨桉k Ευχαλψπτυσ γρανδισl优树的带芽茎段为外植体诱导丛生芽发生以及植株再生的过程 o
对培养过程中新芽及丛生芽的发生类型进行了探讨 ∀通过正交实验及单因素试验 o确定了巨桉快繁体系的最
适培养条件 }ktl初代培养基 }≥ n …„s1x °ª#pt n ‘„„s1sx °ª#pt n 蔗糖 v h ~kul丛生苗诱导培养基 }≥ n
…„t1s °ª#pt n ‘„„s1sx °ª#pt n蔗糖 v h ~kvl有效苗诱导培养基 }≥ n …„s1x °ª#pt n ‘„„s1t °ª#pt n生
物素 u1s n蔗糖 w h ~kwl壮苗培养基 }≥k铁盐 !有机物 t1x倍l n蔗糖 w h ~kxl生根培养基 }tΠu≥ n „…× 生根
粉kt号lt1s °ª#pt n蔗糖 u h ∀
关键词 } 巨桉 o芽器官 o离体培养 o快速繁殖
收稿日期 }ussu p sv p sz ∀
基金项目 }四川省科委/九五0攻关项目k|ystul ∀
3 tl !ul !vl !wl !xl为作者排序 ∀
ΡΑΠΙ∆ ΠΡ ΟΠΑΓΑΤΙΟΝ ΦΡ ΟΜ ΣΠΡ ΟΥΤ ΧΥΛΤΥΡΕ ΙΝ ςΙΤΡ Ο ΟΦ
ΕΥΧΑΛΨΠΤΥΣ ΓΡΑΝ∆ΙΣ
≥«¬⁄¤¬¬±ªtl • ¤±ª ¬¯¬vl
kΧολλεγε οφ Φορεστρψανδ Ηορτιχυλτυρε o ΣΑΥ Ψα. ανyuxstwl
≥«¬≠¬¶²±ªul
kΧολλεγε οφ Ρεσουρχε ανδ Ενϖιρονµεντo Χηονγθινγ Υνιϖερσιτψ Χηονγθινγwssswwl
 ±¨ª°¬±ª. ¤±wl
k Τηε Φορεστρψ Σεεδλινγ Στατιον οφ Σιχηυαν Προϖινχε Χηενγδυytss{tl
¬∏…¬¼¬±ªxl
k Φορεστρψ Βυρεαυ οφ Λεσηαν ∆ιστριχτo Σιχηυαν Προϖινχε Λεσηανytwsssl
Αβστραχτ} ׫¬¶³¤³¨µ°¤¬±¯¼ §¨¤¯·º¬·«·«¨ ¶·∏§¼ ²± ¶«²²·²µª¤±²ª¨ ±¨ ¶¬¶¦∏¯·∏µ¨ ¬± √¬·µ²¤±§³¯¤±·¯¨·µ¨ª¨ ±¨ µ¤·¬²±©µ²°
¶³µ²∏·¨¬³¯¤±·¶²© Ευχαλψπτυσ γρανδισq׫¨ ²µª¤±²ª¨ ±¨ ¶¬¶·¼³¨¶²©µ¨ª¨ ±¨ µ¤·¬²± ¶«²²·¶¤±§¦¯∏°³¶«²²·¶º¨ µ¨ §¬¶¦∏¶¶¨§q
׫¨ ²³·¬°¤¯ ¦∏¯·∏µ¨ ¦²±§¬·¬²±¶º¨ µ¨ ¶¨·¤¥¯¬¶«¨§¥¼²µ·«²ª²±¤¯ ·¨¶·¶¤±§¶¬±ª¯¨©¤¦·²µ·¨¶·¶¤¶©²¯ ²¯º¶}ktlŒ±¬·¬¤¯ °¨ §¬¤}≥ n
s1x °ª#pt…„ n s1sx °ª#pt ‘„„ n v h¶∏¦µ²¶¨ ~kul≤¯ ∏°³¥∏§¬±§∏¦·¬²± °¨ §¬¤}≥ n t1s °ª#pt…„ n s1sx °ª#pt
‘„„ n v h¶∏¦µ²¶¨ ~kvl∞©©¬¦¬¨±¦¼ ¶¨ §¨¯¬±ª¬±§∏¦·¬²± °¨ §¬¤}≥ n s1x °ª#pt…„ n s1t °ª#pt‘„„ n u1s °ª#pt¥¬²·¬±
nv h¶∏¦µ²¶¨ ~kwl •²¥∏¶·¶¨ §¨¯¬±ª °¨ §¬¤} ≥kt1x ¶·µ¨±ª·« ²© ƒ¨¤±§²µª¤±¬¦¦²°³²∏±§l n w h ¶∏¦µ²¶¨ ~kxl •²²·¬±ª
