全 文 ： 第 vz卷 第 v期u s s t年 x 月
林 业 科 学
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落叶松不同类型胚性和非胚性愈伤
组织的生理生化差异 3
齐力旺 李 玲 韩一凡
k中国林业科学研究院林业研究所分子遗传室 北京 tsss|tl
韩素英
k山西农业大学林木生物技术研究中心 太谷 svs{stl
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kƒ §¨¨µ¤¯ • ¶¨¨¤µ¦« ≤ ±¨·µ¨ ©²µƒ²µ¨¶·µ¼oŒ±¶·¬·∏·¨©²µƒ²µ¨¶·µ¼ ×µ¨¨ …µ¨ §¨¬±ª¤±§…¬²·¨¦«±²¯²ª¼ o∞¥¨µ¶º¤¯§¨µ≤«¤∏¶¶¨¨y otxvzz • ¤¯§¶¬¨º µ¨¶§²µ©oŠ¨ µ°¤±¼l
摘 要 } 以华北落叶松继代 !增殖培养的不同类型的胚性及非胚性愈伤组织为材料 o测定其氨基酸 !糖类 !酚
酸 !激素以及离子的含量 o结果表明 }氨基酸含量的差异十分明显 o质地硬的非胚性愈伤组织中 t{种游离氨基
酸含量为胚性愈伤组织的 u倍以上 o经 „…„处理后 o胚性愈伤组织中多糖及邻苯二酚含量急剧升高 ~三糖含
量与不同基因型密切相关 ~乙烯释放量在非胚性愈伤组织中高于胚性愈伤组织 ~金属离子 ≤’ n n的含量 o胚性
愈伤组织是非胚性愈伤组织的 tu倍 o胚性愈伤组织中铵态氮k‘‹ nw l与硝态氮k‘’ pv l的比值是非胚性愈伤组
织中的 ts倍以上 ~实验结果为进一步探讨针叶树体细胞胚胎发生的生理生化机理提供依据 ∀
关键词 } 华北落叶松 o胚性细胞系 o氨基酸 o基因型
收稿日期 }usss2sy2ut ∀
3 基金项目 }国家自然科学基金项目k‘²qv|{zszvu与 v|zzsyu|l和国家林业局/ |w{0项目k‘²q|{2w2sw2sul资助 ∀
ΠΗΨΣΙΟΛΟΓΙΧΑΛ ΑΝ∆ ΒΙΟΧΗΕΜΙΧΑΛ ΧΗΑΝΓΕΣ ΙΝ ∆ΙΦΦΕΡΕΝΤ ΚΙΝ∆Σ ΟΦ
ΕΜΒΡΨΟΓΕΝΙΧ ΧΑΛΛΥΣ ΑΝ∆ ΝΟΝ2ΕΜΒΡΨΟΓΕΝΙΧ ΧΑΛΛΥΣ ΟΦ
ΛΑΡΙΞ ΠΡΙΝΧΙΠΙΣ2ΡΥΠΠΡΕΧΗΤΙΙ
±¬¬º¤±ª ¬¬±ª ‹¤± ≠¬©¤±
k Μολεχυλαρ Γενετιχσ ∆επαρτµεντoΡεσεαρχη Ινστιτυτε οφ Φορεστρψ ΧΑΦ Βειϕινγ tsss|tl
‹¤± ≥∏¼¬±ª
k Ρεσεαρχη Χεντρε οφ Φορεστρψ ΒιοτεχηνολογψoΣηανξι Αγριχυλτυραλ Υνιϖερσιτψ Ταιγυ svs{stl
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k Φεδεραλ Ρεσεαρχη Χεντρε φορ ΦορεστρψoΙνστιτυτε φορ Φορεστρψ Τρεε Βρεεδινγ ανδ ΒιοτεχηνολογψoΕβερσωαλδερ Χηαυσσεε y otxvzz ΩαλδσιεϖερσδορφoΓερµανψl
Αβστραχτ} …¤¶¨§²±·«¨ ¤³³¨¤µ¤±¦¨ ²©¦¤¯ ∏¯¶ªµ²º·«¤±§¥¨«¤√¬²∏µk¶·µ∏¦·∏µ¨ o¦²¯²µ ·¨¦ql²© Λαριξ πρινχιπισ2Ρυππρεχητιι
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Κεψ ωορδσ} Λαριξ πρινχιπισ2Ρυππρεχητιι o∞°¥µ¼²ª¨ ±¬¦¦¨¯¯ ¬¯±¨ o„°¬±²¤¦¬§oŠ¨ ±²·¼³¨
华北落叶松kΛαριξ πρινχιπισ2Ρυππρεχητιιl是我国北方中高山地区重要的速生造林用材树种 o进行其体
细胞胚胎发生的研究 o在针叶树快速繁殖与基因工程育种上有其特殊的用途 ∀然而 o目前已报道的所有
落叶松k¨ ∏¯  „ ot||w !t||z ~¨√¨ ¨ ∂ ot|zz ~פ∏·²µ∏¶×∞ot||t等l体细胞胚胎发生研究表明 o随着胚性愈
伤组织继代次数的增加 o体细胞胚的发生能力会逐渐下降 ots个月后明显降低 o有些转化为非胚性愈伤
组织 o失去体细胞胚发生能力 ~所以 o如何保持胚性愈伤组织持续 !高效的体细胞胚发生能力 o是体细胞
胚胎发生的关键问题之一 ∀虽然近年来体细胞胚胎发生研究方面的报道不断增多 o但大多数研究受经
验影响 o且存在偶然性 o没有一个稳定的体细胞胚胎发生实验系统 o对体细胞胚胎发生过程中生理生化
的差异 !分子机制以及发育过程等缺乏系统的研究 o不能高效 !稳定地调控体细胞胚胎发生 ~迄今国内外
还未见落叶松胚性和非胚性愈伤组织生理生化差异研究的报道 ∀因此 o本文从生理生化方面剖析不同
类型胚性与非胚性愈伤组织的差异 o研究落叶松胚性与非胚性愈伤组织中激素 !氨基酸 !糖 !离子含量等
的变化 o旨在探索针叶树体细胞胚发生特点 o为进一步揭示其再生机理提供实验依据 ∀
t 材料和方法
111 实验材料
分别于 t||{ p sy p ts !us !ux osz p sy !tx o从山西省关帝林区定株采集 u株华北落叶松优树的未成熟
球果 ou个基因型材料分别接种 ∀
112 落叶松愈伤组织的诱导
取落叶松球果中幼嫩合子胚 o在 ≥培养基k∞º¤¯§ot||zl上采用 vtt p „最优回归设计诱导 !继代培
养基 ~继代培养用 ≥ n …k‹v…’v 由 ≥的 v1t°ªΠ增加至 z1zx°ªΠl培养基 o附加 u ow2⁄!…„ !Ž×减少为原
来的 tΠtsk表 tl ∀
表 1 诱导培养基与继代培养基设计 !实施方案
Ταβ .1 Μεδιυµ οφινδυχτιον ανδ συβχυλτυρε εµβρψογενιχ χαλλυσ(ΕΧ) οφ Λαριξ πρινχιπισ2ρυππρεχητιι