°¨ §¬¤}tΠu≥ n t1s °ª#pt „…× n u h¶∏¦µ²¶¨ q
Κεψ ωορδσ} Ευχαλψπτυσ γρανδισo≥³µ²∏·oŒ± √¬·µ²¦∏¯·∏µ¨ o•¤³¬§³µ²³¤ª¤·¬²±
桉树组织培养是林木组织培养中研究最早 !最多的一大类 o目前全世界已对 ys种桉树进行了组织
培养技术的研究 o选用的外植体包括胚 !下胚轴 !芽 !茎尖 !叶 !根 !花芽 !花药 !木瘤等 o大都获得了再生植
株 o其中有 tu种建立了组织培养快速繁殖育苗体系k谢耀坚 ousss ~曹孜义 ot||y ~¨ •²∏¬ ετ αλqot||wl ∀
近年我国对雷林 t号桉k欧阳权等 ot|{tl !巨尾桉k曾练武等 ot||sl !刚果 tu号桉k周志坚 ot|{|l !赤桉
k邱运亮 ot||x ~韩美丽等 ot||zl !尾叶桉k王米力等 ot||yl等组织培养均获得成功 ∀
巨桉k Ευχαλψπτυσ γρανδισl可作纸浆等短周期工业用材 o全世界现有巨桉人工林 uss多万 «°u o是栽培
面积最大的一种桉树 o也是我国近年引种表现优良的桉树之一k潘志刚 ot||wl o在长江流域各省均能安
全越冬 ∀桉树种子繁殖往往由于种源不清 o质量不一 o造林后个体分化大 o林相参差不齐 ∀通过组织培
养快速繁殖可获得基因型一致的优质苗木 o营造林相整齐的速生丰产林 o以获得短周期经济效应 ∀≥¬¯√¤
等分别采用巨桉的下胚轴 !叶 !带芽茎段进行离体培养 o并获得再生植株k≥¬¯√¤ ετ αλqot||w ~¤¬±¨ ετ αλqo
t||w ~•¤ª«¤√¤±ot|{yl o国内尚未见巨桉离体培养的有关报道 ∀于 t||v ∗ usss年对巨桉种子下胚轴及优
树的带芽茎段的离体培养进行了系统研究 o并成功地建立了快繁体系 o可应用于工厂化育苗 ∀
t 材料与方法
111 材料
在四川乐山 !峨眉 !夹江 !青神 !犍为 !彭山等县 x ¤生成片巨桉人工林内 o用小样地法选出优树 yw
株 o选择差为 v1x个标准差 o入选率 tΠts sss o截干后移植到采穗圃 ∀待根系恢复 !树冠充分发育后 o选取
长势旺盛的半木质化萌发枝 o切取除顶芽外的第 v ∗ w轮带芽茎段 o去掉叶片 o留少许叶柄 o剪成 x ∗ ts
¦°节段作为外植体 ∀
112 试验方法
t1u1t 灭菌处理 外植体剪成 t1s ∗ t1x ¦°带芽茎段 o采用 u次灭菌法 os1t h ‹ª≤¯ u 浸泡 u °¬±o无菌水
冲洗 u次 os1t h ‹ª≤¯ u 浸泡 v ∗ w °¬±o无菌水冲洗 x ∗ y次 ∀
t1u1u 初代培养 将已灭菌的外植体接种于启动培养基 o暗培养 z ∗ ts §后转入光培养 ∀启动培养选
用 ≠基本培养基kuΠv≥ !改良 ‹ !≥ l ~ …„ks1x !t1s !u1s l ~≈ ‘„„ks1st !s1sx !s1t l o进行 |kvwl正交试
验 o每个处理接种 txs个外植体 o培养 vs §统计出芽率k发生芽的外植体占无菌外植体总数的百分率 o
ΣΦΦl及出芽指数k发生芽的外植体上的平均出芽数 oΣΦΙl ∀
所有培养基中激素单位均为 °ª#ptk下同l o均加 s1z h ∗ s1{ h琼脂 ~³‹ x1{ ∗ y1s ~培养温度为kuw
? wl ε ~光照 tu «#§pt ~光照强度 u sss ¬¯∀
t1u1v 丛生芽诱导培养 初代培养 vs ∗ ws §后 o将新芽茎段转入继代培养基中 o对基本培养基k≥ !‹ !
改良 ‹ !≥l !…„ks1x !t1s !u1s !w1sl !Ž×ks1x !t1s !t1x !u1sl !‘„„ks1st !s1sx !s1t !s1xl及 Œ…„ks1t !s1u !
s1x !t1sl o进行 tykwxl正交试验 o每个处理接种新芽茎段 us个 o继代培养 x代后统计月增殖倍数k每个
茎段上丛生芽数Π每个茎段上原有腋芽数Π继代次数l及每个茎段上的有效苗k高 u ∗ w ¦°生长健壮的小
苗l数 o继代时间 vs §∀在正交试验的结果上再进行单因素试验 o找出最佳培养条件 o每个处理接种新芽
茎段 ws个 ∀
t1u1w 有效苗诱导培养 将已继代 tx次的丛生芽置于有效苗诱导培养基 ≥ n …„ks1x ot1sl n ‘„„ s1t
n生物素kt ou ovl n蔗糖 w h中 o每个处理接种 xs块 t ¦°u 左右的芽丛 o继代 v次并统计月增殖倍数k每
块芽丛的丛芽数Π芽丛的原有丛芽数Π继代次数l及每块芽丛的有效苗数及有效苗均高 ∀
t1u1x 生根培养 用于生根的芽丛则切割成 x ∗ {株的小丛 o置于壮苗培养基 ≥k铁盐 !有机物 t1x倍l
n蔗糖 w h中培养 us ∗ vs §o取 v ¦°以上的有效苗切割转入添加 ≠ „…×生根粉 t号ks1x !t1s !u1sl ~
Œ…„ks1x !t1s !u1sl ~≈ ‘„„ks1t !s1x !t1sl的 tΠu≥ n蔗糖 u h的生根培养基中 o以不添加激素的培养基
为对照 o培养 vs §后统计生根率 !平均根长 !平均根数及生根时间k转入生根培养基到开始出根的天
数l ∀
t1u1y 移栽 当小苗的根长至 s1x ∗ t1s ¦°并有 v ∗ y条侧生根时 o移栽至基质中 o置于过渡性温室中
培养 o温度 us ∗ ux ε o相对湿度 {s h ∀移栽基质 }≠园土 tΒ河沙 t ~蛭石 ~≈蛭石 tΒ珍珠岩 t ∀
u 结果与分析
211 基本培养基的选择
根据有关文献和预备实验选用了 ≥ ! ‹ !改良 ‹k²§¬©¬¨§‹l !≥等多种培养基 ∀≥培养基是在 ‹及
改良 ‹的基础上研制的配方k见表 tl o主要是调整了铵态 ‘与硝态 ‘的比例 o减少了 ≤¤≤¯ u o而补充了
≤¤k‘’vlu o降低了 ≤¯ 的含量 o提高了 ≤¤!°的含量 o总无机盐含量约为 ≥的 uΠv ∀
sz 林 业 科 学 v|卷
表 1 几种培养基大量元素比较
Ταβ .1 Τηε χοµπαρισον οφ µαχρονυτριεντ φορµυλατιονσιν διφφερεντ µεδια k°ª#ptl
培养基
 §¨¬∏°
‘
硝态 ‘
‘¬·µ¤·¨ ‘
铵态 ‘
„°°²±¬∏° ‘
全 ‘
ײ·¤¯ ‘
° Ž ≤¤ ª ≥ ≤¯ 总计ײ·¤¯
≥ u{{1zx xxt1|s {ws1yx v{1y| z{v1xz tt|1xu vy1w| xv1us utt1w{ u s{v1ys
‹ ut{1zx uyx1|z w{w1zu tx1w{ u|z1|y x|1|w t{1uw uy1ys tsy1sy t ss|1ss
²§¬©¬¨§ ‹ wz{1vt ut{1zx y|z1sy tx1w{ wsu1ux tzv1wx t{1uw uy1ys vt1|s t vyw1|{
≥ wv{1vx t|u1xs yvs1{x wz1{s ws{1vy tzv1wx vy1w| xv1us vt1|s t v{u1sx
212 芽器官的诱导
在外植体的木质化程度适中 !灭菌适度 !材料新鲜的状况下 o初代培养 ts §后 o部分外植体节间开