χονταινινγ ωιτη διφφερεντ 2 ,42∆ ,ΒΑ ανδ ΚΤ χονχεντρατιον k°ªΠl
处理号
×µ¨¤·° ±¨·‘²q
诱导培养基  §¨¬∏° ²©¬±§∏¦·¬²± 继代培养基  §¨¬∏° ²©¶∏¥¦∏¯·∏µ¨
u ow p ⁄ …„ Ž× u ow p ⁄ …„ Ž×
t t qt s qw s q{ s qtt s qsw s qs{
u t qt s qw s s qtt s qsw s
v s qvu s qtu s qy s qsvu s qstu s qsy
w t q{{ s qtu s qy s qt{{ s qstu s qsy
x s qvu s qy{ s qy s qsvu s qsy{ s qsy
y t q{{ s qy{ s qy t qt{{ s qsy{ s qsy
z u qu s qw s qu s quu s qsw s qsu
{ s s qw s qu s s qsw s qsu
| t qt s q{ s qu s qtt s qs{ s qsu
ts t qt s s qu s qtt s s qsu
tt t qt s qw s qw s qtt s qsw s qsw
用镊子取出未成熟种子 ozs h酒精浸泡 t °¬± !s1t h升汞溶液 y °¬±消毒 o无菌水冲洗 x次后 o从侧
部划开种壳 o取出种仁 o划破内种皮 o挑开胚乳 o嫩胚接种于培养基上 o每皿接种 ux个 o重复 w次 o在温度
uv ε ∗ ux ε 下暗培养 otx ∗ ux §根据颜色 !形态 !结构等特征 o初步确定胚性愈伤组织 o以后每 t{ ∗ us §
继代 t次 o每次转接时均挑取表面新分化的愈伤组织 ∀
113 生理生化测定方法
t1v1t 乙烯释放量分析 乙烯含量测定用气相色谱分析法 o玻璃填充柱 s1x °长 o填料用 Š⁄÷ p xsu o柱
温 {s ε o进样口温度 tus ε o衰减 v ≅ tsu o纸速 y °°Π°¬±~参照中国林业科学研究院分析中心kt||wl第
uy{页方法 ∀
t1v1u 离子含量分析 „ªn !≤²n n !≤§n n !±n n ≤∏n n !‘¬n n !ƒ n¨ n !≤µn n n 离子含量测定用原子吸收分
光光度法 o样品在 zs ε 烘干 o称取 tª置于坩埚内 o炭化 oyss ε 灰化 w«o冷却 ots °ts h硝酸溶解灰分 o
tu 第 v期 齐力旺等 }落叶松不同类型胚性和非胚性愈伤组织的生理生化差异
热无离子水洗涤 o滤至 tss °容量瓶 o检验无 ƒ n¨ n n存在时 o定容 !待测 ∀
‘’pv 测定用离子色谱法 oƒŒ≤ p t型分析仪测定 o样品经无离子水洗净 !晾干 o称 t ª组织研碎 o加入
xs °无离子水搅拌 vs °¬±os1wx ∏°滤膜过滤 o进行 Œ≤分析 ∀
‘‹nw 离子含量测定用紫外一可见分光光度计 o称 s1u ª置 xs °消化管中 o湿润样品后 o加 x °硫
酸 o过夜 o滴加 t °vs h的双氧水 o加热消煮 !冷却 o无离子水定容至 xs °o过滤 !待测 ∀
t1v1v 游离糖含量分析 游离糖含量测定用高效液相色谱法 o柱 }≥∏ª¤µ2°¤®2t o柱温 |s ε o‹u ’为流动
相 o流速 s1z °Π°¬±o检测器为 •Œ}w¬~称取样品 wss °ª于 x °容量瓶中溶解 !定容 o摇匀后 os1wx ∏°滤
膜过滤 o待测 ∀
t1v1w 酚酸含量分析 酚酸含量测定用高效液相色谱法 o柱为 }Λ2…²±®¤³¤® °«¨ ±¼ksqw¦° ≅ vs¦°l ~流动
相 }vx h ≤‹v ’‹ p yx h ‹u ’k‹v°’w 调 ³‹ € w qxl ~流速 }t1s °Π°¬±~检测器 }˜∂uxw ±° ≅ s1t„˜ƒ≥ ~样品称取 u
ª于 ux °锥形瓶中 o加 xs °石油醚超声波中振荡 vs °¬±o过夜 o滤去石油醚 o晾干转入 txs °圆底烧瓶
中 o加 xs h甲醇 xs °o加热回流 o滤液浓缩至 ux°定容 o取 • ¤·¨µ¶公司 ≥¨ ³2³¤®≤t{小柱一支 o用 x °甲醇
活化 ox °水冲洗 o吸取 x °样品提取液通过小柱 o弃去初洗液 t °o再收集 u °洗出液 o待测 ∀
t1v1x 激素含量分析 生长素含量测定用高效液相色谱 o柱 }‘²√¤³¤® ≤t{ ks qw ¦° ≅ tx ¦°l ~流动相 }
ws h ≤‹v ’‹ p tx h ≤‹v ≤‘p wx h ‹u ’k‹v°’w 调 ³‹ € wl ~流速 }s1z °Π°¬±~检测器 }˜∂uxw ±° ≅ s qt
„˜ƒ≥ ∀样品称取 uª研碎 o至 xs °锥形瓶中 o加 xs °石油醚在 x ε 浸泡过夜 o滤去石油醚 o加 xs °冷
甲醇 x ε 下电磁搅拌 w «o过滤 o残渣加冰甲醇 vs °搅拌 t «过滤 o合并滤液 o减压浓缩至 ux °∀取 u
°浓缩液经已活化的小柱 o弃去淋出液 o用 u °乙腈淋洗小柱 o淋洗液经 s1x ∏°滤膜过滤 !待测 ∀
细胞分裂素含量测定用液相色谱柱 }‘²√¤³¤® ≤t{ks qw¦° ≅ tx¦°l ~流动相 }tx h ≤«v ≤‘p ux h ≤‹v ’‹
p ys h ‹u ’k‹v°’w 调 ³‹ € v qxl ~流速 }s1z °Π°¬±~检测器 }˜∂uxw ±° ≅ s qt„≥˜≥ ~样品称取 u ª研碎后转
至 xs °锥形瓶中 o加 xs °甲醇于冰箱内kw ε l放置 uw «o滤渣中再加 vs °甲醇 w ε 下电磁搅拌 vs
°¬±o过滤 o合并甲醇液 o用 u h ‘¤’‹调 ³‹ € { ~用 xs °石油醚分两次萃取 o去掉石油醚相 o将甲醇液浓
缩至 ux °定容 os1x ∏°滤膜过滤 o待测 ∀