始膨大 otx ∗ us §后相继出现 t ∗ v个新芽 o而在接种前已抽出的小芽大多自行枯萎 !脱落 ∀vs ∗ ws §
后 o新芽可长至 t1s ∗ t1x ¦°k见图版 ´ p tl ∀诱导出的新芽可以分为 ¤!¥!¦v种类型 o¤类新芽叶大 o色
绿 o叶片舒展 o长势旺盛 o可以用于继代培养 ~¥类新芽叶片较小 o不舒展 o长势较弱 ~¦类新芽抽出后不久
即开始从叶片表面及茎段切口处长出白色颗粒状或粉状愈伤组织 o并导致叶片卷缩 o逐渐萎蔫 o甚至脱
落 ∀因此 o¥!¦两类均不能作为继代材料 o而予以淘汰 ∀
从表 u的结果分析 ouΠv≥ !改良 ‹或 ≥培养基均有较高的出芽率kws h ∗ xs h l o其中 ≥培养基 ¤型
新芽的比例明显高于其它 u种培养基 o出芽指数随 …„浓度增加而增加 o…„t1s时 ¤型新芽的比例较高 o
实验表明 „{k≥ n …„t1s n ‘„„s1sxl有较高的出芽率 o¤型新芽的比例最高 o是较适宜的启动培养基 ∀
表 2 培养基对初代培养的影响 ≠
Ταβ .2 Εφφεχτσ οφ διφφερεντ µεδια ον ινιτιαλ χυλτυρε
代号
≤²§¨
培养基
 §¨¬∏°
…„Π
k°ª#ptl
‘„„Π
k°ª#ptl
样本数
‘∏°¥¨µ²©
¶¤°³¯ ¶¨
出芽率
ΣΦΦΠh
出芽指数
ΣΦΙ
新芽类型
×¼³¨ ²©µ¨ª¨ ±¨ µ¤·¬²± ¶«²²·¶Πh
¤型
×¼³¨ ¤
¥型
×¼³¨ ¥
¦型
×¼³¨ ¦
„t uΠv≥ s1x s1st {| wx1x t1z vt1y uz1{ ws1y
„u uΠv≥ t1s s1sx zy wv1{ t1v vt1x u{1w ws1t
„v uΠv≥ u1s s1ts xy xs1u u1w u|1{ vw1x vx1z
„w ²§¬©¬¨§ ‹ s1x s1st |u wv1w t1u vx1x us1z wv1{
„x ²§¬©¬¨§ ‹ t1s s1sx x| w|1y t1x vy1y vt1w vu1s
„y ²§¬©¬¨§ ‹ u1s s1ts z{ xu1v t1{ vs1{ t{1y xs1y
„z ≥ s1x s1st yw w{1z t1s wv1w vu1v uw1v
„{ ≥ t1s s1sx zx xw1y u1s xy1u uv1t us1z
„| ≥ u1s s1ts |{ x{1| u1x ws1x vw1y uw1|
≠样本数 €接种外植体数 p 污染外植体数 ‘∏°¥¨µ²©¶¤°³¯ ¶¨ € ±∏°¥¨µ²©¬±²¦∏¯¤·¨ ¬¨³¯¤±·¶p ±∏°¥¨µ²©¦²±·¤°¬±¤·¬√¨ ¬¨³¯¤±·¶q ΣΦΦ}¶«²²·
©²µ°¬±ª©µ¨ ∏´¨ ±¦¼ ~ ΣΦΙ }¶«²²·©²µ°¬±ª¬±§¨¬q¤型为正常芽 o¥型和 ¦型为不正常芽 ∀ ×¼³¨ ¤}±²µ°¤¯ µ¨ª¨ ±¨ µ¤·¬²± ¶«²²·¶~ ×¼³¨ ¥¤±§ ×¼³¨ ¦}
¤¥±²µ°¤¯ µ¨ª¨ ±¨ µ¤·¬²± ¶«²²·¶q
213 丛生苗的诱导
巨桉新芽茎段经 x ∗ y次继代培养后可以形成 vs ∗ tss个#¦°pu的丛生芽 o据观察 o丛生芽的发生有
u种类型k谢耀坚 ousss ~曹孜义 ot||y l o„型是腋芽发生型k见图版 ´ p ul o是由新芽节部四周诱导出多
个不定芽而逐渐形成 vs ∗ ws株#¦°pu的丛生芽 ∀这种类型的丛生芽的特点是月增殖率为 v ∗ x倍 o小芽
疏密适度 o容易抽茎展叶 o小苗表现为粗壮 o直立 o嫩叶及茎微红 o叶片大小正常 !展开后叶色深绿 o可以