t1v1y 氨基酸含量分析 氨基酸分析仪柱 o为氨基酸分析专用阳离子交换柱ks1w ¦° ≅ vs ¦°l o柱温 yu
ε o检测器 }wus荧光检测器k ¬¨}vv{ ±° o¨ ° }wux ±°l o流速 }s1w °Π°¬±o柱后反应泵流速 }s1{ °Π°¬±k衍
生剂 ’°„s1w °Π°¬±o氧化剂次氯酸钠溶液 s1y °Π°¬±l ~参照中国林业科学研究院分析中心kt||wl第
uty ∗ ut{页方法进行 ∀
t1v1z 色氨酸和半胱氨酸含量分析 色氨酸和半胱氨酸测定方法参照中国林业科学研究院分析中心
kt||wl第 uv{页与第 uxu页方法 ∀
u 实验结果
211 愈伤组织分类
经诱导培养基上产生的胚性愈伤组织 o在继代培养基上生长 ty个月 o有的细胞系有稳定的体细胞
胚发生能力 o有的细胞系体细胞胚发生能力下降 o产生形态 !质地 !颜色上不同的多种类型的愈伤组织 o
其中有的甚至失去体细胞胚发生能力 o变成非性愈伤组织 ∀以同一诱导培养基同一继代培养基上产生
的不同类型的愈伤组织为材料 o研究落叶松不同类型的胚性愈伤组织及非胚性愈伤组织的生理生化差
异 o探索ktl同一基因型同一细胞系不同类型愈伤组织内 o生理生化方面的差异 ~kul同一基因型 !不同细
胞系ku„ !uŒ细胞系以及 v… !v≤细胞系l愈伤组织内生理生化方面的差异 ~kvl不同基因型kuf基因型 !vf
基因型l的愈伤组织内生理生化方面的差异 ~kwl经 „…„处理后k­l与同一细胞系k«l !同一基因型的不同
细胞系kuŒl !不同基因型kv… !v≤l愈伤组织内 o生理生化方面的差异 ∀
根据形态 !质地 !颜色和体细胞胚发生能力的不同 o划分 ts种不同类型胚性与非胚性愈伤组织情况
见表 u ∀
uu 林 业 科 学 vz卷
表 2 不同类型胚性和非胚性愈伤组织分类情况 ≠
Ταβ .2 Χλασσιφιχατιον οφ διφφερεντ κινδσ οφ εµβρψογενιχ χαλλυσ(ΕΧ) ανδ νον2εµβρψογενιχ χαλλυσ(ΝΕΧ)
编号
≤²§¨
愈伤组织类型
×¼³¨ ²©¦¤¯ ∏¯¶
细胞系号
‘¤°¨ ²©¦¨¯¯ ¬¯±¨
颜色
≤²¯²µ
质地
≤«¤µ¤¦·¨µ
胚状体分化频率
⁄¬©©¨µ¨±·¬¤·¬²±
©µ¨ ∏´¨ ±¦¼k h l
附注k来源与处理l
„±±²·¤·¬²±¶k≥²∏µ¦¨
¤±§·µ¨¤·°¨ ±·l
¤ 胚性愈伤组织 ∞≤ uŒp | p v 黑褐色 ⁄¤µ®¥µ²º± 粘性 ≥·¬¦®¬±¨ ¶¶ uz qv uf Š¨ ±²·¼³¨
¥ 胚性愈伤组织 ∞≤ uŒp | p v 黄褐色 ≥±∏©©¦²¯²µ 粘性 ≥·¬¦®¬±¨ ¶¶ yv qy uf Š¨ ±²·¼³¨
¦ 胚性愈伤组织 ∞≤ uŒp | p v 白色 • «¬·¨ 粘性 ≥·¬¦®¬±¨ ¶¶ {t q{ uf Š¨ ±²·¼³¨
§ 非胚性愈伤组织 ‘∞≤ uŒp | p v 鲜黄色 ƒµ¨¶«¼¨ ¯¯²º 硬 •¬ª¬§¬·¼ s uf Š¨ ±²·¼³¨
¨ 非胚性愈伤组织 ‘∞≤ uŒp | p v 黄白色 ’©©2º«¬·¨ 松 !软 ²²¶¨ ¶²©· s uf Š¨ ±²·¼³¨
© 胚性愈伤组织 ∞≤ v≤ p y p t 黑褐色 ⁄¤µ® ¼¨ ¯¯²º 粘 !软 ∂¬¶¦¬§¬·¼ ¶²©· tss vf Š¨ ±²·¼³¨
ª 胚性愈伤组织 ∞≤ v≤ p y p t 褐白色 …µ²º± º«¬·¨ 软 !粘 ∂¬¶¦¬§¬·¼ ¶²©· tu vf Š¨ ±²·¼³¨
« 胚性愈伤组织 ∞≤ u„ p tt p t 白色 • «¬·¨ 粘性 ≥·¬¦®¬±¨ ¶¶ xs qx uf Š¨ ±²·¼³¨
¬ 非胚性愈伤组织 ‘∞≤ v…p y p t 浅褐色 ≥¤±§¼ ¥¨¬ª¨ 硬 •¬ª¬§¬·¼ s vf Š¨ ±²·¼³¨
­ 胚性愈伤组织 ∞≤ u„ p tt p t 白色 • «¬·¨ 软 ≥²©· |s q| uf Š¨ ±²·¼³¨ !·µ¨¤·¨§¥¼ „…„
≠ }uŒp | p v }分别为 }细胞系号 p培养基号 p重复号 ~所以 o¤!¥!¦!§!¨ o同为 uŒ细胞系 ~«!­同为 u„细胞系 ~uŒ!u„为 uf基因型 ~Œ为
v…细胞系 ~©!ª同为 v≤细胞系 ~v… !v≤为 vf基因型 ~分化频率 €有体细胞胚发生的愈伤组织块数Π接种愈伤组织块数 ∀uŒp | p v° ¤¨± ¦¨¯¯
¬¯±¨ ¶‘²q2¦∏¯·∏µ¨ °¨ §¬∏° ‘²q2µ¨³¨ ¤·‘²~·«¨µ¨©²µ¨ o¤!¥!¦!§!¨ º µ¨¨ ¶¤°¨ ¦¨¯¯ ¬¯±¨ ²©uŒ~«!­º µ¨¨ ¶¤°¨¦¨¯¯ ¬¯±¨ ²©u„ ~uŒ¤±§u„ ©µ²° ¶¤°¨·µ¨¨²©‘²q
u ~/ Œ0 ¥¨ ²¯±ª¶·²v… ¦¨¯¯ ¬¯±¨ ~©!ªº µ¨¨ ¶¤°¨¦¨¯¯ ¬¯±¨ ²©v≤ ~v… ¤±§v≤ ©µ²° ¶¤°¨·µ¨¨²©‘²qv q⁄¬©©¨µ¨±·¬¤·¬²±©µ¨ ∏´¨ ±¦¼¬¶‘²q²©¶²°¤·¬¦ °¨¥µ¼²ª¨ ±¨ ¶¬¶
¦¤¯ ¬¯§¬√¬§¨ ·² ‘²q²©¬±²¦∏¯¤·¬²± ¦¤¯ ¬¯q
212 氨基酸的变化
落叶松胚性和非胚性愈伤组织内氨基酸含量k表 vl差异显著 ouf !vf基因型中质地硬的非胚性愈伤
组织内 t{种氨基酸含量都高于胚性愈伤组织k图 t¤l ∀ktluŒ细胞系 o硬质非胚性愈伤组织中氨基酸含
量除色氨酸k×µ¼l为胚性愈伤组织的 t1y倍外 o其它 tz种氨基酸含量均为胚性愈伤组织的 u倍以上 ~尤
其是精氨酸k„µªl含量非胚性愈伤组织是胚性愈伤组织的 w倍 o赖氨酸含量为 v倍以上 ~图 t¥!图 t¦可
见 o质地硬的非胚性愈伤组织k§l的氨基酸含量比软质非胚性愈伤组织明显高 ~同为胚性愈伤组织的 ¤!