得到较多有效苗 ∀但继代 ts ∗ tx代后 o较高 …„浓度虽然可以保持原有的增殖倍数 o但会出现一些不正
常的生长现象 ∀一种情况是丛生芽虽然也易伸长 o但小苗表现为叶片变小 !增厚 !变脆 o茎增粗呈枝状或
匍匐状 o应该予以淘汰 ∀另一种情况是丛生苗虽能伸长至 v ¦°以上 o但同时出现启动时出现过的叶愈
伤组织 o致使叶片卷曲 o不能正常生长 o也应该予以淘汰 ∀ …型是愈伤组织发生型k见图版 ´ p vl o愈伤
tz 第 t期 石大兴等 }巨桉芽器官离体培养与快繁体系建立的研究
组织是在继代培养中由新芽节间产生 o这种愈伤组织一旦发生 o只需一代则可以由 s1v ¦°u 长至 t ¦°u
左右 !馒头状 !半圆形的愈伤组织 o并且整个愈伤组织表面均为绿色小颗粒 o并逐渐分化出许多绿色小芽
苗 o十分密集 o月增殖率可高达 y ∗ ts倍 o继代 x ∗ y次 ot ¦°u 愈伤组织上有丛生小芽 tss个左右 o高度大
都在 s1t ∗ s1x ¦°左右 o呈微芽形式 o不易伸长 ∀但如果及时降低 …„的浓度 o减少增殖速度 o并转入相
应的有效苗的分化培养基 o仍然可以得到较多的有效苗 ∀
表 3 培养基对丛生芽诱导的影响 ≠
Ταβ .3 Εφφεχτσ οφ διφφερεντ µεδια ον χλυµπ σηοοτσινδυχτιον χυλτυρε
代号
≤²§¨
培养基
 §¨¬∏°
…„Π
k°ª#ptl
‘„„Π
k°ª#ptl
月增殖倍数
•¤·¬²²© °²±·«¯¼ °∏¯·¬³¯¬¦¤·¬²±
有效苗数
‘∏°¥¨µ²© ©¨©¬¦¬¨±¦¼ ¶¨ §¨¯¬±ª
„型 ×¼³¨ „ …型 ×¼³¨ … „型 ×¼³¨ „ …型 ×¼³¨ …
…t ²§¬©¬¨§ ‹ s1x s1st v1t y1w w1v v1t
…u ²§¬©¬¨§ ‹ s1x s1sx v1v x1z w1x u1x
…v ²§¬©¬¨§ ‹ t1s s1st w1u |1v v1{ t1|
…w ²§¬©¬¨§ ‹ t1s s1sx w1t y1z w1| u1w
…x ≥ s1x s1st v1{ x1w y1t v1{
…y ≥ s1x s1sx v1y x1x x1z w1t
…z ≥ t1s s1st w1v z1| y1w v1t
…{ ≥ t1s s1sx w1y z1x x1t v1|
≠ „型为腋芽发生型 o…型为愈伤组织发生型 ∀×¼³¨ „ }¦¯∏°³¶«²²·¶ª¨ ±¨ ¶¬¶©µ²° ¤¬¬¯¯¤µ¼ ¥∏§¶~×¼³¨ …}¦¯∏°³¶«²²·¶ª¨ ±¨ ¶¬¶©µ²° ¦¤¯ ∏¯¶q
表 4 培养基对丛生苗继代培养的影响
Ταβ .4 Εφφεχτσ οφ διφφερεντ µεδια ον χλυµπ σηοοτσσυβχυλτυρε
代号
≤²§¨
培养基
 §¨¬∏°
月增殖倍数
•¤·¬²²©
°²±·«¯¼
°∏¯·¬³¯¬¦¤·¬²±¶
有效苗数
‘∏°¥¨µ²©
©¨©¬¦¬¨±¦¼
¶¨ §¨¯¬±ª¶
有效苗高
‹ ¬¨ª«·²©
©¨©¬¦¬¨±¦¼
¶¨ §¨¯¬±ª¶Π¦°
≤t ≥ n …„s1x n ‘„„s1t n生物素k¥¬²·¬±lt1s v1y tt1w u1u
≤u ≥ n …„s1x n ‘„„s1t n生物素k¥¬²·¬±lu1s v1u ts1u u1{
≤v ≥ n …„s1x n ‘„„s1t n生物素k¥¬²·¬±lv1s v1t ts1y v1t
≤w ≥ n …„s1x n ‘„„s1t v1x z1u t1z
≤x ≥ n …„t1s n ‘„„s1t n生物素k¥¬²·¬±lt1s w1{ z1{ t1|
≤y ≥ n …„t1s n ‘„„s1t n生物素k¥¬²·¬±lu1s w1u z1| u1x
≤z ≥ n …„t1s n ‘„„s1t n生物素k¥¬²·¬±lv1s w1x {1u u1y
≤{ ≥ n …„t1s n ‘„„s1t w1x w1{ t1x
诱导丛生芽的 tykwxl正交试验的结果表明 o在基本培养基k改良 ‹ o≥l上添加 …„ ks1x ot1sl !‘„„
ks1st os1sxl的培养基对巨桉丛生苗的诱导较为适宜 ∀根据这个结果 o进行了单因素试验 o结果见表 v o
试验表明 }…{ k≥ n …„t1s n ‘„„s1sx n蔗糖 v h l使腋芽发生型丛生芽的增殖倍数最高 o…u k改良 ‹ n
…„t1s n ‘„„s1st n蔗糖 v h l使愈伤组织发生型丛生芽的增殖最高 o这与从下胚轴愈伤组织诱导不定芽
的结果较为一致k另文报导l ∀u种培养基对丛生芽伸长生长的影响有明显差异 o采用 ≥培养基则可以
得到较多的有效苗 ∀因此 …{ 是较适宜的丛生芽的诱导培养基 ∀在试验中还发现 o如果在长期继代培养
中采用 …„t1s n ‘„„s1sx的激素组合 o愈伤组织发生型丛生芽增加 o有效苗数有下降的趋势 ∀因此采用
…{ 只适宜在培养初期使用 o以尽快得到丛生芽 ∀以后视丛生芽的状况 o进行相应的调整 ∀
此外 o在实验中发现 o在相同的培养条件下如在 …{k≥ n …„t1s n ‘„„s1sx n蔗糖 v h l培养基中 o腋
芽月增殖倍数在 u ∗ y倍之间 o有效苗数也从 v到 ts株#¦°pu不等 ∀表明在继代过程中 u种途径产生的
丛生芽的比例及增殖情况不仅受基本培养基 !激素配比的影响 o材料本身起源及生理状态也有较大影
响 ∀
214 有效苗的分化
巨桉离体培养应主要选择腋
芽发生型丛生芽进行继代 o一旦
有愈伤组织丛生芽发生 o及时降
低 …„ 浓度 o控制增殖率 ∀即丛
生芽达到 us ∗ vs个#¦°pu时 o在
每次继代培养中应采取逐步降低
…„ o保持月增殖率 v ∗ w 倍 ∀多
次继代后 o上述不正常的生长现
象会相应增加 ∀在试验中发现 o
培养基中添加生物素 t ∗ v °ª#
pt o对于有效苗的分化及减少异
常生长有明显的效果 ∀对此进行
uz 林 业 科 学 v|卷
了研究 o将已继代 tx次的丛生芽置于丛生苗继代培养基中 o继代 v次并统计 o结果见表 w ∀
实验表明 }降低 …„浓度至 s1x o月增殖率略有下降 o但仍可保持在 v ∗ w倍 o而有效苗数及苗高均明
显提高 ∀添加的生物素明显促进有效苗的分化 o有效苗数增加 u ∗ w o有效苗高增加 t ∗ u ¦°∀生物素的
添加量对有效苗数的影响不明显 o而对苗高影响较为明显 o因此在丛生苗继代培养中采用 ≤yk≥ n …„s1x
n ‘„„s1t n生物素 u1s n蔗糖 w h l对有效苗的诱导有较好效果k见图版 ´ p wl ∀
表 5 激素对生根培养的影响 ≠
Ταβ .5 Εφφεχτσ οφ διφφερεντ ηορµονεσ ον ροοτινγ χυλτυρε
代号
≤²§¨
激素
‹²µ°²±¨ Π
k°ª#ptl
生根率
• ²²·¬±ª
µ¤·¬²Πh
生根时间
•²²·¬±ª
·¬° Π¨§
平均根数
 ¤¨± ±∏°¥¨µ
²©µ²²·¶
平均根长
 ¤¨± ¯¨ ±ª·«
²©µ²²·¶Π¦°
⁄t „…×s1x zv ts w t1x
⁄u „…×t1s {x { x t1{
⁄v „…×u1s {t | x t1y
⁄w Œ…„s1x xv tu v s1{
⁄x Œ…„t1s zx tv v t1s