¥!¦中 o¥氨基酸含量最高 ∀vf基因型中 o©!ª同为 v≤细胞系 o©的体细胞胚分化频率 tss h o各种氨基酸
表 3 不同类型的胚性和非胚性愈伤组织内氨基酸含量
Ταβ .3 Τηε αµινο αχιδ χοντεντσ οφ διφφερεντ κινδσ οφ εµβρψογενιχ χαλλυσ ανδ νον2εµβρψογενιχ χαλλυσ
„°¬²± ¤¦¬§kªΠtssªq¦¤¯ ¬¯l ¤ ¥ ¦ § ¨ © ª « ¬ ­
„¶³ s qsws s qs|s s qsv| s qttt s qsxz s qsxy s qttz s qsxw s qs|w s qsxt
׫µ s qsuv s qswx s qsuy s qszv s qsv{ s qsvy s qsys s qsvu s qswy s qsvs
≥ µ¨ s qsu| s qsxs s qsu{ s qszz s qsxs s qswv s qsyw s qsvw s qsxx s qsvw
Š¯ ∏ s qsyv s qt|| s qtuv s qvst s quxw s qtzt s qtyw s qtv{ s qu{{ s qtvy
Š¯ ¼ s qsux s qsxw s qsu{ s qs{s s qswu s qsvw s qsyt s qsvx s qsws s qsvv
„¯ ¤ s qsww s qszx s qsxu s qtww s qsyw s qsww s qs{y s qswx s qsxu s qsxy
∂¤¯ s qsv{ s qsyt s qsu| s qs{| s qswz s qsww s qsyt s qsv{ s qsxt s qsvx
 ·¨ s qssu s qss{ s qssv s qssz s qssx s qssy s qssy s qss{ s qssw s qssv
Œ¯¨ s qsyu s qs|u s qswz s qtvt s qs{w s qszv s qs{y s qsxy s qs{s s qsw{
¨∏ s qsvy s qsxt s qsu| s qszu s qswx s qsws s qsxt s qsvv s qswz s qsvs
×¼µ s qsuu s qsus s qstw s qsvv s qsuv s qsuv s qsuy s qstz s qsu| s qstx
°«¨ s qsvt s qsvw s qsus s qsxy s qsvv s qsv| s qsws s qsu| s qsws s qsuw
‹¬¶ s qsvz s qsxy s qsu| s qsy| s qswv s qswu s qswx s qsuv s qsvt s qsuw
¼¶ s qszw s qs{z s qswx s qtwv s qs|u s qsy{ s qs|v s qsyt s qs{x s qsxs
㵻 s qsyw s qs{{ s qsuw s qs|y s qtty s qsww s qsxv s qsv{ s qsx| s qswy
×µ¼ s qssz s qssw s qssx s qss{ s qssy s qssv s qssz s qssw s qssv s qssw
°µ² s qsxy s qsyv s qsws s qs{{ s qsys s qsv| s qsyt s qsuz s qszu s qsvy
≤¼¶ s qsu{ s qsvw s qst{ s qsw| s qsvy s qsvw s qsuy s qstz s qsvt s qstu
ײ·¤¯ s qy{t t qttt s qx|| t qyuz t qs|x s q{v| t qtsz s qy{| t qtsz s qyyz
vu 第 v期 齐力旺等 }落叶松不同类型胚性和非胚性愈伤组织的生理生化差异
含量比体细胞胚分化频率 tu h的 ª细胞系含量低 o色氨酸 !丙氨酸k„¯ ¤l与天门冬氨酸k„¶³l含量 ª约是
©的 u倍 ∀kul不同基因型kuf !vf l间不同类型的愈伤组织其氨基酸含量差异明显 ~kvl同一基因型 !不
同细胞系内 o如 uŒ细胞系中的胚性愈伤组织 ¦的氨基酸含量低于 u„中的胚性愈伤组织 «o非胚性愈伤
组织中氨基酸的含量则是 uŒ细胞系高 ~kwl胚性愈伤组织­经 „…„处理后 o与同一细胞系 «的各种氨基
酸含量也有差异 o其中 „¯ ¤!„µª!°µ²的含量­比 «高 us p vs h oŒ¯¨!°«¨ !¼¶的含量­比Œ低 us h ∗ ws h o
 ·¨含量­比 Œ低 u1z倍 ~这些不同类型的愈伤组织中游离氨基酸含量的差异 o可能与氮的代谢 !蛋白质
的合成有关 ∀
图 t¤ 不同类型愈伤组织内色氨酸 !蛋氨酸含量
ƒ¬ªqt¤ ׫¨ ¦²±·¨±·¶²©×µ¼ ¤±§  ·¨¬± §¬©©¨µ¨±·®¬±§¶²©¦¤¯ ∏¯¶
τ 色氨酸 ×µ¼~υ蛋氨酸  ·¨q
图 t¥ 不同类型愈伤组织内氨基酸含量
ƒ¬ªqt¥ „°¬±²¤¦¬§¦²±·¨±·¶²©§¬©©¨µ¨±·®¬±§¶²©¦¤¯ ∏¯¶
) σ) 苏氨酸 ׫µ~) υ) 丝氨酸 ≥ µ¨~) ϖ ) 甘氨酸 Š¯ ¼ ~) ≅) 颉氨酸
∂¤¯ ~) Ξ) 亮氨酸 ¨∏~
) π) 酪氨酸 ×¼µ~) n) 苯丙氨酸 °«¨ ~)2) 组氨酸 ‹¬¶~)p) 脯氨酸
°µ²~) ρ ) 半胱氨酸 ≤¼¶q
图 t¦ 不同类型愈伤组织内氨基酸含量
ƒ¬ªqt¦ „°¬±²¤¦¬§¦²±·¨±·¶²©§¬©©¨µ¨±·®¬±§¶²©¦¤¯ ∏¯¶
) σ) 天门冬氨酸 „¶³~) υ) 谷氨酸 Š¯ ∏~) ϖ ) 丙氨酸 „¯ ¤~) ≅) 异
亮氨酸 Œ¯¨~) Ξ) 赖氨酸 ¼¶~) π) 精氨酸 „µªq
图 t§ 不同类型愈伤组织内总氨基酸含量
ƒ¬ªqt§ ׫¨ ·²·¤¯ ¦²±·¨±·¶²©¤°¬±²¤¦¬§¬± §¬©©¨µ¨±·®¬±§¶²©¦¤¯¯ ∏¶
υ总氨基酸 ײ·¤¯ ¦²±·¨±·q
213 游离糖含量的变化
游离糖含量的变化见图 u¤!图 u¥ouŒ细胞系 ¤!¥!¦!§!¨ 中 o胚性愈伤组织 ¤!¥!¦中 ¥的多糖含量为
y1svy ªΠtssª#¦¤¯ ∏¯¶o是非胚性愈伤组织中多糖含量的 u1z倍 o不同类型的胚性愈伤组织中 o多糖含量也
有差异 o是 ¦的 v1x倍 ~表 w可见 ~vf 基因型的胚性与非胚性愈伤组织 ©!ª!¬中均检测到三糖 o分别为
s1szy !s1sy{ !s1ty{ ªΠtssª1¦¤¯ ∏¯¶o但 uf基因型的 z种愈伤组织内均没有三糖 o表明基因型之间三糖含量
存在很大差异 ~而同一基因型 !不同细胞系间 o如 v…k¬l的三糖含量是 v≤k©!ªl的 u倍还多 ∀最明显的是
wu 林 业 科 学 vz卷
在经过 „…„ !°∞Š处理后k­l多糖含量急剧升高 o为 ux1yt{ ªΠtssª#¦¤¯ ∏¯¶o比同一细胞系未经处理的愈伤
组织k«l高出 t{倍 o是非胚性愈伤组织的 tt1|倍 o结果表明 o非胚性愈伤组织与胚性愈伤组织多糖含量
的差异明显 o胚性愈伤组织内多糖的含量差异 o可能与胚性愈伤组织不同的发育时期有关 ∀
图 u¤ 不同类型愈伤组织内糖含量
ƒ¬ªqu¤ ׫¨ ¶¤¦¦«µ²¶¨ ¦²±·¨±·¶²©§¬©©¨µ¨±·¶®¬±§¶²©¦¤¯ ∏¯¶
) σ) 三糖·µ¬¶¤¦¦«¤µ¬§¨ ) υ) 二糖 §¬¶¤¦¦«¤µ¬§¨ ) ϖ ) 葡萄糖 ª¯∏¦²¶¨
) ≅) 果糖 ©µ∏¦·²¶¨ q
图 u¥ 不同类型愈伤组织内多糖与总糖含量
ƒ¬ªqu¥ ׫¨ ¶¤¦¦«µ²¶¨ ¦²±·¨±·¶²©§¬©©¨µ¨±·¶®¬±§¶²©¦¤¯ ∏¯¶
τ 多糖 ¤°¼¯²¶¨ ~υ总糖·²·¤¯ q
表 4 不同类型愈伤组织内糖含量
Ταβ .4 Τηε χοντεντσ οφ αµψλοσε ανδ τρισαχχηαριδειν διφφερεντ κινδσ οφ χαλλυσ
糖 ≥¤¦¦«¤µ²¶¨k°ªΠtssªl ¤ ¥ ¦ § ¨ © ª « ¬ ­
多糖 ¤°¼¯²¶¨ u qu{t y qsvy t qzs| u qt|x u qzzy t qxyv t q{w{ t qwuy t qwvs ux qyt{
三糖·µ¬¶¤¦¦«¤µ¬§¨ p p p p p s qszy s qsy{ p s qty{ p
二糖 §¬¶¤¦¦«¤µ¬§¨ s qvw{ s qwyx s qwss s q{|u s qwu{ s qszy s qtvx s quz{ s qwtz p
葡萄糖 ª¯∏¦²¶¨ u qs|t t q|sx u qwu| t qtzz t quxt s q|yz t qxtz u qsyw s qu{y u qyss
果糖 ©µ∏¦·²¶¨ u q|s| u q{ut u quz| u qvys u qwtx u q{zt u q{|| u qtxx t qwsu u qyw|
总糖·²·¤¯ { qty| tt quuz y q{tz y qyuw y q{zs x qxxv y qwyz x q|uv v qzsv vs q{yz
214 酚酸含量的变化
部分愈伤组织内可检测到酚酸k表 xl ouŒ细胞系 ¥!§!¨ 的胚性和非胚性愈伤组织中均不同程度地
检测到水杨酸 o其它细胞系中未能检测到 ovf基因型k©!ª!¬l中未发现水杨酸 ~vf基因型k©l中检测到对
羟基甲酸ku1|w°ªΠtssªl ouf基因型的愈伤组织中均未发现 o说明基因型之间差异明显 ~儿茶酸 !丁香酸
含量在不同类型的愈伤组织中没有规律性变化 ∀邻苯二酚在经 „…„ !°∞Š处理后的愈伤组织k­l中很高
k图 v¤!图 v¥l o为 u{1wu °ªΠtssªo是 «的 u1u倍 o是非胚性愈伤组织含量的 t1|倍 ∀
表 5 不同类型愈伤组织内酚酸的含量
Ταβ .5 Τηε ηψδροξψβενζενε αχιδ χοντεντσ οφ διφφερεντ κινδσ οφ χαλλυσ
酚酸 ‹¼§µ²¬¼¥¨ ±½¨ ±¨ kªΠtssªl ¤ ¥ ¦ § ¨ © ª « ¬ ­
儿茶酸 ¦¤·¨¦«∏¤¦¬§ t qyv t q|| s qwx s q{{ p t qvz t qt{ s qzv p s qzs
邻苯二酚 ’2°«¨ ±¼¯ ±¨¨ §¬³«·«²¯ tw qus tz qu| tt qzx tx qvw u q{x p tu qvx tu qy| tu quv u{ qwu
丁香酸 ¶¼µ¬±ª¬¦¤¦¬§ p p t qzv u q|y t quy p t q{t u qvv t q{s p
对羟基甲酸 °2«¼§µ²¬¼¯½²¬¦¤¦¬§ p p p p p u q|w p p p p
水杨酸 ¶¤¯¬¦¼¯¬¦¤¦¬§ p x qvx p v qxy x qvs p p p p p
xu 第 v期 齐力旺等 }落叶松不同类型胚性和非胚性愈伤组织的生理生化差异
图 v¤ 不同类型愈伤组织内糖含量
ƒ¬ªqv¤ ׫¨ ¶¤¦¦«¤µ²¶¨ ¦²±·¨±·¶²©§¬©©¨µ¨±·®¬±§¶²©¦¤¯ ∏¯¶
) σ) 三糖 ·µ¬¶¤¦¦«¤µ¬§¨ ~) υ) 二糖 §¬¶¤¦¦«¤µ¬§¨ ~) ϖ ) 葡萄糖 ª¯∏2
¦²¶¨ ~) ≅) 果糖 ©µ∏¦·²¶¨ q
图 v¥ 不同类型愈伤组织内邻苯二酚含量
ƒ¬ªqv¥ ׫¨ ’2³«¨ ±¼¯ ±¨¨ §¬³«·«²¯ ¦²±·¨±·¶²©
§¬©©¨µ¨±·®¬±§¶²©¦¤¯ ∏¯¶
υ邻苯二酚 ’2³«¨ ±¼¯ ±¨¨ §¬³«·«²¯ q
图 w¤ 不同类型愈伤组织内激素含量
ƒ¬ªqw¤ ׫¨ ±¨§²«²µ°²±¨ ¦²±·¨±·¶²©§¬©©¨µ¨±·®¬±§¶²©¦¤¯ ∏¯¶
τ 玉米素核苷 • ~υ赤霉素 Š„ q
图 w¥ 不同类型愈伤组织内乙烯素含量
ƒ¬ªqw¥ ׫¨ ·¨«¼¯ ±¨¨ ¦²±·¨±·¶¬± §¬©©¨µ¨±·®¬±§¶²©¦¤¯ ∏¯¶
) π) 乙烯 ·¨«¼¯ ±¨¨ q
215 激素含量的变化