⁄y Œ…„u1s zv tu w t1u
⁄z ‘„„s1t wx tz v t1s
⁄{ ‘„„s1x y| tx w t1u
⁄| ‘„„t1s yw tx w t1u
⁄ts s tt ux u s1x
≠生根时间 }从植入培养基到发根之间的天数 ∀ • ²²·¬±ª·¬°¨}·«¨ §¤¼¶¥¨·º¨¨ ±µ²²·2
¬±ª¤±§·µ¤±¶©¨µ·²µ²²·¬±ª ° §¨¬∏° q
215 壮苗及生根
将经过无激素培养基进行壮苗培
养的丛生苗k见图版 ´ p xl o选取 v ¦°
以上的有效苗切割转入生根培养基中 o
生根情况见表 x ∀结果表明 }添加 v种
激素的生根培养基对诱导生根均有明
显效果k见图版 ´ p yl o生根率从 ts h
提高到 xs h ∗ {s h o平均根数增加 u ∗
v条 o平均根长增加 t ∗ t1x ¦°∀v种激
素中 „…× 的效果最好 o激素种类的不
同水平也略有差异 o其中 ⁄u ktΠu≥ n
„…×t1s n蔗糖 u h l生根率高 o出根早 o
根系正常 o有 w ∗ y条侧生根 o移栽时容
易成活k见图版 ´ p zl ∀试验表明生根
培养除培养基外 o有效苗的健壮和木质
化程度与生根关系密切 ∀粗壮 !半木质
化程度的小苗容易生根 o根系质量好 ∀因此在生根培养以前采用壮苗培养基 ≥k铁盐 !有机物 t1x倍l
n蔗糖 w h培养 vs §o可以使小苗健壮 !木质化程度提高 o能明显提高生根率及移栽成活率 ∀
216 移栽
生根苗在过渡性温室中培养 t个月后 o小苗可以长至 tx ¦°左右 o且根系发育完全 o此时即可将小
苗带土移至室外定植k见图版 ´ p { !|l ov种基质均有较好效果 o成活率都在 |s h以上 o但园土 tΒ河沙 t
的成本较低 o便于推广应用 ∀
v 问题与讨论
311 巨桉基因型差异对组培的影响
巨桉离体培养过程中 o常表现出本文报导的一些形态异常 o类似情况在其它桉树如山桉 !大桉 !红花
桉 !刚尼桉 !王桉中也有报导k¨ µ²∏¬ ετ αλqot||w ~…²±ª¤ ετ αλqot|{{ l ∀这些情况的产生 o可能与树种本
身的生物学特性有关 o也可能与外植体的起源 !生理 !生殖潜力及对离体培养中各种条件的反应有关 o其
成因十分复杂 o尚无定论 o比如叶表面出现颗粒状愈伤组织 o在本试验中 o认为可能是由于外源激素引起
的异常反应 o但采用无激素培养基培养多代 o多数情况下仍表现异常 ∀
在实验中为解决这些异常现象 o尝试过多种培养条件 o发现巨桉表现正常与否与培养条件关系不
大 o而与其外植体来源有密切关系 ∀因此认为材料本身的基因型差异决定了其是否适合离体培养 o为此
对适合离体培养的巨桉优良无性系进行了筛选 o选用 u{个优树的茎段进行组织培养 o根据不同外植体
在启动 !丛生苗发生 !有效苗的诱导及壮苗生根等试管繁殖过程中的差异 o从中筛选出适合于组织培养
的 v个试管无性系 Šus !Šux !Švu o筛选出来的试管无性系不仅增殖 !分化表现较好 o而且也不易出现异
常形态k另文报道l ∀
312 组培苗的遗传稳定性
桉树的组织培养研究曾经历了 u个阶段 o前期主要采取愈伤组织诱导不定芽或胚状体成苗途径 o据
vz 第 t期 石大兴等 }巨桉芽器官离体培养与快繁体系建立的研究
报道 o该途径的组培苗变异大 o造林后林分分化较大 o并认为可能是诱导初期使用 u ow p ⁄导致的遗传
变异k曾练武等 ot||sl ous世纪 {s年代后期至 |s年代 o多数采用芽器官培养而获得相应的快速繁殖体
系 o并在生产中取得较大成功k曹孜义等 ot||yl ∀本研究中发现同一外植体芽器官在离体培养中即使不