愈伤组织内激素含量见表 y o由于激素含量极其微弱 o…„ !Œ„„ !‘„„在鲜样品 tª时没有检测到 ∀ •
在 uf !vf的硬质非胚性愈伤组织中 o都未检测到 o而软质非胚性愈伤组织中含量最高达 uvz1w ∏ªΠtssªo
同一细胞系k¤!¥!¦!§!¨ l中 o• 含量 ¨为 ¦的 u1y倍 ~Š„含量仍是软质非胚性愈伤组织中含量最高 o达
t{|1| ΛªΠtssªo且 ¨为 ¦的 v1|倍 ~乙烯的含量 §!¨ 分别为 ¦的 u1{倍和 t1{倍 o非胚性愈伤组织中含量
高 o表明乙烯抑制体细胞胚的发生 o与 ‹∏¤±ª等≈u 报道的乙烯对胚性愈伤组织的诱导及体细胞胚发生有
拮抗作用结果一致 ~不同基因型kuf !vf l的愈伤组织内没有规律性的差异趋势 ~同一基因型 !不同细胞
系 o如 v…未发现 • 与 Š„ o而 v≤中二者含量均较高 o细胞系间差异明显 ~经 „…„处理后 o• 与 Š„的含
量不高 o乙烯含量也不高 ∀
表 6 不同类型愈型组织内激素含量
Ταβ .6 Τηε ενδοηορµονε χοντεντσ οφ διφφερεντ κινδσ οφ χαλλυσ
∞±§²«²µ°²±¨ ¤ ¥ ¦ § ¨ © ª « ¬ ­
玉米素核苷 • kΛªΠtssªl x| qx ttw qw |s qv p uvz qw tsw q| ttw q{ tuv qx p xz qy
赤霉素 Š„kΛªΠtssªl tt| qt tvz qv w{ qu zt qt t{| q| yv qs ty{ q| zw qt p wy qt
乙烯 ·¨«¼¯ ±¨¨ k°ªΠ®ªl p { q||t x q{w{ ty qwx{ ts qusz tt q{wu s qst{ p s q{xy u qzws
yu 林 业 科 学 vz卷
216 离子含量的变化
落叶松胚性和非胚性愈伤组织内各种离子含量见表 z o其中 o胚性愈伤组织中 ≤²n n的含量是非胚
性愈伤组织的 tu倍 o≤§n n离子含量胚性是非胚性愈伤组织的 t1w倍 o表明 ≤²n n !≤§n n与体细胞胚关系
密切 o其余 y种金属离子含量差异不大 ~‘‹nw !‘’pv 的含量差异较大k图 xl o胚性愈伤组织中 ‘‹nw 为
w1y|ªΠ®ªo非胚性愈伤组织中为 |1st ªΠ®ªo相差 u倍 o‘’ pv 的含量分别为 s1txz ªΠ®ª和 v1uy ªΠ®ªo非胚性
愈伤组织是胚性愈伤组织的 ut倍 o另外 o胚性愈伤组织中铵态氮与硝态氮的比值为 u|1| o非胚性愈伤组
织中铵态氮与硝态氮的比值为 u1{ o胚性愈伤组织中铵态氮与硝态氮的比值是非胚性愈伤组织中的 ts
倍以上 o表明不同的氮源类型对落叶松体细胞胚发生影响较大 ∀
表 7 胚性与非胚性愈伤组织内离子含量
Ταβ .7 Τηειον χοντεντσ οφ εµβρψογενιχ χαλλυσ ανδ νον2εµβρψογενιχ χαλλυσ
Œ²± ¦²±·¨±·¶
kªΠ®ªl
银
„ªn
钴
≤²n n
镉
≤§n n
锌
±n n
铜
≤∏n n
镍
‘¬n n
铁
ƒ n¨ n
铬
≤µn n n
铵
‘‹ nw
硝酸根
‘’ pv
胚性愈伤组织 « s qsxt s qy{ s qtuv u qwt s qy s qut u qvu s qsu w qy| s qtxz
非胚性愈伤组织¬ s qsxt s qsxz s qs|t u qwx s q|x s quz u q|v s qsu | qst v quy
图 x 胚性愈伤组织与非胚性愈伤组织内离子浓度
ƒ¬ªqx ׫¨ ¬²± ¦²±¦¨±·µ¤·¬²± ²© °¨¥µ¼²ª¨ ±¬¦¦¤¯ ∏¯¶¤±§±²±2 °¨¥µ¼²ª¨ ±¬¦¦¤¯ ∏¯¶
τ 胚性愈伤组织 «~υ非胚性愈伤组织 Œq
v 讨论
落叶松胚性愈伤组织中游离氨基酸的含量 o明显低于非胚性愈伤组织 o特别值得注意的是游离基酸
分析中的精氨酸含量的差异 o非胚性愈伤组织中精氨酸为胚性愈伤组织的 w倍 o杨和平在马唐体细胞胚
发生的研究中也得到相似的结果 o马唐胚性愈伤组织中游离氨基酸含量少于非胚性愈伤组织 o而可溶性
蛋白质含量却高于后者 o当胚胎发生受阻时 o细胞内游离氨基酸增加 o说明胚性蛋白质合成较旺盛 o而非
胚性蛋白质合成较少 ∀两者游离氨基酸的差异 o反映了他们之间在蛋白质代谢上的差异 o以致其分化能
力截然不同k杨和平 ot||tl ∀另外 o多胺促进体细胞胚的发生 o精氨酸为多胺合成前体 o落叶松非胚性愈
伤组织中精氨酸含量高 o可能与多胺的合成及体细胞胚发生关系密切 ∀许多报告也指出 o外源 „µª的供
应可以促进原生质体的 ⁄‘„合成 o促进愈伤组织的胚胎发生 ∀
淀粉作为植物体内最普遍的一类储藏物质 o其消长与组织分化及器官形成具有密切的关系 ∀白杆
非胚性愈伤组织细胞中 o始终无淀粉粒出现 o而胚性愈伤组织只要转到分化培养基便开始有淀粉积累 o
心形胚时期淀粉积累达高峰 o证实淀粉是一种积极参与组织培养过程中 !形态建成的活跃代谢物质k杨
金玲等 ot||{l ∀本试验中 o落叶松胚性愈伤组织经 „…„及 °∞Š诱导后 o愈伤组织的表面形成许多光滑
圆球状的原胚 o这时期测定淀粉含量急剧上升为非胚性和未处理的 t{倍 ∀结果表明 o淀粉和多糖的积
累出现在重要发育转折时期 o是为新的发育阶段提供能源的物质基础 ∀ ׫²µ³¨ 等在烟草愈伤组织诱导
zu 第 v期 齐力旺等 }落叶松不同类型胚性和非胚性愈伤组织的生理生化差异
芽的实验中发现 o淀粉积累的高峰出现在拟分生组织形成之前 o通过测定淀粉代谢中有关酶的活性 o表
明 o淀粉的积累是活性增加的结果 o淀粉和游离糖可能是作为形态建成过程中迅速可利用的贮藏能源
k׫²µ³¨ 等 ot||vl ∀
•¬¼²¶∏¨ 等kt||sl在未用任何激素的情况下 o用 ≤²≤¯ u !‘¬≤¯ u !≤§≤¯ u !±≤¯ u !≤∏≤¯ u !的 ≥培养基 o诱导
了胡萝卜的体细胞胚胎的形成 o其中以 ≤§≤¯ u 的效果最佳 o其效果顺序为 ≤§≤¯ u !‘¬≤¯ u !≤²≤¯ u !≤∏≤¯ u !
±≤¯ u ∀ ≤²n n !±n n !≤∏n n !±n n !等重金属离子具有重要的促进作用 o本试验落叶松的胚性愈伤组织中
≤’ n n的含量为非胚性愈伤组织的 tu倍 ∀乙烯含量非胚性愈伤组织是胚性愈伤组织的 u1{倍 ∀有研究
发现 ≤²n n !„ªn !‘¬n n等金属离子是乙烯合成的抑制剂 o乙烯可抑制体细胞胚胎发生 o多胺可促进体细
胞胚胎的发生 ∀最近 •²∏¶·¤±kt|{|l的研究结果又表明 o„ª‘’v 并非抑制乙烯的合成 o而是由于 „ªn的存
在 o乙烯不能干扰多胺的合成 o却促使精氨酸脱羧酶活性增加 wx h ∗ xw h o这些离子是通过促进多胺的
合成而提高体细胞了胚胎发生频率 ∀
许多资料表明 o氮源对体细胞胚胎发生有一定影响 o在枸杞体细胞胚发生培养基中 o随着铵态氮与
硝态氮比例的增高 o体细胞胚胎发生能力逐渐提高 o当培养基中只有铵态氮时 o体细胞胚发生频率最高
k崔凯荣 ot||vl ∀在落叶松胚性与非胚性愈伤组织中 o铵态氮与硝态氮的比值两者相差 ts倍以上 o胚性
愈伤组织中铵态氮与硝态氮的比值为 u|1| o而非胚性愈伤组织中只为 u1{ ∀虽然目前尚难确定 ‘‹nw 是
否对体细胞胚发生起特异性的作用 o但普遍认为某种还原氮 o无论通过直接外加 o还是由硝酸盐通过体
内转化 o对于产生高频率的体细胞胚是必不可少的k黄学林 ot||xl ∀一些研究也认为还原态氮 o在胚的
诱导分化中是必需的 o主要是外源氮和氮的代谢与体细胞胚胎发生中的发育调节基因的表达有关
k≥°¬·«q⁄qot||sl ∀
参 考 文 献
陈以峰 o周 燮 o汤日圣等 q水稻体细胞培养中胚性细胞出现与 Œ„„的关系 o植物学报 ot||{ owskxl }wzw ∗ wzz
徐九龙 o高东微 o叶文红等 q Š…Š对苜蓿愈伤组织生长 !体细胞胚胎诱导及其乙烯生物合成的影响 q植物学报 ot||{ owskzl }yvx ∗ ywt
杨和平 o程井辰 q马唐胚性与非胚性愈伤组织生理变异的初步研究 q植物生理学通讯 ot||t okxl }vvz
杨金玲 o郭仲琛 q白杆体细胞胚胎发生的细胞组织学和淀粉积累动态的研究 q西北植物学报 ot||{ okvl }vvx ∗ vv{
中国林业科学研究院分析中心编 q现代实用仪器分析方法 q北京 }中国林业出版社 o北京 }t||w ouy{ !uty ∗ ut{| !uv{ !uxu
„°°¬µ¤·² ° ∂ q׫¨ ©¨©¨¦·¶²©¤¥¶¦¬¶¬¦¤¦¬§²±·«¨ §¨ √¨ ²¯³° ±¨·²©¶²°¤·¬¦ °¨¥µ¼²¶©µ²° ¦¨¯¯¶²©¦¤µ¤º¤¼k Χαρυµ χαρϖι Λql q…²·qŠ¤½qot|zw otvx }vu{ ∗ vvz
≤«¤¯∏³¤ ∂ q¬¦µ²³µ²³¤ª¤·¬²± ²© ¤¯µ¦«kΛαριξ δεχιδυα Μιλλql¥¼ ²µª¤± ¦∏¯·∏µ¨ ¤±§·«¨ ©¬¨ §¯ªµ²º·«²© °¬¦µ²³µ²³¤ª¤·¨§·µ¨ ¶¨q¨¶±¬¦·√¬k°µ¤ª∏¨ l t||v ov|
ktul }w{t ∗ w{y
⁄∏°²±·…¨ ¥²∏¬ ‘q¤½¤µ¬„ q¬√¬±ª¶·²± ‘qq∂²± „§¨µ®¤¶° qo…¨ ¦º¤µ q• q°¨ µ¦¼ • q∞qo°²±§≥ q∞q• ¤·¨µµ¨ ¤¯·¬²±¶³¤µ¤°¨ ·¨µ¶¤±§·¬¶¶∏¨ §¨ √¨ ²¯³° ±¨·¬±
¶²°¤·¬¦¤±§½¼ª²·¬¦ °¨¥µ¼²¶²©·«µ¨¨³¬±¤¦¨²∏¶¦²±¬©¨µ¶q„° µ¨¬¦¤± ²∏µ±¤¯ ²© …²·¤±¼ t||y o{vk{l }||u ∗ ||y
∞º¤¯§⁄oŽµ¨·½¶¦«°¤µ˜ o≤«¨ ± ≠ q≤²±·¬±∏²∏¶¬¦µ²³µ²³¤ª¤·¬²± ²©∏√ ±¨¬¯¨ ¤µ¦«©µ²° ⁄¬©©¨µ¨±·≥³¨¦¬¨¶∂¬¤ „§√¨ ±·¬·¬²∏¶…∏§ƒ²µ°¤·¬²±q…¬²¯²ª¬¤ °¯¤±·¤2
µ∏° ot||z ov|kvl }vut ∗ vu|
∞º¤¯§ ⁄oŽµ¨·½¶¦«°¤µ˜ q׫¨ ¬±©¯∏¨±¦¨ ²© °¬¦µ²ªµ¤©·¬±ª¬± √¬·µ²²±·¬¶¶∏¨ ¦∏¯·∏µ¨ ¥¨«¤√¬²µ¤±§√¨ ª¨·¤·¬√¨³µ²³¤ª¤·¬²± ²©²¯§∞∏µ²³¨¤± ¤¯µ¦«·µ¨ ¶¨q°¯ ¤±·≤¨¯¯
׬¶¶∏¨ ¤±§ ’µª¤± ≤∏¯·∏µ¨ t||y owwkvl }uw| ∗ uxu
‹∏¤±ª ≠ o⁄¬±¨ µ„  oŽ¤µ±²¶®¼ ⁄ ƒ q„ªµ²¥¤¦·¨µ¬∏°µ«¬½²ª¨ ±¨ ¶° §¨¬¤·¨§ª¨ ±¨ ·¬¦·µ¤±¶©²µ°¤·¬²±¤±§µ¨ª¨ ±¨ µ¤·¬²±²©¤¦²±¬©¨µ}Λαριξ δεχιδυα qŒ± √¬·µ²¦¨¯¯∏¯¤µ
i §¨√¨¯²³° ±¨·¤¯ ¥¬²¯²ª¼ ³¯¤±·uz° t||t okwl }ust ∗ usz