使用 u ow p ⁄o在经过 ts代以上继代培养后腋芽发生型丛生芽和愈伤组织发生型也往往是同时发生 o而
愈伤组织发生型组培苗被认为是有可能发生遗传变异 o所以用于生产的丛生苗继代次数应控制 ts ∗ tx
代之间为宜 ∀
313 巨桉快繁体系与工厂化育苗
巨桉快繁体系建立后 o以 tss瓶丛生苗进行中试试验 oy个月后 o除去污染损失kus h左右l o已达到
v sss瓶以上 o月增殖系数 y ∗ {倍 o可以实现年产组培苗 ts万株以上 o完全能满足工厂化育苗的要求 ∀
但是要实现大规模工厂化育苗 o还有一些问题需要解决 o首先是组培育苗的成本较高 o其次由于外植体
基因型的差异 o要求对培养条件作出灵活的调整 o这要求较高的技术水平 ∀第三 o组培苗的移栽条件较
为严格 o一般苗圃不易满足 o因此可考虑试管外生根等措施降低育苗成本 o简化操作程序 o提高组培苗成
活率 ∀此外 o从国内外的具体实践来看 o采用以优树组培苗建立采穗圃 o再进行扦插繁殖 o即/以苗繁苗0
的方式是满足大规模造林行之有效的途径 ∀
参 考 文 献
曹孜义 o刘国民 q实用植物组织培养教程 q兰州 }甘肃科学技术出版社 ot||y ouv{ ∗ uwv
韩美丽 o邓九生 q赤桉下胚轴不同再生途径建立研究 q广西林业科学 ot||z ouykwl }uv ∗ uz
欧阳权 q木本植物组织培养及其应用 q见 }陈正华编 q木本植物组织培养及其应用 q北京 }高等教育出版社 ot|{y ot|y ∗ utw
欧阳权 o彭海忠 o李启泉 q桉树愈伤组织发生胚状体的研究 q林业科学 ot|{t otzktl }t ∗ z
潘志刚 q中国主要外来树种引种栽培 q北京 }北京科学技术出版社 ot||w ox|t ∗ x|v
邱运亮 q赤桉组织培养及植株再生 q细胞生物学杂志 ot||x otzk增刊l }zs ∗ zv
王米力 o石大兴 o曾平安等 q尾叶桉胚状体植株诱导与增殖研究 q四川林业科技 ot||y okul }ts ∗ tv
谢耀坚 q桉树组织培养研究进展 q世界林业研究 ousss otvkyl }tw ∗ t|
周志坚 q刚果 tu号桉组织培养育苗技术的研究 q广东林业科技 ot|{| okul }tt ∗ tu
…²±ª¤  o⁄∏µ½¤± ⁄q阙国宁 o郭初达等译 q树木组织培养 q北京 }中国林业出版社 ot|{{ otu| ∗ txy ou{{ ∗ u|{
¨ µ²∏¬o ∂¤± ¶·¤§¨± q谢莉萍译 q桉树的微繁殖和组织培养 q广西林业科学 ot||w ouvktl }vu ∗ ws
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wz 林 业 科 学 v|卷
石大兴等 }巨桉芽器官离体培养与快繁体系建立的研究 图版 ´
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t1 初代培养kvs §l ~u1 丛生苗 „型 ~v1 丛长苗 …型 ~w1有效苗分化 ~x1 壮苗培养 ~y1生根培养 ~z1 生根苗kus §l ~{1 再生植株移栽 ~|1 再生
植株定植kvs §l ∀t qŒ±¬·¬¤¯ ¬± √¬·µ²¦∏¯·∏µ¨kvs §l ~u q×¼³¨ „ ²© ¦¯∏°³¶«²²·¶~v q×¼³¨ … ²© ¦¯∏°³¶«²²·¶~w q⁄¬©©¨µ¨±·¬¤·¬²± ²© ©¨©¬¦¬¨±¦¼ ¶¨ §¨¯¬±ª¶~x q
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