²∏µ§¤¬± Œo¨ ∏¯  „ o¤¥¨¯ ° q‹²µ°²±¤¯ ¦«¤±ª¨¶§∏µ¬±ªªµ²º·«²©¶²°¤·¬¦ °¨¥µ¼²ª¨ ±¬¦°¤¶¶¨¶¬± «¼¥µ¬§ ¤¯µ¦«q°¯ ¤±·°«¼¶¬²¯²ª¼ ¤±§…¬²¦«¨ °¬¶·µ¼ k°¤µ¬¶l
t||z ovxk|l }zwt ∗ zw|
Ž¤°¤§¤§ ‹ ¤±§‹¤µ¤§¤ ‹ q≤«¤±ª¨¶¬± ±¨§²ª¨ ±²∏¶¤°¬±²¤¦¬§¦²°³²¶¬·¬²±¶§∏µ¬±ª¶²°¤·¬¦ °¨¥µ¼²ª¨ ±¨ ¶¬¶¬± ∆αυχυσχαροτα Λq°¯ ¤±·i ≤¨¯¯³«¼¶¬²¯ qot|{w o
ux }uz ∗ v{
Ž¯¬°¤¶½¨ º¶®¤ Žq°¯¤±·¯¨·§¨ √¨ ²¯³°¨ ±·©µ²°¬°°¤·∏µ¨ ½¼ª²·¬¦ °¨¥µ¼²¶²©«¼¥µ¬§ ¤¯µ¦«·«µ²∏ª«¶²°¤·¬¦ °¨¥µ¼²ª¨ ±¨ ¶¬¶q°¯ ¤±·¶¦¬¨±¦¨ k¶«¤±±²±l t|{| oyvktl }
|x ∗ tsw
Ž¯¬°¤¶½¨ º¶®¤Žo⁄¨ √¤±·¬¨µ≠ o¤¦«¤±¦¨ ⁄oετ αλqo≤«¤µ¨¶·°qΛαριξ λαριχινα kפ°¤µ¤¦®l }≥²°¤·¬¦ °¨¥µ¼²ª¨ ±¨ ¶¬¶¤±§ ª¨ ±¨ ·¬¦·µ¤±¶©²µ°¤·¬²±q≤¤±¤§¬¤±
²∏µ±¤¯ ²©ƒ²µ¨¶·• ¶¨¨¤µ¦«t||z ouzkwl }xv{ ∗ xxs
Ž²¦«¥¤o≥³¬¨ª¨ 2¯• ²¼ ° o‘¨∏°¤±± ‹ ¤±§≥¤¤§≥ q≥·¬°∏¯¤·¬²± ²© °¨¥µ¼²ª¨ ±¨ ¶¬¶¬±¦¬·µ∏¶²√∏¯¤µ¦¤¯ ∏¯¶¥¼ „…„ o¨·«¨ ³«²±o≤≤≤ ¤±§¤¯¤µ¤±§¬·¶¶∏³³µ¨¶¶¬²±
¥¼ Š„v o q°©¯¤±½¨ ±³«¼¶¬²¯ qot|z{ o{| }wuz ∗ wvu
{u 林 业 科 学 vz卷
Ž²µ¯¤¦«o²ª¯¤∏¨µŽq⁄¨ √¨ ²¯³° ±¨·¤¯ ³¤·¨µ±¶§∏µ¬±ª§¬µ¨¦·¶²°¤·¬¦ °¨¥µ¼²ª¨ ±¨ ¶¬¶¬± ³µ²·²³¯¤¶·¦∏¯·∏µ¨¶²© ∞∏µ²³¨¤± ¤¯µ¦«k Λαριξ δεχιδυα Μιλλql q°¯ ¤±·
≤¨¯¯ • ³¨²µ·¶t||x otxkv ∗ wl }uwu ∗ uwz
¨ ∏¯  „ o…¤¶·¬¨± ≤ oŽ¯¬°¤¶½¨ º¶®¤Žo• ¤µ§≤ o≤«¤µ¨¶·° q„±¬°³µ²√ §¨ ° ·¨«²§©²µ¶²°¤·¬¦³¯¤±·¯¨·³µ²§∏¦·¬²±¬± «¼¥µ¬§ ¤¯µ¦«kΛαριξ Ξ λεπτοευροπαεαl }
°¤µ·t q≥²°¤·¬¦ °¨¥µ¼² °¤·∏µ¤·¬²±q°¯ ¤±·≤¨¯¯ ׬¶¶∏¨ ¤±§ ’µª¤± ≤∏¯·∏µ¨ t||w ovyktl }tsz ∗ ttx
¨ ∏¯  „ oŽ¯¬°¤¶½¨ º¶®¤Žo≤«¤µ¨¶·°q≥²°¤·¬¦ °¨¥µ¼²ª¨ ±¨ ¶¬¶©µ²°¬°°¤·∏µ¨ ¤±§°¤·∏µ¨ ½¼ª²·¬¦ °¨¥µ¼²¶¤±§©µ²° ¦²·¼¯ §¨²±¶¤±§±¨ §¨¯ ¶¨²©¶²°¤·¬¦³¯¤2
±·¯¨·¶²© Λαριξ q≤¤±¤§¬¤± ²∏µ±¤¯ ²©ƒ²µ¨¶·• ¶¨¨¤µ¦«t||w ouwktl }tss ∗ tsy
¨√¨ ¨ ∂ o¨ ∏¯  „ o²∏¤±¬± o≤²µ±∏⁄o°¬¯¤·¨ Š qΑγροβαχτεριυµ τυµεφαχιενσ2° §¨¬¤·¨§·µ¤±¶©²µ°¤·¬²± ²©«¼¥µ¬§ ¤¯µ¦«k Λαριξ καεµπφερι ≅ Λqδεχιδυαl¤±§
·µ¤±¶ª¨ ±¬¦³¯¤±·µ¨ª¨ ±¨ µ¤·¬²±o°¯¤±·≤¨¯¯ • ³¨²µ·ot||z oty }y{s ∗ y{x
°«¬¯¯¬³¶Š ≤ ¤±§≤²¯ ¬¯±¶Š …qŒ±§∏¦·¬²±¤±§§¨ √¨ ²¯³° ±¨·²©¶²°¤·¬¦ °¨¥µ¼²¶©µ²° ¦¨¯¯ ¶∏¶³¨ ±¶¬²±¦∏¯·∏µ¨¶²©¶²¼¥¨¤±q°¯ ¤±·¦¨¯¯ ׬¶¶’µª¤± ≤∏¯·qot|{t ot }
tuv ∗ tu|
°¬·¨¯  „ o≠²² … ≠ oŽ¯¬°¤¶½¨ º¶®¤Žo≤«¤µ¨¶·° q≤«¤±ª¨¶¬± ±¨½¼°¨¤¦·¬√¬·¼ ¤±§³µ²·¨¬± ³¤·¨µ±¶§∏µ¬±ª·«¨ °¤·∏µ¤·¬²± ³«¤¶¨ ²©¶²°¤·¬¦ °¨¥µ¼²ª¨ ±¨ ¶¬¶¬±
«¼¥µ¬§ ¤¯µ¦«kΛαριξ Ξ ευρολεπισl q≤¤±¤§¬¤±­²∏µ±¤¯ ²©©²µ¨¶·µ¨¶¨¤µ¦«t||u ouukwl }xxv ∗ xys
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|u 第 v期 齐力旺等 }落叶松不同类型胚性和非胚性愈伤组织的生理生化差异